JPH06293645A - 逆転写酵素阻害剤 - Google Patents
逆転写酵素阻害剤Info
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- JPH06293645A JPH06293645A JP8339193A JP8339193A JPH06293645A JP H06293645 A JPH06293645 A JP H06293645A JP 8339193 A JP8339193 A JP 8339193A JP 8339193 A JP8339193 A JP 8339193A JP H06293645 A JPH06293645 A JP H06293645A
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Abstract
(57)【要約】
〔構成〕 ２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド
５′−トリりん酸、例えば２′−デオキシ−Ｌ−チミジ
ン ５′−トリりん酸を有効成分として含む逆転写酵素
阻害剤。 〔効果〕 レトロウイルス、例えばＨＩＶの産生する逆
転写酵素を強く阻害するので、エイズの治療や予防、な
らびにエイズ・ウイルス感染後の発病抑制・遅延に有用
である。また、生化学、遺伝子工学等の研究のために用
いられる試薬としても有用である。
５′−トリりん酸、例えば２′−デオキシ−Ｌ−チミジ
ン ５′−トリりん酸を有効成分として含む逆転写酵素
阻害剤。 〔効果〕 レトロウイルス、例えばＨＩＶの産生する逆
転写酵素を強く阻害するので、エイズの治療や予防、な
らびにエイズ・ウイルス感染後の発病抑制・遅延に有用
である。また、生化学、遺伝子工学等の研究のために用
いられる試薬としても有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、逆転写酵素阻害剤に関
する。さらに詳しくは、本発明は、エイズウイルス（Ｈ
ＩＶ：ヒト免疫不全ウイルス）等のレトロウイルスが産
生する逆転写酵素を阻害し、後天性免疫不全症候群（AI
DS, エイズ）の治療や感染後の発病抑制に有用な逆転写
酵素阻害剤に関する。
する。さらに詳しくは、本発明は、エイズウイルス（Ｈ
ＩＶ：ヒト免疫不全ウイルス）等のレトロウイルスが産
生する逆転写酵素を阻害し、後天性免疫不全症候群（AI
DS, エイズ）の治療や感染後の発病抑制に有用な逆転写
酵素阻害剤に関する。
【従来の技術】従来、天然型ヌクレオシドの光学対掌体
（エナンチオマー）である非天然型エナンチオヌクレオ
シドが種々合成されてきた。これらのうち、Ｌ型ヌクレ
オシドに属する３′−チア−２′−デオキシ−Ｌ−シチ
ジン(3TC, Antimicrob. AgentsChemother., 36, 1688-1
694, 1992) および３′−チア−２′−デオキシ−５−
フルオロ−Ｌ−シチジン(FTC, Antimicrob. Agents Che
mother., 36, 2423-2431, 1992) には強い抗ＨＩＶ活性
が報告されている。また、Ｌ−チミジンが、単純ヘルペ
スウイルスＩ型にコードされるチミジンキナーゼによっ
てりん酸化され、感染細胞中におけるウイルスの複製を
阻害することが報告されている(J. Med. Chem., 35, 42
14-4220, 1992)。
（エナンチオマー）である非天然型エナンチオヌクレオ
シドが種々合成されてきた。これらのうち、Ｌ型ヌクレ
オシドに属する３′−チア−２′−デオキシ−Ｌ−シチ
ジン(3TC, Antimicrob. AgentsChemother., 36, 1688-1
694, 1992) および３′−チア−２′−デオキシ−５−
フルオロ−Ｌ−シチジン(FTC, Antimicrob. Agents Che
mother., 36, 2423-2431, 1992) には強い抗ＨＩＶ活性
が報告されている。また、Ｌ−チミジンが、単純ヘルペ
スウイルスＩ型にコードされるチミジンキナーゼによっ
てりん酸化され、感染細胞中におけるウイルスの複製を
阻害することが報告されている(J. Med. Chem., 35, 42
14-4220, 1992)。
【０００２】
【発明が解決しようとする課題および課題を解決するた
めの手段】本発明者は、２′−デオキシ−Ｌ−リボヌク
レオシド ５′−トリりん酸を製造してその生物活性を
検討したところ、この化合物がレトロウイルスの産生す
る逆転写酵素を強く阻害することを見出し、本発明を完
成するに至った。本発明の逆転写酵素阻害剤は、特にＨ
ＩＶの産生する逆転写酵素を強く阻害するので、エイズ
の治療や予防、ならびにエイズ・ウイルス感染後の発病
抑制・遅延に有用である。また、生化学、遺伝子工学等
の研究のために用いられる試薬としても有用である。本
発明の逆転写酵素阻害剤に有効成分として含まれる２′
−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド ５′−トリりん酸
としては、例えば、２′−デオキシ−Ｌ−チミジン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−ウリジン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−アデノシン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−グアノシン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−シチジン
５′−トリりん酸等の天然型２′−デオキシリボヌクレ
オシド ５′−トリりん酸の光学対掌体、および２′−
デオキシ−Ｌ−５−フルオロウリジン ５′−トリりん
酸等の非天然型２′−デオキシリボヌクレオシド ５′
−トリりん酸の光学対掌体を挙げることができる。
めの手段】本発明者は、２′−デオキシ−Ｌ−リボヌク
レオシド ５′−トリりん酸を製造してその生物活性を
検討したところ、この化合物がレトロウイルスの産生す
る逆転写酵素を強く阻害することを見出し、本発明を完
成するに至った。本発明の逆転写酵素阻害剤は、特にＨ
ＩＶの産生する逆転写酵素を強く阻害するので、エイズ
の治療や予防、ならびにエイズ・ウイルス感染後の発病
抑制・遅延に有用である。また、生化学、遺伝子工学等
の研究のために用いられる試薬としても有用である。本
発明の逆転写酵素阻害剤に有効成分として含まれる２′
−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド ５′−トリりん酸
としては、例えば、２′−デオキシ−Ｌ−チミジン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−ウリジン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−アデノシン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−グアノシン
５′−トリりん酸；２′−デオキシ−Ｌ−シチジン
５′−トリりん酸等の天然型２′−デオキシリボヌクレ
オシド ５′−トリりん酸の光学対掌体、および２′−
デオキシ−Ｌ−５−フルオロウリジン ５′−トリりん
酸等の非天然型２′−デオキシリボヌクレオシド ５′
−トリりん酸の光学対掌体を挙げることができる。
【０００３】本発明の逆転写酵素阻害剤に有効成分とし
て含まれる２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド
５′−トリりん酸は、Ｌ−チミジン等のＬ−ヌクレオシ
ド（天然型ヌクレオシドの光学対掌体）を、例えばオキ
シ塩化りん等により５′−モノりん酸化体とした後、例
えばホスホロイミダゾリデート法によって対応する５′
−トリりん酸化体とすることにより製造することができ
る。本発明の逆転写酵素阻害剤を、例えばＨＩＶウイル
ス等のレトロウイルスの関与する疾患などの治療や予
防、またはレトロウイルス感染後の発病抑制あるいは遅
延のための医薬として用いることができる。この場合に
は、上記の２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド
５′−トリりん酸を有効成分として含む医薬組成物とし
て患者に投与すればよい。医薬組成物としては、例え
ば、カプセル剤、錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、シロッ
プ剤等の経口投与用組成物、あるいは注射剤、坐剤、点
眼剤、眼軟膏、点耳剤、または外皮用剤等の非経口投与
用組成物を挙げることができる。これらの医薬用組成物
は常法により製造できるが、必要により薬理学的、製剤
学的に許容しうる添加物を加えて製造してもよい。
て含まれる２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド
５′−トリりん酸は、Ｌ−チミジン等のＬ−ヌクレオシ
ド（天然型ヌクレオシドの光学対掌体）を、例えばオキ
シ塩化りん等により５′−モノりん酸化体とした後、例
えばホスホロイミダゾリデート法によって対応する５′
−トリりん酸化体とすることにより製造することができ
る。本発明の逆転写酵素阻害剤を、例えばＨＩＶウイル
ス等のレトロウイルスの関与する疾患などの治療や予
防、またはレトロウイルス感染後の発病抑制あるいは遅
延のための医薬として用いることができる。この場合に
は、上記の２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド
５′−トリりん酸を有効成分として含む医薬組成物とし
て患者に投与すればよい。医薬組成物としては、例え
ば、カプセル剤、錠剤、細粒剤、顆粒剤、散剤、シロッ
プ剤等の経口投与用組成物、あるいは注射剤、坐剤、点
眼剤、眼軟膏、点耳剤、または外皮用剤等の非経口投与
用組成物を挙げることができる。これらの医薬用組成物
は常法により製造できるが、必要により薬理学的、製剤
学的に許容しうる添加物を加えて製造してもよい。
【０００４】経口剤及び坐剤の製造には、乳糖、D-マン
ニトール、トウモロコシデンプン、結晶セルロース等の
賦形剤；カルボキシメチルセルロース，カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム等の崩壊剤；ヒドロキシプロピ
ルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
ポリビニルピロリドン等の結合剤；ステアリン酸マグネ
シウム、タルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、白糖、酸化チタン等のコーティング剤；又
はポリエチレングリコール、ハードファット等の基剤を
製剤用成分として使用すればよい。注射剤あるいは点
眼，点耳剤の製造には、注射用蒸留水、生理食塩水、プ
ロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型剤型を
構成しうる溶解剤ないし溶解補助剤；無機又は有機の酸
あるいは塩基のpH調節剤；食塩、ブドウ糖、グリセリン
等の等張化剤；又は安定化剤等の製剤成分を使用すれば
よい。眼軟膏剤、外皮用剤の製造には、白色ワセリン、
マクロゴール、グリセリン、綿布等の軟膏剤、クリーム
剤、貼付剤に汎用される適切な製剤成分を使用すればよ
い。本発明の逆転写酵素阻害剤を医薬組成物として用い
る場合には、例えば、成人の患者に対して、有効成分で
ある２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド ５′−ト
リりん酸の一日あたり投与量が0.１〜1,000 mg/kg 程度
となるように投与すればよいが、治療や予防の目的や患
者の年齢や症状により適宜増減してもよい。
ニトール、トウモロコシデンプン、結晶セルロース等の
賦形剤；カルボキシメチルセルロース，カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム等の崩壊剤；ヒドロキシプロピ
ルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、
ポリビニルピロリドン等の結合剤；ステアリン酸マグネ
シウム、タルク等の滑沢剤；ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、白糖、酸化チタン等のコーティング剤；又
はポリエチレングリコール、ハードファット等の基剤を
製剤用成分として使用すればよい。注射剤あるいは点
眼，点耳剤の製造には、注射用蒸留水、生理食塩水、プ
ロピレングリコール等の水性あるいは用時溶解型剤型を
構成しうる溶解剤ないし溶解補助剤；無機又は有機の酸
あるいは塩基のpH調節剤；食塩、ブドウ糖、グリセリン
等の等張化剤；又は安定化剤等の製剤成分を使用すれば
よい。眼軟膏剤、外皮用剤の製造には、白色ワセリン、
マクロゴール、グリセリン、綿布等の軟膏剤、クリーム
剤、貼付剤に汎用される適切な製剤成分を使用すればよ
い。本発明の逆転写酵素阻害剤を医薬組成物として用い
る場合には、例えば、成人の患者に対して、有効成分で
ある２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド ５′−ト
リりん酸の一日あたり投与量が0.１〜1,000 mg/kg 程度
となるように投与すればよいが、治療や予防の目的や患
者の年齢や症状により適宜増減してもよい。
【０００５】
【実施例】以下、本発明の好ましい態様である２′−デ
オキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん酸についてさら
に具体的に説明するが、本発明はこの化合物およびこれ
らの実施例に限定されることはない。 例１：２′−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん
酸の製造 Ｌ−チミジン２０mg（0.０８３ミリモル）をりん酸トリ
エチル１mlに溶解し、−１０℃に冷却した後、オキシ塩
化りん５０μl を添加した。４℃にて１６時間反応させ
た後、反応液を１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液２mlに攪
拌しながら注いだ。中和後、水を添加して全量を５０ml
に希釈した後、クロロホルム１０mlで３回洗浄した。水
層をＤＥＡＥ−セルロース（３cm I.D. × 7 cm, Whatm
an DE-52) に吸着させて水洗した後、トリエチルアンモ
ニウムビカーボネートの直線濃度勾配（０−0.３M, ５
００ml×２）で溶出した。５′−モノりん酸を含むフラ
クションを集めて濃縮し、２′−デオキシ−Ｌ−チミジ
ン ５′−モノりん酸（Ｌ−ｄＴＭＰ）を得た。505 OD
267 （0.１Ｎ HCl） 収率 ６３％
オキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん酸についてさら
に具体的に説明するが、本発明はこの化合物およびこれ
らの実施例に限定されることはない。 例１：２′−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん
酸の製造 Ｌ−チミジン２０mg（0.０８３ミリモル）をりん酸トリ
エチル１mlに溶解し、−１０℃に冷却した後、オキシ塩
化りん５０μl を添加した。４℃にて１６時間反応させ
た後、反応液を１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液２mlに攪
拌しながら注いだ。中和後、水を添加して全量を５０ml
に希釈した後、クロロホルム１０mlで３回洗浄した。水
層をＤＥＡＥ−セルロース（３cm I.D. × 7 cm, Whatm
an DE-52) に吸着させて水洗した後、トリエチルアンモ
ニウムビカーボネートの直線濃度勾配（０−0.３M, ５
００ml×２）で溶出した。５′−モノりん酸を含むフラ
クションを集めて濃縮し、２′−デオキシ−Ｌ−チミジ
ン ５′−モノりん酸（Ｌ−ｄＴＭＰ）を得た。505 OD
267 （0.１Ｎ HCl） 収率 ６３％
【０００６】２′−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−モ
ノりん酸 475 OD267をジメチルホルムアミドに溶解し、
カルボニルジイミダゾール４0.５mgを添加後、室温にて
3.５時間攪拌した。メタノール１5.４μl を添加して３
０分攪拌した後、ピロりん酸トリブチルアミン塩ジメチ
ルホルムアミド溶液（0.６ミリモル／ml）１mlを添加し
室温で２４時間攪拌した。反応液を減圧乾固した後、残
渣を水５０mlに溶解して、活性炭１グラムを添加した。
穏やかに１０分間攪拌した後に濾過し、残渣に水５０ml
を添加して溶解した。この溶液をＤＥＡＥ−セルロース
（３cm I.D. ×7 cm, Whatman DE-52) に吸着させて水
洗した後、トリエチルアンモニウムビカーボネートの直
線濃度勾配（０−0.５M, ５００ml×２）で溶出した。
５′−トリりん酸を含むフラクションを集めて濃縮し、
２′−デオキシ−Ｌ−チミジン５′−トリりん酸（Ｌ−
ｄＴＴＰ）を得た。370 OD267 （0.１Ｎ HCl） 収率７
８％ ＵＶ吸収スペクトル： λ max 267 nm (H2O) りん原子含量 ： 計算値 ε(p) 267 nm (H2O)=
3,200 実測値 ε(p)=2,900 ＨＰＬＣ分析 ： 保持時間 6.８分 純度９７％ カラム ＹＭＣＯＤＳ Ａ−３０２逆相樹脂、水−アセ
トニトリルおよび１Ｍトリエチルアンモニウムアセテー
ト緩衝液（pH 7.0)(78:2:20, v/v/v) 、流速１ml／分、
５０℃。
ノりん酸 475 OD267をジメチルホルムアミドに溶解し、
カルボニルジイミダゾール４0.５mgを添加後、室温にて
3.５時間攪拌した。メタノール１5.４μl を添加して３
０分攪拌した後、ピロりん酸トリブチルアミン塩ジメチ
ルホルムアミド溶液（0.６ミリモル／ml）１mlを添加し
室温で２４時間攪拌した。反応液を減圧乾固した後、残
渣を水５０mlに溶解して、活性炭１グラムを添加した。
穏やかに１０分間攪拌した後に濾過し、残渣に水５０ml
を添加して溶解した。この溶液をＤＥＡＥ−セルロース
（３cm I.D. ×7 cm, Whatman DE-52) に吸着させて水
洗した後、トリエチルアンモニウムビカーボネートの直
線濃度勾配（０−0.５M, ５００ml×２）で溶出した。
５′−トリりん酸を含むフラクションを集めて濃縮し、
２′−デオキシ−Ｌ−チミジン５′−トリりん酸（Ｌ−
ｄＴＴＰ）を得た。370 OD267 （0.１Ｎ HCl） 収率７
８％ ＵＶ吸収スペクトル： λ max 267 nm (H2O) りん原子含量 ： 計算値 ε(p) 267 nm (H2O)=
3,200 実測値 ε(p)=2,900 ＨＰＬＣ分析 ： 保持時間 6.８分 純度９７％ カラム ＹＭＣＯＤＳ Ａ−３０２逆相樹脂、水−アセ
トニトリルおよび１Ｍトリエチルアンモニウムアセテー
ト緩衝液（pH 7.0)(78:2:20, v/v/v) 、流速１ml／分、
５０℃。
【０００７】例２：試験例 上記の２′−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん
酸（Ｌ−ｄＴＴＰ）を用いて真核生物およびウイルスの
ＤＮＡポリメラーゼに対する作用を検討した。ポリメラ
ーゼとしては、コウシ胸腺ＤＮＡポリメラーゼα(Pol
α）、ラットＤＮＡポリメラーゼβ(Polβ：Date, T.,
et al., Biochemistry, 27, 2983-2990, 1988)、ウシ肝
臓ＤＮＡポリメラーゼγ(Polγ：Izuta, S., et al., B
iochem. Biophys. Res. Commun., 179, 776-783 , 199
1) 、およびＨＩＶ−１由来のレトロウイルス逆転写酵
素(HIV-1 RT)を用いた。ＤＮＡポリメラーゼβとレトロ
ウイルス逆転写酵素は、遺伝子組換えにより大腸菌で生
産、精製された酵素である。酵素活性測定は、以下の表
１に示す条件を用い、各ポリメラーゼを３７℃で２０分
間インキュベートした後、反応液を冷却して DE 81イオ
ン交換紙に吸着させ、5%Na2HPO4で６回、つづいて水で
２回洗浄した後、イオン交換紙を乾燥して放射活性を測
定することにより行った。
酸（Ｌ−ｄＴＴＰ）を用いて真核生物およびウイルスの
ＤＮＡポリメラーゼに対する作用を検討した。ポリメラ
ーゼとしては、コウシ胸腺ＤＮＡポリメラーゼα(Pol
α）、ラットＤＮＡポリメラーゼβ(Polβ：Date, T.,
et al., Biochemistry, 27, 2983-2990, 1988)、ウシ肝
臓ＤＮＡポリメラーゼγ(Polγ：Izuta, S., et al., B
iochem. Biophys. Res. Commun., 179, 776-783 , 199
1) 、およびＨＩＶ−１由来のレトロウイルス逆転写酵
素(HIV-1 RT)を用いた。ＤＮＡポリメラーゼβとレトロ
ウイルス逆転写酵素は、遺伝子組換えにより大腸菌で生
産、精製された酵素である。酵素活性測定は、以下の表
１に示す条件を用い、各ポリメラーゼを３７℃で２０分
間インキュベートした後、反応液を冷却して DE 81イオ
ン交換紙に吸着させ、5%Na2HPO4で６回、つづいて水で
２回洗浄した後、イオン交換紙を乾燥して放射活性を測
定することにより行った。
【０００８】
【表１】 ──────────────────────────────────── HIV-1 RT Pol α Pol β Pol γ ──────────────────────────────────── 50 mM Tris-HCl pH8.3 pH7.5 pH8.8 40 mM KPi pH7.5 MnCl2 0.5 mM 0.5 mM 0.5 mM MgCl2 4 mM DTT 1 mM 1 mM 1 mM 1 mM BSA 100 μg/ml 400 μg/ml 400 μg/ml 400 μg/ml KCl 50 mM 100 mM 50 mM ポリ[rA] 20μg/ml 40μg/ml 40μg/ml オリゴ[dT] 10μg/ml 40μg/ml 10μg/ml 活性化ＤＮＡ 100 μg/ml [3H]dTTP 50μM 50μM 50μM 50μM dATP 100 μM dCTP 100 μM dGTP 100 μM 酵素量（ユニット） 0.1-0.6 0.1-0.6 0.1-0.6 0.1-0.6
【０００９】上記の各ＤＮＡポリメラーゼに対する２′
−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん酸（Ｌ−ｄ
ＴＴＰ）の作用を５０μＭｄＴＴＰ存在下で検討した。
対照として、抗ＨＩＶ剤として周知の３′−アジド−
３′−デオキシチミジン(AZT)の５′−トリりん酸化体
(AZT-TP: Ono, K., et al., Biochem. Biophys. Res. C
ommun., 140, 498-507, 1986) およびα−ｄＴＴＰ(Yam
aguchi, T., et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 1441-1
450, 1984)を用いた。 Polαの鋳型プライマーとして活
性化ＤＮＡを用いた場合、Ｌ−ｄＴＴＰによる阻害効果
はほとんど認められず、 Polβに対しても、ポリ[rA]−
オリゴ[dT]を鋳型プライマーとして用いた場合には、わ
ずかな阻害が認められるにすぎなかった。一方、 Polγ
に対しては、Ｌ−ｄＴＴＰによる阻害効果が認められた
が、ＡＺＴ−ＴＰと比較すると、その阻害活性はやや低
かった。また、α−ｄＴＴＰは Polγに対して弱い阻害
作用を示した。レトロウイルス逆転写酵素の活性測定に
頻用されるポリ[rA]−オリゴ[dT]を鋳型プライマーとし
て用いると、Ｌ−ｄＴＴＰはHIV-1 RTに対して強い阻害
作用を示した。結果を図１ないし図４に示す。図４に示
されたＬ−ｄＴＴＰのHIV-1 RTに対する阻害効果につい
て、ラインウィーバー−バーク・プロットで酵素阻害様
式を検討したところ、Ｌ−ｄＴＴＰは基質であるｄＴＴ
Ｐと拮抗阻害することが示された。HIV-1 RTに対するＬ
−ｄＴＴＰのＫｉ／Ｋｍ値は0.０７であり、Ｌ−ｄＴＴ
ＰはHIV-1 RTに対して、基質のｄＴＴＰよりも約１４倍
高い親和性を示した。
−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−トリりん酸（Ｌ−ｄ
ＴＴＰ）の作用を５０μＭｄＴＴＰ存在下で検討した。
対照として、抗ＨＩＶ剤として周知の３′−アジド−
３′−デオキシチミジン(AZT)の５′−トリりん酸化体
(AZT-TP: Ono, K., et al., Biochem. Biophys. Res. C
ommun., 140, 498-507, 1986) およびα−ｄＴＴＰ(Yam
aguchi, T., et al., Chem. Pharm. Bull., 32, 1441-1
450, 1984)を用いた。 Polαの鋳型プライマーとして活
性化ＤＮＡを用いた場合、Ｌ−ｄＴＴＰによる阻害効果
はほとんど認められず、 Polβに対しても、ポリ[rA]−
オリゴ[dT]を鋳型プライマーとして用いた場合には、わ
ずかな阻害が認められるにすぎなかった。一方、 Polγ
に対しては、Ｌ−ｄＴＴＰによる阻害効果が認められた
が、ＡＺＴ−ＴＰと比較すると、その阻害活性はやや低
かった。また、α−ｄＴＴＰは Polγに対して弱い阻害
作用を示した。レトロウイルス逆転写酵素の活性測定に
頻用されるポリ[rA]−オリゴ[dT]を鋳型プライマーとし
て用いると、Ｌ−ｄＴＴＰはHIV-1 RTに対して強い阻害
作用を示した。結果を図１ないし図４に示す。図４に示
されたＬ−ｄＴＴＰのHIV-1 RTに対する阻害効果につい
て、ラインウィーバー−バーク・プロットで酵素阻害様
式を検討したところ、Ｌ−ｄＴＴＰは基質であるｄＴＴ
Ｐと拮抗阻害することが示された。HIV-1 RTに対するＬ
−ｄＴＴＰのＫｉ／Ｋｍ値は0.０７であり、Ｌ−ｄＴＴ
ＰはHIV-1 RTに対して、基質のｄＴＴＰよりも約１４倍
高い親和性を示した。
【００１０】
【発明の効果】本発明の逆転写酵素阻害剤は、特にＨＩ
Ｖの産生する逆転写酵素を強く阻害するので、エイズの
治療や感染後の発病抑制・遅延に有用である。また、生
化学、遺伝子工学等の研究のために用いられる試薬とし
ても有用である。
Ｖの産生する逆転写酵素を強く阻害するので、エイズの
治療や感染後の発病抑制・遅延に有用である。また、生
化学、遺伝子工学等の研究のために用いられる試薬とし
ても有用である。
【図１】 コウシ胸腺ＤＮＡポリメラーゼα(Polα）に
対する本発明の逆転写酵素阻害剤の効果を示した図であ
る。
対する本発明の逆転写酵素阻害剤の効果を示した図であ
る。
【図２】 ラットＤＮＡポリメラーゼβに対する本発明
の逆転写酵素阻害剤の効果を示した図である。
の逆転写酵素阻害剤の効果を示した図である。
【図３】 ウシ肝臓ＤＮＡポリメラーゼγに対する本発
明の逆転写酵素阻害剤の効果を示した図である。
明の逆転写酵素阻害剤の効果を示した図である。
【図４】 ＨＩＶ−１由来のレトロウイルス逆転写酵素
(HIV-1 RT)に対する本発明の逆転写酵素阻害剤の効果を
示した図である。
(HIV-1 RT)に対する本発明の逆転写酵素阻害剤の効果を
示した図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 ２′−デオキシ−Ｌ−リボヌクレオシド
５′−トリりん酸を有効成分として含む逆転写酵素阻
害剤。 - 【請求項２】 ２′−デオキシ−Ｌ−チミジン ５′−
トリりん酸を有効成分として含む請求項１記載の逆転写
酵素阻害剤。
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