JPH06277055A - グルコシダーゼの保存法 - Google Patents
グルコシダーゼの保存法Info
- Publication number
- JPH06277055A JPH06277055A JP5089497A JP8949793A JPH06277055A JP H06277055 A JPH06277055 A JP H06277055A JP 5089497 A JP5089497 A JP 5089497A JP 8949793 A JP8949793 A JP 8949793A JP H06277055 A JPH06277055 A JP H06277055A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- glucosidase
- solution
- salt
- imidazole
- added
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】グルコシダーゼ（α−グルコシダーゼ及び／又
はβ−グルコシダーゼ）を液状化した状態で長期間安定
に保存する。 【構成】グルコシダーゼ（α−グルコシダーゼ及び／又
はβ−グルコシダーゼ）の含有溶液にトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン若しくはその塩及び／又はイミ
ダゾール類化合物若しくはその塩を含有させる。
はβ−グルコシダーゼ）を液状化した状態で長期間安定
に保存する。 【構成】グルコシダーゼ（α−グルコシダーゼ及び／又
はβ−グルコシダーゼ）の含有溶液にトリス（ヒドロキ
シメチル）アミノメタン若しくはその塩及び／又はイミ
ダゾール類化合物若しくはその塩を含有させる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、グルコシダーゼ、すな
わちα−グルコシダーゼ及び／又はβ−グルコシダーゼ
の長期保存法に関する。
わちα−グルコシダーゼ及び／又はβ−グルコシダーゼ
の長期保存法に関する。
【０００２】
【従来の技術】グルコシダーゼは、α−アミラーゼの活
性測定用試薬のキットに、凍結乾燥製品、あるいは溶液
製品として組み込まれているが、後者ものが、現在では
主に使用されている。血清又は尿等の生体体液中に含ま
れているα−アミラーゼの活性測定は、臨床診断や生化
学的研究における重要な基礎データを提供するもであ
り、広く実施されている。そのためにグルコシダーゼは
需要が多い重要な酵素である。ところで、グルコシダー
ゼは、液状化した状態では不安定な酵素であるために、
溶液状態で長期間保存が出来ないという欠点をもってい
る。この解決策として、酵素溶液の酵素濃度を高くする
等の手段が講じられてきたが、グルコシダーゼは安価な
酵素でないことから、α−アミラーゼの活性測定用試薬
のキットの製造コストが高くなるという問題が生じてい
た。
性測定用試薬のキットに、凍結乾燥製品、あるいは溶液
製品として組み込まれているが、後者ものが、現在では
主に使用されている。血清又は尿等の生体体液中に含ま
れているα−アミラーゼの活性測定は、臨床診断や生化
学的研究における重要な基礎データを提供するもであ
り、広く実施されている。そのためにグルコシダーゼは
需要が多い重要な酵素である。ところで、グルコシダー
ゼは、液状化した状態では不安定な酵素であるために、
溶液状態で長期間保存が出来ないという欠点をもってい
る。この解決策として、酵素溶液の酵素濃度を高くする
等の手段が講じられてきたが、グルコシダーゼは安価な
酵素でないことから、α−アミラーゼの活性測定用試薬
のキットの製造コストが高くなるという問題が生じてい
た。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
問題点を解決し、グルコシダーゼの含有溶液において、
該酵素を安定に長期間保存する方法を提供することを目
的としてなされたものである。
問題点を解決し、グルコシダーゼの含有溶液において、
該酵素を安定に長期間保存する方法を提供することを目
的としてなされたものである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記目的
を達成するために鋭意検討した結果、グルコシダーゼの
含有溶液に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
（以下トリスと略称する）若しくはその塩及び／又はイ
ミダゾール類化合物若しくはその塩を安定化剤として添
加することにより、その目的を達成しうることを見出
し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
を達成するために鋭意検討した結果、グルコシダーゼの
含有溶液に、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン
（以下トリスと略称する）若しくはその塩及び／又はイ
ミダゾール類化合物若しくはその塩を安定化剤として添
加することにより、その目的を達成しうることを見出
し、この知見に基づいて本発明を完成するに至った。
【０００５】すなわち、本発明は、グルコシダーゼの含
有溶液にトリス若しくはその塩及び／又はイミダゾール
類化合物若しくはその塩を添加することを特徴とするグ
ルコシダーゼの長期保存法である。
有溶液にトリス若しくはその塩及び／又はイミダゾール
類化合物若しくはその塩を添加することを特徴とするグ
ルコシダーゼの長期保存法である。
【０００６】以下、本発明を詳細に説明する。本発明に
おいて、グルコシダーゼとは、α−グルコシダーゼ（Ｅ
Ｃ３．２．１．２０）及びβ−グルコシダーゼ（ＥＣ
３．３．２．２１）を意味し、そして、これらは単独又
は両者混合して用いられる。グルコシダーゼの起源は、
動物、植物或いは微生物等、いずれであってもよく、特
に制限されない。α−グルコシダーゼとしては、例えば
酵母（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓ
ｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）等を起源とするもの、β−グルコ
シダーゼとしては、例えばアーモンド等を起源とするも
のが挙げられる。
おいて、グルコシダーゼとは、α−グルコシダーゼ（Ｅ
Ｃ３．２．１．２０）及びβ−グルコシダーゼ（ＥＣ
３．３．２．２１）を意味し、そして、これらは単独又
は両者混合して用いられる。グルコシダーゼの起源は、
動物、植物或いは微生物等、いずれであってもよく、特
に制限されない。α−グルコシダーゼとしては、例えば
酵母（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃａｒｌｓ
ｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）等を起源とするもの、β−グルコ
シダーゼとしては、例えばアーモンド等を起源とするも
のが挙げられる。
【０００７】本発明において、トリス、イミダゾール類
化合物は安定化剤として用いられるが、イミダゾール類
化合物としては、例えばイミダゾール、２−（−ナフチ
ルメチル）−１−イミダゾール、４−フェニルイミダゾ
ール、ベンジルイミダゾール、４，４−ジミチルイミダ
ゾリン等が好適なものとして挙げられる。トリス及びイ
ミダゾール類化合物は、その塩としても用いられるが、
この塩を形成する物質として、例えば、塩酸、硫酸、リ
ン酸等の無機酸類、リンゴ酸、クエン酸、酢酸、コハク
酸等の有機酸類、アスパラギン酸等のアミノ酸類等が挙
げられる。そして、これらの化合物は、高純度、例えば
試薬級のものを使用するのが好ましい。
化合物は安定化剤として用いられるが、イミダゾール類
化合物としては、例えばイミダゾール、２−（−ナフチ
ルメチル）−１−イミダゾール、４−フェニルイミダゾ
ール、ベンジルイミダゾール、４，４−ジミチルイミダ
ゾリン等が好適なものとして挙げられる。トリス及びイ
ミダゾール類化合物は、その塩としても用いられるが、
この塩を形成する物質として、例えば、塩酸、硫酸、リ
ン酸等の無機酸類、リンゴ酸、クエン酸、酢酸、コハク
酸等の有機酸類、アスパラギン酸等のアミノ酸類等が挙
げられる。そして、これらの化合物は、高純度、例えば
試薬級のものを使用するのが好ましい。
【０００８】グルコシダーゼの含有溶液にトリス若しく
はその塩、イミダゾール類化合物若しくはその塩は各々
単独又は組合せて添加する。その添加濃度は、特に制限
されないが、好ましくは０．００１〜２０ｍＭ、より好
ましくは０．０１〜１０ｍＭである。その濃度が０．０
０１ｍＭ未満の場合は、グルコシダーゼの安定性が低下
し、又、２０ｍＭを超える場合は、α−アミラーゼの活
性測定時におけるグルコシダーゼ活性の阻害がみられる
ようになるので好ましくない。
はその塩、イミダゾール類化合物若しくはその塩は各々
単独又は組合せて添加する。その添加濃度は、特に制限
されないが、好ましくは０．００１〜２０ｍＭ、より好
ましくは０．０１〜１０ｍＭである。その濃度が０．０
０１ｍＭ未満の場合は、グルコシダーゼの安定性が低下
し、又、２０ｍＭを超える場合は、α−アミラーゼの活
性測定時におけるグルコシダーゼ活性の阻害がみられる
ようになるので好ましくない。
【０００９】グルコシダーゼの含有溶液にトリス若しく
はその塩及び／又はイミダゾール類化合物若しくはその
塩を添加する場合は、グルコシダーゼの含有溶液に直接
添加するか、又はそれらの水溶液、若しくはｐＨ５〜
９、好ましくは６〜８に調節したそれらの水溶液として
添加すればよい。もしそれを添加することによりｐＨが
５〜９、好ましくは６〜８の範囲からはずれるときは、
例えば塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸類、リンゴ酸、ク
エン酸、酢酸、コハク酸等の有機酸類等の添加でｐＨが
この範囲内におさまるように調節するのが好適である。
はその塩及び／又はイミダゾール類化合物若しくはその
塩を添加する場合は、グルコシダーゼの含有溶液に直接
添加するか、又はそれらの水溶液、若しくはｐＨ５〜
９、好ましくは６〜８に調節したそれらの水溶液として
添加すればよい。もしそれを添加することによりｐＨが
５〜９、好ましくは６〜８の範囲からはずれるときは、
例えば塩酸、硫酸、リン酸等の無機酸類、リンゴ酸、ク
エン酸、酢酸、コハク酸等の有機酸類等の添加でｐＨが
この範囲内におさまるように調節するのが好適である。
【００１０】グルコシダーゼの含有溶液における該酵素
の濃度は特に制限されないが、例えば、α−グルコシダ
ーゼでは１０〜２００単位／ｍｌ、好ましくは５０〜１
００単位／ｍｌであり、β−グルコシダーゼでは３〜５
０単位／ｍｌ、好ましくは５〜２０単位／ｍｌである。
この酵素の含有溶液にはグルコアミラーゼ（ＥＣ．３．
２．１．３）を、３０単位〜２００単位／ｍｌ、好まし
くは５０単位〜１５０単位／ｍｌの濃度で含有させるこ
ともできる。
の濃度は特に制限されないが、例えば、α−グルコシダ
ーゼでは１０〜２００単位／ｍｌ、好ましくは５０〜１
００単位／ｍｌであり、β−グルコシダーゼでは３〜５
０単位／ｍｌ、好ましくは５〜２０単位／ｍｌである。
この酵素の含有溶液にはグルコアミラーゼ（ＥＣ．３．
２．１．３）を、３０単位〜２００単位／ｍｌ、好まし
くは５０単位〜１５０単位／ｍｌの濃度で含有させるこ
ともできる。
【００１１】また、上記グルコシダーゼの含有溶液に
は、本発明の目的達成に適する緩衝剤を含有させてもよ
く、その緩衝剤としては、ｐＨ６〜９、好ましくは６．
６〜７．６に強い緩衝作用をもつものから選択されるの
が好ましい。具体例としてはリン酸塩、グットバッファ
ー、β−グリセロリン酸塩、酢酸塩等である。その使用
濃度は５〜２００ｍＭ、好ましくは３０〜７０ｍＭであ
る。
は、本発明の目的達成に適する緩衝剤を含有させてもよ
く、その緩衝剤としては、ｐＨ６〜９、好ましくは６．
６〜７．６に強い緩衝作用をもつものから選択されるの
が好ましい。具体例としてはリン酸塩、グットバッファ
ー、β−グリセロリン酸塩、酢酸塩等である。その使用
濃度は５〜２００ｍＭ、好ましくは３０〜７０ｍＭであ
る。
【００１１】さらに、抗生物質、サルファ剤等の化学療
法剤、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸塩等）、ボ
バインセーラムアルブミン（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ
ａｌｂｕｍｉｎ：ＢＳＡ）、α−アミラーゼ活性促進
剤（カルシウム塩、ＮａＣｌ等）等を含有させてもよ
い。
法剤、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸塩等）、ボ
バインセーラムアルブミン（ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ
ａｌｂｕｍｉｎ：ＢＳＡ）、α−アミラーゼ活性促進
剤（カルシウム塩、ＮａＣｌ等）等を含有させてもよ
い。
【００１３】
【発明の効果】本発明の方法は、グルコシダーゼを液状
化した状態で、約０〜２０℃において少なくとも６ケ月
間は安定に保存することができ、しかも、保存したグル
コシダーゼの含有溶液は直接にα−アミラーゼの活性測
定に利用できる。このときのグルコシダーゼは、少なく
とも９５％の残存活性をもっている。
化した状態で、約０〜２０℃において少なくとも６ケ月
間は安定に保存することができ、しかも、保存したグル
コシダーゼの含有溶液は直接にα−アミラーゼの活性測
定に利用できる。このときのグルコシダーゼは、少なく
とも９５％の残存活性をもっている。
【００１４】
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
る。なお、本発明方法においては、グルコシダーゼの残
存活性測定は以下のように行った。 α−グルコシダーゼの残存活性：０．５Ｍのグリシン−
ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ８．０）、５ｍＭのｐ−ニトロフ
ェニル−α−Ｄ−グルコシド及びグルコシダーゼの保存
した含有溶液を含む全容２ｍｌを３７℃で１５分間反応
させた。反応開始から２分間の、反応溶液の４０５ｎｍ
における吸光度の変化を測定した。この操作を５回繰り
返し、平均の吸光度変化量を計算した。但し、保存した
該酵素溶液の残存活性は１日保存した該酵素溶液におけ
る吸光度変化量を１００％としたときの相対量（％）と
して表わした。なお、対照溶液（トリス若しくはその塩
及び／又はイミダゾール類化合物若しくはその塩を含有
させないもの）についても同様な操作を行って残存活性
を測定した。 β−グルコシダーゼの残存活性：ｐ−ニトロフェニル−
α−Ｄ−グルコシドの代りにｐ−ニトロフェニル−β−
Ｄ−グルコシドを用いる以外は上記方法と同様である。
る。なお、本発明方法においては、グルコシダーゼの残
存活性測定は以下のように行った。 α−グルコシダーゼの残存活性：０．５Ｍのグリシン−
ＮａＯＨ緩衝液（ｐＨ８．０）、５ｍＭのｐ−ニトロフ
ェニル−α−Ｄ−グルコシド及びグルコシダーゼの保存
した含有溶液を含む全容２ｍｌを３７℃で１５分間反応
させた。反応開始から２分間の、反応溶液の４０５ｎｍ
における吸光度の変化を測定した。この操作を５回繰り
返し、平均の吸光度変化量を計算した。但し、保存した
該酵素溶液の残存活性は１日保存した該酵素溶液におけ
る吸光度変化量を１００％としたときの相対量（％）と
して表わした。なお、対照溶液（トリス若しくはその塩
及び／又はイミダゾール類化合物若しくはその塩を含有
させないもの）についても同様な操作を行って残存活性
を測定した。 β−グルコシダーゼの残存活性：ｐ−ニトロフェニル−
α−Ｄ−グルコシドの代りにｐ−ニトロフェニル−β−
Ｄ−グルコシドを用いる以外は上記方法と同様である。
【００１５】実施例１ フィルター殺菌した蒸留水７００ｍｌを、オートクレー
ブ殺菌したガラス容器に取り、緩衝液を調製した。すな
わち、β−グリセロリン酸１０．８ｇ（５０ｍｏｌ）を
加えて溶解し、５Ｎの苛性ソーダでｐＨを７．０に調節
した。この緩衝液に次の成分〜を加え、溶解した。
ブ殺菌したガラス容器に取り、緩衝液を調製した。すな
わち、β−グリセロリン酸１０．８ｇ（５０ｍｏｌ）を
加えて溶解し、５Ｎの苛性ソーダでｐＨを７．０に調節
した。この緩衝液に次の成分〜を加え、溶解した。
【００１６】トリス１２１ｍｇ（１ｍｍｏｌ）及びイ
ミダゾール６８．１ｍｇ（１ｍｍｏｌ）（但し、上記緩
衝液に溶解後、リン酸でｐＨ７．６に調節した） α−グルコシダーゼ〔酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓからＳ．Ｃｈｉｂａ
（Ａｇｒｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６巻、７
８７〜７９３ページ、１９６２年）の方法により精製し
た酵素、比活性：１１０単位／ｍｇ蛋白質）〕１６００
００単位 β−グルコシダーゼ（アーモンド由来、ベーリンガー
社製、２０単位／ｍｇ蛋白質）１６０００単位 ＮａＣｌ２．９ｇ（５０ｍｍｏｌ） ＣａＣｌ2１１０ｇ（１ｍｍｏｌ） ＮａＮ3６５０ｍｇ（１０ｍｍｏｌ）
ミダゾール６８．１ｍｇ（１ｍｍｏｌ）（但し、上記緩
衝液に溶解後、リン酸でｐＨ７．６に調節した） α−グルコシダーゼ〔酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅ
ｓ ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓからＳ．Ｃｈｉｂａ
（Ａｇｒｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．、２６巻、７
８７〜７９３ページ、１９６２年）の方法により精製し
た酵素、比活性：１１０単位／ｍｇ蛋白質）〕１６００
００単位 β−グルコシダーゼ（アーモンド由来、ベーリンガー
社製、２０単位／ｍｇ蛋白質）１６０００単位 ＮａＣｌ２．９ｇ（５０ｍｍｏｌ） ＣａＣｌ2１１０ｇ（１ｍｍｏｌ） ＮａＮ3６５０ｍｇ（１０ｍｍｏｌ）
【００１７】次いで、殺菌した蒸留水で上記溶液を１ｌ
にし、更にこの溶液を０．４５μｍのフィルターで濾過
殺菌した。この溶液をオートクレーブ殺菌した５００ｍ
ｌ容量のガラス容器に３３０ｍｌ宛分注して、トリス１
ｍＭ、イミダゾール１ｍＭを含有するグルコシダーゼの
含有溶液を調製した。またトリス及びイミダゾールを添
加しないこと以外は上記と同様にして 、対照のグルコ
シダーゼの含有溶液を調製した。本発明方法によるグル
コシダーゼの含有溶液と対照の溶液を２０℃、１〜１８
０日間の保存試験を行ってグルコシダーゼの残存活性を
求めた。その結果を表１に示す。
にし、更にこの溶液を０．４５μｍのフィルターで濾過
殺菌した。この溶液をオートクレーブ殺菌した５００ｍ
ｌ容量のガラス容器に３３０ｍｌ宛分注して、トリス１
ｍＭ、イミダゾール１ｍＭを含有するグルコシダーゼの
含有溶液を調製した。またトリス及びイミダゾールを添
加しないこと以外は上記と同様にして 、対照のグルコ
シダーゼの含有溶液を調製した。本発明方法によるグル
コシダーゼの含有溶液と対照の溶液を２０℃、１〜１８
０日間の保存試験を行ってグルコシダーゼの残存活性を
求めた。その結果を表１に示す。
【００１８】 表１ ───────────────────────────────── 保存期間（日） 本発明溶液の残存活性（％） 対照溶液の残存活性（％） α β α β ───────────────────────────────── １ １００ １００ １００ １００ ５ １００ １００ １００ ９０ ２０ １００ １００ ９０ ８５ ３０ ９９ ９９ ８０ ８０ １８０ ９６ ９７ ７０ ６０ ───────────────────────────────── 但し、α：α−グルコシダーゼ、β：β−グルコシダーゼ
【００１９】上記のように、トリスが１ｍＭ、イミダゾ
ールが１ｍＭとなるように添加したグルコシダーゼの含
有溶液は、２０℃、１８０日間保存しても、その残存活
性は各々９５％以上で、長期間安定に保存できる。それ
に対してトリス及びイミダゾール無添加の対照溶液は、
２０日間の保存でさえ、その残存活性が９０％以下と低
下し、短期間の保存もできないことが分る。なお、２０
℃、１８０日間保存した本発明のグルコシダーゼの含有
溶液は、勿論直接にα−アミラーゼの活性測定に使用で
きた。
ールが１ｍＭとなるように添加したグルコシダーゼの含
有溶液は、２０℃、１８０日間保存しても、その残存活
性は各々９５％以上で、長期間安定に保存できる。それ
に対してトリス及びイミダゾール無添加の対照溶液は、
２０日間の保存でさえ、その残存活性が９０％以下と低
下し、短期間の保存もできないことが分る。なお、２０
℃、１８０日間保存した本発明のグルコシダーゼの含有
溶液は、勿論直接にα−アミラーゼの活性測定に使用で
きた。
【００２０】実施例２ フィルター殺菌した蒸留水７００ｍｌを、オートクレー
ブで殺菌したガラス容器に取り、５０ｍＭのリン酸緩衝
液を調製した。すなわちリン酸一カリ塩６．８ｇを蒸留
水に加えて溶解し、５Ｎの苛性ソーダでｐＨを６．８に
調節した。この緩衝液に次の成分〜を加え、溶解し
た。 イミダゾール６８．１ｍｇ（１ｍｍｏｌ）（但し、上
記緩衝液に溶解後、さらにリン酸でｐＨ６．８に調節し
た） β−グルコシダーゼ（実施例１と同じ）１５０００単
位 グルコアミラーゼ〔Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａ
ｒからＴ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．、８４巻、１１８３〜１１９４ページ、１９７８
年）の方法により精製した酵素、比活性：５０単位／ｍ
ｇ蛋白質〕１４００００単位 ＮａＣｌ２．９ｇ（５０ｍｍｏｌ） ＣａＣｌ2１１０ｍｇ（１ｍｍｏｌ） ＮａＮ3６５０ｍｇ（１０ｍｍｏｌ）
ブで殺菌したガラス容器に取り、５０ｍＭのリン酸緩衝
液を調製した。すなわちリン酸一カリ塩６．８ｇを蒸留
水に加えて溶解し、５Ｎの苛性ソーダでｐＨを６．８に
調節した。この緩衝液に次の成分〜を加え、溶解し
た。 イミダゾール６８．１ｍｇ（１ｍｍｏｌ）（但し、上
記緩衝液に溶解後、さらにリン酸でｐＨ６．８に調節し
た） β−グルコシダーゼ（実施例１と同じ）１５０００単
位 グルコアミラーゼ〔Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｄｅｌｅｍａ
ｒからＴ．Ｔａｋａｈａｓｈｉ（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．、８４巻、１１８３〜１１９４ページ、１９７８
年）の方法により精製した酵素、比活性：５０単位／ｍ
ｇ蛋白質〕１４００００単位 ＮａＣｌ２．９ｇ（５０ｍｍｏｌ） ＣａＣｌ2１１０ｍｇ（１ｍｍｏｌ） ＮａＮ3６５０ｍｇ（１０ｍｍｏｌ）
【００２１】次いで、殺菌した蒸留水で上記溶液を１ｌ
にし、更にこの溶液を０．４５μｍのフィルターで濾過
殺菌した。この溶液をオートクレーブ殺菌した５００ｍ
ｌ容量のガラス容器に３３３ｍｌ宛分注して、イミダゾ
ール１ｍＭを含有するβ−グルコシダーゼの含有溶液を
調製した。またイミダゾールを添加しないこと以外は上
記と同様にして 、対照のβ−グルコシダーゼの含有溶
液を調製した。本発明の方法と対照のβ−グルコシダー
ゼの含有溶液を２０℃で、１〜１８０日間の保存試験を
行って、β−グルコシダーゼの残存活性を求めた。その
結果を表２に示す。
にし、更にこの溶液を０．４５μｍのフィルターで濾過
殺菌した。この溶液をオートクレーブ殺菌した５００ｍ
ｌ容量のガラス容器に３３３ｍｌ宛分注して、イミダゾ
ール１ｍＭを含有するβ−グルコシダーゼの含有溶液を
調製した。またイミダゾールを添加しないこと以外は上
記と同様にして 、対照のβ−グルコシダーゼの含有溶
液を調製した。本発明の方法と対照のβ−グルコシダー
ゼの含有溶液を２０℃で、１〜１８０日間の保存試験を
行って、β−グルコシダーゼの残存活性を求めた。その
結果を表２に示す。
【００２２】 表２ ────────────────────────────────── 保存期間（日） 本発明溶液の残存活性（％） 対照溶液の残存活性（％） ───────────────────────────────── １ １００ １００ ５ １００ １００ ２０ １００ ９５ ３０ １００ ８０ １８０ ９６ ６５ ──────────────────────────────────
【００２３】上記のようにイミダゾールが１ｍＭとなる
ように添加した本発明方法のβ−グルコシダーゼの含有
溶液は、１８０日間保存してもその残存活性は９５％以
上と安定に保存できる。それに対してイミダゾール無添
加の対照溶液は、３０日間の保存でさえ、その残存活性
が８０％と著しく低下し、その保存期間が極めて短いこ
とが分る．なお、２０℃、１８０日間保存した本発明の
β−グルコシダーゼの含有溶液は、勿論直接にα−アミ
ラーゼの活性測定に使用できた。
ように添加した本発明方法のβ−グルコシダーゼの含有
溶液は、１８０日間保存してもその残存活性は９５％以
上と安定に保存できる。それに対してイミダゾール無添
加の対照溶液は、３０日間の保存でさえ、その残存活性
が８０％と著しく低下し、その保存期間が極めて短いこ
とが分る．なお、２０℃、１８０日間保存した本発明の
β−グルコシダーゼの含有溶液は、勿論直接にα−アミ
ラーゼの活性測定に使用できた。
Claims (1)
- 【請求項１】 グルコシダーゼの含有溶液にトリス（ヒ
ドロキシメチル）アミノメタン若しくはその塩及び／又
はイミダゾール類化合物若しくはその塩を添加すること
を特徴とするグルコシダーゼの長期保存法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5089497A JPH06277055A (ja) | 1993-03-25 | 1993-03-25 | グルコシダーゼの保存法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5089497A JPH06277055A (ja) | 1993-03-25 | 1993-03-25 | グルコシダーゼの保存法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06277055A true JPH06277055A (ja) | 1994-10-04 |
Family
ID=13972405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5089497A Pending JPH06277055A (ja) | 1993-03-25 | 1993-03-25 | グルコシダーゼの保存法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06277055A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7611701B2 (en) | 1997-06-04 | 2009-11-03 | Basf Aktiengesellschaft | Preparation of phytase-containing granulates for use in animal feed |
-
1993
- 1993-03-25 JP JP5089497A patent/JPH06277055A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7611701B2 (en) | 1997-06-04 | 2009-11-03 | Basf Aktiengesellschaft | Preparation of phytase-containing granulates for use in animal feed |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wu et al. | Overexpression, purification, and characterization of VanX, a D-, D-dipeptidase which is essential for vancomycin resistance in Enterococcus faecium BM4147 | |
| Auld et al. | Kinetics of carboxypeptidase A. II. Inhibitors of the hydrolysis of oligopeptides | |
| Pedersen | Mitochondrial adenosine triphosphatase | |
| US11236328B2 (en) | Euglobulin-based method for determining the biological activity of defibrotide | |
| US7815788B2 (en) | Creatinine sensor calibration | |
| RU2124052C1 (ru) | Кристалл белка, сшитого многофункциональным сшивающим агентом (варианты), устройство, содержащее этот кристалл, и способ получения аспартама | |
| US4343897A (en) | Reagent for the determination of lipase and process for preparing same | |
| Roise | Interaction of a synthetic mitochondrial presequence with isolated yeast mitochondria: mechanism of binding and kinetics of import. | |
| JPH06277055A (ja) | グルコシダーゼの保存法 | |
| Spomer et al. | The hydrolysis of α-N-benzoyl-l-argininamide catalyzed by trypsin and acetyltrypsin. Dependence on pH | |
| Levitzki et al. | Abortive complexes of α-amylases with lanthanides | |
| JP2542251B2 (ja) | 安定な一液性α―アミラ―ゼ検定用試薬 | |
| JPH09220088A (ja) | 新規ヘキソキナーゼ | |
| Shoham et al. | Effects of pH on the structure and function of carboxypeptidase A: crystallographic studies. | |
| JPH07236483A (ja) | 生理活性蛋白質の安定化方法 | |
| AU2003292109B2 (en) | Prekallikrein depleted plasma derived albumin fraction | |
| JP2008206491A (ja) | ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の安定化方法 | |
| Sanborn et al. | The binding of phenylguanidinium ion and phenol to trypsin | |
| JPH1175896A (ja) | タンパク質分解酵素阻害物質の測定方法およびそれに用いる測定キット | |
| JPH0336520B2 (ja) | ||
| Koeppe II et al. | The effect of pre-incubation on trypsin kinetics at low pH | |
| JPH02138861A (ja) | 制菌剤およびそれを用いた測定方法 | |
| JPS6151875B2 (ja) | ||
| JPS63214193A (ja) | ６−グルコシルマルトオリゴ糖誘導体の製法およびそれを用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 | |
| JPS6193948A (ja) | スクロ−スセンサ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |