JPH0656872A - コウジ酸配糖体及びその製造法 - Google Patents
コウジ酸配糖体及びその製造法Info
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- JPH0656872A JPH0656872A JP22653792A JP22653792A JPH0656872A JP H0656872 A JPH0656872 A JP H0656872A JP 22653792 A JP22653792 A JP 22653792A JP 22653792 A JP22653792 A JP 22653792A JP H0656872 A JPH0656872 A JP H0656872A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 式
【化１】
で示されるコウジ酸配糖体、該コウジ酸配糖体を有効成
分として含有する美白化粧料、及びコウジ酸に糖供与体
の存在下、シュークロースホスホリラーゼを作用させる
ことを特徴とする式 【化２】 （式中Ｒ１がグルコシル基であるときはＲ２は水素原
子、Ｒ１が水素原子であるときはＲ２はグルコシル基で
ある）で示されるコウジ酸配糖体の製造法である。 【効果】 チロシナーゼ活性阻害作用を有し、美白化粧
料の有効成分として利用できる前記化１で表わされる新
規なコウジ酸配糖体及び前記化２で表わされるコウジ酸
配糖体を、効率良く製造することができる。
分として含有する美白化粧料、及びコウジ酸に糖供与体
の存在下、シュークロースホスホリラーゼを作用させる
ことを特徴とする式 【化２】 （式中Ｒ１がグルコシル基であるときはＲ２は水素原
子、Ｒ１が水素原子であるときはＲ２はグルコシル基で
ある）で示されるコウジ酸配糖体の製造法である。 【効果】 チロシナーゼ活性阻害作用を有し、美白化粧
料の有効成分として利用できる前記化１で表わされる新
規なコウジ酸配糖体及び前記化２で表わされるコウジ酸
配糖体を、効率良く製造することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はチロシナーゼ活性阻害作
用を有し、美白化粧料の有効成分として利用できる、新
規なコウジ酸配糖体、及びその製造法に関する。
用を有し、美白化粧料の有効成分として利用できる、新
規なコウジ酸配糖体、及びその製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術】皮膚の着色の原因となるメラニン色素は
表皮と真皮との間にあるメラニン細胞（メラノサイト）
内のメラニン生成顆粒（メラノゾーム）において生産さ
れ、生成したメラニンは、浸透作用により隣接細胞へ拡
散する。このメラノサイト内に於けるメラニン色素の生
成過程は、必須アミノ酸であるＬ−チロシンが酵素チロ
シナーゼの作用により、先ずＬ−β−３，４−Ｄｉｈｙ
ｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ ａｌａｎｉｎｅ（以下Ｌ−Ｄ
ｏｐａ、Ｌ−ドーパという）に変化し、ドーパクロムに
変化した後、ドーパキノンとなり、次いで酵素的又は非
酵素的酸化作用により、赤色色素及び無色色素を経て、
最終的に黒色のメラニンへ変化するものと考えられてい
る。従って、上記メラニン色素の生成過程に於いてチロ
シナーゼの作用を阻害したり、あるいは中間段階におい
てキノン類の酸化作用を阻害したりすれば、最終的にメ
ラニンの生成を抑制し得るものと考えられる。以上のよ
うな現状において、コウジ酸は上記チロシナーゼの活性
中心である銅と結合することによりチロシナーゼの活性
を阻害することから、生体内におけるメラニン生成を抑
制し、皮膚の美白保持、又はシミ、ソバカスの除去等に
極めて有用な物質である。このほか、コウジ酸は、抗
菌、抗カビ作用及び強心作用等の優れた生理活性を有
し、食品及び医薬産業上有用な化合物である。
表皮と真皮との間にあるメラニン細胞（メラノサイト）
内のメラニン生成顆粒（メラノゾーム）において生産さ
れ、生成したメラニンは、浸透作用により隣接細胞へ拡
散する。このメラノサイト内に於けるメラニン色素の生
成過程は、必須アミノ酸であるＬ−チロシンが酵素チロ
シナーゼの作用により、先ずＬ−β−３，４−Ｄｉｈｙ
ｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ ａｌａｎｉｎｅ（以下Ｌ−Ｄ
ｏｐａ、Ｌ−ドーパという）に変化し、ドーパクロムに
変化した後、ドーパキノンとなり、次いで酵素的又は非
酵素的酸化作用により、赤色色素及び無色色素を経て、
最終的に黒色のメラニンへ変化するものと考えられてい
る。従って、上記メラニン色素の生成過程に於いてチロ
シナーゼの作用を阻害したり、あるいは中間段階におい
てキノン類の酸化作用を阻害したりすれば、最終的にメ
ラニンの生成を抑制し得るものと考えられる。以上のよ
うな現状において、コウジ酸は上記チロシナーゼの活性
中心である銅と結合することによりチロシナーゼの活性
を阻害することから、生体内におけるメラニン生成を抑
制し、皮膚の美白保持、又はシミ、ソバカスの除去等に
極めて有用な物質である。このほか、コウジ酸は、抗
菌、抗カビ作用及び強心作用等の優れた生理活性を有
し、食品及び医薬産業上有用な化合物である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】従来、このように優れ
た生理活性を有するコウジ酸誘導体を有機合成により製
造する方法が種々検討されており、例えばコウジ酸の２
位のヒドロキシ基をアシル化して、２−アルキルカルボ
ニルオキシメチル−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４
−オンを製造する方法（特開昭５４−９２６３２号公報
参照）、２−ベンゾイルオキシメチル−５−ヒドロキシ
−４Ｈ−ピラン−４−オン、２−シンナモイルオキシメ
チル−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン及び２
−フェノキシメチル−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−
４−オンを製造する方法（特開昭５９−３３２０７号公
報参照）、及びコウジ酸の２位のヒドロキシ基を２−ピ
ロリドン−５−イン基またはピリジル基により置換する
コウジ酸誘導体の製造法（特開昭６０−２３３０７１号
公報参照）が知られている。また、最近このように優れ
た生理活性を有するコウジ酸誘導体を酵素の作用を利用
して得る方法も検討され、例えばコウジ酸の２位のヒド
ロキシ基にグルコースをα結合したコウジ酸グルコシド
（α−グルコピラノシルコウジ酸）の製造法（特開平４
−４６１９１号公報参照）が知られている。また、この
方法がコウジ酸配糖体がα−アミラーゼの糖転移反応に
より得られるものであることも知られている（平成３年
度日本発酵工学会大会講演要旨集２４８頁参照）。しか
しながら、５位のヒドロキシ基にグルコースが結合した
コウジ酸配糖体並びに上記２位のヒドロキシ基にグルコ
ースが結合したコウジ酸配糖体を糖転移酵素により、効
率よく製造する方法は知られていない。
た生理活性を有するコウジ酸誘導体を有機合成により製
造する方法が種々検討されており、例えばコウジ酸の２
位のヒドロキシ基をアシル化して、２−アルキルカルボ
ニルオキシメチル−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４
−オンを製造する方法（特開昭５４−９２６３２号公報
参照）、２−ベンゾイルオキシメチル−５−ヒドロキシ
−４Ｈ−ピラン−４−オン、２−シンナモイルオキシメ
チル−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン及び２
−フェノキシメチル−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−
４−オンを製造する方法（特開昭５９−３３２０７号公
報参照）、及びコウジ酸の２位のヒドロキシ基を２−ピ
ロリドン−５−イン基またはピリジル基により置換する
コウジ酸誘導体の製造法（特開昭６０−２３３０７１号
公報参照）が知られている。また、最近このように優れ
た生理活性を有するコウジ酸誘導体を酵素の作用を利用
して得る方法も検討され、例えばコウジ酸の２位のヒド
ロキシ基にグルコースをα結合したコウジ酸グルコシド
（α−グルコピラノシルコウジ酸）の製造法（特開平４
−４６１９１号公報参照）が知られている。また、この
方法がコウジ酸配糖体がα−アミラーゼの糖転移反応に
より得られるものであることも知られている（平成３年
度日本発酵工学会大会講演要旨集２４８頁参照）。しか
しながら、５位のヒドロキシ基にグルコースが結合した
コウジ酸配糖体並びに上記２位のヒドロキシ基にグルコ
ースが結合したコウジ酸配糖体を糖転移酵素により、効
率よく製造する方法は知られていない。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで本発明は、チロシ
ナーゼ活性阻害により顕著なメラニン生成阻害作用を有
し、美白化粧料等の外用剤として有用な新規化合物を提
供すること、またその製造法を提供することを目的とし
て種々検討を重ねた結果、遂に本発明を完成した。
ナーゼ活性阻害により顕著なメラニン生成阻害作用を有
し、美白化粧料等の外用剤として有用な新規化合物を提
供すること、またその製造法を提供することを目的とし
て種々検討を重ねた結果、遂に本発明を完成した。
【０００５】即ち、本発明は式
【化３】 で示されるコウジ酸配糖体であり、また本発明はこのコ
ウジ酸配糖体を有効成分として含有する美白化粧料であ
り、また本発明はコウジ酸に糖供与体の存在下、シュー
クロースホスホリラーゼを作用させることを特徴とする
式
ウジ酸配糖体を有効成分として含有する美白化粧料であ
り、また本発明はコウジ酸に糖供与体の存在下、シュー
クロースホスホリラーゼを作用させることを特徴とする
式
【化４】 （式中Ｒ１がグルコシル基であるときはＲ２は水素原
子、Ｒ１が水素原子であるときはＲ２はグルコシル基で
ある）で示されるコウジ酸配糖体の製造法である。
子、Ｒ１が水素原子であるときはＲ２はグルコシル基で
ある）で示されるコウジ酸配糖体の製造法である。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
用いられるコウジ酸は公知化合物であって、アスペルギ
ルス属、ペニシリウム属に属し、コウジ酸生成能を有す
る糸状菌を固体培養、又は液体培養し、該培養物より公
知の方法で単離、精製することにより得られるが、市販
もされているので容易に入手することができる。そし
て、使用に際してはコウジ酸またはその含有物いずれを
用いてもよい。
用いられるコウジ酸は公知化合物であって、アスペルギ
ルス属、ペニシリウム属に属し、コウジ酸生成能を有す
る糸状菌を固体培養、又は液体培養し、該培養物より公
知の方法で単離、精製することにより得られるが、市販
もされているので容易に入手することができる。そし
て、使用に際してはコウジ酸またはその含有物いずれを
用いてもよい。
【０００７】このコウジ酸は、水に対する溶解度が低い
（５〜１０ｍｇ／ｍｌ）ので、予めジメチルスルホキサ
イド（ＤＭＳＯ）、メタノール、エタノール、プロパノ
ール等の有機溶媒に溶解（１００〜６００ｍｇ／ｍｌ）
し、できるだけコウジ酸の濃度を高くして使用すること
が効率良くコウジ酸配糖体を取得する上で好ましい。
（５〜１０ｍｇ／ｍｌ）ので、予めジメチルスルホキサ
イド（ＤＭＳＯ）、メタノール、エタノール、プロパノ
ール等の有機溶媒に溶解（１００〜６００ｍｇ／ｍｌ）
し、できるだけコウジ酸の濃度を高くして使用すること
が効率良くコウジ酸配糖体を取得する上で好ましい。
【０００８】糖供与体としては、グルコシル残基の少な
くとも１分子がコウジ酸分子に転移され得るもの、例え
ばシュークロース、グルコース−１−リン酸等が挙げら
れる。これらは、必要により併用してもよい。
くとも１分子がコウジ酸分子に転移され得るもの、例え
ばシュークロース、グルコース−１−リン酸等が挙げら
れる。これらは、必要により併用してもよい。
【０００９】次に、本発明で用いられるシュークロース
ホスホリラーゼは、無機リンの存在下でシュークロース
に作用してグルコース−１−リン酸とフラクトースとを
生成する、またはこの逆反応を触媒する酵素で、公知の
酵素で、例えば以下に述べる文献に記載の微生物を利用
して製造することにより容易にに得ることができる。
ホスホリラーゼは、無機リンの存在下でシュークロース
に作用してグルコース−１−リン酸とフラクトースとを
生成する、またはこの逆反応を触媒する酵素で、公知の
酵素で、例えば以下に述べる文献に記載の微生物を利用
して製造することにより容易にに得ることができる。
【００１０】即ち、例えばロイコノストック・メセンテ
ロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏ
ｉｄｅｓ）、シュードモナス・サッカロフィラ（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ）、シ
ュードモナス・パトリファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）、クロストリジウ
ム・パスティリアナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａ
ｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）、 アセトバクター・キシリナ
ム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｍ）、プル
ラリア・プルランス（Ｐｕｌｌｕｌａｒｉａ ｐｕｌｌ
ｕｌａｎｓ）等のものが知られている〔バイオテクノロ
ジー・アンド・バンオエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，）Ｖｏｌ．２９，第８〜１
５頁，１９８７年参照〕に属するシュークロースホスホ
リラーゼ生産能を有する微生物を、栄養培地に接種、培
養して、該酵素を生産蓄積せしめ、次いで常法により該
酵素を分離することにより得られる。このシュークロー
スホスホリラーゼは、粗酵素、精製酵素、市販酵素（例
えば、キッコーマン社製造、フナコシ社販売、シューク
ロースホスホリラーゼ）等、いずれを用いてもよい。
ロイデス（Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏ
ｉｄｅｓ）、シュードモナス・サッカロフィラ（Ｐｓｅ
ｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ）、シ
ュードモナス・パトリファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏ
ｎａｓ ｐｕｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）、クロストリジウ
ム・パスティリアナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｐａ
ｓｔｅｕｒｉａｎｕｍ）、 アセトバクター・キシリナ
ム（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ ｘｙｌｉｎｕｍ）、プル
ラリア・プルランス（Ｐｕｌｌｕｌａｒｉａ ｐｕｌｌ
ｕｌａｎｓ）等のものが知られている〔バイオテクノロ
ジー・アンド・バンオエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，）Ｖｏｌ．２９，第８〜１
５頁，１９８７年参照〕に属するシュークロースホスホ
リラーゼ生産能を有する微生物を、栄養培地に接種、培
養して、該酵素を生産蓄積せしめ、次いで常法により該
酵素を分離することにより得られる。このシュークロー
スホスホリラーゼは、粗酵素、精製酵素、市販酵素（例
えば、キッコーマン社製造、フナコシ社販売、シューク
ロースホスホリラーゼ）等、いずれを用いてもよい。
【００１１】本発明を実施するには、先ずコウジ酸と糖
供与体とを水に溶解して、混合液を調製する。水に対す
る上記２つの成分の添加量は、全体として重量％濃度で
５〜８０％、好ましくは２０〜６０％である。
供与体とを水に溶解して、混合液を調製する。水に対す
る上記２つの成分の添加量は、全体として重量％濃度で
５〜８０％、好ましくは２０〜６０％である。
【００１２】そして、上記混合液に対するシュークロー
スホスホリラーゼの添加量は、コウジ酸と糖供与体の合
計重量１グラム当たり１単位以上、望ましくは５０〜２
００単位である。なお、１単位とは特開平３−４７８５
「シュークロースホスホリラーゼの製造法」に記載の方
法に従って求めたもの、即ち２５℃、１分間当たり１μ
モルのシュークロースをグルコース−１−リン酸へ変換
する酵素量を意味する。
スホスホリラーゼの添加量は、コウジ酸と糖供与体の合
計重量１グラム当たり１単位以上、望ましくは５０〜２
００単位である。なお、１単位とは特開平３−４７８５
「シュークロースホスホリラーゼの製造法」に記載の方
法に従って求めたもの、即ち２５℃、１分間当たり１μ
モルのシュークロースをグルコース−１−リン酸へ変換
する酵素量を意味する。
【００１３】また、酵素反応のｐＨは５．０〜８．５、
好ましくは７．０〜８．０であり、また温度は２０〜５
０℃、好ましくは３５〜４５℃であり、また時間は１〜
４８時間、好ましくは５〜４０時間である。
好ましくは７．０〜８．０であり、また温度は２０〜５
０℃、好ましくは３５〜４５℃であり、また時間は１〜
４８時間、好ましくは５〜４０時間である。
【００１４】このようにして、コウジ酸配糖体を含有す
る反応終了液が得られる。得られた反応終了液から目的
とするコウジ酸配糖体の分離は、そのまま、または以下
に述べるような予備処理をした後、液体クロマトグラフ
ィ法、又は有機溶媒抽出法等により単離精製する。
る反応終了液が得られる。得られた反応終了液から目的
とするコウジ酸配糖体の分離は、そのまま、または以下
に述べるような予備処理をした後、液体クロマトグラフ
ィ法、又は有機溶媒抽出法等により単離精製する。
【００１５】予備処理の具体的な方法としては、得られ
た酵素反応終了液を吸着樹脂（例えば活性炭）を充填し
たカラムに通液して、目的とするコウジ酸配糖体（通常
２種類の配糖体が生成する）及び未反応のコウジ酸を吸
着し、次いで蒸留水を通液して未反応の糖供与体、シュ
ークロースホスホリラーゼ（蛋白質）等を溶出した後、
次いでエタノール溶液を通液し、未反応のコウジ酸及び
２種類のコウジ酸配糖体を溶出し、このようにして得ら
れたコウジ酸及びコウジ酸配糖体を含む溶出液はエタノ
ールを蒸発等の方法により除去し、濃縮する等の方法が
挙げられる。
た酵素反応終了液を吸着樹脂（例えば活性炭）を充填し
たカラムに通液して、目的とするコウジ酸配糖体（通常
２種類の配糖体が生成する）及び未反応のコウジ酸を吸
着し、次いで蒸留水を通液して未反応の糖供与体、シュ
ークロースホスホリラーゼ（蛋白質）等を溶出した後、
次いでエタノール溶液を通液し、未反応のコウジ酸及び
２種類のコウジ酸配糖体を溶出し、このようにして得ら
れたコウジ酸及びコウジ酸配糖体を含む溶出液はエタノ
ールを蒸発等の方法により除去し、濃縮する等の方法が
挙げられる。
【００１６】以上の如き予備処理をし、またはすること
なく得られた反応終了液から目的とするコウジ酸配糖体
を分離する方法として、液体クロマトグラフィ法による
場合は、例えば、強酸性イオン交換、逆相分配モードの
ＯＤＳカラム処理、または順相分配モードのアミノカラ
ム処理（硬質ポリマーにポリアミンを化学結合させたア
ミノカラムに供しアセトニトリル溶媒液等によって、コ
ウジ酸配糖体画分を分離溶出し）をして、目的とするコ
ウジ酸配糖体画分を得、減圧濃縮、凍結乾燥等により製
品を得る。また、有機溶媒抽出法による場合は、反応終
了液にメタノール、クロロホルム、酢酸、酢酸エチル等
の有機溶媒を混和し、以下常法による抽出を行う方法等
により単離精製することができる。上記、液体クロマト
グラフィー法及び有機溶媒抽出法は、それぞれ単独、ま
たは組合せて単離精製してもよい。
なく得られた反応終了液から目的とするコウジ酸配糖体
を分離する方法として、液体クロマトグラフィ法による
場合は、例えば、強酸性イオン交換、逆相分配モードの
ＯＤＳカラム処理、または順相分配モードのアミノカラ
ム処理（硬質ポリマーにポリアミンを化学結合させたア
ミノカラムに供しアセトニトリル溶媒液等によって、コ
ウジ酸配糖体画分を分離溶出し）をして、目的とするコ
ウジ酸配糖体画分を得、減圧濃縮、凍結乾燥等により製
品を得る。また、有機溶媒抽出法による場合は、反応終
了液にメタノール、クロロホルム、酢酸、酢酸エチル等
の有機溶媒を混和し、以下常法による抽出を行う方法等
により単離精製することができる。上記、液体クロマト
グラフィー法及び有機溶媒抽出法は、それぞれ単独、ま
たは組合せて単離精製してもよい。
【００１７】
【本発明の効果】本発明によればコウジ酸に糖供与体の
存在下、シュークロースホスホリラーゼを作用させると
いう極めて簡単な操作によって、反応液中にコウジ酸５
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド（上記式化２におい
て、Ｒ１がグルコシル基であり且つ、Ｒ２が水素原子で
ある）及びコウジ酸２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド
（上記式化２においてＲ１が水素原子であり且つＲ２が
グルコシル基である）の２種類のコウジ酸配糖体を得る
ことができる。これらのコウジ酸配糖体は、コウジ酸の
優れた生理活性を有し、強いチロシナーゼ活性阻害効果
を示し、これらを有効成分とする化粧料は人体に対して
好ましくない副作用を有さず、人体皮膚内に存在するチ
ロシナーゼの活性を阻止し、優れたメラニン生成抑制作
用を示す。また、コウジ酸そのものは前述したように、
水に対する溶解度が低くその利用に際して非常に制約を
受けると言う欠点を有しているが、本発明で得られるコ
ウジ酸配糖体は水に対する溶解度が非常に高い特徴を有
しており（コウジ酸に比べて約１０倍）、その優れた生
理活性をさらに助長するものである。
存在下、シュークロースホスホリラーゼを作用させると
いう極めて簡単な操作によって、反応液中にコウジ酸５
−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド（上記式化２におい
て、Ｒ１がグルコシル基であり且つ、Ｒ２が水素原子で
ある）及びコウジ酸２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド
（上記式化２においてＲ１が水素原子であり且つＲ２が
グルコシル基である）の２種類のコウジ酸配糖体を得る
ことができる。これらのコウジ酸配糖体は、コウジ酸の
優れた生理活性を有し、強いチロシナーゼ活性阻害効果
を示し、これらを有効成分とする化粧料は人体に対して
好ましくない副作用を有さず、人体皮膚内に存在するチ
ロシナーゼの活性を阻止し、優れたメラニン生成抑制作
用を示す。また、コウジ酸そのものは前述したように、
水に対する溶解度が低くその利用に際して非常に制約を
受けると言う欠点を有しているが、本発明で得られるコ
ウジ酸配糖体は水に対する溶解度が非常に高い特徴を有
しており（コウジ酸に比べて約１０倍）、その優れた生
理活性をさらに助長するものである。
【００１８】以下、実施例を示して本発明をより具体的
に説明する。
に説明する。
【実施例１】コウジ酸２ｇを２０ｍｌのＤＭＳＯに溶解
し、これを１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝
液に５００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したシュークロース
溶液８０ｍｌに混合し、これにシュークロースホスホリ
ラーゼ（キッコーマン社製造、フナコシ社販売）９，０
００単位を添加し、４２℃、２４時間反応させ、糖化合
物生成反応を行い、次いで、７０℃、１０分間加熱処理
して酵素反応を停止し酵素反応終了液を得た。この反応
終了液のＨＰＬＣ分析の結果を図１に示す。図１の結果
から、反応終了液には、コウジ酸と共に２種類のコウジ
酸配糖体が含まれていることが確認できる。図１に示し
たように先に溶出される配糖体をコウジ酸配糖体１（以
下、これをＫＡＧ１という）、後に溶出される配糖体を
コウジ酸配糖体２（以下、これをＫＡＧ２という）とす
る。図２にはＨＰＬＣ分析による酵素反応におけるコウ
ジ酸配糖体転移率の経時的変化の様子を示す。 ［高速液体クロマトグラムによるＨＰＬＣ分析の条件］ カラム；Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ２Ｐ５０、内径、４．
６ｍｍ、長さ、２５０ｍｍ 流速；１ｍｌ／分 移動相；アセトニトリル：Ｈ2Ｏ＝８０：２０ 検出波長；２７０ｎｍ
し、これを１００ｍＭ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝
液に５００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したシュークロース
溶液８０ｍｌに混合し、これにシュークロースホスホリ
ラーゼ（キッコーマン社製造、フナコシ社販売）９，０
００単位を添加し、４２℃、２４時間反応させ、糖化合
物生成反応を行い、次いで、７０℃、１０分間加熱処理
して酵素反応を停止し酵素反応終了液を得た。この反応
終了液のＨＰＬＣ分析の結果を図１に示す。図１の結果
から、反応終了液には、コウジ酸と共に２種類のコウジ
酸配糖体が含まれていることが確認できる。図１に示し
たように先に溶出される配糖体をコウジ酸配糖体１（以
下、これをＫＡＧ１という）、後に溶出される配糖体を
コウジ酸配糖体２（以下、これをＫＡＧ２という）とす
る。図２にはＨＰＬＣ分析による酵素反応におけるコウ
ジ酸配糖体転移率の経時的変化の様子を示す。 ［高速液体クロマトグラムによるＨＰＬＣ分析の条件］ カラム；Ａｓａｈｉｐａｋ ＮＨ２Ｐ５０、内径、４．
６ｍｍ、長さ、２５０ｍｍ 流速；１ｍｌ／分 移動相；アセトニトリル：Ｈ2Ｏ＝８０：２０ 検出波長；２７０ｎｍ
【００１９】
【実施例２】次に、上記実施例１で得られた酵素反応終
了液１００ｍｌに蒸留水を４００ｍｌを混合し、この混
合液を活性炭カラム（内径３０ｍｍ、長さ３００ｍｍ）
に通液し、未反応の糖及び酵素を水で溶出した後、５０
％エタノール溶液にてコウジ酸とコウジ酸配糖体画分を
溶出した。このようにして得られた未反応のコウジ酸と
目的とする２種類のコウジ酸配糖体を含有する溶液はロ
ータリーエバポレーターにて１／４０容量となるまで濃
縮した。ついで、この濃縮液を順相分配モードのアミノ
カラムであるＡｓａｈｉｐａｋＮＨ２Ｐ−５０カラム
（内径１０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）に供し、８０％アセ
トニトリル溶液を通流させて、目的とするＫＡＧ１、Ｋ
ＡＧ２画分を得、各々ロータリーエバポレーターにより
減圧濃縮を行い、凍結乾燥した。目的とするコウジ酸配
糖体ＫＡＧ１と思われる粉末約３２０ｍｇ、コウジ酸配
糖体ＫＡＧ２と思われる粉末約５３０ｍｇを得た。上記
粉末を前述の条件で、高速液体クロマトグラフィーによ
りコウジ酸配糖体ＫＡＧ１及びＫＡＧ２の純度を測定し
たところいずれも９８％であった。
了液１００ｍｌに蒸留水を４００ｍｌを混合し、この混
合液を活性炭カラム（内径３０ｍｍ、長さ３００ｍｍ）
に通液し、未反応の糖及び酵素を水で溶出した後、５０
％エタノール溶液にてコウジ酸とコウジ酸配糖体画分を
溶出した。このようにして得られた未反応のコウジ酸と
目的とする２種類のコウジ酸配糖体を含有する溶液はロ
ータリーエバポレーターにて１／４０容量となるまで濃
縮した。ついで、この濃縮液を順相分配モードのアミノ
カラムであるＡｓａｈｉｐａｋＮＨ２Ｐ−５０カラム
（内径１０ｍｍ、長さ２５０ｍｍ）に供し、８０％アセ
トニトリル溶液を通流させて、目的とするＫＡＧ１、Ｋ
ＡＧ２画分を得、各々ロータリーエバポレーターにより
減圧濃縮を行い、凍結乾燥した。目的とするコウジ酸配
糖体ＫＡＧ１と思われる粉末約３２０ｍｇ、コウジ酸配
糖体ＫＡＧ２と思われる粉末約５３０ｍｇを得た。上記
粉末を前述の条件で、高速液体クロマトグラフィーによ
りコウジ酸配糖体ＫＡＧ１及びＫＡＧ２の純度を測定し
たところいずれも９８％であった。
【００２０】次に、上記２種類のコウジ酸配糖体の構造
を以下の核磁気共鳴スペクトル及びマススペクトルによ
り分析したところ、ＫＡＧ１は新規なコウジ酸 ５−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシドであることが確認され、Ｋ
ＡＧ２は特開平４−４６１９１のコウジ酸誘導体と全く
同じ結果を示し、コウジ酸 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシドであることが確認された。即ち、上記ＫＡＧ１
の粉末を常法に従って、重ＤＭＳＯに溶解し、1Ｈ−核
磁気共鳴スペクトル及び13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルに
より測定し、構造の解析をしたところそれぞれ図３（1
Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨZ））及び図４（13Ｃ−ＮＭＲ
（５０ＭＨZ））が得られ、これらの図より構成成分は
グルコース１分子とコウジ酸１分子であり、グルコース
の１位とコウジ酸の５位がα結合していることが判明し
た。
を以下の核磁気共鳴スペクトル及びマススペクトルによ
り分析したところ、ＫＡＧ１は新規なコウジ酸 ５−Ｏ
−α−Ｄ−グルコピラノシドであることが確認され、Ｋ
ＡＧ２は特開平４−４６１９１のコウジ酸誘導体と全く
同じ結果を示し、コウジ酸 ２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピ
ラノシドであることが確認された。即ち、上記ＫＡＧ１
の粉末を常法に従って、重ＤＭＳＯに溶解し、1Ｈ−核
磁気共鳴スペクトル及び13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルに
より測定し、構造の解析をしたところそれぞれ図３（1
Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨZ））及び図４（13Ｃ−ＮＭＲ
（５０ＭＨZ））が得られ、これらの図より構成成分は
グルコース１分子とコウジ酸１分子であり、グルコース
の１位とコウジ酸の５位がα結合していることが判明し
た。
【００２１】次に、本実施例２で得られたＫＡＧ１のコ
ウジ酸配糖体を常法に従って、マススペクトルにより分
析を行ったところ図５が得られ、この結果から本発明の
方法で得られた化合物の分子量は３０４であることを確
認した。
ウジ酸配糖体を常法に従って、マススペクトルにより分
析を行ったところ図５が得られ、この結果から本発明の
方法で得られた化合物の分子量は３０４であることを確
認した。
【００２２】次に、本発明の方法で得られたコウジ酸配
糖体を常法に従ってＵＶ及び、ＩＲスペクトルを調べた
結果、それぞれ図６、図７が得られた。ＵＶスペクトル
は検体を蒸留水に溶解して測定し、そして、ＩＲスペク
トルはＫＢｒ法により測定した。この結果から、得られ
た糖化合物はコウジ酸 ５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シドであることが確認された。
糖体を常法に従ってＵＶ及び、ＩＲスペクトルを調べた
結果、それぞれ図６、図７が得られた。ＵＶスペクトル
は検体を蒸留水に溶解して測定し、そして、ＩＲスペク
トルはＫＢｒ法により測定した。この結果から、得られ
た糖化合物はコウジ酸 ５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノ
シドであることが確認された。
【００２３】
【応用例１】 「コウジ酸 ５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシドのチロ
シナーゼ活性阻害効果」 上記実施例２で得られたＫＡＧ１並びにＫＡＧ２の試験
管内（インビトロ）でのチロシナーゼ活性阻害効果を調
べた。試験方法として、基本的には特開平４−４５７９
１号公報に準じて行い、チロシナーゼによるＬ−ドーパ
から生成されるドーパクロム（最大吸収波長４７５ｎ
ｍ）を測定した。 （１）反応系試験溶液；Ｌ−ドーパ溶液：Ｌ−ドーパ
（和光純薬社製）の０．０５％（Ｗ／Ｖ）水溶液試料溶
液：ＫＡＧ１又はＫＡＧ２を、０．０１μｍｏｌ／ｍｌ
の濃度となるように５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．８）
に溶解して調製した。 酢酸緩衝液：５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．８） チロシナーゼ溶液：チロシナーゼ（シグマ社製マッシュ
ルーム起源、２，０００単位／ｍｇ）０．７ｍｇを上記
酢酸緩衝液１ｍｌに溶解して調製。なお、上記反応系試
験溶液は、測定まで氷で冷やしておく。 （２）チロシナーゼ活性阻害率の測定。 反応液の調製 チロシナーゼ活性阻害率の測定に当たり、反応系試験溶
液を表１に記載の如き組成となるように混合し、Ｃ１、
Ｃ２、Ｔ１、Ｔ２の四つの反応液を調製した。次いで、
試験管１２本を３本づつ４区分に分け、それぞれの区分
に上記反応液を入れ、室温に５分以上放置した後、次の
測定操作に移行した。３７℃にて測定を行った。 測定 上記で調製したＣ１、Ｃ２、Ｔ１、Ｔ２のそれぞれの反
応液にチロシナーゼ溶液０．０５ｍｌを添加すると、チ
ロシナーゼの作用によってＬ−ドーパが減少して反対に
ドーパクロムが増大し、反応液は次第に赤橙色に変化し
てゆくので、１分毎に４７５ｎｍにおける吸光度をギル
フォード社製スペクトロフォトメーター（セル温度３７
℃）にて測定した。Ｃ１−Ｃ２（コントロール）、ＫＡ
Ｇ１のＴ１−Ｔ２（本発明）、及びＫＡＧ２のＴ１−Ｔ
２（本発明）について、吸光度の増加した値の変化を調
べた。その結果を図８に示す。図８は、コントロールに
比べて、数値が低いほどチロシナーゼ活性の阻害が大き
いことを示す。 チロシナーゼ活性阻害率の計算、 添加時より５分後の吸光度からＣ１、Ｃ２、Ｔ１、Ｔ
２、について３つづつデータが得られるのでそれぞれに
ついて平均値を求め、それぞれＣ１、Ｃ２、Ｔ１、Ｔ２
とし、次式に従ってチロシナーゼ活性阻害率を求めた。 式；阻害率（％）＝［１−（Ｔ１−Ｔ２）／（Ｃ１−Ｃ
２）］×１００
シナーゼ活性阻害効果」 上記実施例２で得られたＫＡＧ１並びにＫＡＧ２の試験
管内（インビトロ）でのチロシナーゼ活性阻害効果を調
べた。試験方法として、基本的には特開平４−４５７９
１号公報に準じて行い、チロシナーゼによるＬ−ドーパ
から生成されるドーパクロム（最大吸収波長４７５ｎ
ｍ）を測定した。 （１）反応系試験溶液；Ｌ−ドーパ溶液：Ｌ−ドーパ
（和光純薬社製）の０．０５％（Ｗ／Ｖ）水溶液試料溶
液：ＫＡＧ１又はＫＡＧ２を、０．０１μｍｏｌ／ｍｌ
の濃度となるように５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．８）
に溶解して調製した。 酢酸緩衝液：５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ６．８） チロシナーゼ溶液：チロシナーゼ（シグマ社製マッシュ
ルーム起源、２，０００単位／ｍｇ）０．７ｍｇを上記
酢酸緩衝液１ｍｌに溶解して調製。なお、上記反応系試
験溶液は、測定まで氷で冷やしておく。 （２）チロシナーゼ活性阻害率の測定。 反応液の調製 チロシナーゼ活性阻害率の測定に当たり、反応系試験溶
液を表１に記載の如き組成となるように混合し、Ｃ１、
Ｃ２、Ｔ１、Ｔ２の四つの反応液を調製した。次いで、
試験管１２本を３本づつ４区分に分け、それぞれの区分
に上記反応液を入れ、室温に５分以上放置した後、次の
測定操作に移行した。３７℃にて測定を行った。 測定 上記で調製したＣ１、Ｃ２、Ｔ１、Ｔ２のそれぞれの反
応液にチロシナーゼ溶液０．０５ｍｌを添加すると、チ
ロシナーゼの作用によってＬ−ドーパが減少して反対に
ドーパクロムが増大し、反応液は次第に赤橙色に変化し
てゆくので、１分毎に４７５ｎｍにおける吸光度をギル
フォード社製スペクトロフォトメーター（セル温度３７
℃）にて測定した。Ｃ１−Ｃ２（コントロール）、ＫＡ
Ｇ１のＴ１−Ｔ２（本発明）、及びＫＡＧ２のＴ１−Ｔ
２（本発明）について、吸光度の増加した値の変化を調
べた。その結果を図８に示す。図８は、コントロールに
比べて、数値が低いほどチロシナーゼ活性の阻害が大き
いことを示す。 チロシナーゼ活性阻害率の計算、 添加時より５分後の吸光度からＣ１、Ｃ２、Ｔ１、Ｔ
２、について３つづつデータが得られるのでそれぞれに
ついて平均値を求め、それぞれＣ１、Ｃ２、Ｔ１、Ｔ２
とし、次式に従ってチロシナーゼ活性阻害率を求めた。 式；阻害率（％）＝［１−（Ｔ１−Ｔ２）／（Ｃ１−Ｃ
２）］×１００
【００２４】図８の結果から、コウジ酸配糖体を含まな
いコントロールの区分はチロシナーゼの作用によってＬ
−ドーパが減少して反対にドーパクロムが増大し、時間
の経過と共に吸光度が増大するが、ＫＡＧ１、ＫＡＧ２
を含む本発明の区分は、該物質の存在によってチロシナ
ーゼの作用が阻害されるので、反応生成物であるドーパ
クロムに由来する吸光度の増大は低く抑えられ、ＫＡＧ
１を含む区分はチロシナーゼ活性阻害率が５１．５％、
そしてＫＡＧ２を含む区分は、その値が７６．３％と非
常に高い値であった。上記結果より本発明の方法により
得られる、コウジ酸配糖体、特にＫＡＧ１及びＫＡＧ２
は、チロシナーゼ活性阻害作用を有し、美白化粧料の有
効な成分として利用できることが判る。
いコントロールの区分はチロシナーゼの作用によってＬ
−ドーパが減少して反対にドーパクロムが増大し、時間
の経過と共に吸光度が増大するが、ＫＡＧ１、ＫＡＧ２
を含む本発明の区分は、該物質の存在によってチロシナ
ーゼの作用が阻害されるので、反応生成物であるドーパ
クロムに由来する吸光度の増大は低く抑えられ、ＫＡＧ
１を含む区分はチロシナーゼ活性阻害率が５１．５％、
そしてＫＡＧ２を含む区分は、その値が７６．３％と非
常に高い値であった。上記結果より本発明の方法により
得られる、コウジ酸配糖体、特にＫＡＧ１及びＫＡＧ２
は、チロシナーゼ活性阻害作用を有し、美白化粧料の有
効な成分として利用できることが判る。
【図１】実施例１で得られた、２種類のコウジ酸配糖体
を含む酵素反応終了液のＨＰＬＣ分析の結果を示す。
を含む酵素反応終了液のＨＰＬＣ分析の結果を示す。
【図２】ＨＰＬＣ分析により求めた、実施例１の酵素反
応におけるコウジ酸配糖体（ＫＡＧ１及びＫＡＧ２）転
移率の経時的変化の結果を示す。
応におけるコウジ酸配糖体（ＫＡＧ１及びＫＡＧ２）転
移率の経時的変化の結果を示す。
【図３】コウジ酸 ５−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシド
の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨZ）（重ＤＭ
ＳＯ）を示す。
の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨZ）（重ＤＭ
ＳＯ）を示す。
【図４】同化合物の13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（５０
ＭＨZ）（重ＤＭＳＯ）を示す。
ＭＨZ）（重ＤＭＳＯ）を示す。
【図５】同化合物のマススペクトルを示す。
【図６】同化合物を蒸留水に溶解したときのＵＶスペク
トルを示す。
トルを示す。
【図７】同化合物のＫＢｒ法によるＩＲスペクトルを示
す。
す。
【図８】同化合物並びにコウジ酸 ２−Ｏ−α−Ｄ−グ
ルコピラノシドのチロシナーゼによりＬ−ドーパからド
ーパクロム生成を抑制するパターンを示す。
ルコピラノシドのチロシナーゼによりＬ−ドーパからド
ーパクロム生成を抑制するパターンを示す。
Claims (3)
- 【請求項１】式 【化１】 で示されるコウジ酸配糖体。
- 【請求項２】請求項１記載のコウジ酸配糖体を有効成分
として含有する美白化粧料。 - 【請求項３】コウジ酸に糖供与体の存在下、シュークロ
ースホスホリラーゼを作用させることを特徴とする式 【化２】 （式中Ｒ１がグルコシル基であるときはＲ２は水素原
子、Ｒ１が水素原子であるときはＲ２はグルコシル基で
ある）で示されるコウジ酸配糖体の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22653792A JPH0656872A (ja) | 1992-08-04 | 1992-08-04 | コウジ酸配糖体及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22653792A JPH0656872A (ja) | 1992-08-04 | 1992-08-04 | コウジ酸配糖体及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0656872A true JPH0656872A (ja) | 1994-03-01 |
Family
ID=16846701
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22653792A Pending JPH0656872A (ja) | 1992-08-04 | 1992-08-04 | コウジ酸配糖体及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0656872A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100486921B1 (ko) * | 2002-11-08 | 2005-05-03 | 주식회사 바이오랜드 | 코직산 유도체의 신규 제조방법 |
| KR20160046136A (ko) | 2014-10-20 | 2016-04-28 | 한밭대학교 산학협력단 | 신규한 코직산 컨쥬게이트 화합물 및 그의 용도 |
-
1992
- 1992-08-04 JP JP22653792A patent/JPH0656872A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100486921B1 (ko) * | 2002-11-08 | 2005-05-03 | 주식회사 바이오랜드 | 코직산 유도체의 신규 제조방법 |
| KR20160046136A (ko) | 2014-10-20 | 2016-04-28 | 한밭대학교 산학협력단 | 신규한 코직산 컨쥬게이트 화합물 및 그의 용도 |
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