JPH06509327A - エラスターゼ抑制のための組成とその方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 エラスターゼ抑制のための組成とその方法本明細書において多種の文献を引用す るが、文献のリストを明細書の最後に添付する。これらの文献全文を言及により 本明細書に包括し、本発明のかかわる技術の現水準を説明する。

皮■λ１ 背」Ｕｌ術 α１アンチトリプシン（ＡＡＴ）は、５２ｋＤａプラズマ・セリンプロテアーゼ インヒビターである。そのノーマルな血漿濃度は１５０〜３５０　ｍ　ｇ　／　 ｄ　ｌ　（Ｂｒａｎｔ−１ｙ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８８）であるが、宿主の炎 症反応および／または妊娠、急性感染症、腫瘍、エストロゲン、チフス・ワクチ ンなどの組織損傷に対する反応の際に３倍から４倍に増える急性期反応を見せる ことがある（　１＜ｕｓｈｎｅｒ　＋１９８８；　５ｃｈｒｅｉｂｅｒ、　１９ ８７）。ＡＡＴはトリプシン、キモトリプシン、プラスミン、トロンビン、カリ クレイン、Ｘ　゛ａ因子、プラスモーゲン、カテプシンＧなどを含む多種のプロ テアーゼを抑制することもできるが（Ｃａｒｒｅｌ　ｅｔａｔ、、１９８Ｅｉ； 　Ｌａｕｒｅｌｌ　＆　Ｊｅｐｐｓｏｎ　１９７５；　Ｔｒａｗｌｓ　＆　５ａ ｌｖｅ−ｓｅｎ、　１９８３）、その主たる生理学的役割は好中球エラスターゼ の抑制である。好中球エラスターゼはエラスチンを攻撃できるだけではなく、１ １　および　型コラーゲン、プロテオグリカンのたんばく部分や、ラミニンなど の結合組織たんばくを切断することもできる（Ｂｉｅｔｈ、　１９８Ｇ）。

しかしながら、ＡＡＴはかかる分解をしっかり結合した酵素：インヒビターの１ 対１錯体を作ることによって防ぎ、その結果ＡＡＴのＭＥＴ−３５８と５ＥＲ− ３５９の間にあるインヒビターの反応中心のたんばく質が徐々に切断される。

ヒ）ＡＡＴの反応中心は、ストレス・ループ構造の（ＡＬＡ−３５０）から（Ｓ ＥＲ−３５９）の照射ペプチド内に含まれていて（Ｃａｒｒｅｌｌ、　１９８１ １ｉ；　Ｂｒｕｃｈ　ｅｔ　ａｌ、。

１９８Ｂ）、これはα−２−マクログロブリンのベート部分に比肩するといえよ う（Ｓ−Ｊｅｎｓｅｎ、　１９８７）。これまでに試験したバクテリア、植物、 爬虫類および咄乳類の酵素を含むセリンプロテイナーゼはいずれも、天然のイン ヒビターのループ内の結合を破壊すると報告されている。例えば、カテプシンＬ 　（Ｊｏｈｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８Ｇ）やＳｅｒｒａｔｌａｍａｒｃ ｅｓｃｅｎＳメタロプロテイナーゼ（Ｖｌｒｃａ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８２） は、ＭＥＴ−３５８と５ＥＲ−３５９の間のペプチド結合を切断すると報告され ている。一方、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ憇旦剃皿ユ（Ｍｏｒｌｈａｒａ　ｅｔ　 ａｌ、、　１９８４）、マクロファージエラスターゼ（Ｂａｎｄａ　ｅｔ　ａｌ 、、　１９８５）やＰＮＭコラゲナーゼ（Ｋｎ’ａｕｐｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　 １９９０）は、ＰＲＯ−３５７とＭＥＴ−３５８の間のペプチド結合における１ つのアミノ酸残基Ｎ−末端を切断すると報告されている。カテプシンＬ　（Ｊｏ ｈｎｓｏｎ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８Ｇ）やＳｔａ　ｈ　Ｉｏｃｏｃｃｕｓａｕ ｒｅｕｓのシスティンやセリンプロテイナーゼ（Ｐｏｔｅｍｐａｅｔ　ａｌ、、 　１９８１１ｉ）もＧＬＵ−３５４とＡＬＡ−３５５の間のペプチド結合を切断 すると報告されており、−力泳ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓメタロプロ テイナーゼ（Ｐｏｔｅｍｐａ　ｅｔａｌ、、　１！３８Ｇ）、分泌ＰＭＮメタロ プロテイナーゼ（Ｄｅｓｏ−ｃｈｅｒｓ　ａｎｄ　Ｗｅｉｓｓ、　１９８８．　 Ｖｉｓｓｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、、　１９８８）や２ＭＮコラゲナーゼ（Ｋｎｉｕ ｐｅｒ　ｅｔ　ａｔ、、　１９９０）はＰＨＥ−３５２とＬＥＵ−３５３の間の ペプチド結合における２個のアミノ酸Ｎ−末端を切断すると報告されている。さ らに、Ｃｒｏｔｉａｌｕｓ　ａｄａｍｅｎｔｅｕｓ　（Ｔｈｅ　Ｅａｓｔｅｒｎ 　Ｄｌａｍｏｎｄ−ｂａｃｋ　Ｒａｔｔｌｅｓｎａｋｅ）ベノム・プロテイナー ゼ■はＡＬＡ−３５０とＭＥＴ−３５１の間のペプチド結合を切断すると報告さ れている。インヒビターの切断は結合ＡＡＴの抑制をもたらさないが、かかる液 相の切断がインヒビターを不活化し、他のプロテアーゼ抑制を妨げるというのが 一般に合意された意見である（Ｍｌｃｈａｅｌｉｓ　ｅｔ　ａｌ、。

１９９０、　Ｋｎｉｉｕｐｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　１９９０．　Ｋｎａｕｐｅｒ 　ｅｔ　ａｌ、ｓ　１９９０）。

現在、より小さい切断ペプチドの機能として知られたものはないが、肝がんや単 球レセプターを結合させる可能性がある（Ｐｅｒｌｍｕｔｔｅｒｅｔ　ａｌ、＋ 　１９９０）。

クレスら（１９８９）はＥａｓｔｅｒｎ　Ｄｉａｍｏｎｄｂａｃｋ　Ｒａｔｔｌ ｅｓ−ｎａｋｅのベノム・プロテイナーゼ■がｉｎ　ｖｉｔｒｏでＡＡＴをＡＬ Ａ−３５０とＭＥＴ−３５１との間で切断すると報告している。さらに、クレス らは切断により得られるフラグメントの１つはＮＨ２末端の配列を有していると 開示している。つまり、Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｇ　１ｕ−Ａ　Ｉａ−１１ｅ −Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−５ｅｒ−１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ −Ｐｈｅ−Ａｓｎである。クレスらは、フラグメントの作用は開示しておらず、 フラグメントがエラスターゼによるトリプシンの切断を抑制しないと述べている 。

本発明は、４４−残基であるＡＡＴのＣ−末端フラグメント（以下ｒＳＰＡＡＴ Ｊと称する）がヒトに存在するという発見を提供するものである。このフラグメ ントはクレスらが開示したＡＡＴをヘビのベノム・プロテイナーゼ■で切断した ときのフラグメントと同じもののようである。しかし文献中には、切断ＡＡＴの 小さなフラグメントのいずれかを原因とする作用がなく、クレスらの所見でもこ のフラグメントに関連した作用がないにもかかわらず、本発明は５ＰＡＡＴが実 はエラスターゼの強力なインヒビターであるという驚くべき発見を提供するもの である。本発明はさらに、５ＰＡＡＴがコラーゲンなどの細胞外マトリックスた んばくによって結合されると５ＰＡＡＴのみよりもはるかに強度にエラスターゼ を抑制するという全く予期されなかった発見を提供する。

５ＰＡＡＴあるいはこれと同等のポリペプチドは合成てきるので、本発明は気腫 や呼吸困難症候群などの症状を治療する効果的かつ安価な、これまでになかった 治療法を提供する。さらに、５ＰＡＡＴと細胞外マトリ・ソクス（ＥＣＭ）との 独自の結び付きにより半減期が大幅に延びる事実が発見されたので、５ＰＡＡＴ の投与頻度はＡＡＴに比べはるかに少なくてすむ。その結果、投与にかかる費用 が少なくてすみ、患者のクォリティ・オン会ライフはさらに改善される。

最後に、本発明によるとｉｎ　ｖｉｖｏで５ＰＡＡＴが生物学的に作用を受けや すいエラスチンやコラーゲンなどのＥＣＭたんばくに結合するかまたは沈着する ので、これらのたんばくをＨＮＥなどの酵素の望ましくない攻撃から守るのに使 用できる。

区皿勿皿里１１朋 第１図は、ＡＡＴのＣ−末端アミノ酸配列とヒトの胎盤から分離した５ＰＡＡＴ の配列部分との比較を示す。

残基の数は前処置ＡＡＴ配列内の各アミノ酸の位置を表す。２つの異なる残基で あるＬＥＵ−３８６と５ＥＲ−３９０には下線を付した。矢印（↓）はＡＡＴと 錯体化する際の各たんばく分解酵素の切断部位を示す。■はカテプシンＬ１Ｓｅ ｒｒｅｔｔａ　ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓメタロプロテイナーゼ：■はＰｓｅｕｄｏ ｍｏｎａｓ　姪匹「Ｍ月１　マクロファージエラスターゼ、２ＭＮコラゲナーゼ ；■はカテプシンＬ１Ｓｔａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓシスティン およびセリンプロテイナーゼ；■はＳｔａ　ｈ　１ｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕ ｓメタロプロテイナーゼ、分泌ＰＭＮメタロプロテイナーゼ、２ＭＮコラゲナー ゼ；■はＣｒｏｔｉａｌｕｓ　ａｄａｍａｎｔｅｕｓベノム・プロテイナーゼ■ である。

第２図は、５ＰＡＡＴによる各種セリンプロテアーゼの抑制を示す。キモトリプ シン（０）、ＨＮＥ　（四角）、膵臓エラスターゼ（三角）、トリプシン（＠） である。

比較のために、同じ測定条件下でのＡＡＴ　（−−−）によるＨＮＨの抑制も測 定した。

第３図は、ＤＦＰ処置ヒト好中球へのＡＡＴと５ＰＡＡＴの結合を示す。Ａはエ ラスターゼ；ＢはカテプシンＧである。

Ｕを　る　の熊 以下に示すデータは、ＡＡＴ、５ＰＡＡＴのフラグメントを有するＣ−末端４４ アミノ酸反応中心が組織に結合し、ＥＣＭたんばくをＨＮＥの不適当な攻撃から 守るのに重要な生理学的役割を果たすことができることを示す。５ＰＡＡＴは、 広範囲に抽出されたヒト胎盤から分離し、配列（第１図）決定した。この結合は さらに、ＡＡＴのｌＯ倍濃度において認められる別のプラズマたんばくであるヒ ト血清アルブミン（ＨＳ　Ａ）がＥＬＩＳＡ試験で検出されていないので（表１ ）、特異結合であると考えられる。

したがって、本発明は （１）ａ）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸とｂ）エラスターゼ結合作用と を有するポリペプチド成分と、 （２）該ポリペプチド成分に結合する細胞外マトリックスたんばくと からなる組成物を提供する。第１図では３９０の位置にあるアミノ酸のみを開示 しているが、本発明組成物は３９１−３９４の位置にあるアミノ酸、−ＰＲＯ− ＴＨＲ−ＧＬＮ−ＬＹＳを含んでいる。さらに、別途記載したように、３９０お よび３８６の位置は誤配列を表している可能性があり、それらの位置におけるＡ ＡＴの配列と対応するべきである。そのため、ＡＡＴの３５１から３９４までの アミノ酸に相当する配列を合成し、実施例に記載する方法で試験した。実施例に 記載した胎盤由来のペプチドと同一の結果が合成ペプチドについて得られた。し たがって、第１図に示した５ＰＡＡＴの配列とここに用いたＡＡＴの残基３５１ −３９４についてのアミノ酸配列は同一である。

第１図に示した５ＰＡＡＴの配列を用いて、標準的な方法により追加、代替、削 除を行って５ＰＡＡＴの配列を変えることができる。これらの異なる形態の５Ｐ ＡＡＴを実施例に記載の方法を用いて試験し、エラスターゼ結合能を調べること ができる。したがって、ｒｓＰＡＡＴ」は、エラスターゼおよびコラーゲン結合 作用にかかわる５ＰＡＡＴの必須アミノ酸を有する成分を意味する。

実施例に記載した通り、５ＰＡＡＴは細胞外マトリックスたんばくである１型コ ラーゲンを結合し、抑制能を増大する。他の細胞外マトリックスたんばくも、同 様にペプチドに形態的変化をもたらすことにより作用を増大すると思われる。５ ＰＡＡＴのコラーゲンへの結合が起こるのは、疎水性の相互作用のためと考えら れる。５ＰＡＡＴは疎水性ペプチドであり、コラーゲンは疎水性部位のクラスタ ーを有している。したがって、他の細胞外マトリックスたんばく、特にエラスチ ンも同様に疎水性部位を含有しているので同じ相互作用を示すと考えられる。い ずれにしても、かかる作用は実施例の教示に基づき通常の方法で試験することが できる。したがって、実際にポリペプチドを結合する細胞外マトリックスたんぽ （のみが本願の組成物に関する特許請求の範囲に含まれる。エラスチンは、ポリ ペプチド成分を結合すると考えられる細胞外マトリックスたんばくの別の例であ る。さらに、本発明の組成物を薬学的に許容される担体と組合せて投与すること ができる。

本発明はさらに、 （１）ａ）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸とｂ）エラスターゼ結合作用と を有するポリペプチド成分と、 （２）細胞外マトリックスたんばく（該細胞外マトリックスたんばくはコラーゲ ン、特に１型コラーゲンでもよい）と からなるキットを提供する・ 本発明はさらに、 （１）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸と（２）コラーゲン結合作用と （３）エラスターゼ結合作用と を存するポリペプチド成分とエラスターゼを接触させることからなるエラスター ゼ抑制の方法を提供する。この方法は、該成分によって結合するエラスターゼで あればいかなるエラスターゼにも応用することができ、例えば好中球エラスター ゼにも適用可能である。切断機序が類似していることとエラスターゼの基質が特 異であるため、他のエラスターゼも該ポリペプチド成分によって抑制されるもの と考えられる。一実施例では、この方法によるポリペプチド成分は５ＰＡＡＴと 同じアミノ酸配列を有している。

さらに、エラスターゼに接触させる前に、ポリペプチド成分を例えば■型コラー ゲンやエラスチンなど作用を増大させる細胞外マトリックスたんばくに接触させ て本抑制法を実施することができる。かかる方法はポリペプチド成分の作用を高 め、さらに強力なインヒビター効果が得られる。

さらに本発明は、 （１）開示された５ＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸と（２）コラーゲン結合作 用、 （３）好中球エラスターゼ結合作用と を有するポリペプチド成分を投与することからなる、好中球エラスターゼによる たんばく分解に関する異常を呈する患者の治療方法を提供する。この方法によっ て、多くの異常な症状を治療することができる。異常とは肺気腫、成人における 呼吸困難症候群を含む。

実」１倒 以下の実施例は、特に５ＰＡＡＴの分離を記載する。

５ＰＡＡＴが本書に記載の配列をもって、容易に合成したり組換えにより製造で きる点を注目すべきである。

カニ−法 下記の化合物はすべて一般に使用され、入手可能なものであり、用いた略語は本 技術分野の熟練者であれば周知のものである。

足■へ人工咥ユ１　実験はすべて４℃で行い、抽出緩衝液には処理中のたんばく 分解を最小限にとどめるため、いずれにも２５ｍＭ　ＥＤＴＡ、５ｍＭベンズア ミジン、１ｍＭ　ＰＭＳＦと１ｍＭＮＥＭを添加した。ヒト胎盤組織から膜を除 去した後、メスで細断し、ＩＭＮａＣｌ、５０ｍＭトリス（ｐＨ７，５）でよく 洗浄して、血液を除去した。次に８Ｍ尿素、５０ｍＭ）リス（ｐＨ７，８）で数 回洗浄して、組織を抽出した。その後残留物を１％の２−ＭＥを含む二容の８Ｍ 尿素、５０ｍＭ）リス（ｐＨ７，８）で抽出した。上澄みを０．１Ｍ炭酸水素ア ンモニウム１　５０　ｍ　Ｍトリス（ｐＨ８，０）で透析し、不溶物を取除くた め遠心分離した後、前辺て同じ緩衝液で平衡にしたＤＥＡＥ　）リスアクリルで 静かに一晩撹拌した。ＤＥＡＥは低速遠心分離により回収し、同量の炭酸水素緩 衝液で１ｏ分間洗浄した。低速遠心分離の後、求めるたんばくを０．５ＭＮａｃ ｌ含有の同じ炭酸水素緩衝液中で３時間攪拌して溶出した。ＤＥＡＥを低速遠心 分離により除去し、上澄みを超遠心分離でさらに清澄にした。得た溶液を蒸留水 で透析し、凍結乾燥した。調製品のうち５０ｍ１を０．２ＭＤＴＴ含有の５．０ Ｍ尿素、０．１Ｍ）リス（ｐＨ８，５）５ｍｌに５時間再懸濁し、大量の６０ｍ Ｍ酢酸ナトリウム（ｐＨ４，８５）で透析した。透析中に析出した物質を遠心分 離して除去した。この析出物を上記尿素−ＤＴＴ溶液に同じようにして再び溶解 し、酢酸緩衝液でさらに２回透析した。このようにして得た上澄みについてＥＬ ＩＳＡ試験およびアミノ酸分析を行い、収率とアミノ酸配列をめた。

ＥＬ土五入店　プラスチック製マイクロタイター・ウェルを１００μｌのＰＢＳ で適当に希釈した抗原で塗布して、４℃で一晩放置した。プレートを約３００μ ｌ／ウエルのＰＢＳで３回洗浄した。残存する反応部位は、１ウエルあたり２０ ０μｌの１％ＢＳＡのＰＢＳ溶液を加えて３７℃で１時間培養することによりブ ロックした。

プレートを再び約３００μｌ／ウエルのＰＢＳで３回洗浄した。ウサギ抗ヒトＡ ＡＴおよびＩＳＡポリクローナル抗体を０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０含有ＰＢＳ で１／４０．０００に希釈した。この希釈−次抗体の５０μｍを各ウェルに適当 に添加した。プレートを再び３７℃で１時間培養し、約３００μｌ／ウエルのＰ ＢＳで３回洗浄した。各ウェルに、適当に希釈した二次抗体（１／１ｅ、ｏｏｏ に希釈したヤギ抗ウサギＩｇＧ）を５０μｌずつ添加した。プレートを再び３７ ℃で１時間培養し、約３００μｌ／ウエルのＰＢＳで５回洗浄した。各ウェルに 、オルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）発色溶液５０μｌを添加し、プレートを ３７°Ｃで３０分間培養した。５０μｍ／ウェルの４．５Ｍ硫酸を添加すること により反応を最終的に終了し、４９２　ｎｍで測定した。

ＡＡＴおよび／または５ＰＡＡＴに対する各種抗原の潜在的結合性を定量するた めに、さらにＥＬＩＳＡ法を実施した。これらのＥＬＩＳＡ試験は上述のように 行われたが、ただしく１）酵素抗原（ＨＮＥｌ　カテプシンＧ）は、検出しよう とする抗体の切断によって生成し得る人工物を最小限にするためＥＬＩＳＡを行 う前にＤＦＰ処理によって不活化した、（２）約４０μｇ／ｍｌの割合で抗原溶 液をウェルに塗布した、　（３）ブロック後、ウェルに１０　μｇ／ｍ　ｌのＡ ＡＴあるいは５ＰＡＡＴのＰＢＳ溶液を添加して３７℃で２時間半培養した。対 照ウェルはＰＢＳのみで培養した。特定の抗原に対する外因性ＡＡＴおよび５Ｐ ＡＡＴの結合は、ＢＳＡに対するＡＡＴおよび／または５ＰＡＡＴの非特異結合 について補正した。

たんばく　己１の２−　エドマン法による分解をベックフッ８９０Ｍ型配列分析 装置（Ｂｈｏｗｎ　＆　Ｂｅｎｎｅｔｔ、　１９８５）を用いて行った。約２０ ０ｐｍｏｌのペプチドを用いて配列を決定した。２つの異なる胎盤５ＰＡＡＴ検 体を調べたが、同一の結果が得られた。反復収率は通常９６％から９９％であっ た。ＰＴＨアミノ酸をボーン、ベネッ）　（１９８５）の方法を用いてＨＰＬＣ により同定した。

！　セリンプロテアーゼ分析をｐ−ニトロアナリドアミド基質を用いて行った。

ベンジル−ＰＨＥ−ＶＡＬ−ＡＲＧ−ＰＮＡ（０，５ｍｇ／ｍｌ）を用いてトリ プシン活性を分析した。

キモトリプシン活性は５ＵＣ−（ＡＬＡ）２−ＰＲＯ−ＰＩＥ−ＰＮＡ　（Ｄ　 Ｍ　ＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌ）を用いて検定し、エラスターゼ活性は５ＵＣ−（Ａ ＬＡ）２−ＰＮＡ　（Ｄ　Ｍ　Ｓ　Ｏ中１０ｍｇ／ｍｌ）を用いて検定した。最 初に３７℃で１５分間培養することを決定した後に、これらの酵素それぞれを希 釈したことにより約０．４の吸光度の変更を行う必要が生じた。反応完了後の混 合物には、この希釈酵素１０μｌと適当な上記基質１００μｍのほかに、一定の 容積を保つために０−５０μｌの指定濃度のインヒビターあるいはＴＢＳを含め た。トリプシン、キモトリプシン、ＨＮＥ分析には３７℃、１５分間の培養、膵 臓エラスターゼの分析には３７℃、１．５分間の培養を行った。反応は十分の量 の水冷ＴＢＳを加えて終了させ、各分析物の量を最終的に１ｍｌとした。得られ たｐ−ニトロアニリンの吸光度を日立１００−４０型分光光度計を用い、蒸留水 ブランクに対して４１０ｎｍで測定した。抑制率は１０〇−［（ＡＩＥ＋Ｉ／Ａ ＩＥ）ｘ　１００コとして計算した。

桂−】　。

ｉｆｆ　調製の典型例を表１に概略したが、抗原として検出できるＡＡＴ　（ま たは５ＰＡＡＴを含むＡＡＴの切断フラグメント）を各抽出段階でミリグラム単 位で回収した。５ＰＡＡＴの組織結合が特異であることを立証するために、抽出 物中のＡＡＴの反応量を血漿中にＡＡＴの１０倍の濃度で認められる別の血清た んぽ＜ＩＳＡの反応量と比較した。表１に示すように、これらの分画のいずれに もＩＳＡは検出されなかった。興味深いことに、これだけ徹底的に抽出操作を行 った後にも、酸不溶性の析出物に関連しである程度のＡＡＴ抗原活性が残存して いた。この固形物を０．２Ｍ　ＤＴＴを含む０．５Ｍ尿素、０．１Ｍ）リス（ｐ Ｈ８，５）中に溶解し、分子ふるいカラム（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ　Ｇ、　Ｐｈａｒ ｍａｃｉａ）に通すと、ＡＡＴ抗原活性の２つのピークが見られた。すなわち高 分子量ピークと低分子量ピーク（データは示さず）であり、いくらかの５ＰＡＡ Ｔが１つ以上の高分子量「キャリア」たんばくに集まりおよび／または結合して 残存している可能性を示唆していた。

５ＰＡＡＴの生理　π　ＤＥＡＥ結合物質を０．２ＭＤＴＴを含む５Ｍ尿素、０ ．１Ｍ）リス（ｐＨ８，５）に溶解し、６０　ｍ　Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ Ｈ４，８５）で透析すると、たんばくのほとんどは不溶で、沈殿しているようで あった。少量のたんばく（通常１０％以下）が溶解していた。この上澄みを透析 、凍結乾燥し、秤量して５０％の酢酸に再び懸濁した。約２００ｐｍｏｌ相当分 を分取し、アミノ酸配列分析を行った。４０の残基のＮ−末端配列を第２図に示 す。コンピューターを用いて公知のたんばくの配列と比較したところ、これら４ ０の残基のうち３８が、７つのアミノ酸Ｎ−末端、ＭＥＴ−３５１で始まり反応 中心ＭＥＴ−３５８に至るＡＡＴのＣ−末端部位と同じであった（Ｌｏｎｇ　ｅ ｔ　ａｌ、、　１９８４）。配列が解読しにくくなり、配列決定の誤差を示す可 能性が高くなったときに２つの異なる残基ＬＥＵ−３８６と５ＥＲ−３９０がＣ −末端付近で起こった。さらに５ＰＡＡＴが４４残基たんばくで、ＡＡＴのＣ０ ＯＨ末端配列と同じく、ＭＥＴ−３５１で始まり３９４においてＬＹＳで終わる ことは明らかである。

潜　・な生理　が意 酵素活性の抑制　第２図に示した酵素の動力学的予備実験の結果は、今回調製し た脱塩５ＰＡＡＴがキモトリプシン、ＨＮＥ、膵臓エラスターゼを記載の順序で 抑制するが、トリプシンには効果がないことを示している。重要なことは、これ らの５ＰＡＡＴ検体が天然のＡＡＴとほとんど同程度にＨＮＥ活性を抑制した点 である。キモトリプシンの酵素活性を完全に抑制するのに必要なインヒビター濃 度を前辺て計算したところ、５ＰＡＡＴがキモトリプシンの強力な（Ｋｌ−１／ １０Ｋｍ）拮抗的インヒビターであることを示している。

Ｗ　ＡＡＴは、セリンプロテアーゼ活性の反応中心ＭＥＴ−３５８にかかわって 酵素：インヒビターの１＝　１共有結合錯体を形成することによりセリンプロテ アーゼ活性を抑制する（Ｊｏｈｎｓｏｎ　ａｎｄ　Ｔｒａｖｊｓ、１９７８）。

もし５ＰＡＡＴにも同じ作用があるなら、５ＰＡＡＴも同じような安定した酵素 ：ペプチド錯体を形成するはずである。そこで生理学的に関連するセリンプロテ アーゼへの５ＰＡＡＴの結合能を試験し、ＥＬＩＳＡ系を用いて５ＰＡＡＴの結 合能とＡＡＴの結合能を比較検討した。

第３図に示したように、ＡＡＴＴｏＳＰＡＡＴも、ＤＦＰ処理ＨＮＥにもカテプ シンＧにも結合した。

コラーゲンおよびその也のたんばくの±Ａさらにいくつか検査を行った結果、５ ＰＡＡＴが分子量のさらに大きいＥＣＭｒキャリア」たんばくに集まりおよび／ または結合することが分かった。まず、ＡＡＴに対する抗体を用いた免疫組織化 学的試験において、絨毛胎盤の血管外膜および肺胞や小気管支周辺が強い染色性 を示した。第二に、胎盤５ＰＡＡＴ調製品の５ＤＳ−ＰＡＧＥは、低分子量５Ｐ ＡＡＴバンドの他にいくつかの高分子量たんばくバンドを示した。さらに、本発 明５ＰＡＡＴ検体のアミノ酸分析により、かなりの量のヒドロキシプロリンの存 在がわかり、これは、配列決定試験でコラーゲンは検出されていないので遮断Ｎ −末端を有するコラーゲン鎖の存在を示唆している。これらの結果は、Ｉｎ　ｖ ｉｖｏの生体内５ＰＡＡＴが生物学的に作用を受けやすいたんばくに結合するか または沈着する可能性を示し、その結果ＨＮＨなどのセリンプロテアーゼがこれ らのたんばくを不適当に攻撃することから守るのに重要な役割を果たすことがあ ることを示している。したがって、５ＰＡＡＴはこれらのたんばくを保護するの にＩｎ　ｖｉｖ。

で用いることができる。

５ＰＡＡＴは　マトリックスたんばくにＦＡしその括」Ｌ６高Ｊ口りユ キモトリプシンを対象酵素として用いた抑制試験をさらに行った結果、胎盤５Ｐ ＡＡＴのＫｌ（μＭ）が０．９２であるのに対し、化学的に合成した５ＰＡＡＴ のＫｌ（μＭ）は７．５であることが認められた。したがって、モル単位で考え ると、ＨＮＥのインヒビターとしての効果は化学合成された５ＰＡＡＴの場合胎 盤由来の５ＰＡＡＴの１／８である。これらの結果は、胎盤物質中のコラーゲン とペプチドの会合により抑制能をさらに高める構造的変化が生じることを示して いる。

表１ ＳＰＡＡＴ抽出の各段階におけるＥＬＩＳＡ検出たんばく量 検出縁たんばく 分画 ＡＡＴ　Ｈ８Ａ （ｍｇ）　（ｍｇ） １．８Ｍ尿素（第３次抽出）　≧２２．１４　ＮＤ２．８Ｍ尿素＋２−ＭＥ （第１次抽出）　≧３６．３８　ＮＤ ３．８Ｍ尿素＋２−ＭＥ （第２次抽出）　≧１８．５６　ＮＤ ４、酸溶解性上澄み　０．３３７　ＮＤ５、酸不溶性析出物 （２５０μｍの ＰＢＳに再懸濁）　≧　０．０１１４ＮＤ本書「方法」の項に記載したようにＡ ＡＴおよびＨ８ＡはＥＬＩＳＡ法により抗原として検出された。実験値は適当な 市販の抗原を用いて標準曲線から算出した。端数（≧）は、試験した最低濃度の 希釈でも最大の抗体結合を示したのでおそらくごく少量のたんばくを表している と思われる。

ＮＤ：検出せず。

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Ｔｈｅ　Ａｆｆｉｅｒｉｃａｎ　Ｊ、ｏｆ　Ｍｅｄｌｃｉｎｅ；　８４　（Ｓｕ ｐｐｌ　ＧＡ）：　１３−３１　（１９８８）。

５、　８ｒｕｃｈ、Ｍ、Ｗｅｉｓｓ、Ｖ、＆　Ｅｎｇｅｌ、Ｊ（１９８８）、Ｊ 、Ｂｌｏｔ。

Ｃｈｅｗ、；　２６３：　ＩＧＩｌｉ２ＧｉｌｌｉＧ３０゜１１ｉ、Ｃａｒｌｓ ｏｎ、ＪＡ、Ｂａｒｔｏｎ　Ｒｏｇｅｒｓ、Ｂ、５ｉｆｅｒｓ、ＲＮ。

ＨａｖｋｌｎＳ、ＩＩＩＫ、Ｆｊｎｅｇｏｌｄ、ＭＪ、＆　Ｗｏｏ、ＳＬＣ。

Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、；　８２：　２Ｇ−３Ｇ（１９８８）。

７、Ｃａｒｒｅｌｌ、Ｒ，（１９８Ｇ）、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、；　７ ８：１４２７−１４３１　。

８、　０ａｒｒｅｌｌ、ＲＷ　＆　Ｂｏｓｖｅｌｌ　ＤＲ，５ｅｒｐｌｎｓ。

Ｔｈｅ　ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　５ｅｒｉｎｅ　ｐｒｏ ｔｅｉｎａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ、　Ｉｎ：　Ｂａｒｒｅｔｔ、　ＡＪ、　 ５ａｌｖｅｓｅｎ、　Ｇ、　ｅｄｓ。

Ｐｒｏｔｅｔｎａｓｅ　Ｉｎｈｌｂｆｔｏｒｓ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：　Ｅｌｓ ｅｖｌｅｒ。

１９８Ｅｉｉ　４０３−４２０゜ ９、Ｄｅｓｒｏｃｈｅｓ、　ＰＥ　＆　Ｗｅｆｓｓ、　ＳＪ、　Ｊ、　ＣＩｎ、 　Ｉｎｖｅｓｔ、；８１：　１Ｇ４Ｇ−１１１ｉ５０　（１９８８）。

１０、Ｇａｂｏｅｓ、に、Ｒａｙ、ＭＢ、Ｒｕｔｇｅｅｒｔｓ、Ｐ、Ｃａ１ｌｅ ａ、ｐ。

Ｄｅｓｍｅｔ、ＶＪ　＆　Ｖａｎｔｒａｐｐｅｎ、Ｇ　（１９８２）。

１’１ｉｓｔｏ　ａｔｈｏｌｏ　（Ｏｘｆ、）；　Ｇ：　５５−ＧＯ。

Ｉｌ、Ｈｕｂｅｒ、ＡＲ＆　Ｗｅｊｓｓ、ＳＪ、Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、 ；　８３：１１２２−１１３１　（１９８９）。

１２、Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｄ　＆　Ｔｒａｖｊｓ、Ｊ、Ｊ、Ｂｌｏｔ、Ｃｈｅｍ、 ；　２５３ニア１４２−７１４４　（１９７８）。

１３、Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｄ、Ｂａｒｒｅｔ、ｔ、Ｊ、＆　阿ａｓＯｎ、Ｒ（１９ ８Ｇ）。

Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、；　２８１：　１４７４８−１４７５！。

＋４．　Ｋｌｔｔａｓ、　Ｃ，Ａｒｏｎｌ、　Ｋ、　Ｍａｔａｎｉ、　Ａ、　＆ 　Ｐａｐａ旧ｍ１ｔ−ｒｉｏｕ、ｃｓ　（１９８２）、Ｈｅ　ａｔｏ　ａｓｔｒ ｏｅｎｔｅｒｏｌｏ　；　２９：２７５−２７７　。

１５、Ｋｎｉｉｕｐｅｒ、Ｖ、Ｒｅ１ｎｋｅ、Ｈ，＆　Ｔｓｃｈｅｓｃｈｅ、Ｈ ，ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ；　２Ｇ３：　３５５−３５７　（１９９０）。

１Ｇ、　Ｋｎｕｄｓｅｎ、　ＢＳ、　Ｓ目ｖｅｒｓｔｅｆｎ、　ＲＬ、　Ｌｅｕ ｎｇ、　ＬＬＫ。

Ｈａｒｐｅｌ、ＰＣ，＆　Ｎａｃｈｍａｎ、ＲＬ（１９８Ｇ）。

Ｊ、Ｂｌｏｔ、Ｃｈｅｍ、ｉ　２Ｇｌ：　１０７６５−１０７７１゜＋７．Ｋｒ ｅｓｓ、ＬＦ、Ｋｕｒｅｃｋｆ、Ｔ、Ｃｈａｒ、ＳＫ、＆　Ｌａｓｋｏｗｓｋｉ 。

Ｍ、Ｓｒ　（１９７９）、Ｊ、ｆｌｌｏ　、Ｃｈｅｗ、：　２５４：　５３１７ −５３２０゜１８、Ｋｕｓｈｎｅｒ、［（１９８Ｂ）、Ｍｅｔｈ、　Ｅｎｚ　１ １１０１．；　ＩＥｉ３：３７３−３８３　。

１９、Ｌａｕｒｅｌｌ、ＣＢ、＆　Ｊｅｐｐｓｓｏｎ、ＪＯ（１９７５）、Ｐｒ ｏｔｅａｓｅＩｎｈｉｔｔｏｒｓ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ、Ｉｎ　Ｔｈｅ　Ｐｌａ ｓｍａ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ″（Ｆ、　Ｗ、　Ｐｕｔｎａｏ＋、　ｅｄ、）；　Ｖ ｏｌ　Ｉ：　２２９−２６４．　ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒ ｋ。

２０、Ｌｏｎｇ、ＧＬ、Ｃｈａｎｄｒａ、Ｔ、Ｗｏｏ、ＳＬＣ，Ｄａｖｊｅ、Ｅ Ｖ、＆Ｋｕｒａｃｈｌ、に、Ｂｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒ　ｉ　２３：４８２８−４ ８３７　（１９８４）。

２１、Ｍｉｃｈａｅｌｌｓ、Ｊ、Ｖｉｓｓｅｒｓ、ＭＣＭ、＆　Ｗｉｎｔｅｒｂ ｏｕｒｎ、ＣＧ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、に　２７０：　８０９−８１４（１９９０）。

２２、Ｍｏｒｉｈａｒａ、に、Ｔｓｕｚｕｋｉ、Ｈ，Ｈａｒａｄｏ、Ｍ、＆　Ｉ ｗａｔａ。

Ｔ　（１９８４）、Ｊ、Ｂｆｏｃｈｅｍ−；　９５：　７９５−８０４゜２３、 　Ｎ１ｅｌｓｅｎ、　Ｋ　（１９８４）、　Ｈｌｓｔｏ　ａｔｈｏｌｏ　（Ｏｘ ｆ、）ｉ　８ニア５９−７６４　。

２４、　Ｐｅｒｌ＋＊ｕｔｔｅｒ、　ＤＨ，Ｇｌｏｖｅｒ、　Ｇｌ、　Ｒｌｖｅ ｔｎａ、　Ｍ、　５ｃｈａｓ−ｔｅｅｎ、ＣＳ、＆　Ｆａｌｌｏｎ、ＲＪ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｃ１．；　８７：　３７５３−３７５２　（ １９９０）。

２５−　ｒ’ｏｔｅｍｐａ、Ｊ、Ｗａｔｏｒｅｋ、！、＆　Ｔｒａｗｌｓ、Ｊ。

Ｊ、　Ｂｌｏｔ、　Ｃｈｅｍ、；　２Ｇ１：　１４３３０−１４３３４　（１９ ８Ｇ）。

２Ｇ、　Ｐｏｗｅｒｓ、　ＪＣ＆　Ｈａｒｐｅｒ＋　ＪＷ、　Ｉｎ旧ｂｆｔｏｒ ｓ　ｏｆ　５ｅｒｉｎｅｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ、Ｔｎ：　Ｂａｒｒｅｔｔ、Ａ Ｊ　＆　５ａＩｖｅｓｓｏｎ。

Ｇ、ｅｄｓ、Ｐｒｏｔｅｌｎａｓｅｓ　Ｉｎｈｌｂｉｔｏｒｓ、Ｅｌｓｅｖｌｅ ｒ、ＮＹ（１９８Ｇ）、ｐＰ、５５−１５２゜ ２７、Ｒａｙ＋　ＭＢＶ、Ｄｅｓｍｅｔ、ＶＪ、＆　Ｇｅｐｔｓ、！　（１９７ ７）。

Ｃｅ１ｌ　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｒｅｓ、；　１８５：　８３−６８゜２８、Ｒａｙ、 ＭＢ、Ｇｅｂｏｓ、に、Ｃａ１ｌｅａ　Ｆ、＆　Ｄｅｓａ＋ｅｔ、ＶＪ（Ｉ９８ ２）、　Ｈｌｓｔｏ　ａｔｈｏｌｏ　；　Ｉｌｉ：　２８９−２９７゜２９．５ ｃｈｒｅｉｂｅｒ、Ｇ　（１９８７）Ｉｎ　Ｔｈｅ　Ｐｌａｓｍａ　Ｐｒｏｔｅ ｉｎｓ（Ｐｕｔｎａｍ、　ＦＩＩ　ｅｄ、）　２ｎｄ　ｅｄ、、　Ｖｏｌ　５： 　２９２−３Ｇ３゜Ａｃａｄｅｓ＋１ｃ　Ｐｒｅｓｓｓ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。

３Ｇ、５ｌｎｈａ、Ｓ、ＩＦａｔｏｒｅｋ、Ｗ、Ｋａｒｒ、Ｓ、Ｇｊｌｅｓ、Ｊ 、Ｂｏｄｅ。

Ｗ　＆　Ｔｒａｖｉｓ　Ｊ　（１！１１８７）、　Ｐｒｏｃ、　Ｈａ　ｔｔ、　 Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、；８４：　２２２Ｂ−２２３２゜ ３１、　５−Ｊｅｎｓｅｎ、Ｌ　（１９８７）　１ｎ　丁ｈｅ　Ｐｌａｓｍａ　 Ｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｐｕｔｎａｍ、　ＦＷ；　ｅｄ、）、　５：　１９１−２９ １．　Ａｃａｄｅｇ＋ｉｃ　Ｐｒｅｓｓ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。

３２、Ｔａｈａｒａ、Ｅ、Ｉｔｏ、Ｈ，Ｔａｎｉｙａｍａ、に、Ｙｏｋｏｚａｋ ｊ。

Ｈ＆　Ｈａｔａ、Ｊ　（１９８４）、Ｈｕｍ、Ｐａｔｈｏｌ、；　１５：　９５ ７−９６４゜３３、Ｔｒａｖｌｓ、Ｊ　＆　５ａｌｖｅｓｅｎ、ＧＳ、Ｈｕｏ＋ ａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｐｒｏｔｅｉ−ｎａｓｅ　Ｉｎｈｌｂｌｔｏｒｓ、幻＞ｎ 、Ｒｅｖ、Ｂｌｏｃｂｅｍ、１９８３；　５２：６５５−７０９゜ ３４、Ｖｉｒｃａ、ＣＤ＋　Ｌｙｅｒｌｙ、Ｄ、Ｋｒｅｇｅｒ　Ａ、＆　Ｔｒａ ｖｌｓ、Ｊ（１９８２）、Ｂｉｏｃｂｅｍ、ＢＩｏ　ｈ　ｓ、Ａｃｔａ、；　７ ０４：　２Ｇ７−２７１゜３５、Ｗａｇｎｅｒ、ＤＤ、Ｕｒｂａｎ−Ｐｉｃｋｅ ｒｉｎｇ、Ｍ、＆　Ｈａｒｄｅｎ、ＶＪ（１９８４）、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａ ｃａｄ、Ｓｃｉ、；　８１：　４７１−４７５゜３６、　Ｂａｎｄａ、　Ｍ、　 Ｃ１ａｒｋｔ　Ｅ、　＆　Ｗｅｒｂ、　Ｚ　（１９８５）、　Ｊ、　ＣｌＩｎ。

ＦＩＧＵＲＥ　Ｉ Ｖ　ＩＶＩＩＩ　ｌｌｌ Ｒｅ５ｉｄｕ＠＃　３５０◆　＋　＋　＋　３６０ＡＡＴ二ＡＬＡ−ＭＥＴ−Ｐ ）ＬＥ−ＬＥＵ−ＧＬυ−＾ＪＪ−ＩＬＥ−ＰＲＯ−ＨＥコｍ−５ＥＲ−ＸＵ− ５ＰＡＡＴ：　Ｍｌπ−ＰＨＥ　−ＬＥＵ−ＧＬｔｌ　−Ａｌム−ＩＬＥ　−Ｐ ＲＯ−ＭＥＴ　−ＳＥＲ−ＩＬＥ　−ＡＡＴ：　ＰＲＯ−ＰＲＯ−ＧＬυ−ＶＡ Ｌ　−ＬＹＳ　−Ｐ）ＬＥ　−ＪＰＮ　−ＬＹＳ　−ＰＲＯ−ＰｉｌＥ　−５Ｐ ＡＡＴ：　ＰＲＯ−ＰＲＯ−ＧＬυ−ＶＡＬ　−ＬＹＳ　−ＰＩＥ　−ＡＳＮ　 −ＬＹＳ　−ＰＲＯ−Ｐ）ＩＥ　−ＡＡＴ：　ＶＡＬ　−ＰＩＥ　−ＬＥ’ＬＩ 　−ＭＥＴ　−ＩＬＥ　−ＧＬυ−ＧＬＪＩ　−ＡＳＮ　−ＴＨＲ−ＬＹＳ　− ５ＰＡＡＴ；　ＶＡＬ　−ＰＨＥ　−ＬＥＤ　−ＫＥＴ　−ＸＬＥ　−にＬＪＩ 　−ＧＬＩＪ　−ＡＳＮ　−（ＴＨＲ）−ＬＹＳ　−ＡＡＴ：　ＳＥＲ−ＰＲＯ −ＬＥＵ−Ｐｌ［Ｅ　−ＭＥＴ　−ＧＬＹ　−ＬＹＳ　−ＶＡＬ　−ＶＡＬ−＾ ５Ｎ−５ＰＡＡＴ：ＳＥＲ−ＰＲＯ−ＬＥｕ　−ＰＨ１１＋　−）ＬＥＴ　−Ｌ ＥＵ　ＬＹＳ　−ＶＡＬ　−ＶＡＬ　−５ＥＲＡＡＴ；　ＰＲＯ−ＴＨＲ−ＧＬ Ｎ　−ＬＹＳ　−Ｃ００ＨＦＩＧＵＲＥ　２ ｕＯ！↓ＩｑｌＬＩＬｌｌ　Ｊｕ９０ＪｅｄＦＩＧｋｌＲＥ　３ ０＝　Ｎｏ　Ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａｄｄｅｄ震＝　十ＡＡＴ ロー　十５ＰＡＡＴ Ａ　Ｂ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．（ａ）ｉ）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸とｉｉ）エラスターゼ結合作 用を有するポリペプチド成分と、 ｛ｂ）該ポリペプチド成分に結合する細胞外マトリックスたんぱく からなる化合物 ２．細胞外マトリックスたんぱくがコラーゲンであることを特徴とする特許請求 の範囲第１項に記載の化合物３．該コラーゲンがＩ型コラーゲンであることを特 徴とする特許請求の範囲第２項に記載の化合物４．該細胞外マトリックスたんぱ くがエラスチンであることを特徴とする特許請求の範囲第１項に記載の化合物 ５．薬学上許容される担体に含まれることを特徴とする特許請求の範囲第１項に 記載の化合物 ６．（ａ）ｉ）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸とｉｉ）エラスターゼ結合作 用を有するポリペプチド成分と、 （ｂ）細胞外マトリックスたんぱく からなるキット ７．該細胞外マトリックスたんぱくがコラーゲンであることを特徴とする特許請 求の範囲第６項に記載のキット ８．エラスターゼを （ａ）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸と、（ｂ）コラーゲン結合作用および （ｃ）エラスターゼ結合作用 を有するポリペプチド成分と接触させて、エラスターゼを抑制する方法 ９．該エラスターゼが好中球エラスターゼであることを特徴とする特許請求の範 囲第８項に記載の方法１０．ポリペプチド成分がＳＰＡＡＴと同じアミノ酸配列 を持つことを特徴とする特許請求の範囲第８項に記載の方法 １１．エラスターゼに接触させる前に、ポリペプチド成分を活性促進細胞外マト リックスたんぱくと接触させることからなる特許請求の範囲第９項に記載の方法 １２．該細胞外マトリックスたんぱくがコラーゲンであることを特徴とする特許 請求の範囲第１１項に記載の方法 １３．該コラーゲンがＩ型コラーゲンであることを特徴とする特許請求の範囲第 １２項に記載の方法１４．該細胞マトリックスたんぱくがエラスチンであること を特徴とする特許請求の範囲第１１項に記載の方法 １５．（ａ）ＳＰＡＡＴを同定する数のアミノ酸と、（ｂ）コラーゲン結合作用 および （ｃ）好中球エラスターゼ結合作用 を有するポリペプチド成分を投与することからなる、好中球エラスターゼによる たんぱく質分解に関連する異常を呈する患者を治療する方法１６．該異常が肺気 腫および成人における呼吸困難症候群からなる群から選ばれた症状であることを 特徴とする特許請求の範囲第１５項に記載の方法