JPH06505483A - サイトカイン阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、サイトカイン類の生産阻害を必要とするヒトを含む哺乳類におけるサ イトカイン類の生産を阻害（特に、インターロイキン−１の生産を阻害および腫 瘍壊死因子の生産を阻害）する方法であって、このような哺乳類に、有効なサイ トカイン生産阻害量の置換アザスピランを投与することからなる方法に関する。

バドガー（Ｂａｄｇｅｒ）らの米国特許第４．９６３．５５７号（１９９０年１ ０月１６日付で発行）は、式 ［式中、ｎは３〜７：ｍは１または２；Ｒ１およびＲ２は同一または相異なり、 水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状アルキルから選択される（ただし、Ｒ３お よびＲ２に含まれる炭素原子を合わせた合計数は５〜１０である）か：あるいは 、Ｒ１およびＲ２は一緒になって炭素原子数３〜７の環状アルキル基を形成し、 Ｒ３およびＲ４は同一または相異なり、水素または炭素原子数１〜３の直鎖アル キルから選択されるか、あるいは、Ｒ３およびＲ４は窒素原子と一緒になって原 子数５〜８のへテロ環式基を形成する］で示される化合物；あるいは、その医薬 上許容される塩または水和物また溶媒和物を開示している。また、バドガーらは 、このような化合物が、ラットでのアジュバント誘発性関節炎の試験におけるそ れらの活性と、サプレッサー細胞アッセイにおけるそれらの活性とに基づいて、 サプレッサー細胞様活性の誘発によって免疫抑制を誘発するのに有用であること を開示している。アジュバント性関節炎の試験は、プロスタノイド合成の阻害剤 である化合物を検出するのに有用であるが、サイトカイン生産の阻害剤である化 合物、特にインターロイキン−１（ＩＬ−１）および／または腫瘍壊死因子（Ｔ ＮＦ）の阻害剤である化合物を開示または示唆するには役立たない。サプレッサ 細胞アッセイは、免疫抑制化合物を検出するのに有用であるが、サイトカイン生 産の阻害剤である化合物、特にＩＬ−１および／またはＴＮＦ生産の阻害剤であ る化合物を開示または示唆するには役立たない。

サイトカイン類は、単球やマクロファージなどの様々な細胞によって生産される 生物学的物質である。サイトカイン類は、多種多様の細胞および組織に影響を与 えるが、多種多様の疾患状態および症状における重要かつ重大な炎症伝達物質で ある。これらサイトカイン類の阻害は、これら疾患状態の多くを調節、低減およ び緩和する利点を有する。

発明の概要 本発明は、サイトカイン類の生産阻害を必要とするヒトを含む哺乳類におけるサ イトカイン類の生産を阻害する方法であって、このような哺乳類に、有効なサイ トカイン生産阻害量の式： ［式中、ｎは３〜７； ｍは１または２； Ｒ，およびＲ３は同一または相異なり、水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状ア ルキルから選択される（ただし、Ｒ１およびＲ２に含まれる炭素原子を合わせた 合計数は５〜１０である）か：あるいは、Ｒ１およびＲ２は一緒になって炭素原 子数３〜７の環状アルキル基を形成し。

Ｒ３およびＲ４は同一または相異なり、水素または炭素原子数１〜３の直鎖アル キルから選択されるか、あるいは、Ｒ３およびＲ４は窒素原子と一緒になって原 子数５〜８のへテロ環式基を形成する］で示される化合物：あるいは、その医薬 上許容される塩または水和物または溶媒和物を投与することからなる方法に関す る。

サイトカイン生産を阻害する化合物の発見は、過剰または非制御的なサイトカイ ン生産が関係する疾患の治療方法を提供する。

発明の詳細な説明 式（Ｉ）で示されるすべての化合物や、その医薬上許容される塩、水和物および 溶媒和物の調製は、バドガーらに対して１９９０年１０月１６日付で発行された 米国特許第４．９６３．５５７号（その全開示内容は、出典を示すことによって 本明細書の一部とする）に開示されている。

本明細書で使用される「サイトカイン」という用語は、他の細胞の機能に影響を 与え、免疫応答または炎症応答における細胞間の相互作用を媒介する分子である 如何なる分泌ポリペプチドをも意味する。サイトカインには、どの細胞がそれら を生産するかにかかわらず、モノカイン類およびリンホカイン類が含まれるが、 それらに限定されない。例えば、モノカインは、一般的には、マクロファージお よび／または単球などの単核細胞によって生産および分泌されると言われている が、ナチュラルキラー細胞、線維芽細胞、好塩基球、好中球、内皮細胞、脳星状 細胞、骨髄基質細胞、表皮ケラチノサイト、およびβ−リンパ球などの他の多く の細胞がモノカイン類を生産する。リンホカイン類は、一般的には、リンパ球細 胞によって生産されると言われている。サイトカイン類の例には、インターロイ キン−１（ＩＬ−１）、腫瘍壊死因子−アルファ（ＴＮＦα）および腫瘍壊死因 子ベータ（ＴＮＦβ）が含まれるが、これらには限定されない。

「サイトカイン生産阻害量」という用語は、過剰の非制御的なサイトカイン生産 によって悪化または惹起される如何なる疾患状態を予防的または治療的に処置す るために与えた場合に、サイトカインのインビボ・レベルを正常または正常以下 のレベルに低減する、式（Ｉ）で示される化合物の有効量を意味する。

「サイトカイン類の生産を阻害する」という用語は、ａ）すべての細胞（単球ま たはマクロファージを含むが、それらには限定されない）によるサイトカイン類 のインビボ放出を阻害することによって、ヒトを含む哺乳類における過剰なイン ビボ・サイトカインレベルを正常レベルまたは正常レベル以下に低減すること； ｂ）ヒトを含む哺乳類における過剰なインビボ・サイトカインレベルを、転写ま たは翻訳のレベルで、正常レベルまたは正常レベル以下に下方制御すること；ま たは Ｃ）翻訳後の出来事として、サイトカイン類の直接合成を阻害することによって 、下方制御することを意味する。

「１Ｌ−１の生産を阻害する」という用語は、ａ）すべての細胞（単球またはマ クロファージを含むが、それらには限定されない）によるＩＬ−１のインビボ放 出を阻害することによって、ヒトを含む哺乳類における過剰なインビボ・ＩＬ− ルベルの正常レベルまたは正常レベル以下に低減すること。

ｂ）ヒトを含む哺乳類における過剰なインビボ・ＩＬ〜ルベルを、転写または翻 訳のレベルで、正常レベルまたは正常レベル以下に下方制御すること：または Ｃ）翻訳後の出来事として、ＩＬ−１の直接合成を阻害することによって、下方 制御することを意味する。

ｒＴＮＦの生産を阻害する」という用語は、ａ）すべての細胞（単球またはマク ロファージを含むが、それらには限定されない）によるＴＮＦのインビボ放出を 阻害することによって、ヒトを含む哺乳類における過剰なインビボ・ＴＮＦレベ ルを正常レベルまたは正常レベル以下に低減すること。

ｂ）ヒトを含む哺乳類における過剰なインビボ・ＴＮＦレベルを、転写または翻 訳のレベルで、正常レベルまたは正常レベル以下に下方制御すること：またはＣ ）翻訳後の出来事として、ＴＮＦの直接合成を阻害することによって、下方制御 することを意味する。

ＴＮＦ−β（リンホトキシンとしても知られる）は、ＴＮＦ−α（カシエフチン （ｃａｃｈｅｃｔｉｎ）としても知られる）と密接な構造相同性を有し、各々が 類似した生物学的応答を誘発し、同一の細胞レセプターに結合するので、ＴＮＦ −αおよびＴＮＦ−βは両方とも、本発明の化合物によって阻害され、それゆえ 本明細書では、特に断らない限り、集合的にｒＴＮＦＪと呼ぶ。

研究によると、ＴＮＦは血清糖タンパクであって、その活性は高分子量成分に関 連することが示されている。マウスやウサギのＴＮＦは、ヒトＴＮＦ　（その配 列は米国特許法第４．８７９．２２６号（１９８９年１１年子１月で発行）に教 示されている）と同様、単離されている。ＴＮＦは、ホルモン前駆体として合成 され、続いて数箇所で切断され、成熟ホルモンとなる。活性なポリペプチド自体 は、初期の頃に抗腫瘍性活性が報告されているので、腫瘍の処置について評価さ れているが、この投与は多（の重篤な毒性を示していない。さらに、ＴＮＦの過 剰生産は内毒素性７敗血症性ショックの病因に関係している。例えば、カースウ ェル（Ｃａｒｓｗｅｌｌ：１ら、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカ デミ−・オブ・サイエンシズ・イン・、：Ｌ−・１ス−１イ（Ｐｒｏｃ、　Ｎａ ｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ）、Ｒ巻、３６６６−３６７０頁（１９７ ５年）を参照。内毒素は、グラム陰性菌の細胞壁のリポ多糖類成分を含み、ＴＮ Ｆなどのサイトカイン類および他の生物学的活性分子の合成および分泌を誘発す るマクロファージ活性化物質である。敗血症では、ＴＮＦ生産は、低血圧、血管 内皮透過性、および臓器障害、すなわち内毒素性ショックの結果のい（つかをも たらす。成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）は、しばしば敗血症および多発性臓器 不全と関連するが、このことはＡＲＤＳの病因におけるＴＮＦの役割を示唆して いる。ＴＮＦは、長期の寄生およびウィルス感染などの慢性分解代謝疾患状態お よび悪性疾患に見られる体重減少（悪液質）の原因因子でもある。この体重減少 は、回復には不利であって、致命的な場合さえある。

また、ＴＮＦは、炎症応答における初期産物としての役割を果たしているようで ある。例えば、オールド（Ｏｌｄ）、ネイチ＋　−（Ｎａｔｕｒｅ）、３３０巻 、６０２−０３頁（１９８７年）を参照。さらに、サイトカイン類の中でも、Ｔ ＮＦ生産はＩＬ−１および他のサイトカイン類の機能に先立ち、かつ、これら機 能を増大させるが、これら分子間の関係が如何にして炎症関連疾患状態に寄与す るかに関する明白なデータは存在しないようである。ＴＮＦは、マクロファージ を活性化させ、インビトロでのそれらの細胞障害の可能性を増大させる。ＴＮＦ は、単球に対して走化性であることが示されており、このことは、損傷の部位に おけるＴＮＦの生産が、追加のマクロファージを補充し、すでに存在するそれら マクロファージを活性化するように機能し得ることを示唆している。

ＴＮＦが媒介または悪化に関係する様々な哺乳類の症状には、リウマチ様関節炎 、リウマチ様を椎炎、骨関節炎、痛風性関節炎および他の関節炎症状；敗血症、 敗血症性ショック、内毒素性ショック、グラム陰性敗血症、毒素性ショック症候 群、成人呼吸窮迫症候群、マラリア、肺炎痙性疾患、骨吸収性疾患、再潅流障害 、移植片対宿主反応、インフルエンザなどの感染による発熱および筋肉痛、感染 や悪性疾患に伴う悪液質、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に伴う悪液質、Ａ ＩＤＳ、ケロイド形成、搬痕組織形成、クローン病、潰瘍性大腸炎、またはバイ レノス（ｐｙｒｅｓｉｓ）がある。

ヒト後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、リンパ球や、おそらくマクロファー ジがヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）に感染することから生じる。少なくとも ３つのＨＩＶ型またはＨＩＶ株が同定されている。すなわち、ＨＩＶ−１、ＨＩ Ｖ−２およびＨＩ　Ｖ−３である。ＨＩＶ感染の結果として、Ｔ−細胞媒介免疫 は損なわれ、感染した個体は重篤な日和見感染および／または異常な新生物を表 す。

すでに感染した個体において疾患がさらに進行することを阻害するのに有用な薬 剤が絶えず必要とされている。ＴＮＦは、以下で述べるように、様々な役割によ フて、ＡＩＤＳウィルスと関係している。

クラウス（Ｃ１ｏｕｓ）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｊ、　Ｉ闘ｕｎ ｏ１．　）、川巻、４３１頁（１，９８９年）は、活性化したヒト単球によって 分泌されたモノカイン類が、慢性感染したヒトＴ細胞クローンにおける増大した レベルのＨＩＶ発現を誘発したことを考察している。この過程に関係するモノカ インは、ＴＮＦαとして同定された。

ゴウダ（Ｇｏｗｄａ）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー、■巻、７７３頁（ １９８９年）は、ＨＩＶ侵入およびＨＩＶ依存の細胞融合には、Ｔ細胞の活性化 が必要であることを考察している。

ザグリ−（Ｚａｇｕｒｙ）ら、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、ｍ巻、８５０頁 （１９８６年）は、ＨＩＶ遺伝子の発現には、Ｔ細胞の活性化が必要であること を考察している。

ライト（ｆｒｉｇｈｔ）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー、ν４巻、９９頁 （１９８８年）は、ＨＩＶ感染した患者由来の単球が、インビトロで培養するこ とによって多量のＴＮＦαおよびインターロイキン−１（以下、ＩＬ−１という ）を生産したことを考察している。

ビュートラ−（Ｂｅｕｔｌｅｒ）らネイチャー（ロンドン）、３１６巻、５５２ −５５４頁（１９８５年）、は、悪液質におけるＴＮＦαの役割を考察している 。

る。

ラーデビルタ（Ｌａｈｄｅν１ｒｔａ）ら、ジ・アメリカン・ジャーナル・オブ ・メゾイス：／　（Ｔｈｅ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊ、　Ｍｅｄ、　）、８５巻、 ２８９頁（１９８８年）は、ＴＮＦａ力（悪液質および筋肉分解のＨＩＶ関連状 態に関係していることを考察している。

ライト（マｒｉｇｈｔ）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー、１４１（１）巻 、９９−１０４頁（１９１１１８年）は、増大した血清ＴＮＦと、患者由来の末 梢血液単球における高レベルの自発的ＴＮＦ生産とによって、ＴＮＦがＡＩＤＳ 悪液質において果たしうる役割を示唆している。

フォークス（Ｆｏｌｋｓ）ら、プロシーデイングズ・オブ・ナショナル・アカデ ミ年）は、ＴＮＦが、ＴＮＦによって誘発され得る、Ｔ細胞およびマクロファー ジ系における潜伏ＨＩＶのウィルス複製の刺激に関係していることを示唆してい る。

オズボーン（Ｏｓｂｏｒｎ）ら、プロシーディングズ・オブ・ナショナル・アカ デミ−・オブ・サイエンシズ・イン・ニー・ニス・エイ、並巻、２３３６−２３ ４０頁（１９８９年）は、ＴＮＦのウィルス誘発活性の分子機構が、ウィルス制 御遺伝子配列（ＬＴＲ）に結合することによってＨＩＶ複製を促進する、細胞の 細胞質に見い出される遺伝子制御タンパク（ＮＦ−ｋＢ）を活性化するＴＮＦの 能力に起因することを示唆している。

エール大学の欧州特許出願公開第０．２３０．５７４　Ａ２　（１９８７年８月 ６日付で公開）は、ＬＡＶ／）（ＴＬＶｍウィルスに感染した患者を処置するた めの医薬組成物を製造する方法を請求している。ここで、このような組成物は、 リンホトキシン、腫瘍壊死因子、ロイコレグリンおよびナチュラルキラー細胞障 害因子などの、単核細胞由来の細胞障害因子の生産および／または活性を阻害す る化合物を含有する。

前記文献から、ＴＮＦの生産を阻害する化合物は、後天性免疫不全症候群（ＡＩ ＤＳ）の処置および／またはＡＩＤＳ関連症候群の処置に治療効果を有すると結 論される。

インターロイキン（ＩＬ−１）は、免疫制御や、炎症などの他の生理学的症状に おいて重要であると考えられる様々な生物学的活性を媒介することが示されてい る［例えば、ディナレッロ（Ｄｉｎａｒｅｌｌｏ）ら、レビューズ・オブ・イン フェクシャス・ディシーズ（Ｒｅｖ、　Ｉｎｆｅｃｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ）、立春 、５１頁（１９８４年）を参照〕。

ＩＬ−１について公知の無数の生物学的活性には、Ｔヘルパー細胞の活性化、発 熱の誘発、プロスタグランジンやコラゲナーゼ生産の刺激、好中球の走化性、急 性期タンパクの誘発および血漿鉄レベルの抑制が含まれる。特に、単球および／ またはマクロファージによる過剰または非制御的なＩＬ−１生産が疾患を悪化お よび／または惹起させるのに関係しているい（つかの疾患状態が存在する。これ らには、リウマチ様関節炎し例えば、フォンタナ（Ｆｏｎｔａｎａ）ら、アース ライティス・リューマドイド（＾ｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ、　）、η巻、 ４９−５３頁（１９８２年）を参照］；骨関節炎［例えば、ウッド（Ｗｏｏｄ） ら、アースライテイス・リューマドイド、並巻、９７５頁（１９８３年）を参照 ］；毒性ショック症候群［例えば、イケジ？　（Ｉｋｅｊｉｍａ）およびディナ レッロ、ジャーナル・オブ・ロイコサイト・ノくイオロジ−（Ｊ、　Ｌｅｕｋｏ ｃｙｔｅ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）、Ｆ巻、７１４頁（１９８５年）を参照］、内毒素 によって誘発される炎症反応などの他の急性または慢性の炎症疾患状態［例えば 、）１ビヒト（Ｈａｂｉｃｈｔ）およびベック（Ｂｅｃｋ）、ジャーナル・オブ ・ロイコサイト・バイオロジー、Ｈ巻、７０９頁（１９８５年）を参照］：およ び結核症などの他の慢性炎症疾患［例えば、チェスキュー（Ｃｈｅｓｑｕｅ）ら 、ジャーナル・オブ・ロイコサイト・ノくイオロジー、Ｆ巻、６９０頁（１９８ ５年）を参照コが含まれる。ベンジャミン（Ｂｅｎ　ｊａｍｉｎ）ら、「アニュ インク（＾ｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｉｎｃ、）は、過剰のＩＬ−１生産 が、乾癖性関節炎、ライター症候群、リューマチ様関節炎、骨関節炎、通風、外 傷性関節炎、風疹性関節炎、および急性滑膜炎に関係していることを開示してい る。

生物学的活性について論評を行っており、このような活性を表Ａに要約する。

轟Ａ ＩＬ−１に帰属される生物学的活性 発熱（ウサギ、マウスおよびラットにおける）低鉄血症 低亜鉛血症 裏銅血症 増大した 血液好中球 肝臓の急性期タンパク 骨吸収、骨粗に症およびパジエント病を含む軟骨損傷 筋肉のタンパク分解 徐波睡眠 内皮の凝血物質前駆体 軟骨細胞プロテアーゼ 滑膜コラゲナーゼ 内皮への好中球付着 好中球の脱顆粒 好中球スーパーオキシド インターフェロン生産 以下のものの急増 線維芽細胞 神経膠細胞 糸球間質細胞 滑膜線維芽細胞 ＥＢＶ　Ｂ細胞系 以下のものの走化性 単球 好中球 リンパ球 以下のものにおけるｐＧＥ２の刺激 視床下部 皮質 骨格筋 皮膚の線維芽細胞 軟骨細胞 マクロファージ／単球 内皮（ＰＧＩｚ） 減少した 肝臓のアルブミン合成 食欲 オピオイドの脳結合 以下のものの増大 Ｔ細胞応答 Ｂ細胞応答 ＮＫ活性 ＩＬ−２生産 リンホカイン生産 ＩＬ−１生産を阻害する化合物の発見は、過剰または非制御的なＩＬ−’１生産 が関係している疾患の治療法を提供する。

式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬上許容される塩または水和物または溶 媒和物が、サイトカイン生産の阻害を必要とするヒトを含む哺乳類におけるサイ トカイン生産を阻害するのに有用であることが発見された。

有効なサイトカイン生産阻害量の式（Ｉ）で示される化合物あるいはその医薬上 許容される塩または水和物または溶媒和物は、過剰または非制御的なサイトカイ ン生産によって悪化または惹起される、ヒトを含む哺乳類における如何なる疾患 状態を予防的または治療的に処置するのに有用である。好ましくは、阻害される 前記サイトカイン類は、ＩＬ−１およびＴＮＦである。好ましくは、前記疾患状 態は、増大した骨吸収、内毒素性ショック、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ） に伴う悪液質、ＡＩＤＳまたはマラリアから選択される。特に好ましいのは、骨 粗髭症およびパンエツト病を含む、増大した骨吸収の疾患状態である。

本発明は、サイトカイン類の生産阻害を必要とするヒトを含む哺乳類におけるサ イトカイン類の生産を阻害（特に、ＩＬ−１およびＴＮＦの生産を阻害）する方 法であって、有効なサイトカイン生産阻害量の式（１）で示される化合物あるい はその医薬上許容される塩または水和物または溶媒和物を投与することからなる 方法に関する。式（Ｉ）で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩また は水和物または溶媒和物は、バドガー（Ｂａｄｇｅｒ）ら、米国特許第４．９６ ３．５５７号（１９９０年１０月１６日付で発行）に記載されているような公知 の手法に従って、式（１）で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩ま たは水和物または溶媒和物を従来の医薬上許容される担体または希釈剤と組み合 わせることによって調製された従来の投与形態で、ヒトを含むこのような哺乳類 に投与することができる。

医薬上許容される担体または希釈剤の形態および性質が、それと組み合わせるべ き活性成分の量、投与経路および他の公知の可変要素に依存することは当業者に 認識されている。式（Ｉ）で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩ま たは水和物または溶媒和物は、サイトカイン生産の阻害を必要とするヒトを含む 哺乳類に、このような過剰サイトカイン生産を正常レベルに下方制御する程度ま で阻害するのに充分な量で投与される。投与の経路は、経口的、非経口的または 局所的でよい。本明細書で使用される非経口的という用語には、静脈内、筋肉内 、皮下、鼻腔内、直腸内、膣内または腹腔内投与が含まれる。皮下および筋肉内 による非経口投与が、一般的には好ましい。経口投与１日量は、好ましくは、全 体重１キログラムあたり約０．１〜約１０００ｍｇである。非経口１日投与量は 、好ましくは、全体重１キログラム（ｋ　ｇ）あたり約０．１〜約８００ｍｇ、 最も好ましくは、約１〜約１００ｍｇ／ｋｇである。局所的投与１日量は、好ま しくは、投与の部位あたり約１ｍｇ〜約１００ｍｇである。式（Ｉ）で示される 化合物あるいはその医薬上許容される塩または水和物または溶媒和物の各々の投 薬の至適量および間隔は、処置される症状の性質および程度、投与の形態、経路 および部位、ならびに処置される特定の患者によって決定されることや、このよ うな至適条件が従来の手法によって決定できることは、当業者に理解されている 。また、処置の至適過程、すなわち所定の日数にわたって１日あたりに与えられ る式（１）で示される化合物あるいはその医薬上許容される塩または水和物また は溶媒和物の投与量の数値を、当業者が従来手順の処置決定試験を用いて確定で きることも当業者に認められている。

さらに苦心することなく、当業者は、前記の記述を用いて、本発明を最大限まで 利用することができると考えられる。

本明細書で使用される「化合物１」という用語は、Ｎ、Ｎ−ジメチル−８，８− ジプロピル−２−アザスピロ［４，５］デカン−２−プロパンアミンである式（ １）［式中、ＲｏおよびＲ２はプロピル、Ｒ５およびＲ４はメチル、ｍは１およ びｎは３］の化合物を意味する。

インビボにおけるサイトカイン活性の測定ＴＮＦのレベルは、ウィンストン（ｆ ｆｎｓｔｏｎ）ら、カレント・プロトコルズ・イン・モレキュラー・バイオロジ ー（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏ ｌｏｇｙ）、１１、２．１頁、アウスベル（＾ｕｓｕｂｅｌ）ら編、（１９８７ 年）ジョン・ワイリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ　ｆｉｌｅｙ　ａｎｄ　５ｏ ｎｓ）、ニューヨーク、ＵＳＡに記載されている基本的なサンドイッチＥＬＩＳ Ａ法の変法を用いて測定した。ＥＬＩＳＡは、ハムスターのモノクローナル抗マ ウスＴＮＦ　（ジェンザイム（Ｇｅｎｚｙａ＋ｅ）、ボストン、ＭＡ、［ｓ＾） を捕獲抗体として用い、ウサギのポリクローナル抗ネズミＴＮＦ　（ジエンザイ ム、ボストン、ＭＡ、ＵＳＡ）を検出抗体として用いた。マウス試料におけるＴ ＮＦレベルは、組み換えネズミＴＮＦ（ジェンザイム、ボストン、ＭＡ、　ＵＳ Ａ）を用いて作成した標準曲線から計算した。ＥＬＩＳＡによって決定されたＴ ＮＦレベルを、ルフ（Ｒｕｆｆ）ら、ジャーナル・オブ・イムノロジー、１２５ 巻、１６７１−１６７７頁（１９８０年）のＬ９２９バイオアッセイによって検 出されたレベルと関係付けたところ、バイオアッセイにおける１活性単位は、Ｅ ＬＩＳＡにおける７０ピコグラム（ｐｇ）のＴＮＦに相当した。ＥＬＩＳＡはＴ ＮＦのレベルを２５　ｐ　ｇ／ｍ　Ｉまで検出した。

化合物１で処置したアジュバント性関節炎ラット由来の、リボ多糖類で刺激した マクロファージは、処置していない対照より５０％少ないＴＮＦを生産する。

ＴＬ−１のレベルは、サイモン、ピー・エル（Ｓｉｍｏｎ、　Ｐ、Ｌ、）ら、ジ ャーナル・オブ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔ ｈｏｄｓ）、８４巻、８５−９４頁、１９８５年に記載の方法を用いて測定した 。この方法は、２〜５Ｘ１０−７ＭのカルシウムイムノファーＡ２３１８７の存 在下におけるＥＬ〜４ネズミを細胞リンパ腫細胞系からのインターロイキン−２ の生産に基づいている。

化合物１は、前記アッセイにおいて、ＩＬ−１のレベルが約７５％減少するとい う正のインビボ応答を示した。

国際調査報告 フロントページの続き （７２）発明者　ハイ、ワンプ・バーナプツトアメリカ合衆国ペンシルベニア州 １９０８７、ウニイン、ボブ・ホワイト・テラス５４５番

Claims (63)

【特許請求の範囲】
1. １．サイトカイン類の生産阻害を必要とするヒトを含む哺乳類におけるサイトカ イン類の生産を阻害する方法であって、このような哺乳類に、有効なサイトカイ ン生産阻害量の式： ▲数式、化学式、表等があります▼式（Ｉ）［式中、ｎは３〜７； ｍは１または２； Ｒ１およびＲ２は同一または相異なり、水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状ア ルキルから選択される（ただし、Ｒ１およびＲ２に含まれる炭素原子を合わせた 合計数は５〜１０である）か；あるいは、Ｒ１およびＲ２は一緒になって炭素原 子数３〜７の環状アルキル基を形成し： Ｒ３およびＲ４は同一または相異なり、水素または炭素原子数１〜３の直鎖アル キルから選択されるか；あるいは、Ｒ３およびＲ４は窒素原子と一緒になって原 子数５〜８のヘテロ環式基を形成する］で示される化合物；あるいは、その医薬 上許容される塩または水和物または溶媒和物を投与することからなる方法。
2. ２．前記化合物がＮ，Ｎ−ジメチル−８，８−ジプロピル−２−アザスピロ［４ ，５］デカン−２−プロパンアミン二塩酸塩である請求項１記載の方法。
3. ３．前記サイトカインがインターロイキン−１である請求項２記載の方法。
4. ４．前記サイトカインが腫瘍壊死因子である請求項２記載の方法。
5. ５．前記化合物が経口的に投与される請求項２記載の方法。
6. ６．１日につき約１〜約２０００ｍｇの化合物が投与される請求項５記載の方法 。
7. ７．前記化合物が非経口的に投与される請求項２記載の方法。
8. ８．１日につき約０．１〜約１０００ｍｇの化合物が投与される請求項７記載の 方法。
9. ９．前記化合物が吸入によって投与される請求項２記載の方法。
10. １０．１日につき約１０〜約１００ｍｇの化合物が投与される請求項９記載の方 法。
11. １１．前記化合物が局所的に投与される請求項２記載の方法。
12. １２．１日につき約１．５ｍｇ／体重１ｋｇ〜約５００ｍｇ／体重１ｋｇが投与 される請求項１１記載の方法。
13. １３．前記化合物がＮ，Ｎ−ジメチル−８，８−ジプロピル−２−アザスピロ［ ４，５］デカン−２−プロパンアミン；あるいは、その医薬上許容される塩また は水和物または溶媒和物である請求項１記載の方法。
14. １４．前記哺乳類が骨吸収性疾患に罹患している請求項２記載の方法。
15. １５．前記骨吸収性疾患が骨粗鬆症である請求項１４記載の方法。
16. １６．前記骨吸収性疾患がパジェット病である請求項１４記載の方法。
17. １７．前記哺乳類が内毒素誘発性ショックに罹患している請求項２記載の方法。
18. １８．前記哺乳類がマラリアに罹患している請求項２記載の方法。
19. １９．前記哺乳類が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に伴う悪液質に罹患して いる請求項２記載の方法。
20. ２０．前記哺乳類が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に罹患している請求項２ 記載の方法。
21. ２１．所望の治療効果がプロスタグランジン生産の阻害である請求項３記載の方 法。
22. ２２．式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼式（Ｉ）［式中、ｎは３〜７； ｍは１または２； Ｒ１およびＲ２は同一または相異なり、水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状ア ルキルから選択される（ただし、Ｒ１およびＲ２に含まれる炭素原子を合わせた 合計数は５〜１０である）か：あるいは、Ｒ１およびＲ２は一緒になって炭素原 子数３〜７の環状アルキル基を形成し； Ｒ３およびＲ４は同一または相異なり、水素または炭素原子数１〜３の直鎖アル キルから選択されるか；あるいは、Ｒ３およびＲ４は窒素原子と一緒になって原 子数５〜８のヘテロ環式基を形成する］で示される化合物；あるいは、その医薬 上許容される塩または水和物また溶媒和物の、ヒトを含む哺乳類におけるサイト カイン類の生産を阻害するのに使用する医薬品の製造への使用。
23. ２３．前記化合物がＮ，Ｎ−ジメチル−８，８−ジプロピル−２−アザスピロ［ ４，５］デカン−２−プロパンアミン二塩酸塩である請求項１記載の使用。
24. ２４．前記サイトカインがインターロイキン−１である請求項２記載の使用。
25. ２５．前記サイトカインが腫瘍壊死因子である請求項２記載の方法。
26. ２６．前記化合物が経口的に投与される請求項２記載の使用。
27. ２７．１日につき約１〜約２０００ｍｇの化合物が投与される請求項５記載の使 用。
28. ２８．前記化合物が非経口的に投与される請求項２記載の使用。
29. ２９．１日につき約０．１〜約１０００ｍｇの化合物が投与される請求項７記載 の使用。
30. ３０．前記化合物が吸入によって投与される請求項２記載の使用。
31. ３１．１日につき約１０〜約１００ｍｇの化合物が投与される請求項９記載の使 用。
32. ３２．前記化合物が局所的に投与される請求項２記載の使用。
33. ３３．１日につき約１．５ｍｇ／体重１ｋｇ〜約５００ｍｇ／体重１ｋｇが投与 される請求項１１記載の使用。
34. ３４．前記化合物がＮ，Ｎ−ジメチル−８，８−ジプロピル−２−アザスピロ［ ４，５］デカン−２−プロパンアミン；またはその医薬上許容される塩または水 和物または溶媒和物である請求項１記載の使用。
35. ３５．前記哺乳類が骨吸収性疾患に罹患している請求項２記載の使用。
36. ３６．前記骨吸収性疾患が骨粗鬆症である請求項１４記載の使用。
37. ３７．前記骨吸収性疾患がパジェット病である請求項１４記載の使用。
38. ３８．前記哺乳類が内毒素誘発性ショックに罹患している請求項２記載の使用。
39. ３９．前記哺乳類がマラリアに罹患している請求項２記載の使用。
40. ４０．前記哺乳類が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に伴う悪液質に罹患して いる請求項２記載の使用。
41. ４１．前記哺乳類が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に罹患している請求項２ 記載の使用。
42. ４２．所望の治療効果がプロスタグランジン生産の阻害である請求項３記載の使 用。
43. ４３．ヒトを含む哺乳類におけるサイトカイン類の生産を阻害するのに使用する 医薬組成物であって、式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼式（Ｉ）［式中、ｎは３〜７； ｍは１または２； Ｒ１およびＲ２は同一または相異なり、水素または直鎖、分岐鎖もしくは環状ア ルキルから選択される（ただし、Ｒ１およびＲ２に含まれる炭素原子を合わせた 合計数は５〜１０である）か；あるいは、Ｒ１およびＲ２は一緒になって炭素原 子数３〜７の環状アルキル基を形成し； Ｒ３およびＲ４は同一または相異なり、水素または炭素原子数１〜３の直鎖アル キルから選択されるか；あるいは、Ｒ３およびＲ４は窒素原子と一緒になって原 子数５〜８のヘテロ環式基を形成する］で示される化合物；および医薬上許容さ れる賦形剤からなる組成物。
44. ４４．前記化合物がＮ，Ｎ−ジメチル−８，８−ジプロピル−２−アザスピロ［ ４，５］デカン−２−プロパンアミン二塩酸塩である請求項１記載の組成物。
45. ４５．前記サイトカインがインターロイキン−１である請求項２記載の組成物。
46. ４６．前記サイトカインが腫瘍壊死因子である請求項２記載の組成物。
47. ４７．前記化合物が経口的に投与される請求項２記載の組成物。
48. ４８．１日につき約１〜約２０００ｍｇの化合物が投与される請求項５記載の組 成物。
49. ４９．前記化合物が非経口的に投与される請求項２記載の組成物。
50. ５０．１日につき約０．１〜約１０００ｍｇの化合物が投与される請求項７記載 の組成物。
51. ５１．前記化合物が吸入によって投与される請求項２記載の組成物。
52. ５２．１日につき約１０〜約１００ｍｇの化合物が投与される請求項９記載の組 成物。
53. ５３．前記化合物が局所的に投与される請求項２記載の組成物。
54. ５４．１日につき約１．５ｍｇ／体重１ｋｇ〜約５００ｍｇ／体重１ｋｇが投与 される請求項１１記載の組成物。
55. ５５．前記化合物がＮ，Ｎ−ジメチル−８，８−ジプロピル−２−アザスピロ［ ４，５］デカン−２−プロパンアミンである請求項１記載の組成物。
56. ５６．前記哺乳類が骨吸収性疾患に罹患している請求項２記載の組成物。
57. ５７．前記骨吸収性疾患が骨粗鬆症である請求項１４記載の組成物。
58. ５８．前記骨吸収性疾患がパジェット病である請求項１４記載の組成物。
59. ５９．前記哺乳類が内毒素誘発性ショックに罹患している請求項２記載の組成物 。
60. ６０．前記哺乳類がマラリアに罹患している請求項２記載の組成物。
61. ６１．前記哺乳類が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に伴う悪液質に罹患して いる請求項２記載の組成物。
62. ６２．前記哺乳類が後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）に罹患している請求項２ 記載の組成物。
63. ６３．所望の治療効果がプロスタグランジン生産の阻害である請求項３記載の組 成物。