JPH06500042A - 微生物不含長期間貯蔵のため赤血球製品を処理する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 微生物不合長期間貯蔵のため赤血球製品を処理する方法本光皿■分立 本発明は一般には血液採取および処理方法に関する。もっと特定の意味において 、本発明は長期間貯蔵に先立ち、赤血球製品からＹｅｒｓｉｎｉａ　ｅｎｔｅｒ ｏｃｏｌｉｔｉｃａのような微生物を除去する方法に関する。

主光里坐宜景 発表された文献は、供血者血液中に採血時少数の微生物の存在を報告している。

Ｍｙｈｒｅ　ｅｔ　ａｌは表１に示すように、静脈切開時工ないし８株のバクテ リア株を検出し、ある種の株はｄあたり２５個より大きい濃度で存在する０Ｍｙ ｈｒｅ　ｅｔ　ａｌ、“Ｂａｃｔｅｒｉｏｃｉｄａｌ　Ｐｒｏｔｐｅｒｔｉｅｓ 　ｏｆ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ、”Ｔｒａｎｓｆｕｓｔ ｏｎ　１４：１１６（１９７４）。

（以下余白） ＪＬ−Ｌ− ９人の正常ドナーから供血された血液の最初の７ｊＥｉ！から分離された微生物 バクテリア　検出例数　バクテリア濃度（Ｎ＝９）　（個／ｄ） Ｄｉｐｔｈｅｒｏｉｄ　ｓｐ、　１　１０コロニー／７ｔｅＳｔａｐｈ、　ｅｐ ｉｄ、　６　１−２００　＋Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ、　９　１−２００　＋Ｍ ４ｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　１　４ Ｓｔａｐｈ、　ａｕｒｅｕｓ　４　１−１００　＋Ｎｅ１ｓｓｅｒｉａ　ｓｐ、 　２　１−１００　＋Ａｌｐｈａ　５ｔｒｅｐ、　２　２　１００　＋５ｔａｐ ｈ、ｓｐ、　１　１ 採血時にはバクテリアが存在し得るけれども、輸血時臨床的に有意義数のバクテ リアの存在はまれにしか遭遇しない。長年にわたり、採血時と輸血の間のドナー 血液中のバクテリア数の減少は白血球および血漿因子の滅菌活性に帰せられてい た。例えばＢｕｃｈｈｏ　１ｚ　ｅｔ　ａｌ、、”Ｂａｃｔｅｒｉａ　Ｐｒｏｌ ｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　５ｔｏｒｅ ｄａｔ　Ｒｏｏｍ　Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ、”ＮＥＪＭ　２８５：４２９　（ １９７１）；およびＰｕｎｓａｌａｎｇ　ｅｔ　ａｌ。

、’Ｇｒｏｕｔｈ　ｏｆ　Ｇｒａｍ−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ａｎｄＧｒａｍ−Ｎｅ ｇａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｃｏｎｃ’ｅｎｔ ｒａｔｅｓ、”Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ２９：５９６　（１９８９）を見よ。

輸血で誘発された敗血症の発生は、血小板−ａｗｉ物（室温で貯蔵される）に比 較して、貯蔵した赤血球（これば貯蔵巾約４℃に冷蔵される）ではより可能性が 少ないと考えられる。しかしなお冷蔵した赤血球の輸血によって微生物Ｙｅｒｓ ｉｎｉａ　ｅｎｔｅｒｏｃ。

１ｉｔｉｃａ（これは”Ｙｅｒｓｉｎｉａ”と呼ばれるであろう）で引き起され た敗血症の報告が存在する。Ｙｅｒｓｉｎｉａは４℃における冷蔵貯蔵の間でも さえ血液中で増殖することができるヒト病原である。貯蔵した血液製品中のＹｅ ｒｓｉｎｊａの存在による敗血症の発生は非常にまれであり、アメリカ合衆国に おいて過去９年間たった約２３例が報告されたに過ぎない。しかしなおその発生 をすべてなくすことが望ましい。

木光里Ω塁！ 本発明は、貯蔵した赤血球製品中のＹｅｒｓｉｎｉａのような微生物の存在の有 意義に減らす血液処理方法を提供する。

本発明の特徴を具体化する方法は、無菌の閉鎖採血システムの一部を形成する第 １の容器内に赤血球を含む血液製品を収集する。該方法は血液製品を約３ないし ５℃の温度へ冷却するように第１の容器中の血液製品を冷蔵する。冷蔵した血液 製品は、約１０ミクロン以下の平均繊維直径とそして約０．７ｇ／ｃｄ以下の嵩 密度を有する合成繊維の塊よりなるインラインフィルター媒体を含んでいる無菌 閉鎖移換システムを使用し、第１の容器から第２の容器へ移換される。該方法は 濾過後からの輸血のため濾過した血液製品を貯蔵容器巾約３ないし５　’Ｃの温 度少なくとも２４時間貯蔵する。

本発明者らは、この指示した方法に従うことにより、採血時赤血球製品中に存在 し得るＹｅｒｓｉｎｉａのような微生物の臨床上有意義な量を実質上排除できる ことを発見した。この指示した方法は貯蔵期間の始めにおいて微生物の臨床上有 意義な量を含まない赤血球製品を提供する。微生物欠乏条件は輸血時まで貯蔵期 間全体を通じて持続する。

この発見は驚異的であり、予期できなかつた。現在の時点で、本発明者らは何故 またはどのようにして本発明はそれが達成する利益を達成するのか正確には知ら ない。

指示した処理方法に使用するフィルター媒体は、全血および赤血球製品から実質 すべての白血球を除去するように作用することが知られている。白血球は貯蔵し た血液製品中に存在する微生物を食べてしまうと思われているので、通常の知識 は２４時間以上の貯蔵の間濾過した白血球欠乏赤血球製品中の微生物の数の増加 を予期するであろう。驚くことに、本発明者らは逆が真実であることを発見した 。濾過した赤血球製品は、やはり白血球欠乏条件にあるにもかかわらず、２４時 間をよく上廻る貯蔵期間の間微生物の臨床上有意義な量を含まず続ける。

本発明の他の特徴および利益は、以下の説明、図面および請求の範囲を検討する とき明瞭になるであろう。

凹皿■旦員星説里 第１図は、本発明の特徴を具体化する血液処理アセンブリおよび血液移換アセン ブリを含んでいる採血システムの概略図である。

第２図は、望まない成分を血球から除去する目的のため血液処理アセンブリへ血 液移換アセンブリを接続した第１図に示したシステムの概略図である。

第３図は、今や望まない成分を含まない長期間貯蔵に供し得る赤血球を持った、 第１図に示したシステムの概略図である。

第４図は、第１図に示したシステムに関連する無菌接続システムの拡大側面図で ある。

しい　の− 採血システム１０が第１図に示されている。システム１ｏは血液採取、処理およ び貯蔵アセンブリ１２と、移換アセンブリ１４を含む。

第１図に図示した好ましい具体例においては、移換アセンブリ１４は血液処理ア センブリ１２へ接続されていない当初別体のサブアセンブリを含む。しかしなが ら、移換アセンブリ１４は処理アセンブリ１２の一体部分として製作できること を認識すべきである。

血液採取アセンブリ１２は、−次バッグもしくは容器１６と、１個以上の一体に 接続した移換バッグもしくは容器１８および２０を有する多数血液バッグシステ ムを含む。使用時、−次バッグ１６（これは典型的にはドナーバッグとも呼ばれ る）は、静脈切開針２４を支承する一体に取付けたドナーチューブ２２を通って ドナーがら全血を受入れる。適当な抗凝固剤Ａが一次バッグ１６中に収容される 。

サテライトバッグ２６が一体に取付けたチューブ２８によって一次ハッグ１６へ 取付けられる。サテライトバッグ２６は赤血球のための適当な貯蔵溶液Ｓを収容 する。そのような溶液の−っはＧｒ。

ｄｅ　ｅｔ　ａｌの米国特許第４，２６７．２６９号に記載されている。

移換バッグ１８および２０は一体に取付けた移換チューブ３０および３２により 一次バッグ１６へ取付けられている。移換バッグ１８および２０は処理のため血 小板および血漿血液成分を収容することを意図する。第１の移換バッグ１８は最 終的に血小板濃縮物の貯蔵容器として役立ち、第２の貯蔵容器は最終的に血小板 プア血漿のための貯蔵容器として役立つ。

処理アセンブリ１２に関連するすべてのバッグおよびチューブは、ジー２−エチ ルへキシルフタレート（ＤＥＨＰ）で可塑化されたポリ塩化ビニルのような慣用 の承認された医療グレードプラスチック材料からつくることができる。代わりに 、血小板濃縮物を貯蔵することを意図する第１の移換容器１８はポリオレフィン 材料（Ｇａｊｅｗｓｋｉ　ｅｔ　ａｌ、米国特許第４，１４０，１６２号に開示 されているような）、またはトリー２−エチルへキシルトリメリテート（ＴＥＨ ＴＨ）で可塑されたポリ塩化ビニル材料でつくることができる。これらの材料は 、ＤＥＨＰ可塑化ポリ塩化ビニル材料に比較するとき、血小板貯蔵にとって有益 な大きいガス透過性を有する。

血液採取アセンブリは、一旦滅菌すれば合衆国における適用し得る標準によって 判定した時、無菌の“閉鎖”システムを構成する。

全血が採血され、アセンブリ１２内でその種々の治療成分に分離される。これら の治療成分は、典型的には赤血球、血漿および血小板である。使用において、採 取された全血は一次バッグ１６内で赤血球と血小板リッチ血漿とに遠心分離され る。血小板リッチ血漿は慣用技術によって赤血球を一次バッグ中に残して第１の 移換バッグ１８へ移換される。移換バング１８および２０はチューブ３０に密封 された切り離しシール（このシールは第２および３図に“Ｘ″によって概略的に 示されている）を形成する慣用ヒートシール器具（例えばバクスター、ヘルスケ ア、コーホレイシランによって販売されているＨｅｍａｔｒｏｎ高周波シーラー ）を使用し、無菌！！様で切り離される。

赤血球貯蔵溶液Ｓが一次容器１６中へ移換され、次にサテライトバッグ２６は切 り離しシール“Ｘ”を使用して（第２図に示すように）切り離される。ドナーチ ューブ２２も同じ１！様でシールされ、切り離される（やはり第２図に示すよう に）。

血小板リッチ血漿は第１の移換バッグ１８内で血小板濃縮物および血小板プア血 漿への後の遠心分離を受けることができる。血小板プア血漿は血小板濃縮物を第 １の移換バッグ１日中に残して第２の移換バッグ２０へ移換される。移換バッグ １８および２０は、次に採取した成分の後の貯蔵のためチューブ３２中の切り離 しシール“Ｘ”　（第２図に示すような）によって分離される。

移換アセンブリ１４は貯蔵容器３４および関連する流体流路３６を含んでいる。

随意の空気排出路３８も設けられる（第１〜３図に点線で示すように）。移換ア センブリ１４は流路３６に関連する慣用のローラークランプ４６を含む。移換ア センブリ１４は随意の空気排出路３８に関連する慣用のローラークランプも含ん でいる。

移換容器３４および流路３６および３８は、すべてＤＥＨＰ可塑化ポリビニルの ような低コスト医療グレードプラスチック材料でつくられる。

流路３６は、冷蔵した全血および赤血球を含む他の冷蔵した血液製品から望まな い成分を分離するためのインライン濾過器具４０を含んでいる。

図示した具体例においては、濾過器具４０は濾過媒体４４を収容しているハウジ ング４２を含む、濾過媒体４４は６．１０ミクロン以下の平均繊維直径と、約０ ．７ｇ／ｃｄ以下の嵩密度を有する合成繊維の塊よりなる。このタイプの濾過媒 体は作中らの米国特許第４゜３３０．４１０号および渡辺らの米国特許第４，７ ０１，２６７号に記載されており、その両者をここに参照として取入れる。この タイプの濾過媒体を持つフィルターは、５ｅｐａｃｅｌｌ　Ｒ−５００Ｌｅｕｋ ｏｄｅｐｌｅｔｉｏｎ　Ｆｉｌｔｅｒなる商標のもとにバクスター、ヘルスケア 、コーポレイションのフェンウオール部門から商業的に提供販売されている。

図示した好ましい具体例においては、接続アセンブリ４８が当初は別体の血液採 取および移換アセンブリ１２および１４に付属する。

接続アセンブリ４８は移換アセンブリ１４の血液採取アセンブリ１２への選択的 接続を許容する。一旦流れ制御器具４６を開いて（そして随意の流れ制限器具４ ７を閉じ）（第２図に示すように）接続すれば、赤血球は一次容器１６から流路 ３６および濾過器具４０を通って貯蔵容器３４へ運ばれることができる。

二つのアセンブリ１２および１４が依然接続されている間に、流れ制御器具４６ を閉じることができ、捕捉された空気を貯蔵容器３４から排出路３８を通って一 次容器１６へ排出するため随意の流れ制御器具４７を開くことができる。

次に貯蔵容器３４は第３図に示すように移換アセンブリから取外される。濾過し た赤血球製品は分離された容器３４中に貯蔵される。

図示した好ましい具体例においては、濾過アセンブリ１４は、一旦滅菌すると適 用し得る合衆国標準によって判定し、無菌の“閉鎖”システム（処理および貯蔵 アセンブリ１２のように）を構成する。

この態様において、接続アセンブリ４８は、採取および濾過アセンブリを閉鎖シ ステム１２および１４の無菌完全性を保存する態様で接続し、脱着するように働 く。

もっと詳しくは、接続アセンブリ４日は二つの番いになった無菌接続器具（６６ ａおよび６６ｂと指定）を含んでいる。器具６６ａおよび６６ｂ（第４図を見よ ）は、グランゾウらの米国特許第４゜１５７．７２３号および第４，２６５，２ ８０号に記載されており、それらを参照としてここに取入れる。一方の器具６６ ａは一部バッグ１６へ取付けたチューブ６８によって支承される。他方の器具６ ６ｂは移換アセンブリ１４の流路３６の端部５４に支承される。

第４図に示すように、無菌接続器具６６ａおよび６６ｂは、各自一般に放射エネ ルギー吸収性材料でつくった通常開じている溶融し得る壁７２を有するハウジン グ７０を含んでいる。ハウジング７０は壁７２が対面接触するように番いの差し 込みカップラー７４ａおよび７４ｂによって合体される。接続し放射エネルギー へ曝露するとき、壁７２はバクテリアの破壊を生じ、同時に接続したハウジング ７０間に流路を開く温度において溶融する。

器具６６ａおよび６６ｂは関連するアセンブリ１２および１４を大気との連通か ら平常は閉鎖し、そして流路が形成される時に相互接続する流路に隣接した区域 を滅菌するように作用する活性滅菌ステップと共に開かれる。これら器具６６ａ および６６ｂは相互接続する流路をそれが形成される時に密閉シールする。この 無菌接続器具６６ａおよび６６ｂの使用は、百方中１個を上廻る非無菌性の確率 を保証する。器具６６ａおよび６６ｂはこのように二つのアセンブリ１２および １４をどちらの無菌完全性をも損なうことなしに接続するのに役立つ。

代わりに、接続アセンブリ４日にスペンサーの米国特許第４，４１２．８３５号 に開示されている無菌接続システム（図示せず）よりなることができる。この構 造において、このシステムは一部バッグ１６の移換チューブ３０と濾過アセンブ リ１４のチューブ端部分５４０間に溶融したシールを形成する。冷却すれば無菌 溶接が形成される。

直接に記載した濾過媒体４４は、冷蔵した全血および赤血球から白血球および血 小板を除去するのに適していることが知られている。

本発明者らは、濾過媒体４４は冷蔵した赤血球製品から長期貯蔵に先立ちＹｅｒ ｓｉｎｉａのような微生物をも除去することを発見した。本発明が提供するこの 微生物欠如条件は、約３ないし５°Ｃの温度において２４時間をはるかに超える 時間の赤血球の長期貯蔵の間接続する。

使用において、全血が血液採取アセンブリ１２の一部をなすドナーバッグ１６中 に採取される。血小板リンチ血漿の除去および移換バッグの取外し後（第２図を 見よ）、赤血球はドナーバッグ１６中に残る。貯蔵溶液Ｓがバッグ２２からドナ ーバッグ１６中へ運ばれ、バッグ２６が取外される。得られた赤血球製品は、製 品を約３ないし５℃の温度へ冷却するためにドナーバッグＩ６中で冷蔵される。

冷蔵に続いて、ドナーバッグ１６は関連する無菌接続器具６６ａを用いて移換ア センブリ１４へ接続される。ローラークランプ４６が開かれ、ローラークランプ ４７が閉じられる。

第２図に示すように、ドナーバッグ１６は貯蔵バッグ３４の上方に持ち上げられ 、冷蔵した赤血球が重力流によってドナーバッグ４０から流路３６および濾過器 具４０を通って貯蔵バッグ３４へ運ばれる。微生物は濾過器具４０によって赤血 球から除去される。白血球もこのプロセスにおいて除去される。

貯蔵バッグ３４中に空気が捕捉されたならば、以前記載した態様で空気を排出路 ３８を通ってドナーバッグ１６中へ移すことが必要となり得る。

次に貯蔵バッグ３４は移換アセンブリ１４から分離される。これは移換アセンブ リ１４のチューブ中に切り離しシール“Ｘｏ“　（第３図に示すような）を形成 することによって達成される。

白血球欠如赤血球製品は今やＹｅｒｓｉｎｉａのような微生物を実質上台まず、 貯蔵バッグ３４内で約３ないし５°Ｃの温度で２４時間以上輸血前に貯蔵される 。

以下の実施例は本発明の驚異的なそして予期されない結果を示す。

実蓋班 異なるドナーから全血の複数単位が第１図に示したような別々の無菌閉鎖マルチ プル血液バッグシステムに採取された。採取３０分以内に無菌条件を用いて試験 単位が調製された。各試験単位は二人の異なるドナーからのＡＢＯ適合性全血の ２単位をプールすることによってつくられた。これらの試験単位は以後の結果表 ２ないし５においてプールＡないしＬとして同定される。

全血のプールを４段階の異なる接種レベルでＹｅｒｓｉｎｉａで接種した。約１ 個／ｄ　（プールＡ、ＢおよびＣ）、約２〜３／ｉ（ブー／ｌ／Ｄ、ＥおよびＦ 〕　；約３０個／Ｒ１（プールＧ　、　Ｈ＃　ヨびｒ）。

約１３５個／−（プールＪ、ＫおよびＬ）。各接種しプールした試験単位は良く 混合した。

１０個／ｄより下の接種レベルは無症候性のまたは他の点で見掛は上健康な予期 されるドナーの血液中に存在し得るＹｅｒｓｉｎｉａの量を代表するものと信じ られる。異型性症状をかくため、これら人々は予期される血液ドナーのプールへ 加わることが許容されたであろう。それ故、これら無症候性レベルにおいてＹｅ ｒｓｉｎｉａを含んでいる血液が採取される可能性がある。

１０個／ｄ以上の高接種レベルは、もし予期されるドナーの血液中に存在すれば 、それ自体熱病または他の異型性生理症候として現れるであろうＹｅｒｓｉｎｉ ａＯ量を代表する。異型性症候は日常的な採血前検査によって検出され、これら の症候人を予期される血液ドナーから排除する。それ故、Ｙｅｒｓｉｎｉａをこ れらの高い症候レベルで含む血液が採血される可能性はない。

混合後、各接種した全血のプールは単一単位ペア（以後の結果表において単位Ａ およびＢと呼ぶ）に分けられた。各単位ペアは定量的培養（結果表の“保持前” カラムに示すように）のためにサンプリングされた。接種したプールされた単位 ペアは室温で７時間保持され、定量的培養のためにサンプリングされた（結果表 の“保持後”のカラムに示すように）。

めいめいの全血の接種した単位ペアは、本明細書に記載した態様で血小板リッチ 血漿および赤血球に処理された。Ｇｒｏｄｅ　ｅｔａｌの米国特許第４，２６７ ．２６９号に記載されている赤血球貯蔵溶液がめいめいの単位ペアへ加えられた 。

得られためいめいの接種した単位ペアのための赤血球製品は４°Ｃへ１８ないし ２４時間冷蔵された。めいめいの接種した単位ペアのための赤血球が定量的培養 のためにサンプリングされた（結果表の“濾過前第１日”のカラムに示すように ）。

めいめいの赤血球製品ペアの単位Ａが前記したインライン濾過器具を通って他の 貯蔵容器へ移換された。赤血球製品単位Ａが定量的培養のためにサンプリングさ れた（結果表の“濾過後第１日”のカラムに示すように）。単位Ａは次に３ない し５°Ｃで貯蔵された。定量的培養物を貯蔵７，１４，２１，２８．３５および ４２日の終わりに得た（結果表の日のカラムに示すように）。

めいめいの赤血球製品ペアの単位Ｂは濾過を受けることなく３ないし５°Ｃにお いて対照として貯蔵された。定量的培養物は貯蔵７゜１４．２１，２８．３５お よび４５日の終わりに得た（結果表の日のカラムに示すように）。

研究の結果を以下の結果表２ないし５に要約する。

以上の結果表は、採取時赤血球製品中に存在するＹｅｒｓｉｎｉａのような微生 物の臨床上有意義な量は、本発明に従って濾過することにより排除または有意義 に減らすことができることを示す。

無症候性または他のように見掛は上健康なドナーを代表する接種レベルにおいて は（結果表２および３を見よ）、貯蔵期間の開始において本発明に従って形成さ れた微生物欠如条件は少なくとも４２日間の長い貯蔵期間接続する。約３０個／ ｄの高い症候性接種レベルにおいてされも（結果表４）、微生物欠如条件は濾過 後貯蔵の２８日後に観察される。これらの接種レベルにおいては、本発明に従っ て濾過されなかった赤血球製品は、貯蔵約７８目までにＹｅｒｓｉｎｉａ微生物 の臨床上有意義な量を示し、貯！２１日目までにＹｅｒｓｉｎｉａ微生物の融合 性生育を示した。

症候性または他の見掛は上健康なドナーに存在し得るよりも１０倍多いＹｅｒｓ ｉｎｉａ接種レベルにおいてさえも（結果表５を見よ）、本発明の有益な結果は 少なくとも７日間の貯蔵期間観察される。

本発明の種々の特許請求の範囲に述べられている。

〜 国際調査報告

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. １．長期間貯蔵に先立ち微生物を除去するため赤血球を含有する血液製品を処理 する方法であって、 赤血球を含む血液製品を無菌の閉鎖された血液採取システムの一部をなす第１の 容器内に採取するステップと、第１の容器中の該血液製品を約３ないし５℃の温 度へ冷却するように冷蔵するステップと、 貯蔵容器と該貯蔵容器中へ導く流路を含み、そして約１０ミクロン以下の平均繊 維直径および約０．７ｇ／ｃｍ２以下の嵩密度を有する合成繊維の塊よりなるイ ンライン濾過媒体を含んでいる無菌の閉鎖された移換システムと、そして前記第 １の容器の間の連通を開くステップと、 冷蔵した血液製品を前記第１の容器から前記貯蔵容器へ、血液製品から微生物を 除去するため前記濾過媒体を通って運ぶステップと、 濾過した微生物欠如血液製品を前記貯蔵容器中で約３ないし５℃の温度において 濾過後２４時間をこえる期間貯蔵するステップを含むことを特徴とする血液製品 を処理する方法。
2. ２．移換システムとの連通を開くステップは、分離および血液採取システムに付 属する無菌接続アセンブリを使用して、移換システムを血液採取システムへ取付 けるステップを含んでいる請求項１の方法。
3. ３．貯蔵期間の終わりに濾過した微生物欠如血液製品を輸血するステップを含ん でいる請求項１の方法。