JPH0631315B2 - 脂肪族‐芳香族ケトン側鎖を含むペプチド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、ゴナドトロピン（生殖線刺激ホルモン）の放
出に影響を及ぼすか、または捕乳動物の脳下垂体からの
成長ホルモンの放出を抑制するペプチドおよびその製造
方法に関する。より詳細には、本発明は、生殖腺機能お
よびステロイド系ホルモンのプロゲステロンおよびテス
トステロンの放出を促進または抑制するか、もしくは成
長ホルモンの放出を抑制する改良された生物学的効力を
有するＧｎＲＨ類似体ペプチド、およびその製造方法に
関する。

従来の技術 脳下垂体は視床下部として知られる脳の底部領域に柄
（ｓｔａｌｋ）によつて接合されている。この脳下垂体
からはとりわけゴナドトロピンまたはゴナドトロピツク
ホルモンと呼ばれる卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）および
黄体形成ホルモン（ＬＨ）が放出される。これらのホル
モンは互いに協力して生殖腺の機能を調節することによ
り精巣においてテストステロンを、そして卵巣において
プロゲステロンとエストロゲンを産生し、またそれらは
配偶子の産生および成熟を調節する。成長ホルモン（Ｇ
Ｈ）も脳下垂体から放出される。

脳下垂体前葉からのホルモンの放出は通常、視床下部に
よつて産生される別の種類のホルモンの前放出を必要と
する。視床下部ホルモンの１種はゴナドトロピックホル
モン特にＬＨの放出を誘発する因子として作用し、この
ホルモンは本明細書ではＧｎＲＨと称するがＬＨ−ＲＨ
やＬＲＦとも呼されている。ＧｎＲＨは単に離されそし
て次の構造式： ｐＧｌｕ−Ｈｉ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ｐｒｏ Ｇｌｙ−ＮＨ_２ で表わされるデカペプチドとして性状決定がなされた。

ペプチドとは２つまたはそれ以上のアミノ酸を含有する
化合物であつて、１つのアミノ酸のカルボキシル基が他
のアミノ酸のアミノ基に結合している。ＧｎＲＨについ
ての上記構造式はペプチドの慣用表示に従つており、Ｎ
−末端のアミノ基が左に、そしてＣ−末端のカルボキシ
ル基が右に表示されている。アミノ酸残基の位置は左か
ら右へアミノ酸残基に番号をつけることにより識別され
る。ＧｎＲＨの場合はグリシンのカルボキシル基のヒド
ロキシ部分がアミノ酸（ＮＨ_２）で置換されている。上
記の個々のアミノ酸残基についての略号は慣用的であつ
てアミノ酸の俗名に基づいている。例えばｐＧｌｕはピ
ログルタミン酸であり、Ｈｉｓはヒスチジンであり、Ｔ
ｒｐはトリプトフアンであり、Ｓｅｒはセリンであり、
Ｔｙｒはチロシンであり、Ｇｌｙはグリシンであり、Ｌ
ｅｕはロイシンであり、Ｏｒｎはオルニチンであり、Ａ
ｒｇはアルギニンであり、Ｌｙｓはリシンであり、Ｃｙ
ｓはシステインであり、Ａｓｎはアスラギンであり、Ｔ
ｈｒはトレオニンであり、Ｐｒｏはプロリンであり、Ｐ
ｈｅはフエニルアラニンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸
であり、Ａｓｐはアスパラギン酸であり、そしてＡｌａ
はアラニンである。グリシンを除いて、本発明のペプチ
ドのアミノ酸類は特に指定しない限りＬ−立体配置のも
のである。

ＧｎＲＨデカペプチドまたはノナペプチドの６位に存在
するＧｌｙの代わりにＤ−アミノ酸で置換すると、実質
的に一層優れた結合親和性を有するＧｎＲＨ類似体が得
られ、従つてこのような置換はより強力なアルゴニスト
（作動薬）およびアンタゴニスト（拮抗薬）の両方を製
造する際に使用できる。Ｃ−末端のＧｌｙ−ＮＨ_２の代
わりにエチルアミド部分またはその類似物で置換する
と、より強力なアルゴニストが生成する。ＧｎＲＨデカ
ペプチド全体を通してその他の置換は、哺乳動物の脳下
垂体からのＬＨおよび他のゴナドトロピンの放出に対し
て抑制作用を有するアンタゴニストを生成することが知
られている。このような放出または抑制作用は、ＧｎＲ
Ｈ類似体を哺乳動物に静脈内、皮下、筋肉内、経口的、
経皮的（例えば鼻腔内、腟内）に、または遅効性配合物
もしくは定期放出性配合物の形で投与する場合に得られ
る。

雌哺乳動物の排卵を抑えたいと思う理由がいろいろ存在
し、そして排卵を抑制するかまたは遅らせるためにＧｎ
ＲＨまたは大量のＧｎＲＨアルゴニストの正常機能に対
して拮抗するＧｎＲＨ類似体が投与されてきた。この理
由のために、この種のＧｎＲＨ類似体は避妊薬としての
それらの使用可能性について、または妊娠時期を調節す
ることについて研究されつつある。ＧｎＲＨアンタゴニ
ストはまた早発思春期症および子宮内膜症の治療のため
に使用される。さらにこの種のアンタゴニストは雄哺乳
動物のゴナドトロピンの分泌を調節するのに有用であこ
とが見出され、そして精子形成を阻止するために（例え
ば雄動物用避妊薬として）、および前立腺肥大のために
使用できる。

より一層効力があるＧｎＲＨ類似体の改良されたペプチ
ド類を提供することが望まれている。

発明が解決しようとする問題点 本発明はＧｎＲＨ類似体ペプチドおよびその製造方法を
提供する。

一般に、本発明によれば、６位に脂肪族−芳香族ケトン
側鎖を有するアミノ酸残基を含む結果として一層優れた
結合効率を有するＧｎＲＨペプチド類が合成され、しか
も比較的安価な材料を使つて経済的に合成することが可
能である。ＧｎＲＨアンタゴニストはヒトを含めた哺乳
動物の脳下垂体からのゴナドトロピンの分泌を強く抑制
し、かつ／または生殖腺からのステロイドホルモンの放
出を抑制する。これらのペプチドはＧｎＲＨの類似体で
あつて、ＧｎＲＨの６位にカルボキシル基含有側鎖を有
するα−アミノ酸のＤ−異性体（例えばＤ−Ｇｌｕ、Ｄ
−ＨｇｌまたはＤ−Ａｓｐ）が初めに配置され、その後
このアミノ酸残基の側鎖カルボキシル基は、カルボキシ
ル基がらの側鎖アシリウムイオン中間体の形成（ＨＦま
たは適当なルイス酸のような同等の酸で処理すると形成
される）を経て、混合アルキルケトンに転化される。こ
の混合アルキルケトン側鎖はその先端に芳香族部分を含
有すべきである。本明細書において“混合アルキルケト
ン”とは１個のアルキル基と１個の非アルキル基を含有
するケトンを意味する。本明細書において“芳香族”と
は共鳴炭素環式基または共鳴複素環式基を意味し、例え
ばアニソール、インドール、フラン、アルキルピロール
またはチオフエンから誘導されるものである。Ｈｇｌは
α−アミノアジピン酸を意味し、これはまたホモグルタ
ミン酸とも呼ばれる。

さらに、ＧｎＲＨアンタゴニストはＤ−ｐＧｌｕ、デヒ
ドロ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ、ハロゲン化Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔ
ｒｐまたはβ−（２−ナフチル）−Ｄ−アラニン（以後
β−Ｄ−２ＮＡＬと略記する）のような１位置換；置換
（好ましくはハロゲン化）されたＤ−Ｐｈｅによる２位
置換；３位置換；炭素原子数５以下のジアミノ酸による
４位の任意置換；ハロゲン化Ｌ−Ｐｈｅ、ハロゲン化Ｌ
−ＴｙｒまたはＬ−Ａｒｇの形の５位の任意置換；およ
び７位と１０位の任意置換を包含する。１位置換基は、
Ｄ−ｐＧｌｕを除いて、そのα−アミノ基がホルミル基
（Ｆｏｒ）、アセチル基（Ａｃ）、アクリル基（Ａｃ
ｒ）、ビニルアセチル基（Ｖａｃ）またはベンゾイル基
（Ｂｚ）のようなアシル基を含むように修飾されるのが
好ましく、この場合ＡｃとＡｃｒが好適である。３位の
修飾されたＤ−Ｔｒｐは、インドール環に存在する特定
の修飾の結果として増強された拮抗作用を与える。水素
原子に代わる単一置換は５位または６位においてなさ
れ、その置換基はクロル、フルオル、ブロム、メチル
基、アミノ基、メトキシ基およびニトロ基から選択さ
れ、この場合クロル、フルオルおよびニトロ基が好適で
ある。インドール窒素も例えばホルミル基（Ｎ^ｉｎＦｏ
ｒ−または１Ｆｏｒ−）またはアセチル基でアシル化さ
れうる。もう１つの３位置換はＤ−ＰＡＬであり、これ
はβ−炭素原子がピリジル基で置換されたＤ−アラニン
（ピリジン環の２位、３位または４位に結合する）を意
味し、Ｄ−３ＰＡＬが好適である。先に述べたように、
４位、７位および１０位における置換は一般に任意であ
ると考えられる。もし置換するとすれば、１０位はＤ−
Ａｌａ−ＮＨ_２であるのが好ましい。

これらのペプチド類はＬＨの放出を非常に強力に抑制す
るので、それらはＧｎＲＨアンタゴニストと呼ばれる。
本ペプチド類は発情前期に極めて低用量で投与した場合
に雌哺乳動物の排卵を抑制し、また妊娠直後に投与した
場合に受精卵を再吸収させるのに効果的である。本ペプ
チド類はさらに雄哺乳動物の避妊処理に対しても効果的
である。

改良されたＧｎＲＨアゴニストは６位に類似のアミノ酸
残基を有し、且つ１位の任意置換（好しくはホルミルＰ
ｒｏ）および１０位の任意置換〔好ましくは−ＮＨＣＨ
_２ＣＨ_３（−ＮＨＥｔ）〕を有する。

同様に脂肪族−芳香族ケトン側鎖を有するアミノ酸残基
をほぼ中央の限定位置に組み入れた他のペプチドホルモ
ン類が合成され、これによりそのホルモンの受容体に対
する結合親保性が増強される。

問題点を解決するための手段 本発明は、次式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ− Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｃ_６Ｈ_４ＯＣＨ_３） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２ で表わされるＧｎＲＨ類似体ペプチドを提供する。

このペプチドは強力なＧｎＲＨアンタゴニストである。

さらに本発明は、式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ− Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｃ_６Ｈ_４ＯＣＨ_３） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２ で表わされるＧｎＲＨ類似体ペプチドの製造方法を提供
する。この方法は、次式 Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ− Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ（Ｘ^３）−Ａｒｇ（Ｘ^６）−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｘ^５） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｘ^６）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ−［樹脂支持体］ ［式中、Ｘ^３は水素原子またはＳｅｒのアルコール性水
酸基の保護基であり； Ｘ^５はベンジルエステル、２，６−ジクロロベンジル、
ジニトロフェニル、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ベンジルエステル、８−ヒドロキシキノリンエステル、
ｐ−ニトロベンジルオキシ、フェニルアゾフェニルおよ
びｔ−ブトキシからなる群から選ばれる、側鎖カルボキ
シル基の保護基であり； Ｘ^６は水素原子または側鎖グアニジノ基の保護基であ
る］ で表わされるペプチド中間体を、前記樹脂支持体にアミ
ノ酸を段階的に付加することによって形成する； 前記ペプチド中間体を、前記Ｘ^５保護基が除去されてア
シリウムイオン中間体が生成し、かつそのアシリウムイ
オンがアニソールと反応して混合アルキルケトンを形成
するような条件下で、約２０℃またはそれ以上の温度に
おいてＨＦおよびアニソールによって処理する；および 前記ＨＦを除去して所望のペプチドを回収する； の各工程からなる。

より詳細に述べると、ＧｎＲＨアンタゴニストは次の式
Ｉ： Ｘ−Ｒ_１−（Ｗ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ_３−Ｒ_４−Ｒ_５−Ｒ_６
（Ｖ）−Ｒ_７−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｒ_１０によつて表わさ
れ、式中Ｘは水素原子または７個以下の炭素原子を有す
るアシル基であり；Ｒ_４はデヒドロ−Ｐｒｏ、Ｐｒｏ、
Ｄ−ｐＧｌｕ、Ｄ−Ｐｈｅ、Ｄ−Ｔｒｐまたはβ−Ｄ−
ＮＡＬであり；ＷはＦ、Ｃｌ、Ｃｌ_２、Ｂｒ、ＮＯ_２ま
たはＣ^αＭｅ／Ｃｌであり；Ｒ_３はＤ−ＰＡＬ、Ｄ−Ｔ
ｒｐ、（Ｎ^ｉｎＦｏｒ）Ｄ−Ｔｒｐまたは５位もしくは
６位ＮＯ_２、ＮＨ_２、ＯＣＨ_３、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒまたは
ＣＨ_３で置換されたＤ−Ｔｒｐであり；Ｒ_４はＳｅｒ、
Ｏｒｎ、ＡＡＬまたはαＢｕであり、Ｒ_５はＴｙｒ、Ａ
ｒｇ、（３Ｆ）Ｐｈｅ、（２Ｆ）Ｐｈｅ、（３Ｉ）Ｔｙ
ｒ、（３ＣＨ_３）Ｐｈｅ、（２ＣＨ_３）Ｐｈｅ、（３Ｃ
ｌ）Ｐｈｅまたは（２Ｃｌ）Ｐｈｅであり；Ｒ_３はＤ−
Ｇｌｕ、Ｄ−ＨｇｌまたはＤ−Ａｓｐであり；Ｒ_７はＬ
ｅｕは、ＭＮＬ、ＮｌｅまたはＮｖａであり；Ｒ_１０は
Ｇｌｙ−ＮＨ_２、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２またはＮＨ−Ｙ
〔ここでＹは低級アルキル基、シクロアルキル基、フル
オル低級アルキル基またはＮＨＣＯＮＨＱ（ＱはＨまた
は低級アルキル）である〕であり；そしてＶはＲ_６のカ
ルボキシル基側鎖とクラスＺ′から選択される化合物と
から形成されたケトンの芳香族部分である。そのクラス
Ｚ′はエチルベンゼン、プロピルベンゼン、イソプロピ
ルベンゼン、ブチルベンゼン、ｓ−ブチルベンゼン、イ
ソブチルベンゼン、ｔ−ブチルベンゼン、アミルベンゼ
ン、１−メチルブチルベンゼン、１−エチルプロピルベ
ンゼン、３−メチルブチルベンゼン、１，１−ジメチル
プロピルベンゼン、ヘキシルベンゼン、ヘプチルベンゼ
ン、２−エチルヘキシルベンゼン、オクチルベンゼン、
ノニルベンゼン、デシルベンゼン、ドデシルベンゼン、
テトラデシルベンゼン、ヘキサデシルベンゼン、オクタ
デシルベンゼン、シクロプロピルベンゼン、シクロペン
チルベンゼン、シクロヘキシルベンゼン、（４−アシル
オキシシクロヘキシル）−ベンゼン、３−メチル−フエ
ニル−５−シクロヘキセ−２−ノン、ｏ−キシレン、ｍ
−キシレン、ｐ−キシレン、ｍ−エチルトルエン、ｐ−
エチルトルエン、ｏ−プロピルトルエン、ｍ−プロピル
トルエン、ｍ−シメン、ｐ−プロピルトルエン、ｍ−ｔ
−ブチルトルエン、ｐ−シメン、ｍ−ｓ−ブチルトルエ
ン、ｐ−ｓ−ブチルトルエン、ｐ−ドデシルトルエン、
ｐ−ジエチルベンゼン、ｍ−ｔ−ブチルエチルベンゼ
ン、ｐ−ｔ−ブチルエチルベンゼン、ｍ−ジイソプロピ
ルベンゼン、ｐ−ジイソプロピルベンゼン、ｐ−ジブチ
ルベンゼン、ｐ−ジ−ｓ−ブチルベンゼン、ｐ−ジ−ｔ
−ブチルベンゼン、ｐ−ジ−（１−メチルブチル）ベン
ゼン、インダン（ヒドロインデン）、５−メチルインダ
ン、６−ｔ−ブチルインダン、２−ベンジルインダン、
ジアルキルインダン、トリアルキルインダン、テトラア
ルキルインダン、ペンタアルキルインダン、ヘキサアル
キルインダン、ヘプタアルキルインダン、１−カルボエ
トキシインダン、テトラリン、６−メチルテトラリン、
６−エチルテトラリン、６−ブチルテトラリン、６−ヘ
キシルテトラリン、６−シクロヘキシルテトラリン、ジ
アルキルテトラリン、テトラアルキルテトラリン、ペン
タアルキルテトラリン、７−エチル−１−カルボエトキ
シメチルテトラリン、２−フエニルテトラリン、ヘミメ
リテン、プソイドクメン、メシチレン、プレニテン、イ
ソジェレン、ジュレン、ペンタメチルベンゼン、エチル
−１，４−キシレン、４−エチル−１，３−キシレン、
２−プロピル−１，４−キシレン、２−イソプロピル−
１，４−キシレン、４−プロピル−１，２−キシレン、
４−プロピル−１，３−キシレン、２−イソブチル−
１，４−キシレン、５−ｔ−ブチル−１，３−キシレ
ン、２−ｔ−アミル−４−イソプロピルトルエン、トリ
アルキルベンゼン、４−ベンジル−１，３−キシレン、
３，４，５，１１−テトラヒドロアセナフテン、エチル
メシチレン、ヒドロインダセン、ヒドロフエナントレ
ン、ペンタアルキルベンゼン、ヒドロピレン、ヒドロア
ントラセン、ジフエニルメタン、ジフエニルプロパン、
ビベンジル、３，４−ジフエニルヘキサン、α，ω−ジ
フエニルアルカン、トリフエニルメタン、パラシクロフ
アン、フエニルエチレン、カルコン、ホルムアミドトル
エン、フエニル酢酸、フエニル酢酸アルキル、フエニル
アセトニトリル、デスオキシベンゾイン、１−フエニル
−２−ニトロエタン、１−フエニル−２−アセトアミド
エタン、３−フエニルプロピオン酸アルキル、３−フエ
ニルプロピオニトリル、フエニルベンゾイルアルカン、
フエニルクロルアルカン、フエニルニトロアルカン、フ
エニル酪酸アルキル、ハロアルキルベンゼン、フエノー
ル、酢酸フエニル、プロピオン酸フエニル、アルキルフ
エノール、ハロフエノール、カテコール、レゾルシノー
ル、アルキルレゾルシノール、安息香酸フエニル、ピロ
ガロール、フロログルシノール、トリヒドロキシトルエ
ン、トリヒドロキシイソアミルベンゼン、アニソール、
フエネトール、アルキルフエニルエーテル、アルキルト
リルエーテル、エチルアニソール、ｐ−ｔ−ブチルアニ
ソール、ｍ−ヘプチルアニソール、ｐ−シクロヘキシル
アニソール、アニシルヘキサン、ジメチルアニソール、
２−エチル−４−メチルアニソール、５−メトキシテト
ラリン、イソプロピルメチルアニソール、ヒドロフエナ
ントレン、トリアルキルアニソール、フルオロアニソー
ル、クロルアニソール、クロルフエネトール、ブロムア
ニソール、ブロムフエネトール、ヨードアニソール、ア
ルキルハロアニソール、ジアルキルハロアニソール、ジ
ハロアニソール、ジアルコキシハロアニソール、グアヤ
コール、レゾルシノールモノメチルエーテル、ヒドロキ
ノンモノメチルエーテル、アルキルヒドロキシアニソー
ル、二価フエノールジメチルエーテル、多価フエノール
メチルエーテル、ジフエニルエーテル、アルキルジフエ
ニルエーテル、クロルジフエニルエーテル、アルコキシ
ジフエニルエーテル、ジアルキルジフエニルエーテル、
ニトロフエニルエーテル、チオアニソール、チオフエネ
トール、アルキルフエニルスルフイド、ｏ−トリルチオ
エーテル、アルキルチオアニソール、クロルチオアニソ
ール、ジフエニルスルフイド、ニトロジフエニルスルフ
イド、２−チオクレゾール、３−メトキシチオフエノー
ル、３−エトキシチオフエノール、ジフエニルジスルフ
イド、アセトアニリド（ＡＡ）、アルキルＡＡ、ジアル
キルＡＡ、アセトアミドインダン、アセトアミドテトラ
リン、トリメチルＡＡ、クロルＡＡ、クロル−４−メチ
ルＡＡ、アルコキシＡＡ、Ｎ，Ｎ−ジアシルアニリン、
ニトロブロムベンゼン、ニトロフエノール、ニトロアニ
ソール、ニトロフエネトール、ヒドロキシ−３−ニトロ
トルエン、ニトロレゾルシノール、ヒドロキシ−４−ニ
トロアニソール、安息香酸、ｍ−トルイル酸、サリチル
酸、サリチル酸アルキル、安息香酸アルキルアルコキ
シ、ヒドロキシ安息香酸アルキル、ジメチルアセトフエ
ノン、トリメチルアセトフエノン、トリメチルプロピオ
フエノン、メトキシアセトフエノン、ジヒドロキシアセ
トフエノン、ジヒドロキシプロピオフエノン、ベンゾフ
エノン、ジメチルベンゾフエノン、ジヒドロキシベンゾ
フエノン、ビフエニル（ＢＰ）、アルキルＢＰ、ジアル
キルＢＰ、９，１０−ジヒドロフエナントレン、クロル
ＢＰ、ブロムＢＰ、ヒドロキシＢＰ、メトキシＢＰ、メ
トキシ−クロルＢＰ、アセチルＢＰ、ニトロＢＰ、クロ
ルアセチルＢＰ、ジフエニルベンゼン、１，４−テルフ
エニル、１，３，５−トリフエニルベンゼン、フルオレ
ン（Ｆ）、ベンジルＦ、メトキシＦ、カルボメトキシ
Ｆ、ベンゾイルＦ、ナフタリン、アルキルナフタリン、
ハロナフタリン、ナフトール、アルキルナフトールエー
テル、２−ナフチルメチルスルフイド、ナフタスルト
ン、１，８−ナフタスルタム、ナフタリンカルボン酸、
アントラセン、アルキルアントラセン、ハロアントラセ
ン、アルキルハロアントラセン、アルキルアルコキシア
ントラセン、アントロフエノン、９，９′−ビアントリ
ル、フエナントレン（Ｐ）、アルキルＰ、ハロＰ、アル
コキシＰ、アセトキシＰ、ヒドロキシＰ、３−アセトア
ミドＰ、ピレン、２−メチルピレン、１−ベンゾイルピ
レン、クリセン、２−エチルクリセン、６−ベンジルク
リセン、トリフエニレン、ペリレン、フルオランテン、
ビフエニレン、フラン、アルキルフラン、ベンゾフラン
（ＢＦ）、メチルＢＦ、エチルＢＦ、プロピルＢＦ、ベ
ンジルＢＦ、フエニルＢＦ、アニシルＢＦ、ジヒドロベ
ンゾフラン、ジベンゾフラン（ＤＢＦ）、エチルＤＢ
Ｆ、プロピルＤＢＦ、ブロムＤＢＦ、メトキシＤＢＦ、
ニトロＤＢＦ、キサンテン、１−ヒドロキシ−９−オキ
ソキサンテン、チオフエン、アルキルチオフエン、ジア
ルキルチオフエン、トリアルキルチオフエン、２−ベン
ジルチオフエン、ハロチオフエン、ジハロチオフエン、
トリハロチオフエン、アルキルハロチオフエン、ハロフ
エニルチオフエン、メチルフエニルチオフエン、ジチエ
ニル、ジメチルジチエニル、テルチエニル、ベンゾ
〔ｂ〕チオフエン（ＢＴ）、メチル（ＢＴ）、メトキシ
ＢＴ、ジベンゾチオフエン、アルキルピロール、ジアル
キルピロール、トリアルキルピロール、ジアルキル−カ
ルボメトキシピロール、インドール、２−メチルインド
ール、１，２−メチルインドール、１，２−ジメチルイ
ンドール，１，２，３−トリメチルインドール、２，
３，４，６−テトラメチルインドール、２−フエニルイ
ンドール、２，３−ジメチル−１−アセチルインドー
ル、テトラヒドロカルバゾール（ＴＨＣ）、９−アセチ
ルＴＨＣ、９−ベンゾイルＴＨＣ、６−ハロ−９−アセ
チルＴＨＣ、カルバゾール、アセチルカルバゾール、ア
ルキルカルバゾール、ハロアルキルカルバゾール、ベン
ゾイルカルバゾール、アセチルインドリン、１−アシル
−２，３−ジメチルインドリン、ヘギサヒドロカルバゾ
ール、フエニルピラゾール、フエニルアルキルピラゾー
ル、１−フエニル−３−ピラゾリン−５−オン（Ｐ
Ｐ）、アルキルＰＰ、ジアルキルＰＰ、２−イミダゾロ
ン（ＩＡ）、４−メチルＩＡ、２−オキソ−２，３−ジ
ヒドロベンゾイミダゾール、イミダゾ〔１，５−α〕ピ
リジン（ＩＰ）、メチルＩＰ、５，７−ジメチルキノリ
ン、ヒドロキシキノリン、メトキシキノリン、２−メチ
ルヒドロキシキノリン、アシルテトラヒドロキノリン、
アクリダン、１０−アセチルアクリダン、２−ヒドロキ
シ−４−メチルチアゾール、１０−エチルフエノキサジ
ン、１０−アセチルフエノキサジン、フエノチアジン
（ＰＴ）、１０−アルキルＰＴ、３，１０−ジメチルＰ
Ｔ、１０−アシルＰＴ、１，２−ベンゾイソキサゾール
（ＢＩＯ）、３−メチルＢＩＯ、７−メトキシＢＩＯお
よび３−フエニル−７−メトキシＢＩＯから成る。

またＧｎＲＨアゴニストは次の式ＩＡ： Ｒ_１−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｒ_６（Ｖ）−
Ｌｅｕ−Ａｒ−Ｐｒｏ−Ｒ_１０で表わされ、式中Ｒ_６お
よびＶは先に定義した通りであり、Ｒ_１はｐＧｌｕまた
はＦｏｒ−Ｐｒｏであり、そしてＲ_１０はＧｌｙ−ＮＨ
_２、Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２または置換されたアミドであ
る。

β−Ｄ−ＮＡＬはβ−炭素原子がナフチル基によつて置
換されたアラニンのＤ−異性体を意味し、これはまた３
−Ｄ−ＮＡＬとも称される。好ましくはβ−Ｄ−２ＮＡ
Ｌが使用され、これはアラニンのβ−炭素原子がナフタ
リン環の２位に結合していることを意味する。しかしな
がら、β−Ｄ−１ＮＡＬも使できる。Ｄａｐはα，β−
ジアミノプロピオン酸を表わし、これはまたβ−アミノ
アラニンとも称される。ＮＭＬはＮ^αＣＨ_３−Ｌ−Ｌｅ
ｕを意味する。ＡＡＬはβ−アミノ−Ａｌａを、そして
Ｂｕはα，γ−ジアミノ酪酸をそれぞれ意味し、これら
のうちのいずれかまたはＯｒｎが４位に存在しうる。Ｓ
ｅｒが４位に存在しない場合は、デヒドロＰｒｏが１位
に存在するのが好ましい。Ｃ^αＭｅ／Ｃｌ−Ｄ−Ｐｈｅ
はメチル化されたα−炭素原子を有し且つパラ位がＣｌ
によつて置換されたＤ−Ｐｈｅを意味する。

式Ｉおよび式ＩＡにおけるＲ_６（Ｖ）は、混合アルキル
ケトンを形成するように修飾された側鎖カルボキシル基
を有する主ペプチド鎖中のＤ−アミノ酸残基を定義する
ために使用される。好ましくは、主ペプチド鎖中のその
アミノ酸残基はＤ−Ｇｌｕであるが、その代わりとして
Ｄ−ＨｇｌまたはＤ−Ａｓｐであつてもよい。

上記のペプチドは基本的な溶液合成法、またはクロルメ
チル化樹脂、ベンズヒドリルアミン（ＢＨＡ）樹脂、メ
チルベンズヒドリルアミン樹脂（ＭＢＨＡ）、Ｎ−アル
キルアミノメチル樹脂（ＮＡＡＭ）または当分野で知ら
れた他の適当な樹脂を使用する固相合成法によつて合成
することができる。基本的な溶液合成法を使用する場合
は、ケトン側鎖を別個に生成させて、その後そのアミノ
酸をペプチド鎖中の隣接アミノ酸残基に結合させること
が有利である。固相合成法は、米国特許第４２１１６９
３号に詳しく記載された方法を使つて、アミノ酸類をペ
プチド鎖に段階的に付加させる方法で実施される。当分
野でよく知られるように、Ｓｅｒ，ＴｙｒおよびＡｒｇ
が存在する場合にはそれらに対して、同様に置換基のあ
る種のものに対して側鎖保護基を付加させることが好ま
しく、場合によつてはＴｒｐ（アシル化されたものを除
く）に対しても付加される。その後これらのアミノ酸を
樹脂上に増成されつつあるペプチド鎖にカツプリングす
る。固相合成法を使用する場合、６位のＤ−Ｇｌｕ、Ｄ
−ＨｇｌまたはＤ−Ａｓｐ残基は好ましくはＢｚｌ（ベ
ンジルエテル）、２，６−ジクロルベンジル（ＤＣ
Ｂ）、ジニトロフエニル（Ｄｎｐ）、１−ヒドロキシ−
ベンゾトリアゾールベンジルエステル（ＯＨｂｔ）、８
−ヒドロキシ−キノリンエステル（ＯＨｑ）、ｐ−ニト
ロベンジルオキシ（ＯＮＢｚｌ）、フエニルアゾフエニ
ルまたはｔ−ブトキシ基で保護され、このような合成法
は十分に保護されたペプチド樹脂中間体をもたらす。

ＧｎＲＨアンタゴニストの中間体は次の式II： Ｘ^１−Ｒ_１−（Ｗ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ_３（Ｘ^２−Ｒ_４（Ｘ^３）−Ｒ_５（Ｘ^４ またはＸ^６）−Ｒ_４（Ｘ^５）−Ｒ_７−Ａｒｇ（Ｘ^１）−
Ｐｒｏ−Ｘ^７ で表わされ、式中Ｘ^１はポリペプチドの段階的合成法に
おいて当分野で有用であることが知られる型のα−アミ
ノ保護基であり、そして目的ペプチド化合物中のＸが特
定のアシル基であるときには、そのアシル基を保護基と
して使用することができる。Ｘ^１に包含されるα−アミ
ノ保護基の種類としては（１）アシル型保護基、例えば
ホルミル（Ｆｏｒ）、トリフルオルアセチル、フタリ
ル、ｐ−トルエンスルホニル（Ｔｏｓ）、ベンゾイル
（Ｂｚ）、ベンゼンスルホニル、ｏ−ニトロフエニルス
ルフエニル（Ｎｐｓ）、トリチルスルフエニル、ｏ−ニ
トロフエノキシアセチル、アクリリル（Ａｃｒ）、クロ
ルアセチル、アセチル（Ａｃ）およびγ−クロルブチリ
ル；（２）芳香族ウレタン型保護基、例えばベンジルオ
キシカルボニル（Ｚ）、フルオレニルメチルオキシカル
ボニル（ＦＭＯＣ）および置換されたベンジルオキシカ
ルボニル、例えばｐ−クロルベンジルオキシカルボニル
（ＣｌＺ）、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ
−ブロムベンジルオキシカルボニルおよびｐ−メトキシ
ベンジルオキシカルボニル；（３）脂肪族ウレタン型保
護基、例えばｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、
ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキ
シカルボニル、エトキシカルボニルおよびアリルオキシ
カルボニル；（４）シクロアルキルウレタン型保護基、
例えばシクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチル
オキシカルボニルおよびシクロヘキシルオキシカルボニ
ル；（５）チオウレタン型保護基、例えばフエニルチオ
カルボニル；（６）アルキル型保護基、例えばアリル
（Ａｌｙ）、トリフエニルメチル（トリチル）およびベ
ンジル（Ｂｚｌ）；（７）トリアルキルシラン基、例え
ばトリメチルシラン；がある。Ｘが水素原子であると
き、好適なα−アミノ保護基はＢｏｃである。

Ｘ^２は水素原子またはＴｒｐのインドール窒素のための
保護基（例えばホルミルまたはベンジル）である。多く
の合成においてＴｒｐのインドールＮＨを保護する必要
はないが、Ｒ_３が（Ｎ^ｉｎＦｏｒ）Ｄ−Ｔｒｐである場
合にＸ^２はホルミルである。Ｄ−３ＰＡＬは保護する必
要がない。

Ｘ^３は水素原子またはＳｅｒのアルコール性ヒドロキシ
ル基のための保護基であり、例えばアセチル、ベンゾイ
ル、テトラヒドロピラニル、ｔ−ブチル、トリチル、ベ
ンジルおよび２，６−ジクロルベンジルよりなる群から
選択される１種である。ベンジルが好適である。また、
Ｓｅｒに代わる置換がなされている場合に、Ｘ^３は側鎖
アミノ基のための保護基（例えばＴｏｓ、ＺまたはＣｌ
Ｚ）でありうる。

Ｘ^４は水素原子またはＴｙｒが存在するときにはＴｙｒ
のフエノール性ヒドロキシル基のための保護基であり、
テトラヒドロピラニル、ｔ−ブチル、トリチル、ベンジ
ル、Ｚ、４−プロムベンジルオキシカルボニルおよび
２，６−ジクロルベンジルよりなる群から選択される。
２，６−ジクロルベンジルが好適である。

Ｘ^５はＤ−Ｇｌｕ、Ｄ−ＨｇｌまたはＤ−Ａｓｐの側鎖
カルボキシル基のため保護基であり、Ｂｚｌ（ベンジル
エステル）、２，６−ジクロルベンジル（ＤＣＢ）、ジ
ニトロフエニル（Ｄｎｐ）、１−ヒドロキシベンゾトリ
アゾールベンジルエステル（ＯＨｂｔ）、８−ヒドロキ
シキノリンエステル（ＯＨｑ）、ｐ−ニトロベンジルオ
キシ（ＯＮＢｚｌ）、フエニルアゾフエニルおよびｔ−
ブトキシよりなる群から選択される。Ｂｚｌが好適であ
る。

Ｘ^６はＡｒｇの側鎖グアニジノ基のための保護基であつ
て、例えばニトロ、Ｔｏｓ、トリチル、ベンジルオキシ
カルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、Ｚおよび
Ｂｏｃである。またＸ^６は水素原子であつてもよく、こ
の場合は側鎖基原子に保護基が存在しないことを意味す
る。一般にＴｏｓが好適である。

Ｘ^７はＧｌｙ−ＮＨ−〔樹脂支持体〕、Ｄ−Ａｌａ−Ｎ
Ｈ−〔樹脂支持体〕またはＮ（Ａ）−〔樹脂支持体〕で
ありうる。またＸ^７はＧｌｙあるいはＤ−Ａｌａのアミ
ド、もしくはＰｒｏに直接結合した置換アミドでありう
る。

Ｘ^２〜Ｘ^６の側鎖保護基を選択する規準は、合成の各段
階でα−アミノ保護基を除去するために選択した反応条
件のもとで試薬に対してその保護基が安定であるべきで
あるということである。保護基はカツプリング条件下で
開裂してはならず、また意図するアミノ酸配列の合成が
完了した時点でペプチド鎖を変性しない反応条件下に除
去できなければならない。

Ｘ^７基がＧｌｙ−ＮＨ−〔樹脂支持体〕またはＤ−Ａｌ
ａ−ＮＨ−〔樹脂支持体〕である場合、ＧｌｙまたはＤ
−Ａｌａはアミド結合によつてＢＨＡ樹脂またはＭＢＨ
Ａ樹脂へ結合される。Ｘ^７基がＮ（Ａ）−〔樹脂支持
体〕である場合には、ｐｒｏが置換されたアミド結合に
よつてＮ−アルキルアミノメチル樹脂（ＮＡＡＭ）へ結
合される。

Ｘがアセチル基である場合（例えば最終式のＮ−末端に
おいて）、それはＤ−ＮＡＬのまたは１位で使用される
アミノ酸が何であろうとそのα−アミノ基のＸ^１保護基
として使用することができ、それはこの最後のアミノ酸
をペプチド鎖にカツプリングする前に付加される。しか
しながら、アセチル化は好ましくは、樹脂上のペプチド
（側鎖基を保護したままでα−アミノ基の保護基を除去
したもの）を用いて、例えばジシクロヘキシルカルボジ
イミド（ＤＣＣ）の存在下での酢酸との反応、または好
適には無水酢酸との反応、あるいは当分野で知られた他
の適当な反応によつて実施される。

十分に保護されたペプチド中間体は基本的な溶液合成法
から得られ、その後当分野でよく知られるように保護基
が除去される。ペプチド保護基の除去、ならびにＢＨ
Ａ、ＭＢＨＡまたはＮＡＡＭ樹脂からのペプチドの開裂
は、フツ化水素酸（ＨＦ）またはその均等物を用いて、
側鎖カルボキシル基においてアシリウムイオンの形成を
促進する温度（好ましくは約２０℃〜約２５℃）で適切
な時間（例えば約２〜３時間）処理することにより行わ
れる。ＨＦでの処理に先立つて、スカベンジヤーとして
も作用するクラスＺ′から選択される芳香族化合物（例
えばアニソール）の十分過剰量がペプチドに添加され
る。一般にペプチドのモル量の少なくとも同量ないし２
０倍量が添加される。アシリウムイオンの存在下で、こ
の添加されたクラスＺ′からの化合物は脂肪族−芳香族
ケトン側鎖を生成するように反応し、この反応機構は
Ｇ．バラニー（Ｂａｒａｎｙ）およびＲ．メリーフイー
ルド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）の固相相ペプチド合成
（Ｓｏｌｉｄ−Ｐｈａｓｓ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔ
ｈｅｓｉｓ）、１９２〜１９７頁に示されている。真空
下でＨＦを除去した後、樹脂から開裂し且つ保護基を除
去したペプチドはエーテルで有利に処理し、デカント
し、希酢酸で抽出し、そして凍結乾燥される。この時点
で、ペプチドは所望により例えば１Ｎ酢酸で処理するこ
とによりその無毒性塩に転化される。

ペプチドの精製はＣＭＣカラムでのイオン交換クロマト
グラフイー、その後のセフアデツクスＧ−２５を充填し
たカラムでの分配クロマトグラフイー〔ｎ−ブタノー
ル：０．１Ｎ酢酸（容量比１：１）の溶離剤を使用〕に
より、あるいはＪ．リビアー（Ｒｉｖｉｅｒ）らのジヤ
ーナル・オブ・クロマトグラフイー（Ｊ．Ｃｈｒｏｍａ
ｔｏｇｒａｐｈｙ）、２８８（１９８４）３０３〜３２
８に報告されている当分野で知られたＨＰＬＣを使うこ
とにより行われる。

本発明のＧｎＲＨアンタゴニストは、発情前期の日の正
午項に投与した場合、１００μｇ／ｋｇ（体重）以下の
用量で雌ラツトの排卵を抑えるのに有効である。排卵を
長期間抑制するためには、約０．１〜約２．５ｍｇ／ｋ
ｇ（体重）の範囲の投与量を使用することが必要かも知
れない。これらのアンタゴニストはまた定期的に雄哺乳
動物に投与した場合、精子形成を阻止するのに有効であ
つて、避妊薬として使用可能である。これらの化合物は
テストステロン量を減少させる（このことは正常の、性
的に活動している雄にとつて望ましくない結果である）
ので、ＧｎＲＨアンタゴニストと一緒に補充量のテスト
テトロンを投与することが合理であるかも知れない。こ
れらのアンタゴニストはまた先に示したような他の目的
のためにゴナドトロピンおよび性ステロイド類の産生を
調節するのに使用できる。

実施例１ 表Ｉに記載の次式： Ａｃ−Ｒ_１−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ_３−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｄ−Ｇｌｕ （Ｖ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｅ−Ｒ_１０ で表わされるＧｎＲＨアンタゴニストを、先に述べた固
相法によつて製造した。表ＩにおけるＺ′はケト側鎖の
所望芳香族部分Ｖをもたらす化合物である。

１つの例として、 〔Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ^１，（４Ｃｌ）Ｄ−ｐｈｅ^２，Ｄ− ３ＰＡＬ^３，Ａｒｇ^５，Ｄ−Ｇｌｕ^６（Ｃ_６Ｈ_４ＯＣＨ_３），Ｄ−Ａｌａ^１０〕 −ＧｎＲＨ と称される本発明のペプチドＮＯ．１の代表的固相合成
法を以下に説明する。このペプチドは次式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−ｐｈｅ−Ｄ−３ＰＡＬ− Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｃ_６Ｈ_４ＯＣＨ_３）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｅ −Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２ で表わされる。その他のペプチド類も同様にして合成さ
れ且つ精製される。

ＢＨＡ樹脂を使用し、そして３倍過剰のＢｏｃ−保護Ｄ
−Ａｌａおよび活性化剤としてのＤＣＣを用いてＣＨ_２
Ｃｌ_２中２時間にわたつてＢｏｃ誘導体を樹脂にカツプ
リングさせた。Ｄ−アラニン残基はアミド結合によつて
ＢＨＡ樹脂に結合した。

各アミノ酸残基のカツプリング後、洗浄、保護基の除去
および次のアミノ酸残基のカツプリングを以下のスケジ
ユールに従つて行い、この際自動合成機を使用した約５
ｇの樹脂を用いて開始した。

段階１３の後に、その合成が手動であるときにはニンヒ
ドリン試験用のアリコートを採取した。その試験が陰性
である場合は次のアミノ酸のカツプリングのために段階
１へ戻り、その試験が陽性またはわずかに陽性である場
合は段階９へ戻つて、段階９〜１３を繰り返した。

一般に、上記のスケジユールは最初のアミノ酸を結合さ
せた後に本発明ペプチドの各アミノ酸をカツプリングさ
せる際に用いられる。Ｎ^αＢｅｃ保護は合成の間中それ
ぞれの残存アミノ酸に対して使用した。Ｎ^αＢｅｃ−β
−Ｄ−２ＮＡＬは当分野における既知方法で製造され、
例えば米国特許第４２３４５７１号（１９８０年１１月
１８日付）に詳しく述べられている。Ａｒｇの側鎖はＴ
ｏｓで保護した。ＯＢｚｌはＳｅｒのヒドロキシ基のた
めの側鎖保護基として使用し、ＢｚｌはＤ−Ｇｌｕを保
護するのに使用した。Ｄ−３ＰＡＬは保護しないままで
使用した。最後のアミノ酸としてＮ^αＢｅｃ−β−Ｄ−
２ＮＡＬを導入した。ＣＨ_２Ｃｌ_２に対する溶解性が小
さいＢｅｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）はＤＭＦ／ＣＨ_２Ｃｌ_２
混合溶媒を用いてカツプリングさせた。

Ｎ−末端のα−アミノ基の保護基を除去した後、ジクロ
ルメタン中で無水酢酸を大過剰使用してそのアセチル化
を行つた。樹脂からのペプチドの開裂および側鎖保護基
の完全な除去は、ＨＦを用いて２４℃で約２時間半実施
した。表Ｉに示したスカベンジヤーをＨＦ処理以前に添
加して、混合アルキルケトンを生成させた。真空下でＨ
Ｆを除去した後、樹脂を５０％酢酸で抽出し、そしてそ
の洗液を凍結乾燥させて粗製ペプチド粉末を得た。

その後、ＣＭＣ（ワツトマンＣＭ３２、メタノール／水
５０：５０中の０．０５〜０．３Ｍ ＮＨ_４ＯＡｃの濃
度勾配を使用）でのイオン交換クロマトグラフイー、続
いてゲル過カラム（ｎ−ブタノール／０．１Ｎ酢酸
（容量比１：１）の溶離剤を使用）での分配クロマトグ
ラフイーを使つてペプチドの精製を行つた。

このペプチドは数種の異なる展開液を使用した薄層クロ
マトグラフイー、および燐酸トリエチルアンモニウム水
溶液／アセトニトリルを使用した逆相高圧液体クロマト
グラフイーにより均一であることが判明した。得られた
精製ペプチドのアミノ酸分析は実質的にペプチド鎖中の
各アミノ酸に関して整数値を示すことにより、作成した
構造式と一致した。その旋光度は光電旋光計で測定して
〔α〕▲²² _D▼＝−２８．７７゜±１（ｃ＝１、５０％
酢酸） であつた。

表Ｉに記載のその他のＧｎＲＨアンタゴニストも上記方
法および適当な樹脂を使うことにより合成できる。

各ペプチドは雌ラツトの排卵を抑制するというその有効
性について調べるためのインビボ検定を行つた。この試
験において、一定数（７匹）の成熟したスプラーグ・ド
ーレイ種（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗ−ｌｅｙ）の雌ラツ
ト（体重２２５〜２５０ｇ）に、コーン油中のペプチド
の一定マイクログラム量を発情前期の日の正午項に皮下
注射した。発情前期は排卵の日の午後である。別の群の
雌ラツトを対照として使用し、これらにはペプチドを投
与しなかつた。対照の雌ラツトはそれぞれ発情前期の日
の夜に排卵した。処理群のラツトのうち排卵したものの
数を記録した。表Ｉに記載のペプチドはそれぞれ極めて
低用量で雌ラツトの排卵を抑えるのに有意に効果的であ
り、そして各ペプチドは約５μｇの用量で完全に有効で
あると考えられた。

本発明による、表ＩのペプチドＮＯ．１を、１．５μｇ
の用量で１０匹のラツトに投与したところ、１０匹のす
べてのラツトが排卵しなかつた。さらに、このペプチド
ＮＯ．１を０．５μｇの用量で投与したところ、試験し
た１６匹のラツトのうち８匹のみが排卵し、このような
低用量においても５０％の有効性を有することが示され
た。

参考例Ｉ 表IIに記載の次式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（Ｗ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｄ−Ｔｒｐ−Ｒ_４− Ｒ_５−Ｒ_６（Ｖ）−Ｒ_７−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−ＮＨ_２ で表わされるペプチドを先に述べた固相法によつて製造
した。表ＩＩにおけるＺ′はＶを生成するために使用し
た化合物である。

表IIに記載のペプチドのインビトロおよび／またはイン
ビボ試験は、これらのペプチドがインビトロにおいて適
当な濃度でＧｎＲＨにより誘発されるＬＨ分泌を阻止す
るのに有効であることを示した。これらのペプチドの多
くはインビボにおいて本件の標準品よも一層強力であつ
た。ペプチドは全て極めて低用量で雌哺乳動物の排卵を
抑制するのに効果的であると考えられた。

参考例II 表IIIに記載の次式： Ｘ−β−Ｄ−２ＮＡＬ（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ−（１Ｆｏｒ）Ｄ −Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｒ_５−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｖ）−ＮＭＬ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｒ_１０ で表わされるペプチドを、適当な樹脂を使つて先に述べ
た固相法により製造した。表IIIにおけるＺ′はＶを生
成するために使用した化合物である。

表IIIに記載のペプチドのインビトロおよび／またはイ
ンビボ試験は、これらのペプチドがインビトロにおいて
適当な濃度でＧｎＲＨにより誘発されるＬＨ分泌を阻止
するのに有効であることを示した。これらのペプチドの
多くはインビボにおいて本件の標準品よりも一層強力で
あつた。本発明ペプチドは全て極めて低用量で雌哺乳動
物の排卵を抑制するのに効果的であと考えられた。

参考例III 表IVに記載の次式： Ａｃ−Ｒ_１−（４Ｆ）Ｄ−Ｐｈｅ−Ｒ_３−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｒ_６（Ｖ） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−ＮＨＣＨ_２ＣＨ_３ で表わされるペプチドを先に述べた固相法により製造し
た。表IV中のＺ′はＶ生成するために使用した化合物で
ある。

表IVに記載のペプチドのインビトロおよび／またはイン
ビボ試験は、これらのペプチドがインビトロにおいて適
当な濃度でＧｎＲＨにより誘発されＬＨ分泌を阻止する
のに有効であることを示した。これらのペプチドの多く
はインビボにおいて本件標準品よりも一層効力があつ
た。本発明ペプチドは全て極めて低用量で雌哺乳動物の
排卵を抑制するのに効果的であると考えられた。

参考例IV 表Ｖに記載の次式： ｐＧｌｕ−Ｈｉｓ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ−Ｒ_６（Ｖ）−Ｌｅｕ−Ａｒｇ −Ｐｒｏ−Ｒ_１０ で表わされるＧｎＲＨアゴニストを先に述べた固相法に
より製造した。表Ｖ中のＺ′は上記式中のＶを生成する
ために使用した化合物である。

ペプチドＮＯ．５７を合成するために、架橋クロルメチ
ル化ポリスチレン樹脂とエチルアミンとを４℃で約２日
間反応させることによりＮ−エチルアミン樹脂を製造
し、この樹脂と３倍過剰のＢｏｃ−保護Ｐｒｏおよび活
性化剤としてのＤＣＣを用いて、Ｂｏｃ誘導体をＣＨ_２
Ｃｌ_２中で２時間間にわたり樹脂へカツプリングさせ
た。プロリン残基は置換されたアミド結合によつてＮＥ
ＡＭ樹脂に結合した。

各アミノ酸残基のカツプリング後に、洗浄、保護基の除
去および次のアミノ酸残基のカツプリング反応を、自動
合成機を使用し且つ約５ｇの樹脂から出発することによ
り以下のスケジユールに従つて実施した。

Ｎ^αＢｏｃ保護は合成を通じて残存アミノ酸の各々に対
して使用した。但しｐＧｌｕは保護しないままで使用し
たが、場合によりＺで保護することもできる。Ａｒｇの
側鎖はＴｏｓで保護した。ＯＢｚｌはＳｅｒのヒドロキ
シル基のための側鎖保護基として使用し、ＢｚｌはＤ−
Ｇｌｕを保護するるために使用した。Ｔｒｐは保護しな
かつた。ｐＧｌｕは最後のアミノ酸として導入した。Ｂ
ｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）およびＢｏｃ−ＴｒｐはＣＨ_２
Ｃｌ_２に対する溶解性が低いので、ＤＭＦ／ＣＨ_２Ｃｌ
_２の混合溶媒を使用したカツプリングさせた。

Ｎ−末端のα−アミノ保護基を除去した後、ジクロルメ
タン中で大過剰の無水酢酸を用いてそのアセチル化を行
つた。樹脂からのペプチドの開裂ならびに側鎖保護基の
完全な除去は、ＨＦを用いて２４℃で約２時間半処理す
ることにより実施した。表Ｖに示した化合物Ｚ′はＨＦ
処理以前に添加して混合アルキルケトンを生成させ、ま
た大抵の場合スカベンジヤーとして作用させた。真空下
でＨＦを除去した後、５０％酢酸で樹脂を抽出し、そし
て洗液を凍結乾燥して粗製ペプチド粉末を得た。

次いで、ＣＭＣ（ワツトマンＣＭ３２、メタノール／水
５０：５０の混合溶媒中の０．０５〜０．３Ｍ ＮＨ_４
ＯＡｃの濃度勾配を使用）でのイオン交換クロマトグラ
フイー、その後のゲル過カラム（ｎ−ブタノール／
０．１Ｎ酢酸容量比１：１の溶離剤を使用）での分配ク
ロマトグラフイーを使つてペプチドの精製を行つた。

このペプチドは数種の異なる展開液を使用する薄層クロ
マトグラフイー、および燐酸トリエチルアンモニウム水
溶液／アセトニトリルを使用する逆相高圧液体クロマト
グラフイーにより均一であると判明した。得られた精製
ペプチドのアミノ酸分析は実質的にペプチド鎖中の各ア
ミノ酸に関して整数値を示し、作成した構造式と一致し
た。

表Ｖに記載のその他のＧｎＲＨアゴニストも上記方法お
よび適当な樹脂を使用することにより合成できる。

各ペプチドは、ラツト脳下垂体の分散細胞の一次倍養物
からＬＨを分泌させるというその有効性について調べる
ために、米国特許第４３８２９２２号に記載の方法を使
つてインビトロ検定を行つた。表Ｖに記載の各ペプチド
は天然のＧｎＲＨよりも非常に顕著に効力があつて有効
であると考えられ、また受精能力の調節および早発思春
期症、子宮内膜症または月経困難症を有する患者の治療
に適切な用量で十分に効果的であると考えられた。

本発明ペプチドはしばしば薬学的に受容される無毒性
塩、例えば酸付加塩または金属錯体（例えば亜鉛、バリ
ウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウムとの錯
体、これらも本明細書では付加塩とみなされる）または
これらの組合せの形で投与される。酸付加塩の例として
塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、燐酸塩、硝酸塩、蓚酸
塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、タンニン酸塩、マレイ
ン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、コハク酸
塩、アルギン酸塩、リンゴ酸塩、アスコルビン酸塩、酒
石酸塩などがある。ペプチドの水溶液を例えば１Ｎ酢酸
で繰り返し処理し、次に凍結乾燥するとその酢酸塩が得
られる。その活性成分が錠剤の形で投与される場合、錠
剤はトラガカント、トウモロコシ澱粉またはゼラチンの
ような結合剤；アルギン酸のような崩壊剤；およびステ
アリン酸マグネシウムのような滑沢剤を含む薬学的に受
容される希釈剤を包含しうる。液体での投与が望まれる
場合は、薬学的に受容される希釈剤の一部として甘味料
および／または風味料を使用することができる。等張食
塩水または燐酸緩衝液などでの静脈内投与も行われる。

薬剤組成物は通常、薬学的に受容される担体との組合せ
でペプチドを含有するであろう。一般に静脈内投与の場
合その投与量は患者の体重１ｋｇ当たりペプチド約１〜
１００μｇであり、経口投与量はそれよりも高くなるで
あろう。結局、これらのペプチドでの患者の治療は一般
に、他のＧｎＲＨアンタゴニストを使用する臨床治療と
同じ方法で行われる。

これらのペプチドは、受精の抑制および／または調節を
行うために、あるいは例えば早期思春期症の管理または
放射線照射や化学療法の期間中のような生殖腺の活性を
可逆的に抑制する必要がある場合には、哺乳動物に対し
て静脈内、皮下、筋肉内、経口的、経皮的（例えば鼻腔
内または腟内）に投与することができる。有効投与量は
投与形体および治療を受ける個々の哺乳動物種により変
化するであろう。１つの代表的な投与形体の例はペプチ
ドを含有する静菌水溶液であり、この溶液は約０．１〜
２．５ｍｇ／ｋｇ（体重）の範囲の用量となるように投
与される。ペプチドの経口投与は固体または液体のいず
れかの形で行われる。

本発明はその好適な実施態様に関して述てきたが、当分
野で通常の知識を有する者には明白であるような変更お
よび修飾が添付の特許請求の範囲に記載の本発明範囲を
逸脱することなしに行いうることは理解されるべきであ
る。例えば、ペプチドの有効性を有意に損うことのない
当分野で知られた他の置換が本発明ペプチドにおいて使
用可能である。例えば、Ｒ_１０について特定したアミノ
酸残基の代わりに、Ｓａｒ−ＮＨ_２（Ｓａｒ＝サルコシ
ン）を使用することができ、あるいはＮＨ−Ｙ（ここで
Ｙは低級アルキル基、シクロアルキル基、フルオル低級
アルキル基またはＮＨＣＯＮＨＱであり、ＱはＨまたは
低級アルキル基である）を存在させることができ、これ
らは全て均等であるとみなされる。１位のＤ−Ｐｈｅは
２位の置換について特定したように場合によりハロゲン
化することができる。クラスＺ′として列挙した化合物
のほかに、追加の均等な芳香族化合物がピーターＨ・ゴ
ア（Ｐｅｔｅｒ Ｈ．Ｇｏｒｅ）の芳香族ケトンの合成
（Ａｒｏｍａｔｉｃ Ｋｅｔｏｎｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ）、第３巻（１９６３年）、インターサイエンス・パ
プリシヤーズ発行に開示されている。その他の均等なア
ミノ酸残基、例えばＭｅｔ、Ｃｙｓ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒ、
およびＴｒｐも先に７位で特定した残基の代わりに使用
することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ワイリー・ウオーカー・ベール・ジユニア アメリカ合衆国カリフオルニア州92037, ラ・ホーラ，バルデズ 1643 (56)参考文献 特開 昭59−62556（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−115753（ＪＰ，Ａ)

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】次式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ− Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｃ_６Ｈ_４ＯＣＨ_３） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２ で表わされるＧｎＲＨ類似体ペプチド。
2. 【請求項２】次式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ− Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ−Ａｒｇ−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｃ_６Ｈ_４ＯＣＨ_３） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ_２ で表わされるＧｎＲＨ類似体ペプチドの製造方法であっ
   て、次式： Ａｃ−β−Ｄ−２ＮＡＬ−（４Ｃｌ）Ｄ−Ｐｈｅ− Ｄ−３ＰＡＬ−Ｓｅｒ（Ｘ^３）−Ａｒｇ（Ｘ^６）−Ｄ−Ｇｌｕ（Ｘ^５） −Ｌｅｕ−Ａｒｇ（Ｘ^６）−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ−［樹脂支持体］ ［式中、Ｘ^３は水素原子またはＳｅｒのアルコール性水
   酸基の保護基であり； Ｘ^５はベンジルエステル、２，６−ジクロロベンジル、
   ジニトロフェニル、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール
   ベンジルエステル、８−ヒドロキシキノリンエステル、
   ｐ−ニトロベンジルオキシ、フェニルアゾフェニルおよ
   びｔ−ブトキシからなる群から選ばれる、側鎖カルボキ
   シル基の保護基であり； Ｘ^６は水素原子または側鎖グアニジノ基の保護基であ
   る］ で表わされるペプチド中間体を、前記樹脂支持体にアミ
   ノ酸を段階的に付加することによって形成する； 前記ペプチド中間体を、前記Ｘ^５保護基が除去されてア
   シリウムイオン中間体が生成し、かつそのアシリウムイ
   オンがアニソールと反応して混合アルキルケトンを形成
   するような条件下で、約２０℃またはそれ以上の温度に
   おいてＨＦおよびアニソールによって処理する；および 前記ＨＦを除去して所望の前記ペプチドを回収する； の各工程からなる方法。