JPH06319529A - 石油類分解糸状菌 - Google Patents
石油類分解糸状菌Info
- Publication number
- JPH06319529A JPH06319529A JP11343593A JP11343593A JPH06319529A JP H06319529 A JPH06319529 A JP H06319529A JP 11343593 A JP11343593 A JP 11343593A JP 11343593 A JP11343593 A JP 11343593A JP H06319529 A JPH06319529 A JP H06319529A
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- JP
- Japan
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- petroleum
- trichoderma
- atcc
- crude oil
- strain
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- Pending
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 石油類分解活性を有するトリコデルマ属に属
する糸状菌。 【効果】 本発明によって新規な糸状菌が提供される。
そして、この新規な糸状菌は石油類、特に原油やその難
分解成分である芳香族炭化水素画分に対して顕著な分解
活性を有するため、この糸状菌を用いて各種の石油類を
効率的な分解除去ことができ、環境汚染を防止すること
ができる。
する糸状菌。 【効果】 本発明によって新規な糸状菌が提供される。
そして、この新規な糸状菌は石油類、特に原油やその難
分解成分である芳香族炭化水素画分に対して顕著な分解
活性を有するため、この糸状菌を用いて各種の石油類を
効率的な分解除去ことができ、環境汚染を防止すること
ができる。
Description
【産業上の利用分野】本発明は、トリコデルマ属の糸状
菌で、原油やその難分解成分である芳香族炭化水素画分
等の石油類に対して顕著な分解活性を有する新規な微生
物に関する。
菌で、原油やその難分解成分である芳香族炭化水素画分
等の石油類に対して顕著な分解活性を有する新規な微生
物に関する。
【従来の技術】近年、各種石油類による海洋等の汚染は
非常に深刻な環境問題となっている。このような汚染
は、大型タンカーの海難事故や油田事故、各種工業プラ
ントの事故等により引起こされるが、いずれの場合も莫
大な量の油が流出することになり、大規模の環境被害を
もたらす。従来から、このような石油汚染を微生物によ
り分解除去しようとするバイオレメディエーションの多
数の試みがなされているが、実用化のためには、解決し
なければならない問題が多い。例えば、石油類、特に原
油や重油等には芳香族炭化水素画分等の微生物が分解し
難い成分が存在し、この難分解成分を効率的に分解でき
る微生物は未だ見出されておらず、これがバイオレメデ
ィエーション実用化の大きな障壁になっている。また、
海洋の石油汚染で最も問題になるのは海岸の汚染であ
り、また石油が陸上を汚染する場合もあり、このような
水分が少ない等の苛酷な環境条件でも生存して石油を分
解する微生物の検索も望まれている。
非常に深刻な環境問題となっている。このような汚染
は、大型タンカーの海難事故や油田事故、各種工業プラ
ントの事故等により引起こされるが、いずれの場合も莫
大な量の油が流出することになり、大規模の環境被害を
もたらす。従来から、このような石油汚染を微生物によ
り分解除去しようとするバイオレメディエーションの多
数の試みがなされているが、実用化のためには、解決し
なければならない問題が多い。例えば、石油類、特に原
油や重油等には芳香族炭化水素画分等の微生物が分解し
難い成分が存在し、この難分解成分を効率的に分解でき
る微生物は未だ見出されておらず、これがバイオレメデ
ィエーション実用化の大きな障壁になっている。また、
海洋の石油汚染で最も問題になるのは海岸の汚染であ
り、また石油が陸上を汚染する場合もあり、このような
水分が少ない等の苛酷な環境条件でも生存して石油を分
解する微生物の検索も望まれている。
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、海岸や
陸上での石油分解に有利な糸状菌に着目し、石油の難分
解性の芳香族炭化水素画分を効率的に分解する微生物を
鋭意探索した結果、岡山県水島の海岸の泥から、芳香族
炭化水素画分の分解性に優れた新規な糸状菌、トリコデ
ルマ sp. A5-2 を分離することに成功し、本発明を完成
した。本発明の目的は、石油類、特に原油やその難分解
成分である芳香族炭化水素画分に対して顕著な分解活性
を有するトリコデルマ属に属する糸状菌を提供すること
である。
陸上での石油分解に有利な糸状菌に着目し、石油の難分
解性の芳香族炭化水素画分を効率的に分解する微生物を
鋭意探索した結果、岡山県水島の海岸の泥から、芳香族
炭化水素画分の分解性に優れた新規な糸状菌、トリコデ
ルマ sp. A5-2 を分離することに成功し、本発明を完成
した。本発明の目的は、石油類、特に原油やその難分解
成分である芳香族炭化水素画分に対して顕著な分解活性
を有するトリコデルマ属に属する糸状菌を提供すること
である。
【課題を解決するための手段】本発明者は、石油類分解
活性を有するトリコデルマ（Tricoderma) 属に属する糸
状菌にある。そして、このトリコデルマ属に属する糸状
菌の例としてはトリコデルマ sp. A5-2 が挙げられる。
また、ここで石油類としては原油あるいは原油の芳香族
炭化水素画分が挙げられる。本発明の石油類分解活性を
有するトリコデルマ属に属する糸状菌は、海岸や陸上で
の石油分解のために用いることができる。以下、本発明
を詳細に説明する。本発明者らは石油類分解活性を有す
る糸状菌の探索を次のように行った。すなわち、岡山県
水島の海岸泥１ｇを、硝酸アンモニウム１ｇ、リン酸２
カリ２０ｍｇ、クエン酸鉄２０ｍｇ、海水８００ｍｌ、
純水２００ｍｌからなるｐＨ７．８のＮＳＷ基本培地
に、ウェザリング原油（原油から沸点２７０℃以下の軽
質分を留去した残りのもの）１ｇとツイーン８０ ０．
１ｇ、クロラムフェニコール２０ｍｇ、ストレプトマイ
シン２０ｍｇ、テトラサイクリン１００ｍｇを添加した
集積用培地５ｍｌに入れ、３０℃で７日間振盪して集積
培養を行なった。本集積培養の終了物０．１ｍｌを新規
集積培地５ｍｌに移植して同様に２回目の集積培養をお
こなった。この操作を繰返し、５回目の集積培養の終了
物を、集積用培地に寒天２０ｍｇ／ｍｌを添加した平板
培地に拡げ、３０℃で７日間培養してコロニーを形成さ
せた。これらの中から、糸状菌のコロニーを選び、さら
にＹＭアガー平板培地での培養、形成コロニーの釣菌に
より鈍化して単離した。単離株について、ウェザリング
原油をシリカゲル・カラムにより分画した芳香族画分を
１ｍｇ／ｍｌとツイーン８０の０．１ｍｇ／ｍｌを添加
した培地で、３０℃で１０日間培養して、分解活性を比
較した。分解活性は、本培養の終了物中の残存油分を、
クロロホルム抽出し、薄層クロマトグラフィー−水素炎
イオン化検出法により分析して、この定量値から各菌株
の分解率を計算して比較した。芳香族画分の分解率の比
較により、最も分解率の高い A5-2 株を選出した。本菌
株の菌学的性質は以下の通りである。 （１）肉眼的観察 ３０℃でＹＭアガー平板上で培養した場合、コロニーは
広く拡大的で表面は綿毛状である。コロニー中心部は緑
色を呈し、周辺部は白色を呈し、培地中に褐色の水溶性
色素の溶出が認められる。 （２）光学顕微鏡的観察 ３０℃でＹＭアガー平板上で培養した場合、菌糸は、巾
は３〜４μｍで、隔壁を有し、平滑、無色でよく分岐す
る。分生子柄の分枝は簡単で、その先端にフィアライド
を不規則に形成する。フィアライドは無色、平滑で、フ
ラスコ型である。フィアライド先端部に球状の分生子魂
が形成され、分生子は、３μｍの球形で、個体発生様式
は内生出芽型である。本菌株は、アナモルフのみ観察さ
れ、テレオモルフは観察されない。 （３）生育環境 本菌株の至適生育温度は、２０〜３５℃で、３０℃付近
で最も良好に生育する。生育至適ｐＨは、ｐＨ４．０〜
８．５で、ｐＨ７．０付近で最も良好に生育する。以上
の菌学的性質から、分類学上の位置を「ザ・ジェネラ・
オブ・ファンジャイ・スポルレイティング・イン・ピュ
ア・カルチャー 第２版」に従って検索した結果、本菌
株は、トリコデルマ属に属することが明らかになった。
トリコデルマ属で石油分解活性を示す菌株は、従来全く
知られていないことから、本菌株を、トリコデルマ属の
新菌株として、トリコデルマ sp. A5-2 と命名した。本
菌株は、工業技術院生命工業技術研究所に平成５年３月
23日にFREM P-13541として寄託されている。本菌株の培
養には、通常の微生物の培養に使用される炭素源、窒素
源、無機物を含む各種培地を使用することができる。炭
素源としては、例えばグルコース、フラクトース、デン
プン等の各種糖類、またウェザリング原油、原油の香族
炭化水素画分、ｎ−アルカン等の各種炭化水素等であ
り、窒素源としては、酵母エキス、肉エキス、ペプト
ン、各種アミノ酸等の有機窒素類、また硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム等の各種無機窒素である。炭素
源、窒素源とも、単独または組合わせて用いられる。そ
の他の無機物として、リン、ナトリウム、カリウム、カ
ルシウム、微量金属類等、必要に応じて添加する。本菌
株の使用に当たっての菌体の形態は、菌糸体、または胞
子体、その生細胞、または凍結物、または凍結乾燥物の
いずれでもよく、特に制限はない。
活性を有するトリコデルマ（Tricoderma) 属に属する糸
状菌にある。そして、このトリコデルマ属に属する糸状
菌の例としてはトリコデルマ sp. A5-2 が挙げられる。
また、ここで石油類としては原油あるいは原油の芳香族
炭化水素画分が挙げられる。本発明の石油類分解活性を
有するトリコデルマ属に属する糸状菌は、海岸や陸上で
の石油分解のために用いることができる。以下、本発明
を詳細に説明する。本発明者らは石油類分解活性を有す
る糸状菌の探索を次のように行った。すなわち、岡山県
水島の海岸泥１ｇを、硝酸アンモニウム１ｇ、リン酸２
カリ２０ｍｇ、クエン酸鉄２０ｍｇ、海水８００ｍｌ、
純水２００ｍｌからなるｐＨ７．８のＮＳＷ基本培地
に、ウェザリング原油（原油から沸点２７０℃以下の軽
質分を留去した残りのもの）１ｇとツイーン８０ ０．
１ｇ、クロラムフェニコール２０ｍｇ、ストレプトマイ
シン２０ｍｇ、テトラサイクリン１００ｍｇを添加した
集積用培地５ｍｌに入れ、３０℃で７日間振盪して集積
培養を行なった。本集積培養の終了物０．１ｍｌを新規
集積培地５ｍｌに移植して同様に２回目の集積培養をお
こなった。この操作を繰返し、５回目の集積培養の終了
物を、集積用培地に寒天２０ｍｇ／ｍｌを添加した平板
培地に拡げ、３０℃で７日間培養してコロニーを形成さ
せた。これらの中から、糸状菌のコロニーを選び、さら
にＹＭアガー平板培地での培養、形成コロニーの釣菌に
より鈍化して単離した。単離株について、ウェザリング
原油をシリカゲル・カラムにより分画した芳香族画分を
１ｍｇ／ｍｌとツイーン８０の０．１ｍｇ／ｍｌを添加
した培地で、３０℃で１０日間培養して、分解活性を比
較した。分解活性は、本培養の終了物中の残存油分を、
クロロホルム抽出し、薄層クロマトグラフィー−水素炎
イオン化検出法により分析して、この定量値から各菌株
の分解率を計算して比較した。芳香族画分の分解率の比
較により、最も分解率の高い A5-2 株を選出した。本菌
株の菌学的性質は以下の通りである。 （１）肉眼的観察 ３０℃でＹＭアガー平板上で培養した場合、コロニーは
広く拡大的で表面は綿毛状である。コロニー中心部は緑
色を呈し、周辺部は白色を呈し、培地中に褐色の水溶性
色素の溶出が認められる。 （２）光学顕微鏡的観察 ３０℃でＹＭアガー平板上で培養した場合、菌糸は、巾
は３〜４μｍで、隔壁を有し、平滑、無色でよく分岐す
る。分生子柄の分枝は簡単で、その先端にフィアライド
を不規則に形成する。フィアライドは無色、平滑で、フ
ラスコ型である。フィアライド先端部に球状の分生子魂
が形成され、分生子は、３μｍの球形で、個体発生様式
は内生出芽型である。本菌株は、アナモルフのみ観察さ
れ、テレオモルフは観察されない。 （３）生育環境 本菌株の至適生育温度は、２０〜３５℃で、３０℃付近
で最も良好に生育する。生育至適ｐＨは、ｐＨ４．０〜
８．５で、ｐＨ７．０付近で最も良好に生育する。以上
の菌学的性質から、分類学上の位置を「ザ・ジェネラ・
オブ・ファンジャイ・スポルレイティング・イン・ピュ
ア・カルチャー 第２版」に従って検索した結果、本菌
株は、トリコデルマ属に属することが明らかになった。
トリコデルマ属で石油分解活性を示す菌株は、従来全く
知られていないことから、本菌株を、トリコデルマ属の
新菌株として、トリコデルマ sp. A5-2 と命名した。本
菌株は、工業技術院生命工業技術研究所に平成５年３月
23日にFREM P-13541として寄託されている。本菌株の培
養には、通常の微生物の培養に使用される炭素源、窒素
源、無機物を含む各種培地を使用することができる。炭
素源としては、例えばグルコース、フラクトース、デン
プン等の各種糖類、またウェザリング原油、原油の香族
炭化水素画分、ｎ−アルカン等の各種炭化水素等であ
り、窒素源としては、酵母エキス、肉エキス、ペプト
ン、各種アミノ酸等の有機窒素類、また硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム等の各種無機窒素である。炭素
源、窒素源とも、単独または組合わせて用いられる。そ
の他の無機物として、リン、ナトリウム、カリウム、カ
ルシウム、微量金属類等、必要に応じて添加する。本菌
株の使用に当たっての菌体の形態は、菌糸体、または胞
子体、その生細胞、または凍結物、または凍結乾燥物の
いずれでもよく、特に制限はない。
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。ただし、これらの実施例により本発明の技術的範囲
を限定するものではない。 （実施例１）前述のＮＳＷ基本培地に原油の芳香族炭化
水素画分１ｍｇ／ｍｌとツイーン８０ ０．１ｍｇ／ｍｌを添加した培地５ｍｌに、ＹＭアガー
で３０℃で３日間培養して得られたトリコデルマ sp. A
5-2 の菌糸体を１白金耳植菌して、３０℃で１０日間、
振盪培養した。次いで、この培養物中の残存油分を前述
のように分析して、この定量値から本菌の油分解率を計
算した。結果を表１に示す。この表からトリコデルマ s
p. A5-2 による芳香族画分の分解率は、44.8％であっ
た。 （比較例１）トリコデルマ sp. A5-2 の代わりに、既知
の石油分解糸状菌、アスペルギルス・ニガ ATCC 9142、
アスペルギルス・ニガ IFO 4407 、アスペルギルス・オ
クラセウス IFO 4344 、アスペルギルス・オクラセウス
ATCC 1008、オウレオバシヂウム・プルランス IFO 635
3 、バシヂオボラス・ラナラム ATCC 14449 、クラドス
ポリウム・クラドスポリオイデス IFO 6348 、コニヂオ
ボラス・インコングルウス ATCC 1444、クンニガメラ・
エチヌラタ ATCC 9244、クンニガメラ・エチヌラタ ATC
C 36112 、ペニシリウム・ピノフィラム IFO 6345 、ペ
ニシリウム・オクロクロン IFO 4612 、フィトフトラ・
シンナモミ ATCC 16984 またはサプロレグニア・パラジ
チカ ATCC 22284 を用いた以外は、実施例１と同様に実
施した。結果を表１に示す。この表から芳香族炭化水素
画分の分解率は、最も高いサプロレグニア・パラジチカ
ATCC 22284 でも１２．５％であった。
る。ただし、これらの実施例により本発明の技術的範囲
を限定するものではない。 （実施例１）前述のＮＳＷ基本培地に原油の芳香族炭化
水素画分１ｍｇ／ｍｌとツイーン８０ ０．１ｍｇ／ｍｌを添加した培地５ｍｌに、ＹＭアガー
で３０℃で３日間培養して得られたトリコデルマ sp. A
5-2 の菌糸体を１白金耳植菌して、３０℃で１０日間、
振盪培養した。次いで、この培養物中の残存油分を前述
のように分析して、この定量値から本菌の油分解率を計
算した。結果を表１に示す。この表からトリコデルマ s
p. A5-2 による芳香族画分の分解率は、44.8％であっ
た。 （比較例１）トリコデルマ sp. A5-2 の代わりに、既知
の石油分解糸状菌、アスペルギルス・ニガ ATCC 9142、
アスペルギルス・ニガ IFO 4407 、アスペルギルス・オ
クラセウス IFO 4344 、アスペルギルス・オクラセウス
ATCC 1008、オウレオバシヂウム・プルランス IFO 635
3 、バシヂオボラス・ラナラム ATCC 14449 、クラドス
ポリウム・クラドスポリオイデス IFO 6348 、コニヂオ
ボラス・インコングルウス ATCC 1444、クンニガメラ・
エチヌラタ ATCC 9244、クンニガメラ・エチヌラタ ATC
C 36112 、ペニシリウム・ピノフィラム IFO 6345 、ペ
ニシリウム・オクロクロン IFO 4612 、フィトフトラ・
シンナモミ ATCC 16984 またはサプロレグニア・パラジ
チカ ATCC 22284 を用いた以外は、実施例１と同様に実
施した。結果を表１に示す。この表から芳香族炭化水素
画分の分解率は、最も高いサプロレグニア・パラジチカ
ATCC 22284 でも１２．５％であった。
【表１】 （実施例２）ＮＳＷ基本培地に添加した芳香族炭化水素
画分１ｍｇ／ｍｌの代わりに、前述のウェザリング原油
５ｍｇ／ｍｌを用いた以外は、実施例１と同様に実施し
た。結果を表２に示す。この表からトリコデルマ sp. A
5-2 によるウェザリング原油の分解率は、飽和炭化水素
分で２３．６％、芳香族炭化水素分で２１．１％であっ
た。 （比較例２）トリコデルマ sp. A5-2 の代わりに、既知
の石油分解糸状菌、アスペルギルス・オクラセウス ATC
C 1008、バシヂオボラス・ラナラム ATCC 14449 、コニ
ヂオボラス・インコングルウス ATCC 14445 、クンニガ
メラ・エチヌラタ ATCC 9244、またはクンニガメラ・エ
チヌラタ ATCC 36112 、ペニシリウム・オクロクロンIF
O 4612 、フィトフトラ・シンナモミ ATCC 16984 また
はサプロレグニア・パラジチカ ATCC 22284 を用いた以
外は、実施例１と同様に実施した。結果を表２に示す。
この表からウェザリング原油の分解率は、飽和炭化水素
分ではいずれの菌株でも２０〜３０％程度の分解率であ
ったが、芳香族炭化水素分では最も高いクンニガメラ・
エチヌラタ ATCC 9244でも６．８％であった。
画分１ｍｇ／ｍｌの代わりに、前述のウェザリング原油
５ｍｇ／ｍｌを用いた以外は、実施例１と同様に実施し
た。結果を表２に示す。この表からトリコデルマ sp. A
5-2 によるウェザリング原油の分解率は、飽和炭化水素
分で２３．６％、芳香族炭化水素分で２１．１％であっ
た。 （比較例２）トリコデルマ sp. A5-2 の代わりに、既知
の石油分解糸状菌、アスペルギルス・オクラセウス ATC
C 1008、バシヂオボラス・ラナラム ATCC 14449 、コニ
ヂオボラス・インコングルウス ATCC 14445 、クンニガ
メラ・エチヌラタ ATCC 9244、またはクンニガメラ・エ
チヌラタ ATCC 36112 、ペニシリウム・オクロクロンIF
O 4612 、フィトフトラ・シンナモミ ATCC 16984 また
はサプロレグニア・パラジチカ ATCC 22284 を用いた以
外は、実施例１と同様に実施した。結果を表２に示す。
この表からウェザリング原油の分解率は、飽和炭化水素
分ではいずれの菌株でも２０〜３０％程度の分解率であ
ったが、芳香族炭化水素分では最も高いクンニガメラ・
エチヌラタ ATCC 9244でも６．８％であった。
【表２】
【発明の効果】本発明によって新規な糸状菌が提供され
る。そして、この新規な糸状菌は石油類、特に原油やそ
の難分解成分である芳香族炭化水素画分に対して顕著な
分解活性を有するため、この糸状菌を用いて各種の石油
類を効率的な分解除去ことができ、環境汚染を防止する
ことができる。従って、本発明は産業上きわめて有用な
発明である。
る。そして、この新規な糸状菌は石油類、特に原油やそ
の難分解成分である芳香族炭化水素画分に対して顕著な
分解活性を有するため、この糸状菌を用いて各種の石油
類を効率的な分解除去ことができ、環境汚染を防止する
ことができる。従って、本発明は産業上きわめて有用な
発明である。
Claims (2)
- 【請求項１】 石油類分解活性を有するトリコデルマ属
に属する糸状菌。 - 【請求項２】 糸条菌がトリコデルマ sp. A5-2 である
請求項１記載のトリコデルマ属に属する糸状菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11343593A JPH06319529A (ja) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | 石油類分解糸状菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11343593A JPH06319529A (ja) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | 石油類分解糸状菌 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06319529A true JPH06319529A (ja) | 1994-11-22 |
Family
ID=14612153
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11343593A Pending JPH06319529A (ja) | 1993-05-14 | 1993-05-14 | 石油類分解糸状菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06319529A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8445252B2 (en) | 2007-05-31 | 2013-05-21 | National University Corporation Shizuoka University | Method for producing functional compost, functional compost and compost for proliferation of filamentous fungus |
-
1993
- 1993-05-14 JP JP11343593A patent/JPH06319529A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8445252B2 (en) | 2007-05-31 | 2013-05-21 | National University Corporation Shizuoka University | Method for producing functional compost, functional compost and compost for proliferation of filamentous fungus |
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