JPH06506912A - 環状ケタール誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 環状ケタール誘導体 本発明は、コレステロール低下活性、脂質低下活性、および／または抗真菌活性 を持つ新規な化合物、それらの調製方法、それらを含む薬学組成物、および医学 、特にアテローム性動脈硬化症および関連する循環器疾患の治療および／または 予防でのそれらの使用に関する。本発明は、コレステロール低下活性、脂質低下 活性および／または抗真菌作用を有する化合物の調製に中間体として有用な新規 な化合物に関する。

高濃度の血中コレステロールおよび血中脂質は、脈管壁疾患の発症に関連する症 状である。それ故、血漿中コレステロール濃度を効果的に低下する方法が高い関 心事となっている。例えば、飲食によるステロールの摂取量を減らし、その代謝 および消失を促進し、またはその生合成の速度を減少させることにより、コレス テロール濃度を低下させることができる。コレステロール合成はフィードバック 制御を受けており、従ってコレステロール濃度の低下量は生合成の増加によって 補償されやすいので、生理学的なコレステロール濃度を低下させるのに最も効果 的な方法は、成分としてのコレステロール生合成の阻害が挙げられるであろう。

コレステロールの生合成における一つの律速段階は、３−ヒドロキシ−３メチル グルタリル補酵素Ａ　（ＨＭＧＣｏＡ）からのメバロン酸の形成であり、高コレ ステロール血症の治療においては、ＨＭ　Ｇ　Ｃｏ　Ａ還元酵素阻害物質のメビ ン酸化合物を用いて臨床的に成功してきた。

しかしながら、メバロン酸は、動物においては補酵素Ｑ、ヘムＡおよびドリコー ルなどの全てのイソプレニル誘導体の共通の前駆体である。

専らステロールを生じる生合成の第一段階、すなわちスクアレンを生じる２分子 のファルネシルピロホスフェートの縮合が、第二の律速部位である。ファルネシ ルピロホスフェートからのスクアレンの合成は、単離可能な中間体であるプレス クアレンピロホスフェートを伴っており、全合成過程はスクアレンシンターゼ（ ファルネシルジホスフェート：ファルネシルジホスフェートファルネシルトラン スフェラーゼ、ＥＣ２，５，１゜２１）、すなわち膜に結合した酵素によって触 媒される。それ故、酵素スクアレンシンターゼを阻害する働きをする薬剤は、コ レステロール生成の制御を行う薬物となる可能性がある。ステロイド以外の生合 成経路への影響は最小限であるべきなので、そのような薬剤の使用は魅力あるも のである。

真菌細胞膜の主要なステロール成分であるエルゴステロールの生合成は、ヒトを 含む哺乳類におけるコレステロールの生合成に類似しており、酵素クアレンシン ターゼによって媒介される。それ故、真菌細胞において酵素スクアレンシンター ゼを阻害する働きをする薬剤は、抗真菌化学療法のための薬物となる可能性があ る。

本発明者らは、酵素スクアレンシンターゼの阻害物質として働きおよび／または 酵素スクアレンシンターゼの阻害物として働く化合物の調製の中間物である新規 な化合物群を見いだした。

したがって、本発明の第一の態様では、本発明者らは式（１ａ）および（１ｂ） 〔式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシル基または一０ＣＯＣＨ＝ＣＨＣＨ（ＣＨ ３）（ＣＨ２）　３ｃＨ３、Ｅ　Ｅ −ＯＣＯＣＨ＝ＣＨＣ（ＣＩ（３）　＝ＣＨＣＨ（ＣＨ３）　ＣＨ２ＣＨ３また は一０ＣＯ−Ｘ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（但しＸは、 −ＣＨ＝ＣＨＣＨ（ＣＨ３）−１−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）　ＣＨ（ＣＨ３）　−１ −ＣＨ＝ＣＨＣ（ＯＨ）　（ＣＨ３）−１−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）　ＣＨ２−また は−ＣＨＣＨＣＨ（ＣＨ３）−’）から選択される基であり、 Ｒ２はヒドロキシル基、基−０ＣＯＲ７または基−ＯＣＯＲ（但し、ＲはＣ１〜 ８アルキル、アリ−ル、アリールＣ１〜４アルキルおよび０３〜８シクロアルキ ルから選択される基）であり、 （式中、Ｒ８は水素原子またはアセチル基である）、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨＣＨ （ＣＨ２Ｒ）ＣＨ２Ｐｈ（但し、Ｒは水素原子またはヒドロキシル基である）、 −Ｃ（ＣＨ２０Ｈ）＝ＣＨＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｐｈ。

−Ｃ（＝ＣＨ２）　ＣＨ（ＯＨ）　ＣＨ（ＣＨ２０Ｆ（）　ＣＨ２Ｐｈ。

−Ｃ（＝ＣＨ２）　ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）　ＣＨ（ＣＨ３）　ＣＨ２Ｐｈ。

−Ｃ（ＣＨ２ＮＨＣＯＣＨ３）＝ＣＨＣＥ（（ＣＨ３）ＣＨ２Ｐｈおよびから選 択される基であり、 Ｒ、ＲおよびＲ６は、それぞれ独立に水素原子またはメチル基を表わすコを有す る化合物、およびその塩を提供する。

基または基の一部分としてのアリールという用語は、フェニル、またはハロゲン 原子、水酸基、０１〜３アルキルおよび０１−３アルコキシ基のような１個以上 の残基によって置換されたフェニルを意味する。

Ｒ２の中のアルキルという用語は、直鎖または分岐したアルキル鎖を意味する。

好適なアルキル基の例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ −ブチル、Ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよびｎ〜ヘ プチルが挙げられる。

０３〜８シクロアルキルとしてのＲ２の例には、シクロペンチルおよびシクロヘ キシルが挙げられる。

式（１）におけるＲ２は１個以上の不整中心を含むことができることが理解され るであろう。本発明は、式（１）を有する化合物のジアステレオ異性体を含む全 ての光学異性体を包含するものであると理解すべきである。

Ｒ、ＲおよびＲ６が水素原子および生理学的に許容可能なカチオンである、式（ Ｉａ）および（Ｉｂ）を有する化合物が一般的に好ましい。

Ｒ１は、好ましくは基 Ｒ３は、好ましくは基 （式中、Ｒ８は水素原子またはアセチル基である）を表わす。

式（Ｉａ）の化合物は、本発明の化合物の好ましい群を表わす。

本発明は、前記の好ましい化合物の任意の組み合わせを包含するものと理解され るべきである。

Ｒ１が水酸基である式（Ｉ　ａ）および（Ｉｂ）の化合物は、スクアレンシンタ ーゼ阻害活性を有する関連構造体の調製の中間体として特に有用である。

本発明の化合物は、無機および有機塩基で塩を形成することができる。生理学的 に許容可能な塩には、アルカリ金属塩（例えば、三ナトリウム、ニカリウムおよ び三カリウム塩のようなナトリウムおよびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（ 例えば、カルシウム塩）、アンモニウム塩およびアミノ酸塩（例えば、三し〜リ ジン塩などのリジンおよびアルギニン塩）のような無機塩基塩がある。

好適な有機塩基塩には、トリアルキルアミン（例えば、トリエチルアミン）、ジ アルキルアミン（例えば、ジシクロへキシルアミン）、所望により置換されたベ ンジルアミン（例えば、ｐ−ブロモベンジルアミン）およびトリス（ヒドロキシ メチル）メチルアミン塩のようなアミン塩が挙げられる。

本発明による化合物は、酵素スクアレンシンターゼおよびコレステロールの生合 成を阻害することがわかっており、それ故医薬、特に動物（特にヒト）の血漿コ レステロール濃度を低下させることが有益である様々な症状に用いられる。その ような症状の例には、高コレステロール血症および高リポタンパク血症を伴う疾 患、特にアテローム性動脈硬化症および循環器疾患（例えば、虚血性心疾患、虚 血性大脳疾患および末梢動脈疾患）がある。

スクアレンシンターゼを阻害する本発明の化合物は、ヒトを含む動物における真 菌感染症の治療に用いることもできる。例えば、それらの化合物はＣａｎｄｉｄ ａｐａｒａｐｓ　ｉ　ｌｏｓ　ｉｓおよびＣａｎｄｉｄａｐｓｅｕａｏｔｒｏｐ ＞　、　ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ身性感染症の治療に用いることができる。そ れらの化合の種によって引き起こされる局所感染症の治療に用いることもできる 。それらは、ＴｏｒｕｌｏｐｓｉｓｇｌａｂｒａｔａおよびＰｉ　ｔｙｒｏｓｐ ｏｒｕｍ０ｖａｌｅによって引き起こされる真菌疾患の治療にも用いることがで きる。

本発明の化合物の抗真菌活性のイン・ビトロでの評価は、適当な培地における特 定の微生物が生育できなくなる試験化合物の濃度である最小阻止濃度（ＭＩＣ） を決定することによって行うことができる。

抗真菌療法におけるそれら化合物の効力を考慮すると、スクアレンシンターゼを 阻害する本発明の化合物は、ヒトおよび動物における様々な真菌感染症の治療に 好ましく用いることができる。そのような感染症には、カンジダ症および慢性粘 膜カンジダ症（例えば、鵞口癒および腟カンジダ症）のような糸状菌感染症およ び真菌によって引き起こされた皮膚感染症である皮膚および粘膜皮膚のカンジダ 症、自製および輪重感染症を含む皮膚糸状菌症、足自製、爪囲炎、でん風、紅色 陰型、間擦疹、真菌性おむつ皮膚炎、カンジダ外陰炎、カンジダ亀頭炎および外 耳炎がある。それらの化合物は、全身性および局所性真菌感染症を防止するため の予防薬としても用いることができる。予防薬としては、例えば、免疫が低下し た患者の感染防止における選択的な腸の汚染除去法の一部として好適に用いるこ とができる。抗生物質治療中の真菌の過剰成長の防止も、ある種の疾患症候群ま たは医原性状態おいて望ましい。

本発明の化合物の鴫乳類および真菌における酵素スクアレンシンターゼを阻害す る能力は、 Ｊ、Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３１（１０）１８６９〜１８７ １　（１９８８年）中にＳ、Ａ。

Ｂ１１１ｅｒらが記載しているものと同様の分析条件下で基質として［２−１４ Ｃ］　ファルネシルピロホスフェ一部を用いてイン・ビトロで示すことができ、 ［Ｃ］スクアレンを薄層クロマトグラフィープレート上で未反応の基質から分離 し、液体シンチレー・ジョン計数法により測定するのである。本発明の化合物の コレステロール生合成を阻害する能力は、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、Ａ ｃｔａ、８７７巻　５０−６０　（１９８６年）の中でＹ、Ｔｓｕｊｉｔａらが 記載しているのと同様の、高性能液体クロマトグラフィー（ｈ、ｐ、１．ｃ）を 使用したコレステロールの測定を含むように変更した方法を用いて、雄ウィスタ ー系ラットの肝臓切片における［Ｃ］アセテートからの阻害を測定することによ って示すことができる。

治療に用いるには、スクアレンシンターゼを阻害する本発明の化合物を未加工化 合物として投与することができるが、活性成分を薬学配合物として提供するのが 好ましい。したがって、本発明はスクアレンシンターゼを阻害する本発明の化合 物を１種類以上の薬学上許容可能な担体および所望により他の治療および／また は予防成分と共に含んで成る薬学配合物も提供する。（複数の）担体は、配合物 の他の成分と相溶性であり且つその賦形剤に悪影響を与えないという意味におい て「許容可能」なものでなければならない。

本発明の組成物には、経口投与、口腔投与、非経口投与、移植による投与、直腸 投与、局所投与、目への投与または尿生殖器への投与用に特別に配合した形態ま たは吸入または通気法による投与に好適な形態であるものが挙げられる。

経口投与のだめの錠剤およびカプセルは、従来の賦形剤、例えば、シロップ、ア ラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントゴム、澱粉漿剤またはポリ ビニルピロリドンのような結合剤、ラクトース、ショ糖、微品質セルロース、ト ウモトコシ澱粉、リン酸カルシウムまたはソルビトールのような充填剤ニステア リン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、ポリエチレングリコールまたはシ リカのような潤滑剤；ジャガイモ澱粉、または、澱粉グリコール酸ナトリウムの ような崩壊剤；またはラウリル硫酸ナトリウムのような湿潤剤を含むことができ る。これらの錠剤は、当該技術分野で周知の方法によってコーティングすること もできる。経口用の液体製剤は、例えば水性または油性懸濁液、溶液、エマルジ ョン、シロツプまたはエリキシルの形態とすることができ、またはそれらを使用 前に水もしくは他の好適なビヒクルを用いて構成する乾燥生成物として提供する こともできる。このような液体製剤は、通常の添加剤、例えば、ソルビトールシ ロップ、メチルセルロース、グルコース／シタ塘シロップ、ゼラチン、ヒドロキ シエチルセルロース、カルボギシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウム ゲルまたは水素化食用脂肪のような沈澱防止剤；レシチン、ソルビタンモノ−オ レエートまたはアラビアゴムのような乳化剤；アーモンド油、精留ヤシ曲、油性 エステル、プロピレングリコールまたはエチルアルコールのような非水性ビヒク ル（食用油を包含することができる）、およびｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル若 しくはプロピルまたはソルビン酸のような防腐剤を含むことができる。これらの 組成物は、例えば、カカオ脂または他のグリセリドのような従来の座薬基剤を含 む座薬として処方することもできる。

口腔投与には、この組成物は従来の方法で処方した錠剤またロゼンジの形態をと ることもできる。

本発明による組成物は、注射または連続輸液による非経口投与用に処方すること ができる。注射用の配合物は、アンプルに入れた単位投与形態でまたは防腐剤を 加えた多数回投与容器に入れて提供することができる。組成物は、油性または水 性ビヒクルの沈澱防止剤、溶液またはエマルジョンのような形態をとることがで き、且つ沈殿防止剤、安定剤および／または分散剤のような配合剤を含むことが できる。或いは、活性成分は粉末状をしておリ、使用前に無菌の発熱物質不含水 のような好適なビヒクルを用いて構成することができる。

吸入による投与には、本発明による組成物を、例えば、ジクロロジフルオロメタ ン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素ま たは他の好適なガスのような好適なプロペラントを用いて加圧パックからまたは 噴霧器からエアゾールスプレーの形態で、噴射するのが好都合である。加圧エア ゾールの場合には、一定量を噴射するための弁をとりつけることによって用量単 位を決定することができる。

或いは、吸入による投与には、本発明による組成物は、例えば、化合物と、乳糖 または澱粉のような好適な粉末基剤との粉末混合物のような乾燥粉末組成物の形 態をとることができる。粉末組成物は、単位投薬量形態、例えばゼラチンのカプ セルまたはカートリッジ或いは粉末を吸入器もしくは注入器を用いて投与するこ とができるブリスターパックにいれた単位投与形態で提供することができる。

これらの組成物は、例えば従来の座薬基剤を含む座薬、または従来のペッサリー 基剤を含むペッサリーの形態をとることもできる。

ａ酸物は、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、シャンプー、粉末（スプレーパ ウダーを含む）、ペッサリー、タンポン、スプレー、浸液、エアゾール、点滴剤 （例えば、点眼剤、耳用点滴剤または点鼻薬）または、注入剤（ｐｏｕｒ−ｏｎ ｓ）の形態で、局所投与用に配合することもできる。軟膏およびクリームは、例 えば、好適な増粘剤および／またはゲル化剤を加えた水性または油性基剤を用い て配合することができる。眼に投与する軟膏は、滅菌成分を用いて無菌の方法に よって製造することができる。注入剤は、例えば安定剤および可溶化剤のような 配合剤を所望により用いて、有機溶媒を含む油性物質中で獣医用に処方すること ができる。腟挿入用のペッサリーおよびタンポンは、従来の技術を用いて処方さ れ、適宜発泡性のビヒクルを含むこともできる。そのような組成物は、適宜コル チコステロイド、抗生物質または駆虫剤のような他の活性成分をも含むこともで きる。

鼻腔内投与の液体製剤は、溶液または懸濁剤の形態をとることができ、従来の賦 形剤、例えば塩化ナトリウム、右旋性ブドウ糖またはマンニトールのような張度 調節剤；塩化ベンザルコニウム、チオメルサール、フェニルエチルアルコールの ような防腐剤；および沈殿防止剤、緩衝剤、安定剤および／または分散剤のよう な他の配合剤を含むことができる。

経皮投与は、活性化合物の皮膚を介して吸収を促進するのに好適な系の設計によ って影響を受けることがあり、典型的には裏当て用フィルム、膜および放出用ラ イナーを含む粘着性貼剤内に包含される基本配合物から成る。

本発明による組成物は、貯蔵製剤として処方することもてきる。そのような長期 活性性配合物は、移植（例えば皮下または筋肉中に）、または筋肉注射により投 与しても良い。このように例えば本発明の化合物は、適当なポリマーまたは疎水 性の材料（例えば許容できる油におけるエマルジョンとして）、またはイオン交 換レジンにより、またはわずかに可溶性の誘導体、例えばわずかに可溶性の塩と して処方する場合がある。

組成物が投薬量単位から成るとき、本発明の化合物を経口投与しようとする場合 には、それぞれの単位は好ましくは活性成分０．００１ｍｇから１０００　ｍ　 ｇまで、有利にはＱ、Ｑｌｍｇから４００ｍｇまでを含むのが好ましい。成人治 療に用いられる１日投与量は、好ましくは活性成分０．００１ｍｇから５０００ ｍｇまでの範囲であり、最も好ましくはＱ、Ｑｌｍｇから２０００ｍｇまでを１ 日］から４回、投与経路および治療を受ける患者および疾患の状態に応じて投与 することができる。

本化合物は、例えば活性成分５０ｍｇ／ｋ　ｇ／日までを用いて静脈輸液により 投与することができる。治療期間は、恣意的な日数よりはむしろ応答の程度によ り指示される。

スクアレンシンターゼを阻害する本発明の化合物は、他の治療薬と組み合わせて 用いることもでき、従って本発明は、もう一つの態様では、スクアレンシンター ゼを阻害する本発明の化合物ともう一つの治療活性を有する薬剤、例えば３−ヒ ドロキシ−３−メチルグルタリル補酵素Ａ　（ＨＭＧＣｏＡ）レダクターゼの阻 害剤または血清コレステロールを減少しおよび／またはコレステロール生合成を 抑制する別種の薬剤、例えば胆汁酸封鎖剤または抗高リポタンパク血症剤または 抗高脂血症剤、即ちプロブコール、ゲムフィブロジル、クロフィブレート、デキ ストロチロキシンまたはそのナトリウム塩、コレスチラミンまたはその塩酸塩、 コレスチラミン、ニコチン酸、ネオマイシン、ｐ−アミノサリチル酸、アスピリ ン、ＤＥＡＥ−３ｅｐｈａｄｅｘ、ポリ（ジアリルジメチルアミン）誘導体、イ オネンまたはポリ（ジアリルジメチルアンモニウム）クロリドとを組み合わせた ものを提供する。

前記の組み合わせは、薬学配合物の形態で使用するのに好都合に提供することが でき、したがって前記の組み合わせと薬学上許容可能なその担体とから成る薬学 配合物は本発明のもう一つの態様を構成する。このような組み合わせの個々の成 分は遂時的にまたは別々の若しくは組み合わせた製剤配合物で同時に投与するこ ともできる。

本発明の化合物を、第二の治療薬と組み合わせて同じ症状に対して用いる場合、 各化合物の投与量は化合物を単独で用いるときの投与量と異なっていてもよい。

適当な投与量は、当該技術分野において熟練した者ならば容易に理解するであろ う。

本発明のもう一方の態様によれば、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）または生理学上 許容可能なその塩または式（ｌａ）または（ｌｂ）の化合物、または治療に使用 する、特に動物（特にヒト）における血漿コレスチール濃度の低下が有益である 症状の治療或いは動物（特にヒト）の真菌感染症の治療用の前記の生理学上許容 可能なその塩を含んで成る薬学組成物が提供される。

本発明の特定の態様においては、式（Ｉａ）または（［ｂ）の化合物または生理 学上許容可能なその塩、または高コレステロール血症および／または高リポタン パク血症、特にアテローム性動脈硬化症および循環器疾患（例えば、心虚血性疾 患、大脳虚血性疾患および抹消動脈性疾患）に伴う疾患の治療に用いられる式（ Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物または前記に定義した生理学上許容可能なその 塩を含む薬学組成物が提供される。

本発明の別の態様によれば、式（ｌａ）または式（Ｉｂ）の化合物または生理学 上許容可能なその塩の、高コレステロール血症および／または高リポタンパク血 症、特にアテローム性動脈硬化症および循環器疾患（例えば、心虚血性疾患、大 脳虚血性疾患および抹消動脈性疾、１りに伴う疾患治療薬の製造における使用が 提供される。

本発明のもう一つの態様によれば、式（Ｉａ）または式（Ｉｂ）の化合物または 生理学上許容可能なその塩の、ヒトおよびヒト以外の動物患者の真菌性感染症の 治療薬の製造における使用が提供される。

本発明のもう一つの態様によれば、高コレステロール血症および／または高リポ タンパク血症、特にアテローム性動脈硬化症および循環器疾患（心虚血性疾患、 大脳虚血性疾患および抹消動脈性疾患）に伴う疾患を治療し、または真菌性疾患 を治療するヒトおよびヒト以外の動物の治療方法であって、式（Ｉａ）または式 （Ｉｂ）の化合物または生理学上許容可能なその塩の有効量を、前記の患者に投 与することを特徴とする方法が提供される。

本明細書において治療とは、予防並びに画定した症状または感染症の治療にも数 行することを当業者であれば理解するであろう。

本発明の化合物は、下記の方法により調製できる。

例えば、式（Ｉａ）（式中、Ｒ２は基−０ＣＯＲ７または一〇ＣＯＲ７である） の化合物を調製するための一般的方法（Ａ）は、 １　３ａ （式中、Ｒは前記に定義した通りであり、Ｒは前記のＲ３について定義した通り であるかまたはその保護４ａ　５ａ　（３ａ 誘導体であり、Ｒ、ＲおよびＲは保護基である）を有する化合物を従来の条件下 で反応させてエステルまたはカーボネートを生成させた後、存在する保護基を除 去する工程を含んでいる。例えば、この反応は、式（Ｉ　Ｉ）の化合物を適当な 化合物Ｒ７Ｃ０Ｈａ　ｌまたはＲ７０ＣＯＨａｌ（但し、Ｈａｌは塩素または臭 素のようなハロゲン原子を表わす）で適宜処理することにより好都合に行うこと ができる。

化合物ＲＣ０ＨａｌまたはＲ０ＣＯＨａｌとの反応は、４−ジメチルアミノピリ ジンの存在下にて、第三アミン（例えば、トリエチルアミン）のような好適な塩 基を用いてまたは用いることなく、またはハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロ ロメタン）のような溶媒中でアルカリ金属カーボネートまたはアルカリ土類金属 カーボネート（例えば、炭酸カルシウム）を使用して好都合に行うことができる 。

式（Ｉ　Ｉ）の化合物におけるＲ　がヒドロキシル基を表わすときには、このヒ ドロキシル基はエステルおよびカーボネートを形成しやすいということが理解さ れるであろう。従って、Ｒがヒドロキシル基である式（Ｉａ）の化合物の調製に おいては、式（Ｉ　Ｉ）の化合物中のそのＲ１のヒドロキシル基を保護するか、 またはＲ１が前記の式（Ｉａ）に定義された通りのアシルオキシ基である式（Ｉ 　Ｉ）の化合物を利用し、７位のエステルまたは炭酸を生成する反応の後に、保 護基を除去するかまたは適宜脱アシル化を行い、Ｒ１がヒドロキシである式（Ｉ ａ）の所望の化合物を提供するのが適当なことがある。

Ｒ２がアセトキシ基である式（Ｉａ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物を無水酢 酸と反応させた後、存在する保護基を除去することにより好都合に調製できる。

アセチル化反応は、ハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン）のような溶 媒中で第三アミン（例えば、トリエチルアミン）のような好適な塩基の存在下で 好都合に行うことができる。

Ｒ２がヒドロキシル基である式（Ｉａ）の化合物のもう一つの調製法（Ｂ）は、 式（Ｉ　Ｉ　Ｉ）（式中、Ｒ１およびＲ３ａ−Ｒ６“は前記に定義の通りである ）を有する化合物を適当な還元剤により還元した後、存在する保護基を除去する ことから成っている。したがって、例えば還元は、エーテル（例えば、テトラヒ ドロフラン）のような溶媒中で水素化トリエチルホウ素リチラムまたはアルコー ル（例えばメタノール）またはアルコールとエーテル（例えば、テトラヒドロフ ラン）のような別種の溶媒との混合物のような溶媒中で、所望により好適な金属 水素化物の存在下にて、水素化ホウ素ナトリウムのような水素化ホウ素化合物を 用いて２０℃を下回る温度（例えば、−７０’〜１０℃）の温度で好都合に行う ことができる。或いは、還元は低温（例えば−７０°〜０℃）でトルエンのよう な溶媒中で水素化アルミニウム還元剤、例えば水素化ジイソブチルアルミニウム を用い、または低温（例えば−７０℃〜０℃）でエーテル（例えば、テトラヒド ロフラン）のような溶媒中でリチウムトリ［（３−エチル−３−ペンチル）オキ シ］アルミノヒドリドを用いて行うことができる。

式（ＩＩＩ）の化合物からＲ１がヒドロキシル基である式（Ｉａ）の化合物を調 製すること所望ならば、式（ＩＩＩ）のＲ１は前記の式（Ｉａ）において定義し たように好都合にはアシルオキシ基を表し、これを還元反応の後で、保護基の除 去の前または後に（後記する脱アシル化条件下にて）ヒドロキシル基に転換する 。

式（Ｉｂ）の化合物は、式（Ｉ　Ｉ　ｌ）の化合物から、存在する保護基を除去 することにより好都合に調製することができる。

もう一つの方法（Ｃ）は、式（１）の化合物または保護されたその誘導体を、式 （Ｉ）の別種の化合物または保護されたその誘導体に転換した後、必要であれば 存在する任意の保護基を除去することから成っている。

Ｒ１が水素原子である式（Ｉ　Ｉ　Ｉ）の化合物は、Ｒ１が である対応する式（ＩＩＩ）の化合物から、ケトン（例えば、アセトン）のよう な適当な溶剤中で、好都合にはほぼ室温で水性塩化第一クロムと反応させること により調製することができる。

式（ＩＩＩ）の化合物は、式（ｒｖ） １　３ａ　６ａ （式中、ＲおよびＲ−Ｒは前記に定義した通りである）の化合物から、ハロゲン 化炭化水素（例えば、ジクロロメタン）のような溶媒中で粉末化した分子篩の存 在下でクロロクロメート（例えば、ピリジニウムクロロクロメート）のような適 当な酸化剤を用いて（ＩＶ）を処理することによって好都合に調製することがで きる。

Ｒ１がヒドロキシル基である式（Ｉ　Ｉ）の化合物は、Ｒ１がヒドロキシル基で ある式（ＩＩＩ）の化合物から前記の還元手順に従って調製することもできる。

式（ＩＶ）の化合物は、式（Ｖ） （式中、Ｒ１およびＲ３−Ｒ６は前記の式（Ｉ）に定義した通りである）の化合 物から、標準的カルボン酸保護法によって、適宜Ｒ３内のヒドロキシル基を保護 して好都合に調製することができる。

４ａ　５ａ　５ａ Ｒ、ＲおよびＲの好適なカルボン酸保護基およびＲ３ａの水酸保護基には、従来 の任意の保護基、例えば「有機化学における保護基Ｊ、Ｊ、Ｆ、Ｗ。

ＭｃＯｍ１ｅ監修（Ｐｌｅｎｕｍ　Ｐｒｅｓｓ。

１９７３年）またはＴｈｅｏｄｏｒａ　Ｗ。

Ｇｒｅｅｎｅ著「有機合成における保護基」　（ジョン・ワイリー・アンド・サ ンズ、１９８１年）に記載されるものが挙げられる。適当なカルボン酸保護基の 例には、ｔ−ブチルのようなアルキル基、２−メトキシエトキシメチル、または ジフェニルメチルまたはｐ−ニトロベンジルなどのアラールキル基がある。好適 なヒドロキシル保護基の例には、２−メトキシエトキシメチルのような基がある 。

保護基は、従来の手法を用いて除去することができる。

したがって、ｔ−ブチルのようなアルキル基は、例えば無水酸の条件下で（例え ば、ジオキサンのようなエーテル溶媒中で塩化水素を用いて）除去することがで きる。

ｐ−ニトロベンジル基は、エーテル（例えば、テトラヒドロフランまたは水性テ トラヒドロフラン）のような溶媒中で亜鉛金属および塩酸を用いて好都合に除去 することができる。ジフェニルメチル基または２−メトキシエトキシメチル基は 、水性ギ酸またはトリフルオロ酢酸を用いて好都合に除去することができる。

式（Ｖ）のカルボン酸の対応するメチルエステルへのエステル化は、重炭酸塩（ 例えば、重炭酸ナトリウム）のような塩基の存在下にて、アミド（例えば、ジメ チルアセタミドまたは好ましくはジメチルホルムアミド）のような好適な有機溶 媒中で、ハロゲン化メチル（例えば、ヨウ化メチル）または硫酸ジメチルのよう なメチル化剤で処理することによって好都合に行うことができる。反応は、０° から１００℃、好ましくは２０°から３０℃の範囲の温度で、好都合に行うこと ができる。或いは、エステル化は、メタノールのような好適な溶剤中でジアゾメ タンのエーテル性溶液で処理することにより行うこともできる。エステル化は、 鉱酸（例えば、塩酸）のような好適な酸の存在下にて室温でメタノールを用いて 処理することによって行うこともできる。

式（Ｖ）のメチルエステルから別種のメチルエステルへの転換は、適当なエステ ル化／脱エステル化工程によって行うことができる。脱エステル化は、標準的条 件下で、例えば塩基加水分解により行うことができる。

式（Ｖ）の化合物は、後記する発酵法にしたがって調製することができ、または 好適なアシル化および脱アシル化の方法にしたがって適宜６位のアシル化および 脱アシル化により、発酵法の生成物から調製することができる。好適なアシル化 の方法は、後記する。脱アシル化は、アルコール（例えば、メタノール）のよう な溶媒中で水性の水酸化ナトリウムのような塩基を用いて塩基によって触媒され る加水分解により好都合に行うことができる。

また、α、β−不飽和エステルの脱アシル化は、ジメチルホルムアミドのような 溶媒中で、所望により好適な塩基（例えば、トリエチルアミンのようなトリアル キルアミン）の存在下にて、ヒドロキシルアミン（例えば、Ｎ−メチルヒドロキ シルアミン塩酸塩）を用いて行うことができる。発酵法は、式（Ｖ）の化合物を １個以上産生ずることのできる微生物を培養することから成る。その後、培養物 から所望の化合物を分離し、所望ならばアシル化または脱アシル化しおよび／ま たは対応するメチルエステルにエステル化することができる。

好適な微生物は、小規模試験を用い、標準的方法を用いて微生物の発酵から得ら れる試験試料を分析することによって容易に同定することができる。

詳細には、好都合に用いられる微生物は、ＧＳａｘ。

Ｇｒｏｕｐ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌｉｍ１ｔｅｄ。

Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｄｔｖｊｓｉｏｎ、　グリーンフォード・ロード、 ミドルセックス、英国、の培養物収集に１９８９年５月３１日に受入番号Ｃ２９ ３２で寄託した微生物の株、ＵＢ６　０ＨＥ　（Ｗｏ　ｒ　１ｄＤｉｒｅｃｔｏ ｒｙ　ｏｆ　Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎｓｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　ｏｆ　Ｍｉｃｒ ｏ　−ｏｒｇａｎｉｓｍｓ、１９８２年、館長：ミスＡＭＨａｒｒｉｓ、におけ る収集番号２０２）、またはその突然変異株である。前記の培養物収集センター は、１９８２年の英国特許法１７条に従って培養物収集に対して正当な要請を行 う総ての人が利用することができることに対して無条件且つ取り消しのできない 承認を与えていることを理解する必要がある。

受付番号Ｃ２９３２でグリ−フォードに寄託された菌株株は、ＣＡＢ　Ｉｎｔｅ ｒｎａｔｉｏｎａｌＭｙｃｏＬｏｇｉｃａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔ、ｕｔｅ、の永久培 養物収集、フェリー・ロード、キュー、サリー、英国にも寄託されている。この 菌株は１９８９年５月２５日に前記の研究所に受理された後、ＩＭＩ　３３２９ ６２という受付番号と１９８９年６月２７日の寄託日（生存の確認日）を与えら れた。寄託された菌株は、本明細書では研究所受付番号ＩＭＩ３３２９６２を表 示することにより同定する。ＩＭＩ３３２９６２についてこれまでに同定された 特性を、後記の実施例９に示す。

所望な中間体もＩＭＩ３３２９６２の突然変異株から調製することができること が理解されるであろう。

１Ｍ１３３２９６２の突然変異株は自然に生成することができ、または［産業用 微生物の放射線および放射性同位体Ｊ、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆＳｙｍｐ ｏｓｉｕｍ、ウィーン、１９７３年、２４１頁、国際原子力委員会におけるＨ、 １．Ａｄｌｅｒの微生物の開発の手法に記載されているものなどの多種多様な方 法によって産生ずることができる。これらの方法↓こ【よ、イオン化放射線、化 学的方法、例えばＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン（ＮＴＧ ）ｌこよる処理、熱、遺伝学的手法、例えば組換えおよび形質転換、および自然 発生的突然変異株に対する選択的手法力（ある。

醗酵は、従来の手段により、すなわち炭素、窒素および無機塩の同化源の存在下 にて微生物を培養すること１こよって行うことができる。

炭素、窒素および鉱物の同化源は、単純なまたは複雑な栄養のいずれによっても 提供することができる。炭素源には、一般的にはグルコース、マルトース、澱粉 、グリセロール、糖蜜、デキストリン、ラクトース、スクロース、フルクトース 、ガラクトース、ミオ−イノシトール、Ｄ−マンニトール、大豆油、カルボン酸 、アミノ酸、グリセリド、アルコール、アルカンおよび植物油がある。

炭素源は、通常は醗酵媒質の０．５〜１０重量％である。

フルクトース、グルコースおよびスクロースは、好ましい炭素源である。

窒素源には、一般的には大豆ミール、コーン・ステイープ・リカー、デイステイ ラーズ・ソルブルス、酵母エキス、綿実ミール、ペプトン、ビーナツツミール、 麦芽エキス、糖蜜、カゼイン、アミノ酸混合物、アンモニア（ガスまたは溶液） 、アンモニウム塩または硝酸塩がある。尿素および他のアミドを用いることもで きる。窒素源は、通常は醗酵媒質の０．１〜１０重量％である。

培地に配合することができる栄養素無機塩には、ナトリウム、カリウム、アンモ ニウム、鉄、マグネシウム、亜鉛、ニッケル、コバルト、マンガン、ノクナジウ ム、クロム、カルシウム、銅、モリブデン、ホウ素、ホスフェート、スルフェー ト、クロリドおよびカーボネートイオンを生成することができる一般に用いられ る塩力（ある。

微生物の培養は、通常は２０〜４０℃、好ましくは２０〜３５℃、特に約２５〜 ２８℃の温度で行われ、例えば振盪または掻き混ぜによる通気および撹拌を行う のが望ましい。培地には最初に少量の菌糸体および／または胞子を接種すること ができる。得られる成長力のある接種物を醗酵培地に移すことができ、または主 要な醗酵培地に移す前に更に成長が起こる１以上の種子段階に移すことができる 。醗酵は、通常は３．５〜９．５、好ましくは４．５〜７．５のｐＨ範囲で行わ れる。ｐＨを所望な範囲内に保つために、塩基または酸を醗酵培地に添加する必 要があることがある。添加することができる好適な塩基には、水性の水酸化ナト リウムまたは水酸化カリウムのようなアルカリ金属水酸化物がある。好適な酸に は、塩酸、硫酸またはリン酸のような鉱酸がある。

醗酵は、４〜３０日間、好ましくは約７〜１８日間行うことができる。消泡剤を 含んで過剰の発泡を制御し、且つ必要に応じて定期的に添加することができる。

炭素および／または窒素源を、必要に応じて醗酵培地に供給することもできる。

醗酵工程の生成物は、醗酵液および菌糸画分の両方に含まれることができ、これ らは濾過または遠心分離によって好都合に分離することができる。醗酵液は、そ の後所望により有機溶媒の存在下にてｐ）（値がｐＨ６を下回る（例えば、ｐ　 Ｈ約３）間で硫酸のような酸で処理することができる。

醗酵工程の生成物は、従来の単離および分離手法により醗酵ブロスから分離する ことができる。単離手法の選択は広範囲に変化し得ることが理解されるであろう 。

醗酵工程の生成物は、様々な分別法、例えば吸着−溶出、沈澱、分別結晶、溶媒 抽出および液−液分配によって単離し、精製することができ、これらの方法は様 々なやり方で組み合わせることができる。

固形支持体上への吸着の後溶出を行うことは、本発明の化合物を単離して精製す るのに好適であることが判った。

この醗酵工程の生成物は、ケトン（例えば、アセトン、メチルエチルケトンまた はメチルイソブチルケトン）、ハロゲン化炭化水素、アルコール、ジオール（例 えば、プロパン−１，２−ジオールまたはブタン−１，３−ジオール）またはエ ステル（例えば、酢酸メチルまたは酢酸エチル）のような適当な有機溶媒を用い て細胞および水性層から抽出することができる。一般には、最適の回収率を得る には２回以上の抽出が望ましい。水不混和性溶媒抽出物はそれ自体、塩基性の水 性溶液で抽出することができ、これらの塩基性溶液を酸性にした後、所望な化合 物を水不混和性の有機相に再抽出することができる。

有機抽出物から（例えば、蒸発によって）溶媒を除去すると、所望な化合物を含 む物質が得られる。

（高性能液体クロマトグラフィのような）クロマトグラフィを、シリカ；非官能 性のマクロ網状吸着樹脂、例えばアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４、ＸＡ Ｄ−１６またはＸＡＤ−１１８０樹脂（Ｒｏｈｍ　＆ＨａａｓＬｔｄ）またはカ スチルＳ１１２（Ｍｏｎｔｅｄｉｓｏｎ）のような架橋したスチレンジビニルベ ンゼンポリマー樹脂、１換スチレン−ジビニルベンゼンポリマー、例えばダイア イオン５Ｐ２０７　（三菱）のようなハロゲン化（例えば、臭素化）スチレンー ジビニルヘンゼンポリマー：陰イオン交換体（例えば、ＩＲＡ−３５またはＩＲ Ａ−６８）；有機溶媒に相溶性の架橋デキストラン、例えばセファデックスＬＨ ２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ　ＵＫ　Ｌｔｄ）のような適当な支持体上で、または 炭化水素結合したシリカ、例えばＣ結合シリカのような逆相支持体上で行うこと かできる。醗酵工程の生成物の精製／分離のための別のクロマトグラフィ手段は 、多層コイル抽出器のようなコイル抽出器を用いる向流クロマトグラフィである 。

醗酵工程の生成物は、ＬＡ２のような液体陰イオン交換体を用いることによって 単離および精製することもできる。

ＩＲＡ−６８または特にＩ　ＲＡ−３５を固体吸着剤として用いるときには、細 胞抽出物を溶媒を除去することなく直接に載荷することができる。この抽出物は 、ｐＨが約３で直接に載荷することも、または固形不純物を濾過した後にｐ）ｆ が約８で載荷することもできる。

式（Ｖ）の化合物のクロマトグラフィによる精製／分離に好適な溶媒／溶出液は 、カラムの種類および支持体の性状によって変化することは勿論である。向流ク ロマトグラフィを用いるときには、本発明者らは、酢酸エチル、ヘキサン、メタ ノールおよび水性酸（例えば、硫酸）を含んで成る溶媒系が特に好適であること を見出した。

ＩＲＡ−３５のようなアニオン交換体を用いるときには、この樹脂を水性アセト ンで洗浄した後、水性アセトン中硫酸で溶出するのが好都合であることがある。

抽出／単離処理の際の醗酵工程の生成物の存在は、高性能液体クロマトグラフィ または紫外部分光分析法のような従来の手法により、または化合物の特性を用い ることにより観察することができる。

醗酵工程の生成物が、例えばクロマトグラフィによる精製の後に有機溶媒の溶液 の形態で得られるときには、溶媒を従来の手法、例えば、蒸発によって除去して 、所望な化合物を生成させることができる。所望ならば、この化合物を前記のク ロマトグラフィ法によって更に精製することができる。

Ｒ１が前記の式（Ｉａ）および（ｉｂ）に定義した通りのアシルオキシ基である 式（Ｖ）化合物を提供するためのアシル化は、Ｒ１がヒドロキシル基である式（ Ｖ）の対応する化合物またはその保護誘導体を、従来のエステル化条件下でカル ボン酸のような好適なアシル化剤またはその活性化誘導体、例えば塩化アシルの ような／ＸＸロジンアシルで処理した後、存在する任意の保護基を除去すること によって行うことができる。

したがって、式（Ｖ）の化合物であってＲ１がであるものは、式（Ｖ）の化合物 であってＲ１がヒドロキシル基であるものまたはその保護誘導体を、式（ｖｉ） を有する酸またはその活性化誘導体、例えば対応する酸鉛果物で処理することに よって調製することができる。

アシル化反応は、４−ジメチルアミノピリジンの存在下にて、第三アミン（例え ば、トリエチルアミン）のような好適な塩基を用いてまたは用いることなく、ま たはハロゲン化炭化水素（例えば、ジクロロメタン）のような溶媒中でアルカリ 金属カーボネートまたはアルカリ土類金属カーボネートを用いて好都合に行うこ とができる。

アシル化または脱アシル化およびエステル化工程は、適宜遂時または同時反応段 階として組み合わせることができることを理解すべきである。

式（Ｉａ）および（！ｂ）の化合物の塩は、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物 を適当な塩または塩基で処理することによって好都合に形成させることができる 。例えば、塩は、式（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物を、水酸化ナトリウムまた はカリウム、酸性炭酸塩、炭酸塩または酢酸塩（例えば、水酸化カリウム、炭酸 水素カリウム、炭酸水素ナトリウムまたは酢酸カリウム）、酢酸アンモニウム、 酢酸カルシウムおよびＬ−リシンから適宜選択される塩または塩基で処理するこ とによって好都合に調製することができる。この塩は、例えば、適当な塩または 塩基（必要ならば、水性溶液として）を、水のような好適な溶媒および／または アルコール（例えばメタノール）、ニトリル（例えば、アセトニトリル）または ケトン（例えば、アセトン）のような共溶媒に式（１）の化合物を溶解または懸 濁したものに、例えばＯ℃〜８０℃、好都合には室温付近で加えることによって 調製することができる。

式（Ｉ　Ｉ）および（Ｉ　ｆ　Ｉ）の化合物は新規な中間体であり、本発明の別 の態様を形成する。

下記の実施例３．４および５の異性体７α−（４，６−シメチルー２−オクテノ エート）化合物も新規化合物であり、哺乳類および／または真菌細胞における酵 素スクワレンシンターゼを阻害する働きをする。これらの化合物およびその塩は 、本発明のもう一つの態様を形成する。

下記の実施例は本発明を例示するために提供するものであり、決して本発明を制 限するものではない。

天プレート上で成長させた。

麦芽エキス（ＯｘｏｉｄＬ３９）　３０ｇ真菌ペプトン（ＯｘｏｉｄＬ４０）　 ５ｇ酵母エキス（ＯｘｏｉｄＬ２１）　０．５ｇ蒸溜水で１リツトルとする。

オートクレーブ処理の前の培地のｐＨは、５．３〜取り、２個のプラグを滅菌法 溜水１．５ｍｌを含む数個のクリオチューブのそれぞれに移した。これらのチュ ーブを蓋をして、必要になるまで室温で保存した。

２個の寒天プラグを用いて、２５０ｍ１三角フラスコにいれた種培地（Ａ）の５ Ｑｍｌずつ８個のそれぞれに接種した。

種培地（Ａ）　二 ペプトン（ＯｘｏｉｄＬ３４）　１０ｇ麦芽エキス（ＯｘｏｉｄＬ３９）　２１ ｇグリセロール　４０ｇ Ｊｕｎｌｏｎｌ　１０　（Ｈｏｎｅｙｗｉ　ｌ　ｌ＆　５ｔｅｉｎ　Ｌｔｄ、、 つｔ−リングトン、サリー）　１ｇ 蒸溜水で１リツトルとする。

培地のｐｔ−ｉを、オートクレーブ処理の前に、水性の水酸化ナトリウムで６． ３〜６．５に調整した。

接種した種培地のフラスコを、５０ｍｍの直径の軌道運動で２５Ｏｒｐｍで回転 するシェーカープラットホーム上で２５℃で５日間インキュベーションを行った 。

フラスコの内容物をプールして、ホモゲナイズした。

ホモゲナイズを行った種培養物を３％（Ｖ／Ｖ）で用いて、２５０ｍ１の三角フ ラスコ中の醗酵培地（Ｂ）の５０ｍ１ずつ１２０個を接種した。

醗酵培地（Ｂ）： 綿実粉（Ｓｉｇｍａ）　１０ｇ ０ｇ蒸溜水リツトルとする。

オートクレーブ処理の前のこの培地のｐＨは、６，１〜６．３の範囲であった。

フラスコを前記と同様に振盪しながら８日間インキュベーションした。

８日間インキュベーションしたフラスコの醗酵ブロス（約６リツトル）を濾過し て、菌糸を除去し、濾液を硫酸（２０％ｖ　／　ｖ　）でｐＨ２，８に調整して 、酢酸エチル３×２容で抽出した。酢酸エチル抽出物を纏めて、水性炭酸水素ナ トリウム（１％ｖ　／　ｖ　）　２　Ｘ　４００　ｍ、　ｌで逆抽出した。水性 の逆抽出物を纏めて、前記と同様にｐＨ２，８に調整し、酢酸エチル２Ｘ８００ ｍｌに再抽出した。これらの抽出物を纏めて、蒸発乾固し、褐色油状生成物を得 た。この油状生成物を、ＩｔｏＭｕｌｔｉ−１ａｙｅｒ　Ｃｏ１１　Ｅｘｔｒａ ｃｔｏｒ　（Ｐ、Ｃ。

Ｉｎｃ、ボトマック、メリーランド、米国）を用いて向流クロマトグラフィによ って更に処理した。用いたコイルは内径が２．６ｍｍのＰＴＦＥチューブ約７０ ｍから成る標準的な調製用コイルであり、総容積は薬３８０ｍ１となった。用い た溶媒系は酢酸エチル、ヘキサン、メタノールおよびＮ／１００硫酸（６：５： ５：６、容積）の混合物であった。下相は一定に保持した。

Ｇｉ　ｌ５ｏｎ３０３型ポンプおよび８０４Ｃ型圧力計モジユール（Ｇｉｌｓｏ ｎ、ビリールベル、仏閣）を用いて、コイルに下相を満たした。次に、油状生成 物（上相の４ｍｌ＋下相の４ｍｌに４９７ｍｇ）を、カラムの「尾」端部に注入 した。次に、遠心分離機を８００回転／分で作動させ、移動（上）相をカラムの 「尾」端部から４ｍｌ／分で送液した。２０　ｍ、　１画分を収集し、スクアレ ンシンターゼの阻害を測定することによって監視した。

スクアレンシンターゼに対して活性を示す連続画分を一緒に纏めた。初期の画分 を蒸発乾固して、標題化合物（９０ｍｇ）を淡黄色油状生成物として得た。

（ｂ）　前記の（ａ）の手順にしたがって、８日間インキュベーションしたフラ スコからの６リツトルのブロスから分離した菌糸を、メタノール（２×３リツト ル）で抽出して、濾過した。濾液を蒸発濃縮して約５００ｍ１とし、ギ酸でｐＨ ３，０に調整し、酢酸エチル３×５００ｍ　ｌで抽出した。酢酸エチル抽出物を 一緒に纏めて、炭酸水素ナトリウム溶液（１％ｗ／ｖ）２Ｘ２００ｍ［で逆抽出 した。水性の逆抽出物を一緒に纏めて、ｐ）（：３．０に調整し、酢酸エチル２ Ｘ５００ｍｌに再抽出した。総ての有機画分を纏めて、ロータリーエバポレータ ーを用いて蒸発乾固し、褐色油状生成物を得た。この油状生成物（５７８ｍｇ） を３個のＧ１１ｓｏｎ溶媒送液ポンプ（３０３型）、１個の８１１Ｄｙｎａｍｉ ｃミキサーおよび８０２Ｃ圧力計モジユールから構成されるＧ１１ｓｏｎ自動調 製装置を用いて高性能液体クロマトグラフィ　（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）　により更に処 理を行った。クロマトグラフィは、Ｄｙｎａｍａｘ　ＭｉｃｒｏｓｏｒｂＣ１８ （５μｍ）半調製用カラム（２５０ｘｌＯｍｍ）上で行った。移動相は、アセト ニトリルおよび酢酸アンモニウムでｐＨ３，１５に調整した０、１％Ｖ　／　Ｖ ギ酸から成るグラディエンド（１：３→４：１→１．３）であり、２．８〜５． ６ｒｎ、１．７分で送液し、操作時間は６５分間であった。この方法を１６回繰 り返した。１３Ｘ４．９５分の画分を厚め、スクアレンシンターゼの阻害を測定 することによって監視した。それぞれの操作からの画分番号５を一緒にまとめ、 ギ酸で酸性にしてｐＨ３，０とし、２Ｘ１００ｍｌの酢酸エチルで抽出した。

有機相を取り出して、蒸発乾固し、淡黄色油状生成物として標題化合物（１，７ ２ｍｇ）を得た。

（ｃ）（ｉ）　５日間醗酵を行ったものからの０．５ｍ、１ずつ８個に前記の（ ａ）に記載の処理を行ったものを用いて、２５０ｍ１三角フラスコに入れた種培 地（Ａ）５０ｍｌずつ８個に接種した。フラスコを、２５Ｏｒｐｍで回転し５Ｑ ｍｍ直径の軌道運動を行うシェーカープラットホーム上で２５℃で４日間インキ ュベーションした。フラスコの内容物をプールし、ホモゲナイズした。

ホモゲナイズした種培養物を３％（Ｖ　／　Ｖ　）で用いて、２５０ｍ１三角フ ラスコ中の醗酵培地（Ｂ）５０ｍ　ｌずつ１２０個に接種した。フラスコを前記 と同様に振盪しながら１０日間インキュベーションした。

（ｃ）（ｉｉ）　前記の（ｃ）（ｉ）と同様に調整したホモゲナイズした種培養 物を３％（Ｖ／Ｖ）で用いて、容量がそれぞれ５リツトルであり醗酵培地（Ｂ） ３リツトルを含む２個の醗酵槽に接種した。接種した培地を２５℃に保持し、５ ００ｒｐｍで回転する２個の６枚タービン羽根車（７０ｍｍ直径）で撹拌した。

培養物に、滅菌空気を３リットル／分で通じて、通気した。シリコーン消泡剤（ Ｄｏｗ　Ｃｏｒｎｉｎｇ１５２０）を添加して、培養物の過度の発泡を抑制した 。１１日間生育した後、２個の培養槽の内容物を一緒に纏めて、前記の（ａ）の 手順にしたがって向流クロマトグラフィによって更に処理したところ、標題化合 物（１３７ｍｇ）を得た：重メタノール中の５００　Ｍ　Ｈｚプロトンｎｍｒで は、下記の位置にシグナルが見られる。約６０，８４〜０．９０　（ｍ、９Ｈ） 、１．０３　（ｄ、７，３Ｈ）。

１．０９〜１．１９　（ｍ、２Ｈ）、２．１０　（ｓ、３Ｈ）、２．２４　（ｍ 、ＩＨ）、２．３４　（ｍ、ＬＨ）。

２．６８　（ｄｄ、１３，６．ＬＨ）、４．０４　（ｄ、２゜ＩＨ）、４．９７ 　（ｓ、ＬＨ）、５．０２　（ｓ、ＩＨ）。

５．０８　（ｄ、５．ＬＨ）、５．２７　（ｓ、ＬＨ）、５゜８０　（ｄ、１６ ．ＬＨ）、６．３１　（ｄ、２．ＬＨ）。

６．８５　（ｄｄ、１６，８．ＩＨ）、７．１４　（ｔ、７゜ＩＨ）、７．１９ 　（ａ、７，２Ｈ）、７．２６　（ｔ、７゜２Ｈ）。重メタノール中での複合パ ルスデカップリング１２５．７５ＭＨｚ炭素−１３ｎｍｒでは、下記の位置にピ ークが見られる。約δ１７２．５　（０）。

１７２．１　（０）、１７０．１　（０）、１６８．５　（０）、１６６．５　 （０）、１５７．６　（１）、１４７．７（０）、１４１．６　（０）、１３０ ．２　（１）。

１２９．３　（１）、１２６．９　（１）、１１９．８　（１）、１１１．５　 （２）、１０６．８　（０）、９１．１　（０）、８２．５　（１）、８１．０ 　（１）、８０．１　（１）。

７６．６　（１）、７５．６　（０）、４４．４　（２）。

４０．９　（２）、３７．７　（１）、３５．６　（１）。

３４．９　（２）、３３．１　（１）、３０．８　（２）。

２６．５　（２）、２０．９　（３）、２０．５　（３）。

１９．２　（３）、１４．１　（３）、１１．４　（３）。

（ｄ）（ｉ）　前記の（ａ）と同様に行った５日間の醗酵から、接種物を凍結保 存したもの調製した。培養物の資料を１０分間遠心分離し、最初と同じ容積の１ ５％グリセロールおよび０．０１％Ｔ　Ｗ　６　ｅ　ｎ　８０に再分散した。菌 糸を遠心分離し、再分散した後プラスチ・ツクチューブに１．８ｍｌずつ分配し 、−２０℃で保存した。凍結した接種物Ｑ、５ｍｌずつ８個を用いて、２５０ｍ １三角フラスコに含まれた種培地（Ａ）５０ｍｌずつ８個に接種した。フラスコ を、２５Ｏｒｐｍで回転して５０ｍｍ直径の軌道運動を行うシェーカーグラ・ソ トホーム上で２５℃インキュベーションした。種フラスコの内容物をプールし、 ３％（ｖ　／　ｖ　）で用いて、２５０ｍ１三角フラスコ中の醗酵培地（Ｂ）５ ０ｍｌずつ１２０個に接種した。フラスコを、前記と同様にして９日間インキュ ベーションした。

（ｄ）（ｉｉ）　前記の（ｄ）（ｉ）と同様に生育させた４個の最終段階のフラ スコの内容物を７日間のインキュベーションの後にプールし、ホモゲナイズして 、前記の（ｃ）（ｉ）および（ｄ）（ｉ）と同様にして８日間インキュベーショ ンした醗酵培地（Ｂ）５０ｍｌずつ１２０個の種を供給した。８日間インキュベ ーションしたフラスコからの醗酵ブロス（約６リツトル）を濾過して、菌糸を除 去した。濾液を硫酸（２０％ｖ　／　ｖ　）でｐＨ２，８に調整し、酢酸エチル で抽出し、炭酸水素ナトリウムで逆抽出し、前記の（ａ）に記載したのと同じ方 法でｐ）（ｌ　８に酢酸エチルで再抽出した。酢酸エチル抽出物を減圧下にて濃 縮して、黄色油状生成物として、これをメタノール（１０ｍ　ｌ）に溶解した。

このよう疫を３ｍｌまで蒸発し、０ＤＳ−３（Ｗｈ　ａ　ｔｍａ　ｎＰａｒｔｉ ｓｉｌ　Ｂｉｏｐｒｅｐ４０．７５オングストローム、アセトニトリル−水、２ ０：８０にスラリー充填したもの）のカラム（３２ｘ２．５ｃｍ）に適用した。

カラムを、アセトニトリルと水との混合物の、アセトニトリルが１８４．３ニア 、２　・３．１　：　１．３：２の比率で増加する段階的グラディエンドにより 溶出した。

画分をＨＰＬＣによって監視し、標題化合物を含む画分を蒸発して、アセトニト リルを除去した。精製する水性懸濁液をプールし、−晩凍結乾燥したところ、灰 白色固形物として標題化合物（５９ｍｇ）を得た。

（ｅ）　プールした種フラスコを３％（Ｖ／Ｖ）で用いて、７リツトル醗酵槽中 の種培地（Ａ）４リツトルに接種したこと以外は、（ｄ）（ｉ）の処理を行った 。培養物を、４すｙトル／分で通気しながら、５００ｒｐｍで前記と同様に撹拌 しながら２日間インキュベーションした。培養物１．２リツトルを取り出し、４ ０リツトルの種培地（Ａ）を入れた７０リツトル醗酵槽に接種した。

培養物を４０リットル／分で通気しながら、前記と同様に５００ｒｐｍで２日間 インキュベーションした。培養物１５リツトルを取り出し、５００リツトルの醗 酵培地（Ｃ）を入れた７８０リツトル醗酵槽に加えた。

醗酵培地（Ｃ） 綿実粉（Ｓ　ｉ　ｇｍａ）　２０ｇ 自然のＩ）Ｈａ 培養物を５００リットル／分で通気しながら、前記と同様に振盪しながら２０Ｏ ｒｐｍで４５０時間インキユヘーションし、１２０時間後にフルクトースの５０ ％（ｗ　／　ｖ　）溶液を５ｇ／リットル／日で供給し、１６２時間後に７．５ ｇ／リットル／日に増加した。４５０時間後にブロスを分析したところ、１０５ ６ｍｇ／リットルの標題化合物を得た。

フルクトースの代わりに、グルコース、スクロース、マルトース、ラクトース、 ミオ−イノシトール、Ｄ−マンニトールおよび大豆油から選択される他の炭素源 を用いたこと以外は、前記の処理を小規模で繰り返した。

４５０時間後にそれぞれの実験からのブロスを分析したところ、標題化合物の実 質的力価が見られた。

前記の処理法にしたがって調製した標題化合物は、下記の特性を有する生成物と 一致した。

近似的分子量６９０；−ＦＡＢマススペクトル分析法［Ｍ−Ｈ］−６８９，２７ ８９；＋ＦＡＢマススペクトル分析法［Ｍ＋Ｎａ］　＋７１３．２７５３；分子 式％式％ 重クロロホルム中の５００ＭＨｚプロトンｎｍｒスペクトルＣδ値、括弧内は多 重度、カップリング定数（Ｈｚ）および積分値］　：０．７９〜０．８５　（ｍ 、９Ｈ）、１．００　（ｄ、７，３Ｈ）、１．０４〜１．１５（ｍ、２Ｈ）、２ ０９　（ｓ、３Ｈ）、２．４０　（ｍ、ＬＨ）、２．６９　（ｄｄ、１３，５． ＩＨ）、４．０５（ｓ、ＬＨ）、４．９４　（ｓ、ＬＨ）、４．９６　（ｓ。

ＬＨ）、５．０６　（ｄ、４．ＩＨ）、５．３０　（ｓ、ＩＨ）、５．７８　（ ｄ、１６．ＩＨ）、５．９２　（ｓ、ＬＨ）、６．８８　（ｄｄ、１６，８．Ｌ Ｈ）、７．１１（ａ、７．　２Ｈ）、７．　１４　（ｔ、７．　ＩＨ）。

７．　２４　（ｔ、７．　２Ｈ）　。

重クロロホルム中の複合パルスデカップリング１２５．７５ＭＨｚ炭素−１３ス ペクトル［δ値、括弧内は結合したプロトンの数］　：１７１．５　（０）。

１７１．０　（０）、１６９．１　（０）、１６７．０（０）、１６６．７　（ ０）、１５７．９　（１）。

１４５．４　（０）、１４０．１　（０）、１２８．９（１）、１２８．１　（ １）、１２５．８　（１）。

１１７．８　（１）、１１１．４　（２）、１０５．８（０）、８８．５　（０ ）、８１．６　（１）、８０．７（１）、７９．３　（１）、７５．１　（１） 、７４．２（０）、４２．９　（２）、３９．７　（２）、３６．７（１）、３ ４．２　（１）、３３．６　（２）、３１．６（１）、２９．４　（２）、２５ ．４　（２）、２０．９（３）、１９．８　（３）、１８．８　（３）、１３． ５（３）、１０．９　（３）。

中間体２ ＊ Ｌ秤肚二土り巳匹土見−二ｊｊ１エニ」ｌ二」Ｊ工」」！ルヘキシル）−４，６ ，７−ドリヒドロキシー２，８−ジオキサビシクロ［３，２，４］オクタン−３ ，４，５−トリカルボン酸、６−（４，６−シメチルー２−オクテノエート）　 、３，４．５−トリス（１，１−ジメチル中間体■の凍結乾燥生成物（７，５ｇ ）を乾燥ジクロロメタン（３２ｍｌ）に溶解したものを、窒素雰囲気下にて加熱 還流し、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミドジーｔｅｒｔ−ブチルアセタール（３１ ，３ｍ　ｌ）で２０分間を要して滴下処理した。更にＮ、Ｎ−ジメチルホルムア ミドジーｔｅｒｔ−ブチルアセタール（７，２１ｍ　ｌ）を３分間を要して添加 したとき、混合物を１時間加熱還流した。混合物を更に４時間加熱還流した後、 室温まで冷却し、ジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈し、食塩水（３Ｘ１０ ０ｍｌ）で洗浄した。何機相を乾燥しくＭｇ５０４）、蒸発させたところ、赤褐 色発泡体（１０，７５ｇ）を得た。これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋｇ３８５．１ １００ｍｌ）上でフラッシュクロマトグラフィに付し、酢酸エチル：シクロヘキ サン（１６）で溶出した。主成分を含む画分を纏めて蒸発させたところ、クリー ム−黄色発泡体状の標題化合物（６，５５ｇ）を得た。ｖ　（ＣＨＢｒ３）約　 ａ　Ｘ ３４００〜３６００　（ＯＨ）、１７５５　（エステルＣ＝Ｏ）、１７３０　（ エステルＣ−０）および１２５０ｃｍ−１（エステルｃ＝ｏ）、δ（ＣＤＣｌ２ ）１．４３　（ｓ、秩１３Ｃ−）、１．４８　（Ｓ、性至３Ｃ−）、１゜６０（ ｓ、性１３Ｃ−）、２．０８　（Ｓ。

ＣＨＣｏ　−）、２．　９３　（ｄ、Ｊ＝３Ｈｚ。

□３２ ７−ＯＨ）、４．００　（幅広いｓ、７−Ｈ）、４．０８（ｓ、４−０旦）、４ ．９５　（ｂｓ、Ｃ＝以月旦２゜５．０５　（ｓ、３−Ｈ）、５．１１　（ｄ、 Ｊ＝５Ｈｚ。

ＣＨ３Ｃ０２Ｃ旦）、５．７７　（ｄ、Ｊ＝１５Ｈｚ。

芳香族プロトン）。

オキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４，６−シヒド ロキシー７−オキソー２．８−ジオキサビシクロ［３，２，１］オクタン−３， ４，５−トリカルボン酸、６−（４，６−シメチルー２−オフ中間体２　（６， ９ｇ）をジクロロメタン（６９ｒｎｌ）に溶解したものに、粉末状の３オングス トロ一ム分子篩（６，９ｇ）とピリジニウムクロロクロメート（６，９ｇ）を加 えた。混合物を２０℃で１４時間撹拌した後、揮発油と酢酸エチルとの３：１混 合物（２す・ソトル）で希釈し、キーゼルグールで濾過した。生成する透明な橙 色溶液を水（３Ｘ５００ｍｌ）で洗浄し、乾燥して、蒸発させたところ、標題化 合物（６ｇ）を得た。

δ（ＣＤＣＩ　）０．８０　（ｍ、９Ｈ，ＣＨａ）　。

１．４３　（ｓ、１８Ｈ，Ｃ（Ｃ旦３）３）、１．６５（ｓ、９Ｈ，Ｃ（ＣＨ３ ）　３）、２．１０　（ｓ。

ｏｃｏｃ旦ａ）　、　４．２２　（ｓ、　０ｆ（）　、　４．６９　（ｓ。

３Ｈ）、４．９９，５．０１　（２ｓ、＝ＣＣ２０゜５．１１　（ｄ、ＩＨ，Ｃ ＨＯＣＯＣＨ３）、５゜７６７．３　（ｍ、５Ｈ，芳香族プロトン）。

中間体４ ［ＩＳ−［１ａ　（４Ｒ，５Ｓ　）、３ａ、４Ｂ、５ａ。

セチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル’）−４，６ ，７−ドリヒドロキシー２．８−ジオキサビシクロ［３，２，１］オクタン−３ ，４，５−トリカルボン酸、６−（４，６−シメチルー２−オクテノエート）、 ３．４．５−トリス（１，１−ジメチルエチル）エステル （ａ）　中間体３（６ｇ）を水冷メタノール（５０ｍｌ）に溶解したものに、水 素化ホウ素ナトリウム（２６５ｍｇ）を２０℃を下回る温度に保持しながら少し ずつ加えた。５分後に、更に水素化ホウ素ナトリウム（７０ｍｇ）を追加した。

反応混合物を１分間保持した後、過剰量の水性クエン酸を加えて反応を停止し、 エーテル（２Ｘ　２００ｍ　ｌ）で抽出した。抽出物を食塩水で洗浄し乾燥して 蒸発させたところ、生成物が得られ、これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリカゲル ６０．２３０〜４００メツシユ、３００ｇ）上でクロマトグラフィによって精製 して、揮発油と酢酸エチルとの３〜１混合物で溶出したところ、標題化合物およ び対応する７β−ヒドロキシ異性体を３・１の近似比（３ｇ）で得た。

δ（ＣＤＣｌ　３）０．８０〜０．９　（ｍ、９Ｈ，以旦３）、　１．４５　（ ｓ、　１８Ｈ，Ｃ（ＣＨ３）３）、１．６３（ｓ、９Ｈ，Ｃ（Ｃ旦ａ）３）、２ ．１０　（ｓ。

０ＣＯＣＥｉ３）、４．９５　（ｍ、２Ｈ，＝ＣＣＨ２，５゜８］、（ｄ、ＬＨ ，Ｊ＝１５Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨＣ０）。

６．５２　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝６．３Ｈｚ、６Ｈ）。

６．８５〜７．０２　（ｍ、ＣＨ＝ＣＨＣ０）、７．１〜７．３　（ｍ、５Ｈ， 芳香族プロトン）。

（ｂ）　中間体３（Ｉｇ）を氷冷したテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）およびメ タノール（２０ｍｌ）に溶解したものに、窒素雰囲気下にて塩化セリウム７水和 物（５６０ｍｇ）を加えた。２０分後に、混合物を一７０℃まで冷却し、−６０ ℃を下回る温度に保持しながら水素化ホウ素ナトリウム（３７０ｍｇ）で少しず つ処理した。２０分後に、更に水素化ポウ素ナトリウム（１００ｍｇ）を追加し た。反応混合物を１０分間保持した後、過剰量の飽和の水性塩化アンモニウムを 添加して反応を停止し、酢酸エチル（２Ｘ１００ｍｌ）で抽出した。抽出物を０ ．２モル塩酸、飽和重炭酸ナトリウムおよび食塩水で順次洗浄した後、乾燥して 蒸発させたところ、生成物が得られ、これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリカゲル ６０．２３０〜４００メツシユ、１００　ｇ）上でクロマトグラフィによって精 製して、揮発油と酢酸エチルとの４：１混合物で溶出したところ、標題化合物お よび対応する７β−ヒドロキシ異性体を８：１の近似比（４００ｍ　ｇ）で得た 。

δ（ＣＤＣｌ　）’０．８０〜０．９　（ｍ、　９Ｈ，ＣＨ３）、　１．４５　 （ｓ、　１８Ｈ，Ｃ（ＣＨ３）　３）、１．６３（ｓ、９Ｈ，Ｃ（ＣＨ３）　３ ）、２．１０　（Ｓ。

ｏｃｏｃ旦３）　、４．　９５　（ｍ、２　Ｈ，＝Ｃ旦。）。

５．８１　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝１５Ｈｚ、ＣＨ＝Ｃ旦ｃｏ）。

６．５２　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝６．３Ｈｚ、６Ｈ）。

６．８５〜７．０２　（ｍ、ＣＨ＝ＣＨＣ０）、７．１〜７．３　（ｍ、５Ｈ， 芳香族プロトン）。

（Ｃ）　中間体３（３ｇ）を−６５℃に冷却したテトラヒドロフランに溶解した ものに、窒素雰囲気下にてリチウムトリス［（３−エチル−３−ペンチルオキシ ）］アルミノヒドリドのテトラヒドロフラン溶液（０６５モル、７ｍ１）を加え た。−６５℃で３時間後に、温度を０℃まで上昇させ、更に５分後に反応混合物 を一６０℃に冷却し、１モル塩酸（１００ｍｌ）で反応を停止した後、酢酸エチ ル（３Ｘ１００ｍｌ）で抽出した。有機相を食塩水（１，ＯＯｍ　ｌ　）で洗浄 した後、乾燥し、蒸発させて油状生成物とし、これをシリカゲルカラム（Ｍｅｒ ｃｋシリカゲル６０，２３０〜４００メツシユ、４００ｇ）に載荷した。揮発油 と酢酸エチルとの混合物でグラディエンド溶出（４・１から７・３まで）を行っ たところ、標題化合物と異性体の［ＩＳ−［１α（４Ｒ，５Ｓ＊）＊ 、３α、４β、５α、６α（２Ｅ、４Ｒ，６Ｒ＊）。

＊ ７α］］１−（４−アセチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニル ヘキシル）−４，６，７−１−リヒドロキシー２．８〜ジオキサビシクロ［３， ２，１］オクタン−３，４，５−１リカルボン酸、７−（４，６−シメチルー２ −オクタノエート）　、３，４．５−トリス（１，１−ジメチルエチル）エステ ルとを近似比９　：　１　（２，８ｇ）で得た。δ（ＣＤＣｌ２）５．１６（不 明瞭、ｄ、Ｊ　＝６Ｈｚ、ＣＨＯＡｃ）および６．８４〜６．８９　（ｍ、ＣＨ ＝ＣＨＣ０）。

（ｄ）　水素化ジイソブチルアルミニウム（０，５モル）をトルエン（２１ｍｌ ）に溶解したものに、２，６−ジーｔ−ブチル−４−メチルフェノール（２，２ ｇ）のトルエン溶ｍ（３０ｍｌ）を加えた。ガスの発生が止んだら、溶液を一７ ０℃に冷却し、中間体３　（８６０ｍｇ）をトルエン（５ｍｌ）に溶解したもの を滴下して加えた。

−７０℃に２０分間保持した後、反応混合物に１モル塩酸を加えて反応を停止し 、エーテル（３Ｘ１００ｍｌ）で抽出した。有機相を５％水性重炭酸ナトリウム 溶液（１００ｍ　ｌ）および食塩水（１００ｍ　ｌ）で洗浄し、蒸発させて油状 生成物とし、これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０，２３０〜４００メ ツシユ、１２０　ｇ）上でクロマトグラフィにより精製した。揮発油とエーテル との混合物でグラディエンド溶出（９：１から２＝１まで）を行ったところ、標 題化合物、６α−ヒドロキシ−７α−（４，６−シメチルー２−オクタノエート ）異性体および７β−異性体を９：１：１０の近似比（４６０ｍｇ）で得た。

（ｅ）　中間体３　（９００ｍｇ）を−７０℃に冷却した乾燥テトラヒドロフラ ン（５０ｍ　ｌ）に溶解したものに、同じ溶媒（２，２ｍ１）に水素化トリエチ ルホウ素リチウム１モルを溶解したものを窒素雰囲気下で加えた。反応混合物を ２時間撹拌した後、希酢酸を加えて反応を停止し、酢酸エチル（３Ｘ１５０ｍｌ ）で抽出した。有機相を５％水性重炭酸ナトリウム溶液で十分に洗浄した後、乾 燥し、溶媒をストリップしたところ、油状生成物を得て、これをシリカゲル（Ｍ ｅｒｃｋシリカゲル６０゜２３０〜４０ｏメツシユ、１２０ｇ）上でクロマトグ ラフィにより精製した。揮発油／酢酸エチル（３：　１）カラムを溶出したとこ ろ、標題化合物、６α−ヒドロキシ−７α−（４，６−シメチルー２−オクタノ エート）異性体および７β−異性体を９・１：１の近似比（５２０ｍｇ）で得た 。

（ｆ）　中間体３　（４９９ｍｇ）を−２０’Ｃで窒素雰囲気下にて乾燥テトラ ヒドロフラン（２０ｍｌ）に溶解シたものに、水素化トリス［（３−エチル−３ −ペンチル）オキシコアルミニウムリチウムをテトラヒドロフラン（１０，４９ ｍ１）に溶解した０、５モル溶液を加え、生成混合物を一２０℃で１５分間撹拌 した。混合物に水（２ｍ　ｌ）を加えて反応を停止し、３／４時間撹拌を行い室 温まで温度を上昇させた。硫酸マグネシウムを加えて、懸濁液を真空濾過した。

濾液を蒸発させたところ、標題化合物のみが黄色油状生成物として得られた。

東員止ｊ ［ＩＳ−［１α（４Ｒ５８）　３ａ　４β、５α。

−−−−−一一−−−−−−−一−−−一一一一二〜−一一一　・　・対応する ７β−ヒドロキシ異性体との３・１混合物としての中間体４（３ｇ）を乾燥ジメ チルホルムアミド（２８ｍ　ｉ　）に溶解したものに、Ｎ−メチルヒドロキシル アミン塩酸塩（７２０ｍｇ）を加えた後、トリエチルアミン（１９ｍ１）を加え た。混合物を水分の非存在下にて２０℃で１．８時間撹拌し、２Ｎ−塩酸（１０ ｍ　ｌ）と食塩水で洗浄し、乾燥して、蒸発させた。生成物をシリカゲル（Ｍｅ ｒｃｋシリカゲル６０．２３０〜４００メツシユ、１６０　ｇ）上でクロマトグ ラフィにより精製し、揮発油と酢酸エチルとの３・２混合物で溶出したところ、 標題化合物（１，６ｇ）を得た。δ（ＣＤＣ１３）０．８５　（ｄ、３Ｈ，Ｊ＝ ７．３Ｈｚ、Ｃ旦３）。

１．４５　（ｓ、９Ｈ，Ｃ（ＣＨ３）　３）、１．５　（ｓ。

９Ｈ，Ｃ（Ｃ旦３）　３）、　１．６０　（ｓ、　９Ｈ。

Ｃ（、ＣＨ）　）　、２．１６　（ｓ、３Ｈ，０ＣｏＣＨａ）（２ｓ、２Ｈ，＝ ＣＣ２０、５，１１（ｍ、　Ｌ　Ｈ，６旦）、５．　１８　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝４ ．　８Ｈｚ。

ＣＨＯＣｏＣＨａ）、７．１〜７．３　（ｍ、５Ｈ１芳香］１−（４−アセチル オキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４−ヒドロキシ −７−オキソ−２，８−ジオキサビシクロ［３２，１］オクター−酷−一−１１ −一一一一、よ、−１−１→−―、５エユーーー、ニーー喝舷−−−−〜−一響 一中間体３　（２，０９ｇ）を脱酸素化アセトン（１００ｍｌ）に溶解したもの を、窒素雰囲気下にて塩化第一クロムの水性溶１ｉｊｉ　（０，８５モル：　８ ０ｍ　ｌ）　７２時間処理した。混合物をアセトン（４０ｍ　ｌ）で希釈し、塩 化第一クロム溶液（０，８５モル；４０ｍ１）で更に処理した。］時間後に、混 合物を酢酸エチル（５００ｍ、　ｔ　）で希釈した。有機相を分離史、水性相を 酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出した。纏めた有機溶液を食塩水（４Ｘ１００ｍ 、ｌ）で洗浄し、乾燥し、シリカゲル（〜１ｅｒｃｋ７７３４＋１００ｇ）上で クロマトグラフィを行い、酢酸エチル　シクロヘキサン（１：９から１４まで増 加）で溶出したところ、標題化合物（８６３ｍｇ）を得た。６　（ＣＤＣｌ２） ０．８０　（ｄ。

Ｊ＝７Ｈｚ、Ｃ旦３）、１．４４．１．５１，１．５８はそれぞれ（Ｓ、（ＣＦ （３）　３Ｃ）、２．１０　（Ｓ。

Ａｃｔ）、２．６８および３．４５はそれぞれ（ｄ。

Ｊ　＝　１９　Ｈｚ、ＣＨ２Ｃｏ）　、４．１３　（ｓ、４　０Ｈ）、４．６７ 　（ｓ、３−Ｈ）、４．９９　（ｂｒｓ。

−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４，６，７中間体５（１１０ｍｇ） を、２０℃で無水塩化水素をジオキサン（５Ｎ；０．３３ｍ１）に溶解したもの で処理した。溶液を水分の非存在下に１８時間保持した後、エーテル（２０ｍｌ ）で希釈し２．４０℃で真空下に”Ｃ蒸発乾固した。エーテル希釈および蒸発を ２回繰り返したところ、発泡体を得た。１′のスフエリソルブ０ＤＳ−２カラム 上で調製用ＨＰＬＣによって精製を行い、濃硫酸０．１５ｍ１／リットルを含む 水にアセトニトリルを溶解した４０％溶液で溶出したところ、標題化合物（５５ ｍｇ）を得た。δ（ＣＤ３０Ｄ）０．８５　（ｄ。

３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ、Ｃ旦３）、　２．１０　（Ｓ。

ｏｃｏｃ旦３）、　４．３７　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝７．５Ｈｚ。

ＣＨＯＣｏＣＨａ）、５．３５　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝７．５Ｈｚ、６Ｈ）、７．１ 〜７．３　（ｍ。５Ｈ，芳香族プロトン）；分析用高性能液体クロマトグラフィ 　（スフエリソルブ０ＤＳ−２カラム）で０．１５ｍ１／リツトルのたもので溶 出したところ、保持時間は３．７８分であった。

］１−（４−アセチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシ ル）−４−ヒドロキシ−７−オキソ−２，８−ジオキサビシクロ［３，２，１］ オクタン−３，４，５−トリカルボン酸 中間体６（１２５，ｍｇ）をジオキサン（６モル；２．５ｍ１）に無水塩化水素 を溶解したものに溶解し、混合物を２０℃で７．５時間放置した。次に、溶媒を 減圧下にて蒸発させ、残渣を逆相ＨＰＬＣ（１インチスフエリソルブ０ＤＳ−２ 、流速１５ｍ１／分、０．１５ｍ１濃硫酸／リツトルを含むアセトニトリル−水 のアセトニトリルを４０％から９５％まで増加させて溶出）によって精製した。

適当な画分をまとめ、アセトニトリルを減圧下にて蒸発させて除去し、水性溶液 を酢酸エチル（×３）で抽出し、食塩水（×２）で洗浄し、乾燥して蒸発乾固し たところ、標題化合物（４７ｍｇ）を得た。

δ　（ＣＤ３０Ｄ） ０．８４　（ｄ、Ｊ＝７Ｈｚ、ＣＨ３）、２．１０　（ｓ。

Ａｃｔ）、２．８５および３．６６はそれぞれ（ｄ、Ｊ＝１９Ｈｚ、Ｃ旦２Ｃｏ ）、４．９および５．００はそれぞれ（ｓ、Ｃ＝Ｃ旦２）、５．０５　（ｄ、Ｊ ＝５Ｈｚ。

Ｃ旦ＯＡ　ｃ）　、７．　１〜７．　３　（ｍ、　Ｃｓ旦５）；近似分子量５２ ０．５；−ＦＡＢマススペクトル分析法中間体４の対応する７β−ヒドロキシ異 性体との８：１混合物としてのもの（２０Ｑｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（２０ ｍ　ｌ）中に窒素雰囲気下にて溶解したものに、メチルクロロホルメート（２９ ｍｇ）および４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（３７ｍｇ）を加えた。混合 物を２０℃で２２時間撹拌した後、追加量のメチルクロロホルメート（７ｍｇ） および４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（８，６ｍｇ）を加え、３時間反応 させた。

混合物を飽和の水性塩化アンモニウム（３０ｍｌ）に投入し、有機物質をエーテ ル（３Ｘ５０ｍｌ）で抽出した後、エーテル溶液を水（３０ｍｌ）　、５％水性 重炭酸ナトリウム（３０ｍ　ｌ）および食塩水（３０ｍ　ｌ）で順次洗浄した。

乾燥した有機相を蒸発して油状生成物とし、これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリ カゲル６０．２３０〜４００メツシユ、１０ｇ）上でクロマトグラフィによって 精製した。カラムを揮発油と酢酸エチルとの混合物（４・１）で溶出し、生成す る物質をジオキサンに無水塩化水素を溶解したもの（６，９モル、２．５ｍ１） に溶解した後、窒素雰囲気下にて２０℃で３２時間放置した。溶媒を除去したと ころ、黄色ワックスが得られ、これをスフェリソルブ０ＤＳ−２カラム上で調製 用ＨＰＬＣによって分離し、濃硫酸０．１５ｍ１／リツトルを含む水中にアセト ニトリル６７％を溶解したもので溶出したところ、標題化合物（５０ｍｇ）を得 た。保持時間６．０２分（スフエリソルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１．５ ｍｌの濃Ｈ２ＳＯ４を含む水にアセトニトリルを６５％溶解したもの）；δ（Ｃ Ｄ３０Ｄ）２．１０（ｓ、３Ｈ，０ＣＯＣＨ２，３６（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ□３′ 〜１５および１０Ｈｚ、ＨＣＨＰｈ）、２．７１　（ｄｄ。

ＬＨ，Ｊ＝１５および５Ｈｚ、ＨＣＨＰｈ）、３．６４（ｓ　、　３　Ｈ，ＯＣ Ｏ２Ｃ旦３）、４．９８．５．００および５．０２　（３ｓ、それぞれＩＨ，＝ ＣＣ２０よびＬＨ，Ｊ＝１５および８Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ０）　。移動度の小さな 成分（１６ｍｇ）は、［ＩＳ−［１α（４Ｒ”。

５Ｓ＊）、３α、４β、５α、６α、７α　（２Ｅ。

４Ｒ＊、６Ｒ）］］　１．−　（４−アセチルオキシ−５−＊ メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４゜６．７−１リヒドロキシ ー２，８−ジオキサビシクロＣ３，２，１］オクタン−３，４，５−トリカルボ ン酸、６−メチルカーボネート、７−（４，６−ジメチル−２−オクテノエート ）；保持時間７．３２分（スフエリソルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ １の濃Ｈ２ＳＯ４を含む水にアセトニトリルを６５％溶解したもの）、δ　（Ｃ Ｄ　３０Ｄ）２．０８　（ｓ、３　Ｈ。

０ＣＯＣ８２，３６（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５および□３′ １０Ｈｚ、ＨＣＨＰｈ）、２．　６９　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１５および５Ｈｚ、 ＨＣ旦Ｐｈ）、３．６８　（ｓ、３Ｈ。

０ＣＯ２ε旦３）、４．９５．４．９７および４．９９（３本の１重線、それぞ れＩＨ９−〇、！ｉ２およびＣＨＣＯ２Ｈ）　、５．０６　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　＝ ５Ｈｚ。

ＣＨ＝ＣＨＣ０ＣＨ５）、５．７６　（ｄ、ＩＨ。

Ｊ＝１５Ｈｚ、ＣＨ＝Ｃ旦Ｃｏ）、　５．８２　（ｄ、　ＩＨ。

Ｊ＝５Ｈｚ、Ｃ旦−０ＣＯＣＨ＝ＣＨ）、６．５１　（ｄ。

ＩＨ，Ｊ＝６Ｈｚ、Ｃ旦０Ｃ０２ＣＨ３）、および６．８７　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ ＝１５および８Ｈｚ。

６α、７α（２Ｅ、４Ｒ＊、６Ｒ）］］　１−　（４−ア中間体４の、対応する ６α−ヒドロキシ−７α−（４゜６−シメチルー２−オクテノエ−１・）および ７β−ヒドロキシ異性体との９・１：１．０α合物としてのもの（３８０ｍｇ） をジクロロメタン（２５ｍｌ）中に窒素雰囲気下にて溶解したものに、塩化フェ ノキシアセチル（１２３ｍｇ）および４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（８ ８ｍ、　ｇ　）を加えた。混合物を２０’Ｃで３２時間反応させた後、水性塩化 アンモニウム溶液に投入した後、ジクロロメタンで抽出した。有機相を１モル塩 酸（５０ｍ　１．　）および重炭酸ナトリウムの飽和水性溶液（５０ｍｌ）で連 続的に洗浄した後、乾燥し、蒸発させて油状生成物を得て、これをシリカゲル（ Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０．２３０〜４００メツシユ、４０ｇ）上でクロマトグ ラフィによって精製した。カラムを石油エーテルと酢酸エチルとの混合物（４・ １）で溶出したところ、ゴム状生成物（３７０ｍｇ）を得た。無水塩化水素／ジ オキサン（６，９モル、４ｍ　ｌ）にこの物質（３６０ｍｇ）を溶解したものを 、窒素雰囲気下にて２０℃で４０時間放置した。溶媒を除去し、残渣をスフェリ ソルブ０ＤＳ−２カラム上で調製用ＨＰＬＣによって精製し、濃硫酸０．１５ｍ 、ｌ／リットルを含む水中にアセトニトリル６５％を溶解したもので溶出したと ころ、標題化合物（３０ｍｇ）を得た。保持時間１４．１分（スフエリソルブ０ ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ１の濃Ｈ２ＳＯ４を含む水に７５％アセトニ トリルを溶解したも））：δ　（ＣＤ　３０Ｄ）２．０８　（ｓ、３　Ｈ５ｏｃ ｏ旦旦３）、２．３６　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１４およＩＨ，Ｊ＝１６Ｈｚ、ＨＣ ＨＯＰｈ）、４．９６゜４．９８および５．０６　（３本の１重線、それぞれＬ Ｈ。

＝ＣＣ２０よびＣＨＣＯ２Ｈ）、５．０７　（ｄ、、ＩＨ。

Ｊ＝６Ｈｚ、Ｃ旦０ＣＯＣＨ３）、５．７５　（ｄ、ＬＨ。

Ｊ＝６Ｈｚ、Ｃ旦０ＣＯＣＨ＝ＣＨ）、５．８１　（ｄｄ。

ＩＨ，Ｊ＝１５ＨｚおよびＩＨｚ、ＣＨ＝ＣＨＣ０）。

６．８４（部分的に不明瞭なｄ、ＩＨ，Ｊ＝６Ｈｚ。

Ｃ旦０ＣＯＣＨ２０Ｐｈ）、および６．９１　（ｄｄ。

ＩＨ，Ｊ＝１５および８Ｈｚ、Ｃ旦＝　ＣＨＣＯ）。

セチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フエニートリカルボン酸、６− （４，６−シメチルー２−オクテノエート）、７−アセテート 中間体４の、対応する６α−ヒドロキシ−７α−（４゜６−シメチルー２−オク テノエート）および７β−ヒドロキシ異性体との９：１：１混合物としてのもの （１７０ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（６ｍｌ）中に窒素雰囲気下にて溶解した ものに、塩化アセチル（２４ｍｇ）および４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン （４０ｍｇ）を加えた。混合物を２０℃で１６時間撹拌した後、酢酸エチル（３ ０ｍｌ）で希釈し、有機相を１モル塩酸（５ｍ　ｌ）および５％重炭酸ナトリウ ム水性液（２Ｘ５ｍｌ）で連続的に洗浄した。乾燥した有機相を蒸発させたとこ ろ、油状生成物を得て、これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０．２３０ 〜４００メツシユ、１０ｇ）上でクロマトグラフィによって精製し、揮発油と酢 酸エチルとの混合物（４：　１）で溶出した。

この物質（１１０ｍｇ）を無水塩化水素／ジオキサン（６，８モル、２ｍ　ｌ） に溶解したものを、窒素雰囲気下にて２０℃で４０時間放置した。混合物を蒸発 させ、残渣をスフエリソルブ０ＤＳ−２カラム上で調製用ＨＰＬＣによって分離 し、濃硫酸０．１５ｍ１．／リットルを含む水中にアセトニトリル６５％を溶解 したもので溶出したところ、標題化合物（３０ｍｇ）を得た。保持時間１４．７ 分（スフニリソルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ１の濃Ｈ２ｓｏ４を含 む水に６５％アセトニトリルを溶解したもの）：δ（ｃＤ３ｏＤ）１．９２　（ ｓ、３Ｈ，０ＣＯＣ旦３）、２．１０　（ｓ。

３Ｈ，０ＣＯＣＨ３）、２．４０　（ｄｄ、ＩＨ。

４．９９および５．０１（３本の１重線、それぞれＬＨ。

＝ＣＨ２およびＣＨＣＯ２Ｈ）、５．０８　（ｄ、ＬＨ。

Ｊ　＝５Ｈｚ、ＣＨＯＣＯＣＨ３）、５．７２　（ｄ、ＩＨ。

Ｊ＝６Ｈｚ、７ａ−Ｃ旦０Ａｃ）、５．７９　（ｄｄ。

ＩＨ，Ｊ＝１５Ｈｚおよび８Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨＣ０）。

移動度の小さな成分（１５ｍｇ）は、［ＩＳ−［１α（４Ｒ，５３）、３α、４ β、５α、６α、７α（２Ｅ、４Ｒ，６Ｒ）コ］１−（４−アセチルオキシ−５ −メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４，６，７−ドリヒドロキ シー２．８−ジオキサビシクロ［３，２，１］オクタン−３，４，５−トリカル ボン酸、６−アセテート、７−（４，６−シメチルー２−オクテノエート）；保 持時間１６．６分（スフエリソルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ１の濃 Ｈ２Ｓ　Ｏ４を含む水にアセトニトリルを６５％溶解したもノ）；　δ　（ＣＤ ３００）１．９５　（Ｓ、３Ｈ。

ＯＣＯＣＨ３，２，１０（ｓ、３Ｈ，０ＣＯＣ旦３）。

２．４０　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５および９Ｈｚ。

５．０３　（３本の１重線、それぞれＩＨ，＝ＣＨ２お、Ｊｌ。

びＣ旦Ｃ０２Ｈ）　、５．０７　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５Ｈｚ。

Ｃ旦０ＣＯＣＨａ）　、５．７４　（ｄ、ＩＨ，Ｊ　＝６Ｈｚ。

Ｊ＝６Ｈｚ、Ｃ旦０ＣＯ２ＣＨ３）及び６．９０　（ｄｄ。

セチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４，６， ７−ドリヒドロキシー２，８−ジオキサビシクロ［３，２，１１オクタン−３， ４，５−トリカルボン酸、６−（４，６−シメチルー２−オクテノエート）、７ −フェニルカーボネート。

中間体４の、対応する６α−ヒドロキシ−７α−（４゜６−シメチルー２−オク テノエート）異性体との９：１混合物としてのもの（２００ｍｇ）を乾燥ジクロ ロメタン（１５ｍ　ｌ）中に窒素雰囲気下にて溶解したものに、フェニルクロロ ホルメート（４７ｍｇ）および４−Ｎ。

Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４０ｍｇ）を加えた。２０℃で１６時間後に、追 加量のフェニルクロロホルメート（２４ｍｇ）及び４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ ピリジン（２０ｍｇ）を加えた後、６００時間反応行った。混合物を中性物質に ついて処理し、これをシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０，２３０〜４００ メツシュ、２０ｇ）上でクロマトグラフィによって精製した。カラムを石油エー テルと酢酸エチルとの混合物（４：　１）で溶出し、生成する物質（１２０ｍｇ ）を無水塩化水素をジオキサンに溶解したもの（６，８モル、４ｍ１）に溶解し 、混合物を窒素雰囲気下にて２０°で３６時間放置した。混合物を濃縮した後、 酢酸エチルで抽出し、有機相を食塩水で洗浄した。乾燥した酢酸エチル溶液を蒸 発させて残渣を得て、これをスフエリソルダ０ＤＳ−２カラム上で調製用ＨＰＬ Ｃによって精製し、濃硫酸０．１５ｍ１／リツトルを含む水中にアセトニトリル ８０％を溶解したもので溶出したところ、標題化合物（３０ｍｇ）を得て、凍結 乾燥した固形物として単離した（６０ｍｇ）。保持時間６，４５分（スフエリソ ルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ１の濃Ｈ２Ｓ　Ｏ４を含む水に９０％ アセトニトリルを溶解したもの）；δ（ＣＤａＯＤ）２．１０　（ｓ、３Ｈ，０ ＣＯＣ且３）。

２．３６　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１５および９Ｈｚ。

ＨＣＨＰｈ）、２．７２　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５および５．０８　（３本の１ 重線、それぞれＬＨ，＝ＣＣ２０よびＣＨＣＯ２Ｈ）　、５．　１２　（ｄ、Ｌ 　Ｈ，Ｊ　＝５　Ｈｚ。

ＣＨＯＣＯＣＨ３）、５．７２　（ｄ、Ｌ　Ｈ，Ｊ　＝６Ｈｚ。

ＣＨＯＣＯ２Ｐｈ）、５．８６　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１５ＨｚおよびＩＨｚ、Ｃ Ｈ＝ＣＨＣ０）、６．６７　（ｄ。

ＬＨ，Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨＯＣＯＣＨ＝ＣＨ）、６．　８９（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１ ５および８Ｈｚ、Ｃ旦＝ＣＨＣ０）中間体４の、対応する６α−ヒドロキシ−７ α−（４゜６−ジメチル−２〜オクテノエート）異性体との９＝１混合物として のもの（２００ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍ　ｌ）中に窒素雰囲気下に て溶解したものに、塩化ヘキサノイル（４７ｍｇ）および４−Ｎ、Ｎ−ジメチル アミノピリジン（４３ｍｇ）を加えた。２０℃で１４時間後に、追加量の塩化ヘ キサノイル（１４ｍｇ）及び４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１３ｍｇ） を加え、２時間反応を行った。次いで、混合物を２モル塩酸／ジクロロメタンに 投入し、有機相を飽和の水性重炭酸塩溶液で洗浄し、乾燥して、蒸発させた。残 渣をシリカゲル（Ｍｅｒｃｋシリカゲル６０．２３０〜４００メツシユ、１０ｇ ）上でクロマトグラフィによって精製し、揮発油と酢酸エチルとの３：１混合物 で溶出し、この物質（１７０ｍｇ）を無水の塩化水素をジオキサンに溶解したも の（６，８モル、２．５ｍ１）に溶解し、混合物を窒素雰囲気下にて２０’で４ ０時間放置した。次いで、混合物を濃縮し、この濃縮物をスフエリソルダ０ＤＳ −２カラム上で調製用ＨＰＬＣによって精製し、濃硫酸０．１５ｍ１／リツトル を含む水中にアセトニトリル９０％を溶解したもので溶出したところ、標題化合 物（３０ｍｇ）を得て、凍結乾燥した固形物として単離した（５０ｍｇ）。保持 時間８．４６分（スフエリソルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ１の濃Ｈ ２Ｓ　Ｏ４を含む水にアセトニトリル８５％を溶解したもの）；δ　（ＣＤ３０ Ｄ）２．１０　（ｓ、３Ｈ。

ｏｃｏｃ旦３）、２．３９　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５および９Ｈｚ、ＨＣＨＰｈ ）、２．７１　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５および５Ｈｚ、ＨＣＨＰｈ）、４．９８ ．５．００および５．０５　（３本の１重線、それぞれＬＨ。

＝ＣＨおよびＣＨＣＯ２Ｈ）、５．０７　（ｄ、ＩＨ。

−２＝ Ｊ　＝５Ｈｚ、ＣＨＯＣＯＣＨ３）、５．７４　（ｄ、ＬＨ。

Ｊ＝６Ｈｚ、ＣＨＯＣＯＣＲ）、５．　７７　（ｄｄ。

１Ｈ，Ｊ＝１５およびＩＨｚ、ＣＨ＝Ｃ旦ＣＯ）。

６、　５７　（ｄ、ＩＨ，Ｊ＝６Ｈｚ。

セチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−）ユニ中間体４の、対応する６ α−ヒドロキシ−７α−（４゜６−シメチルー２−オクテノエート）異性体との ９；１混合物としてのもの（２００ｍｇ）をジクロロメタン（１０ｍ　ｌ）中に 窒素雰囲気下にて溶解したものに、ｎ−へキシルクロロホルメート（５７，５ｍ ｇ）および４−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（４３ｍｇ）を加えた。２０℃ で１４時間後に、追加量のｎ−へキシルクロロホルメート（１９ｍｇ）及び４− Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン（１４ｍｇ）を加え、２時間反応を行った。

次いで、混合物に２モル塩酸を加えて反応を停止し、ジクロロメタンで抽出した 。有機相を飽和の水性重炭酸ナトリウム溶液で洗浄し、乾燥して、濃縮し、濃縮 物をシリカゲル（Ｍｅ　ｒ　ｃｋシ’Ｊヵゲル６ｏ１２３ｏ〜４ｏ。

メツシュ、ＬＯｇ）上でクロマトグラフィによって精製し、石油エーテルと酢酸 エチルとの３二１混合物で溶出した。この物質（１８０ｍｇ）を無水の塩化水素 をジオキサンに溶解したもの（６，８モル、３ｍ１）に溶解し、混合物を窒素雰 囲気下にて２０°で３６時間放置した。

次いで、溶液を濃縮し、この濃縮物をスフェリソルブ０ＤＳ−２カラム上で調製 用ＨＰＬＣによって精製し、濃硫酸０−　１５ｍ１／リツトルを含む水中にアセ トニトリル８５％を溶解したもので溶出したところ、標題化合物（３０ｍｇ）を 得て、凍結乾燥した固形物として単離しｔ：　（５０ｍｇ）。保持時間１０．８ 分（スフエリソルブ０ＤＳ−２分析用カラム、０．１５ｍ１の濃Ｈ２ＳＯ４を含 む水にアセトニトリル８５％を溶解したもの）；δ　（ＣＤ　ａ　０Ｄ）２．０ ９　（ｓ、３　Ｈ１ｏｃｏｃ且３）、２．３６　（ｄｄ、ＬＨ，Ｊ＝１５およＩ Ｈ，０ＨＣＨＣＨ）、４．　０３　（ｍ、ＬＨ。

０８ＣＨＣＨ）、［５，００（ｓ、２Ｈ）および５，０２（ｓ、ＩＨ）＝ＣＨ２ およびＣ旦Ｃｏ２Ｈ］。

５．０９　（ｄ、１．Ｈ，Ｊ　＝５Ｈｚ、ＣＨＯＣＯＣＨ３）　。

５、　６１　（ｄ、ＬＨ，Ｊ＝６Ｈｚ。

ＣＨＯＣＯＣＨ）、５．　７５　（ｄｄ、ＬＨ。

び６．８５　（ｄｄ、ＩＨ，Ｊ＝１５および８Ｈｚ。

オートミール寒天上で２５℃で２〜３週間生育させたところ、コロニーは表面お よび裏面の両方ともくすんだ灰色乃至鼠灰色となった（Ｒａｙｎｅｒ’　ｓＭｙ ｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｏ１ｏｕｒ　Ｃｈａｒｔ。

１９７０年、連邦農業局編）。

オートミール寒天上で２５℃で生育させた菌株の菌学的観察は、光学顕微鏡下で 行った。真菌には有性生殖世代はないが、分生予設を形成するので、Ｃｏｅｌｏ ｍｙｃｅｔｅｓ類に分類した。この真菌は緩い菌糸を有する嘴状分生予設と無限 および有限分生子を産生じた。分生子の大きさは約５〜９Ｘ１．５〜３μｍ（通 常は、７〜９Ｘ１．５〜２．５μｍ）であった。厚膜胞子または分生予設初期の ものに類似している多数の多隔／多細胞の球形構造も見られた。明確な石垣状厚 膜胞子は見られなかった。

この単離体はＰｈｏｍａ属の一種として同定され、この同定はＣＡＢ国際国際碩 学研究所って確認された。

（１）　本発明の化合物が酵素スクアレンシンターゼを阻害する能力を、Ｓ、Ａ 、Ｂ１１１ｅｒらがＪ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３１（１０ ）、１８６９〜１８７１　（１９８８）に記載した分析条件と同じ条件下で［２ −１４０］ファルネシルピ０ホスフエートを基質として用いて証明した。［Ｃｌ スクアレンを薄層クロマトグラフィプレート上で未反応基質から分離し、液体シ ンチレーション計数法によって測定した。スクアレンシンターゼの阻害は、ラッ ト肝臓ホモゲ不一トを、各種の濃度の試験化合物と共に［２−１４Ｃ］フアルネ シルピロホスフエートの存在下でインキュベーションすることによって定量した 。３０分の分析でＥ　Ｃｌスクアレンの生成を５０％抑制する化合物の濃度をＩ Ｃ値とした。

この試験では、実施例１．２．４．５および６の標題化合物のＩＣ値は１００　 ｎＭ未満であった。

（２）　本発明の化合物の抗真菌活性のイン・ビトロでの評価は、適当な培地中 で特定の微生物が成長しない試験化合物の最小濃度（ＭＩＣ）を測定することに よって行った。実際には、一連の寒天プレートであって、それぞれに試験化合物 を特定の濃度で配合したものに、臨床的に問題とされている病原菌、例えばＣａ ｎｄｊｄａａｌｂｉｃａｎｓの標準培養物を接種した後、それぞれのプレートを ３７℃で病原菌によって２４から４８時間まで時間を変えてインキュベーション した。次いで、プレートを、真菌の生育の有無について検討を行い、妥当なＭＩ Ｃを記録した。

この試験では、実施例４．６．７および８の標題化合物の臨床上問題とされてい る各種の病原菌に対するＭＩＣは２〜１６μｇ　／　ｍ　ｌの範囲であった。

製薬例 下記の実施例では、「活性成分」という用語は本発明の化合物、例えば前記の例 １〜８に記載した化合物を表ａ）　活性成分　５．０ｍｇ ラクトース　９５．０ｍｇ 微品質セルロース　９０．０ｍｇ 架橋ポリビニルピロリドン　８．０ｍｇステアリン酸マグネシウム　２．Ｏｍｇ 圧縮重量　２００．０ｍｇ 活性活性色微品質セルロース、ラクトースおよび架橋ポリビニルピロリドンを、 ５００ミクロンの篩を通して整粒し、適当なミキサーで配合する。ステアリン酸 マグネシウムを２５０ミクロンの篩を通して整粒し、活性配合物と混合した。こ の配合物を適当なパンチを用いて圧縮して錠剤とする。

ｂ）　活性成分　５．０ｍｇ ラクトース　１６５．０ｍｇ 予備糊化澱粉　９５．０ｍｇ 架橋ポリビニルピロリドン　８．０ｍｇステアリン酸マグネシウム　２．０ｍｇ 圧縮重量　２００．０ｍｇ 活性活性色ラクトースおよび予備糊化澱粉を混合して、水で造粒する。湿潤素材 を乾燥して、微粉砕する。ステアリン酸マグネシウムと架橋ポリビニルピロリド ンを、２５０ミクロンの篩を通して整粒し、顆粒と混合する。

適当なミキサーで配合する。ステアリン酸マグネシウムを２５０ミクロンの篩を 通して整粒し、活性配合物と混合する。生成する配合物を適当なパンチを用いて 圧縮する。

実施例２　カプセル ａ）　活性成分　５．０ｍｇ 予備糊化澱粉　１９３．０ｍｇ ステアリン酸マグネシウム　２．０ｍｇ充填重量　２００．０ｍｇ 活性活性色予備糊化澱粉を５００ミクロンメツシュの篩を通して整粒して混合し 、（２５０ミクロンの篩を通して整粒した）ステアリン酸マグネシウムで潤滑化 する。

粉の配合物を適当な大きさの膠質ゼラチンカプセルに充填する。

ｂ）　活性成分　５．０ｍｇ ラクトース　１７７．０ｍｇ ポリビニルピロリドン　８．０ｍｇ 架橋ポリビニルピロリドン　８．０ｍｇステアリン酸マグネシウム　２．０ｍｇ 充填重量　２００．０ｍｇ 活性活性色ラクトースを混合し、ポリビニルピロリドンの溶液で造粒する。粉の 湿潤素材を乾燥して微粉砕する。ステアリン酸マグネシウムと架橋ポリビニルピ ロリドンを２５０ミクロン篩を通して整粒し、顆粒と混合する。生成する配合物 を適当な大きさの膠質ゼラチンカプセルに充填する。

実施例３　シロップ ａ）　活性成分　５．０ｍｇ ヒドロキシプロピルメチルセルロース ４５．０ｍｇ ヒドロキシ安息香酸プロピル　１．５ｍｇヒドロキシ安息香酸ブチル　０．７５ ｍｇサッカリンナトリウム　５，０ｍｇ ソルビトール溶液　１．０ｍｇ 適当な緩衝液　適量 適当なフレーバ剤　適量 精製水を加えて総量を　１０．０ｍｌとする。

ヒドロキシプロピルメチルセルロースをヒドロキシ安息香酸エステルと共に熱精 製水の一部に分散し、溶液を室温まで冷却させる。サッカリンナトリウム、フレ ーバ剤およびソルビトール溶液をバルク溶液に加える。活性成分を残りの水の一 部に溶解し、バルク溶液に加える。

適当な緩衝液を加えてｐＨが最大安定性の領域になるように調節することができ る。溶液を所定容積まで増量し、濾過して適当な容器に充填する。

実施例４　鼻内溶液 ａ）　防腐剤添加溶液 ％ｗ　／　ｗ 活性成分　０．　１ デキストロース（無水物）５．０ 塩化ベンザルコニウム　０．０２ 適当な緩衝液　適量 精製水を加えて総量を　１００とする。

活性成分とデキストロースをバルク溶液の一部に溶解する。適当な緩衝液を加え て、ｐＨが最大安定性の領域にあるように調節することができる。溶液を所定容 積まで増量し、濾過して適当な容器に充填する。

或いは、溶液は、無菌の単位投与形態にして、防腐剤を処方から省略することが できる。

ｂ）　防腐剤無添加の無菌溶液 ％ｗ　／　ｗ 活性成分　０．１ デキストロース（無水物）５．０ 適当な緩衝液　適量 精製水を加えて総量を　１００とする。

国際調査報告 フロントページの続き （８１）指定回　ＥＰ（ＡＴ、ＢＥ、ＣＨ，ＤＥ。

ＤＫ、ＥＳ、ＦＲ，ＧＢ、ＧＲ，ＩＴ、ＬＵ、ＭＣ，ＮＬ、ＳＥ）、０Ａ（ＢＦ 、ＢＪ、ＣＦ、ＣＧ、ＣＩ、ＣＭ、ＧＡ、ＧＮ、ＭＬ、ＭＲ，ＳＮ、ＴＤ、ＴＧ ）、ＡＴ、ＡＵ、ＢＢ、ＢＧ、ＢＲ，ＣＡ、ＣＨ，Ｃ３，ＤＥ。

ＤＫ、　ＥＳ、　ＦＩ、　ＧＢ、　ＨＵ、ＪＰ、　ＫＰ、　ＫＲ，ＬＫ、　ＬＵ 、　ＭＧ、　ＭＮ、　ＭＷ、　ＮＬ、　Ｎｏ、　ＰＬ、　Ｒ○、ＲＵ、ＳＤ、Ｓ Ｅ、ＵＳ （７２）発明者　レスター、マイケル　ジョージイギリス国ミドルセックス、グ リーンフォード、バークレー、アベニュ（番地なし）グラクツ、グループ、リサ ーチ、リミテッド内 （７２）発明者　プロコピウ、パナイオテイス　アレクサンドロウ イギリス国ミドルセックス、グリーンフォード、バークレー、アベニュ（番地な し）グラクツ、グループ、リサーチ、リミテッド内 （７２）発明者　ワトソン、ナイジエル　ステイーブンイギリス国ミドルセック ス、グリーンフォード、バークレー、アベニュ（番地なし）グラクツ、グループ 、リサーチ、リミテッド内 （７２）発明者　ピオンディ、ステファノイタリー国ベロナ、ビア、アレッサン ドロ、フレミング、２、グラクツ、ソチェタ、ベル、アツイオー二内 （７２）発明者　ラムゼイ、マイケル　ビンセント　ジョンイギリス国ミドルセ ックス、グリーンフォード、バークレー、アベニュ（番地なし）グラクツ、グル ープ、リサーチ、リミテッド内 （７２）発明者　リバーモアー、ディピッド　ジョージ　ヒユーパート イギリス国ミドルセックス、グリーンフォード、バークレー、アベニュ（番地な し）グラクツ、グループ、リサーチ、リミテッド内 （７２）発明者　ロス、バリー　クライブイギリス国ミドルセックス、グリーン フォード、バークレー、アベニュ（番地なし）グラクツ、グループ、リサーチ、 リミテッド内

Claims (21)

【特許請求の範囲】
1. １．式（１ａ）および（１ｂ）の化合物およびその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（１ａ）▲数式、化学式、表等があります▼ （１ｂ）［式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシル基または▲数式、化学式、表等 があります▼、 ▲数式、化学式、表等があります▼ または−ＯＣＯ−Ｘ−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３（但しＸは、▲数式、 化学式、表等があります▼、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ３）−、▲数式、 化学式、表等があります▼、−ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−または−ＣＨ２ＣＨ ２ＣＨ（ＣＨ３）−）から選択される基であり、Ｒ２はヒドロキシル基、基−Ｏ ＣＯＲ７または基−ＯＣＯ２Ｒ７（但し、Ｒ７はＣ１−８アルキル、アリール、 アリールＣ１〜４アルキルおよびＣ３〜８シクロアルキル）であり、 Ｒ３は ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ８は水素原子またはアセチル基である）、−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨＣＨ （ＣＨ２Ｒ９）ＣＨ２Ｐｈ（但し、Ｒ９は水素またはヒドロキシル基である）、 ▲数式、化学式、表等があります▼、 −Ｃ（＝ＣＨ２）ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ（ＣＨ２ＯＨ）ＣＨ２Ｐｈ、−Ｃ（＝ＣＨ２ ）ＣＨ（ＮＨＣＯＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｐｈ、▲数式、化学式、表等が あります▼ および ▲数式、化学式、表等があります▼ から選択される基であり、 Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、それぞれ独立に水素原子またはメチル基を表わす］。
2. ２．請求の範囲第１項に記載の式（Ｉａ）を有する化合物。
3. ３．Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素原子である、請求の範囲第１項または第２項に 記載の化合物。
4. ４．Ｒ１が基 ▲数式、化学式、表等があります▼ である、請求の範囲第１〜３項のいずれか１項に記載の化合物。
5. ５．Ｒ３が基 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ８は水素原子またはアセチル基である）を表わす、請求の範囲第１〜 ４項のいずれか１項に記載の化合物。
6. ６．治療に用いる、請求の範囲第１〜５項のいずれか１項に記載の化合物。
7. ７．ヒトを含む動物の血漿コレステロール濃度の低下が有効である、症状の治療 に用いられる、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の化合物。
8. ８．ヒトまたはヒト以外の動物の患者の真菌感染症の治療に用いられる、請求の 範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の化合物。
9. ９．高コレステロール血症および／または高リポタンパク血症に伴う疾患を治療 しまたは真菌性疾患を治療する、ヒトまたはヒト以外の動物体の治療法であって 、前記の動物体にスクアレンシンターゼを阻害する請求の範囲第１〜６項のいず れか１項に記載の化合物の有効量を投与することから成る、方法。
10. １０．請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の化合物を１種類以上の担体 および／または賦形剤と共に含んで成る、薬学組成物。
11. １１．ヒトを包含する動物の血漿コレステロールの濃度を低下させることが有利 である症状の治療に用いる請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の化合物 の活性量を含んで成る、薬学組成物。
12. １２．ヒトまたはヒト以外の動物患者の真菌感染症の治療に用いられる請求の範 囲第１〜６項のいずれか１項に記載の化合物の活性量を含んで成る、薬学組成物 。
13. １３．経口、口腔、局所、非経口、移植、直腸、眼または泌尿器投与に好適な形 態の、または吸入または通気による投与に好適な形態の、請求の範囲第１０〜１ ２項のいずれか１項に記載の薬学組成物。
14. １４．単位投与形態の、請求の範囲第１０〜１３項のいずれか１項に記載の薬学 組成物。
15. １５．ヒトまたはヒト以外の動物患者の高コレステロール血症および／または高 リボタンパク血症の治療用の医薬の製造における、請求の範囲第１〜６項のいず れか１項に記載の化合物の使用。
16. １６．ヒトまたはヒト以外の動物患者の真菌感染症の治療用の医薬の製造におけ る、請求の範囲第１〜６項のいずれか１項に記載の化合物の使用。
17. １７．請求の範囲第１項に記載の化合物の製造法であって、 （Ａ）（Ｒ２が基−ＯＣＯＲ７または−ＯＣＯ２Ｒ７である式（Ｉａ）の化合物 の調製では）式（ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩ）（式中、Ｒ １は請求の範囲第１項に定義した通りであり、Ｒ３ａは請求の範囲第１項でＲ３ について定義した通りであり、またはそれらの保護誘導体であり、Ｒ４ａ、Ｒ５ ａおよびＲ６ａは保護基である）を有する化合物をエステルまたはカーボネート 形成の条件下で反応させた後、存在する保護基を除き、 （Ｂ）（Ｒ２がヒドロキシル基である式（Ｉａ）の化合物の調製では）式（ＩＩ Ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼（ＩＩＩ）（式中、Ｒ１〜Ｒ６ａは前記に定 義した通りである）を有する化合物還元した後、存在する保護基を除き、または （Ｃ）式（Ｉ）の化合物またはその保護誘導体を式（Ｉ）の別種の化合物または その保護誘導体に転換し、必要ならば、存在する任意の保護基を除く、ことを特 徴とする方法。
18. １８．式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物。
19. １９．［１Ｓ−［１α（４Ｒ＊，５Ｓ＊），３α，４β，５α，６α，７α（２ Ｅ，４Ｒ＊，６Ｒ＊）］］１−（４−アセチルオキシ−５−メチル−３−メチレ ン−６−フェニルヘキシル）−４，６，７−トリヒドロキシ−２，８−ジオキサ ビシクロ［３，２，１〕オクタン−３，４，５−トリカルボン酸、６−メチルカ ーボネート、７−（４，６−ジメチル−２−オクテノエート）；［１Ｓ−［１α （４Ｒ＊，５Ｓ＊），３α，４β，５α，６α，７α（２Ｅ，４Ｒ＊，６Ｒ＊） ］］１−（４−アセチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキ シル）−４，６，７−トリヒドロキシ−２，８−ジオキサビシクロ［３，２，１ ］オクタン−３，４，５−トリカルボン酸、６−フェノキシアセテート、７−（ ４，６−ジメチル−２−オクテノエート）；及び［１Ｓ−［１α（４Ｒ＊，５Ｓ ＊），３α，４β，５α，６α，７α（２Ｅ，４Ｒ＊，６Ｒ＊）］］１−（４− アセチルオキシ−５−メチル−３−メチレン−６−フェニルヘキシル）−４，６ ，７−トリヒドロキシ−２，８−ジオキサビシクロ［３，２，１］オクタン−３ ，４，５−トリカルボン酸、６−アセテート、７−（４，６−ジメチル−２−オ クテノエート）；及びそれらの塩。
20. ２０．実質的に本明細書に記載されている、請求の範囲第１〜６項のいずれか１ 項に記載の化合物。
21. ２１．実質的に本明細書記載されている、請求の範囲第１０〜１４項のいずれか １項に記載の組成物。