JPH06500560A - α―アンチキモトリプシン―β―タンパク質複合体形成妨害方法およびその方法に使用する合成ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アルツハイマーβ−タンパク質とＡＣＴの特異的複合体の１成分の模 倣であるとともに該複合体の形成を妨げるのに青用である一群の新規合成ペプチ ドまたはペプチド様化合物に関する。また、本発明は、上記複合体の形成の結果 、異常な状態または病的状態が直接または間接的に引き起こされている人を治療 する方法、さらに詳しくはアルツハイマー病の人を治療する方法に関する。本発 明の合成ペプチドはβ−タンパク質またはＡＣＴと結合することによってアルツ ハイマーβ−タンパク質とＡＣＴの複合体形成を阻害させるものであり、ＡＣＴ −β−タンパク質相互作用を妨げるようなやり方で、目的の効果（すなわち複合 体形成および異常な病的状態の抑制）を得るのに十分な量で投与することができ る。

図面の簡単な説明 図１は、アルツハイマーアミロイドβ−タンパク質のアミノ酸配列（最上段）、 および下記の５つのセリンプロテアーゼの活性部位である。細胞障害性Ｔ細胞プ ロテアーゼ、カテプシンＧ、肥満細胞プロテアーゼ、トリプシン、およびキモト リプシン。

図２は、アルツハイマーアミロイドβ−タンパク質のプロテアーゼ調節活性をグ ラフ化したものである。

発明の詳細な説明 プロテアーゼ阻害剤α１−アンチキモトリプシン（ＡＣＴ）および４２個のアミ ノ酸から成るβ−タンパク質がアルツハイマー病、ダウン症、および正常な老化 における脳アミロイド沈着物の不可欠の成分である。このことは、ＡＣＴとβ− タンパク質の間におそらくアミロイド形成に不可欠の特殊な親和性があることを 示している。β−タンパク質のＮ末端とセリンプロテアーゼの活性部位の類似性 によって、この関係の基礎が示唆される。

本明細書で述べるように、ＡＣＴとβ−タンパク質はプロテアーゼ−阻害剤相互 作用の特異性と安定性を反映する複合体を形成することがイン・ビトロ実験で証 明される。これらの結果は、アミロイドフィラメントのモデルおよびβ−タンパ ク質の生理機能を示唆するものである。また、該複合体の２成分の結合を妨げる （抑制または阻止する）ために細胞に導入することができる合成ペプチドの設計 や選択を可能にする。このような合成ペプチドとしては、ＡＣＴとβ−タンパク 質の相互作用を妨げるペプチドおよびペプチド様化合物（たとえば改変ペプチド や誘導体化ペプチド）、とりわけセリンプロテアーゼの活性（または結合）部位 を“模倣する“ペプチドなどが挙げられる。このようなペプチドは、ペプチドが ＡＣＴと結合する程にアミノ酸配列がセリンプロテアーゼの結合部位の配列と、 または図１に示したようなβ−タンパク質のＮ末端とに対して十分に相同である 短いペプチドであってもよい。あるいは、上記ペプチドは、セリンプロテアーゼ 結合部位またはβ−タンパク質領領域対して十分に相同である配列以外にも、他 のアミノ酸（たとえば結合部位配列の１端または両端にある１個以上のアミノ酸 ）を含んでいてもよい。本発明の方法によれば、本発明の化合物をＡＣＴ−β− タンパク質複合体の形成を妨げるようなやり方で人に投与する。本発明の複合体 形成妨害方法においては、治療効果を得るのに十分な量および適当な経路で化合 物を投与する。

以下は、ＡＣＴとβ−タンパク質が特異的に相互作用してイン・ビトロで安定な 複合体を形成することの証明、およびこの相互作用を妨げるのに使用することが できる化合物についての説明である。上記化合物およびそれらの投与方法につい ても説明する。

本発明は、アルツハイマー病患者など処置しないと複合体形成が起きてしまう人 の治療に使用することができる。

ＡＣＴ−β−タンパク質複合体形成の証明アルツハイマー病、ダウン症、および 正常な老化の斑および血管中に見られる細胞外アミロイドフィラメントは、４２ 個のアミノ酸から成るβ−タンパク質とセリンプロテアーゼ阻害剤α、−アンチ キモトリプシンという２種類のタンパク質を含んでおり、いずれもフィラメント と密に会合している［グレナーとウイング（Ｇｌｅｎｎｅｒ、　Ｇ、Ｇ、　ａｎ ｄ　Ｃ，Ｗ、　Ｗｏｎｇ　）、ｒｅｓｓ、　Ｓａｎ　Ｄｉｅｇｏ、印刷中）；ア ブラハムら（Ｃ，Ｒ，Ａｂｒａｈａｍ、アミロイド−シスを伴うオランダ変異型 遺伝性脳出血（ＨＣＨＷＡ−Ｄ）の血管アミロイドの主成分はβ−タンパク質で あって、血管障害は似ているがアイスランドＷ　（ＨＣＨＷＡ−１）のようにシ スタチンＣではないことがわかった［ギソら（Ｊ、　Ｇｈｉｓｏ、　ｅｔ　ａｌ 、）　、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　８３：２９７４　（ １９８６）　；パン・ドゥイネンら（Ｓ、Ｇ、　ｖａｎ　Ｄｕｉｎｅｎ、　ｅｔ 　ａｌ、　）　、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　８４：５ ９９１　（１９８７）　］　。この疾患を有する人の脳切片を免疫標識法によっ て分析したところ、ＡＣＴも含まれていることがわかった［ピッケンら（Ｍ、　 Ｍ。

一方、他の疾患で見られるアミロイド沈着物はβ−タンパク質やＡＣＴを含んで いない。ＡＣＴとβ−タンパク質の生化学的性質から、この特殊な関係の根本原 図が示唆される。まず、ＡＣＴは偽基質として作用して標的プロテアーゼと共有 結合して長寿命複合体を形成することによって機能するセリンプロテアーゼ阻害 剤である［トラビスら（Ｊ、　Ｔｒａｖｉｓ、　ｅｔａｌ、　）　、Ｂｉｏｃｈ ｅｍｉｓｔｒＬ　１７：５６５１　（１９７８）コ。次に、β−タンパク質の配 列を調べてみると、セリンプロテアーゼの活性部位の１つのセグメントに対して 顕著な相同性を示す領域がＮ末端付近に存在することがわかり、カギとなるセリ ンアミノ酸が含まれている（図１）［ロバーツ（Ｅ、　Ｒｏｂｅｒｔｓ）　、Ｎ ｅｕｒｏｂｉｏｌ、　Ａｇｉｎｇ、　７：５６１　（１９８６）　；　）ラビス とサルベセン（Ｔｒａｖｓｔｒｙ、　２６：２２８９　（１９８７）］　、した がって、ＡＣＴとβ−タンパク質はプロテアーゼ阻害剤のような相互作用によっ て複合体を形成する能力があって、この複合体がアルツハイマーアミロイドフィ ラメントの安定性に寄与している可能性があると思われた。この仮説は以下のよ うにして検証された。すなわち、実際に、β−タンパク質はＡＣＴの阻害活性部 位と特異的に安定的に結合する能力があるという結果が得られた。

実施例１で述べるように、イン・ビトロでのＡＣＴによるキモトリプシンの阻害 に対し様々な合成ペプチドが及ぼす影響を調べた。

図２は、合成ペプチドを用いて行なったプロテアーゼ活性の評価の結果である。

図２に示したとおり、ＡＣＴ／キモトリプシンのモル比が約１：ｌであると、Ａ ＣＴは９０％以上のキモトリプシン活性を阻害した。ところが、キモトリプシン の添加に先立ち、β−ペプチドの１−１２または１−２８位アミノ酸に対応する 合成ペプチドの約４倍モル過剰量とともにＡＣＴをインキュベートすると、ＡＣ Ｔの阻害活性は大幅に低下し、キモトリプシン反応速度は２〜８倍上昇した。

一方、β−タンパク質前駆体の２５８−２７７位アミノ酸に対応するペプチド（ セリンプロテアーゼの活性部位と全く類似性を有しない）の１０倍モル過剰量と ともにあらかじめインキュベートしても、ＡＣＴは妨害されなかった。これらの データは、セリンプロテアーゼ、特にアルツハイマーアミロイドβ−タンパク質 の活性部位にあるキーとなるセリンの周辺領域と類似性を示すペプチド（図１） は、セリンプロテアーゼ阻害剤であるＡＣＴの阻害機能を妨害することができる ことを示している。この相互作用の特異性は、それがＡＣＴの阻害活性部位で起 こることを示している。該ペプチドの存在下でもＡＣＴはやはりかなりのキモト リプシン阻害能力を示すという事実は、おそらくプロテアーゼ阻害剤が標的に結 合する際には小型のペプチドが当然に欠損している完全プロテアーゼ活性部位の アミノ酸との多数点接触があるという事実を反映するものであろう。

α＋ＡＣＴ−β−タンパク質複合体の形酸複合体性と特異真の基質は反応性セリ ンのヒドロキシ基を介してプロテアーゼと遷移的な共有結合中間体を形成した後 、結合が破壊されてプロテアーゼが再び活性状態になる際に分解するが、これと は異なり、プロテアーゼ阻害剤は分解するもののプロテアーゼとの結合が解ける のは非常にゆっくりである〔トラビスら（Ｊ、　Ｔｒａｖｉｓ、　ｅｔ　ａｌ、 　）　、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　１７：５６５１　（１９７８）コ。した がって、該阻害剤は自殺的、化学量論的相互作用によってプロテアーゼを実質的 に不活性化する。セリンプロテアーゼ阻害剤は標的プロテアーゼと安定な複合体 を形成すること、およびセリンプロテアーゼ阻害剤であるＡＣＴは不溶性アルツ ハイマーアミロイド沈着物の不可欠の成分であるという事実は、このタンパク質 が安定な阻害剤−ブロチアーゼ相互作用によってフィラメントに取り込まれる可 能性を示唆するものである。そこで、α１−アンチキモトリプシンとβ−タンパ ク質の相互作用の安定性を評価した。実施例２で述べるように、β−タンパク質 の１−１２位および１−２８位のアミノ酸およびβ−タンパク質前駆体の２５８ −２７７位の無関係セグメントに対応する放射性ヨウ素探識ペプチドを調製し、 様々な条件下ＡＣＴの存在下でインキュベートし、得られた混合物をＳＤＳポリ アクリルアミドゲル上で電気泳動した。ＡＣＴの非存在下では、低分子量ペプチ ドは色素先端と共に急速に移動したが、ＡＣＴの存在下ではＡＣＴタンパク質よ り数千分子量大きいタンパク質に相当する位置に放射性バンドが出現した。した がって、図２においてＡＣＴとβ−タンパク質の間に最初に検出された相互作用 は、ＳＤＳとβ−メルカプトエタノール中での煮沸による変性に耐えるのに十分 な程度に安定であり得ることになる。図２に示した様に、ＡＣＴのプロテアーゼ 阻害部位においてＡＣＴ−−β−タンパク質相互作用が起きることは、放射性ペ プチドの添加に先立ちＡＣＴにキモトリプシンを加えるとＡＣＴ−ペプチド複合 体の形成が阻止された事実によって確認された。

ペプチドの添加に先立ちＡＣＴを熱変性させた場合も、複合体形成が阻止された 。

α、−ＡＣＴ−β−タンパク質相互作用の特異性は、１−２８位ペプチドを他の タンパク質（たとえばＢＳＡＳＣＰＫおよびＣＡ）と共にインキュベートするこ とによって証明された。これらは、安定な複合体を形成しなかったからである要 するに、以上に述べた研究は、アルツハイマーアミロイとを示すものである。こ の相互作用はペプチドとＡＣＴタンパク質の両者に特異的であり、ＡＣＴの活性 プロテアーゼ阻害部位とセリンプロテアーゼの活性部位に似ているβ−タンパク 質Ｎ末端との間に起きるように思われる。

これらの結果は、アルツハイマーアミロイドフィラメントの構造に対する一つの モデルを示唆するものである。フィラメントを形成するβ−タンパク質分子の疎 水性Ｃ末端部分は内部に抱き込まれるが、親水性の中心セグメント（１２−２８ 位アミノ酸）はフィラメントの表面を形成する。Ｎ末端にあるプロテアーゼ活性 部位関連アミノ酸は、フィラメントの表面から突き出ていてＡＣＴによる結合に 利用できるアームを形成するが、β−タンパク質だけがβ−折り畳みシート構造 を有するフィラメントをイン・ビトロで形成しつるのであれば、少なくとも後者 の可能性はあると思われる［キルシュナーら（Ｄ、Ａ、　Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ、 　ｅｔ　ａｌ、）　、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、、　８３ ：　（１９８６）；カスターノら（Ｅ、Ｍ、　Ｃａ５ｔａｎｏ、　ｅｔ　ａｌ、 ）、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ、、　１４１ニ ア８２　（１９８６）　；キルシュナーら（Ｄ、Ａ、　Ｋｉｒｓｃｈｎｅｒ、　 ｅｔ　ａｌ、）　、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　５ｃｉ−＋　８４： ６９５３　（１９８７）］。しかし、これらのフィラメントは容易に可溶化でき るので、真のアルツハイマーアミロイドフィラメントに持前の重要成分または立 体構造（ｓｔｒｕｃｔｕａｌ　ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）を欠いているに違い ない。β−タンパク質中心フィラメントが比較的プロテアーゼ耐性のあるＡＣＴ と結合することで、必要な安定性増大をもたらす可能性がある。

これらの結果は、β−タンパク質が潜在的な生物学的機能を有する可能性がある ことも示唆している。β−タンパク質はイン・ビトロでセリンプロテアーゼ阻害 剤の活性部位と競合的に相互作用しつるので、イン・ビボでも同様の役目を果た しつると期待できる。β−タンパク質自体はプロテアーゼではないが、プロテア ーゼ阻害剤（β−タンパク質前駆体におけるクニッッ型阻害剤を含む）を引きつ けることによってプロテアーゼ強化剤として働き、周囲のタンパク質分解活性を 効果的に上昇させる。したがって、たとえばβ−タンパク質前駆体のタンパク質 分解の増大によって生じるような過剰なβ−タンパク質産生はさらにプロテアー ゼ活性を上昇させて、ますます悪い結果をもたらすことがある。

したがって、本明細書で述べるように、イン・ビトロでは、セリンプロテアーゼ 阻害剤（Ａ　ＣＴ）はセリンプロテアーゼの活性部位と顕著な配列相同性を存す るセリンプロテアーゼ様標的タンパク質（アルツハイマーβ−タンパク質）部分 と特異的に相互作用し、その結果安定なＡＣＴ−β−タンパク質複合体を形成す ることが示されている。本明細書で述べた研究は、アルツハイマー病のアミロイ ド沈着物を構成する不溶性タンパク質フィラメントの形成を合理的に説明する分 子機構を提示するものである。

ＡＣＴとアルツハイマーβ−タンパク質の特異的相互作用が発見された結果、こ のＡＣＴ−β−タンパク質相互作用を妨げる（抑制または阻止する）のに有用な 化合物を設計または選択することができるようになった。この発見により、該相 互作用の阻止方法も可能になった。本発明の化合物と方法は、上記複合体が形成 され、その結果異常または好ましくない状態すなわち病的状態が直接または間接 的に引き起こされる人においてＡＣＴ−β−タンパク質複合体の形成を抑制する のに特に有用である。たとえば、上記化合物を用いてアルツハイマー病をすでに 発症しているか適切な処置を講じないとアルツハイマー病を発症するであろう人 におけるＡＣＴ−β−タンパク質複合体の形成を抑制（完全または部分的に）ま たは阻止することができる。

本発明の化合物はＡＣＴと結合することでＡＣＴ−β−タンバク質複合体の形成 を防止するか、β−タンパク質と結合することでやはりＡＣＴ−β−タンパク質 複合体の形成を防止するかのいずれかによってＡＣＴとアルツハイマーβ−タン パク質の結合を妨害する目的で使うことができる。例えば、アルツハイマーβ− タンパク質の配列の全体または一部などセリンプロテアーゼのアミノ酸配列の全 体または一部に対応するペプチドを使うことができる。あるいは、ＡＣＴの阻害 活性部位のアミノ酸配列を模倣する合成ペプチドを用いて、ＡＣＴ−β−タンパ ク質複合体形成を妨害することができる。このタイプのペプチドはβ−タンパク 質と結合することで合成ペプチド−β−タンパク質複合体を生じ、実質的にβ− タンパク質を“つなぎとめて（ｔｉｅ　ｕｐ）”　、β−タンパク質がＡＣＴと 相互作用できなくする。

本発明のペプチド化合物は、ＡＣＴのプロテアーゼ阻害機能に及ぼす直接または 間接的作用によって生じる効果をさらに有することがある。ＡＣＴはセリンプロ テアーゼ阻害剤であり、アルツハイマーβ−タンパク質はＡＣＴのセリンプロテ アーゼ（例えば、キモトリプシン）阻害能力を阻害することが示されている。し たがって、β−タンパク質、それ自体はプロテアーゼではないがプロテアーゼ阻 害剤を引き寄せるので、タンパク質分解活性を効果的に上昇させることによって （すなわちセリンプロテアーゼが発現するようにＡＣＴの能力を低下させること によって）、プロテアーゼ活性を強化する。

ＡＣＴとβ−タンパク質の相互作用に関するこの見解は、上記２種類のペプチド の投与によってそれぞれ異なる結果が得られることを示唆するものである。ペプ チドがＡＣＴと結合して複合体形成を阻害する場合、そのペプチドはＡＣＴに対 して阻害作用を及ぼし、結果的にβ−タンパク質自体について示唆されているの と同様にプロテアーゼ活性を強化する。合成ペプチドがＡＣＴの阻害活性部位を 模倣してβ−タンパク質に結合する場合、逆の結果が予想される。すなわち、ペ プチドはβ−タンパク質と複合体を形成し、ＡＣＴとの相互作用を阻止する結果 、仮定したβ−タンパク質のプロテアーゼ強化作用をブロックする。次いで、Ａ ＣＴは遊離状態となってプロテアーゼ阻害剤としての機能を発揮する。

本明細書に述べた発見は、異常に高いレベルのＡＣＴ−β−タンパク質複合体を 有する疑いのある人から得られた生検組織などの組織における該複合体の同定を も可能にする。これを利用して、たとえば剖検で得られた脳組織にＡＣＴ−β− タンパク質複合体が含まれているかどうかを決めたり、必要な場合はその量を決 定することもできる。

本発明の合成ペプチドは、生理学的に許容され得る担体（たとえば適当な緩衝液 や生理食塩水）に含ませた形で投与することができる。また、治療に有効な量す なわち用量を送達することができるのであればどのような経路によっても、目的 の効果（複合体形成の抑制）を得るために利用可能な形で投与することができる 。たとえば、本発明の合成ペプチドは、該ペプチドを分解から守る組成物に組み 込んで非経口的（たとえば静脈内投与や筋肉内投与）に投与することができる本 発明の合成ペプチドは、組換え／遺伝子工学技術や化学合成法などの公知の方法 を使ってつくることができる。

Ｔによるキモトリプシンの阻害に及ぼす影響を試験した。試験した合成ペプチド は次のとおりである。

１、アルツハイマーβ−タンパク質のＮ末端部分の１−２８位アミノ酸に対応す るペプチド（図１参照）。

２、アルツハイマーβ−タンパク質のＮ末端部分の１−１２位アミノ酸に対応す るペプチド（図１の最初の１２個のアミノ酸参照）。

３、セリンプロテアーゼ活性領域配列と類似性を全（有しないアルツハイマーβ −タンパク質前駆体の２５８−２７７位アミノ酸に対応する対照ペプチド。

発色性基質サクシニル−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−ニトロアニリドの分 解によってキモトリプシンの活性を測定した。その結果、キモトリプシン活性は ほぼ等モル濃度のＡＣＴの存在下で約９０パーセント低下することがわかった。

プロテアーゼアッセイに先立ちβ−タンパク質のＮ末端部分に由来する２種類の 合成ペプチド（それぞれ１−２８位アミノ酸および１−１２位アミノ酸に対応） のいずれか一方を４倍モル過剰量でＡＣＴに添加すると、ＡＣＴの阻害活性を妨 害する。対照的に、β−タンパク質前駆体の２５８−２７７位アミノ酸に対応す る対照ペプチドはＡＣＴのキモトリプシン阻害能力を変化させない。

結果を図２に示す。各グラフについて示したデータは、０．３μｇのキモトリプ シンの添加に先立ち、ペプチドの存在下または非存在下で０．５μｇ（左）また は０．６μｇ（右）のＡＣＴを１０μｌのＯ，１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７）中で ２０゛Ｃで２分間インキュベートした独立の４回のアッセイの平均値を示してい る。さらに２分間インキュベートした後、反応容量を０．８ｍｌに増加させ、基 質２ｍｇ／ｍｌの１５μＩを加え、０Ｄ４０５において５分間反応を追跡した。

グラフは、キモトリプシン単独の反応速度に対して正規化された反応曲線（すべ ての直線）の相対勾配を比較したものである。ペプチドはキモトリプシンに対し て独立した影響を及ぼさず、それ自体のプロテアーゼ活性やエステラーゼ活性も 示さなかった。

β−タンパク質の合成断片のＡＣＴ阻害能力（図２）は、２種類のタンパク質の 間に少なくとも一時的な複合体が形成されうろことを示している。このような複 合体の安定性は、ＡＣＴを放射標識β−タンパク質断片とともに様々な条件下で インキュベートした後、ポリアクリルアミドゲル電気泳動で複合体形成を分析す ることによって証明することができる。一部の実験では、ゲル電気泳動に先立ち タンパク質架橋剤（ＤＳＳ）を用いて複合体を安定化させているが、架橋がなく ても、ＳＤＳおよびβ−メルカプトエタノール中での蕉沸に対して安定な複合体 が形成される。ＡＣＴに等モル量のキモトリプシンを添加すると、活性部位がブ ロックされ、複合体形成が阻止される。ＡＣＴタンパク質を熱によって変性させ ても、複合体形成が阻止される。プロットしたタンパク質を抗α１−アンチキモ トリプシン抗体によって免疫染色したところ、熱やキモトリプシン処理はいずれ もＡＣＴを破壊しないことがわかった。ＡＣＴに添加したキモトリプシンの量は このペプチドを消化するのに不十分であることが薄層クロマトグラフィーで確認 された。

・く ＦＩＧＵＲＥ　２ アルツハイマーＢ−タンパク質によるＡＣＴのキモトリプシン阻害の低下 補正書の写しく翻訳文）提出書（特許法第１８４条の８）鳴 １、特許出願の表示 ＰＣＴ／ＵＳ　９１１０５９９６ ２、発明の名称 α−アンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体形成妨害方法およびその方法 に使用する合成ペプチド３、特許出願人 住所　アメリカ合衆国　マサチューセッツ　０２１３８ケンブリツジ、マサチュ ーセッツ　アベニュー名称　プレジデント　アンド　フエローズ　イン住所　〒 ５４０　大阪市中央区谷町２丁目８番１号大手前Ｍ２ビル　細円国際特許事務所 （１）補正書の写しく翻訳文）　１通 請求の範囲 １、複合体の１つのメンバーをそのメンバーに特異的に結合する合成ペプチドと 接触させ、それにより第一のメンバーと第二のメンバーとの結合を阻止すること よりなる、第一のメンバーであるα、−アンチキモトリプシンと第二のメンバー であるβ−タンパク質を含む複合体の形成を妨害するイン・ビトロでの方法。

２、α、−アンチキモトリプシンを、セリンプロテアーゼの活性部位の模倣であ りかつα、−アンチキモトリプシンに結合する合成ペプチドと接触させ、それに より合成ペプチド−α１−アンチキモトリプシン複合体を形成させることよりな る、α１−アンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体の形成を妨害するイン ・ビトロでの方法。

３、α１−アンチキモトリプシンを図１に示すようなアルツハイマーアミロイド β−タンパク質のアミノ酸配列の全部または一部を有する合成ペプチドと接触さ せることよりなる、α、−アンチキモトリプシンーβ−タンパク質複合体の形成 を妨害するイン・ビトロでの方法。

４、図１に示すようなアルツハイマーアミロイドβ−タンパク質のアミノ酸配列 の部分が１〜１２位のアミノ酸または１〜２８位のアミノ酸である、請求項３記 載の方法。

５、β−タンパク質を、α１−アンチキモトリプシンの阻害活性部位の模倣であ りかつβ−タンパク質に結合する合成ペプチドと接触させ、それにより合成ペプ チド−α１−アンチキモトリプシン複合体を形成させることよりなる、α１−ア ンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体の形成を妨害するイン・ビトロでの 方法。

６、セリンプロテアーゼの活性部位のアミノ酸配列の模倣でありかつα１−アン チキモトリプシンに結合する合成ペプチド類、およびα１−アンチキモトリプシ ンの阻害活性部位の模倣でありかつβ−タンパク質に結合する合成ペプチド類か ら成る群より選ばれる合成ペプチドであって、治療、例えばα１−アンチキモト リプシン−β−タンパク質複合体の形成の妨害に用いられる合成ペプチド。

７、ＡＣＴに結合する程に図１に示すアルツハイマーβ−タンパク質のアミノ酸 配列の全部または一部とに十分相同であるアミノ酸配列を有する、請求項６記載 の合成ペプチド。

８、図１の１〜１２位のアミノ酸と相同であり、または図１の１〜２８位のアミ ノ酸と相同である、請求項７記載の合成ペプチド。

９、第一のメンバーであるα、−アンチキモトリプシンと第二のメンバーである β−タンパク質を含む複合体の形成をイン・ビボにおいて妨害する薬剤の製造の ための、請求項６〜８のいずれかに記載の合成ペプチドの使用。

１０、アルツハイマー病、ダウン症および通常の老化の治療のための請求項９記 載の使用。

Φく くΣ ニーｃｆ＋！　Σ　０　工 Ｃｘａ−１ａ−Ｃｓ、　−（Ｊ　ＣＪ 口　く　の　く　ψ　ψ ＜−＜＜（ロ　ψ 国際調査報告 １ｍ＋−１−一喝−＾ｎｈｍ−Ｓｓ口ｒ１＃１ｌＣ６１’／ｎｃＯＯｃＦ６１１ １１　ＰＣＴｌｌＳＡｎｌｏ　１１ｕ凶憎争ＭＩａｌ　ｉ−＋２１１　、Ｐｋ　 ＋　２８　Ｇ１＋フロントページの続き （５１）　Ｉｎｔ、Ｃ１，５識別記号　庁内整理番号Ｃ０７Ｋ　９９：００ Ｉ

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. １．複合体の１つのメンバーをそのメンバーに特異的に結合する合成ペプチドと 接触させ、それにより第一のメンバーと第二のメンバーとの結合を阻止すること よりなる、第一のメンバーであるα１−アンチキモトリプシンと第二のメンバー であるβ−タンパク質を含む複合体の形成を妨害する方法。
2. ２．α１−アンチキモトリプシンを、セリンプロテアーゼの活性部位の模倣であ りかつα１−アンチキモトリプシンに結合する合成ペプチドと接触させ、それに より合成ペプチド−α１−アンチキモトリプシン複合体を形成させることよりな る、α１−アンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体の形成を妨害する方法 。
3. ３．α１−アンチキモトリプシンを図１に示すようなアルツハイマーアミロイド β−タンパク質のアミノ酸配列の全部または一部を有する合成ペプチドと接触さ せることよりなる、α１−アンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体の形成 を妨害する方法。
4. ４．図１に示すようなアルツハイマーアミロイドβ−タンパク質のアミノ酸配列 の部分が１〜１２位のアミノ酸または１〜２８位のアミノ酸である、請求項３記 載の方法。
5. ５．図１に示すようなアルツハイマーアミロイドβ−タンパク質のアミノ酸配列 の全部または一部を有する合成ペプチド。
6. ６．請求項５記載の合成ペプチドおよび生理学的に許容され得る担体を有して成 る組成物。
7. ７．セリンプロテアーゼの活性部位のアミノ酸配列の模倣でありかつα１−アン チキモトリプシンに結合する合成ペプチド類、およびα１−アンチキモトリプシ ンの阻害活性部位でありかつβ−タンパク質に結合する合成ペプチド類から成る 群より選ばれる合成ペプチドを個体に投与することよりなる、個体においてα１ −アンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体の形成を妨害する方法。
8. ８．セリンプロテアーゼの活性部位のアミノ酸配列の模倣である合成ペプチドが 、ＡＣＴに結合する程に図１に示すアルツハイマ−β−タンパク質のアミノ酸配 列の全部または一部とに十分相同であるアミノ酸配列を有する、請求項７記載の 方法。
9. ９．ＡＣＴに結合する程に図１に示すアルツハイマ−β−タンパク質領域のアミ ノ酸配列の全部または一部とに十分相同であるアミノ酸配列を有する合成ペプチ ドが、図１の１〜１２位のアミノ酸と相同であり、または図１の１〜２８位のア ミノ酸と相同である、請求項８記載の方法。 α−アンチキモトリプシン−β−タンパク質複合体形成妨害方法およびその方法 に使用する合成ペプチド発明の詳細な説明