JPH06247873A - 肝実質細胞増殖因子の誘導剤 - Google Patents
肝実質細胞増殖因子の誘導剤Info
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- JPH06247873A JPH06247873A JP5035644A JP3564493A JPH06247873A JP H06247873 A JPH06247873 A JP H06247873A JP 5035644 A JP5035644 A JP 5035644A JP 3564493 A JP3564493 A JP 3564493A JP H06247873 A JPH06247873 A JP H06247873A
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- Japan
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- cells
- growth factor
- hepatocyte growth
- inducer
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 インターロイキン−１および／または腫瘍壊
死因子からなる肝実質細胞増殖因子の産生、放出を誘導
する薬剤。 【効果】 肝疾患の予防または治療薬、腎疾患の予防ま
たは治療薬、創傷治癒促進剤として、さらには肝、腎、
表皮等の各細胞や組織の培養に有用である。
死因子からなる肝実質細胞増殖因子の産生、放出を誘導
する薬剤。 【効果】 肝疾患の予防または治療薬、腎疾患の予防ま
たは治療薬、創傷治癒促進剤として、さらには肝、腎、
表皮等の各細胞や組織の培養に有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、肝実質細胞増殖因子の
誘導剤に関し、詳細にはインターロイキン−１および／
または腫瘍壊死因子からなる肝実質細胞増殖因子の産
生、放出を誘導する薬剤に関する。本発明の誘導剤は、
肝疾患の治療・予防剤、腎疾患の治療・予防剤、広くは
創傷治癒の促進剤としての利用が期待される。また本発
明の誘導剤は、肝、腎、表皮等の細胞もしくは組織の培
養にも有用であると考えられ、更に培養された細胞、組
織の肝疾患、腎疾患の治療や予防、創傷治療への応用も
期待される。
誘導剤に関し、詳細にはインターロイキン−１および／
または腫瘍壊死因子からなる肝実質細胞増殖因子の産
生、放出を誘導する薬剤に関する。本発明の誘導剤は、
肝疾患の治療・予防剤、腎疾患の治療・予防剤、広くは
創傷治癒の促進剤としての利用が期待される。また本発
明の誘導剤は、肝、腎、表皮等の細胞もしくは組織の培
養にも有用であると考えられ、更に培養された細胞、組
織の肝疾患、腎疾患の治療や予防、創傷治療への応用も
期待される。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】肝実
質細胞増殖因子は、肝実質細胞を生体外においてその増
殖を促進させる活性を有する蛋白性因子である。合田ら
は、ほ乳類由来の肝実質細胞増殖因子（以下、「ＨＧ
Ｆ」と略す）のうち、特にヒト由来の肝実質細胞増殖因
子、すなわちヒト肝実質細胞増殖因子（以下、「ｈＨＧ
Ｆ」と略す）を劇症肝炎患者血漿より見出し、世界で初
めて単一の蛋白質として精製することに成功した（特開
昭６３−２２５２６号公報）。また喜多村らは、ｈＨＧ
Ｆ蛋白質をコードする塩基配列を有する遺伝子およびそ
の製造方法を発明するに至っている（欧州特許公開 ４
１２５５７号公報）。
質細胞増殖因子は、肝実質細胞を生体外においてその増
殖を促進させる活性を有する蛋白性因子である。合田ら
は、ほ乳類由来の肝実質細胞増殖因子（以下、「ＨＧ
Ｆ」と略す）のうち、特にヒト由来の肝実質細胞増殖因
子、すなわちヒト肝実質細胞増殖因子（以下、「ｈＨＧ
Ｆ」と略す）を劇症肝炎患者血漿より見出し、世界で初
めて単一の蛋白質として精製することに成功した（特開
昭６３−２２５２６号公報）。また喜多村らは、ｈＨＧ
Ｆ蛋白質をコードする塩基配列を有する遺伝子およびそ
の製造方法を発明するに至っている（欧州特許公開 ４
１２５５７号公報）。
【０００３】ＨＧＦを産生する細胞に関しては、これま
でに白血球系の血球細胞、肝臓におけるクッパー細胞、
類洞壁内皮細胞、あるいは各種線維芽細胞等いずれも中
胚葉由来の間葉系細胞において産生されることが確認さ
れている。一方、ＨＧＦの標的細胞は、肝実質細胞、腎
尿細管上皮細胞、表皮ケラチノサイトあるいは表皮メラ
ノサイト等、内胚葉あるいは外胚葉由来の上皮系細胞で
あることが知られている。すなわち、ＨＧＦは間葉系細
胞が産生し、上皮系細胞に作用する機構を有する増殖因
子であることが明らかにされてきた。
でに白血球系の血球細胞、肝臓におけるクッパー細胞、
類洞壁内皮細胞、あるいは各種線維芽細胞等いずれも中
胚葉由来の間葉系細胞において産生されることが確認さ
れている。一方、ＨＧＦの標的細胞は、肝実質細胞、腎
尿細管上皮細胞、表皮ケラチノサイトあるいは表皮メラ
ノサイト等、内胚葉あるいは外胚葉由来の上皮系細胞で
あることが知られている。すなわち、ＨＧＦは間葉系細
胞が産生し、上皮系細胞に作用する機構を有する増殖因
子であることが明らかにされてきた。
【０００４】ＨＧＦの血中濃度は、肝炎、肝硬変、肝癌
等の肝疾患あるいは肝切除等をも含めた肝障害時に上昇
することが知られている。これは、肝臓に障害が生じた
情報が直接的あるいは間接的にＨＧＦ産生細胞に伝達さ
れ、ＨＧＦの産生、放出が上昇したものと考えられる。
すなわち、これらの疾患においては体内でＨＧＦの産
生、放出の誘導の機構が機能していることが推測され、
ＨＧＦの産生、放出に関与する内在性誘導物質の存在が
示唆される。しかしながら、現在までにかかる内在性誘
導物質の詳細に関しては何ら明らかとはなっていない。
等の肝疾患あるいは肝切除等をも含めた肝障害時に上昇
することが知られている。これは、肝臓に障害が生じた
情報が直接的あるいは間接的にＨＧＦ産生細胞に伝達さ
れ、ＨＧＦの産生、放出が上昇したものと考えられる。
すなわち、これらの疾患においては体内でＨＧＦの産
生、放出の誘導の機構が機能していることが推測され、
ＨＧＦの産生、放出に関与する内在性誘導物質の存在が
示唆される。しかしながら、現在までにかかる内在性誘
導物質の詳細に関しては何ら明らかとはなっていない。
【０００５】ＨＧＦは、その強力かつ特異的な作用によ
って肝炎、肝硬変、肝癌、肝切除術等に生じる肝障害、
あるいは腎炎等の腎障害に対する治療薬としての有用性
が期待されている。従って、かかるＨＧＦが上述したＨ
ＧＦ誘導物質の投与によって必要十分量産生、放出され
たならば、ＨＧＦを投与した場合と同様の臨床効果が期
待できるものと考えられた。
って肝炎、肝硬変、肝癌、肝切除術等に生じる肝障害、
あるいは腎炎等の腎障害に対する治療薬としての有用性
が期待されている。従って、かかるＨＧＦが上述したＨ
ＧＦ誘導物質の投与によって必要十分量産生、放出され
たならば、ＨＧＦを投与した場合と同様の臨床効果が期
待できるものと考えられた。
【０００６】一方インターロイキン−１（以下、「ＩＬ
−１」と略す）は、マクロファージ細胞をはじめとする
諸々の細胞から産生される生理活性物質である。その代
表的な生理活性として、Ｔ細胞およびＢ細胞に対する分
化増殖促進作用、リンパ球活性化作用、マクロファージ
の活性化作用、発熱惹起作用、プロスタグランジンＥ２
の産生誘導および線維芽細胞の増殖促進作用等が知られ
ており（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，７，４５
（１９８６）；Ｒｅｖｉｅｗｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，６，５１（１９８４））、
生体における免疫機構等の調節因子として、重要な役割
を担っている。ＩＬ−１の有するこれらの多様な生理活
性が注目され、ＩＬ−１の抗癌作用、放射線照射による
骨髄機能障害に対する予防・治療効果、感染症に対する
予防・治療効果、鎮痛・消炎効果などが報告され、医薬
品としての有用性が明らかにされつつある（Ｊｐｎ．
Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７７，７６７（１９８
６）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３６，２４８３（１９
８６）；Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔ
ｙ，５５，１４３６（１９８７）；特開昭６２−２９２
７２６号公報；国際特許公開８８／０３０３１号公報
等）。
−１」と略す）は、マクロファージ細胞をはじめとする
諸々の細胞から産生される生理活性物質である。その代
表的な生理活性として、Ｔ細胞およびＢ細胞に対する分
化増殖促進作用、リンパ球活性化作用、マクロファージ
の活性化作用、発熱惹起作用、プロスタグランジンＥ２
の産生誘導および線維芽細胞の増殖促進作用等が知られ
ており（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ，７，４５
（１９８６）；Ｒｅｖｉｅｗｓ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，６，５１（１９８４））、
生体における免疫機構等の調節因子として、重要な役割
を担っている。ＩＬ−１の有するこれらの多様な生理活
性が注目され、ＩＬ−１の抗癌作用、放射線照射による
骨髄機能障害に対する予防・治療効果、感染症に対する
予防・治療効果、鎮痛・消炎効果などが報告され、医薬
品としての有用性が明らかにされつつある（Ｊｐｎ．
Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７７，７６７（１９８
６）；Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３６，２４８３（１９
８６）；Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔ
ｙ，５５，１４３６（１９８７）；特開昭６２−２９２
７２６号公報；国際特許公開８８／０３０３１号公報
等）。
【０００７】また腫瘍壊死因子（以下、「ＴＮＦ」と略
す）は、カーズウェルらにより見出された生理活性物質
で（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，
７２，３６６６（１９７５））、ｉｎ ｖｉｔｒｏの細
胞培養系で癌細胞に対して強い細胞障害活性を示し、か
つｉｎ ｖｉｖｏで移植腫瘍に壊死を生ぜしめる物質と
して特徴づけられている（Ｃａｃｅｒ Ｒｅｓ．，４
１，３６１（１９８１））。
す）は、カーズウェルらにより見出された生理活性物質
で（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，
７２，３６６６（１９７５））、ｉｎ ｖｉｔｒｏの細
胞培養系で癌細胞に対して強い細胞障害活性を示し、か
つｉｎ ｖｉｖｏで移植腫瘍に壊死を生ぜしめる物質と
して特徴づけられている（Ｃａｃｅｒ Ｒｅｓ．，４
１，３６１（１９８１））。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者は、ｈＨＧＦの
産生、放出に関与する内在性の誘導物質を探索するべ
く、種々の内在性物質に関してｈＨＧＦの産生、放出の
誘導評価試験を行った。ｈＨＧＦの産生、放出を誘導す
る物質を検定する方法として、ｈＨＧＦを産生する細胞
である正常ヒト胎児肺線維芽細胞由来ＭＲＣ−５細胞、
あるいは正常ヒト歯肉線維芽細胞由来ＧＦ−５細胞を培
養し、その培養液中に検定する物質を添加し、培養液中
に産生、放出されるｈＨＧＦを免疫化学的に測定する方
法を用いることができる。さらに、ｈＨＧＦのｃＤＮＡ
を用いたノザンブロッティング法により、細胞内でのｈ
ＨＧＦ産生を評価することができる。本発明者は、これ
らの方法を用いて種々の物質に関して検討を重ねた結
果、驚くべきことにＩＬ−１および／またはＴＮＦが細
胞に作用して、その培養液中のｈＨＧＦを増加させ、こ
れらの物質がｈＨＧＦの産生、放出を誘導していること
を初めて見出し、本発明を完成するに至った。
産生、放出に関与する内在性の誘導物質を探索するべ
く、種々の内在性物質に関してｈＨＧＦの産生、放出の
誘導評価試験を行った。ｈＨＧＦの産生、放出を誘導す
る物質を検定する方法として、ｈＨＧＦを産生する細胞
である正常ヒト胎児肺線維芽細胞由来ＭＲＣ−５細胞、
あるいは正常ヒト歯肉線維芽細胞由来ＧＦ−５細胞を培
養し、その培養液中に検定する物質を添加し、培養液中
に産生、放出されるｈＨＧＦを免疫化学的に測定する方
法を用いることができる。さらに、ｈＨＧＦのｃＤＮＡ
を用いたノザンブロッティング法により、細胞内でのｈ
ＨＧＦ産生を評価することができる。本発明者は、これ
らの方法を用いて種々の物質に関して検討を重ねた結
果、驚くべきことにＩＬ−１および／またはＴＮＦが細
胞に作用して、その培養液中のｈＨＧＦを増加させ、こ
れらの物質がｈＨＧＦの産生、放出を誘導していること
を初めて見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】即ち本発明の要旨は、ＩＬ−１および／ま
たはＴＮＦからなる肝実質細胞増殖因子の誘導剤に存す
る。以下、本発明につき詳細に説明する。ＩＬ−１は、
天然から抽出されたもの、遺伝子組み換え技術により製
造されたもの、化学的に合成されたもののいずれも使用
可能であり、さらにはその亜分子種も使用可能である。
具体的には、α型ヒトＩＬ−１（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３，５８６９（１９８５）；Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１５，６４１（１９８５）、その改変体
（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６４，２３７（１９８
６）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１６５，５３７
（１９８７））、またβ型のヒトＩＬ−１（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，７９０９
（１９８４））、その改変体（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，４５７２（１９８
７））等が挙げられ、これらの文献に記載の方法に準じ
て製造することができる。
たはＴＮＦからなる肝実質細胞増殖因子の誘導剤に存す
る。以下、本発明につき詳細に説明する。ＩＬ−１は、
天然から抽出されたもの、遺伝子組み換え技術により製
造されたもの、化学的に合成されたもののいずれも使用
可能であり、さらにはその亜分子種も使用可能である。
具体的には、α型ヒトＩＬ−１（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ
ｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３，５８６９（１９８５）；Ｎａ
ｔｕｒｅ，３１５，６４１（１９８５）、その改変体
（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１６４，２３７（１９８
６）；Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１６５，５３７
（１９８７））、またβ型のヒトＩＬ−１（Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１，７９０９
（１９８４））、その改変体（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４，４５７２（１９８
７））等が挙げられ、これらの文献に記載の方法に準じ
て製造することができる。
【００１０】ＴＮＦについても同様に、天然から抽出さ
れたもの、遺伝子組み換え技術により製造されたもの、
化学的に合成されたもののいずれも使用可能であり、そ
の亜分子種も使用可能である。具体的には、ウサギ、ヒ
トおよびマウスのＴＮＦ（特開昭６０−１２０９９０号
公報；特開昭６０−１８５７７９号公報；特開昭６１−
５０９２３号公報；欧州特許公開１５５５４９号公報；
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３，４４１
１７（１９８５））その改変体（国際特許公開８６／０
２３８１号公報；同８６／０４６０６号公報；特開昭６
２−４８６３２号公報；特開昭６２−９１１９８号公
報；特開昭６１−５０９２３号公報；特開昭６１−４０
２２１号公報）等が挙げられ、これらの文献に記載の方
法に準じて製造することができる。
れたもの、遺伝子組み換え技術により製造されたもの、
化学的に合成されたもののいずれも使用可能であり、そ
の亜分子種も使用可能である。具体的には、ウサギ、ヒ
トおよびマウスのＴＮＦ（特開昭６０−１２０９９０号
公報；特開昭６０−１８５７７９号公報；特開昭６１−
５０９２３号公報；欧州特許公開１５５５４９号公報；
Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１３，４４１
１７（１９８５））その改変体（国際特許公開８６／０
２３８１号公報；同８６／０４６０６号公報；特開昭６
２−４８６３２号公報；特開昭６２−９１１９８号公
報；特開昭６１−５０９２３号公報；特開昭６１−４０
２２１号公報）等が挙げられ、これらの文献に記載の方
法に準じて製造することができる。
【００１１】ＨＧＦに対する本発明の誘導剤の添加量と
しては、ＩＬ−１の場合０．０１〜５０ｎｇ／ｍｌ程度
でＨＧＦを約数倍にまで誘導することができ、ＴＮＦの
場合０．１〜５００ｕｎｉｔ／ｍｌ程度でＨＧＦを約数
倍〜１０倍に誘導することができる。これらは単独で使
用することもできるし、両者を組み合わせて使用するこ
ともできる。
しては、ＩＬ−１の場合０．０１〜５０ｎｇ／ｍｌ程度
でＨＧＦを約数倍にまで誘導することができ、ＴＮＦの
場合０．１〜５００ｕｎｉｔ／ｍｌ程度でＨＧＦを約数
倍〜１０倍に誘導することができる。これらは単独で使
用することもできるし、両者を組み合わせて使用するこ
ともできる。
【００１２】これらの誘導剤を医薬品として使用する際
には、常法により通常使用されうる賦形剤や安定化剤を
添加して製剤化することができる。安定化剤としては、
例えばアルブミン、グロブリン、ゼラチン、プロタミ
ン、プロタミン酸、グルコース、ガラクトース、キシロ
ース、マンニトール、グルクロン酸、トレハロース、デ
キストラン、ヒドロキシエチルデンプン、非イオン系界
面活性剤（ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオ
キシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンア
ルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪
酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオ
キシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシ
プロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリ
オキシプロピレンブロックポリマー、ソルビタン脂肪酸
エステル、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エ
ステル）等が挙げられる。投与方法としては、非経口投
与または局所投与が特に好ましい。投与量は、ＨＧＦの
活性を十分に誘導できる量であれば特に制限はされない
が、ＨＧＦとして０．０１〜１００ｍｇ／日となるよう
な量が適当であると考えられる。
には、常法により通常使用されうる賦形剤や安定化剤を
添加して製剤化することができる。安定化剤としては、
例えばアルブミン、グロブリン、ゼラチン、プロタミ
ン、プロタミン酸、グルコース、ガラクトース、キシロ
ース、マンニトール、グルクロン酸、トレハロース、デ
キストラン、ヒドロキシエチルデンプン、非イオン系界
面活性剤（ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオ
キシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンア
ルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪
酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオ
キシエチレンヒマシ油、ポリオキシエチレンポリオキシ
プロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンポリ
オキシプロピレンブロックポリマー、ソルビタン脂肪酸
エステル、ショ糖脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エ
ステル）等が挙げられる。投与方法としては、非経口投
与または局所投与が特に好ましい。投与量は、ＨＧＦの
活性を十分に誘導できる量であれば特に制限はされない
が、ＨＧＦとして０．０１〜１００ｍｇ／日となるよう
な量が適当であると考えられる。
【００１３】後述の実施例に示すように、本発明の誘導
剤はＨＧＦの産生、放出を誘導することができる。この
結果は、上皮系組織に損傷が生じた時の治癒過程におい
て、炎症性サイトカインであるＩＬ−１および／または
ＴＮＦが仲介物質となり、これらによって産生、放出が
誘導されたＨＧＦが上皮系組織の創傷治癒に直接係わっ
ていることを示唆するものである。また、ＨＧＦは肝実
質細胞の増殖を強力に促進する活性を示し、肝組織障害
時の組織修復の中核をなす物質であると考えられること
から、本発明の誘導剤は、肝炎等による肝障害に対し、
ＨＧＦ産生、放出誘導を介した肝実質細胞の修復、肝機
能の回復に有効に利用できることが期待され、同時に、
肝癌、肝外傷等に伴う肝切除あるいは肝臓移植の際の肝
再生、肝機能回復にも有効利用できることが期待され
る。さらにＨＧＦは、肝実質細胞のみならず腎近位尿細
管やメサンギウム細胞などの腎細胞、さらには皮膚表皮
細胞等に対しても増殖促進硬化を示すことから、腎炎、
腎障害時の腎再生、腎機能回復、あるいは皮膚創傷治癒
促進等にも利用できると考えられ、その他ＨＧＦの標的
となる細胞組織の障害に対しても同様に利用できるもの
と考えられる。
剤はＨＧＦの産生、放出を誘導することができる。この
結果は、上皮系組織に損傷が生じた時の治癒過程におい
て、炎症性サイトカインであるＩＬ−１および／または
ＴＮＦが仲介物質となり、これらによって産生、放出が
誘導されたＨＧＦが上皮系組織の創傷治癒に直接係わっ
ていることを示唆するものである。また、ＨＧＦは肝実
質細胞の増殖を強力に促進する活性を示し、肝組織障害
時の組織修復の中核をなす物質であると考えられること
から、本発明の誘導剤は、肝炎等による肝障害に対し、
ＨＧＦ産生、放出誘導を介した肝実質細胞の修復、肝機
能の回復に有効に利用できることが期待され、同時に、
肝癌、肝外傷等に伴う肝切除あるいは肝臓移植の際の肝
再生、肝機能回復にも有効利用できることが期待され
る。さらにＨＧＦは、肝実質細胞のみならず腎近位尿細
管やメサンギウム細胞などの腎細胞、さらには皮膚表皮
細胞等に対しても増殖促進硬化を示すことから、腎炎、
腎障害時の腎再生、腎機能回復、あるいは皮膚創傷治癒
促進等にも利用できると考えられ、その他ＨＧＦの標的
となる細胞組織の障害に対しても同様に利用できるもの
と考えられる。
【００１４】
【発明の効果】本発明の誘導剤を用いることにより、肝
細胞、腎細胞、表皮細胞等のＨＧＦにより機能の修飾が
認められる細胞の基礎研究、あるいは各種疾患動物モデ
ルに対するＨＧＦの作用の基礎研究に有用であると考え
られ、さらに生体内においてＨＧＦが疾患治療に有効で
あると考えられる肝疾患、腎疾患等の予防または治療
薬、および広く創傷治癒促進剤等としての利用が期待さ
れる。
細胞、腎細胞、表皮細胞等のＨＧＦにより機能の修飾が
認められる細胞の基礎研究、あるいは各種疾患動物モデ
ルに対するＨＧＦの作用の基礎研究に有用であると考え
られ、さらに生体内においてＨＧＦが疾患治療に有効で
あると考えられる肝疾患、腎疾患等の予防または治療
薬、および広く創傷治癒促進剤等としての利用が期待さ
れる。
【００１５】
【実施例】以下、本発明につき実施例を挙げて詳細に説
明するが、その要旨を越えない限り以下に限定されるも
のではない。 実施例１ ｈＨＧＦの産生、放出を誘導する物質の検定 ｈＨＧＦを産生する細胞として、正常ヒト胎児肺線維芽
細胞由来のＭＲＣ−５細胞、あるいは正常ヒト歯肉芽細
胞由来ＧＦ−５細胞を用いた（１０歳の男児より、Ｔａ
ｋａｄａらの方法（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，５
９，２９５（１９９１））により採取し、培養）。いず
れの細胞も３５ｍｍプラスティックディッシュを用い、
１０％牛胎児血清および２００ｍｇ／ｌカナマイシンを
添加した改変イーグル培地中で、、３７℃、５％ＣＯ2
条件下にて培養した。ｈＨＧＦの産生、放出を誘導する
物質を検定する１８時間前より１％牛胎児血清を含む改
変イーグル培地中で培養し、その後被検定物質を添加し
た同じ培地に交換して培養を行い一定時間後の培養上清
中に産生、放出されたｈＨＧＦを定量した。ｈＨＧＦの
定量には、坪内らのＥＬＩＳＡ法（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ
ｙ，１３，１（１９９１））を用いた。また、細胞内で
のｈＨＧＦ産生の評価にはノザンブロッティング法を用
いた。すなわち、細胞よりＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉとＳ
ａｃｈｉのグアニジウムチオシアネート−フェノール−
クロロホルム法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１６
２，１５６（１９８７））により全ＲＮＡを抽出し、
０．６６Ｍホルムアルデヒドを含む１．２％アガロース
ゲル中で電気泳動した後、ナイロン膜へ転写した。ナイ
ロン膜上に転写されたＲＮＡに32ＰでラベルされたｈＨ
ＧＦｃＤＮＡをハイブリダイズし、ハイブリダイズした
32ＰをＸ線フィルムを用いたオートラジオグラムにより
検出した。 実施例２ ＩＬ−１、ＴＮＦによるｈＨＧＦ産生、放出
の誘導 ＩＬ−１αまたはＴＮＦ−αを添加したときに生じるｈ
ＨＧＦの産生、放出の誘導に関する結果を図１および図
２に示す。図１より、ＭＲＣ−５細胞、ＧＦ−５細胞い
ずれの細胞でもＩＬ−１αおよびＴＮＦ−αが濃度依存
的にｈＨＧＦの産生、放出を誘導したことがわかる。そ
の産生、放出の誘導は、ＩＬ−１αまたはＴＮＦ−α添
加後６時間以降経時的に進行し、少なくとも４８時間ま
で持続した（図２）。またＩＬ−１βを用いて同様の実
験を行ったところ、同様の結果が得られた。しかしなが
ら、インターフェロン−βおよびインターフェロン−γ
には全くその効果を認めることができなかった。さらに
ノザンブロッティング法により細胞内のｈＨＧＦｍＲＮ
Ａ発現量について検討したところ、細胞内のｈＨＧＦｍ
ＲＮＡ発現量は、ＩＬ−１αおよびＴＮＦ−αの添加濃
度に依存して増加した（図３）。また細胞内ｈＨＧＦｍ
ＲＮＡ発現量の時間的推移に関しては、ＩＬ−１αを添
加した場合、添加後３時間後より増え始め、６時間後に
最大となり、２４時間後には刺激前のレベルに復してい
た（図４）。これらの結果より、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−
αがｈＨＧＦ産生細胞からのｈＨＧＦ産生、放出を誘導
する効果を有することが明らかとなった。なお、ＴＮＦ
−αは特開昭６１−５０９２３号公報、ＩＬ−１αは特
開平１−１３７９７７号公報に記載の方法に従って製造
されたものを用いた。
明するが、その要旨を越えない限り以下に限定されるも
のではない。 実施例１ ｈＨＧＦの産生、放出を誘導する物質の検定 ｈＨＧＦを産生する細胞として、正常ヒト胎児肺線維芽
細胞由来のＭＲＣ−５細胞、あるいは正常ヒト歯肉芽細
胞由来ＧＦ−５細胞を用いた（１０歳の男児より、Ｔａ
ｋａｄａらの方法（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．，５
９，２９５（１９９１））により採取し、培養）。いず
れの細胞も３５ｍｍプラスティックディッシュを用い、
１０％牛胎児血清および２００ｍｇ／ｌカナマイシンを
添加した改変イーグル培地中で、、３７℃、５％ＣＯ2
条件下にて培養した。ｈＨＧＦの産生、放出を誘導する
物質を検定する１８時間前より１％牛胎児血清を含む改
変イーグル培地中で培養し、その後被検定物質を添加し
た同じ培地に交換して培養を行い一定時間後の培養上清
中に産生、放出されたｈＨＧＦを定量した。ｈＨＧＦの
定量には、坪内らのＥＬＩＳＡ法（Ｈｅｐａｔｏｌｏｇ
ｙ，１３，１（１９９１））を用いた。また、細胞内で
のｈＨＧＦ産生の評価にはノザンブロッティング法を用
いた。すなわち、細胞よりＣｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉとＳ
ａｃｈｉのグアニジウムチオシアネート−フェノール−
クロロホルム法（Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１６
２，１５６（１９８７））により全ＲＮＡを抽出し、
０．６６Ｍホルムアルデヒドを含む１．２％アガロース
ゲル中で電気泳動した後、ナイロン膜へ転写した。ナイ
ロン膜上に転写されたＲＮＡに32ＰでラベルされたｈＨ
ＧＦｃＤＮＡをハイブリダイズし、ハイブリダイズした
32ＰをＸ線フィルムを用いたオートラジオグラムにより
検出した。 実施例２ ＩＬ−１、ＴＮＦによるｈＨＧＦ産生、放出
の誘導 ＩＬ−１αまたはＴＮＦ−αを添加したときに生じるｈ
ＨＧＦの産生、放出の誘導に関する結果を図１および図
２に示す。図１より、ＭＲＣ−５細胞、ＧＦ−５細胞い
ずれの細胞でもＩＬ−１αおよびＴＮＦ−αが濃度依存
的にｈＨＧＦの産生、放出を誘導したことがわかる。そ
の産生、放出の誘導は、ＩＬ−１αまたはＴＮＦ−α添
加後６時間以降経時的に進行し、少なくとも４８時間ま
で持続した（図２）。またＩＬ−１βを用いて同様の実
験を行ったところ、同様の結果が得られた。しかしなが
ら、インターフェロン−βおよびインターフェロン−γ
には全くその効果を認めることができなかった。さらに
ノザンブロッティング法により細胞内のｈＨＧＦｍＲＮ
Ａ発現量について検討したところ、細胞内のｈＨＧＦｍ
ＲＮＡ発現量は、ＩＬ−１αおよびＴＮＦ−αの添加濃
度に依存して増加した（図３）。また細胞内ｈＨＧＦｍ
ＲＮＡ発現量の時間的推移に関しては、ＩＬ−１αを添
加した場合、添加後３時間後より増え始め、６時間後に
最大となり、２４時間後には刺激前のレベルに復してい
た（図４）。これらの結果より、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−
αがｈＨＧＦ産生細胞からのｈＨＧＦ産生、放出を誘導
する効果を有することが明らかとなった。なお、ＴＮＦ
−αは特開昭６１−５０９２３号公報、ＩＬ−１αは特
開平１−１３７９７７号公報に記載の方法に従って製造
されたものを用いた。
【図１】ＭＲＣ−５細胞（グラフＡ）およびＧＦ−５細
胞（グラフＢ）によるｈＨＧＦの産生、放出に対するＩ
Ｌ−１αおよびＴＮＦ−αの誘導効果を表す図面であ
る。図中、○はＩＬ−１αを●はＴＮＦ−αをそれぞれ
表し、添加濃度を変化させた時の培養液中のｈＨＧＦ濃
度を表す。
胞（グラフＢ）によるｈＨＧＦの産生、放出に対するＩ
Ｌ−１αおよびＴＮＦ−αの誘導効果を表す図面であ
る。図中、○はＩＬ−１αを●はＴＮＦ−αをそれぞれ
表し、添加濃度を変化させた時の培養液中のｈＨＧＦ濃
度を表す。
【図２】ＭＲＣ−５細胞（グラフＡ）およびＧＦ−５細
胞（グラフＢ）における、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−αの添
加により誘導されたｈＨＧＦの産生、放出量の時間的推
移を表す図面である。図中、○はＩＬ−１α（１０ｎｇ
／ｍｌ）、●はＴＮＦ−α（２００ｕｎｉｔｓ／ｍ
ｌ）、×は無添加をそれぞれ表し、培養時間に伴う経時
的な培養液中ｈＨＧＦ濃度変化を表す。
胞（グラフＢ）における、ＩＬ−１α、ＴＮＦ−αの添
加により誘導されたｈＨＧＦの産生、放出量の時間的推
移を表す図面である。図中、○はＩＬ−１α（１０ｎｇ
／ｍｌ）、●はＴＮＦ−α（２００ｕｎｉｔｓ／ｍ
ｌ）、×は無添加をそれぞれ表し、培養時間に伴う経時
的な培養液中ｈＨＧＦ濃度変化を表す。
【図３】ＭＲＣ−５細胞内におけるｈＨＧＦｍＲＮＡ発
現に対するＩＬ−１α（図中のＡ）およびＴＮＦ−α
（図中のＢ）の効果を表す図面である。ＩＬ−１α（ｎ
ｇ／ｍｌ）およびＴＮＦ−α（ｕｎｉｔ／ｍｌ）の添加
濃度を変化させた時に細胞内に発現されたｍＲＮＡ量を
ノザンブロッティング法により検出した結果を、電気泳
動パターンで示した。図中、２８Ｓおよび１８Ｓは、そ
れぞれ２８Ｓ−、１８Ｓ−リボゾームＲＮＡの位置を表
す。
現に対するＩＬ−１α（図中のＡ）およびＴＮＦ−α
（図中のＢ）の効果を表す図面である。ＩＬ−１α（ｎ
ｇ／ｍｌ）およびＴＮＦ−α（ｕｎｉｔ／ｍｌ）の添加
濃度を変化させた時に細胞内に発現されたｍＲＮＡ量を
ノザンブロッティング法により検出した結果を、電気泳
動パターンで示した。図中、２８Ｓおよび１８Ｓは、そ
れぞれ２８Ｓ−、１８Ｓ−リボゾームＲＮＡの位置を表
す。
【図４】ＭＲＣ−５細胞内において、ＩＬ−１αにより
誘導されたｈＨＧＦｍＲＮＡ発現の時間経過を表す図面
である。ＭＲＣ−５細胞とＩＬ−１α（５ｎｇ／ｍｌ）
とを表示した時間孵置した際、細胞内に発現されたｍＲ
ＮＡ量をノザンブロッティング法により検出した結果
を、電気泳動パターンで示した（図中Ａでは32Ｐで、Ｂ
では臭化エチジウムで検出）。図中、２８Ｓおよび１８
Ｓは、それぞれ２８Ｓ−、１８Ｓ−リボゾームＲＮＡの
位置を表す。
誘導されたｈＨＧＦｍＲＮＡ発現の時間経過を表す図面
である。ＭＲＣ−５細胞とＩＬ−１α（５ｎｇ／ｍｌ）
とを表示した時間孵置した際、細胞内に発現されたｍＲ
ＮＡ量をノザンブロッティング法により検出した結果
を、電気泳動パターンで示した（図中Ａでは32Ｐで、Ｂ
では臭化エチジウムで検出）。図中、２８Ｓおよび１８
Ｓは、それぞれ２８Ｓ−、１８Ｓ−リボゾームＲＮＡの
位置を表す。
Claims (4)
- 【請求項１】 インターロイキン−１および／または腫
瘍壊死因子からなる肝実質細胞増殖因子の誘導剤。 - 【請求項２】 請求項１記載の誘導剤を有効成分とする
肝障害の予防または治療薬。 - 【請求項３】 請求項１記載の誘導剤を有効成分とする
腎障害の予防または治療薬。 - 【請求項４】 請求項１記載の誘導剤を有効成分とする
創傷治癒促進剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5035644A JPH06247873A (ja) | 1993-02-24 | 1993-02-24 | 肝実質細胞増殖因子の誘導剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5035644A JPH06247873A (ja) | 1993-02-24 | 1993-02-24 | 肝実質細胞増殖因子の誘導剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06247873A true JPH06247873A (ja) | 1994-09-06 |
Family
ID=12447589
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5035644A Pending JPH06247873A (ja) | 1993-02-24 | 1993-02-24 | 肝実質細胞増殖因子の誘導剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH06247873A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5980911A (en) * | 1994-05-04 | 1999-11-09 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Adjuvant |
| JP2003534857A (ja) * | 2000-05-29 | 2003-11-25 | アウグスチナス バデル， | レシピエント特異的組織移植片または組織インプラントの作製方法 |
| WO2009127248A1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-10-22 | United Technologies Ut Ag | Cosmetic and dermatological compositions and kits containing interleukin-1 alpha |
-
1993
- 1993-02-24 JP JP5035644A patent/JPH06247873A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5980911A (en) * | 1994-05-04 | 1999-11-09 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Adjuvant |
| JP2003534857A (ja) * | 2000-05-29 | 2003-11-25 | アウグスチナス バデル， | レシピエント特異的組織移植片または組織インプラントの作製方法 |
| JP4898068B2 (ja) * | 2000-05-29 | 2012-03-14 | アウグスチナス バデル， | レシピエント特異的組織移植片または組織インプラントの作製方法 |
| WO2009127248A1 (en) * | 2008-04-16 | 2009-10-22 | United Technologies Ut Ag | Cosmetic and dermatological compositions and kits containing interleukin-1 alpha |
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