JPH0641058A - ２５位水酸基に残基を有する新規ビタミンｄ誘導体類、その製造法及びその用途 - Google Patents
２５位水酸基に残基を有する新規ビタミンｄ誘導体類、その製造法及びその用途Info
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- JPH0641058A JPH0641058A JP19392792A JP19392792A JPH0641058A JP H0641058 A JPH0641058 A JP H0641058A JP 19392792 A JP19392792 A JP 19392792A JP 19392792 A JP19392792 A JP 19392792A JP H0641058 A JPH0641058 A JP H0641058A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 式（１）
【化１】
（ただし、Ｒ1 およびＲ3 は水素原子、水酸基、もしく
は、保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ2 は水酸基、
もしくは、保護された水酸基を表し、ｎは１〜５の整数
を表し、Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、アミノ基、あ
るいは、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基またはビオチ
ン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。）で表さ
れるビタミンＤ誘導体、およびその製造法、並びにそれ
を用いたビタミンＤ類の測定法。 【効果】 特に、活性型ビタミンＤ類の測定において有
用な抗体を作製するのに適するハプテンとして使用でき
る。さらに、高い感度と特異性を有する簡便な測定方法
となし得る有用な標識ビタミンＤ誘導体等を提供するも
のである。したがって、本発明の測定法は、微量成分の
測定が必要な分野、例えば臨床的な内分泌検査において
有用である。
は、保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ2 は水酸基、
もしくは、保護された水酸基を表し、ｎは１〜５の整数
を表し、Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、アミノ基、あ
るいは、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基またはビオチ
ン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。）で表さ
れるビタミンＤ誘導体、およびその製造法、並びにそれ
を用いたビタミンＤ類の測定法。 【効果】 特に、活性型ビタミンＤ類の測定において有
用な抗体を作製するのに適するハプテンとして使用でき
る。さらに、高い感度と特異性を有する簡便な測定方法
となし得る有用な標識ビタミンＤ誘導体等を提供するも
のである。したがって、本発明の測定法は、微量成分の
測定が必要な分野、例えば臨床的な内分泌検査において
有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ビタミンＤ類の側鎖の
２５位水酸基への化学的修飾によって得られた新規誘導
体、その製造法、及びその用途に関する。
２５位水酸基への化学的修飾によって得られた新規誘導
体、その製造法、及びその用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】生体にとってカルシウムとリン酸塩の代
謝制御に関わる物質として、活性型ビタミンＤの重要性
は既に多くの特許や一般文献中の開示を通じて十分認識
されており、活性型ビタミンＤ誘導体は、カルシウム代
謝疾患と関連の骨疾患の治療薬として臨床的用途の増加
をみている。
謝制御に関わる物質として、活性型ビタミンＤの重要性
は既に多くの特許や一般文献中の開示を通じて十分認識
されており、活性型ビタミンＤ誘導体は、カルシウム代
謝疾患と関連の骨疾患の治療薬として臨床的用途の増加
をみている。
【０００３】ビタミンＤ誘導体、特に活性型ビタミンＤ
誘導体を治療薬として用いる場合には、その薬効や毒性
等の追求のために、生体内におけるこれらのビタミンＤ
代謝物の測定が必要である。また生体内に存在する各種
のビタミンＤ代謝物の濃度の測定結果から、各種疾患の
診断鑑別が行なわれている（日本臨床、４７、６０８−
６１１、１９８９）。
誘導体を治療薬として用いる場合には、その薬効や毒性
等の追求のために、生体内におけるこれらのビタミンＤ
代謝物の測定が必要である。また生体内に存在する各種
のビタミンＤ代謝物の濃度の測定結果から、各種疾患の
診断鑑別が行なわれている（日本臨床、４７、６０８−
６１１、１９８９）。
【０００４】このビタミンＤ代謝物の検出法は、検出す
べき代謝物に対する親和力、及び特異性を有するビタミ
ンＤ結合性を有する受容体を必要とし、このビタミンＤ
結合性を有する受容体としては、ビタミンＤ類に対する
抗体や、活性型ビタミンＤ結合蛋白（１，２５（ＯＨ）
2 Ｄレセプター）またはビタミンＤ結合蛋白（ＤＢＰ）
等が挙げられる。
べき代謝物に対する親和力、及び特異性を有するビタミ
ンＤ結合性を有する受容体を必要とし、このビタミンＤ
結合性を有する受容体としては、ビタミンＤ類に対する
抗体や、活性型ビタミンＤ結合蛋白（１，２５（ＯＨ）
2 Ｄレセプター）またはビタミンＤ結合蛋白（ＤＢＰ）
等が挙げられる。
【０００５】ビタミンＤ類に対する好ましい抗体を作製
するため、従来から種々のハプテンの開発が行われてき
た（Ｊ．ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．
２８，Ｎｏ．６，７８５−８０１，１９８７）。これら
のハプテンにおける免疫原担体蛋白質とのカップリング
位置としては、従来３位、１位、２５位の水酸基、及び
２５位、２２位、１１位等の炭素が用いられている。こ
のハプテンのカップリング位置が相違すると、得られる
抗体の特異性も異なることが知られており、特に、活性
型ビタミンＤ代謝物において活性部位であるＡ環の１位
水酸基に対して親和力、特異性が高い抗体を得ようとす
る場合、その１位または３位の水酸基に対して遠位の部
位から分枝させたハプテンが有効であるという経験則か
らすれば側鎖から分枝させることが望ましい。
するため、従来から種々のハプテンの開発が行われてき
た（Ｊ．ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．，ｖｏｌ．
２８，Ｎｏ．６，７８５−８０１，１９８７）。これら
のハプテンにおける免疫原担体蛋白質とのカップリング
位置としては、従来３位、１位、２５位の水酸基、及び
２５位、２２位、１１位等の炭素が用いられている。こ
のハプテンのカップリング位置が相違すると、得られる
抗体の特異性も異なることが知られており、特に、活性
型ビタミンＤ代謝物において活性部位であるＡ環の１位
水酸基に対して親和力、特異性が高い抗体を得ようとす
る場合、その１位または３位の水酸基に対して遠位の部
位から分枝させたハプテンが有効であるという経験則か
らすれば側鎖から分枝させることが望ましい。
【０００６】従来、側鎖から分枝させたハプテンとして
は、上記２５位水酸基よりヘミサクシネートを形成させ
た誘導体（Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｃｒ．，１８，１５１−１
６５，１９８３）、２５位炭素からオキシムを形成させ
た誘導体（Ｓｔｅｒｉｏｄ，４６，７４１−７５４，１
９８５、特表昭５６−５００６１１号）、２２位からカ
ルボン酸を伸長させた誘導体（特表昭５７−８０３４１
号、特開昭５８−１９３４６３）の他に、２３位、及
び、２４位のカルボン酸誘導体が挙げられる（Ｓｔｅｒ
ｏｉｄ，４６，７４１−７５４，１９８５、及び、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，４
３１−４３６，１９８３、特表昭５５−５０１１００
号）。測定対象のビタミンＤ代謝物に対して、その基本
的な構造に差異が少ない程、そのハプテンを用いて得ら
れる抗体が測定対象のビタミンＤ代謝物に対して高い親
和性を有するので有利であると考えられ、その観点から
すると、上記のこれらの誘導体の中で、活性型ビタミン
Ｄの完全な全構造を有する２５位水酸基のヘミサクシネ
ート誘導体が、ハプテンとして最も好ましいということ
ができる。
は、上記２５位水酸基よりヘミサクシネートを形成させ
た誘導体（Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｃｒ．，１８，１５１−１
６５，１９８３）、２５位炭素からオキシムを形成させ
た誘導体（Ｓｔｅｒｉｏｄ，４６，７４１−７５４，１
９８５、特表昭５６−５００６１１号）、２２位からカ
ルボン酸を伸長させた誘導体（特表昭５７−８０３４１
号、特開昭５８−１９３４６３）の他に、２３位、及
び、２４位のカルボン酸誘導体が挙げられる（Ｓｔｅｒ
ｏｉｄ，４６，７４１−７５４，１９８５、及び、Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．，４
３１−４３６，１９８３、特表昭５５−５０１１００
号）。測定対象のビタミンＤ代謝物に対して、その基本
的な構造に差異が少ない程、そのハプテンを用いて得ら
れる抗体が測定対象のビタミンＤ代謝物に対して高い親
和性を有するので有利であると考えられ、その観点から
すると、上記のこれらの誘導体の中で、活性型ビタミン
Ｄの完全な全構造を有する２５位水酸基のヘミサクシネ
ート誘導体が、ハプテンとして最も好ましいということ
ができる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ところが、前記の２５
位水酸基のヘミサクシネート誘導体は、抗体作製におい
て動物に感作投与した際にそのヘミサクシネートのエス
テル結合が生体由来のエステラーゼで切断分解され、ハ
プテンとしては不適当であると考えられる。しかもこの
ヘミサクシネート誘導体は、ビタミンＤの前駆体である
ステロイド誘導体においてその２５位水酸基へ導入した
後、光反応により開環させてビタミンＤへ変換すること
により得られるものであって、ステロイドを出発原料と
した長い合成ステップを経て調製されるという問題があ
った。
位水酸基のヘミサクシネート誘導体は、抗体作製におい
て動物に感作投与した際にそのヘミサクシネートのエス
テル結合が生体由来のエステラーゼで切断分解され、ハ
プテンとしては不適当であると考えられる。しかもこの
ヘミサクシネート誘導体は、ビタミンＤの前駆体である
ステロイド誘導体においてその２５位水酸基へ導入した
後、光反応により開環させてビタミンＤへ変換すること
により得られるものであって、ステロイドを出発原料と
した長い合成ステップを経て調製されるという問題があ
った。
【０００８】ところでまた、前述の新規なハプテンの開
発の目的とは別に、ビタミンＤ類の測定に際し用いられ
る標識ビタミンＤ誘導体を検討し、従来公知の標識ビタ
ミンＤ誘導体ではなし得なかった、１，２５（ＯＨ）2
Ｄレセプターを含む種々のビタミンＤ結合性を有する受
容体と任意の組み合わせが可能な、新規な標識ビタミン
Ｄ誘導体を開発することも必要であると考えられる。
発の目的とは別に、ビタミンＤ類の測定に際し用いられ
る標識ビタミンＤ誘導体を検討し、従来公知の標識ビタ
ミンＤ誘導体ではなし得なかった、１，２５（ＯＨ）2
Ｄレセプターを含む種々のビタミンＤ結合性を有する受
容体と任意の組み合わせが可能な、新規な標識ビタミン
Ｄ誘導体を開発することも必要であると考えられる。
【０００９】従来、標識ビタミンＤ誘導体の標識として
は、トリチウム（ 3Ｈ）放射性標識や、放射性ヨード
（125 Ｉ）標識が一般的に使用されている。放射性ヨー
ド標識は、トリチウム放射性標識と違って、操作の煩雑
なシンチレーションを行う必要がなく、簡単なガンマカ
ウンターにより測定ができることから、放射性標識とし
ては、トリチウム（ 3Ｈ）放射性標識物より放射性ヨー
ド（125 Ｉ）標識物の方が使用し易い。
は、トリチウム（ 3Ｈ）放射性標識や、放射性ヨード
（125 Ｉ）標識が一般的に使用されている。放射性ヨー
ド標識は、トリチウム放射性標識と違って、操作の煩雑
なシンチレーションを行う必要がなく、簡単なガンマカ
ウンターにより測定ができることから、放射性標識とし
ては、トリチウム（ 3Ｈ）放射性標識物より放射性ヨー
ド（125 Ｉ）標識物の方が使用し易い。
【００１０】従来知られている放射性ヨード標識ビタミ
ンＤ誘導体としては、本発明者及びブイヨンらによる報
告（特開平２−２７４号、特開平２−１０１０６０号、
特開平２−１０４５７０号、および、特開平２−２６２
５５５号）に開示された、ビタミンＤの１位、３位、ま
たは２４位の水酸基もしくは１１位の炭素原子に放射性
ヨード標識残基の導入された放射性ヨード標識ビタミン
Ｄ誘導体が挙げられる。しかしながら、これら公知の放
射性ヨード標識ビタミンＤ誘導体においては、抗体、ま
たはＤＢＰとの組み合わせによりビタミンＤ類を測定し
ており、特に活性型ビタミンＤ類に対して親和性及び特
異性が高い１，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプターとの組み合
わせは不可能であった。また、放射性同位元素を扱わな
くて済むことから設備等において簡便な方法として、酵
素標識ビタミンＤ誘導体を使用する方法が挙げられる
が、従来知られている酵素標識ビタミンＤ誘導体として
は、２５ＯＨＤ3 の３位水酸基よりグルタルアルデヒド
により酵素と架橋結合させた標識化合物（Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．，９８，９９１，１９８５）が挙げられる。し
かしながら、この酵素標識ビタミンＤ誘導体において
も、上記と同様に親和性及び特異性が十分なものはなか
った。
ンＤ誘導体としては、本発明者及びブイヨンらによる報
告（特開平２−２７４号、特開平２−１０１０６０号、
特開平２−１０４５７０号、および、特開平２−２６２
５５５号）に開示された、ビタミンＤの１位、３位、ま
たは２４位の水酸基もしくは１１位の炭素原子に放射性
ヨード標識残基の導入された放射性ヨード標識ビタミン
Ｄ誘導体が挙げられる。しかしながら、これら公知の放
射性ヨード標識ビタミンＤ誘導体においては、抗体、ま
たはＤＢＰとの組み合わせによりビタミンＤ類を測定し
ており、特に活性型ビタミンＤ類に対して親和性及び特
異性が高い１，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプターとの組み合
わせは不可能であった。また、放射性同位元素を扱わな
くて済むことから設備等において簡便な方法として、酵
素標識ビタミンＤ誘導体を使用する方法が挙げられる
が、従来知られている酵素標識ビタミンＤ誘導体として
は、２５ＯＨＤ3 の３位水酸基よりグルタルアルデヒド
により酵素と架橋結合させた標識化合物（Ｊ．Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ．，９８，９９１，１９８５）が挙げられる。し
かしながら、この酵素標識ビタミンＤ誘導体において
も、上記と同様に親和性及び特異性が十分なものはなか
った。
【００１１】このように、従来の標識ビタミンＤ誘導体
においては、ビタミンＤ結合性を有する受容体を広く選
択することができず、測定対象のビタミンＤ類の種類に
より最も好ましい組み合わせを採用し得ないことから、
ひいては感度や特異性において不充分なものであった。
したがって、好ましいハプテンや好ましい標識物に誘導
可能な全く新しいビタミンＤ誘導体の開発が求められて
いた。
においては、ビタミンＤ結合性を有する受容体を広く選
択することができず、測定対象のビタミンＤ類の種類に
より最も好ましい組み合わせを採用し得ないことから、
ひいては感度や特異性において不充分なものであった。
したがって、好ましいハプテンや好ましい標識物に誘導
可能な全く新しいビタミンＤ誘導体の開発が求められて
いた。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
点を鋭意研究の結果、ビタミンＤ類に対して、ω−ハロ
ゲノアルコキシメチルハライドを反応せしめることによ
り、簡便かつ高収率で該ビタミンＤ類の２５位水酸基を
直接修飾し、これにより製造されるビタミンＤが安定で
あること、好ましいハプテンや好ましい標識物に誘導可
能であることを確認し、本願における発明を完成するに
至った。
点を鋭意研究の結果、ビタミンＤ類に対して、ω−ハロ
ゲノアルコキシメチルハライドを反応せしめることによ
り、簡便かつ高収率で該ビタミンＤ類の２５位水酸基を
直接修飾し、これにより製造されるビタミンＤが安定で
あること、好ましいハプテンや好ましい標識物に誘導可
能であることを確認し、本願における発明を完成するに
至った。
【００１３】即ち、本発明は、次の一般式（１）
【００１４】
【化７】
【００１５】（ただし、Ｒ1 およびＲ3 は水素原子、水
酸基、もしくは、保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ
2 は水酸基、もしくは、保護された水酸基を表し、ｎは
１〜５の整数を表し、Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、
アミノ基、あるいは、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基
またはビオチン標識残基で置換された置換アミノ基を表
す。）で表されるビタミンＤ誘導体、およびその製造法
である。
酸基、もしくは、保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ
2 は水酸基、もしくは、保護された水酸基を表し、ｎは
１〜５の整数を表し、Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、
アミノ基、あるいは、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基
またはビオチン標識残基で置換された置換アミノ基を表
す。）で表されるビタミンＤ誘導体、およびその製造法
である。
【００１６】この式（１）のＲ1 、Ｒ2 およびＲ3 にお
ける保護基としては、２５位水酸基へのω−ハロゲノア
ルコキシメチルハライドの反応に際して、脱離、もしく
は応しない安定性を有し、必要に応じて、ビタミンＤ本
体の化学構造を変化させない条件において容易に脱離す
ることができるものであれば特に限定されず、当業者は
容易に公知の保護基を選択できるものである。なお、ビ
タミンＤ本体の化学構造を変化させず容易に脱離する条
件としては、例えば、アルカリ条件（例えば、ｐＨ９以
上）、フッ素イオン存在下、還元反応等が例示される。
さらに本願では、保護基としては、少なくともある特定
の条件で２級ＯＨには選択的に保護基が導入され、３級
ＯＨ（２５位水酸基）には導入されないものであること
が好ましい。さらに具体的には、この保護基としては、
例えば、シリル保護基、エステル保護基等が挙げられる
が、特に脱保護において緩和な条件が選択できるシリル
保護基が簡便で利用しやすく使用において好ましい。
ける保護基としては、２５位水酸基へのω−ハロゲノア
ルコキシメチルハライドの反応に際して、脱離、もしく
は応しない安定性を有し、必要に応じて、ビタミンＤ本
体の化学構造を変化させない条件において容易に脱離す
ることができるものであれば特に限定されず、当業者は
容易に公知の保護基を選択できるものである。なお、ビ
タミンＤ本体の化学構造を変化させず容易に脱離する条
件としては、例えば、アルカリ条件（例えば、ｐＨ９以
上）、フッ素イオン存在下、還元反応等が例示される。
さらに本願では、保護基としては、少なくともある特定
の条件で２級ＯＨには選択的に保護基が導入され、３級
ＯＨ（２５位水酸基）には導入されないものであること
が好ましい。さらに具体的には、この保護基としては、
例えば、シリル保護基、エステル保護基等が挙げられる
が、特に脱保護において緩和な条件が選択できるシリル
保護基が簡便で利用しやすく使用において好ましい。
【００１７】シリル残基としては、具体的にはｔ−ブチ
ルジメチルシリル基、（トリフェニルメチル）ジメチル
シリル基、イソプロピルジメチルシリル基、メチルジイ
ソプロピルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基等
が挙げられるが、好ましくはｔ−ブチルジメチルシリル
基が例示される。また、エステル保護基としては、具体
的には、アセチル基、クロロアセチル基、ベンゾイル
基、イソブチロイル基、ピバロイル基、が挙げられる。
ルジメチルシリル基、（トリフェニルメチル）ジメチル
シリル基、イソプロピルジメチルシリル基、メチルジイ
ソプロピルシリル基、ｔ−ブチルジフェニルシリル基等
が挙げられるが、好ましくはｔ−ブチルジメチルシリル
基が例示される。また、エステル保護基としては、具体
的には、アセチル基、クロロアセチル基、ベンゾイル
基、イソブチロイル基、ピバロイル基、が挙げられる。
【００１８】Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、アミノ
基、あるいは放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基またはビ
オチン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。ハロ
ゲン原子としては、特に好ましくはクロル原子やブロム
原子が例示される。また、置換アミノ基における放射性
ヨード（125 Ｉ）標識残基としては、３−ヨード（125
Ｉ）−４−ヒドロキシフェニルプロピオニル残基、３，
５−ジヨード（125 Ｉ）−４−ヒドロキシフェニルプロ
ピオニル残基、ヨード（125 Ｉ）−Ｎ−メチルチロシン
残基等の末端にカルボニル基を有する残基が好ましい例
として示されるが、その他に、ヨード（125 Ｉ）ヒスタ
ミン、ヨード（125 Ｉ）チラミン等の末端にアミノ基を
有する放射性ヨード（125 Ｉ）標識化合物と、ジアルデ
ヒドまたはジカルボン酸である二官能性架橋剤とにより
形成せしめて、新たに末端にカルボニル基を形成せしめ
た放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基も挙げられる。ジア
ルデヒドまたはジカルボン酸である二官能性架橋剤とし
ては、例えば無水コハク酸、グルタルアルデヒド、ジサ
クシニミジルサベレート（ＤＳＳ）、ジサクシミジルタ
ルタレート（ＤＳＴ）、３、３ージチオビス（スルホサ
クシミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）等が挙げら
れる。
基、あるいは放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基またはビ
オチン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。ハロ
ゲン原子としては、特に好ましくはクロル原子やブロム
原子が例示される。また、置換アミノ基における放射性
ヨード（125 Ｉ）標識残基としては、３−ヨード（125
Ｉ）−４−ヒドロキシフェニルプロピオニル残基、３，
５−ジヨード（125 Ｉ）−４−ヒドロキシフェニルプロ
ピオニル残基、ヨード（125 Ｉ）−Ｎ−メチルチロシン
残基等の末端にカルボニル基を有する残基が好ましい例
として示されるが、その他に、ヨード（125 Ｉ）ヒスタ
ミン、ヨード（125 Ｉ）チラミン等の末端にアミノ基を
有する放射性ヨード（125 Ｉ）標識化合物と、ジアルデ
ヒドまたはジカルボン酸である二官能性架橋剤とにより
形成せしめて、新たに末端にカルボニル基を形成せしめ
た放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基も挙げられる。ジア
ルデヒドまたはジカルボン酸である二官能性架橋剤とし
ては、例えば無水コハク酸、グルタルアルデヒド、ジサ
クシニミジルサベレート（ＤＳＳ）、ジサクシミジルタ
ルタレート（ＤＳＴ）、３、３ージチオビス（スルホサ
クシミジルプロピオネート）（ＤＴＳＳＰ）等が挙げら
れる。
【００１９】また、ビオチン標識残基としては、ビオチ
ニル残基、ビオチンアミドカプロイル残基などの末端に
カルボニルを有する残基が好ましい例として示される
が、その他に、上記と同様な架橋剤を用いることにより
末端にアミノ基を有するビオチンアミドカプロイルヒド
ラジド等を結合することにより形成された残基も挙げら
れる。
ニル残基、ビオチンアミドカプロイル残基などの末端に
カルボニルを有する残基が好ましい例として示される
が、その他に、上記と同様な架橋剤を用いることにより
末端にアミノ基を有するビオチンアミドカプロイルヒド
ラジド等を結合することにより形成された残基も挙げら
れる。
【００２０】この式（１）のビタミンＤ誘導体を製造す
るに当たっては、式（２）
るに当たっては、式（２）
【００２１】
【化８】 （ただし、Ｒ12、およびＲ32は水素原子、もしくは保護
された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ22は保護された水酸基
を表す。）で表されたビタミンＤ類と、式（３）
された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ22は保護された水酸基
を表す。）で表されたビタミンＤ類と、式（３）
【００２２】
【化９】 （ただし、ｎは前記と同様の意味を示し、Ｘ、およびＹ
はハロゲン原子を表す。）で表されるω−ハロゲノアル
コキシメチルハライドを媒体中で反応せしめ、式（１−
１）
はハロゲン原子を表す。）で表されるω−ハロゲノアル
コキシメチルハライドを媒体中で反応せしめ、式（１−
１）
【００２３】
【化１０】
【００２４】（ただし、Ｒ12、Ｒ22、Ｒ32、ｎ、Ｙは前
記と同様の意味を示す。）で表されたビタミンＤ誘導体
を製造し、必要に応じて、置換基Ｙを置換基Ｒ4 へ、置
換基Ｒ12、Ｒ22およびＲ32をそれぞれ置換基Ｒ1 、Ｒ2
およびＲ3 へと変換することにより得ることができる。
上記の式（２）において、Ｒ12、およびＲ32は水素原
子、もしくは保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ22は
保護された水酸基を表すが、これらの保護された水酸基
は、前述と同様である。
記と同様の意味を示す。）で表されたビタミンＤ誘導体
を製造し、必要に応じて、置換基Ｙを置換基Ｒ4 へ、置
換基Ｒ12、Ｒ22およびＲ32をそれぞれ置換基Ｒ1 、Ｒ2
およびＲ3 へと変換することにより得ることができる。
上記の式（２）において、Ｒ12、およびＲ32は水素原
子、もしくは保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ22は
保護された水酸基を表すが、これらの保護された水酸基
は、前述と同様である。
【００２５】式（２）の保護ビタミンＤ類の出発原料と
しては、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （以下１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 と略すことがある）、２５−ヒ
ドロキシビタミンＤ3 （以下２５ＯＨＤ3 と略すことが
ある）、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （以下
２４，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 と略すことがある）等の活性
型ビタミンＤが挙げられるが、これらの活性型ビタミン
Ｄは、Ｋａｌｉ−Ｄｕｐｈａ社より市販されているの
で、これらを利用することが簡便である。また、その他
の活性型ビタミンＤとして１，２５−ジヒドロキシビタ
ミンＤ3 −２６，２３−ラクトン、２２−オキサ−１，
２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 、２５−ヒドロキシビ
タミンＤ2 、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ2 等の
２５位に水酸基を有するビタミンＤ代謝物や医薬品とし
て合成された各種の活性型ビタミンＤ誘導体が例示され
る（有機合成化学、高山浩明ら、第４８巻第１２号、ｐ
１０８２、１９９０年）。さらに、本発明の技術からす
ると２５位に水酸基を有するステロイド類、例えば２５
−ヒドロキシコレステロールにも適用できるばかりでな
く、一般的に三級水酸基を有する化合物についても応用
可能である。
しては、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （以下１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 と略すことがある）、２５−ヒ
ドロキシビタミンＤ3 （以下２５ＯＨＤ3 と略すことが
ある）、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （以下
２４，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 と略すことがある）等の活性
型ビタミンＤが挙げられるが、これらの活性型ビタミン
Ｄは、Ｋａｌｉ−Ｄｕｐｈａ社より市販されているの
で、これらを利用することが簡便である。また、その他
の活性型ビタミンＤとして１，２５−ジヒドロキシビタ
ミンＤ3 −２６，２３−ラクトン、２２−オキサ−１，
２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 、２５−ヒドロキシビ
タミンＤ2 、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ2 等の
２５位に水酸基を有するビタミンＤ代謝物や医薬品とし
て合成された各種の活性型ビタミンＤ誘導体が例示され
る（有機合成化学、高山浩明ら、第４８巻第１２号、ｐ
１０８２、１９９０年）。さらに、本発明の技術からす
ると２５位に水酸基を有するステロイド類、例えば２５
−ヒドロキシコレステロールにも適用できるばかりでな
く、一般的に三級水酸基を有する化合物についても応用
可能である。
【００２６】これらのビタミンＤ類の１位、３位、２４
位に水酸基が存在する際には、その水酸基を、シリル保
護基により保護する場合にはコーリーらの方法〔Ｊ．Ａ
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９４，２５４９（１９７
２）〕、またエステル保護基により保護する場合には、
ウェーバーらの方法〔Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，．７２，
２１９（１９７２）〕、ホルトンらの方法〔Ｏｒｇ．Ｓ
ｙｎｔｈ．Ｃｏｌｌｅｃｔ．ｖｏｌ．Ｖ．１（１９７
３）〕、ネイルソンらの方法〔Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．，９４，８６１３（１９７２）〕等を参考にし
て、式（２）で表された保護ビタミンＤ類となせばよ
い。
位に水酸基が存在する際には、その水酸基を、シリル保
護基により保護する場合にはコーリーらの方法〔Ｊ．Ａ
ｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９４，２５４９（１９７
２）〕、またエステル保護基により保護する場合には、
ウェーバーらの方法〔Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，．７２，
２１９（１９７２）〕、ホルトンらの方法〔Ｏｒｇ．Ｓ
ｙｎｔｈ．Ｃｏｌｌｅｃｔ．ｖｏｌ．Ｖ．１（１９７
３）〕、ネイルソンらの方法〔Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓ
ｏｃ．，９４，８６１３（１９７２）〕等を参考にし
て、式（２）で表された保護ビタミンＤ類となせばよ
い。
【００２７】式（３）で表されるω−ハロゲノアルコキ
シメチルハライドにおいて、ＸおよびＹはハロゲン原子
を表すが、両者は同一または相違していてもよく、ハロ
ゲン原子としては、特に好ましくはクロル原子やブロム
原子が例示される。ω−ハロゲノアルコキシメチルハラ
イド、特にω−クロロアルコキシメチルクロライドの製
法については、既に成書（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｅｓ，Ｍｏｎｏｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ Ｅｔｈ
ｅｒ，３７７−３７９）において知られており、例え
ば、ホルマリン存在下クロロプロパノール用いて、乾燥
塩酸ガスを通じることにより、クロロプロポキシメチル
クロライドが調製されている。この製法に準じてハロゲ
ン化アルコールを変えることにより、種々の化合物を合
成することができる。例えば、ｎが２の場合には、２−
クロロエタノール、２−ブロモエタノール等を用いれば
よく、ｎが３の場合には、３−クロロプロパノール、３
−ブロモプロパノール等を、ｎが４の場合には、４−ク
ロロブタノール等を、ｎが５の場合には、５−クロロペ
ンタノール等を用いることが例示される。これらの中で
特に、２−クロロエタノール、３−クロロプロパノー
ル、４−クロロブタノールが特に好ましい例として挙げ
られる。また、ｎが１の場合にジクロロメチルエーテル
はアルドリッチ社製の試薬を用いることも簡便で好まし
い。これらのクロル原子は、臭化ナトリウムや臭化リチ
ウムを用い、クロル原子からブロム原子へ変換すること
ができる。
シメチルハライドにおいて、ＸおよびＹはハロゲン原子
を表すが、両者は同一または相違していてもよく、ハロ
ゲン原子としては、特に好ましくはクロル原子やブロム
原子が例示される。ω−ハロゲノアルコキシメチルハラ
イド、特にω−クロロアルコキシメチルクロライドの製
法については、既に成書（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｅｓ，Ｍｏｎｏｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ Ｅｔｈ
ｅｒ，３７７−３７９）において知られており、例え
ば、ホルマリン存在下クロロプロパノール用いて、乾燥
塩酸ガスを通じることにより、クロロプロポキシメチル
クロライドが調製されている。この製法に準じてハロゲ
ン化アルコールを変えることにより、種々の化合物を合
成することができる。例えば、ｎが２の場合には、２−
クロロエタノール、２−ブロモエタノール等を用いれば
よく、ｎが３の場合には、３−クロロプロパノール、３
−ブロモプロパノール等を、ｎが４の場合には、４−ク
ロロブタノール等を、ｎが５の場合には、５−クロロペ
ンタノール等を用いることが例示される。これらの中で
特に、２−クロロエタノール、３−クロロプロパノー
ル、４−クロロブタノールが特に好ましい例として挙げ
られる。また、ｎが１の場合にジクロロメチルエーテル
はアルドリッチ社製の試薬を用いることも簡便で好まし
い。これらのクロル原子は、臭化ナトリウムや臭化リチ
ウムを用い、クロル原子からブロム原子へ変換すること
ができる。
【００２８】式（２）の保護ビタミンＤ類と式（３）の
ω−ハロゲノアルコキシメチルハライドとの反応に際し
て用いられる媒体としては、この反応に際して反応する
ことのない媒体であれば特に限定されず、特に不活性な
媒体が好ましく、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨ
Ｆ）、ジオキサン、エチルエーテル、ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）等の無水溶媒が挙げられる。またこの反
応を行うに際しては、塩基を存在せしめることが好まし
く、通常この塩基としては有機塩基が好ましく、特に三
級アミンが好ましい例として挙げられ、さらに具体的に
は、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、
トリプロピルアミン等が例示される。また前述の媒体と
して、塩基のみを媒体とすることもできる。
ω−ハロゲノアルコキシメチルハライドとの反応に際し
て用いられる媒体としては、この反応に際して反応する
ことのない媒体であれば特に限定されず、特に不活性な
媒体が好ましく、例えば、テトラヒドロフラン（ＴＨ
Ｆ）、ジオキサン、エチルエーテル、ジメチルホルムア
ミド（ＤＭＦ）等の無水溶媒が挙げられる。またこの反
応を行うに際しては、塩基を存在せしめることが好まし
く、通常この塩基としては有機塩基が好ましく、特に三
級アミンが好ましい例として挙げられ、さらに具体的に
は、ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、
トリプロピルアミン等が例示される。また前述の媒体と
して、塩基のみを媒体とすることもできる。
【００２９】保護ビタミンＤ類に対するω−ハロゲノア
ルコキシメチルハライドの量比は、１当量以上であるこ
とが望ましく、好ましくは５当量から１００当量の過剰
用いてもよく、望ましくは１０当量が好ましい。また、
塩基の添加量は、ω−ハロゲノアルコキシメチルハライ
ドに対し当量が望ましく、原料の保護ビタミンＤ類に対
して５当量から１００当量の過剰用いてもよく、望まし
くは１０当量が好ましい。媒体の添加量は適宜の量でよ
い。反応および取扱の温度は、通常１０℃以下であるこ
とが一般的には好ましい。反応時間としては、反応温度
や保護ビタミンＤ類とω−ハロゲノアルコキシメチルハ
ライドとの組合せによって適宜変え得、目的とする生成
物ができるだけ高い収率となる時間に設定することが好
ましいが、通常は、１０分から１時間程度である。ま
た、これらの反応は不活性ガスの存在下で行うことが望
ましく、例えばアルゴンガス、窒素ガスが例示される
が、特にアルゴンガスが好ましい。
ルコキシメチルハライドの量比は、１当量以上であるこ
とが望ましく、好ましくは５当量から１００当量の過剰
用いてもよく、望ましくは１０当量が好ましい。また、
塩基の添加量は、ω−ハロゲノアルコキシメチルハライ
ドに対し当量が望ましく、原料の保護ビタミンＤ類に対
して５当量から１００当量の過剰用いてもよく、望まし
くは１０当量が好ましい。媒体の添加量は適宜の量でよ
い。反応および取扱の温度は、通常１０℃以下であるこ
とが一般的には好ましい。反応時間としては、反応温度
や保護ビタミンＤ類とω−ハロゲノアルコキシメチルハ
ライドとの組合せによって適宜変え得、目的とする生成
物ができるだけ高い収率となる時間に設定することが好
ましいが、通常は、１０分から１時間程度である。ま
た、これらの反応は不活性ガスの存在下で行うことが望
ましく、例えばアルゴンガス、窒素ガスが例示される
が、特にアルゴンガスが好ましい。
【００３０】斯くして得られた式（１−１）で表される
化合物は、必要に応じて、その置換基Ｙを置換基Ｒ4
へ、置換基Ｒ12、Ｒ22およびＲ32をそれぞれ置換基Ｒ1
、Ｒ2およびＲ3 へと変換することにより、式（１）の
ビタミンＤ誘導体となすことができる。置換基Ｙを置換
基Ｒ4 へと変換する場合、即ち、ハロゲン原子をアジド
基、アミノ基、または置換アミノ基と変換する場合に
は、以下の通り公知の方法により変換すればよい。
化合物は、必要に応じて、その置換基Ｙを置換基Ｒ4
へ、置換基Ｒ12、Ｒ22およびＲ32をそれぞれ置換基Ｒ1
、Ｒ2およびＲ3 へと変換することにより、式（１）の
ビタミンＤ誘導体となすことができる。置換基Ｙを置換
基Ｒ4 へと変換する場合、即ち、ハロゲン原子をアジド
基、アミノ基、または置換アミノ基と変換する場合に
は、以下の通り公知の方法により変換すればよい。
【００３１】まず、ハロゲン原子をアジド基に変換する
場合には、ハロゲン原子を有する式（１−１）で表され
る化合物に、アジド試薬を反応せしめればよく、このア
ジド試薬としては、アジ化ナトリウム、テトラブチルア
ンモニウムアジド、トリメチルシリルアジドが挙げられ
るが、好ましくはアジ化ナトリウムが例示される。この
アジ化ナトリウムの使用量は原料１当量に対して１０か
ら１００当量が好ましく、望ましくは２０から５０当量
がよい。この反応は、前記と同様の不活性媒体中、不活
性ガス存在下で行えばよく、反応温度は通常は５０℃か
ら８０℃が好ましい。反応時間は、適宜選択すればよい
が、通常は１時間から４８時間程度である。
場合には、ハロゲン原子を有する式（１−１）で表され
る化合物に、アジド試薬を反応せしめればよく、このア
ジド試薬としては、アジ化ナトリウム、テトラブチルア
ンモニウムアジド、トリメチルシリルアジドが挙げられ
るが、好ましくはアジ化ナトリウムが例示される。この
アジ化ナトリウムの使用量は原料１当量に対して１０か
ら１００当量が好ましく、望ましくは２０から５０当量
がよい。この反応は、前記と同様の不活性媒体中、不活
性ガス存在下で行えばよく、反応温度は通常は５０℃か
ら８０℃が好ましい。反応時間は、適宜選択すればよい
が、通常は１時間から４８時間程度である。
【００３２】また、上記により形成されたアジド基は、
還元剤にて還元することにより、アミノ基となすことが
できる。この反応で用いる還元剤としては、水素化リチ
ウムアルミニウム、水素化ほう素ナトリウム等が例示さ
れるが、好ましくは緩和な条件下で反応が進行する水素
化リチウムアルミニウムが挙げられる。還元剤の使用量
は、原料１当量に対して１から２０当量が好ましい。前
記と同様の不活性媒体中、不活性ガス存在下で行えばよ
く、反応温度は通常１０℃以下であることが一般的には
好ましい。反応時間は、適宜選択すればよいが、通常は
５分から２時間程度である。
還元剤にて還元することにより、アミノ基となすことが
できる。この反応で用いる還元剤としては、水素化リチ
ウムアルミニウム、水素化ほう素ナトリウム等が例示さ
れるが、好ましくは緩和な条件下で反応が進行する水素
化リチウムアルミニウムが挙げられる。還元剤の使用量
は、原料１当量に対して１から２０当量が好ましい。前
記と同様の不活性媒体中、不活性ガス存在下で行えばよ
く、反応温度は通常１０℃以下であることが一般的には
好ましい。反応時間は、適宜選択すればよいが、通常は
５分から２時間程度である。
【００３３】さらに、このアミノ基に、放射性ヨード
（125 Ｉ）標識残基またはビオチン標識残基を導入すれ
ばよく、この放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基およびビ
オチン標識残基は、前述した通りであるが、導入条件お
よび用いる試薬は、目的とする放射性ヨード（125 Ｉ）
標識残基またはビオチン標識残基の種類により、適宜選
択すればよい。例えば、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残
基またはビオチン標識残基が、末端にカルボニル基を有
する残基の場合には、該残基を含むカルボン酸と反応せ
しめアミド結合を形成せしめればよく、該反応に際して
は後述の如く、縮合剤の存在下、または予め活性エステ
ル化させて、反応せしめアミド結合となせばよい。ま
た、末端にアミノ基を有する放射性ヨード（125 Ｉ）標
識化合物および末端にアミノ基を有するビオチン標識化
合物を用い、該標識化合物と、ジアルデヒドまたはジカ
ルボン酸である二官能性架橋剤とにより新たに末端にカ
ルボニル基を形成せしめた場合には、該カルボニル基と
ビタミンＤ誘導体の末端アミノ基とを、上記と同様に、
縮合剤の存在下、または予め活性エステル化させて、反
応せしめアミド結合となせばよい。
（125 Ｉ）標識残基またはビオチン標識残基を導入すれ
ばよく、この放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基およびビ
オチン標識残基は、前述した通りであるが、導入条件お
よび用いる試薬は、目的とする放射性ヨード（125 Ｉ）
標識残基またはビオチン標識残基の種類により、適宜選
択すればよい。例えば、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残
基またはビオチン標識残基が、末端にカルボニル基を有
する残基の場合には、該残基を含むカルボン酸と反応せ
しめアミド結合を形成せしめればよく、該反応に際して
は後述の如く、縮合剤の存在下、または予め活性エステ
ル化させて、反応せしめアミド結合となせばよい。ま
た、末端にアミノ基を有する放射性ヨード（125 Ｉ）標
識化合物および末端にアミノ基を有するビオチン標識化
合物を用い、該標識化合物と、ジアルデヒドまたはジカ
ルボン酸である二官能性架橋剤とにより新たに末端にカ
ルボニル基を形成せしめた場合には、該カルボニル基と
ビタミンＤ誘導体の末端アミノ基とを、上記と同様に、
縮合剤の存在下、または予め活性エステル化させて、反
応せしめアミド結合となせばよい。
【００３４】上記縮合剤としては、例えば、ジシクロヘ
キシルカルボジイミド（ＤＣＣ）やジメチルアミノプロ
ピルエチルカルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）等が挙げら
れ、特にＷＳＣが反応後の処理の点から簡便で望まし
い。また縮合剤を用いる場合には、塩基を存在させるこ
とが好ましく、添加する塩基としては、例えば、トリエ
チルアミン、ジメチルアミノピリジン、ジイソプロピル
エチルアミン等の三級アミンが挙げられるが、好ましく
はトリエチルアミンが挙げられる。
キシルカルボジイミド（ＤＣＣ）やジメチルアミノプロ
ピルエチルカルボジイミド塩酸塩（ＷＳＣ）等が挙げら
れ、特にＷＳＣが反応後の処理の点から簡便で望まし
い。また縮合剤を用いる場合には、塩基を存在させるこ
とが好ましく、添加する塩基としては、例えば、トリエ
チルアミン、ジメチルアミノピリジン、ジイソプロピル
エチルアミン等の三級アミンが挙げられるが、好ましく
はトリエチルアミンが挙げられる。
【００３５】さらに、これらのアミド結合を形成せしめ
る際には、縮合剤の存在下で反応せしめる方法の他、予
めカルボニル基を活性エステルとなして用いる方法も好
ましい例として挙げられる。この活性エステル残基とな
して用いる方法においても、塩基を存在させてもよい。
具体的に活性エステル残基となすための活性エステル試
薬を例示すれば、例えばヨード（125 Ｉ）標識残基を作
製するには、ヨード（125 Ｉ）−ボルトン−ハンター試
薬（ＮＥＮ製、もしくはアマーシャム社製）であるＮ−
ヒドロキシサクシニミド ３−ヨード（125 Ｉ）−４−
ヒドロキシフェニルプロピオネート、またはＮ−ヒドロ
キシサクシニミド ３，５−ジヨード（125 Ｉ）−４−
ヒドロキシフェニルプロピオネートが挙げられ、その他
に、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド ３−ヨード（125
Ｉ）−４−ヒドロキシフェニルプロピオネート、Ｎ−ヒ
ドロキシフタルイミド ３，５−ジヨード（125 Ｉ）−
４−ヒドロキシフェニルプロピオネート、Ｎ−ヒドロキ
シマレイミド ３−ヨード（125 Ｉ）−４−ヒドロキシ
フェニルプロピオネート、Ｎ−ヒドロキシマレイミド
３，５−ジヨード（125 Ｉ）−４−ヒドロキシフェニル
プロピオネートが例示されるが、特に好ましくはＮ−ヒ
ドロキシサクシニミド ３−ヨード（125 Ｉ）−４−ヒ
ドロキシフェニルプロピオネートが例示される。またビ
オチン標識残基を作製するには、Ｎ−ヒドロキシサクシ
ニミド ビオチンエステル（シグマ社）、Ｎ−ヒドロキ
シサクシニミド ビオチンアミドカプロエート（シグマ
社）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド ビオチンエステ
ル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドビオチンアミドカプロ
エート、Ｎ−ヒドロキシマレイミド ビオチンエステ
ル、Ｎ−ヒドロキシマレイミド ビオチンアミドカプロ
エート等の活性エステル試薬が挙げられ、特に好ましく
はＮ−ヒドロキシサクシニミド ビオチンエステルが例
示される。これらのアミド結合の形成方法については成
書（ペプチド合成、泉屋信夫ら著、丸善、第５章ペプチ
ド結合の生成）に詳しく述べられているので参考とな
る。
る際には、縮合剤の存在下で反応せしめる方法の他、予
めカルボニル基を活性エステルとなして用いる方法も好
ましい例として挙げられる。この活性エステル残基とな
して用いる方法においても、塩基を存在させてもよい。
具体的に活性エステル残基となすための活性エステル試
薬を例示すれば、例えばヨード（125 Ｉ）標識残基を作
製するには、ヨード（125 Ｉ）−ボルトン−ハンター試
薬（ＮＥＮ製、もしくはアマーシャム社製）であるＮ−
ヒドロキシサクシニミド ３−ヨード（125 Ｉ）−４−
ヒドロキシフェニルプロピオネート、またはＮ−ヒドロ
キシサクシニミド ３，５−ジヨード（125 Ｉ）−４−
ヒドロキシフェニルプロピオネートが挙げられ、その他
に、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド ３−ヨード（125
Ｉ）−４−ヒドロキシフェニルプロピオネート、Ｎ−ヒ
ドロキシフタルイミド ３，５−ジヨード（125 Ｉ）−
４−ヒドロキシフェニルプロピオネート、Ｎ−ヒドロキ
シマレイミド ３−ヨード（125 Ｉ）−４−ヒドロキシ
フェニルプロピオネート、Ｎ−ヒドロキシマレイミド
３，５−ジヨード（125 Ｉ）−４−ヒドロキシフェニル
プロピオネートが例示されるが、特に好ましくはＮ−ヒ
ドロキシサクシニミド ３−ヨード（125 Ｉ）−４−ヒ
ドロキシフェニルプロピオネートが例示される。またビ
オチン標識残基を作製するには、Ｎ−ヒドロキシサクシ
ニミド ビオチンエステル（シグマ社）、Ｎ−ヒドロキ
シサクシニミド ビオチンアミドカプロエート（シグマ
社）、Ｎ−ヒドロキシフタルイミド ビオチンエステ
ル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドビオチンアミドカプロ
エート、Ｎ−ヒドロキシマレイミド ビオチンエステ
ル、Ｎ−ヒドロキシマレイミド ビオチンアミドカプロ
エート等の活性エステル試薬が挙げられ、特に好ましく
はＮ−ヒドロキシサクシニミド ビオチンエステルが例
示される。これらのアミド結合の形成方法については成
書（ペプチド合成、泉屋信夫ら著、丸善、第５章ペプチ
ド結合の生成）に詳しく述べられているので参考とな
る。
【００３６】本願発明の活性型ビタミンＤの２５位より
伸長したヨード（125 Ｉ）標識誘導体については、従来
開示されていないのは勿論であるが、２５位以外の部位
にヨード（125 Ｉ）標識残基を導入したいくつかのビタ
ミンＤ誘導体については、既に本発明者ら、および、ブ
イヨンらにより開示されている（特開平２−２７４号、
特開平２−１０１０６０号、特開平２−１０４５７０
号、および、特開平２−２６２５５５号）ので、これら
の文献を参考として、その合成および測定法を容易に実
施できる。また、本願発明の活性型ビタミンＤの２５位
より伸長したビオチン標識誘導体については、従来全く
開示されていないが、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド ビ
オチンエステルを用いた、一般的抗原へのビオチン標識
残基の導入については、既に、ポーリーらの報告（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２７５，ｐｐ７３３，１９９１）、
さらに多くの種々のビオチン試薬の合成に関してはホフ
マンらの報告（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２１，９７
８，１９８２）に詳しい。
伸長したヨード（125 Ｉ）標識誘導体については、従来
開示されていないのは勿論であるが、２５位以外の部位
にヨード（125 Ｉ）標識残基を導入したいくつかのビタ
ミンＤ誘導体については、既に本発明者ら、および、ブ
イヨンらにより開示されている（特開平２−２７４号、
特開平２−１０１０６０号、特開平２−１０４５７０
号、および、特開平２−２６２５５５号）ので、これら
の文献を参考として、その合成および測定法を容易に実
施できる。また、本願発明の活性型ビタミンＤの２５位
より伸長したビオチン標識誘導体については、従来全く
開示されていないが、Ｎ−ヒドロキシサクシニミド ビ
オチンエステルを用いた、一般的抗原へのビオチン標識
残基の導入については、既に、ポーリーらの報告（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２７５，ｐｐ７３３，１９９１）、
さらに多くの種々のビオチン試薬の合成に関してはホフ
マンらの報告（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２１，９７
８，１９８２）に詳しい。
【００３７】より詳細な該ヨード（125 Ｉ）標識ビタミ
ンＤ誘導体の合成反応の条件としては、無水ＴＨＦ等の
媒体中で、ヨード（125 Ｉ）標識残基を有する試薬〔ヨ
ード（125 Ｉ）標識試薬〕の１当量に対して標識用の原
料である式（１）においてＲ4 がアミノ基である化合物
を、通常１から２０００当量、特に好ましくは５００か
ら１０００当量用い、縮合剤を使用するときには、ヨー
ド（125 Ｉ）標識試薬の１当量に対して縮合剤を１から
１００当量程度を用いればよい。反応時間としては１時
間から７２時間程度で、実際上の反応処理からすると１
６時間から２４時間であることが望ましい。反応温度は
０℃から５０℃程度ならはよいが、不安定なビタミンＤ
誘導体であることから、できる限り高温は避けるべきで
あり、このましくは１０℃から３０℃が望ましい。
ンＤ誘導体の合成反応の条件としては、無水ＴＨＦ等の
媒体中で、ヨード（125 Ｉ）標識残基を有する試薬〔ヨ
ード（125 Ｉ）標識試薬〕の１当量に対して標識用の原
料である式（１）においてＲ4 がアミノ基である化合物
を、通常１から２０００当量、特に好ましくは５００か
ら１０００当量用い、縮合剤を使用するときには、ヨー
ド（125 Ｉ）標識試薬の１当量に対して縮合剤を１から
１００当量程度を用いればよい。反応時間としては１時
間から７２時間程度で、実際上の反応処理からすると１
６時間から２４時間であることが望ましい。反応温度は
０℃から５０℃程度ならはよいが、不安定なビタミンＤ
誘導体であることから、できる限り高温は避けるべきで
あり、このましくは１０℃から３０℃が望ましい。
【００３８】また、より詳細な該ビオチン標識ビタミン
Ｄ誘導体の合成反応の条件としては、無水ＴＨＦ等の媒
体中、標識用の原料である式（１）においてＲ4 がアミ
ノ基である化合物の１当量に対してビオチン標識残基を
有する試薬〔ビオチン標識試薬〕を１から５当量、好ま
しくは１．１から２当量を加え、縮合剤を使用するとき
には、ビオチン標識試薬の１当量に対して縮合剤を１か
ら５当量程度を用いればよい。必要により添加する塩基
は、前述に説明した通りである。反応時間としては１時
間から２４時間程度で、反応処理からすると８時間から
２０時間であることが望ましい。反応温度は、通常０℃
から５０℃程度、特に好ましくは５℃から２０℃程度が
例示される。
Ｄ誘導体の合成反応の条件としては、無水ＴＨＦ等の媒
体中、標識用の原料である式（１）においてＲ4 がアミ
ノ基である化合物の１当量に対してビオチン標識残基を
有する試薬〔ビオチン標識試薬〕を１から５当量、好ま
しくは１．１から２当量を加え、縮合剤を使用するとき
には、ビオチン標識試薬の１当量に対して縮合剤を１か
ら５当量程度を用いればよい。必要により添加する塩基
は、前述に説明した通りである。反応時間としては１時
間から２４時間程度で、反応処理からすると８時間から
２０時間であることが望ましい。反応温度は、通常０℃
から５０℃程度、特に好ましくは５℃から２０℃程度が
例示される。
【００３９】斯くして得られた該ヨード（125 Ｉ）標識
ビタミンＤ誘導体またはビオチン標識ビタミンＤ誘導体
は、ＨＰＬＣ等の公知の方法で精製することが好まし
い。式（１−１）で表される化合物の置換基Ｒ12、Ｒ22
およびＲ32は、必要に応じて、それぞれ置換基Ｒ1 、Ｒ
2 およびＲ3 へと変換することができる。この変換は、
置換基Ｒ12、Ｒ22およびＲ32における保護された水酸基
の、必要に応じて行われる脱保護反応を意味する。この
脱保護反応は、保護基の種類にもよるが、基本的には前
述した置換基Ｙから置換基Ｒ4 への変換のいずれの工程
においても行うことができる。特に好ましくは、置換基
Ｙまたは置換基Ｒ4 が、ハロゲン原子、アジド基、また
はアミノ基である段階において脱保護反応を行えばよ
い。
ビタミンＤ誘導体またはビオチン標識ビタミンＤ誘導体
は、ＨＰＬＣ等の公知の方法で精製することが好まし
い。式（１−１）で表される化合物の置換基Ｒ12、Ｒ22
およびＲ32は、必要に応じて、それぞれ置換基Ｒ1 、Ｒ
2 およびＲ3 へと変換することができる。この変換は、
置換基Ｒ12、Ｒ22およびＲ32における保護された水酸基
の、必要に応じて行われる脱保護反応を意味する。この
脱保護反応は、保護基の種類にもよるが、基本的には前
述した置換基Ｙから置換基Ｒ4 への変換のいずれの工程
においても行うことができる。特に好ましくは、置換基
Ｙまたは置換基Ｒ4 が、ハロゲン原子、アジド基、また
はアミノ基である段階において脱保護反応を行えばよ
い。
【００４０】保護された水酸基の脱保護反応は、保護基
がシリル保護基の場合には、テトラブチルアンモニウム
フロリド、もしくはフッ化水素等のフッ素イオンの存在
の条件下で、必要に応じて容易に水酸基と変換せしめる
ことができ、コーリーらの方法が参考に挙げられる
（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９４，２５４９，１
９７２）。このテトラブチルアンモニウムフロリドの使
用量は原料１当量に対して通常２から２０当量が挙げら
れる。また、エステル保護基である場合には、通常ｐＨ
を９以上とするか、還元反応により、脱保護反応を行い
水酸基とすればよい。
がシリル保護基の場合には、テトラブチルアンモニウム
フロリド、もしくはフッ化水素等のフッ素イオンの存在
の条件下で、必要に応じて容易に水酸基と変換せしめる
ことができ、コーリーらの方法が参考に挙げられる
（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，９４，２５４９，１
９７２）。このテトラブチルアンモニウムフロリドの使
用量は原料１当量に対して通常２から２０当量が挙げら
れる。また、エステル保護基である場合には、通常ｐＨ
を９以上とするか、還元反応により、脱保護反応を行い
水酸基とすればよい。
【００４１】斯くして式（１）のビタミンＤ誘導体が製
造される。さらに、本発明は、式（１−２）
造される。さらに、本発明は、式（１−２）
【００４２】
【化１１】
【００４３】（ただし、Ｒ13およびＲ33は水素原子、水
酸基をそれぞれ表し、Ｒ23は水酸基を表し、ｎは１〜５
の整数を表し、Ｒ43は放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基
またはビオチン標識残基で置換された置換アミノ基を表
す。）で表される標識ビタミンＤ誘導体の存在下、検体
と、ビタミンＤ結合性を有する受容体とを用いて、検体
中のビタミンＤ類と該標識ビタミンＤ誘導体との競合反
応を行い、反応後、反応生成物と未反応物とを分離し、
未反応物または反応生成物中の該標識ビタミンＤ誘導体
を検出することを特徴とする検体中のビタミンＤ類の測
定法である。
酸基をそれぞれ表し、Ｒ23は水酸基を表し、ｎは１〜５
の整数を表し、Ｒ43は放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基
またはビオチン標識残基で置換された置換アミノ基を表
す。）で表される標識ビタミンＤ誘導体の存在下、検体
と、ビタミンＤ結合性を有する受容体とを用いて、検体
中のビタミンＤ類と該標識ビタミンＤ誘導体との競合反
応を行い、反応後、反応生成物と未反応物とを分離し、
未反応物または反応生成物中の該標識ビタミンＤ誘導体
を検出することを特徴とする検体中のビタミンＤ類の測
定法である。
【００４４】本発明は、検体中のビタミンＤ類の存在、
またはその定量を目的とするものであり、本発明で検体
とは、ビタミンＤ類の測定が必要なものであれば特に限
定されずに適用できるものであって、通常はビタミンＤ
類含有液や体液が例示され、特に体液、即ち、血液、血
清、血漿、リンパ液等が挙げられる。また、測定される
ビタミンＤ類としては、活性ビタミンＤ類が特に好まし
い例として示される。
またはその定量を目的とするものであり、本発明で検体
とは、ビタミンＤ類の測定が必要なものであれば特に限
定されずに適用できるものであって、通常はビタミンＤ
類含有液や体液が例示され、特に体液、即ち、血液、血
清、血漿、リンパ液等が挙げられる。また、測定される
ビタミンＤ類としては、活性ビタミンＤ類が特に好まし
い例として示される。
【００４５】本測定法は、上記の式（１−２）で表され
る標識ビタミンＤ誘導体を用いることにより達成された
ものであり、該標識ビタミンＤ誘導体は、式（１）のビ
タミンＤ誘導体の一種であり、その製造法も既に詳細に
説明している。ビタミンＤ結合性を有する受容体として
は、ビタミンＤ類に対する抗体、活性型ビタミンＤ結合
蛋白（１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター）及びビタミ
ンＤ結合蛋白（ＤＢＰ）が例示される。ビタミンＤ類に
対する抗体は、測定対象とするビタミンＤ類の部分構造
に出来るだけ近いビタミンＤ誘導体をハプテンとして用
い、通常の方法により、免疫用担体蛋白質と結合し、動
物または細胞に接種感作せしめることにより誘導される
抗体であれば特に限定されないが、活性ビタミンＤ類を
測定対象とする場合には、下記の式（１−３）
る標識ビタミンＤ誘導体を用いることにより達成された
ものであり、該標識ビタミンＤ誘導体は、式（１）のビ
タミンＤ誘導体の一種であり、その製造法も既に詳細に
説明している。ビタミンＤ結合性を有する受容体として
は、ビタミンＤ類に対する抗体、活性型ビタミンＤ結合
蛋白（１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター）及びビタミ
ンＤ結合蛋白（ＤＢＰ）が例示される。ビタミンＤ類に
対する抗体は、測定対象とするビタミンＤ類の部分構造
に出来るだけ近いビタミンＤ誘導体をハプテンとして用
い、通常の方法により、免疫用担体蛋白質と結合し、動
物または細胞に接種感作せしめることにより誘導される
抗体であれば特に限定されないが、活性ビタミンＤ類を
測定対象とする場合には、下記の式（１−３）
【００４６】
【化１２】
【００４７】（ただし、Ｒ13、Ｒ23、Ｒ33およびｎは前
記と同様の意味を示す。）で表されるビタミンＤ誘導体
をハプテンとして用いて誘導される抗体が特に好ましく
例示される。上記の式（１−３）で表されるビタミンＤ
誘導体も式（１）のビタミンＤ誘導体の一種であり、そ
の製造法も既に詳細に説明している。この免疫用抗原の
作製法については特開平２−２７４、特開平２−１０１
０６０、特開平２−１０４５７０等を参考とすることが
できる。免疫用担体蛋白としては、牛血清アルブミン、
ヒト血清アルブミン、ヒト血清グロブリンが使用できる
が、特に牛血清アルブミンが好ましい。またその免疫感
作用の動物としては、ヒツジ、牛、ヤギ、ウサギ、マウ
ス、ラット等であり、ポリクロナール抗体作製にはヒツ
ジ、ウサギ、モノクロナール抗体作製にはマウスが好ま
しい。
記と同様の意味を示す。）で表されるビタミンＤ誘導体
をハプテンとして用いて誘導される抗体が特に好ましく
例示される。上記の式（１−３）で表されるビタミンＤ
誘導体も式（１）のビタミンＤ誘導体の一種であり、そ
の製造法も既に詳細に説明している。この免疫用抗原の
作製法については特開平２−２７４、特開平２−１０１
０６０、特開平２−１０４５７０等を参考とすることが
できる。免疫用担体蛋白としては、牛血清アルブミン、
ヒト血清アルブミン、ヒト血清グロブリンが使用できる
が、特に牛血清アルブミンが好ましい。またその免疫感
作用の動物としては、ヒツジ、牛、ヤギ、ウサギ、マウ
ス、ラット等であり、ポリクロナール抗体作製にはヒツ
ジ、ウサギ、モノクロナール抗体作製にはマウスが好ま
しい。
【００４８】また、その他のビタミンＤ結合性を有する
受容体としては、１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ結合蛋白（以
下１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター、もしくは、単に
レセプターと略することがある）またはビタミンＤ結合
蛋白（以下ＤＢＰと略すことがある）等が例示される
が、これらの１α，２５（ＯＨ）2 ＤレセプターやＤＢ
Ｐは、特に活性型ビタミンＤとの特異性が高く、活性型
ビタミンＤを測定対象とする場合に特に好ましい。活性
型ビタミンＤが１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 である場合に
は１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプターを、２５ＯＨＤ3
、及び、２４，２５（ＯＨ）2 Ｄである場合にはＤＢ
Ｐを利用することが好ましい。この際のレセプターとし
ては、ニワトリ小腸レセプター、ウシ胸腺レセプター、
ウシ乳腺レセプターや遺伝子操作により発現されたレセ
プターが好ましく、特に好適にはニワトリ小腸レセプタ
ーを用いるとよい。また、ＤＢＰとしては、牛胎児血
清、ヒト血清、豚血清由来等のＤＢＰが好ましい。
受容体としては、１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ結合蛋白（以
下１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター、もしくは、単に
レセプターと略することがある）またはビタミンＤ結合
蛋白（以下ＤＢＰと略すことがある）等が例示される
が、これらの１α，２５（ＯＨ）2 ＤレセプターやＤＢ
Ｐは、特に活性型ビタミンＤとの特異性が高く、活性型
ビタミンＤを測定対象とする場合に特に好ましい。活性
型ビタミンＤが１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 である場合に
は１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプターを、２５ＯＨＤ3
、及び、２４，２５（ＯＨ）2 Ｄである場合にはＤＢ
Ｐを利用することが好ましい。この際のレセプターとし
ては、ニワトリ小腸レセプター、ウシ胸腺レセプター、
ウシ乳腺レセプターや遺伝子操作により発現されたレセ
プターが好ましく、特に好適にはニワトリ小腸レセプタ
ーを用いるとよい。また、ＤＢＰとしては、牛胎児血
清、ヒト血清、豚血清由来等のＤＢＰが好ましい。
【００４９】本測定法は、上記のビタミンＤ結合性を有
する受容体の存在下、式（１−２）で表される標識ビタ
ミンＤ誘導体と上記の検体を競合反応せしめ、受容体と
複合体形成をした反応生成物と未反応物とを分離（ＢＦ
分離）し、未反応物または反応生成物中の該標識ビタミ
ンＤ誘導体を検出する測定法である。ＢＦ分離の方法と
しては、例えばデキストラン−チャコール法、二抗体
法、ポリエチレングリコール法、固定化法等が挙げられ
る。ここで固定化法とは、ビタミンＤ結合性を有する受
容体を、例えば、プレート、ビーズ表面等へ固定化させ
ることであり、これらの固定化法としは、該受容体に対
する抗体による結合、化学的結合、または物理的吸着等
が挙げられる。１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプターに対
する第二抗体については既にＤｅＬｕｃａらの特許（特
公表平２−５０３３５５）や文献（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｉ
ｃｈｅｍ．，１８３，５７−６３，１９８９）において
用いられ公知となっているので参考となる。
する受容体の存在下、式（１−２）で表される標識ビタ
ミンＤ誘導体と上記の検体を競合反応せしめ、受容体と
複合体形成をした反応生成物と未反応物とを分離（ＢＦ
分離）し、未反応物または反応生成物中の該標識ビタミ
ンＤ誘導体を検出する測定法である。ＢＦ分離の方法と
しては、例えばデキストラン−チャコール法、二抗体
法、ポリエチレングリコール法、固定化法等が挙げられ
る。ここで固定化法とは、ビタミンＤ結合性を有する受
容体を、例えば、プレート、ビーズ表面等へ固定化させ
ることであり、これらの固定化法としは、該受容体に対
する抗体による結合、化学的結合、または物理的吸着等
が挙げられる。１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプターに対
する第二抗体については既にＤｅＬｕｃａらの特許（特
公表平２−５０３３５５）や文献（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｉ
ｃｈｅｍ．，１８３，５７−６３，１９８９）において
用いられ公知となっているので参考となる。
【００５０】該標識ビタミンＤ誘導体がヨード（125
Ｉ）標識残基を有する放射性標識ビタミンＤ誘導体を検
出する場合には、受容体と複合体形成した放射性標識ビ
タミンＤ誘導体、または未反応な放射性標識ビタミンＤ
誘導体の放射能をガンマカウンターにて計測すること
で、既知の濃度のスタンダードを計測しておくことによ
り被検体のビタミンＤ類の濃度を算出することができ
る。これらのラジオメトリックアッセイについては既に
数多くの文献（ホルモンと臨床、第４０巻第４号、ｐ３
５３、１９９２年，蛋白質核酸酵素、別冊３１号、１９
８７年９月、共立出版、特開平２−１０４５７０等）に
詳しく解説されている。より詳細には、ヨード（125
Ｉ）標識ビタミンＤ誘導体を約３０，０００ｃｐｍ含む
５０％エタノール溶液（２５μｌ）の標識物と標準物質
（２−２５６ｐｇ／チューブ）もしくは検体の５０％エ
タノール溶液５０μｌの混合溶液に、各チューブ当り７
８μｇの蛋白濃度を含むニワトリ腸管レセプター（ヤマ
サ醤油製）の０．１Ｍ ｐＨ７．４トリス緩衝液５００
μｌを加え、４℃で４時間競合反応させる。その後ＢＦ
分離のためにデキストラン−チャーコール液を２００μ
ｌ添加、４℃で３０分間放置後、４℃で１０分間３，０
００ｒｐｍでの遠心操作により分離した上清５００μｌ
を分取し、オートウエルガンマーカウンターで計測する
ことで、予め濃度既知のスタンダードより得られた標準
曲線より未知の検体濃度を算出することができる。ここ
で、ヨード（125 Ｉ）標識ビタミンＤ誘導体の放射能
は、各チューブ当り通常１０，０００から１００，００
０ｃｐｍ程度で、このましくは２０，０００から５０，
０００ｃｐｍ、さらに好ましくは３０，０００ｃｐｍ程
度が計測上望ましい。緩衝液は燐酸緩衝液、トリス緩衝
液等が用いられ特に限定はされないが、ｐＨは中性から
弱アルカリ性であるｐＨ７からｐＨ９程度が好ましい。
応温度は、０℃から室温が好ましく、適当な反応時間で
競合反応が終結するような反応温度として４℃から２５
℃程度が挙げられる。
Ｉ）標識残基を有する放射性標識ビタミンＤ誘導体を検
出する場合には、受容体と複合体形成した放射性標識ビ
タミンＤ誘導体、または未反応な放射性標識ビタミンＤ
誘導体の放射能をガンマカウンターにて計測すること
で、既知の濃度のスタンダードを計測しておくことによ
り被検体のビタミンＤ類の濃度を算出することができ
る。これらのラジオメトリックアッセイについては既に
数多くの文献（ホルモンと臨床、第４０巻第４号、ｐ３
５３、１９９２年，蛋白質核酸酵素、別冊３１号、１９
８７年９月、共立出版、特開平２−１０４５７０等）に
詳しく解説されている。より詳細には、ヨード（125
Ｉ）標識ビタミンＤ誘導体を約３０，０００ｃｐｍ含む
５０％エタノール溶液（２５μｌ）の標識物と標準物質
（２−２５６ｐｇ／チューブ）もしくは検体の５０％エ
タノール溶液５０μｌの混合溶液に、各チューブ当り７
８μｇの蛋白濃度を含むニワトリ腸管レセプター（ヤマ
サ醤油製）の０．１Ｍ ｐＨ７．４トリス緩衝液５００
μｌを加え、４℃で４時間競合反応させる。その後ＢＦ
分離のためにデキストラン−チャーコール液を２００μ
ｌ添加、４℃で３０分間放置後、４℃で１０分間３，０
００ｒｐｍでの遠心操作により分離した上清５００μｌ
を分取し、オートウエルガンマーカウンターで計測する
ことで、予め濃度既知のスタンダードより得られた標準
曲線より未知の検体濃度を算出することができる。ここ
で、ヨード（125 Ｉ）標識ビタミンＤ誘導体の放射能
は、各チューブ当り通常１０，０００から１００，００
０ｃｐｍ程度で、このましくは２０，０００から５０，
０００ｃｐｍ、さらに好ましくは３０，０００ｃｐｍ程
度が計測上望ましい。緩衝液は燐酸緩衝液、トリス緩衝
液等が用いられ特に限定はされないが、ｐＨは中性から
弱アルカリ性であるｐＨ７からｐＨ９程度が好ましい。
応温度は、０℃から室温が好ましく、適当な反応時間で
競合反応が終結するような反応温度として４℃から２５
℃程度が挙げられる。
【００５１】また、ビオチン標識残基で置換された標識
ビタミンＤ誘導体を用いた場合には、特に、ビオチン−
アビジン複合体形成を応用した検出法を応用することが
既に一般的となっているが、ビタミンＤ測定に応用され
た例は知られていない。このビオチン−アビジン複合体
形成の原理についてはＷａｒｄら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８０，ｐｐ４０４
５，１９８３）やそのビオチン−アビジン複合体形成の
免疫測定法への応用としては既に数多くの文献成書等
（ホルモンと臨床、第４０巻第４号、ｐ３８９、１９９
２年，酵素免疫測定法、蛋白質核酸酵素、別冊３１号、
１９８７年９月、共立出版，代謝、第２６巻第８号、ｐ
７７３、１９８９年，化学と生物、第２８巻第５号、ｐ
３３２、１９９０年，蛋白質核酸酵素、第３７巻第２
号、ｐ１４４、１９９２年）に詳しく記載され参考とな
る。
ビタミンＤ誘導体を用いた場合には、特に、ビオチン−
アビジン複合体形成を応用した検出法を応用することが
既に一般的となっているが、ビタミンＤ測定に応用され
た例は知られていない。このビオチン−アビジン複合体
形成の原理についてはＷａｒｄら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，ＵＳＡ，８０，ｐｐ４０４
５，１９８３）やそのビオチン−アビジン複合体形成の
免疫測定法への応用としては既に数多くの文献成書等
（ホルモンと臨床、第４０巻第４号、ｐ３８９、１９９
２年，酵素免疫測定法、蛋白質核酸酵素、別冊３１号、
１９８７年９月、共立出版，代謝、第２６巻第８号、ｐ
７７３、１９８９年，化学と生物、第２８巻第５号、ｐ
３３２、１９９０年，蛋白質核酸酵素、第３７巻第２
号、ｐ１４４、１９９２年）に詳しく記載され参考とな
る。
【００５２】ここで使用されるアビジンは、検出し得る
標識が付されているものであり、特に好ましくは、酵素
標識アビジンが挙げられる。この標識酵素としては、ア
ルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、パー
オキシダーゼ等が一般的に用いられ、発色検出系、蛍光
検出系、発光検出系と組み合わされた測定法が既に確立
されており、上記の文献成書等（酵素免疫測定法、別冊
３１号、１９８７年９月、共立出版，代謝、第２６巻第
８号、ｐ７７３、１９８９年）に詳しく述べられてい
る。さらに、酵素標識されていないアビジンを添加し、
しかる後に酵素標識ビオチンを結合させてこの標識酵素
を測定してもよい。これらの標識酵素は、既に種々の由
来の数多くの酵素が市販されており、さらには、酵素標
識アビジン、酵素標識ビオチンとしても市販（生化学工
業、シグマ社等）されているので利用しうる。
標識が付されているものであり、特に好ましくは、酵素
標識アビジンが挙げられる。この標識酵素としては、ア
ルカリフォスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、パー
オキシダーゼ等が一般的に用いられ、発色検出系、蛍光
検出系、発光検出系と組み合わされた測定法が既に確立
されており、上記の文献成書等（酵素免疫測定法、別冊
３１号、１９８７年９月、共立出版，代謝、第２６巻第
８号、ｐ７７３、１９８９年）に詳しく述べられてい
る。さらに、酵素標識されていないアビジンを添加し、
しかる後に酵素標識ビオチンを結合させてこの標識酵素
を測定してもよい。これらの標識酵素は、既に種々の由
来の数多くの酵素が市販されており、さらには、酵素標
識アビジン、酵素標識ビオチンとしても市販（生化学工
業、シグマ社等）されているので利用しうる。
【００５３】ビオチン標識残基で置換された標識ビタミ
ンＤ誘導体を用いた場合の測定法においても、前述の如
く、競合反応せしめた後、ＢＦ分離し、未反応物または
反応生成物中の該標識ビタミンＤ誘導体を検出すればよ
い。その具体的な測定法としては、例えば、以下の通り
である。ビオチン標識ビタミンＤ誘導体を０．１ｎｇ含
有するエタノール溶液を添加し、標準物質（２−２５６
ｐｇ／チューブ）もしくは検体の５０％エタノール溶液
５０μｌの混合溶液に、各チューブ当り７８μｇの蛋白
濃度を含むニワトリ腸管レセプター（ヤマサ醤油製）の
０．１Ｍ ｐＨ７．４トリス緩衝液５００μｌを加え、
４℃で４時間競合反応させる。その後ＢＦ分離のために
デキストラン−チャーコール液を２００μｌ添加、４℃
で３０分間放置後、４℃で１０分間３，０００ｒｐｍで
の遠心操作により分離した上清５００μｌを分取する。
この上清に抗ニワトリ腸管レセプター抗体をコーティン
グしたポリスチレンビーズを入れて４℃で２時間放置し
てニワトリ腸管レセプターを固定化させた後、アルカリ
フォスファターゼ標識アビジン溶液を添加してビオチン
−アビジン複合体を形成させる。溶媒を捨てた後、複合
体未形成のアルカリフォスファターゼ標識アビジン洗浄
するために、緩衝液を添加して洗浄を行う。その後、ア
ルカリフォスファターゼの基質としてパラニトロフェノ
ール燐酸溶液を添加し、一定時間のインキュベーション
後に発色する４０５ｎｍの黄色の吸収強度を測定するこ
とにより、ビタミンＤ結合性を有する受容体に結合した
ビオチン標識ビタミンＤ誘導体の量を知ることができ
る。ここで予め濃度既知のスタンダードより得られた標
準曲線を基に未知の検体におけるビタミンＤ類の濃度を
算出することができる。
ンＤ誘導体を用いた場合の測定法においても、前述の如
く、競合反応せしめた後、ＢＦ分離し、未反応物または
反応生成物中の該標識ビタミンＤ誘導体を検出すればよ
い。その具体的な測定法としては、例えば、以下の通り
である。ビオチン標識ビタミンＤ誘導体を０．１ｎｇ含
有するエタノール溶液を添加し、標準物質（２−２５６
ｐｇ／チューブ）もしくは検体の５０％エタノール溶液
５０μｌの混合溶液に、各チューブ当り７８μｇの蛋白
濃度を含むニワトリ腸管レセプター（ヤマサ醤油製）の
０．１Ｍ ｐＨ７．４トリス緩衝液５００μｌを加え、
４℃で４時間競合反応させる。その後ＢＦ分離のために
デキストラン−チャーコール液を２００μｌ添加、４℃
で３０分間放置後、４℃で１０分間３，０００ｒｐｍで
の遠心操作により分離した上清５００μｌを分取する。
この上清に抗ニワトリ腸管レセプター抗体をコーティン
グしたポリスチレンビーズを入れて４℃で２時間放置し
てニワトリ腸管レセプターを固定化させた後、アルカリ
フォスファターゼ標識アビジン溶液を添加してビオチン
−アビジン複合体を形成させる。溶媒を捨てた後、複合
体未形成のアルカリフォスファターゼ標識アビジン洗浄
するために、緩衝液を添加して洗浄を行う。その後、ア
ルカリフォスファターゼの基質としてパラニトロフェノ
ール燐酸溶液を添加し、一定時間のインキュベーション
後に発色する４０５ｎｍの黄色の吸収強度を測定するこ
とにより、ビタミンＤ結合性を有する受容体に結合した
ビオチン標識ビタミンＤ誘導体の量を知ることができ
る。ここで予め濃度既知のスタンダードより得られた標
準曲線を基に未知の検体におけるビタミンＤ類の濃度を
算出することができる。
【００５４】
【実施例】次に実施例により本発明をさらに詳細に説明
するが、本発明はこれらの例によってなんら限定される
ものではない。
するが、本発明はこれらの例によってなんら限定される
ものではない。
【００５５】
【参考例１】 １α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシ
リル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 １α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ５０ｍｇ（０. １２ｍｍｏ
ｌ、カリ−デュファー社製）を無水ＴＨＦ２ｍｌ中アル
ゴンガス雰気下で、ｔ- ブチルジメチルシリルクロライ
ド １２６ｍｇ（０. ８４ｍｍｏｌ、アルドリッチ社
製）、イミダゾール １２２ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ、ア
ルドリッチ社製）を加え、４℃にて二日間反応させた。
反応後、溶液中に析出した塩を濾別した後に濾液を濃縮
し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル Ｃ−３０
０、和光純薬社製、展開溶媒、酢エチ：ｎ- ヘキサン＝
１：２）にて分離精製することにより目的物を７４．２
ｍｇ（収率９６％）得ることができた。
リル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 １α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ５０ｍｇ（０. １２ｍｍｏ
ｌ、カリ−デュファー社製）を無水ＴＨＦ２ｍｌ中アル
ゴンガス雰気下で、ｔ- ブチルジメチルシリルクロライ
ド １２６ｍｇ（０. ８４ｍｍｏｌ、アルドリッチ社
製）、イミダゾール １２２ｍｇ（１．８ｍｍｏｌ、ア
ルドリッチ社製）を加え、４℃にて二日間反応させた。
反応後、溶液中に析出した塩を濾別した後に濾液を濃縮
し、カラムクロマトグラフィー（シリカゲル Ｃ−３０
０、和光純薬社製、展開溶媒、酢エチ：ｎ- ヘキサン＝
１：２）にて分離精製することにより目的物を７４．２
ｍｇ（収率９６％）得ることができた。
【００５６】Ｒｆ＝０. ５２（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：２）１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ
３）：δ ０．０６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），
０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），０．８９（Ｓｉ
−ｔＢｕ，１８Ｈ，ｓ），０．９４（ＣＨ３−２１，３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８２），１．２１（ＣＨ３−２６ ａ
ｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．２２（Ｈ−４β，１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ ７．７９），２．４５
（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ３．
９０），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），４．１９
（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．４７（Ｈ−１β，１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝６．３５ ａｎｄ ３．４２），４．８７
（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４５），５．１８（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１１．２３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．２３）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：２）１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ
３）：δ ０．０６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），
０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），０．８９（Ｓｉ
−ｔＢｕ，１８Ｈ，ｓ），０．９４（ＣＨ３−２１，３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８２），１．２１（ＣＨ３−２６ ａ
ｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．２２（Ｈ−４β，１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ ７．７９），２．４５
（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ３．
９０），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），４．１９
（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．４７（Ｈ−１β，１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝６．３５ ａｎｄ ３．４２），４．８７
（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４５），５．１８（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１１．２３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．２３）
【００５７】
【参考例２】 ３−クロロプロポキシメチルクロライド
の製造、及び、２−クロロエトキシシメチルクロライ
ド、４−クロロブトキシシメチルの製造 文献（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｍｏｎｏ
ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ Ｅｔｈｅｒ，３７７−３７
９）に記載の方法に従って、クロロプロパノール ５ｍ
ｌ（６０ｍｍｏｌ、アルドリッチ社製）に３５％濃度の
ホルマリン３．６ｍｌ（４６ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下
で塩酸ガスを通じ、約４時間撹拌すると、オイル状の３
−クロロプロポキシメチルクロライドが反応溶液の上層
に遊離析出した。このオイル状の３−クロロプロポキシ
メチルクロライドを分液ロートで分取し、塩化カルシウ
ムで乾燥後に２１ｍｍ減圧下で分別蒸留により沸点７６
ー７８℃の蒸留画分に、目的の３−クロロプロポキシメ
チルクロライド約３．５ｍｌを得た。
の製造、及び、２−クロロエトキシシメチルクロライ
ド、４−クロロブトキシシメチルの製造 文献（Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｍｏｎｏ
ｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈｙｌ Ｅｔｈｅｒ，３７７−３７
９）に記載の方法に従って、クロロプロパノール ５ｍ
ｌ（６０ｍｍｏｌ、アルドリッチ社製）に３５％濃度の
ホルマリン３．６ｍｌ（４６ｍｍｏｌ）を加え、氷冷下
で塩酸ガスを通じ、約４時間撹拌すると、オイル状の３
−クロロプロポキシメチルクロライドが反応溶液の上層
に遊離析出した。このオイル状の３−クロロプロポキシ
メチルクロライドを分液ロートで分取し、塩化カルシウ
ムで乾燥後に２１ｍｍ減圧下で分別蒸留により沸点７６
ー７８℃の蒸留画分に、目的の３−クロロプロポキシメ
チルクロライド約３．５ｍｌを得た。
【００５８】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ２．０
８（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，ｍ），３．６３（ＣＨ２−
Ｃｌ，２Ｈ，ｍ），３．８４（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，
ｍ），５．５０（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ） ２−クロロエトキシメチルクロライド、並びに４−クロ
ロブトキシメチルクロライドの製造は、上記の３−クロ
ロプロポキシメチルクロライドの参考例に準じて製造を
行った。
８（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，ｍ），３．６３（ＣＨ２−
Ｃｌ，２Ｈ，ｍ），３．８４（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，
ｍ），５．５０（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ） ２−クロロエトキシメチルクロライド、並びに４−クロ
ロブトキシメチルクロライドの製造は、上記の３−クロ
ロプロポキシメチルクロライドの参考例に準じて製造を
行った。
【００５９】
【実施例１】 ２５−Ｏ−（３−クロロプロポキシメチ
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の参考例１で得られた１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ７４. ２
ｍｇ（０. １１５２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ１ｍｌ、ア
ルゴンガス雰気下にて、参考例２で調製された３−クロ
ロプロポキシメチルクロライド ５００μｌ、及びジイ
ソプロピルエチルアミン１ｍｌ（アルドリッチ社製）を
０℃で添加し、２時間反応させた。反応終了後、酢エチ
１００ｍｌ、水５０ｍｌを反応液に加え、酢エチ抽出を
行い、酢エチ層を水５０ｍｌで２回洗浄した後に溶媒を
留去した。その残査をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（和光純薬社製、酢エチ：ｎ- ヘキサン＝１：４）
にて精製し、目的物を８２ｍｇ（収率９５％）で得るこ
とができた。
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の参考例１で得られた１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ７４. ２
ｍｇ（０. １１５２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ１ｍｌ、ア
ルゴンガス雰気下にて、参考例２で調製された３−クロ
ロプロポキシメチルクロライド ５００μｌ、及びジイ
ソプロピルエチルアミン１ｍｌ（アルドリッチ社製）を
０℃で添加し、２時間反応させた。反応終了後、酢エチ
１００ｍｌ、水５０ｍｌを反応液に加え、酢エチ抽出を
行い、酢エチ層を水５０ｍｌで２回洗浄した後に溶媒を
留去した。その残査をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィー（和光純薬社製、酢エチ：ｎ- ヘキサン＝１：４）
にて精製し、目的物を８２ｍｇ（収率９５％）で得るこ
とができた。
【００６０】Ｒｆ＝０. ６１（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：４） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，ｓ），０．９
３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３４），１．２
１（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．２
１（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１９ ａｎｄ
６．８４），２．４５（Ｈ−４α，１Ｈ，ｍ），２．８
２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．６４（ＣＨ２−Ｃｌ，
２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３５），３．６８（Ｏ−ＣＨ２−，
２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．２０（Ｈ−３α，１
Ｈ，ｍ），４．３７（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７５
（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ−１９，
１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４５），５．１８（Ｈ−１９，１
Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２
３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：４） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，ｓ），０．９
３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３４），１．２
１（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．２
１（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１９ ａｎｄ
６．８４），２．４５（Ｈ−４α，１Ｈ，ｍ），２．８
２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．６４（ＣＨ２−Ｃｌ，
２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３５），３．６８（Ｏ−ＣＨ２−，
２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．２０（Ｈ−３α，１
Ｈ，ｍ），４．３７（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７５
（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ−１９，
１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４５），５．１８（Ｈ−１９，１
Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２
３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００６１】
【実施例２】 ２５−Ｏ−（２−クロロエトキシメチ
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例１に準じた操作法により、上記の参考例１で得ら
れた１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ５８ｍｇ（０．０９ｍｍｏ
ｌ）と参考例２に準じて調製された２−クロロエトキシ
メチルクロリドを用いて目的物である２５−Ｏ−（２−
クロロエトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を４３ｍｇ
（収率６３．３％）得ることができた。
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例１に準じた操作法により、上記の参考例１で得ら
れた１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ５８ｍｇ（０．０９ｍｍｏ
ｌ）と参考例２に準じて調製された２−クロロエトキシ
メチルクロリドを用いて目的物である２５−Ｏ−（２−
クロロエトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を４３ｍｇ
（収率６３．３％）得ることができた。
【００６２】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０
５（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５２（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８９（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９１（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３
４），１．２０（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，
ｓ），２．２０（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１
８ ａｎｄ ７．３２），２．４３（Ｈ−４α，１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ３．９１），２．８１
（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．６３（ＣＨ２−Ｃｌ，２
Ｈ，ｍ），３．８０（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｍ），４．
１８（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．３５（Ｈ−１β，１
Ｈ，ｍ），４．７９（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），
４．８５（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４４），５．
１６（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．００（Ｈ−７，１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．２２（Ｈ−６，１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１１．２３）
５（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５２（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８９（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９１（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３
４），１．２０（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，
ｓ），２．２０（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１
８ ａｎｄ ７．３２），２．４３（Ｈ−４α，１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ３．９１），２．８１
（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．６３（ＣＨ２−Ｃｌ，２
Ｈ，ｍ），３．８０（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｍ），４．
１８（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．３５（Ｈ−１β，１
Ｈ，ｍ），４．７９（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），
４．８５（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４４），５．
１６（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．００（Ｈ−７，１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．２２（Ｈ−６，１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００６３】
【実施例３】 ２５−Ｏ−（４−クロロブトキシメチ
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例１に準じた操作法により、上記の参考例１で得ら
れた１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ５８ｍｇ（０．０９ｍｍｏ
ｌ）と参考例２に準じて調製された４−クロロブトキシ
メチルクロリドを用いて目的物である２５−Ｏ−（４−
クロロブトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を４５．２
ｍｇ（収率６５．６％）得ることができた。
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例１に準じた操作法により、上記の参考例１で得ら
れた１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ５８ｍｇ（０．０９ｍｍｏ
ｌ）と参考例２に準じて調製された４−クロロブトキシ
メチルクロリドを用いて目的物である２５−Ｏ−（４−
クロロブトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を４５．２
ｍｇ（収率６５．６％）得ることができた。
【００６４】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０
６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５２（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８９（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９１（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３
４），１．１９（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，
ｓ），１．７１−１．７６（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，
ｍ），１．８３−１．８６（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，
ｍ），２．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ
７．３２），２．４３（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
１３．１８ ａｎｄ ３．４２），２．８１（Ｈ−９
β，１Ｈ，ｍ），３．５３−３．５８（ＣＨ２−Ｃｌ，
Ｏ−ＣＨ２，４Ｈ，ｍ），４．１８（Ｈ−３α，１Ｈ，
ｍ），４．３５（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７２（Ｏ
−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８５（Ｈ−１９，１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９３），５．１６（Ｈ−１９，１Ｈ，
ｍ），６．００（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２
３），６．２２（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５２（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８９（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９１（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３
４），１．１９（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，
ｓ），１．７１−１．７６（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，
ｍ），１．８３−１．８６（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，
ｍ），２．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ
７．３２），２．４３（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
１３．１８ ａｎｄ ３．４２），２．８１（Ｈ−９
β，１Ｈ，ｍ），３．５３−３．５８（ＣＨ２−Ｃｌ，
Ｏ−ＣＨ２，４Ｈ，ｍ），４．１８（Ｈ−３α，１Ｈ，
ｍ），４．３５（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７２（Ｏ
−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８５（Ｈ−１９，１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９３），５．１６（Ｈ−１９，１Ｈ，
ｍ），６．００（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２
３），６．２２（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００６５】
【実施例４】 ２５−Ｏ−（３−アジドプロポキシメチ
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例１で得られた２５−Ｏ−（３−クロロプロ
ポキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチル
シリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体 ６６ｍｇ
（０. ０８７９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ１ｍｌ、無水Ｔ
ＨＦ０. ５ｍｌの混合溶媒中、アルゴンガス雰気下で、
アジ化ナトリウム２７６ｍｇ（４．３９５ｍｍｏｌ、メ
ルク社製）を加え、６０℃にて２４時間反応せしめた。
反応後、酢エチ５０ｍｌで抽出を行い、水５０ｍｌで４
回洗浄を行い、酢エチ層を濃縮し、分取用シリカゲルＴ
ＬＣ（メルク社製、展開溶媒、酢エチ：ｎ- ヘキサン＝
１：２５）にて分離精製すると、目的物４３. ９ｍｇ
（収率６６％）を得ることができた。
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例１で得られた２５−Ｏ−（３−クロロプロ
ポキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチル
シリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体 ６６ｍｇ
（０. ０８７９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ１ｍｌ、無水Ｔ
ＨＦ０. ５ｍｌの混合溶媒中、アルゴンガス雰気下で、
アジ化ナトリウム２７６ｍｇ（４．３９５ｍｍｏｌ、メ
ルク社製）を加え、６０℃にて２４時間反応せしめた。
反応後、酢エチ５０ｍｌで抽出を行い、水５０ｍｌで４
回洗浄を行い、酢エチ層を濃縮し、分取用シリカゲルＴ
ＬＣ（メルク社製、展開溶媒、酢エチ：ｎ- ヘキサン＝
１：２５）にて分離精製すると、目的物４３. ９ｍｇ
（収率６６％）を得ることができた。
【００６６】Ｒｆ＝０. ３７（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：９） ＩＲ：（neat）ｃｍ-1 ２９５０、２１００、１４７
０、１４５０、１３８０、１３７０、１１９０、１１５
０ １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，ｓ），０．９
３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８４），１．２
１（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），１．８
５（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝５．８６ ａｎ
ｄ ７．８４），２．３１（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１３．１８ ａｎｄ ７．３３），２．４５（Ｈ−４
α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ３．６２），
２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．３９（ＣＨ２−
Ｎ３，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８４），３．６２（Ｏ−ＣＨ
２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．１９（Ｈ−３
α，１Ｈ，ｍ），４．３７（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），
４．７５（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４５），５．１８（Ｈ−１
９，１Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．２３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．
２３）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：９） ＩＲ：（neat）ｃｍ-1 ２９５０、２１００、１４７
０、１４５０、１３８０、１３７０、１１９０、１１５
０ １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，ｓ），０．９
３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８４），１．２
１（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），１．８
５（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，ｔｄ，Ｊ＝５．８６ ａｎ
ｄ ７．８４），２．３１（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１３．１８ ａｎｄ ７．３３），２．４５（Ｈ−４
α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ３．６２），
２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．３９（ＣＨ２−
Ｎ３，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８４），３．６２（Ｏ−ＣＨ
２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．１９（Ｈ−３
α，１Ｈ，ｍ），４．３７（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），
４．７５（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４５），５．１８（Ｈ−１
９，１Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．２３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．
２３）
【００６７】
【実施例５】 ２５−Ｏ−（２−アジドエトキシメチ
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例４に準じた操作法で、実施例２で得られた２５−
Ｏ−（２−クロロエトキシシメチル）−１α、３β−ジ
−ｔ−ブチルジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ
3 ４２ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）をアジ化ナトリウ
ムと反応せしめると、目的物である２５−Ｏ−（２−ア
ジドエトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジ
メチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を２５ｍｇ
（収率４０．５％）得ることができた。
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例４に準じた操作法で、実施例２で得られた２５−
Ｏ−（２−クロロエトキシシメチル）−１α、３β−ジ
−ｔ−ブチルジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ
3 ４２ｍｇ（０．０５７ｍｍｏｌ）をアジ化ナトリウ
ムと反応せしめると、目的物である２５−Ｏ−（２−ア
ジドエトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジ
メチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を２５ｍｇ
（収率４０．５％）得ることができた。
【００６８】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０
６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８
３），１．２２（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，
ｓ），２．２２（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１
８ ａｎｄ ７．３３），２．４５（Ｈ−４α，１Ｈ，
ｍ），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．４０（Ｃ
Ｈ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），３．７３（Ｏ−ＣＨ２−，２
Ｈ，ｍ），４．１９（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．３７
（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．８０（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，
２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ−２．
６４），５．１８（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．０２
（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．２４（Ｈ
−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８
３），１．２２（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，
ｓ），２．２２（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１
８ ａｎｄ ７．３３），２．４５（Ｈ−４α，１Ｈ，
ｍ），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．４０（Ｃ
Ｈ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），３．７３（Ｏ−ＣＨ２−，２
Ｈ，ｍ），４．１９（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．３７
（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．８０（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，
２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ−２．
６４），５．１８（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．０２
（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．２４（Ｈ
−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００６９】
【実施例６】 ２５−Ｏ−（４−アジドブトキシメチ
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例４に準じた操作法で、実施例３で得られた２５−
Ｏ−（４−クロロブトキシメチル）−１α、３β−ジ−
ｔ−ブチルジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3
４５．２ｍｇ（０．０５９ｍｍｏｌ）をアジ化ナトリ
ウムと反応せしめると、目的物である２５−Ｏ−（４−
アジドブトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を３７ｍｇ
（収率８１．２％）得ることができた。
ル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシリル−１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 実施例４に準じた操作法で、実施例３で得られた２５−
Ｏ−（４−クロロブトキシメチル）−１α、３β−ジ−
ｔ−ブチルジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3
４５．２ｍｇ（０．０５９ｍｍｏｌ）をアジ化ナトリ
ウムと反応せしめると、目的物である２５−Ｏ−（４−
アジドブトキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチル
ジメチルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を３７ｍｇ
（収率８１．２％）得ることができた。
【００７０】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０
６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９１（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｍ），１．２１
（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），１．６６
−１．６８（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，４Ｈ，ｍ），２．２２
（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１９ ａｎｄ
７．３２），２．４５（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
３．１９ ａｎｄ ３．４２），２．８２（Ｈ−９β，
１Ｈ，ｍ），３．３０（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），
３．５７（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｍ），４．１９（Ｈ−
３α，１Ｈ，ｍ），４．３７（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），
４．７５（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６４），５．１８（Ｈ−１
９，１Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．２３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．
２３）
６（Ｓｉ−ＣＨ３，１２Ｈ，ｓ），０．５３（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，１８Ｈ，
ｓ），０．９１（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｍ），１．２１
（ＣＨ３−２６ ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），１．６６
−１．６８（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，４Ｈ，ｍ），２．２２
（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１９ ａｎｄ
７．３２），２．４５（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
３．１９ ａｎｄ ３．４２），２．８２（Ｈ−９β，
１Ｈ，ｍ），３．３０（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），
３．５７（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｍ），４．１９（Ｈ−
３α，１Ｈ，ｍ），４．３７（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），
４．７５（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．８７（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．６４），５．１８（Ｈ−１
９，１Ｈ，ｍ），６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．２３），６．２４（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．
２３）
【００７１】
【実施例７】 ２５−Ｏ−（３−アジドプロポキシメチ
ル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例４で得られたの２５−Ｏ−（３−アジドプ
ロポキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチ
ルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体３５. ９ｍ
ｇ（４７. ３６μｍｏｌ）を無水ＴＨＦ中、アルゴンガ
ス雰気下でテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフロライド
の１Ｍ ＴＨＦ溶液試薬を４７３. ６μｌ（４７３．６
μｍｏｌ、アルドリッチ社製）添加し、４℃にて１６時
間反応せしめた。反応後、反応液を濃縮しシリカゲルカ
ラム（展開溶媒、酢エチ：ｎ-ヘキサン＝４：１）で分
離精製すると、脱シリルされた目的物を１６. ６ｍｇ
（収率６６％）で得ることができた。
ル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例４で得られたの２５−Ｏ−（３−アジドプ
ロポキシメチル）−１α、３β−ジ−ｔ−ブチルジメチ
ルシリル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体３５. ９ｍ
ｇ（４７. ３６μｍｏｌ）を無水ＴＨＦ中、アルゴンガ
ス雰気下でテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフロライド
の１Ｍ ＴＨＦ溶液試薬を４７３. ６μｌ（４７３．６
μｍｏｌ、アルドリッチ社製）添加し、４℃にて１６時
間反応せしめた。反応後、反応液を濃縮しシリカゲルカ
ラム（展開溶媒、酢エチ：ｎ-ヘキサン＝４：１）で分
離精製すると、脱シリルされた目的物を１６. ６ｍｇ
（収率６６％）で得ることができた。
【００７２】Ｒｆ＝０. ２５（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝２：１） ＩＲ：（neat）ｃｍ-1、２９５０、２１００、１４７
０、１４５０、１３８０、１３７０、１１５０ １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．５４（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２１（ＣＨ３−２６ａｎｄ
２７，６Ｈ，ｓ），１．８５（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，
ｔｄ，Ｊ＝５．８６ ａｎｄ ６．８４），２．３１
（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ６．
３５），２．６０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．
１８ ａｎｄ ３．４２），２．８２（Ｈ−９β，１
Ｈ，ｍ），３．３９（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝
６．８４），３．６２（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝
５．８６），４．２３（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．４
４（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７５（Ｏ−ＣＨ２−
Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．０１（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
１．４７），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．０
２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．３８
（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝２：１） ＩＲ：（neat）ｃｍ-1、２９５０、２１００、１４７
０、１４５０、１３８０、１３７０、１１５０ １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．５４（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２１（ＣＨ３−２６ａｎｄ
２７，６Ｈ，ｓ），１．８５（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，
ｔｄ，Ｊ＝５．８６ ａｎｄ ６．８４），２．３１
（Ｈ−４β，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ６．
３５），２．６０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．
１８ ａｎｄ ３．４２），２．８２（Ｈ−９β，１
Ｈ，ｍ），３．３９（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝
６．８４），３．６２（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝
５．８６），４．２３（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．４
４（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７５（Ｏ−ＣＨ２−
Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．０１（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
１．４７），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．０
２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．３８
（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００７３】
【実施例８】 ２５−Ｏ−（２−アジドエトキシメチ
ル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例５で得られた２５−Ｏ−（２−アジドエト
キシメチル）−１α，３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシ
リル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ４０．８ｍｇ（０．
０５４８ｍｍｏｌ）をテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
フロライドにて脱シリル保護をすると目的物である２５
−Ｏ−（２−アジドエトキシメチル）−１α，２５（Ｏ
Ｈ）2 Ｄ3 ２６ｍｇ（収率９２％）を得ることができ
た。
ル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例５で得られた２５−Ｏ−（２−アジドエト
キシメチル）−１α，３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシ
リル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ４０．８ｍｇ（０．
０５４８ｍｍｏｌ）をテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
フロライドにて脱シリル保護をすると目的物である２５
−Ｏ−（２−アジドエトキシメチル）−１α，２５（Ｏ
Ｈ）2 Ｄ3 ２６ｍｇ（収率９２％）を得ることができ
た。
【００７４】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．５
４（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２
１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２３（ＣＨ３−２
６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．３１（Ｈ−４β，１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ６．３５），２．６
０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ
３．４２），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．４
０（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），３．７３（Ｏ−ＣＨ２
−，２Ｈ，ｍ），４．２３（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），
４．４２（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．８０（Ｏ−ＣＨ
２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．００（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１．４６），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），
６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．
３８（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
４（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２
１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２３（ＣＨ３−２
６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．３１（Ｈ−４β，１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ａｎｄ ６．３５），２．６
０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ
３．４２），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．４
０（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），３．７３（Ｏ−ＣＨ２
−，２Ｈ，ｍ），４．２３（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），
４．４２（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．８０（Ｏ−ＣＨ
２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．００（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１．４６），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），
６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．
３８（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００７５】
【実施例９】 ２５−Ｏ−（４−アジドブトキシメチ
ル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例６で得られた２５−Ｏ−（４−アジドブト
キシメチル）−１α，３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシ
リル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ３７ｍｇ（０．０４
８ｍｍｏｌ）をテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフロラ
イドにて脱シリル保護をすると目的物である２５−Ｏ−
（４−アジドブトキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2
Ｄ3 ２５ｍｇ（収率９６％）を得ることができた。
ル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例６で得られた２５−Ｏ−（４−アジドブト
キシメチル）−１α，３β−ジ−ｔ−ブチルジメチルシ
リル−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ３７ｍｇ（０．０４
８ｍｍｏｌ）をテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフロラ
イドにて脱シリル保護をすると目的物である２５−Ｏ−
（４−アジドブトキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2
Ｄ3 ２５ｍｇ（収率９６％）を得ることができた。
【００７６】１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．５
４（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２
１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２１（ＣＨ３−２
６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），１．６４−１．７２（Ｃ
−ＣＨ２−Ｃ，４Ｈ，ｍ），２．３１（Ｈ−４β，１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ ６．３５），２．
６０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ
３．４２），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．
３０（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），３．５７（Ｏ−ＣＨ
２−，２Ｈ，ｍ），４．２３（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），
４．４３（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７４（Ｏ−ＣＨ
２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．００（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１．４６），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），
６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．
３８（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
４（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２
１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２１（ＣＨ３−２
６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），１．６４−１．７２（Ｃ
−ＣＨ２−Ｃ，４Ｈ，ｍ），２．３１（Ｈ−４β，１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ ６．３５），２．
６０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．１８ ａｎｄ
３．４２），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．
３０（ＣＨ２−Ｎ３，２Ｈ，ｍ），３．５７（Ｏ−ＣＨ
２−，２Ｈ，ｍ），４．２３（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），
４．４３（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），４．７４（Ｏ−ＣＨ
２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．００（Ｈ−１９，１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１．４６），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），
６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．
３８（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３）
【００７７】
【実施例１０】 ２５−Ｏ−（３−アミノプロポキシメ
チル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例３で得られた２５−Ｏ−（３−アジドプロ
ポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体 １
６. ６ｍｇ（３１. ３μｍｏｌ）を１. ５ｍｌの無水Ｔ
ＨＦに溶解し、水素化リチウムアルミニウム １１. ８
９ｍｇ（３１３μｍｏｌ、和光純薬社製）の無水ＴＨＦ
１ｍｌ溶解液に０℃、アルゴンガス雰気下で滴下しなが
ら添加し反応せしめた。０℃で１５分反応後、過剰の水
素化リチウムアルミニウムを分解するために５０％水含
有のＴＨＦ溶液１ｍｌを滴下加え、０℃で１５分撹拌反
応させ、反応液中の析出物をろ過し、濾液を濃縮するこ
とにより目的物である２５−Ｏ−（３−アミノプロポキ
シメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を１２. ４ｍｇ
（収率７９％）得ることができた。
チル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の製造 上記の実施例３で得られた２５−Ｏ−（３−アジドプロ
ポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体 １
６. ６ｍｇ（３１. ３μｍｏｌ）を１. ５ｍｌの無水Ｔ
ＨＦに溶解し、水素化リチウムアルミニウム １１. ８
９ｍｇ（３１３μｍｏｌ、和光純薬社製）の無水ＴＨＦ
１ｍｌ溶解液に０℃、アルゴンガス雰気下で滴下しなが
ら添加し反応せしめた。０℃で１５分反応後、過剰の水
素化リチウムアルミニウムを分解するために５０％水含
有のＴＨＦ溶液１ｍｌを滴下加え、０℃で１５分撹拌反
応させ、反応液中の析出物をろ過し、濾液を濃縮するこ
とにより目的物である２５−Ｏ−（３−アミノプロポキ
シメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を１２. ４ｍｇ
（収率７９％）得ることができた。
【００７８】Ｒｆ＝０. ０９（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：メタノール＝１：４） ニンヒドリン反応 陽性 ＵＶ：λmax （ＥｔＯＨ）ｎｍ ２６５. ６
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：メタノール＝１：４） ニンヒドリン反応 陽性 ＵＶ：λmax （ＥｔＯＨ）ｎｍ ２６５. ６
【００７９】
【実施例１１】 （その１）；放射性ヨード（125 Ｉ）
標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体に対するコールド
化合物の製造 上記の実施例１０で得られた２５−Ｏ−（３−アミノプ
ロポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体
１. ５５ｍｇ（３. ０８５μｍｏｌ）を無水ＴＨＦ１ｍ
ｌ、アルゴンガス雰気下、４−ヒドロキシ−３−ヨード
−フェニルプロピオニル−Ｎ−サクシニミドエステル
１. ２ｍｇ（３. ０８５μｍｏｌ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ，，ｐ１２２０，１９８
９参照）及び、トリエチルアミン０．４２９μｌ（３．
０８５μｍｏｌ、和光純薬社製）を添加し、４℃にて２
０時間反応せしめた。反応液を濃縮し、残査をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフイー（クロロホルム：メタノー
ル＝５：１）で分離精製すると、４−ヒドロキシ−３−
ヨード−フェニルプロピオニル基が２５−Ｏ−（３−ア
ミノプロポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の
アミノ基とアミド結合した目的物の放射性ヨード（125
Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体のコールド化
合物の標準品を１. ６５ｍｇ（収率６７％）得ることが
できた。
標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体に対するコールド
化合物の製造 上記の実施例１０で得られた２５−Ｏ−（３−アミノプ
ロポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体
１. ５５ｍｇ（３. ０８５μｍｏｌ）を無水ＴＨＦ１ｍ
ｌ、アルゴンガス雰気下、４−ヒドロキシ−３−ヨード
−フェニルプロピオニル−Ｎ−サクシニミドエステル
１. ２ｍｇ（３. ０８５μｍｏｌ、Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ，，ｐ１２２０，１９８
９参照）及び、トリエチルアミン０．４２９μｌ（３．
０８５μｍｏｌ、和光純薬社製）を添加し、４℃にて２
０時間反応せしめた。反応液を濃縮し、残査をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフイー（クロロホルム：メタノー
ル＝５：１）で分離精製すると、４−ヒドロキシ−３−
ヨード−フェニルプロピオニル基が２５−Ｏ−（３−ア
ミノプロポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 の
アミノ基とアミド結合した目的物の放射性ヨード（125
Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体のコールド化
合物の標準品を１. ６５ｍｇ（収率６７％）得ることが
できた。
【００８０】Ｒｆ＝０. ６３（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、ク
ロロホルム：メタノール＝５：１）１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ３）：δ ０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），
０．９２（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３５），
１．２０（ＣＨ３−２６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），
１．７２（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，ｍ），２．２９−
２．４２（Ｈ−４β，ＣＨ２−Ｐｈ，３Ｈ，ｍ），２．
６１（Ｈ−４α，１Ｈ，ｍ），２．８１−２．９０（Ｈ
−９β，ＣＯ−ＣＨ２−，３Ｈ，ｍ），３．３４（ＣＨ
２−Ｎ，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３５），３．５７（Ｏ−Ｃ
Ｈ２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．２３（Ｈ−３
α，１Ｈ，ｍ），４．４４（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），
４．７０（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．０１（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，
ｍ），５．８７（ＮＨ，１Ｈ，ｂｒｓ），６．０１（Ｈ
−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．３８（Ｈ−
６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．８８（Ｈ−Ｐ
ｈ，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３０），７．０６（Ｈ−Ｐｈ，
１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．９６ ａｎｄ ８．３０），７．
４９（Ｈ−Ｐｈ，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９６）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、ク
ロロホルム：メタノール＝５：１）１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ
Ｃｌ３）：δ ０．５３（ＣＨ３−１８，３Ｈ，ｓ），
０．９２（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３５），
１．２０（ＣＨ３−２６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），
１．７２（Ｃ−ＣＨ２−Ｃ，２Ｈ，ｍ），２．２９−
２．４２（Ｈ−４β，ＣＨ２−Ｐｈ，３Ｈ，ｍ），２．
６１（Ｈ−４α，１Ｈ，ｍ），２．８１−２．９０（Ｈ
−９β，ＣＯ−ＣＨ２−，３Ｈ，ｍ），３．３４（ＣＨ
２−Ｎ，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．３５），３．５７（Ｏ−Ｃ
Ｈ２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．２３（Ｈ−３
α，１Ｈ，ｍ），４．４４（Ｈ−１β，１Ｈ，ｍ），
４．７０（Ｏ−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．０１（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），５．３３（Ｈ−１９，１Ｈ，
ｍ），５．８７（ＮＨ，１Ｈ，ｂｒｓ），６．０１（Ｈ
−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．３８（Ｈ−
６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２３），６．８８（Ｈ−Ｐ
ｈ，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３０），７．０６（Ｈ−Ｐｈ，
１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．９６ ａｎｄ ８．３０），７．
４９（Ｈ−Ｐｈ，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．９６）
【００８１】
【実施例１１】 （その２）；放射性ヨード（125 Ｉ）
標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体の製造 上記実施例１０の２５−Ｏ−（３−アミノプロポキシメ
チル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体 ６９．２７
ｎｍｏｌ／１０．８μｌエタノール溶液を無水ＴＨＦ５
７. ３μｌ、アルゴンガス雰気下、４−ヒドロキシ−３
−ヨード（125Ｉ）−フェニルプロピオニル−Ｎ−サク
シニミドエステル（125 Ｉ−ボルトンハンター試薬、Ｎ
ＥＮ製、８１. ４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）３. ０８３ＭＢｑ
／３０μｌベンゼン溶液（６９. ２７ｐｍｏｌ）、及
び、トリエチルアミン（１０００倍希釈ＴＨＦ液）１.
３μｌを添加し、４℃にて２４時間反応せしめた。この
反応液を濃縮し、ＨＰＬＣにて分離精製をすると、目的
とする放射性ヨード（125 Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）
2 Ｄ3 １. ５０７ＭＢｑ（放射性回収率４８. ９％）
を得ることができた。
標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体の製造 上記実施例１０の２５−Ｏ−（３−アミノプロポキシメ
チル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体 ６９．２７
ｎｍｏｌ／１０．８μｌエタノール溶液を無水ＴＨＦ５
７. ３μｌ、アルゴンガス雰気下、４−ヒドロキシ−３
−ヨード（125Ｉ）−フェニルプロピオニル−Ｎ−サク
シニミドエステル（125 Ｉ−ボルトンハンター試薬、Ｎ
ＥＮ製、８１. ４ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）３. ０８３ＭＢｑ
／３０μｌベンゼン溶液（６９. ２７ｐｍｏｌ）、及
び、トリエチルアミン（１０００倍希釈ＴＨＦ液）１.
３μｌを添加し、４℃にて２４時間反応せしめた。この
反応液を濃縮し、ＨＰＬＣにて分離精製をすると、目的
とする放射性ヨード（125 Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）
2 Ｄ3 １. ５０７ＭＢｑ（放射性回収率４８. ９％）
を得ることができた。
【００８２】ＨＰＬＣ- Ｒｔ＝３５〜３８分、使用カラ
ム：Ｚｏｒｂａｘ−ＯＤＳ φ４.６ｘ２５０ｍｍ（デ
ュポン製）、移動相溶媒：１５％水−メタノール、流
速：０. ５ｍｌ／分
ム：Ｚｏｒｂａｘ−ＯＤＳ φ４.６ｘ２５０ｍｍ（デ
ュポン製）、移動相溶媒：１５％水−メタノール、流
速：０. ５ｍｌ／分
【００８３】
【実施例１１】 （その３）：放射性ヨード（125 Ｉ）
標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体のＨＰＬＣによる
同定 上記の実施例１１（その１）で得られたコールド誘導体
と実施例１１（その２）で得られた放射性ヨード（125
Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体を混合し、Ｈ
ＰＬＣにより検定すると同一の保持時間で溶出され、ヨ
ード（125 Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体と
コールド誘導体は同一の化学構造を有する化合物である
と同定できた。
標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体のＨＰＬＣによる
同定 上記の実施例１１（その１）で得られたコールド誘導体
と実施例１１（その２）で得られた放射性ヨード（125
Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体を混合し、Ｈ
ＰＬＣにより検定すると同一の保持時間で溶出され、ヨ
ード（125 Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体と
コールド誘導体は同一の化学構造を有する化合物である
と同定できた。
【００８４】ＨＰＬＣ- Ｒｔ＝３５〜３８分、使用カラ
ム：Ｚｏｒｂａｘ−ＯＤＳ φ４.６ｘ２５０ｍｍ（デ
ュポン社製）、移動相溶媒：１５％水−メタノール、流
速：０. ５ｍｌ／分、
ム：Ｚｏｒｂａｘ−ＯＤＳ φ４.６ｘ２５０ｍｍ（デ
ュポン社製）、移動相溶媒：１５％水−メタノール、流
速：０. ５ｍｌ／分、
【００８５】
【実施例１２】 放射性ヨード（125 Ｉ）標識１α，２
５（ＯＨ）2 Ｄ3と１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター
を用いた１α，２５（ＯＨ）2 Ｄの測定 上記の実施例１１（その２）で得られた放射性ヨード
（125 Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ３０，００
０ｃｐｍを含むエタノール溶液 ２５μｌ、標準濃度用
の１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 （１−５１２ｐｇ／チュー
ブ）を含むエタノール溶液５０μｌ、及び、ニワトリ腸
管より得られた１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター（ヤ
マサ醤油社製：１α２５（ＯＨ）2 Ｄ3 、および１α，
２５（ＯＨ）2 Ｄ2 とに特異的に結合）の凍乾品を０．
１Ｍ ｐＨ７．６トリス緩衝液で溶解し、各チューブ当
り５００μｌ分注し、４℃で４時間反応せしめた。この
反応液に０．０２５％デキストラン−０．２５％チャー
コールを含む上記と同じ組成のトリス緩衝液を２００μ
ｌ分注し、４℃で３０分間放置した後、遠心分離（３，
０００ｒｐｍ，１０分間）によりをＢ−Ｆ分離を行っ
た。その上清５００μｌを別のチューブに分取し、オー
トウェル−γ−カウンターにて１分間測定をすると、２
−２５６ｐｇ／チューブの濃度範囲において良好な標準
曲線を描くことができた。図１にその標準曲線を示し
た。図中横軸は、１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3の濃度を示
した。また縦軸は、各濃度の１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3
を用いた場合における上清中の放射活性（Ｂ）を、１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 が存在しないとき（ブランク）
の放射活性（Ｂｏ）で除した比率である。
５（ＯＨ）2 Ｄ3と１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター
を用いた１α，２５（ＯＨ）2 Ｄの測定 上記の実施例１１（その２）で得られた放射性ヨード
（125 Ｉ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 ３０，００
０ｃｐｍを含むエタノール溶液 ２５μｌ、標準濃度用
の１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 （１−５１２ｐｇ／チュー
ブ）を含むエタノール溶液５０μｌ、及び、ニワトリ腸
管より得られた１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレセプター（ヤ
マサ醤油社製：１α２５（ＯＨ）2 Ｄ3 、および１α，
２５（ＯＨ）2 Ｄ2 とに特異的に結合）の凍乾品を０．
１Ｍ ｐＨ７．６トリス緩衝液で溶解し、各チューブ当
り５００μｌ分注し、４℃で４時間反応せしめた。この
反応液に０．０２５％デキストラン−０．２５％チャー
コールを含む上記と同じ組成のトリス緩衝液を２００μ
ｌ分注し、４℃で３０分間放置した後、遠心分離（３，
０００ｒｐｍ，１０分間）によりをＢ−Ｆ分離を行っ
た。その上清５００μｌを別のチューブに分取し、オー
トウェル−γ−カウンターにて１分間測定をすると、２
−２５６ｐｇ／チューブの濃度範囲において良好な標準
曲線を描くことができた。図１にその標準曲線を示し
た。図中横軸は、１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3の濃度を示
した。また縦軸は、各濃度の１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3
を用いた場合における上清中の放射活性（Ｂ）を、１
α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 が存在しないとき（ブランク）
の放射活性（Ｂｏ）で除した比率である。
【００８６】健常人の４人の血清検体を用いて、各血清
１ｍｌを小林らの方法（日本臨床、４７、６０８−６１
１、１９８９）に準じて、有機溶媒抽出、逆相または順
相のセップパックカラム（ウオータース社製、商品
名）、およびＨＰＬＣ（カラム；Ｚｏｒｂａｘ−ＳＩ
Ｌ、デュポン社製）精製を行い、アッセイ用のサンプル
とした。この際のＨＰＬＣ精製されたサンプルの抽出回
収率は、６７±４％であった。このサンプルをエタノー
ル ５０μｌに溶解し、上記方法に従いアッセイを行っ
てサンプル中の１，２５（ＯＨ）2 Ｄ濃度を出し、その
値を抽出回収率で補正を行い検体中の１，２５（ＯＨ）
2 Ｄ濃度を算出したところ、３４±３ｐｇ／ｍｌであっ
た。
１ｍｌを小林らの方法（日本臨床、４７、６０８−６１
１、１９８９）に準じて、有機溶媒抽出、逆相または順
相のセップパックカラム（ウオータース社製、商品
名）、およびＨＰＬＣ（カラム；Ｚｏｒｂａｘ−ＳＩ
Ｌ、デュポン社製）精製を行い、アッセイ用のサンプル
とした。この際のＨＰＬＣ精製されたサンプルの抽出回
収率は、６７±４％であった。このサンプルをエタノー
ル ５０μｌに溶解し、上記方法に従いアッセイを行っ
てサンプル中の１，２５（ＯＨ）2 Ｄ濃度を出し、その
値を抽出回収率で補正を行い検体中の１，２５（ＯＨ）
2 Ｄ濃度を算出したところ、３４±３ｐｇ／ｍｌであっ
た。
【００８７】
【参考例３】 ｔ−ブチルジメチルシリル−２５ＯＨＤ
3 の製造 ２５ＯＨＤ3 ２２ｍｇ（０. ０５５ｍｍｏｌ、カリ−
デュファー社製）を出発原料とし、ｔ−ブチルジメチル
シリルを用いて、上記参考例１に準じた操作法により目
的物であるｔ−ブチルジメチルシリル−２５ＯＨＤ3 を
１９ｍｇ（収率６５．４％）で得た。
3 の製造 ２５ＯＨＤ3 ２２ｍｇ（０. ０５５ｍｍｏｌ、カリ−
デュファー社製）を出発原料とし、ｔ−ブチルジメチル
シリルを用いて、上記参考例１に準じた操作法により目
的物であるｔ−ブチルジメチルシリル−２５ＯＨＤ3 を
１９ｍｇ（収率６５．４％）で得た。
【００８８】Ｒｆ＝０. ４９（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：９） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，６Ｈ，ｄ），０．５５（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，９Ｈ，ｓ），０．９４
（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２７），１．２１
（ＣＨ３−２６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．８３
（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．８２（Ｈ−３α，１Ｈ，
ｍ），４．７８（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），５．０１（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），６．０１（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１１．２），６．１６（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．５）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：９） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，６Ｈ，ｄ），０．５５（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，９Ｈ，ｓ），０．９４
（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２７），１．２１
（ＣＨ３−２６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），２．８３
（Ｈ−９β，１Ｈ，ｍ），３．８２（Ｈ−３α，１Ｈ，
ｍ），４．７８（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），５．０１（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），６．０１（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１１．２），６．１６（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
１．５）
【００８９】
【実施例１３】 ２５−Ｏ−（３−クロロプロポキシメ
チル）−ｔ−ブチルジメチルシリル−２５ＯＨＤ3 の製
造 実施例２に準じた操作法で、参考例３で得られたｔ−ブ
チルジメチルシリル−２５ＯＨＤ3 ６ｍｇ（０．０１
１３６ｍｍｏｌ）に３−クロロプロポキシメチルクロラ
イドを作用させることにより、目的物である２５−Ｏ−
（３−クロロプロポキシメチル）−ｔ−ブチルジメチル
シリル−２５ＯＨＤ3 ５ｍｇ（収率７０．８％）を得
た。
チル）−ｔ−ブチルジメチルシリル−２５ＯＨＤ3 の製
造 実施例２に準じた操作法で、参考例３で得られたｔ−ブ
チルジメチルシリル−２５ＯＨＤ3 ６ｍｇ（０．０１
１３６ｍｍｏｌ）に３−クロロプロポキシメチルクロラ
イドを作用させることにより、目的物である２５−Ｏ−
（３−クロロプロポキシメチル）−ｔ−ブチルジメチル
シリル−２５ＯＨＤ3 ５ｍｇ（収率７０．８％）を得
た。
【００９０】Ｒｆ＝０. ４９（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：９） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，６Ｈ，ｄ），０．５５（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，９Ｈ，ｓ），０．９３
（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２６），１．２１
（ＣＨ３−２６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），３．６１−
３．６８（ＣＨ２−Ｃｌ，Ｏ−ＣＨ２−，４Ｈ，ｍ），
３．７０（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．７５（Ｏ−ＣＨ
２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．７８（Ｈ−１９，１Ｈ，
ｍ），５．０１（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．０１（Ｈ
−７，１Ｈ，ｄ），６．１６（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、酢
エチ：ｎ- ヘキサン＝１：９） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．０６（Ｓｉ−Ｃ
Ｈ３，６Ｈ，ｄ），０．５５（ＣＨ３−１８，３Ｈ，
ｓ），０．８８（Ｓｉ−ｔＢｕ，９Ｈ，ｓ），０．９３
（ＣＨ３−２１，３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．２６），１．２１
（ＣＨ３−２６ａｎｄ ２７，６Ｈ，ｓ），３．６１−
３．６８（ＣＨ２−Ｃｌ，Ｏ−ＣＨ２−，４Ｈ，ｍ），
３．７０（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．７５（Ｏ−ＣＨ
２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），４．７８（Ｈ−１９，１Ｈ，
ｍ），５．０１（Ｈ−１９，１Ｈ，ｍ），６．０１（Ｈ
−７，１Ｈ，ｄ），６．１６（Ｈ−６，１Ｈ，ｄ）
【００９１】
【実施例１４】 ビオチン標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ
3 誘導体の合成 上記の実施例１０で得られた２５−Ｏ−（３−アミノプ
ロポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体
５. ０３ｍｇ（１０μｍｏｌ）を無水ＴＨＦ１．５ｍ
ｌ、アルゴンガス雰気下、Ｎ- ヒドロキシサクシニミド
ビオチン４. ０９ｍｇ（１２μｍｏｌ、シグマ社製）及
び、ジメチルアミノピリジン１．４６ｍｇ（１２μｍｏ
ｌ、ＤＭＡＰ、アルドリッチ社製）を添加し、４℃にて
１６時間反応せしめた。反応液を濃縮し、残査をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー（クロロホルム：メタノ
ール＝５：１）で分離精製すると、ビオチン残基が、２
５−Ｏ−（３−アミノプロポキシメチル）−１α，２５
（ＯＨ）2 Ｄ3 のアミノ基とアミド結合した目的物のビ
オチン標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体を７．０ｍ
ｇ（収率９６％）得ることができた。
3 誘導体の合成 上記の実施例１０で得られた２５−Ｏ−（３−アミノプ
ロポキシメチル）−１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体
５. ０３ｍｇ（１０μｍｏｌ）を無水ＴＨＦ１．５ｍ
ｌ、アルゴンガス雰気下、Ｎ- ヒドロキシサクシニミド
ビオチン４. ０９ｍｇ（１２μｍｏｌ、シグマ社製）及
び、ジメチルアミノピリジン１．４６ｍｇ（１２μｍｏ
ｌ、ＤＭＡＰ、アルドリッチ社製）を添加し、４℃にて
１６時間反応せしめた。反応液を濃縮し、残査をシリカ
ゲルカラムクロマトグラフイー（クロロホルム：メタノ
ール＝５：１）で分離精製すると、ビオチン残基が、２
５−Ｏ−（３−アミノプロポキシメチル）−１α，２５
（ＯＨ）2 Ｄ3 のアミノ基とアミド結合した目的物のビ
オチン標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 誘導体を７．０ｍ
ｇ（収率９６％）得ることができた。
【００９２】Ｒｆ＝０. ４０（シリカゲルＴＬＣ、メル
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、ク
ロロホルム：メタノール＝５：１） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．５４（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２１（ＣＨ３−２６ａｎｄ
２７，６Ｈ，ｓ），２．３２（Ｈ−４β，１Ｈ，ｍ），
２．６０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｍ），２．７３（Ｂ−Ｈ6
or Ｈ7 ，１Ｈ，ｍ），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，
ｍ），２．９１（Ｂ−Ｈ6 or Ｈ7 ，１Ｈ，ｍ），
３．１５（Ｂ−Ｈ1 ，１Ｈ，ｍ），３．３５（ＣＨ２−
Ｎ，２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．２５，１２．３１），３．６３
（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．２３
（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．４３（Ｈ−１β，１Ｈ，
ｍ），４．５０（Ｂ−Ｈ5 ，１Ｈ，ｍ），４．７４（Ｏ
−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．０１（Ｈ−１９，１
Ｈ，ｍ），５．２４（ＮＨ，１Ｈ，ｓ），５．３３（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），５．９４（ＮＨ，１Ｈ，ｓ），
６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．１３），６．
２５（Ｃ−ＮＨ，１Ｈ，ｓ），６．３７（Ｈ−６，１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．１３）
ク社製、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ６０Ｆ254 、展開溶媒、ク
ロロホルム：メタノール＝５：１） １Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：δ ０．５４（ＣＨ３−
１８，３Ｈ，ｓ），０．９３（ＣＨ３−２１，３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝６．３５），１．２１（ＣＨ３−２６ａｎｄ
２７，６Ｈ，ｓ），２．３２（Ｈ−４β，１Ｈ，ｍ），
２．６０（Ｈ−４α，１Ｈ，ｍ），２．７３（Ｂ−Ｈ6
or Ｈ7 ，１Ｈ，ｍ），２．８２（Ｈ−９β，１Ｈ，
ｍ），２．９１（Ｂ−Ｈ6 or Ｈ7 ，１Ｈ，ｍ），
３．１５（Ｂ−Ｈ1 ，１Ｈ，ｍ），３．３５（ＣＨ２−
Ｎ，２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．２５，１２．３１），３．６３
（Ｏ−ＣＨ２−，２Ｈ，ｔ，Ｊ＝５．８６），４．２３
（Ｈ−３α，１Ｈ，ｍ），４．４３（Ｈ−１β，１Ｈ，
ｍ），４．５０（Ｂ−Ｈ5 ，１Ｈ，ｍ），４．７４（Ｏ
−ＣＨ２−Ｏ，２Ｈ，ｓ），５．０１（Ｈ−１９，１
Ｈ，ｍ），５．２４（ＮＨ，１Ｈ，ｓ），５．３３（Ｈ
−１９，１Ｈ，ｍ），５．９４（ＮＨ，１Ｈ，ｓ），
６．０２（Ｈ−７，１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．１３），６．
２５（Ｃ−ＮＨ，１Ｈ，ｓ），６．３７（Ｈ−６，１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．１３）
【００９３】
【発明の効果】本発明は、２５位水酸基を修飾した新規
のビタミンＤ誘導体を提供するものであり、特に、生体
内の活性型ビタミンＤ代謝物の測定において有用な抗体
を作製するのに適するハプテンとなすことができるもの
で、さらに放射性ヨード（125 Ｉ）標識、および、ビオ
チン標識の標識ビタミンＤ誘導体等を提供するものであ
る。例えば、ニワトリ小腸の１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレ
セプターと本発明の放射性ヨード（125 Ｉ）標識１α，
２５（ＯＨ）2 Ｄ3 とを組み合わせた測定法は、従来の
トリチウム（3 Ｈ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を用
いた測定法と同等以上の感度と特異性を有する。しかも
本発明の放射性ヨード標識は、トリチウム放射性標識と
違って、操作の煩雑なシンチレーションを行う必要がな
く、簡単なガンマカウンターにより測定ができることか
ら、より簡便かつ迅速な測定法が提供される。さらに、
ビオチン標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 と１α，２５
（ＯＨ）2 Ｄレセプターを組み合わせた測定法は、放射
性同位元素を用いないというメリットを有しながら、放
射性同位元素を用いた従来の測定法と同等以上の感度と
特異性を有するものである。
のビタミンＤ誘導体を提供するものであり、特に、生体
内の活性型ビタミンＤ代謝物の測定において有用な抗体
を作製するのに適するハプテンとなすことができるもの
で、さらに放射性ヨード（125 Ｉ）標識、および、ビオ
チン標識の標識ビタミンＤ誘導体等を提供するものであ
る。例えば、ニワトリ小腸の１α，２５（ＯＨ）2 Ｄレ
セプターと本発明の放射性ヨード（125 Ｉ）標識１α，
２５（ＯＨ）2 Ｄ3 とを組み合わせた測定法は、従来の
トリチウム（3 Ｈ）標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 を用
いた測定法と同等以上の感度と特異性を有する。しかも
本発明の放射性ヨード標識は、トリチウム放射性標識と
違って、操作の煩雑なシンチレーションを行う必要がな
く、簡単なガンマカウンターにより測定ができることか
ら、より簡便かつ迅速な測定法が提供される。さらに、
ビオチン標識１α，２５（ＯＨ）2 Ｄ3 と１α，２５
（ＯＨ）2 Ｄレセプターを組み合わせた測定法は、放射
性同位元素を用いないというメリットを有しながら、放
射性同位元素を用いた従来の測定法と同等以上の感度と
特異性を有するものである。
【００９４】したがって、本発明の測定法は、微量成分
の測定が必要な分野、例えば臨床的な内分泌検査におい
て有用である。
の測定が必要な分野、例えば臨床的な内分泌検査におい
て有用である。
【図１】図１は、ヨード（125 Ｉ）標識１α，２５（Ｏ
Ｈ）2 Ｄ3 とニワトリ小腸レセプターを用いたレセプタ
ーアッセイにおけるスタンダードカーブを示す。
Ｈ）2 Ｄ3 とニワトリ小腸レセプターを用いたレセプタ
ーアッセイにおけるスタンダードカーブを示す。
Claims (3)
- 【請求項１】 式（１） 【化１】 （ただし、Ｒ1 およびＲ3 は水素原子、水酸基、もしく
は、保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ2 は水酸基、
もしくは、保護された水酸基を表し、ｎは１〜５の整数
を表し、Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、アミノ基、あ
るいは、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基またはビオチ
ン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。）で表さ
れるビタミンＤ誘導体。 - 【請求項２】 式（２） 【化２】 （ただし、Ｒ12、およびＲ32は水素原子、もしくは保護
された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ22は保護された水酸基
を表す。）で表された保護ビタミンＤ類と、式（３） 【化３】 （ただし、ｎは１〜５の整数を表し、Ｘ、およびＹはハ
ロゲン原子を表す。）で表されるω−ハロゲノアルコキ
シメチルハライドを媒体中で反応せしめ、式（１−１） 【化４】 （ただし、Ｒ12、Ｒ22、Ｒ32、ｎ、Ｙは前記と同様の意
味を示す。）で表された化合物を製造し、必要に応じ
て、置換基Ｙを置換基Ｒ4 へ、置換基Ｒ12、Ｒ22および
Ｒ32をそれぞれ置換基Ｒ1 、Ｒ2 およびＲ3 へと変換す
ることを特徴とする 式（１） 【化５】 （ただし、Ｒ1 およびＲ3 は水素原子、水酸基、もしく
は、保護された水酸基をそれぞれ表し、Ｒ2 は水酸基、
もしくは、保護された水酸基を表し、ｎは前記と同様の
意味を示し、Ｒ4 はハロゲン原子、アジド基、アミノ
基、あるいは、放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基または
ビオチン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。）
で表されるビタミンＤ誘導体の製造法。 - 【請求項３】 式（１−２） 【化６】 （ただし、Ｒ13およびＲ33は水素原子、水酸基をそれぞ
れ表し、Ｒ23は水酸基を表し、ｎは１〜５の整数を表
し、Ｒ43は放射性ヨード（125 Ｉ）標識残基またはビオ
チン標識残基で置換された置換アミノ基を表す。）で表
される標識ビタミンＤ誘導体の存在下、検体と、ビタミ
ンＤ結合性を有する受容体とを用いて、検体中のビタミ
ンＤ類と該標識ビタミンＤ誘導体との競合反応を行い、
反応後、反応生成物と未反応物とを分離し、未反応物ま
たは反応生成物中の該標識ビタミンＤ誘導体を検出する
ことを特徴とする検体中のビタミンＤ類の測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19392792A JPH0641058A (ja) | 1992-07-21 | 1992-07-21 | ２５位水酸基に残基を有する新規ビタミンｄ誘導体類、その製造法及びその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19392792A JPH0641058A (ja) | 1992-07-21 | 1992-07-21 | ２５位水酸基に残基を有する新規ビタミンｄ誘導体類、その製造法及びその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0641058A true JPH0641058A (ja) | 1994-02-15 |
Family
ID=16316062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19392792A Withdrawn JPH0641058A (ja) | 1992-07-21 | 1992-07-21 | ２５位水酸基に残基を有する新規ビタミンｄ誘導体類、その製造法及びその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0641058A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998021580A3 (en) * | 1996-11-13 | 1998-07-30 | Immunodiagnostic Systems Ltd | Vitamin d immunoassay systems |
| EP0873126A1 (en) * | 1995-12-29 | 1998-10-28 | A and D Assay, Incorporated | Labeled vitamin d compounds and the use thereof |
| CN108205064A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-06-26 | 北京丹大生物技术有限公司 | 一种25羟基维生素d3检测方法及试剂盒 |
| CN115057804A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-09-16 | 南京海融制药有限公司 | 一种骨化三醇的纯化方法 |
-
1992
- 1992-07-21 JP JP19392792A patent/JPH0641058A/ja not_active Withdrawn
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0873126A1 (en) * | 1995-12-29 | 1998-10-28 | A and D Assay, Incorporated | Labeled vitamin d compounds and the use thereof |
| US6291693B1 (en) | 1995-12-29 | 2001-09-18 | A & D Bioscience, Inc. | Kits comprising labeled vitamin D compounds |
| US6455714B1 (en) | 1995-12-29 | 2002-09-24 | A & D Bioscience, Inc. | Labeled vitamin D compounds and the use thereof |
| WO1998021580A3 (en) * | 1996-11-13 | 1998-07-30 | Immunodiagnostic Systems Ltd | Vitamin d immunoassay systems |
| JP2001504114A (ja) * | 1996-11-13 | 2001-03-27 | イムノダイアグノスティック システムズ リミティッド | ビタミンｄイムノアッセイシステム |
| CN108205064A (zh) * | 2018-03-28 | 2018-06-26 | 北京丹大生物技术有限公司 | 一种25羟基维生素d3检测方法及试剂盒 |
| CN108205064B (zh) * | 2018-03-28 | 2020-08-21 | 北京丹大生物技术有限公司 | 25ohd3检测试剂、试剂盒及其检测方法 |
| CN115057804A (zh) * | 2022-05-27 | 2022-09-16 | 南京海融制药有限公司 | 一种骨化三醇的纯化方法 |
| CN115057804B (zh) * | 2022-05-27 | 2024-03-29 | 南京海融制药有限公司 | 一种骨化三醇的纯化方法 |
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