JPH0622787A - ヒト向代謝性グルタミン酸レセプターおよび関連ｄｎａ化合物 - Google Patents
ヒト向代謝性グルタミン酸レセプターおよび関連ｄｎａ化合物Info
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- JPH0622787A JPH0622787A JP5106517A JP10651793A JPH0622787A JP H0622787 A JPH0622787 A JP H0622787A JP 5106517 A JP5106517 A JP 5106517A JP 10651793 A JP10651793 A JP 10651793A JP H0622787 A JPH0622787 A JP H0622787A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70571—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for neuromediators, e.g. serotonin receptor, dopamine receptor
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ヒトグルタミン酸レセプターおよびその機能
的等価物、ならびに該レセプターをコードしている核酸
化合物を提供する。 【構成】 配列番号１はヒト向代謝性グルタミン酸レセ
プター蛋白のアミノ酸配列であり、配列番号２は、この
蛋白をコードしている核酸配列である。
的等価物、ならびに該レセプターをコードしている核酸
化合物を提供する。 【構成】 配列番号１はヒト向代謝性グルタミン酸レセ
プター蛋白のアミノ酸配列であり、配列番号２は、この
蛋白をコードしている核酸配列である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規なヒトグルタミン
酸レセプター蛋白およびこの新規な蛋白をコードしてい
る新規な核酸化合物に関するものである。
酸レセプター蛋白およびこの新規な蛋白をコードしてい
る新規な核酸化合物に関するものである。
【０００２】哺乳動物の中枢神経系においてＬ−グルタ
メート（以下Ｌ−グルタミン酸またはその塩と表示す
る）は主要な興奮性神経伝達物質として働いている。グ
ルタミン酸塩とその膜結合レセプターとの相互作用が、
迅速なシナプス伝達、シナプスの可塑性、および長期増
強作用を含む多くの重要なニューロンのプロセスにおけ
る役割を演じていると信じられている。これらのプロセ
スは、生命の維持ならびに学習および記憶といったよう
な正常な人間の能力に必須なものである。Ｄ．Ｔ．モナ
ガーン等、８ ニューロン（Ｎｅｕｒｏｎ）２６７（１
９９２）。
メート（以下Ｌ−グルタミン酸またはその塩と表示す
る）は主要な興奮性神経伝達物質として働いている。グ
ルタミン酸塩とその膜結合レセプターとの相互作用が、
迅速なシナプス伝達、シナプスの可塑性、および長期増
強作用を含む多くの重要なニューロンのプロセスにおけ
る役割を演じていると信じられている。これらのプロセ
スは、生命の維持ならびに学習および記憶といったよう
な正常な人間の能力に必須なものである。Ｄ．Ｔ．モナ
ガーン等、８ ニューロン（Ｎｅｕｒｏｎ）２６７（１
９９２）。
【０００３】Ｌ−グルタミン酸塩のレセプターの薬理学
的特性化により、これらはその生物学的機能に基づき二
つの群に分類された：細胞膜の陽イオンチャンネルに直
接結合する向イオン性レセプター、およびＧ蛋白との結
合を介して機能する向代謝性レセプターである。本発明
は、向代謝性群のグルタミン酸レセプターの一員に関す
るものである。
的特性化により、これらはその生物学的機能に基づき二
つの群に分類された：細胞膜の陽イオンチャンネルに直
接結合する向イオン性レセプター、およびＧ蛋白との結
合を介して機能する向代謝性レセプターである。本発明
は、向代謝性群のグルタミン酸レセプターの一員に関す
るものである。
【０００４】正常な人間の生理におけるその役割に加え
て、Ｌ−グルタミン酸塩とそのレセプターの相互作用
は、多くの神経学的疾患、例えば卒中、癲癇、および頭
部外傷、ならびにアルツハイマー病のような神経変性作
用において基本的な役割を演じていると信じられてい
る。Ｒ．Ｗ．オルネイ、１７ ドラッグ・ディベロップ
メント・リサーチ（Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．）２９
９（１９８９）。このような理由で、ヒトＬ−グルタミ
ン酸レセプターの分子構造の理解は、これらの疾患のプ
ロセスの理解および有効な治療薬の探索をするために重
要である。現在までの所、ヒトグルタミン酸レセプター
に結合しその機能を調節する治療薬の探索は、このレセ
プターの均質な供給源が得られないことで妨げられてい
る。薬理学者が通常使用する脳組織は実験動物（ヒト以
外）由来のものであり、そのうえ様々な型のグルタミン
酸レセプターの混合物を含んでいる。
て、Ｌ−グルタミン酸塩とそのレセプターの相互作用
は、多くの神経学的疾患、例えば卒中、癲癇、および頭
部外傷、ならびにアルツハイマー病のような神経変性作
用において基本的な役割を演じていると信じられてい
る。Ｒ．Ｗ．オルネイ、１７ ドラッグ・ディベロップ
メント・リサーチ（Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．）２９
９（１９８９）。このような理由で、ヒトＬ−グルタミ
ン酸レセプターの分子構造の理解は、これらの疾患のプ
ロセスの理解および有効な治療薬の探索をするために重
要である。現在までの所、ヒトグルタミン酸レセプター
に結合しその機能を調節する治療薬の探索は、このレセ
プターの均質な供給源が得られないことで妨げられてい
る。薬理学者が通常使用する脳組織は実験動物（ヒト以
外）由来のものであり、そのうえ様々な型のグルタミン
酸レセプターの混合物を含んでいる。
【０００５】人間の治療薬の探索にあたっては、現在使
用されている齧歯動物のレセプターよりも、より無傷の
人間の脳のレセプターに類似したレセプターを使用する
ことが望ましい。故に、ヒトグルタミン酸レセプターの
発見は、選択的薬用物質の開発のための必要な研究手段
を提供するものである。本発明はヒトグルタミン酸レセ
プターＨＳｍＧｌｕＲ１を提供し、これは、このレセプ
ターを調節する薬物を選択的に探索するために使用する
ことができる。
用されている齧歯動物のレセプターよりも、より無傷の
人間の脳のレセプターに類似したレセプターを使用する
ことが望ましい。故に、ヒトグルタミン酸レセプターの
発見は、選択的薬用物質の開発のための必要な研究手段
を提供するものである。本発明はヒトグルタミン酸レセ
プターＨＳｍＧｌｕＲ１を提供し、これは、このレセプ
ターを調節する薬物を選択的に探索するために使用する
ことができる。
【０００６】近年、４つの向代謝性レセプターサブタイ
プ（ｍＧｌｕＲ１−ｍＧｌｕＲ４）がラットの脳からク
ローニングされた。マス等、３４９ ネイチャー（Ｎａ
ｔｕｒｅ）７６０（１９９１）；フアミッド等、２５２
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）１３１４（１９９
１）；およびＹ．タナベ等、８ ニューロン（Ｎｅｕｒ
ｏｎ）１６９（１９９１）。さらに、二つの交互にスプ
ライスされるｍＧｌｕＲ１の型が知られている。Ｙ．タ
ナベ等、８ ニューロン（Ｎｅｕｒｏｎ）１６９（１９
９１）。
プ（ｍＧｌｕＲ１−ｍＧｌｕＲ４）がラットの脳からク
ローニングされた。マス等、３４９ ネイチャー（Ｎａ
ｔｕｒｅ）７６０（１９９１）；フアミッド等、２５２
サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）１３１４（１９９
１）；およびＹ．タナベ等、８ ニューロン（Ｎｅｕｒ
ｏｎ）１６９（１９９１）。さらに、二つの交互にスプ
ライスされるｍＧｌｕＲ１の型が知られている。Ｙ．タ
ナベ等、８ ニューロン（Ｎｅｕｒｏｎ）１６９（１９
９１）。
【０００７】本発明は、配列番号１のアミノ酸を含む化
合物またはその機能的等価物を提供するものである。特
に、配列番号１であるアミノ酸化合物が好ましい。
合物またはその機能的等価物を提供するものである。特
に、配列番号１であるアミノ酸化合物が好ましい。
【０００８】さらに本発明は、提供されるアミノ酸化合
物をコードしている核酸配列を含む核酸化合物を提供す
る。特に、ＤＮＡである核酸化合物が好ましい。最も好
ましいのは配列番号２のＤＮＡ化合物である。しかしな
がら、センスｍＲＮＡである核酸化合物もまた好まし
い。
物をコードしている核酸配列を含む核酸化合物を提供す
る。特に、ＤＮＡである核酸化合物が好ましい。最も好
ましいのは配列番号２のＤＮＡ化合物である。しかしな
がら、センスｍＲＮＡである核酸化合物もまた好まし
い。
【０００９】さらに、配列番号１をコードしている核酸
を含む組み替え核酸ベクターが本発明によって提供され
る。好ましい核酸ベクターは、ＤＮＡである核酸ベクタ
ーである。最も好ましいのは、配列番号２であるＤＮＡ
配列を含む組み替えＤＮＡベクターである。配列番号２
を含む好ましいＤＮＡベクターはｐＲＳ１１７である。
を含む組み替え核酸ベクターが本発明によって提供され
る。好ましい核酸ベクターは、ＤＮＡである核酸ベクタ
ーである。最も好ましいのは、配列番号２であるＤＮＡ
配列を含む組み替えＤＮＡベクターである。配列番号２
を含む好ましいＤＮＡベクターはｐＲＳ１１７である。
【００１０】さらに、本発明に係る組み替えＤＮＡベク
ターは、好ましくは、配列番号１をコードしているＤＮ
Ａ配列の発現をさせるよう位置するプロモーターを含
む。該プロモーターが哺乳動物の細胞で機能するベクタ
ーが好ましい。該プロモーターがＡＶ１２細胞で機能す
る哺乳動物のベクターが好ましい。最も好ましい組み替
えＤＮＡ発現ベクターはプラスミドｐＲＳ１２１であ
る。
ターは、好ましくは、配列番号１をコードしているＤＮ
Ａ配列の発現をさせるよう位置するプロモーターを含
む。該プロモーターが哺乳動物の細胞で機能するベクタ
ーが好ましい。該プロモーターがＡＶ１２細胞で機能す
る哺乳動物のベクターが好ましい。最も好ましい組み替
えＤＮＡ発現ベクターはプラスミドｐＲＳ１２１であ
る。
【００１１】好ましいベクターの制限フラグメントもま
た提供される。特に、配列番号２を含むベクターのおよ
そ４．１ｋｂ ＥｃｏＲＩおよびおよそ３．８ｋｂ Ｂ
ｓｓＨＩＩ／ＡｆｌＩＩ制限フラグメントが提供され
る。
た提供される。特に、配列番号２を含むベクターのおよ
そ４．１ｋｂ ＥｃｏＲＩおよびおよそ３．８ｋｂ Ｂ
ｓｓＨＩＩ／ＡｆｌＩＩ制限フラグメントが提供され
る。
【００１２】さらに本発明は、分子生物学技術に役立つ
プローブおよびプライマーを提供する。配列番号１の全
体もしくは一部をコードしている化合物または配列番号
１をコードしている化合物の逆相補体であって少なくと
も連続した１８塩基の長さであるものが、プローブおよ
び／またはプライマーとして提供される。好ましくは、
１８塩基対またはそれ以上の化合物がＤＮＡである。こ
の使用に最も好ましいのは、配列番号３、配列番号４お
よび配列番号５であるＤＮＡ化合物またはそれらの逆相
補体である。
プローブおよびプライマーを提供する。配列番号１の全
体もしくは一部をコードしている化合物または配列番号
１をコードしている化合物の逆相補体であって少なくと
も連続した１８塩基の長さであるものが、プローブおよ
び／またはプライマーとして提供される。好ましくは、
１８塩基対またはそれ以上の化合物がＤＮＡである。こ
の使用に最も好ましいのは、配列番号３、配列番号４お
よび配列番号５であるＤＮＡ化合物またはそれらの逆相
補体である。
【００１３】さらに本発明は、本発明に係る核酸化合物
を導入することのできる細胞を提供する。例えば、本発
明に係る核酸化合物が機能的ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプタ
ーを発現する卵母細胞が提供される。ＤＮＡが機能的Ｈ
ＳｍＧｌｕＲ１レセプターを発現する卵母細胞が好まし
い。最も好ましいのは、センスｍＲＮＡが機能的ＨＳｍ
ＧｌｕＲ１レセプターを発現する卵母細胞である。
を導入することのできる細胞を提供する。例えば、本発
明に係る核酸化合物が機能的ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプタ
ーを発現する卵母細胞が提供される。ＤＮＡが機能的Ｈ
ＳｍＧｌｕＲ１レセプターを発現する卵母細胞が好まし
い。最も好ましいのは、センスｍＲＮＡが機能的ＨＳｍ
ＧｌｕＲ１レセプターを発現する卵母細胞である。
【００１４】その他の宿主細胞は、配列番号１をコード
している核酸化合物によりトランスフェクトされる宿主
細胞を包含する。配列番号１をコードしているトランス
フェクトされる好ましい宿主細胞は、哺乳動物細胞およ
び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。好ましい哺乳動物細
胞はＡＶ１２細胞を包含する。好ましい宿主細胞は、組
み替えＤＮＡベクターによりトランスフェクトされた宿
主細胞である。好ましくは該ＤＮＡベクターは配列番号
２を含む。最も好ましいトランスフェクトされる宿主細
胞はＡＶ１２／ｐＲＳ１２１およびＥ．ｃｏｌｉ／ｐＲ
Ｓ１１７である。
している核酸化合物によりトランスフェクトされる宿主
細胞を包含する。配列番号１をコードしているトランス
フェクトされる好ましい宿主細胞は、哺乳動物細胞およ
び大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）である。好ましい哺乳動物細
胞はＡＶ１２細胞を包含する。好ましい宿主細胞は、組
み替えＤＮＡベクターによりトランスフェクトされた宿
主細胞である。好ましくは該ＤＮＡベクターは配列番号
２を含む。最も好ましいトランスフェクトされる宿主細
胞はＡＶ１２／ｐＲＳ１２１およびＥ．ｃｏｌｉ／ｐＲ
Ｓ１１７である。
【００１５】さらに本発明は、本発明に係るプローブと
ホモローガスな核酸を同定する方法であって、被験核酸
を、ハイブリダイズする条件下でプローブと接触させ、
該プローブとホモローガスな核酸を同定することからな
る方法を提供する。この方法に使用されるための好まし
いプローブは、配列番号３、配列番号４または配列番号
５である。
ホモローガスな核酸を同定する方法であって、被験核酸
を、ハイブリダイズする条件下でプローブと接触させ、
該プローブとホモローガスな核酸を同定することからな
る方法を提供する。この方法に使用されるための好まし
いプローブは、配列番号３、配列番号４または配列番号
５である。
【００１６】本発明により提供される化合物を利用する
検定もまた提供される。提供される検定は、或る物質が
配列番号１の化合物と相互作用するか否か、または該化
合物に影響を及ぼすか否かを決定するものであり、この
検定は、配列番号１の機能的化合物を当該物質と接触さ
せ、物理的に検出し得る手段によって相互作用を監視
し、そして選ばれた応答をする物質を同定することから
なる。
検定もまた提供される。提供される検定は、或る物質が
配列番号１の化合物と相互作用するか否か、または該化
合物に影響を及ぼすか否かを決定するものであり、この
検定は、配列番号１の機能的化合物を当該物質と接触さ
せ、物理的に検出し得る手段によって相互作用を監視
し、そして選ばれた応答をする物質を同定することから
なる。
【００１７】好ましくは、物理的に検出し得る手段と
は、標識されたグルタミン酸塩との競合、ホスファチジ
ルイノシトール（ＰＩ）の加水分解、卵母細胞発現系に
おける電気生理学的応答、アデニル酸シクラーゼの賦活
もしくは阻害、またはアラキドン酸の放出である。最も
好ましいグルタミン酸塩競合検定は、放射性同位体で標
識されたグルタミン酸塩を利用する。最も好ましい卵母
細胞発現系はセンスｍＲＮＡを利用する。
は、標識されたグルタミン酸塩との競合、ホスファチジ
ルイノシトール（ＰＩ）の加水分解、卵母細胞発現系に
おける電気生理学的応答、アデニル酸シクラーゼの賦活
もしくは阻害、またはアラキドン酸の放出である。最も
好ましいグルタミン酸塩競合検定は、放射性同位体で標
識されたグルタミン酸塩を利用する。最も好ましい卵母
細胞発現系はセンスｍＲＮＡを利用する。
【００１８】さらに本発明は、配列番号１を含む化合物
をコードしている核酸化合物を発現することのできる組
み替え宿主細胞を組み立てる方法を提供し、この方法
は、当該核酸化合物を含む組み替えＤＮＡベクターによ
って宿主細胞をトランスフェクトすることからなる。好
ましい方法は、宿主細胞として哺乳動物細胞を利用す
る。最も好ましい方法は、哺乳動物宿主細胞としてＡＶ
１２細胞を利用する。好ましい方法は、配列番号２を含
むＤＮＡベクターを含む。最も好ましい方法はＤＮＡベ
クターｐＲＳ１２１を利用する。
をコードしている核酸化合物を発現することのできる組
み替え宿主細胞を組み立てる方法を提供し、この方法
は、当該核酸化合物を含む組み替えＤＮＡベクターによ
って宿主細胞をトランスフェクトすることからなる。好
ましい方法は、宿主細胞として哺乳動物細胞を利用す
る。最も好ましい方法は、哺乳動物宿主細胞としてＡＶ
１２細胞を利用する。好ましい方法は、配列番号２を含
むＤＮＡベクターを含む。最も好ましい方法はＤＮＡベ
クターｐＲＳ１２１を利用する。
【００１９】さらに、配列番号１をコードしている核酸
配列を組替え宿主細胞中で発現させるための方法が提供
される。この方法は、本発明により提供されるトランス
フェクトされた宿主細胞を遺伝子の発現に好適な条件下
で培養することからなる。好ましい方法は宿主細胞とし
て哺乳動物細胞を利用する。最も好ましい方法は、哺乳
動物宿主細胞としてＡＶ１２細胞を利用する。より好ま
しい方法は、配列番号２を含む組み替えＤＮＡベクター
を利用する。最も好ましい方法は、組み替えＤＮＡベク
ターｐＲＳ１２１を利用する。
配列を組替え宿主細胞中で発現させるための方法が提供
される。この方法は、本発明により提供されるトランス
フェクトされた宿主細胞を遺伝子の発現に好適な条件下
で培養することからなる。好ましい方法は宿主細胞とし
て哺乳動物細胞を利用する。最も好ましい方法は、哺乳
動物宿主細胞としてＡＶ１２細胞を利用する。より好ま
しい方法は、配列番号２を含む組み替えＤＮＡベクター
を利用する。最も好ましい方法は、組み替えＤＮＡベク
ターｐＲＳ１２１を利用する。
【００２０】以下の部分に本発明の詳細な説明を供す
る。明確化の目的のため、そして本明細書中に開示され
特許請求される本発明の理解を助けるために、以下の項
目を下記に定義する。
る。明確化の目的のため、そして本明細書中に開示され
特許請求される本発明の理解を助けるために、以下の項
目を下記に定義する。
【００２１】「ｍＲＮＡ」 − インビボまたはインビ
トロのいずれかで転写されたＲＮＡであって、例えばＲ
ＮＡポリメラーゼによるＤＮＡのコード化配列の転写を
介してインビトロで調製されたＲＮＡ転写物を包含す
る。
トロのいずれかで転写されたＲＮＡであって、例えばＲ
ＮＡポリメラーゼによるＤＮＡのコード化配列の転写を
介してインビトロで調製されたＲＮＡ転写物を包含す
る。
【００２２】「プライマー」 − 酵素的または合成的
伸長のための鋳型として機能する、核酸フラグメントま
たはその逆相補体。
伸長のための鋳型として機能する、核酸フラグメントま
たはその逆相補体。
【００２３】「プローブ」 − そのいずれかが他の核
酸とハイブリダイズするのに用いられる、核酸化合物も
しくはそのフラグメント、またはその逆相補体。
酸とハイブリダイズするのに用いられる、核酸化合物も
しくはそのフラグメント、またはその逆相補体。
【００２４】「配列番号１の一部分」 − 少なくとも
６個の連続したアミノ酸残基またはそれ以上を含み、且
つ配列番号１に含まれる配列に対応する配列。
６個の連続したアミノ酸残基またはそれ以上を含み、且
つ配列番号１に含まれる配列に対応する配列。
【００２５】「物理的に検出し得る」 − 介在する解
釈の助けを伴うまたは伴わない、人間の認知し得る形で
供せられた任意の情報。例えば、電気生理学的、化学
的、または生化学的データは、物理的に検出し得る情報
の範囲内であると考えられる。
釈の助けを伴うまたは伴わない、人間の認知し得る形で
供せられた任意の情報。例えば、電気生理学的、化学
的、または生化学的データは、物理的に検出し得る情報
の範囲内であると考えられる。
【００２６】「配列番号１の機能的化合物」 − グル
タミン酸塩と相互作用することのできる、配列番号１を
含む化合物。
タミン酸塩と相互作用することのできる、配列番号１を
含む化合物。
【００２７】「ＨｓｍＧｌｕＲ１レセプター」 − 配
列番号１のアミノ酸配列。
列番号１のアミノ酸配列。
【００２８】「配列番号１およびその機能的等価物」
− 配列番号１の化合物および配列番号１のアミノ酸配
列の保存的改変［ここで保存的改変は、配列番号１と実
質上同じ物理的および構造的性質を表わす化合物をもた
らす］。
− 配列番号１の化合物および配列番号１のアミノ酸配
列の保存的改変［ここで保存的改変は、配列番号１と実
質上同じ物理的および構造的性質を表わす化合物をもた
らす］。
【００２９】「配列番号３」 − ＤＮＡ配列 ATG GT
C GGG CTC CTT TTG TTT TTT TTC CCA GCG ATC TTT TTG
GAG GTG TCC CTT CTC CCC。この配列は配列番号２の塩
基１ないし６０を含んでいる。
C GGG CTC CTT TTG TTT TTT TTC CCA GCG ATC TTT TTG
GAG GTG TCC CTT CTC CCC。この配列は配列番号２の塩
基１ないし６０を含んでいる。
【００３０】「配列番号４」 − CCA GGA CACCTT CTG
GAA AAT CCC AAC TTT AAA CGA ATCTGC ACA GGC AAT GA
A AGC TTA。この配列は配列番号２の塩基１１４１ない
し１２００を含んでいる。
GAA AAT CCC AAC TTT AAA CGA ATCTGC ACA GGC AAT GA
A AGC TTA。この配列は配列番号２の塩基１１４１ない
し１２００を含んでいる。
【００３１】「配列番号５」 − AAC GTA TCC TAC GC
C TCT GTC ATT CTG CGG GAC TAC AAG CAA AGC TCT TCC
ACC CTG TAA。この配列は、３'末端にＴＡＡ停止コドン
が付加された配列番号２の塩基３７６１ないし３８１７
を含んでいる。
C TCT GTC ATT CTG CGG GAC TAC AAG CAA AGC TCT TCC
ACC CTG TAA。この配列は、３'末端にＴＡＡ停止コドン
が付加された配列番号２の塩基３７６１ないし３８１７
を含んでいる。
【００３２】「トランスフェクション」 − 該宿主細
胞のゲノム中への該核酸の統合を伴うまたは伴わない、
宿主細胞中への核酸の移動。
胞のゲノム中への該核酸の統合を伴うまたは伴わない、
宿主細胞中への核酸の移動。
【００３３】本発明は、配列番号１のアミノ酸配列を含
む化合物およびその機能的等価物を提供する。好ましい
アミノ酸化合物は配列番号１であって、以下のアミノ酸
配列である：
む化合物およびその機能的等価物を提供する。好ましい
アミノ酸化合物は配列番号１であって、以下のアミノ酸
配列である：
【００３４】
【化１】
【化２】
【化３】
【化４】
【化５】
【化６】
【００３５】当業者には、配列番号１の幾らかの改変は
このアミノ酸化合物の機能を変化させないことが理解で
きるであろう。例えば、幾つかの疎水性アミノ酸は別の
疎水性アミノ酸と交換することができる。例示アミノ酸
化合物と実質上同じ方法で実質上同じ機能を付与するこ
れら改変されたアミノ酸もまた本発明に包含される。
このアミノ酸化合物の機能を変化させないことが理解で
きるであろう。例えば、幾つかの疎水性アミノ酸は別の
疎水性アミノ酸と交換することができる。例示アミノ酸
化合物と実質上同じ方法で実質上同じ機能を付与するこ
れら改変されたアミノ酸もまた本発明に包含される。
【００３６】当業者はさらに、配列番号１およびその機
能的等価物は、幾つかの異なった方法により合成され得
ることが理解できるであろう。本発明に係る全てのアミ
ノ酸化合物は、固相ペプチド合成または組み替え法を含
む当分野で周知の化学的方法により製造することができ
る。どちらの方法も米国特許第４６１７１４９号に記載
されている。高収量を望むならば組み替え法が好まし
い。任意の所望ＤＮＡ配列を組み立てるための一般的方
法が、ブラウン等、６８ メソッズ・イン・エンザイモ
ロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ）１０９（１９７９）に提供されている。
能的等価物は、幾つかの異なった方法により合成され得
ることが理解できるであろう。本発明に係る全てのアミ
ノ酸化合物は、固相ペプチド合成または組み替え法を含
む当分野で周知の化学的方法により製造することができ
る。どちらの方法も米国特許第４６１７１４９号に記載
されている。高収量を望むならば組み替え法が好まし
い。任意の所望ＤＮＡ配列を組み立てるための一般的方
法が、ブラウン等、６８ メソッズ・イン・エンザイモ
ロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇ
ｙ）１０９（１９７９）に提供されている。
【００３７】アミノ酸化合物を製造する他の経路は良く
知られている。真核生物細胞における発現は配列番号２
を介して達成できる。例えば、アミノ酸化合物は、配列
番号１をコードしているＤＮＡを含むＳＶ４０由来の発
現ベクターを用いて真核生物細胞において産生され得
る。幾つかのウイルスもまたこの目的のための適当なベ
クターである。例えば、アデノウイルス、アデノ付随ウ
イルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、バキ
ュロウイルス、およびラウス肉腫ウイルスは有用なウイ
ルスベクターである。このような方法は米国特許第４７
７５６２４号に記載されている。幾つかのこれに代わる
発現方法が、Ｊ．サムブルック、Ｅ．Ｆ．フリトゥシュ
およびＴ．マニアティス、モレキュラー・クローニン
グ：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ）１６．３−１７．４４（１９８９）に記載さ
れている。
知られている。真核生物細胞における発現は配列番号２
を介して達成できる。例えば、アミノ酸化合物は、配列
番号１をコードしているＤＮＡを含むＳＶ４０由来の発
現ベクターを用いて真核生物細胞において産生され得
る。幾つかのウイルスもまたこの目的のための適当なベ
クターである。例えば、アデノウイルス、アデノ付随ウ
イルス、ワクシニアウイルス、ヘルペスウイルス、バキ
ュロウイルス、およびラウス肉腫ウイルスは有用なウイ
ルスベクターである。このような方法は米国特許第４７
７５６２４号に記載されている。幾つかのこれに代わる
発現方法が、Ｊ．サムブルック、Ｅ．Ｆ．フリトゥシュ
およびＴ．マニアティス、モレキュラー・クローニン
グ：ア・ラボラトリー・マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａ
ｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ）１６．３−１７．４４（１９８９）に記載さ
れている。
【００３８】本発明の別の態様は、配列番号１をコード
している核酸配列を含む核酸化合物である。当業者には
理解できるであろうが、殆どのアミノ酸は１以上の核酸
トリプレットによりコードされるため、本発明のアミノ
酸化合物は数多くの異なった核酸配列によってコードさ
れ得る。これら代替核酸配列が同じアミノ酸配列をコー
ドするであろうから、本発明はさらにこれらの代替核酸
配列をも包含する。好ましくは、核酸化合物はＤＮＡま
たはセンスｍＲＮＡである。ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプタ
ーをコードしているＤＮＡ化合物の最も好ましい態様
は、この配列を有する：
している核酸配列を含む核酸化合物である。当業者には
理解できるであろうが、殆どのアミノ酸は１以上の核酸
トリプレットによりコードされるため、本発明のアミノ
酸化合物は数多くの異なった核酸配列によってコードさ
れ得る。これら代替核酸配列が同じアミノ酸配列をコー
ドするであろうから、本発明はさらにこれらの代替核酸
配列をも包含する。好ましくは、核酸化合物はＤＮＡま
たはセンスｍＲＮＡである。ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプタ
ーをコードしているＤＮＡ化合物の最も好ましい態様
は、この配列を有する：
【００３９】
【化７】
【化８】
【化９】 これは配列番号２と同定される配列である。
【００４０】配列番号２を含むクローニングベクターを
含むＥ．ｃｏｌｉ／ｐＲＳ１１７は、１９９２年４月２
２日に受理番号ＮＲＲＬ Ｂ−１８９６９の下でノーザ
ン・リージョナル・リサーチ・ラボラトリーズ（ＮＲＲ
Ｌ）、アグリカルチュラル・リサーチ・サービス、米国
農業省、ピオリア、イリノイ、６１６０４に寄託され、
ストックカルチャー・コレクションの一部とされた。配
列番号２は、例えば４．１ｋｂ ＥｃｏＲＩ制限フラグ
メントとしてプラスミドから分離することができる。他
のフラグメントもまた配列番号２の取得に有用であり得
る。
含むＥ．ｃｏｌｉ／ｐＲＳ１１７は、１９９２年４月２
２日に受理番号ＮＲＲＬ Ｂ−１８９６９の下でノーザ
ン・リージョナル・リサーチ・ラボラトリーズ（ＮＲＲ
Ｌ）、アグリカルチュラル・リサーチ・サービス、米国
農業省、ピオリア、イリノイ、６１６０４に寄託され、
ストックカルチャー・コレクションの一部とされた。配
列番号２は、例えば４．１ｋｂ ＥｃｏＲＩ制限フラグ
メントとしてプラスミドから分離することができる。他
のフラグメントもまた配列番号２の取得に有用であり得
る。
【００４１】さらに、ＤＮＡ配列は、自動ＤＮＡ合成
機、例えばＡＢＳ（アプライド・バイオシステムズ、８
５０リンカーン・センター・ドライブ、フォスター・シ
ティー、ＣＡ、９４４０４）３８０Ｂ ＤＮＡ合成機を
用いて合成することができる。ＤＮＡ配列はまた、米国
特許第４８８９８１８号に記載のポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）により生成させることもできる。
機、例えばＡＢＳ（アプライド・バイオシステムズ、８
５０リンカーン・センター・ドライブ、フォスター・シ
ティー、ＣＡ、９４４０４）３８０Ｂ ＤＮＡ合成機を
用いて合成することができる。ＤＮＡ配列はまた、米国
特許第４８８９８１８号に記載のポリメラーゼ連鎖反応
（ＰＣＲ）により生成させることもできる。
【００４２】当業者に理解できるように、発現およびク
ローニングのために多くのベクターを入手することがで
きる。配列番号１をコードしている核酸を含むこれらの
発現およびクローニングベクターは本発明に包含され
る。好ましい核酸ベクターはＤＮＡである核酸ベクター
である。最も好ましい組み替えＤＮＡベクターは、配列
番号２のＤＮＡ配列を含む。プラスミドｐＲＳ１１７が
本発明に係る好ましいＤＮＡベクターである。
ローニングのために多くのベクターを入手することがで
きる。配列番号１をコードしている核酸を含むこれらの
発現およびクローニングベクターは本発明に包含され
る。好ましい核酸ベクターはＤＮＡである核酸ベクター
である。最も好ましい組み替えＤＮＡベクターは、配列
番号２のＤＮＡ配列を含む。プラスミドｐＲＳ１１７が
本発明に係る好ましいＤＮＡベクターである。
【００４３】その他の好ましいＤＮＡベクターは、配列
番号２の発現をさせるよう位置したプロモーターを含む
ものを包含する。好ましい発現ベクターは、哺乳動物細
胞において機能するものを包含する。好ましい哺乳動物
の発現ベクターは、ＡＶ１２細胞において機能するもの
を包含する。ＡＶ１２細胞における発現のために最も好
ましいのは発現ベクターｐＲＳ１２１である。
番号２の発現をさせるよう位置したプロモーターを含む
ものを包含する。好ましい発現ベクターは、哺乳動物細
胞において機能するものを包含する。好ましい哺乳動物
の発現ベクターは、ＡＶ１２細胞において機能するもの
を包含する。ＡＶ１２細胞における発現のために最も好
ましいのは発現ベクターｐＲＳ１２１である。
【００４４】これらのベクターの制限フラグメントもま
た提供される。好ましいフラグメントは、プラスミドｐ
ＲＳ１１７の４．１ｋｂＥｃｏＲＩ制限フラグメントお
よび３．８ｋｂＢｓｓＨＩＩ／ＡｆｌＩＩ制限フラグメ
ントである。
た提供される。好ましいフラグメントは、プラスミドｐ
ＲＳ１１７の４．１ｋｂＥｃｏＲＩ制限フラグメントお
よび３．８ｋｂＢｓｓＨＩＩ／ＡｆｌＩＩ制限フラグメ
ントである。
【００４５】プラスミドｐＲＳ１１７は、常套の塩化セ
シウムＤＮＡ分離法を用いて、寄託されているＥ．ｃｏ
ｌｉ／ｐＲＳ１１７から分離することができる。プラス
ミドｐＲＳ１１７は、容易に修飾されて、例えば大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｓｆ９（バキュロウイルスの宿主と
して）、スポドプテラおよびサッカロミセテスを包含す
る種々の生物中でＨＳｍＧｌｕＲ１レセプターを産生す
る発現ベクターが組み立てられる。最近の文献には、Ａ
Ｖ１２発現ベクターの組み立ておよびＡＶ１２宿主細胞
のトランスフェクトのための技術が記載されている。例
えば、米国特許第４９９２３７３号はこれらの技術を説
明している。
シウムＤＮＡ分離法を用いて、寄託されているＥ．ｃｏ
ｌｉ／ｐＲＳ１１７から分離することができる。プラス
ミドｐＲＳ１１７は、容易に修飾されて、例えば大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）、Ｓｆ９（バキュロウイルスの宿主と
して）、スポドプテラおよびサッカロミセテスを包含す
る種々の生物中でＨＳｍＧｌｕＲ１レセプターを産生す
る発現ベクターが組み立てられる。最近の文献には、Ａ
Ｖ１２発現ベクターの組み立ておよびＡＶ１２宿主細胞
のトランスフェクトのための技術が記載されている。例
えば、米国特許第４９９２３７３号はこれらの技術を説
明している。
【００４６】必要ならば単に適当な調節因子を周知の技
術を用いて置換するだけで、ＡＶ１２ベクターに対して
利用される組み立て法に従って、他の生物のための類似
のベクターを組み立てることができる。使用することの
できるプロモーターは、例えばチミジンキナーゼプロモ
ーター、メタロチオニンプロモーターまたは種々のウイ
ルスおよび免疫グロブリンプロモーターである。
術を用いて置換するだけで、ＡＶ１２ベクターに対して
利用される組み立て法に従って、他の生物のための類似
のベクターを組み立てることができる。使用することの
できるプロモーターは、例えばチミジンキナーゼプロモ
ーター、メタロチオニンプロモーターまたは種々のウイ
ルスおよび免疫グロブリンプロモーターである。
【００４７】さらに本発明は分子生物学技術に有用なプ
ローブおよびプライマーを提供する。配列番号１の全部
または一部をコードしている化合物、または配列番号１
をコードしている化合物の逆相補体であって、長さが少
なくとも１８の連続した塩基対である化合物が、プロー
ブおよび／またはプライマーとして提供される。好まし
いプローブおよびプライマーはＤＮＡである。最も好ま
しいプローブおよびプライマーは、配列番号３、配列番
号４、および配列番号５である。プローブおよびプライ
マーの使用に関連する技術は当分野で良く知られてい
る。
ローブおよびプライマーを提供する。配列番号１の全部
または一部をコードしている化合物、または配列番号１
をコードしている化合物の逆相補体であって、長さが少
なくとも１８の連続した塩基対である化合物が、プロー
ブおよび／またはプライマーとして提供される。好まし
いプローブおよびプライマーはＤＮＡである。最も好ま
しいプローブおよびプライマーは、配列番号３、配列番
号４、および配列番号５である。プローブおよびプライ
マーの使用に関連する技術は当分野で良く知られてい
る。
【００４８】本発明に係る核酸の少なくとも１８塩基対
の長さの任意の配列を、任意の他の核酸のスクリーニン
グに使用することができる。例えば、本発明に係る１８
の連続した塩基またはそれ以上の核酸を使用して、コー
ド化配列の末端にハイブリダイズさせることができる。
次いでポリメラーゼ連鎖反応増幅により全長の配列を生
成させることができる。全長の配列は、選ばれた任意の
ベクター中に引続きサブクローニングすることができ
る。
の長さの任意の配列を、任意の他の核酸のスクリーニン
グに使用することができる。例えば、本発明に係る１８
の連続した塩基またはそれ以上の核酸を使用して、コー
ド化配列の末端にハイブリダイズさせることができる。
次いでポリメラーゼ連鎖反応増幅により全長の配列を生
成させることができる。全長の配列は、選ばれた任意の
ベクター中に引続きサブクローニングすることができ
る。
【００４９】別法として、配列番号３、配列番号４、ま
たは配列番号５を、常法によりｃＤＮＡライブラリーを
スクリーニングするために放射標識することができる。
さらに、フィルターに結合したＨＳｍＧｌｕＲ１ＤＮＡ
の任意の断片を全ｍＲＮＡに晒らしてもよい。次いで、
放射標識したＤＮＡにハイブリダイズするｍＲＮＡを逆
転写して相当するｃＤＮＡを生産してもよい。
たは配列番号５を、常法によりｃＤＮＡライブラリーを
スクリーニングするために放射標識することができる。
さらに、フィルターに結合したＨＳｍＧｌｕＲ１ＤＮＡ
の任意の断片を全ｍＲＮＡに晒らしてもよい。次いで、
放射標識したＤＮＡにハイブリダイズするｍＲＮＡを逆
転写して相当するｃＤＮＡを生産してもよい。
【００５０】プライマーおよびプローブは当分野で良く
知られる手段によって取得することができる。例えば、
いったんｐＲＳ１１７が分離されれば、制限酵素および
その後のゲル分離を用いて、選ばれたフラグメントを分
離することができる。
知られる手段によって取得することができる。例えば、
いったんｐＲＳ１１７が分離されれば、制限酵素および
その後のゲル分離を用いて、選ばれたフラグメントを分
離することができる。
【００５１】本発明に係る核酸を収容する宿主細胞もま
た提供される。例えば、本発明に係るＲＮＡまたはＤＮ
Ａ化合物を注射した卵母細胞が提供される。本発明に係
る最も好ましい卵母細胞は、センスｍＲＮＡを収容する
卵母細胞である。その他の好ましい宿主細胞は、配列番
号２を含むベクターによりトランスフェクトされた大腸
菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞およびＡＶ１２細胞を包含す
る。最も好ましいＡＶ１２および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌ
ｉ）宿主細胞はＡＶ１２／ｐＲＳ１２１およびＥ．ｃｏ
ｌｉ／ｐＲＳ１１７である。
た提供される。例えば、本発明に係るＲＮＡまたはＤＮ
Ａ化合物を注射した卵母細胞が提供される。本発明に係
る最も好ましい卵母細胞は、センスｍＲＮＡを収容する
卵母細胞である。その他の好ましい宿主細胞は、配列番
号２を含むベクターによりトランスフェクトされた大腸
菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞およびＡＶ１２細胞を包含す
る。最も好ましいＡＶ１２および大腸菌（Ｅ．ｃｏｌ
ｉ）宿主細胞はＡＶ１２／ｐＲＳ１２１およびＥ．ｃｏ
ｌｉ／ｐＲＳ１１７である。
【００５２】卵母細胞発現系は、ルバート等、８４ プ
ロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー
・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．）４３３２（１９８７）またはバージャー、メ
ソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）１５２巻（１９８７）に記
載される方法に従って組み立てることができる。その他
の宿主細胞トランスフェクト法もまた当分野で良く知ら
れている。
ロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー
・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．）４３３２（１９８７）またはバージャー、メ
ソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）１５２巻（１９８７）に記
載される方法に従って組み立てることができる。その他
の宿主細胞トランスフェクト法もまた当分野で良く知ら
れている。
【００５３】さらに本発明は、配列番号１を発現するこ
とのできる組み替え宿主細胞を組み立てる方法であっ
て、配列番号１をコードしているＤＮＡ配列を含む組み
替えＤＮＡベクターによって宿主細胞をトランスフェク
トすることからなる方法を提供する。
とのできる組み替え宿主細胞を組み立てる方法であっ
て、配列番号１をコードしているＤＮＡ配列を含む組み
替えＤＮＡベクターによって宿主細胞をトランスフェク
トすることからなる方法を提供する。
【００５４】好ましい宿主細胞はＡＶ１２であり、これ
は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（ＡＴＣＣ）（１２３０１ パークローン・ドライブ、
ロックビル、ＭＤ ２０８５２）から受理番号ＡＴＣＣ
ＣＲＬ９５９５の下で入手することができる。発現の
ための好ましいベクターは配列番号２を含むものであ
る。この目的のために特に好ましいのはｐＲＳ１２１で
ある。
は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（ＡＴＣＣ）（１２３０１ パークローン・ドライブ、
ロックビル、ＭＤ ２０８５２）から受理番号ＡＴＣＣ
ＣＲＬ９５９５の下で入手することができる。発現の
ための好ましいベクターは配列番号２を含むものであ
る。この目的のために特に好ましいのはｐＲＳ１２１で
ある。
【００５５】この方法のために好ましいその他の宿主細
胞は哺乳動物細胞である。特に好ましい哺乳動物細胞は
ＡＶ１２細胞である。好ましいＡＶ１２発現ベクターは
ｐＲＳ１２１である。トランスフェクトされた宿主細胞
は、配列番号１が発現されるような周知の条件の下で培
養し、その結果組み替え宿主細胞中でＨＳｍＧｌｕＲ１
活性を生成させることができる。
胞は哺乳動物細胞である。特に好ましい哺乳動物細胞は
ＡＶ１２細胞である。好ましいＡＶ１２発現ベクターは
ｐＲＳ１２１である。トランスフェクトされた宿主細胞
は、配列番号１が発現されるような周知の条件の下で培
養し、その結果組み替え宿主細胞中でＨＳｍＧｌｕＲ１
活性を生成させることができる。
【００５６】したがって、さらに本発明により提供され
るのは、配列番号１をコードしている遺伝子を組み替え
宿主細胞中で発現させる方法であって、この方法は、ト
ランスフェクトされた宿主細胞を遺伝子の発現に好適な
条件下で培養することからなる。好ましい方法は哺乳動
物細胞を利用する。好ましい方法は、哺乳動物細胞とし
てＡＶ１２細胞を利用する。最も好ましい方法は、ｐＲ
Ｓ１２１のための宿主細胞としてＡＶ１２細胞を利用す
る。宿主細胞中での発現は、ゲッデル、メソッズ・イン
・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ）１８５巻（１９９０）に概説される方法
に従って達成することができる。
るのは、配列番号１をコードしている遺伝子を組み替え
宿主細胞中で発現させる方法であって、この方法は、ト
ランスフェクトされた宿主細胞を遺伝子の発現に好適な
条件下で培養することからなる。好ましい方法は哺乳動
物細胞を利用する。好ましい方法は、哺乳動物細胞とし
てＡＶ１２細胞を利用する。最も好ましい方法は、ｐＲ
Ｓ１２１のための宿主細胞としてＡＶ１２細胞を利用す
る。宿主細胞中での発現は、ゲッデル、メソッズ・イン
・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙ
ｍｏｌｏｇｙ）１８５巻（１９９０）に概説される方法
に従って達成することができる。
【００５７】さらに本発明は、本発明に係るプローブに
対しホモローガスな核酸を同定する方法であって、ハイ
ブリダイズする条件の下で被験核酸を該プローブと接触
させ、該プローブに対しホモローガスな被験核酸を同定
することからなる方法を提供する。この方法における使
用のために好ましいプローブは、配列番号３、配列番号
４、または配列番号５である。ハイブリダイゼーション
技術は当分野において良く知られている。サムブルック
等、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・
マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）１１（１９８
９）がこのような方法を記載している。
対しホモローガスな核酸を同定する方法であって、ハイ
ブリダイズする条件の下で被験核酸を該プローブと接触
させ、該プローブに対しホモローガスな被験核酸を同定
することからなる方法を提供する。この方法における使
用のために好ましいプローブは、配列番号３、配列番号
４、または配列番号５である。ハイブリダイゼーション
技術は当分野において良く知られている。サムブルック
等、モレキュラー・クローニング：ア・ラボラトリー・
マニュアル（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ）１１（１９８
９）がこのような方法を記載している。
【００５８】本発明により提供される化合物を利用する
検定もまた提供される。これらの検定は、或る物質が配
列番号１の化合物と相互作用するか否か、またはこれに
影響を及ぼすか否かを決定するものであって、該検定
は、配列番号１の機能的化合物を該物質と接触させ、物
理的に検出し得る手段によって相互作用を監視し、そし
て選ばれた応答をする物質を同定することからなる。
検定もまた提供される。これらの検定は、或る物質が配
列番号１の化合物と相互作用するか否か、またはこれに
影響を及ぼすか否かを決定するものであって、該検定
は、配列番号１の機能的化合物を該物質と接触させ、物
理的に検出し得る手段によって相互作用を監視し、そし
て選ばれた応答をする物質を同定することからなる。
【００５９】好ましくは、物理的に検出し得る手段と
は、標識されたグルタミン酸塩との競合、ホスファチジ
ルイノシトールの加水分解、卵母細胞発現系における電
気生理学的応答、アデニル酸シクラーゼの賦活もしくは
阻害、またはアラキドン酸の放出である。最も好ましい
グルタミン酸塩競合検定は、放射性同位体で標識された
グルタミン酸塩を利用する。最も好ましい卵母細胞発現
系はセンスｍＲＮＡを利用する。
は、標識されたグルタミン酸塩との競合、ホスファチジ
ルイノシトールの加水分解、卵母細胞発現系における電
気生理学的応答、アデニル酸シクラーゼの賦活もしくは
阻害、またはアラキドン酸の放出である。最も好ましい
グルタミン酸塩競合検定は、放射性同位体で標識された
グルタミン酸塩を利用する。最も好ましい卵母細胞発現
系はセンスｍＲＮＡを利用する。
【００６０】卵母細胞発現系はルバート等、８４ プロ
シーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．）４３３２（１９８７）またはバージャー、メソ
ッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）１５２巻（１９８７）に記載
される方法に従って組み立てることができる。放射能標
識されたＨＳｍＧｌｕＲ１競合検定は、フォスターおよ
びファグ、７ ブレイン・リサーチ・レビューズ（Ｂｒ
ａｉｎ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．）１０３（１９８４）に従っ
て達成することができる。グルタミン作動性活性をホス
ファチジルイノシトールの加水分解を介して測定する検
定は、Ｍ．ベリッジ、２１２ バイオケミカル・ジャー
ナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．）８４９（１９８３）また
はショエップ等、１１ ＴｉＰＳ５０８（１９９０）に
従って達成することができる。アデニル酸シクラーゼの
賦活および阻害はナカジマ等、２６７ ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．）２４３７（１９９２）に従って達成できる。
アラキドン酸放出の測定はフェルダー等、２６４ ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２０３５６（１９８９）に従って
達成できる。当業者には、望ましいＫi値が被験化合物
の選択性に依存することが理解できるであろう。例え
ば、Ｋiが１０ｎＭより小さい化合物は一般に薬物療法
の優れた候補物質であると考えられる。しかしながら、
親和性が低く、それでいて特定のレセプターに対し選択
的な化合物は、さらに良好な候補物質であり得る。が、
当業者は、特定の化合物の結合または選択性に関するい
かなる情報も薬物の薬学的開発に役立つものであること
を理解しているであろうから、本発明は、或る物質がＨ
ＳｍＧｌｕＲ１レセプターに対し高い親和性を持つか低
い親和性を持つかを示す競合検定を提供する。
シーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・
オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．）４３３２（１９８７）またはバージャー、メソ
ッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）１５２巻（１９８７）に記載
される方法に従って組み立てることができる。放射能標
識されたＨＳｍＧｌｕＲ１競合検定は、フォスターおよ
びファグ、７ ブレイン・リサーチ・レビューズ（Ｂｒ
ａｉｎ Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．）１０３（１９８４）に従っ
て達成することができる。グルタミン作動性活性をホス
ファチジルイノシトールの加水分解を介して測定する検
定は、Ｍ．ベリッジ、２１２ バイオケミカル・ジャー
ナル（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．）８４９（１９８３）また
はショエップ等、１１ ＴｉＰＳ５０８（１９９０）に
従って達成することができる。アデニル酸シクラーゼの
賦活および阻害はナカジマ等、２６７ ジャーナル・オ
ブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃ
ｈｅｍ．）２４３７（１９９２）に従って達成できる。
アラキドン酸放出の測定はフェルダー等、２６４ ジャ
ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）２０３５６（１９８９）に従って
達成できる。当業者には、望ましいＫi値が被験化合物
の選択性に依存することが理解できるであろう。例え
ば、Ｋiが１０ｎＭより小さい化合物は一般に薬物療法
の優れた候補物質であると考えられる。しかしながら、
親和性が低く、それでいて特定のレセプターに対し選択
的な化合物は、さらに良好な候補物質であり得る。が、
当業者は、特定の化合物の結合または選択性に関するい
かなる情報も薬物の薬学的開発に役立つものであること
を理解しているであろうから、本発明は、或る物質がＨ
ＳｍＧｌｕＲ１レセプターに対し高い親和性を持つか低
い親和性を持つかを示す競合検定を提供する。
【００６１】以下は本発明の実施例である。
【００６２】実施例１ Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐＲＳ１１７の
増殖 プラスミドｐＲＳ１１７を含む大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）
の凍結乾燥培養物をＮＲＲＬ（ピオリア、イリノイ、６
１６０４）から受理番号ＮＲＲＬ Ｂ−１８９６９の下
で取得し、標準的な微生物学的方法を用いて大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）増殖用の適当なブロス中に接種するこ
とができる。
増殖 プラスミドｐＲＳ１１７を含む大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）
の凍結乾燥培養物をＮＲＲＬ（ピオリア、イリノイ、６
１６０４）から受理番号ＮＲＲＬ Ｂ−１８９６９の下
で取得し、標準的な微生物学的方法を用いて大腸菌
（Ｅ．ｃｏｌｉ）増殖用の適当なブロス中に接種するこ
とができる。
【００６３】Ｅ．ｃｏｌｉ／ｐＲＳ１１７を含む凍結乾
燥バイアルの内容物を、１ｌの発酵フラスコに入れたア
ンピシリン１００μｇ／ｍｌを含有する滅菌ＹＴ（トリ
プトン−酵母抽出液）ブロス１００ｍｌに移し、３７℃
で軌道振盪機上で２５０−３００ｒｐｍで振盪した。光
学密度（ＯＤ。６００ミリミクロンで測定。）がおよそ
１−２ＯＤに達した後に細菌の細胞を回収し、Ｊ．サム
ブルック等、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）第１章（１９８９）に詳説
される方法に従ってプラスミドｐＲＳ１１７の分離に使
用した。
燥バイアルの内容物を、１ｌの発酵フラスコに入れたア
ンピシリン１００μｇ／ｍｌを含有する滅菌ＹＴ（トリ
プトン−酵母抽出液）ブロス１００ｍｌに移し、３７℃
で軌道振盪機上で２５０−３００ｒｐｍで振盪した。光
学密度（ＯＤ。６００ミリミクロンで測定。）がおよそ
１−２ＯＤに達した後に細菌の細胞を回収し、Ｊ．サム
ブルック等、モレキュラー・クローニング（Ｍｏｌｅｃ
ｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ）第１章（１９８９）に詳説
される方法に従ってプラスミドｐＲＳ１１７の分離に使
用した。
【００６４】細菌の細胞から分離されると、このプラス
ミドＤＮＡはＨＳｍＧｌｕＲ１レセプター蛋白をコード
しているＤＮＡの供給源として役立った。プラスミドｐ
ＲＳ１１７からこのレセプターをコードしているＤＮＡ
を分離する一つの簡便な方法は、このプラスミドを制限
酵素ＥｃｏＲＩで消化することであった。この酵素は、
このプラスミドを特異な部位で切断し、ＨＳｍＧｌｕＲ
１レセプターのコード化配列全体を含むおよそ４．１ｋ
ｂのＤＮＡフラグメントを生成する。
ミドＤＮＡはＨＳｍＧｌｕＲ１レセプター蛋白をコード
しているＤＮＡの供給源として役立った。プラスミドｐ
ＲＳ１１７からこのレセプターをコードしているＤＮＡ
を分離する一つの簡便な方法は、このプラスミドを制限
酵素ＥｃｏＲＩで消化することであった。この酵素は、
このプラスミドを特異な部位で切断し、ＨＳｍＧｌｕＲ
１レセプターのコード化配列全体を含むおよそ４．１ｋ
ｂのＤＮＡフラグメントを生成する。
【００６５】実施例２ ｐＲＳ１１７からのｐＲＳ１２
１の組み立て 配列番号１をコードしているＤＮＡを、実施例１に記載
のようにしてプラスミドｐＲＳ１１７から回収した。Ｅ
ｃｏＲＩ粘着端をＢａｍＨＩ粘着端に適合させるため、
フラグメント末端にＤＮＡリンカーを付加した。これ
は、ＥｃｏＲＩ末端およびＢａｍＨＩ末端の両者を持つ
短い二本鎖オリゴヌクレオチドをｐＲＳ１１７由来フラ
グメントにライゲーションすることにより達成した。ラ
イゲーションはＴ４ＤＮＡリガーゼとのインキュベーシ
ョンを含んだ。
１の組み立て 配列番号１をコードしているＤＮＡを、実施例１に記載
のようにしてプラスミドｐＲＳ１１７から回収した。Ｅ
ｃｏＲＩ粘着端をＢａｍＨＩ粘着端に適合させるため、
フラグメント末端にＤＮＡリンカーを付加した。これ
は、ＥｃｏＲＩ末端およびＢａｍＨＩ末端の両者を持つ
短い二本鎖オリゴヌクレオチドをｐＲＳ１１７由来フラ
グメントにライゲーションすることにより達成した。ラ
イゲーションはＴ４ＤＮＡリガーゼとのインキュベーシ
ョンを含んだ。
【００６６】インキュベーションの後、反応生成物をＢ
ａｍＨＩで消化し、アガロースゲル上で分子量にしたが
って分離した。およそ４ｋｂのフラグメントに対して予
想される位置におけるゲル上のＤＮＡバンドをゲルから
切取り、ハフ等、１０ バイオテクニークス（Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）７２４（１９９１）のフェノール
−凍結−破壊法によってＤＮＡを回収した。
ａｍＨＩで消化し、アガロースゲル上で分子量にしたが
って分離した。およそ４ｋｂのフラグメントに対して予
想される位置におけるゲル上のＤＮＡバンドをゲルから
切取り、ハフ等、１０ バイオテクニークス（Ｂｉｏｔ
ｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）７２４（１９９１）のフェノール
−凍結−破壊法によってＤＮＡを回収した。
【００６７】次に、分離されたフラグメントを修飾され
たｐＨＤプラスミドにライゲーションした。この修飾さ
れたｐＨＤベクターは、登録された特許に記載のベクタ
ーが制限酵素ＢｃｌＩで消化されアルカリホスファター
ゼ処理されたこと以外は、実質上、登録された特許第４
９９２３７３号に記載されたベクターであった。次いで
ライゲーション生成物を、ＤＮＡトランスフェクション
に対してコンピテントとしたＥ．ｃｏｌｉＤＨ５α細胞
中にトランスフェクトした。これらの細胞を、アンピシ
リンを含有するＴＹ寒天板上に低密度で蒔いた。
たｐＨＤプラスミドにライゲーションした。この修飾さ
れたｐＨＤベクターは、登録された特許に記載のベクタ
ーが制限酵素ＢｃｌＩで消化されアルカリホスファター
ゼ処理されたこと以外は、実質上、登録された特許第４
９９２３７３号に記載されたベクターであった。次いで
ライゲーション生成物を、ＤＮＡトランスフェクション
に対してコンピテントとしたＥ．ｃｏｌｉＤＨ５α細胞
中にトランスフェクトした。これらの細胞を、アンピシ
リンを含有するＴＹ寒天板上に低密度で蒔いた。
【００６８】生育したコロニーから一つのクローンを選
択した。このクローンｐＲＳ１２１を、制限酵素消化お
よびＤＮＡハイブリダイゼーションプロービングにより
特性化した。
択した。このクローンｐＲＳ１２１を、制限酵素消化お
よびＤＮＡハイブリダイゼーションプロービングにより
特性化した。
【００６９】実施例３ ＡＶ１２／ｐＲＳ１２１のトラ
ンスフェクションおよび増殖 ＡＶ１２細胞を常法により増殖させた。細胞を、３７℃
で１０％牛胎児血清を含有するダルベッコの改良イーグ
ル培地（Ｄ−ＭＥＭ）中、１００ｍｍの細胞培養プレー
トに蒔き、５％ＣＯ2を含有する雰囲気下に増殖させ
た。トランスフェクション用のプラスミドＤＮＡを調製
するために、プラスミドｐＲＳ１２１（２０μｇ）を
０．５Ｍ ＣａＣｌ2５００μｌに加え、Ｎ，Ｎ−ビス
（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン
酸でｐＨ６．９５に緩衝化した０．９％ＮａＣｌ５００
μｌと混合した。室温で３０分後にこの混合物は沈澱し
たＤＮＡの懸濁液となった。
ンスフェクションおよび増殖 ＡＶ１２細胞を常法により増殖させた。細胞を、３７℃
で１０％牛胎児血清を含有するダルベッコの改良イーグ
ル培地（Ｄ−ＭＥＭ）中、１００ｍｍの細胞培養プレー
トに蒔き、５％ＣＯ2を含有する雰囲気下に増殖させ
た。トランスフェクション用のプラスミドＤＮＡを調製
するために、プラスミドｐＲＳ１２１（２０μｇ）を
０．５Ｍ ＣａＣｌ2５００μｌに加え、Ｎ，Ｎ−ビス
（２−ヒドロキシエチル）−２−アミノエタンスルホン
酸でｐＨ６．９５に緩衝化した０．９％ＮａＣｌ５００
μｌと混合した。室温で３０分後にこの混合物は沈澱し
たＤＮＡの懸濁液となった。
【００７０】次いで、沈澱したＤＮＡの懸濁液を、直径
１００ｍｍのＡＶ１２細胞の細胞培養プレートに加え
た。ＤＮＡの懸濁液を添加した時点で細胞の単層はおよ
そ５０％の全面成長であった。プレートを３７℃で一夜
インキュベートし、Ｄ−ＭＥＭですすいだ後、細胞を１
０％透析化牛胎児血清を含有するＤ−ＭＥＭ中でさらに
２４時間インキュベートした。次いで細胞をトリプシン
によりプレートから分離し、１０枚の新たなプレートに
分配した。さらに２４時間インキュベーションした後、
生育する細胞のコロニーを選択するために、最終濃度２
００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンを成長培地に加え
た。生育した細胞は、ハイグロマイシン耐性遺伝子を伴
うｐＲＳ１２１を含んでいた。クローンが適当な大きさ
（直径１−２ｍｍ）に達した後、個々のクローンを回収
し、これらのクローンの培養を標準的組織培養技術を用
いて増幅させた。この培養を、２ｍＭグルタミンおよび
１０％透析化牛胎児血清を含有する、グルタミン酸を含
まないＤ−ＭＥＭ培地中、常法によって増殖させた。培
養が全面成長になった時に継代培養を調製した。継代培
養の調製は、細胞をトリプシンで分離し、分離した細胞
を新鮮な培地中に希釈し、そしてこの希釈物を最初の１
／１０の濃度で新たな培養容器に入れる事を含んだ。
１００ｍｍのＡＶ１２細胞の細胞培養プレートに加え
た。ＤＮＡの懸濁液を添加した時点で細胞の単層はおよ
そ５０％の全面成長であった。プレートを３７℃で一夜
インキュベートし、Ｄ−ＭＥＭですすいだ後、細胞を１
０％透析化牛胎児血清を含有するＤ−ＭＥＭ中でさらに
２４時間インキュベートした。次いで細胞をトリプシン
によりプレートから分離し、１０枚の新たなプレートに
分配した。さらに２４時間インキュベーションした後、
生育する細胞のコロニーを選択するために、最終濃度２
００μｇ／ｍｌのハイグロマイシンを成長培地に加え
た。生育した細胞は、ハイグロマイシン耐性遺伝子を伴
うｐＲＳ１２１を含んでいた。クローンが適当な大きさ
（直径１−２ｍｍ）に達した後、個々のクローンを回収
し、これらのクローンの培養を標準的組織培養技術を用
いて増幅させた。この培養を、２ｍＭグルタミンおよび
１０％透析化牛胎児血清を含有する、グルタミン酸を含
まないＤ−ＭＥＭ培地中、常法によって増殖させた。培
養が全面成長になった時に継代培養を調製した。継代培
養の調製は、細胞をトリプシンで分離し、分離した細胞
を新鮮な培地中に希釈し、そしてこの希釈物を最初の１
／１０の濃度で新たな培養容器に入れる事を含んだ。
【００７１】実施例４ ＡＶ１２／ｐＲＳ１２１ ＰＩ
検定 グルタミン酸塩アゴニストに応答するＡＶ１２／ｐＲＳ
１２１細胞のクローンセルラインにおけるＰＩ加水分解
を、ショエップ、１１ ＴｉＰＳ ５０８（１９９０）
に従って、向代謝性グルタミン酸レセプター活性のため
の機能的検定として測定した。
検定 グルタミン酸塩アゴニストに応答するＡＶ１２／ｐＲＳ
１２１細胞のクローンセルラインにおけるＰＩ加水分解
を、ショエップ、１１ ＴｉＰＳ ５０８（１９９０）
に従って、向代謝性グルタミン酸レセプター活性のため
の機能的検定として測定した。
【００７２】２ｍＭグルタミンおよび１０％透析化牛胎
児血清を含有するＤ−ＭＥＭ（グルタミン酸不在下）に
入れた、ウェル当りおよそ２５００００の細胞を、２４
ウェルの組織培養容器に蒔いた。次いで４μＣｉの3Ｈ
−ミオイノシトールを各ウェルに添加し、この培養を３
７℃で４８時間インキュベートした。次にウェルを１０
ｍＭＬｉＣｌおよび１０ｍＭミオイノシトールを含有す
る無血清培地ですすいだ。次に、幾つかのウェルを、グ
ルタミン酸塩アゴニストを含む培地に３７℃で１時間暴
露し、同時に幾つかのウェルを、グルタミン酸塩アゴニ
ストを含まない培地に３７℃で１時間暴露した。
児血清を含有するＤ−ＭＥＭ（グルタミン酸不在下）に
入れた、ウェル当りおよそ２５００００の細胞を、２４
ウェルの組織培養容器に蒔いた。次いで４μＣｉの3Ｈ
−ミオイノシトールを各ウェルに添加し、この培養を３
７℃で４８時間インキュベートした。次にウェルを１０
ｍＭＬｉＣｌおよび１０ｍＭミオイノシトールを含有す
る無血清培地ですすいだ。次に、幾つかのウェルを、グ
ルタミン酸塩アゴニストを含む培地に３７℃で１時間暴
露し、同時に幾つかのウェルを、グルタミン酸塩アゴニ
ストを含まない培地に３７℃で１時間暴露した。
【００７３】培地を取り除きアセトン−メタノール
（１：１）０．５ｍｌを添加することにより、反応を停
止させた。次いで細胞を４℃で２０分間インキュベート
した。このアセトン−メタノール溶液をウェルから回収
し、遠心管に入れた。各ウェルを水０．５ｍｌですす
ぎ、対応する溶媒抽出液を入れた遠心管の中に洗液を合
した。１５０００ｇで１０分間遠心した後、上清を回収
した。
（１：１）０．５ｍｌを添加することにより、反応を停
止させた。次いで細胞を４℃で２０分間インキュベート
した。このアセトン−メタノール溶液をウェルから回収
し、遠心管に入れた。各ウェルを水０．５ｍｌですす
ぎ、対応する溶媒抽出液を入れた遠心管の中に洗液を合
した。１５０００ｇで１０分間遠心した後、上清を回収
した。
【００７４】ＰＩ加水分解生成物を分離するために、最
終濃度１Ｍの蟻酸アンモニウムおよび０．１Ｍの蟻酸を
含有する溶液１０ｍｌを各カートリッジに加え、引続き
蒸留水１０ｍｌで２回すすぐことにより、ＡＣＥＬＬ
ＰＬＵＳ ＱＭＡ（ウォーターズ・ディビジョン・オブ
・ミリポア・コーポレーション）カートリッジを調製し
た。細胞抽出液を蒸留水で５ｍｌに希釈し、次いで個々
のカートリッジに加えた。次に各カートリッジを５ｍＭ
四ほう酸ナトリウム溶液１０ｍｌで洗浄した。
終濃度１Ｍの蟻酸アンモニウムおよび０．１Ｍの蟻酸を
含有する溶液１０ｍｌを各カートリッジに加え、引続き
蒸留水１０ｍｌで２回すすぐことにより、ＡＣＥＬＬ
ＰＬＵＳ ＱＭＡ（ウォーターズ・ディビジョン・オブ
・ミリポア・コーポレーション）カートリッジを調製し
た。細胞抽出液を蒸留水で５ｍｌに希釈し、次いで個々
のカートリッジに加えた。次に各カートリッジを５ｍＭ
四ほう酸ナトリウム溶液１０ｍｌで洗浄した。
【００７５】０．１Ｍ蟻酸アンモニウム；０．１Ｍ蟻酸
および５ｍＭ四ほう酸ナトリウムを含有する溶液４ｍｌ
によって、標識されたホスホイノシチドをカートリッジ
から溶出した。溶出液をシンチレーションバイアルに集
めた。シンチレーション計数液（レディー・ソルブ・Ｈ
Ｐ）をこのバイアルに加え、放射能をベックマン・シン
チレーション・カウンターで測定した。
および５ｍＭ四ほう酸ナトリウムを含有する溶液４ｍｌ
によって、標識されたホスホイノシチドをカートリッジ
から溶出した。溶出液をシンチレーションバイアルに集
めた。シンチレーション計数液（レディー・ソルブ・Ｈ
Ｐ）をこのバイアルに加え、放射能をベックマン・シン
チレーション・カウンターで測定した。
【００７６】既知のグルタミン酸塩レセプターアゴニス
トであるキスカル酸塩（１０μＭ）へのＡＶ１２／ｐＲ
Ｓ１２１の暴露は、アゴニストに暴露させた細胞の基本
レベルに対し２００ないし３００％のＰＩ加水分解の増
加をもたらした。対照のＡＶ１２細胞においては、基本
レベルに対するＰＩ加水分解の増加は見いだされなかっ
た。
トであるキスカル酸塩（１０μＭ）へのＡＶ１２／ｐＲ
Ｓ１２１の暴露は、アゴニストに暴露させた細胞の基本
レベルに対し２００ないし３００％のＰＩ加水分解の増
加をもたらした。対照のＡＶ１２細胞においては、基本
レベルに対するＰＩ加水分解の増加は見いだされなかっ
た。
【００７７】実施例５ レセプターのサブユニットｃＤＮＡのアミノ末端コード
化末端に隣接するプラスミドに含まれる転写プロモータ
ーを認識するＲＮＡポリメラーゼを用いて、ｐＲＳ１１
７からの酵素的転写によって、ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプ
ターをコードしているＲＮＡ転写物を生成させた。プラ
スミドｐＲＳ１１７を制限酵素ＳａｌＩで処理して環状
ＤＮＡ中にｃＤＮＡ挿入物の３'末端に対し遠位の切断
１個を作り、このプラスミドＤＮＡを線状型に変換し
た。次いでこのＤＮＡを、ＧｐｐｐＧキャップヌクレオ
チド、ｒＡＴＰ、ｒＣＴＰ、ｒＵＴＰおよびｒＧＴＰの
存在下でＴ７ＲＮＡポリメラーゼとインキュベートし
た。得られた合成ＲＮＡ転写物をセファデックスＧ−５
０カラムを通過させることにより精製した。Ｔ７のよう
なバクテリオファージのＲＮＡポリメラーゼを用いるイ
ンビトロのＲＮＡ合成に関する詳細な記述については、
Ｐ．Ａ．クリーグおよびＤ．Ａ．メルトン、１５５巻、
メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）２５章、１９８７を参照
されたい。
化末端に隣接するプラスミドに含まれる転写プロモータ
ーを認識するＲＮＡポリメラーゼを用いて、ｐＲＳ１１
７からの酵素的転写によって、ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプ
ターをコードしているＲＮＡ転写物を生成させた。プラ
スミドｐＲＳ１１７を制限酵素ＳａｌＩで処理して環状
ＤＮＡ中にｃＤＮＡ挿入物の３'末端に対し遠位の切断
１個を作り、このプラスミドＤＮＡを線状型に変換し
た。次いでこのＤＮＡを、ＧｐｐｐＧキャップヌクレオ
チド、ｒＡＴＰ、ｒＣＴＰ、ｒＵＴＰおよびｒＧＴＰの
存在下でＴ７ＲＮＡポリメラーゼとインキュベートし
た。得られた合成ＲＮＡ転写物をセファデックスＧ−５
０カラムを通過させることにより精製した。Ｔ７のよう
なバクテリオファージのＲＮＡポリメラーゼを用いるイ
ンビトロのＲＮＡ合成に関する詳細な記述については、
Ｐ．Ａ．クリーグおよびＤ．Ａ．メルトン、１５５巻、
メソッズ・イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ
ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）２５章、１９８７を参照
されたい。
【００７８】実施例６ ツメガエルの卵母細胞における
ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプターの機能的発現 注射に好適な卵母細胞を、Ｃ．Ｊ．マークス−セクラお
よびＭ．Ｊ．Ｍ．ヒッチコック、メソッズ・イン・エン
ザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ）１５２巻（１９８７）に記載の方法を用いて雌
のアフリカ産ツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉ
ｓ）の成体から取得した。２ｍｇ／ｍｌの濃度のコラゲ
ナーゼ１ａ型（シグマ）で処理した後、卵胞を除去した
卵母細胞を、Ｍ．Ｊ．Ｍ．ヒッチコック等、メソッズ・
イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ）１５２巻２８章（１９８７）による
記載と本質上同様にして注射した。続いて実施例２に記
載のようにして調製した５ｎｇのＲＮＡ転写物を総容量
５０ｎｌで各卵母細胞に注射し、次いでこれらをバース
の塩溶液中１８℃で電気生理学的測定に必要なだけイン
キュベートした。
ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプターの機能的発現 注射に好適な卵母細胞を、Ｃ．Ｊ．マークス−セクラお
よびＭ．Ｊ．Ｍ．ヒッチコック、メソッズ・イン・エン
ザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ
ｏｇｙ）１５２巻（１９８７）に記載の方法を用いて雌
のアフリカ産ツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓ ｌａｅｖｉ
ｓ）の成体から取得した。２ｍｇ／ｍｌの濃度のコラゲ
ナーゼ１ａ型（シグマ）で処理した後、卵胞を除去した
卵母細胞を、Ｍ．Ｊ．Ｍ．ヒッチコック等、メソッズ・
イン・エンザイモロジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎ
ｚｙｍｏｌｏｇｙ）１５２巻２８章（１９８７）による
記載と本質上同様にして注射した。続いて実施例２に記
載のようにして調製した５ｎｇのＲＮＡ転写物を総容量
５０ｎｌで各卵母細胞に注射し、次いでこれらをバース
の塩溶液中１８℃で電気生理学的測定に必要なだけイン
キュベートした。
【００７９】ＨＳｍＧｌｕＲ１レセプターの存在を検出
するため、グルタミン酸塩アゴニストへの暴露に応答し
て卵母細胞膜を横切って流れる電流の電圧を記録するこ
とにより、レセプターが機能する能力を決定した。個々
の卵母細胞は拡散室（０．５ｍｌ容）に入れ、これに溶
液を迅速に灌流させた。薬物（アゴニストおよびアンタ
ゴニスト）は灌流溶液に添加することにより卵母細胞に
適用し、引続きこれらを対照溶液で洗い流した。対照溶
液は、９６ｎＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＫＣｌ、１．８ｎ
Ｍ ＣａＣｌ2、１ｍＭ ＭｇＣｌ2、および５ｍＭ Ｈ
ＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）を含有させた。電極を卵
母細胞に挿入した後、アキソクランプの１Ａ電圧クラン
プユニットの橋状回路を用いて電圧の記録を行なった。
微小電極を３Ｍ ＣｓＣｌで満たした。−７０ｍＶのク
ランプではさんだ卵母細胞の電気生理学的記録を、卵母
細胞へのＲＮＡの注射の３日後またはそれ以降に室温
（２０−２５℃）で行なった。１０μＭグルタミン酸塩
による卵母細胞の灌流に応答して、卵母細胞膜を横切る
４００ナノアンペアの内向き電流が観察された。観察さ
れた電流は、灌流液中のアゴニストの濃度に比例した。
得られた値から、種々のアゴニストに対するＥＣ50値
（最大応答の５０％が観察される濃度）を算出した。例
えば、グルタミン酸塩についてのＥＣ50値は０．０００
００２Ｍであり、キスカル酸塩についてのＥＣ50値は
０．００００００４Ｍであった。当業者には理解できる
であろうが、これらの結果は向代謝性グルタミン酸レセ
プターを示すものであった。ツメガエルの卵母細胞の電
気生理学についての詳細な議論については、Ｎ．ダスカ
ル、２２ ＣＲＣ・クリティカル・レビューズ・イン・
バイオケミストリー（ＣＲＣ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅ
ｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）３１７
（１９８７）を参照されたい。
するため、グルタミン酸塩アゴニストへの暴露に応答し
て卵母細胞膜を横切って流れる電流の電圧を記録するこ
とにより、レセプターが機能する能力を決定した。個々
の卵母細胞は拡散室（０．５ｍｌ容）に入れ、これに溶
液を迅速に灌流させた。薬物（アゴニストおよびアンタ
ゴニスト）は灌流溶液に添加することにより卵母細胞に
適用し、引続きこれらを対照溶液で洗い流した。対照溶
液は、９６ｎＭ ＮａＣｌ、２ｍＭ ＫＣｌ、１．８ｎ
Ｍ ＣａＣｌ2、１ｍＭ ＭｇＣｌ2、および５ｍＭ Ｈ
ＥＰＥＳ緩衝液（ｐＨ７．６）を含有させた。電極を卵
母細胞に挿入した後、アキソクランプの１Ａ電圧クラン
プユニットの橋状回路を用いて電圧の記録を行なった。
微小電極を３Ｍ ＣｓＣｌで満たした。−７０ｍＶのク
ランプではさんだ卵母細胞の電気生理学的記録を、卵母
細胞へのＲＮＡの注射の３日後またはそれ以降に室温
（２０−２５℃）で行なった。１０μＭグルタミン酸塩
による卵母細胞の灌流に応答して、卵母細胞膜を横切る
４００ナノアンペアの内向き電流が観察された。観察さ
れた電流は、灌流液中のアゴニストの濃度に比例した。
得られた値から、種々のアゴニストに対するＥＣ50値
（最大応答の５０％が観察される濃度）を算出した。例
えば、グルタミン酸塩についてのＥＣ50値は０．０００
００２Ｍであり、キスカル酸塩についてのＥＣ50値は
０．００００００４Ｍであった。当業者には理解できる
であろうが、これらの結果は向代謝性グルタミン酸レセ
プターを示すものであった。ツメガエルの卵母細胞の電
気生理学についての詳細な議論については、Ｎ．ダスカ
ル、２２ ＣＲＣ・クリティカル・レビューズ・イン・
バイオケミストリー（ＣＲＣ Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅ
ｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）３１７
（１９８７）を参照されたい。
【００８０】
配列番号：１ 配列の長さ：1194 配列の型：アミノ酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Met Val Gly Leu Leu Leu Phe Phe Phe Pro Ala Ile Phe Leu Glu Val 1 5 10 15 Ser Leu Leu Pro Arg Ser Pro Gly Arg Lys Val Leu Leu Ala Gly Ala 20 25 30 Ser Ser Gln Arg Ser Val Ala Arg Met Asp Gly Asp Val Ile Ile Gly 35 40 45 Ala Leu Phe Ser Val His His Gln Pro Pro Ala Glu Lys Val Pro Glu 50 55 60 Arg Lys Cys Gly Glu Ile Arg Glu Gln Tyr Gly Ile Gln Arg Val Glu 65 70 75 80 Ala Met Phe His Thr Leu Asp Lys Ile Asn Ala Asp Pro Val Leu Leu 85 90 95 Pro Asn Ile Thr Leu Gly Ser Glu Ile Arg Asp Ser Cys Trp His Ser 100 105 110 Ser Val Ala Leu Glu Gln Ser Ile Glu Phe Ile Arg Asp Ser Leu Ile 115 120 125 Ser Ile Arg Asp Glu Lys Asp Gly Ile Asn Arg Cys Leu Pro Asp Gly 130 135 140 Gln Ser Leu Pro Pro Gly Arg Thr Lys Lys Pro Ile Ala Gly Val Ile 145 150 155 160 Gly Pro Gly Ser Ser Ser Val Ala Ile Gln Val Gln Asn Leu Leu Gln 165 170 175 Leu Phe Asp Ile Pro Gln Ile Ala Tyr Ser Ala Thr Ser Ile Asp Leu 180 185 190 Ser Asp Lys Thr Leu Tyr Lys Tyr Phe Leu Arg Val Val Pro Ser Asp 195 200 205 Thr Leu Gln Ala Arg Ala Met Leu Asp Ile Val Lys Arg Tyr Asn Trp 210 215 220 Thr Tyr Val Ser Ala Val His Thr Glu Gly Asn Tyr Gly Glu Ser Gly 225 230 235 240 Met Asp Ala Phe Lys Glu Leu Ala Ala Gln Glu Gly Leu Cys Ile Ala 245 250 255 His Ser Asp Lys Ile Tyr Ser Asn Ala Gly Glu Lys Ser Phe Asp Arg 260 265 270 Leu Leu Arg Lys Leu Arg Glu Arg Leu Pro Lys Ala Arg Val Val Val 275 280 285 Cys Phe Cys Glu Gly Met Thr Val Arg Gly Leu Leu Ser Ala Met Arg 290 295 300 Arg Leu Gly Val Val Gly Glu Phe Ser Leu Ile Gly Ser Asp Gly Trp 305 310 315 320 Ala Asp Arg Asp Glu Val Ile Glu Gly Tyr Glu Val Glu Ala Asn Gly 325 330 335 Gly Ile Thr Ile Lys Leu Gln Ser Pro Glu Val Arg Ser Phe Asp Asp 340 345 350 Tyr Phe Leu Lys Leu Arg Leu Asp Thr Asn Thr Arg Asn Pro Trp Phe 355 360 365 Pro Glu Phe Trp Gln His Arg Phe Gln Cys Arg Leu Pro Gly His Leu 370 375 380 Leu Glu Asn Pro Asn Phe Lys Arg Ile Cys Thr Gly Asn Glu Ser Leu 385 390 395 400 Glu Glu Asn Tyr Val Gln Asp Ser Lys Met Gly Phe Val Ile Asn Ala 405 410 415 Ile Tyr Ala Met Ala His Gly Leu Gln Asn Met His His Ala Leu Cys 420 425 430 Pro Gly His Val Gly Leu Cys Asp Ala Met Lys Pro Ile Asp Gly Ser 435 440 445 Lys Leu Leu Asp Phe Leu Ile Lys Ser Ser Phe Ile Gly Val Ser Gly 450 455 460 Glu Glu Val Trp Phe Asp Glu Lys Gly Asp Ala Pro Gly Arg Tyr Asp 465 470 475 480 Ile Met Asn Leu Gln Tyr Thr Glu Ala Asn Arg Tyr Asp Tyr Val His 485 490 495 Val Gly Thr Trp His Glu Gly Val Leu Asn Ile Asp Asp Tyr Lys Ile 500 505 510 Gln Met Asn Lys Ser Gly Val Val Arg Ser Val Cys Ser Glu Pro Cys 515 520 525 Leu Lys Gly Gln Ile Lys Val Ile Arg Lys Gly Glu Val Ser Cys Cys 530 535 540 Trp Ile Cys Thr Ala Cys Lys Glu Asn Glu Tyr Val Gln Asp Glu Phe 545 550 555 560 Thr Cys Lys Ala Cys Asp Leu Gly Trp Trp Pro Asn Ala Asp Leu Thr 565 570 575 Gly Cys Glu Pro Ile Pro Val Arg Tyr Leu Glu Trp Ser Asn Ile Glu 580 585 590 Pro Ile Ile Ala Ile Ala Phe Ser Cys Leu Gly Ile Leu Val Thr Leu 595 600 605 Phe Val Thr Leu Ile Phe Val Leu Tyr Arg Asp Thr Pro Val Val Lys 610 615 620 Ser Ser Ser Arg Glu Leu Cys Tyr Ile Ile Leu Ala Gly Ile Phe Leu 625 630 635 640 Gly Tyr Val Cys Pro Phe Thr Leu Ile Ala Lys Pro Thr Thr Thr Ser 645 650 655 Cys Tyr Leu Gln Arg Leu Leu Val Gly Leu Ser Ser Ala Met Cys Tyr 660 665 670 Ser Ala Leu Val Thr Lys Thr Asn Arg Ile Ala Arg Ile Leu Ala Gly 675 680 685 Ser Lys Lys Lys Ile Cys Thr Arg Lys Pro Arg Phe Met Ser Ala Trp 690 695 700 Ala Gln Val Ile Ile Ala Ser Ile Leu Ile Ser Val Gln Leu Thr Leu 705 710 715 720 Val Val Thr Leu Ile Ile Met Glu Pro Pro Met Pro Ile Leu Ser Tyr 725 730 735 Pro Ser Ile Lys Glu Val Tyr Leu Ile Cys Asn Thr Ser Asn Leu Gly 740 745 750 Val Val Ala Pro Leu Gly Tyr Asn Gly Leu Leu Ile Met Ser Cys Thr 755 760 765 Tyr Tyr Ala Phe Lys Thr Arg Asn Val Pro Ala Asn Phe Asn Glu Ala 770 775 780 Lys Tyr Ile Ala Phe Thr Met Tyr Thr Thr Cys Ile Ile Trp Leu Ala 785 790 795 800 Phe Val Pro Ile Tyr Phe Gly Ser Asn Tyr Lys Ile Ile Thr Thr Cys 805 810 815 Phe Ala Val Ser Leu Ser Val Thr Val Ala Leu Gly Cys Met Phe Thr 820 825 830 Pro Lys Met Tyr Ile Ile Ile Ala Lys Pro Glu Arg Asn Val Arg Ser 835 840 845 Ala Phe Thr Thr Ser Asp Val Val Arg Met His Val Gly Asp Gly Lys 850 855 860 Leu Pro Cys Arg Ser Asn Thr Phe Leu Asn Ile Phe Arg Arg Lys Lys 865 870 875 880 Ala Gly Ala Gly Asn Ala Asn Ser Asn Gly Lys Ser Val Ser Trp Ser 885 890 895 Glu Pro Gly Gly Gly Gln Val Pro Lys Gly Gln His Met Trp His Arg 900 905 910 Leu Ser Val His Val Lys Thr Asn Glu Thr Ala Cys Asn Gln Thr Ala 915 920 925 Val Ile Lys Pro Leu Thr Lys Ser Tyr Gln Gly Ser Gly Lys Ser Leu 930 935 940 Thr Phe Ser Asp Thr Ser Thr Lys Thr Leu Tyr Asn Val Glu Glu Glu 945 950 955 960 Glu Asp Ala Gln Pro Ile Arg Phe Ser Pro Pro Gly Ser Pro Ser Met 965 970 975 Val Val His Arg Arg Val Pro Ser Ala Ala Thr Thr Pro Pro Leu Pro 980 985 990 Pro His Leu Thr Ala Glu Glu Thr Pro Leu Phe Leu Ala Glu Pro Ala 995 1000 1005 Leu Pro Lys Gly Leu Pro Pro Pro Leu Gln Gln Gln Gln Gln Pro Pro 1010 1015 1020 Pro Gln Gln Lys Ser Leu Met Asp Gln Leu Gln Gly Val Val Ser Asn 1025 1030 1035 1040 Phe Ser Thr Ala Ile Pro Asp Phe His Ala Val Leu Ala Gly Pro Gly 1045 1050 1055 Gly Pro Gly Asn Gly Leu Arg Ser Leu Tyr Pro Pro Pro Pro Pro Pro 1060 1065 1070 Gln His Leu Gln Met Leu Pro Leu Gln Leu Ser Thr Phe Gly Glu Glu 1075 1080 1085 Leu Val Ser Pro Pro Ala Asp Asp Asp Asp Asp Ser Glu Arg Phe Lys 1090 1095 1100 Leu Leu Gln Glu Tyr Val Tyr Glu His Glu Arg Glu Gly Asn Thr Glu 1105 1110 1115 1120 Glu Asp Glu Leu Glu Glu Glu Glu Glu Asp Leu Gln Ala Ala Ser Lys 1125 1130 1135 Leu Thr Pro Asp Asp Ser Pro Ala Leu Thr Pro Pro Ser Pro Phe Arg 1140 1145 1150 Asp Ser Val Ala Ser Gly Ser Ser Val Pro Ser Ser Pro Val Ser Glu 1155 1160 1165 Ser Val Leu Cys Thr Pro Pro Asn Val Ser Tyr Ala Ser Val Ile Leu 1170 1175 1180 Arg Asp Tyr Lys Gln Ser Ser Ser Thr Leu 1185 1190
【００８１】配列番号：２ 配列の長さ：3582 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cＤＮＡ 配列の特徴 名称／キー：CDS 位置：1..3582 配列 ATGGTCGGGC TCCTTTTGTT TTTTTTCCCA GCGATCTTTT TGGAGGTGTC CCTTCTCCCC 60 AGAAGCCCCG GCAGGAAAGT GTTGCTGGCA GGAGCGTCGT CTCAGCGCTC GGTGGCCAGA 120 ATGGACGGAG ATGTCATCAT TGGAGCCCTC TTCTCAGTCC ATCACCAGCC TCCGGCCGAG 180 AAAGTGCCCG AGAGGAAGTG TGGGGAGATC AGGGAGCAGT ATGGCATCCA GAGGGTGGAG 240 GCCATGTTCC ACACGTTGGA TAAGATCAAC GCGGACCCGG TCCTCCTGCC CAACATCACC 300 CTGGGCAGTG AGATCCGGGA CTCCTGCTGG CACTCTTCCG TGGCTCTGGA ACAGAGCATT 360 GAGTTCATTA GGGACTCTCT GATTTCCATT CGAGATGAGA AGGATGGGAT CAACCGGTGT 420 CTGCCTGACG GCCAGTCCCT CCCCCCAGGC AGGACTAAGA AGCCCATTGC GGGAGTGATC 480 GGTCCCGGCT CCAGCTCTGT AGCCATTCAA GTGCAGAACC TGCTCCAGCT CTTCGACATC 540 CCCCAGATCG CTTATTCAGC CACAAGCATC GACCTGAGTG ACAAAACTTT GTACAAATAC 600 TTCCTGAGGG TTGTCCCTTC TGACACTTTG CAGGCAAGGG CCATGCTTGA CATAGTCAAA 660 CGTTACAATT GGACCTATGT CTCTGCAGTC CACACGGAAG GGAATTATGG GGAGAGCGGA 720 ATGGACGCTT TCAAAGAGCT GGCTGCCCAG GAAGGCCTCT GTATCGCCCA TTCTGACAAA 780 ATCTACAGCA ACGCTGGGGA GAAGAGCTTT GACCGACTCT TGCGCAAACT CCGAGAGAGG 840 CTTCCCAAGG CTAGAGTGGT GGTCTGCTTC TGTGAAGGCA TGACAGTGCG AGGACTCCTG 900 AGCGCCATGC GGCGCCTTGG CGTCGTGGGC GAGTTCTCAC TCATTGGAAG TGATGGATGG 960 GCAGACAGAG ATGAAGTCAT TGAAGGTTAT GAGGTGGAAG CCAACGGGGG AATCACGATA 1020 AAGCTGCAGT CTCCAGAGGT CAGGTCATTT GATGATTATT TCCTGAAACT GAGGCTGGAC 1080 ACTAACACGA GGAATCCCTG GTTCCCTGAG TTCTGGCAAC ATCGGTTCCA GTGCCGCCTT 1140 CCAGGACACC TTCTGGAAAA TCCCAACTTT AAACGAATCT GCACAGGCAA TGAAAGCTTA 1200 GAAGAAAACT ATGTCCAGGA CAGTAAGATG GGGTTTGTCA TCAATGCCAT CTATGCCATG 1260 GCACATGGGC TGCAGAACAT GCACCATGCC CTCTGCCCTG GCCACGTGGG CCTCTGCGAT 1320 GCCATGAAGC CCATCGACGG CAGCAAGCTG CTGGACTTCC TCATCAAGTC CTCATTCATT 1380 GGAGTATCTG GAGAGGAGGT GTGGTTTGAT GAGAAAGGAG ACGCTCCTGG AAGGTATGAT 1440 ATCATGAATC TGCAGTACAC TGAAGCTAAT CGCTATGACT ATGTGCACGT TGGAACCTGG 1500 CATGAAGGAG TGCTGAACAT TGATGATTAC AAAATCCAGA TGAACAAGAG TGGAGTGGTG 1560 CGGTCTGTGT GCAGTGAGCC TTGCTTAAAG GGCCAGATTA AGGTTATACG GAAAGGAGAA 1620 GTGAGCTGCT GCTGGATTTG CACGGCCTGC AAAGAGAATG AATATGTGCA AGATGAGTTC 1680 ACCTGCAAAG CTTGTGACTT GGGATGGTGG CCCAATGCAG ATCTAACAGG CTGTGAGCCC 1740 ATTCCTGTGC GCTATCTTGA GTGGAGCAAC ATCGAACCCA TTATAGCCAT CGCCTTTTCA 1800 TGCCTGGGAA TCCTTGTTAC CTTGTTTGTC ACCCTAATCT TTGTACTGTA CCGGGACACA 1860 CCAGTGGTCA AATCCTCCAG TCGGGAGCTC TGCTACATCA TCCTAGCTGG CATCTTCCTT 1920 GGTTATGTGT GCCCATTCAC TCTCATTGCC AAACCTACTA CCACCTCCTG CTACCTCCAG 1980 CGCCTCTTGG TTGGCCTCTC CTCTGCGATG TGCTACTCTG CTTTAGTGAC TAAAACCAAT 2040 CGTATTGCAC GCATCCTGGC TGGCAGCAAG AAGAAGATCT GCACCCGGAA GCCCAGGTTC 2100 ATGAGTGCCT GGGCTCAGGT GATCATTGCC TCAATTCTGA TTAGTGTGCA ACTAACCCTG 2160 GTGGTAACCC TGATCATCAT GGAACCCCCT ATGCCCATTC TGTCCTACCC AAGTATCAAG 2220 GAAGTCTACC TTATCTGCAA TACCAGCAAC CTGGGTGTGG TGGCCCCTTT GGGCTACAAT 2280 GGACTCCTCA TCATGAGCTG TACCTACTAT GCCTTCAAGA CCCGCAACGT GCCCGCCAAC 2340 TTCAACGAGG CCAAATATAT CGCGTTCACC ATGTACACCA CCTGTATCAT CTGGCTAGCT 2400 TTTGTGCCCA TTTACTTTGG GAGCAACTAC AAGATCATCA CAACTTGCTT TGCAGTGAGT 2460 CTCAGTGTAA CAGTGGCTCT GGGGTGCATG TTCACTCCCA AGATGTACAT CATTATTGCC 2520 AAGCCTGAGA GGAATGTCCG CAGTGCCTTC ACCACCTCTG ATGTTGTCCG CATGCATGTT 2580 GGCGATGGCA AGCTGCCCTG CCGCTCCAAC ACTTTCCTCA ACATCTTCCG AAGAAAGAAG 2640 GCAGGGGCAG GGAATGCCAA TTCTAATGGC AAGTCTGTGT CATGGTCTGA ACCAGGTGGA 2700 GGACAGGTGC CCAAGGGACA GCATATGTGG CACCGCCTCT CTGTGCACGT GAAGACCAAT 2760 GAGACGGCCT GCAACCAAAC AGCCGTCATC AAACCCCTCA CTAAAAGTTA CCAAGGCTCT 2820 GGCAAGAGCC TGACCTTTTC AGATACCAGC ACCAAGACCC TTTACAACGT AGAGGAGGAG 2880 GAGGATGCCC AGCCGATTCG CTTTAGCCCG CCTGGTAGCC CTTCCATGGT GGTGCACAGG 2940 CGCGTGCCAA GCGCGGCGAC CACTCCGCCT CTGCCGCCCC ACCTGACCGC AGAGGAGACC 3000 CCCCTCTTCC TGGCCGAACC AGCCCTCCCC AAGGGCTTGC CCCCTCCTCT CCAGCAGCAG 3060 CAGCAACCCC CTCCACAGCA GAAATCGCTG ATGGACCAGC TCCAGGGAGT GGTCAGCAAC 3120 TTCAGTACCG CGATCCCGGA TTTTCACGCG GTGCTGGCAG GCCCCGGGGG TCCCGGGAAC 3180 GGGCTGCGGT CCCTGTACCC GCCCCCGCCA CCTCCGCAGC ACCTGCAGAT GCTGCCGCTG 3240 CAGCTGAGCA CCTTTGGGGA GGAGCTGGTC TCCCCGCCCG CGGACGACGA CGACGACAGC 3300 GAGAGGTTTA AGCTCCTCCA GGAGTACGTG TATGAGCACG AGCGGGAAGG GAACACCGAA 3360 GAAGACGAAC TGGAAGAGGA GGAGGAGGAC CTGCAGGCGG CCAGCAAACT GACCCCGGAT 3420 GATTCGCCTG CGCTGACGCC TCCGTCGCCT TTCCGCGACT CGGTGGCCTC GGGCAGCTCG 3480 GTGCCCAGCT CCCCAGTGTC CGAGTCGGTG CTCTGCACCC CTCCCAACGT ATCCTACGCC 3540 TCTGTCATTC TGCGGGACTA CAAGCAAAGC TCTTCCACCC TG 3582
【００８２】配列番号：３ 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cＤＮＡ 配列の特徴 名称／キー：CDS 位置：1..60 配列 ATGGTCGGGC TCCTTTTGTT TTTTTTCCCA GCGATCTTTT TGGAGGTGTC CCTTCTCCCC 60
【００８３】配列番号：４ 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cＤＮＡ 配列の特徴 名称／キー：CDS 位置：1..60 配列 CCAGGACACC TTCTGGAAAA TCCCAACTTT AAACGAATCT GCACAGGCAA TGAAAGCTTA 60
【００８４】配列番号：５ 配列の長さ：60 配列の型：核酸 鎖の数：両形態 トポロジー：直鎖状 配列の種類：cＤＮＡ 配列の特徴 名称／キー：CDS 位置：1..60 配列 ＡＡＣＧＴＡＴＣＣＴ ＡＣＧＣＣＴＣＴＧＴ ＣＡＴＴＣＴＧＣＧＧ ＧＡＣ
ＴＡＣＡＡＧＣ ＡＡＡＧＣＴＣＴＴＣ ＣＡＣＣＣＴＧＴＡＡ ６０
ＴＡＣＡＡＧＣ ＡＡＡＧＣＴＣＴＴＣ ＣＡＣＣＣＴＧＴＡＡ ６０
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｎ 15/12 15/70 7236−4Ｂ Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ (72)発明者 ナンシー・ゲイル・メイン アメリカ合衆国46226インディアナ州イン ディアナポリス、ロックスベリー・テラス 5524エイ番 (72)発明者 ロバート・レオン・シャープ アメリカ合衆国46202インディアナ州イン ディアナポリス、ノース・アラバマ・ナン バー・シー1304番 (72)発明者 イボンヌ・マリー・シュナイダー アメリカ合衆国46256インディアナ州イン ディアナポリス、スキッパーズ・ウェイ 8807番
Claims (6)
- 【請求項１】 配列番号１のアミノ酸配列またはその機
能的等価物からなるヒト向代謝性グルタミン酸レセプタ
ー蛋白。 - 【請求項２】 配列番号１である請求項１に記載のヒト
向代謝性グルタミン酸レセプター蛋白。 - 【請求項３】 請求項１に記載の蛋白の全部または一部
をコードしている核酸配列からなる核酸化合物。 - 【請求項４】 配列番号２である請求項３に記載の核酸
化合物。 - 【請求項５】 請求項３または請求項４の核酸化合物か
らなる組み替えＤＮＡベクター。 - 【請求項６】 請求項５の組み替えＤＮＡベクターによ
りトランスフェクトされた宿主細胞。
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