JPH06225792A - ステロイド転化プロセス - Google Patents
ステロイド転化プロセスInfo
- Publication number
- JPH06225792A JPH06225792A JP25092693A JP25092693A JPH06225792A JP H06225792 A JPH06225792 A JP H06225792A JP 25092693 A JP25092693 A JP 25092693A JP 25092693 A JP25092693 A JP 25092693A JP H06225792 A JPH06225792 A JP H06225792A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- dione
- steroid
- pregna
- methyl
- diene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/02—Dehydrogenating; Dehydroxylating
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明の目的は、ステロイド変換方法の提供
である。 【構成】 本発明は、芳香族炭化水素からなる水と混ざ
らない溶媒と外因性電子キャリヤ−の存在下に、アルト
ロバクタ−・シンプレックス又はバクテリウム・シクロ
オキシダンスに1,2-飽和ステロイドを露出することから
なる、1,2-飽和ステロイドを1,2-デヒドロステロイドへ
変換する改良法に関する。
である。 【構成】 本発明は、芳香族炭化水素からなる水と混ざ
らない溶媒と外因性電子キャリヤ−の存在下に、アルト
ロバクタ−・シンプレックス又はバクテリウム・シクロ
オキシダンスに1,2-飽和ステロイドを露出することから
なる、1,2-飽和ステロイドを1,2-デヒドロステロイドへ
変換する改良法に関する。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】コ−チコステロイド類が治療に初
めて使われた実例は1950年代で、リュ−マチ様関節炎に
コ−チゾンアセテ−ト処置を導入した。
めて使われた実例は1950年代で、リュ−マチ様関節炎に
コ−チゾンアセテ−ト処置を導入した。
【０００２】その後の研究で、ハイドロコ−チゾンとコ
−チゾンの1,2-位置へ不飽和を挿入すると、生ずるステ
ロイドのプレドニソロン及びプレドニソンの効果が高く
なり、薬剤で誘発される塩の滞留が少なくなることが立
証された。コ−チコステロイドに応答する病気の処置用
に使われるほとんどのその他のステロイド類はそれ以
後、ステロイド分子の1,2-位置に二重結合を含むものが
合成されるようになった。1977年に、ステロ−ル前駆物
質からコ−チコステロイド類を合成する新しい方法を示
す二つの米国特許が発行された。合衆国特許第4,035,23
6号は、シトステロ−ル、スチグマステロ−ル又はコレ
ステロ−ルの発酵を通して9α-ヒドロキシアンドロステ
ンジオンをつくる方法を記述している。合衆国特許第4,
041,055号はこのアンドロステンから医学的に有用なコ
−チコステロイド類を合成する一般的方法を明らかにし
ている。この化学で扱われる中間体類は3-ケト-Δ
4,9(11)立体配置をもちうる。
−チゾンの1,2-位置へ不飽和を挿入すると、生ずるステ
ロイドのプレドニソロン及びプレドニソンの効果が高く
なり、薬剤で誘発される塩の滞留が少なくなることが立
証された。コ−チコステロイドに応答する病気の処置用
に使われるほとんどのその他のステロイド類はそれ以
後、ステロイド分子の1,2-位置に二重結合を含むものが
合成されるようになった。1977年に、ステロ−ル前駆物
質からコ−チコステロイド類を合成する新しい方法を示
す二つの米国特許が発行された。合衆国特許第4,035,23
6号は、シトステロ−ル、スチグマステロ−ル又はコレ
ステロ−ルの発酵を通して9α-ヒドロキシアンドロステ
ンジオンをつくる方法を記述している。合衆国特許第4,
041,055号はこのアンドロステンから医学的に有用なコ
−チコステロイド類を合成する一般的方法を明らかにし
ている。この化学で扱われる中間体類は3-ケト-Δ
4,9(11)立体配置をもちうる。
【０００３】
【従来の技術と発明が解決しようとする課題】以下は、
1,2-飽和ステロイドから対応する1,2-デヒドロステロイ
ドへの生物学的転化を明らかにした先行技術の方法であ
る。
1,2-飽和ステロイドから対応する1,2-デヒドロステロイ
ドへの生物学的転化を明らかにした先行技術の方法であ
る。
【０００４】合衆国特許第2,837,464号「コリネバクテ
リウム(Corynebacterium)によるジエン類の製造法」 アルトロバクタ−（コリネバクテリウム）・シンプレッ
クスによる発酵液中のステロイド類の1-脱水素の記述。
リウム(Corynebacterium)によるジエン類の製造法」 アルトロバクタ−（コリネバクテリウム）・シンプレッ
クスによる発酵液中のステロイド類の1-脱水素の記述。
【０００５】「１-デヒドロステロイド類の製法」と題
する合衆国特許第3,360,439号。 基質及び水素キャリヤ−と混合する前に、低級アルカノ
−ル又はアセトンのような低級アルカノンで事前処理さ
れたＡ．シンプレックス菌体の使用によるステロイド類
の1-脱水素の記述。
する合衆国特許第3,360,439号。 基質及び水素キャリヤ−と混合する前に、低級アルカノ
−ル又はアセトンのような低級アルカノンで事前処理さ
れたＡ．シンプレックス菌体の使用によるステロイド類
の1-脱水素の記述。
【０００６】チャ−ネイ・ダブリュ−(Charney. W.）及
びハ−ゾグ・エッチ(Herzog. H.)、1967年、ステロイド
の微生物的転化。アカデミック・プレス社、ニュ−ヨ−
ク、４〜９頁、236〜261頁。 ステロイドの生物転化に関する歴史的背景、及び1-脱水
素を行なうことで知られている微生物の分類学的一覧
表。
びハ−ゾグ・エッチ(Herzog. H.)、1967年、ステロイド
の微生物的転化。アカデミック・プレス社、ニュ−ヨ−
ク、４〜９頁、236〜261頁。 ステロイドの生物転化に関する歴史的背景、及び1-脱水
素を行なうことで知られている微生物の分類学的一覧
表。
【０００７】T. ヤマネ、H. ナカタニ、E. サダ、T. オ
マタ、A. タナカ及びS. フクイ、Biotechnology and Bi
oengineering 21巻 1979年。 この著者らは５０％ベンゼン−ヘプタンからなる混合物
中で、ノカルジア・ロドクラス(Nocardia rhodocrous)
による4-アンドロステン-3,17-ジオンの1-脱水素の研究
を行なった。生物転化混合物にこの溶媒を加える既報の
利点は、反応速度を180の係数で増加させるにあった。
しかし、ベンゼンは知られた発癌物質である。ノカルジ
ア・ロドクラスの活性に好ましい電子受容体はフェナジ
ンメトサルフェ−トであった。この電子受容体は価格が
高すぎ、かつ不安定すぎるため、生物転化製造法でこの
微生物活性を実用的又は有用にはできない。ノカルジア
・ロドクラスの酵素は、アルトロバクタ−・シンプレッ
クス用に選ばれる電子受容体のメナジオンの存在下に活
性を持たない。Ｎ. ロドクラス中の酵素はＡ. シンプレ
ックスでつくられるものとは異なっているに違いない。
反応は、ステロイドでわずか２０％飽和された有機溶媒
水準で進められた。ステロイド濃度を高めると反応速度
が低下することが示された。酸素は1-脱水素反応の必須
試薬である。溶媒（５０％ベンゼン−ヘプタン）は酸素
の存在下に可燃性である。爆発的な環境を作らずに反応
器へ酸素を導入する方法は論じられなかった。
マタ、A. タナカ及びS. フクイ、Biotechnology and Bi
oengineering 21巻 1979年。 この著者らは５０％ベンゼン−ヘプタンからなる混合物
中で、ノカルジア・ロドクラス(Nocardia rhodocrous)
による4-アンドロステン-3,17-ジオンの1-脱水素の研究
を行なった。生物転化混合物にこの溶媒を加える既報の
利点は、反応速度を180の係数で増加させるにあった。
しかし、ベンゼンは知られた発癌物質である。ノカルジ
ア・ロドクラスの活性に好ましい電子受容体はフェナジ
ンメトサルフェ−トであった。この電子受容体は価格が
高すぎ、かつ不安定すぎるため、生物転化製造法でこの
微生物活性を実用的又は有用にはできない。ノカルジア
・ロドクラスの酵素は、アルトロバクタ−・シンプレッ
クス用に選ばれる電子受容体のメナジオンの存在下に活
性を持たない。Ｎ. ロドクラス中の酵素はＡ. シンプレ
ックスでつくられるものとは異なっているに違いない。
反応は、ステロイドでわずか２０％飽和された有機溶媒
水準で進められた。ステロイド濃度を高めると反応速度
が低下することが示された。酸素は1-脱水素反応の必須
試薬である。溶媒（５０％ベンゼン−ヘプタン）は酸素
の存在下に可燃性である。爆発的な環境を作らずに反応
器へ酸素を導入する方法は論じられなかった。
【０００８】K. ソノモト、I. ジン、A. タナカ及びS.
フクイ、Agric. Biol. Chem、４４巻 1119-1126頁、198
0年。 同じ研究室がＡ. シンプレックスによるハイドロコ−チ
ゾンの1-脱水素を研究した。水と混ざらないｎ-ブタノ
−ルとｎ-アミルアルコ−ルの２溶媒を試験したが、こ
れらの溶媒の存在下に生物転化反応は進行しなかった。
１０％メタノ−ル−水や１０％プロピレングリコ−ル−
水のような水と混ざる溶媒が好ましい溶媒として選ばれ
た。先行技術は本改良法を開示又は示唆しなかった。
フクイ、Agric. Biol. Chem、４４巻 1119-1126頁、198
0年。 同じ研究室がＡ. シンプレックスによるハイドロコ−チ
ゾンの1-脱水素を研究した。水と混ざらないｎ-ブタノ
−ルとｎ-アミルアルコ−ルの２溶媒を試験したが、こ
れらの溶媒の存在下に生物転化反応は進行しなかった。
１０％メタノ−ル−水や１０％プロピレングリコ−ル−
水のような水と混ざる溶媒が好ましい溶媒として選ばれ
た。先行技術は本改良法を開示又は示唆しなかった。
【０００９】
【課題を解決する手段】本願分割出願の親出願の発明で
はステロイドの１-脱水素を触媒できる空気乾燥又は加
熱乾燥された微生物の菌体を使用して、水性環境で、特
に外因性の電子受容体の存在下に、最もよく知られた先
行技術の方法で得られるよりも、1,2-飽和ステロイドか
ら対応する1,2-デヒドロ誘導体への能率的な転化が得ら
れる。
はステロイドの１-脱水素を触媒できる空気乾燥又は加
熱乾燥された微生物の菌体を使用して、水性環境で、特
に外因性の電子受容体の存在下に、最もよく知られた先
行技術の方法で得られるよりも、1,2-飽和ステロイドか
ら対応する1,2-デヒドロ誘導体への能率的な転化が得ら
れる。
【００１０】本発明ではＡ. シンプレックス菌体と外因
性電子受容体及び脱水素化されるステロイドからなる水
性スラリ−に、水と混ざらない溶媒として芳香族炭化水
素を添加することを伴う方法が開示され特許請求されて
いる。スラリ−をかきまぜ、気体空洞の酸素含有量が酸
素の最少燃焼量より低くなる程度に酸素を供給するか、
又は有機溶媒の引火点より低温で反応を行なう。
性電子受容体及び脱水素化されるステロイドからなる水
性スラリ−に、水と混ざらない溶媒として芳香族炭化水
素を添加することを伴う方法が開示され特許請求されて
いる。スラリ−をかきまぜ、気体空洞の酸素含有量が酸
素の最少燃焼量より低くなる程度に酸素を供給するか、
又は有機溶媒の引火点より低温で反応を行なう。
【００１１】これらの手順は以下の理由から、微生物に
よる先行技術のステロイド脱水素技術より優れている。 ａ）この生物転化では、未転化ステロイド基質水準が低
くなる。 ｂ）この方法は、より高いステロイド濃度で実施でき
る。 ｃ）所定量のステロイドを転化するのに、微生物菌体、
例えばＡ. シンプレックスの量が少なくて済む。 ｄ）本方法は、ステロイド中に存在する有機可溶性不純
物、微生物菌体内に存在する不純物、又は菌体によって
ステロイドからつくられる不純物に対する耐性が大き
い。 ｅ）微生物菌体内に存在するステロイド分解酵素を減少
又は全面的に排除するため、望んでいる生成物のより高
収量が得られる。 更に、ノカルジア・ロドクラスのようなその他の微生物
活性でステロイドを脱水素させる先行技術より溶媒手順
が優れている。というのは、Ａ. シンプレックスで触媒
される反応はメナジオンのような安定で安価が電子受容
体で実施できるからである。
よる先行技術のステロイド脱水素技術より優れている。 ａ）この生物転化では、未転化ステロイド基質水準が低
くなる。 ｂ）この方法は、より高いステロイド濃度で実施でき
る。 ｃ）所定量のステロイドを転化するのに、微生物菌体、
例えばＡ. シンプレックスの量が少なくて済む。 ｄ）本方法は、ステロイド中に存在する有機可溶性不純
物、微生物菌体内に存在する不純物、又は菌体によって
ステロイドからつくられる不純物に対する耐性が大き
い。 ｅ）微生物菌体内に存在するステロイド分解酵素を減少
又は全面的に排除するため、望んでいる生成物のより高
収量が得られる。 更に、ノカルジア・ロドクラスのようなその他の微生物
活性でステロイドを脱水素させる先行技術より溶媒手順
が優れている。というのは、Ａ. シンプレックスで触媒
される反応はメナジオンのような安定で安価が電子受容
体で実施できるからである。
【００１２】微生物 本方法に使用できる微生物は1-脱水素菌として知られる
周知の多数微生物の任意のものである。このような微生
物は、 チャ−ネイ・ダブリュ−(Charney. W.）及びハ
−ゾグ・エッチ(Herzog. H.)、1967年、「ステロイド類
の微生物転化」（アカデミック・プレス社、ニュ−ヨ−
ク）、に名前をあげてある。
周知の多数微生物の任意のものである。このような微生
物は、 チャ−ネイ・ダブリュ−(Charney. W.）及びハ
−ゾグ・エッチ(Herzog. H.)、1967年、「ステロイド類
の微生物転化」（アカデミック・プレス社、ニュ−ヨ−
ク）、に名前をあげてある。
【００１３】ステロイドの1-脱水素を行なう細菌は、
「バ−ギ−ズマニュアルオブデタ−ミネ−ティブバイオ
ロジ−」第８版で確定された２群に分けられる。本明細
書に記載の手順は、「第１７部・放線菌及び関連生物」
に含まれるアルトロバクタ−属とコリネバクテリウム属
からの種に対して実証することに成功した。ノカルジ
ア、ミコバクテリウム、ストレプトミセス及びバクテリ
ウムのような第１７部のその他の幾つかの属の１−脱水
素種も恐らく有用である。
「バ−ギ−ズマニュアルオブデタ−ミネ−ティブバイオ
ロジ−」第８版で確定された２群に分けられる。本明細
書に記載の手順は、「第１７部・放線菌及び関連生物」
に含まれるアルトロバクタ−属とコリネバクテリウム属
からの種に対して実証することに成功した。ノカルジ
ア、ミコバクテリウム、ストレプトミセス及びバクテリ
ウムのような第１７部のその他の幾つかの属の１−脱水
素種も恐らく有用である。
【００１４】ステロイド類の1-脱水素を行なうことが知
られている一般に入手可能な２つの微生物が、この種の
方法に役立つことが示された。合衆国特許第3,065,146
号に1-脱水素菌-ATCC No.12673として包含されるバクテ
リウム・シクロオキシダンスは、有用な微生物として検
査された。ステロイドの1-脱水素にもつと広範囲に使わ
れた細菌はアルトロバクタ−・シンプレックス、ATCC 6
946であり、これは合衆国特許第2,837,464号に明らかに
されている。このため、以下の多くは本方法を例示する
のにこの微生物を使用している。しかし、本方法が任意
の1-脱水素微生物の使用を含めることを理解すべきであ
る。
られている一般に入手可能な２つの微生物が、この種の
方法に役立つことが示された。合衆国特許第3,065,146
号に1-脱水素菌-ATCC No.12673として包含されるバクテ
リウム・シクロオキシダンスは、有用な微生物として検
査された。ステロイドの1-脱水素にもつと広範囲に使わ
れた細菌はアルトロバクタ−・シンプレックス、ATCC 6
946であり、これは合衆国特許第2,837,464号に明らかに
されている。このため、以下の多くは本方法を例示する
のにこの微生物を使用している。しかし、本方法が任意
の1-脱水素微生物の使用を含めることを理解すべきであ
る。
【００１５】微生物の生育 微生物は以下のものを含有する水性栄養培地中で生育す
る。 ａ）生育に必要な窒素を供給する硝酸塩又はアンモニウ
ム塩のような無機化合物又は有機窒素化合物（酵母エキ
ス、ペフトン、コ−ンスチ−プリカ−等）。 ｂ）炭素・エネルギ−源、例えば炭水化物と糖誘導体、
油、脂肪酸、及びそれらのメチルエステル、アルコ−
ル、アミノ酸又は有機酸類。 ｃ）イオン及び微量元素、例えば水道水又は（コ−ンス
チ−プリカ−のような）精製度の低い培地成分によって
供給される水準のナトリウム、カリウム、マグネシウ
ム、燐酸塩、硫酸塩、マンガン、銅、コバルト、モリブ
デン等。 生物は生育のため大気中に存在する酸素を必要とする。
生育温度の範囲は１０〜４５℃であり、Ａ. シンプレッ
クスについては２８〜３７℃が最適である。生育の最適
ｐＨは中性付近である。
る。 ａ）生育に必要な窒素を供給する硝酸塩又はアンモニウ
ム塩のような無機化合物又は有機窒素化合物（酵母エキ
ス、ペフトン、コ−ンスチ−プリカ−等）。 ｂ）炭素・エネルギ−源、例えば炭水化物と糖誘導体、
油、脂肪酸、及びそれらのメチルエステル、アルコ−
ル、アミノ酸又は有機酸類。 ｃ）イオン及び微量元素、例えば水道水又は（コ−ンス
チ−プリカ−のような）精製度の低い培地成分によって
供給される水準のナトリウム、カリウム、マグネシウ
ム、燐酸塩、硫酸塩、マンガン、銅、コバルト、モリブ
デン等。 生物は生育のため大気中に存在する酸素を必要とする。
生育温度の範囲は１０〜４５℃であり、Ａ. シンプレッ
クスについては２８〜３７℃が最適である。生育の最適
ｐＨは中性付近である。
【００１６】ステロイド-1-脱水素酵素の産生 アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン又はコ−チゾンアセ
テ−トのような1,2-飽和3-ケト-ステロイド化合物を培
地の0.005％(w/v)又はそれ以上の水準で加えることによ
って、菌体のステロイド-1-脱水素酵素活性が誘発され
る。誘発物質の存在下に培養を少なくとも６時間続けて
から、菌体を乾燥のため取り入れる。
テ−トのような1,2-飽和3-ケト-ステロイド化合物を培
地の0.005％(w/v)又はそれ以上の水準で加えることによ
って、菌体のステロイド-1-脱水素酵素活性が誘発され
る。誘発物質の存在下に培養を少なくとも６時間続けて
から、菌体を乾燥のため取り入れる。
【００１７】誘発物質を生育周期の任意の点で添加でき
る。ラ−ド油のような栄養素で生育する培養基はステロ
イド-1-脱水素酵素の合成を急速に開始するが、グルコ
−スで生育する培養基は酵素合成が起る前に基質の消耗
が必要である。誘発物質を加えてから６時間ないしそれ
以上にわたって培養を続け、次に溶媒手順用又は乾燥用
に菌体を取り入れる。
る。ラ−ド油のような栄養素で生育する培養基はステロ
イド-1-脱水素酵素の合成を急速に開始するが、グルコ
−スで生育する培養基は酵素合成が起る前に基質の消耗
が必要である。誘発物質を加えてから６時間ないしそれ
以上にわたって培養を続け、次に溶媒手順用又は乾燥用
に菌体を取り入れる。
【００１８】乾燥用菌体回収手順 菌体は、栄養培地から分離し、遠心分離又は凝集、瀘
過、限外瀘過のような慣用手段によって濃縮する。分離
された菌体は約１ないし約１０％の範囲の含水量まで、
１〜８５℃（55〜75゜が好適）で減圧下におくか、加熱
しながら空気乾燥、又は噴霧乾燥又はタンブル乾燥によ
って乾燥される。約５％の含水量が好ましい。菌体を生
物転化に使用するまで５℃で保存する。乾燥した活性菌
体は、「酵素学の方法」ＸＬIV巻、1976年、（アカデミ
ックプレス社、ニュ−ヨ−ク）、11〜317頁に記載のよ
うに、ポリアクリルアミドゲル及びコラ−ゲン内への閉
じ込め、又は高分子電解質担体への菌体の共有結合によ
り、乾燥菌体を固定することによってもつくられる。
過、限外瀘過のような慣用手段によって濃縮する。分離
された菌体は約１ないし約１０％の範囲の含水量まで、
１〜８５℃（55〜75゜が好適）で減圧下におくか、加熱
しながら空気乾燥、又は噴霧乾燥又はタンブル乾燥によ
って乾燥される。約５％の含水量が好ましい。菌体を生
物転化に使用するまで５℃で保存する。乾燥した活性菌
体は、「酵素学の方法」ＸＬIV巻、1976年、（アカデミ
ックプレス社、ニュ−ヨ−ク）、11〜317頁に記載のよ
うに、ポリアクリルアミドゲル及びコラ−ゲン内への閉
じ込め、又は高分子電解質担体への菌体の共有結合によ
り、乾燥菌体を固定することによってもつくられる。
【００１９】生物転化法 生物転化は、調製された菌体をステロイド基質に露出す
ることによって達成される。典型的には、６〜１０のpH
（最適pH7.25〜8.5）をもつ弱い緩衝度の水溶液に菌体
とステロイドを懸濁させる。菌量はl当り0.1〜50gの範
囲であり、ステロイドを0.05〜5.0（ステロイド：菌
体）の重量比で加える。水性環境で生物転化を行なう時
は、l当り５〜１０gのステロイドにl当り８〜１０gの菌
量が好ましい。反応を刺激するために、触媒量（例えば
５×１０-14Ｍメナジオン）の外因性電子キャリヤ−を
加える。有用な化合物はメナジオン（2-メチル-1,4-ナ
フトキノン）、フェナジンメトサルフェ−ト、ジクロロ
フェノ−ル-インドフェノ−ル、1,4-ナフトキノン、メ
ナジオン重亜硫酸塩、ユビキノン類（補酵素Ｑ）及びビ
タミンＫ型化合物を包含する。混合物を５〜４５℃の温
度範囲で０〜１４日間培養する。培養中、混合物を分子
状酸素に接触させ、好ましくはかきまぜる。1-脱水素率
は典型的には時間と共に減少する。生物転化は、ｌ当り
１０gの基質を使用して、２４時間に満たないうちに完
了率９８〜100％まで進む。
ることによって達成される。典型的には、６〜１０のpH
（最適pH7.25〜8.5）をもつ弱い緩衝度の水溶液に菌体
とステロイドを懸濁させる。菌量はl当り0.1〜50gの範
囲であり、ステロイドを0.05〜5.0（ステロイド：菌
体）の重量比で加える。水性環境で生物転化を行なう時
は、l当り５〜１０gのステロイドにl当り８〜１０gの菌
量が好ましい。反応を刺激するために、触媒量（例えば
５×１０-14Ｍメナジオン）の外因性電子キャリヤ−を
加える。有用な化合物はメナジオン（2-メチル-1,4-ナ
フトキノン）、フェナジンメトサルフェ−ト、ジクロロ
フェノ−ル-インドフェノ−ル、1,4-ナフトキノン、メ
ナジオン重亜硫酸塩、ユビキノン類（補酵素Ｑ）及びビ
タミンＫ型化合物を包含する。混合物を５〜４５℃の温
度範囲で０〜１４日間培養する。培養中、混合物を分子
状酸素に接触させ、好ましくはかきまぜる。1-脱水素率
は典型的には時間と共に減少する。生物転化は、ｌ当り
１０gの基質を使用して、２４時間に満たないうちに完
了率９８〜100％まで進む。
【００２０】使用できる種々の手順の例は以下を包含す
る。 （ａ） 弱い緩衝度の水溶液にステロイドとメナジオン
を懸濁し、続いて乾燥菌体を添加する。ツウイ−ン８０
のような表面活性剤を低濃度、例えば０〜５％で添加
し、ステロイドを懸濁しやすくさせる。
る。 （ａ） 弱い緩衝度の水溶液にステロイドとメナジオン
を懸濁し、続いて乾燥菌体を添加する。ツウイ−ン８０
のような表面活性剤を低濃度、例えば０〜５％で添加
し、ステロイドを懸濁しやすくさせる。
【００２１】（ｂ） 水性緩衝液系に菌体を懸濁させ、
続いてエタノ−ル、メタノ−ル、アセトン中に溶解され
た電子キャリヤ−を添加する（最終容積の５％まで）。
ステロイド基質を乾燥粉末として添加するか、又はジメ
チルホルムアミド、エタノ−ル、メタノ−ル、アセト
ン、ジメチルスルホキシドのような水と混ざる有機溶
媒、又はトルエンのような混ざらない有機溶媒中に溶解
（懸濁）できる。
続いてエタノ−ル、メタノ−ル、アセトン中に溶解され
た電子キャリヤ−を添加する（最終容積の５％まで）。
ステロイド基質を乾燥粉末として添加するか、又はジメ
チルホルムアミド、エタノ−ル、メタノ−ル、アセト
ン、ジメチルスルホキシドのような水と混ざる有機溶
媒、又はトルエンのような混ざらない有機溶媒中に溶解
（懸濁）できる。
【００２２】（ｃ） 乾燥菌体を少量の緩衝液に再水和
し、続いて緩衝液や有機溶媒を更に加える。エタノ−
ル、アセトン、キシレン、酢酸ブチル、塩化メチレン又
はトルエン等を加えると、０〜９５％（容量／容量）の
最終有機溶媒含有量が得られる。芳香族炭化水素の使用
量は、出発ステロイド又は生成物ステロイドの最も易溶
のものを溶解するのに必要な量の約半量から、出発ステ
ロイド又は生成物ステロイドの最も難溶のものを溶解す
るのに必要な量の約４倍までの範囲にある。ステロイド
と電子キャリヤ−は反応開始するために加えられる。ス
テロイドと共に芳香族炭化水素を加えるのが好ましい。
しかし、これを後から、又はもっと早い時期に加えても
よい。
し、続いて緩衝液や有機溶媒を更に加える。エタノ−
ル、アセトン、キシレン、酢酸ブチル、塩化メチレン又
はトルエン等を加えると、０〜９５％（容量／容量）の
最終有機溶媒含有量が得られる。芳香族炭化水素の使用
量は、出発ステロイド又は生成物ステロイドの最も易溶
のものを溶解するのに必要な量の約半量から、出発ステ
ロイド又は生成物ステロイドの最も難溶のものを溶解す
るのに必要な量の約４倍までの範囲にある。ステロイド
と電子キャリヤ−は反応開始するために加えられる。ス
テロイドと共に芳香族炭化水素を加えるのが好ましい。
しかし、これを後から、又はもっと早い時期に加えても
よい。
【００２３】（ｄ） 湿った菌体ケ−キを弱い緩衝度の
水溶液に懸濁させるか、発酵液を同水溶液で希釈し、続
いて外因性電子キャリヤ−、ステロイド及び芳香族炭化
水素を添加する。
水溶液に懸濁させるか、発酵液を同水溶液で希釈し、続
いて外因性電子キャリヤ−、ステロイド及び芳香族炭化
水素を添加する。
【００２４】基質範囲 本発明の実施に有用な化合物類は、3-ケト-△4-アンド
ロステン及び3-ケト-△4-プレグネン系のステロイドに
属している。ステロイド-1-脱水素酵素用の基質はＡ環
の炭素Ｃ1とＣ2との間に飽和をもち、Ａ環の３位置にヒ
ドロキシル又はケト基をもつことが認められる。アンド
ロステン系の成員は以下を包含する。
ロステン及び3-ケト-△4-プレグネン系のステロイドに
属している。ステロイド-1-脱水素酵素用の基質はＡ環
の炭素Ｃ1とＣ2との間に飽和をもち、Ａ環の３位置にヒ
ドロキシル又はケト基をもつことが認められる。アンド
ロステン系の成員は以下を包含する。
【００２５】１） アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン ２） アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオン及び
その6α-フルオロ、6α-メチル又は16-メチル誘導体 ３） 11β-ヒドロキシアンドロスタ-4-エン-3,17-ジオ
ン及びその誘導体
その6α-フルオロ、6α-メチル又は16-メチル誘導体 ３） 11β-ヒドロキシアンドロスタ-4-エン-3,17-ジオ
ン及びその誘導体
【００２６】使用できる3-ケト-△4-プレグネン系のス
テロイドには次のものがある。 １．17α-ヒドロキシプレグネ-4-エン-20-イン-3-オン
及びその16-メチル誘導体 ２．11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,17(20)-ジエン-
3-オン及びその6α-メチル誘導体 ３．20-クロロ-プレグナ-4,9(11)、17(20)-トリエン-21-
ア−ル-3-オン ４．以下を含めた3,20-ジケト-△4-プレグネンの幾つか
の群。
テロイドには次のものがある。 １．17α-ヒドロキシプレグネ-4-エン-20-イン-3-オン
及びその16-メチル誘導体 ２．11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,17(20)-ジエン-
3-オン及びその6α-メチル誘導体 ３．20-クロロ-プレグナ-4,9(11)、17(20)-トリエン-21-
ア−ル-3-オン ４．以下を含めた3,20-ジケト-△4-プレグネンの幾つか
の群。
【００２７】ａ） 11,17,21-トリヒドロキシ化合物、
例えばハイドロコ−チゾンとその6α-メチル誘導体 ｂ） 9β,11β-エポキシ-17,21-ジヒドロキシ化合物、
例えば9β,11β-エポキシ-17,21-ジヒドロキシ-16β-メ
チル-プレグネ-4-エン-3,20-ジオン ｃ） 3,20-ジケト-4,9(11)-プレグネジエン類、例えば
17α,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,9(11)-ジエン-3,20-
ジオン及びその16α-メチル、16β-メチル又は16α-ヒ
ドロキシ誘導体類又は17α-アセテ−トエステル ｄ） 3,20-ジケト-4,9(11)、4,9(11),16-プレグネトリ
エン類、例えば21-ヒドロキシ-プレグナ-4,9(11),16-ト
リエン-3,20-ジオン及びその６α-フルオロ誘導体
例えばハイドロコ−チゾンとその6α-メチル誘導体 ｂ） 9β,11β-エポキシ-17,21-ジヒドロキシ化合物、
例えば9β,11β-エポキシ-17,21-ジヒドロキシ-16β-メ
チル-プレグネ-4-エン-3,20-ジオン ｃ） 3,20-ジケト-4,9(11)-プレグネジエン類、例えば
17α,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,9(11)-ジエン-3,20-
ジオン及びその16α-メチル、16β-メチル又は16α-ヒ
ドロキシ誘導体類又は17α-アセテ−トエステル ｄ） 3,20-ジケト-4,9(11)、4,9(11),16-プレグネトリ
エン類、例えば21-ヒドロキシ-プレグナ-4,9(11),16-ト
リエン-3,20-ジオン及びその６α-フルオロ誘導体
【００２８】21-ヒドロキシル基（＃２及び＃４）を含
有するステロイド類の21-エステル誘導体類も基質とし
て役立つ。好ましい21-エステル類は低級脂肪酸、例え
ば酢酸と単環式カルボン酸、例えば安息香酸のような低
級アルキル又はアリ−ル基からなる。
有するステロイド類の21-エステル誘導体類も基質とし
て役立つ。好ましい21-エステル類は低級脂肪酸、例え
ば酢酸と単環式カルボン酸、例えば安息香酸のような低
級アルキル又はアリ−ル基からなる。
【００２９】生物転化生成物及び未転化基質は慣用手段
によって混合物から回収できる。ステロイド類は典型的
には、瀘過に続いてフィルタ−ケ−キをアセトン又は塩
化メチレンのような有機溶媒で抽出することによって回
収できる。その代りに、酢酸ブチル又は塩化メチレンの
ような水と混ざらない溶媒と混合することによって、全
生物転化混合物を抽出できる。次に生成物は有機溶媒か
ら単離される。
によって混合物から回収できる。ステロイド類は典型的
には、瀘過に続いてフィルタ−ケ−キをアセトン又は塩
化メチレンのような有機溶媒で抽出することによって回
収できる。その代りに、酢酸ブチル又は塩化メチレンの
ような水と混ざらない溶媒と混合することによって、全
生物転化混合物を抽出できる。次に生成物は有機溶媒か
ら単離される。
【００３０】以下は、先行技術の方法に対する本発明方
法の優秀性を示す異なる生物転化の結果である。生物転
化は、上に詳述された条件を用いて行なわれた。
法の優秀性を示す異なる生物転化の結果である。生物転
化は、上に詳述された条件を用いて行なわれた。
【００３１】
【実施例】参考例１ 乾燥菌体の調製 セレロ−ス、ペプトン及びコ−ンスチ−プリカ−（各々
６g/l）からなるpH7.0の培地を含有する振盪フラスコ中
にバクテリウム・シクロオキシダンス（ATCC 12673）を
接種した。２８℃の回転振盪機上で、グルコ−スの消滅
が起るまで培養基を培養した。この時点でコ−チゾンア
セテ−ト（0.5g/l）を加え、フラスコを更に１６時間培
養した。菌体を遠心分離によって採取し、水で２回洗っ
てから、乾燥するまで４５℃の低真空炉に入れた。
６g/l）からなるpH7.0の培地を含有する振盪フラスコ中
にバクテリウム・シクロオキシダンス（ATCC 12673）を
接種した。２８℃の回転振盪機上で、グルコ−スの消滅
が起るまで培養基を培養した。この時点でコ−チゾンア
セテ−ト（0.5g/l）を加え、フラスコを更に１６時間培
養した。菌体を遠心分離によって採取し、水で２回洗っ
てから、乾燥するまで４５℃の低真空炉に入れた。
【００３２】６α-メチルハイドロコ−チゾンの生物転化 上記のとおりに調製された乾燥菌体0.5gをpH7.5の５０m
M燐酸緩衝液５０mlにかき混ぜながら再水和した。メナ
ジオンをエタノ−ル溶液（8.6mg/mlエタノ−ル）として
0.025ml/mlの水準で菌懸濁液に加えた。基質をジメチル
ホルムアミド(DMF)溶液（DMFml当り６α-メチルハイド
ロコ−チゾン100mg）として、0.5g/lの最終生成物転化
濃度まで添加した。混合物をかきまぜながら２８℃で培
養した。４時間培養後、ステロイドの９１％が転化され
た。６α-メチルプレドニソロンを慣用手段で回収し
た。
M燐酸緩衝液５０mlにかき混ぜながら再水和した。メナ
ジオンをエタノ−ル溶液（8.6mg/mlエタノ−ル）として
0.025ml/mlの水準で菌懸濁液に加えた。基質をジメチル
ホルムアミド(DMF)溶液（DMFml当り６α-メチルハイド
ロコ−チゾン100mg）として、0.5g/lの最終生成物転化
濃度まで添加した。混合物をかきまぜながら２８℃で培
養した。４時間培養後、ステロイドの９１％が転化され
た。６α-メチルプレドニソロンを慣用手段で回収し
た。
【００３３】参考例２ アンドロスタ-1,4,9(11)-トリ
エン-3,17-ジオン産生 ａ） 生物触媒の調製 グルコ−ス６g/l、コ−ンスチ−プリカ−６g/l及び噴霧
乾燥されたラ−ド水６g/lを含有する振盪フラスコ内の
培地中でアルトロバクタ−・シンプレックス（ATCC 694
6）を生育させた。培養基を回転振盪機上で、グルコ−
ス消滅が起るまで２８℃で培養した。この時点で、ステ
ロイド-1-デヒドロゲナ−ゼ合成を誘発するためにコ−
チゾンアセテ−ト（0.5g/l)を加えた。一夜培養後、低
速遠心分離によって菌体を取り入れた。菌ペレットを乾
燥のため５５℃の低真空炉へ２４時間入れた。２４時間
後、乾燥済み材料を気密容器に移し、生物転化に必要な
時まで５℃で保存した。
エン-3,17-ジオン産生 ａ） 生物触媒の調製 グルコ−ス６g/l、コ−ンスチ−プリカ−６g/l及び噴霧
乾燥されたラ−ド水６g/lを含有する振盪フラスコ内の
培地中でアルトロバクタ−・シンプレックス（ATCC 694
6）を生育させた。培養基を回転振盪機上で、グルコ−
ス消滅が起るまで２８℃で培養した。この時点で、ステ
ロイド-1-デヒドロゲナ−ゼ合成を誘発するためにコ−
チゾンアセテ−ト（0.5g/l)を加えた。一夜培養後、低
速遠心分離によって菌体を取り入れた。菌ペレットを乾
燥のため５５℃の低真空炉へ２４時間入れた。２４時間
後、乾燥済み材料を気密容器に移し、生物転化に必要な
時まで５℃で保存した。
【００３４】ｂ） アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17
-ジオンの生物転化 乾燥菌体（１０g/l）をpH7.5の５０mM燐酸緩衝液中で３
０分かきまぜて水和した。次にメナジオンを乾燥粉末と
して８６mg/lの最終濃度まで菌懸濁液に加えた。微粉砕
したアンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオンをジメ
チルホルムアミド中にスラリ−化し、ｌ当りステロイド
2.5g及び２％（v/v）DMFの水準で生物転化混合物に加え
た。混合物を３１℃でかきませながら空気の存在下、２
４時間培養した。培養終了後、アンドロスタ-1,4,9(11)
-トリエン-3,17ジオンを慣用手段によって回収した。
-ジオンの生物転化 乾燥菌体（１０g/l）をpH7.5の５０mM燐酸緩衝液中で３
０分かきまぜて水和した。次にメナジオンを乾燥粉末と
して８６mg/lの最終濃度まで菌懸濁液に加えた。微粉砕
したアンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオンをジメ
チルホルムアミド中にスラリ−化し、ｌ当りステロイド
2.5g及び２％（v/v）DMFの水準で生物転化混合物に加え
た。混合物を３１℃でかきませながら空気の存在下、２
４時間培養した。培養終了後、アンドロスタ-1,4,9(11)
-トリエン-3,17ジオンを慣用手段によって回収した。
【００３５】参考例３ 前参考例記載の条件に従って、下のステロイド化合物類
をＡ．シンプレックスの乾燥菌体に露出し、対応する1,
2-デヒドロ誘導体を得た。番 号 名 前 １． アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン ２． 6α-フルオロ-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,1
7-ジオン ３． 6α-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-
ジオン ４． 16β-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17
-ジオン ５． 17α-ヒドロキシプレグネ-4-エン-20-イン-3-オ
ン ６． 17α-ヒドロキシプレグナ-4,9(11)-ジエン-20-イ
ン-3-オン ７． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-20-イン-3-オン ８． 11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,17(20)-ジエ
ン-3-オン ９． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-4,17
(20)-ジエン-3-オン 10． 6α-メチル-11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,1
7(20)-ジエン-3-オン 11． 20-クロロ-プレグナ-4,9(11),17(20)-トリエン-2
1-ア−ル-3-オン 12． ハイドロコ−チゾン 13． 6α-メチルハイドロコ−チゾン 14． 21-アセトキシ-11β,17-ジヒドロキシ-16β-メチ
ル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン 15． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,17-ジヒドロ
キシ-16β-メチル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン 16． 21-アセトキシ-9β、11β-エポキシ-17-ヒドロキ
シ-16β-メチル-プレグネ-4-エン-3,20-ジオン 17． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-3,20-ジオン 18． 21-アセトキシ-16α,17-ジヒドロキシ-プレグナ-
4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 19． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 20． 21-ベンジロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プ
レグナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 21． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 22． 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16(17)-トリエ
ン-3,20-ジオン 23． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-4,9(11),
16-トリエン-3,20-ジオン
をＡ．シンプレックスの乾燥菌体に露出し、対応する1,
2-デヒドロ誘導体を得た。番 号 名 前 １． アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン ２． 6α-フルオロ-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,1
7-ジオン ３． 6α-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-
ジオン ４． 16β-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17
-ジオン ５． 17α-ヒドロキシプレグネ-4-エン-20-イン-3-オ
ン ６． 17α-ヒドロキシプレグナ-4,9(11)-ジエン-20-イ
ン-3-オン ７． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-20-イン-3-オン ８． 11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,17(20)-ジエ
ン-3-オン ９． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-4,17
(20)-ジエン-3-オン 10． 6α-メチル-11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-4,1
7(20)-ジエン-3-オン 11． 20-クロロ-プレグナ-4,9(11),17(20)-トリエン-2
1-ア−ル-3-オン 12． ハイドロコ−チゾン 13． 6α-メチルハイドロコ−チゾン 14． 21-アセトキシ-11β,17-ジヒドロキシ-16β-メチ
ル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン 15． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,17-ジヒドロ
キシ-16β-メチル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン 16． 21-アセトキシ-9β、11β-エポキシ-17-ヒドロキ
シ-16β-メチル-プレグネ-4-エン-3,20-ジオン 17． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-3,20-ジオン 18． 21-アセトキシ-16α,17-ジヒドロキシ-プレグナ-
4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 19． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 20． 21-ベンジロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プ
レグナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 21． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 22． 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16(17)-トリエ
ン-3,20-ジオン 23． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-4,9(11),
16-トリエン-3,20-ジオン
【００３６】転化から得られる対応生成物は次の通りで
ある。番 号 名 前 １ａ． アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン ２ａ． 6α-フルオロ-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ３ａ． 6α-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエン
-3,17-ジオン ４ａ． 16β-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ５ａ． 17α-ヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-20-イ
ン-3-オン ６ａ． 17α-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11)-トリエ
ン-20-イン-3-オン ７ａ． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-20-イン-3-オン ８ａ． 11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-1,4,17(20)-
トリエン-3-オン ９ａ． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-1,
4,17(20)-トリエン-3-オン及び11β,21-ジヒドロキシ-
プレグナ-1,4,17(20)-トリエン-3-オン 10ａ． 6α-メチル-11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-
1,4,17(20)-トリエン-3-オン 11ａ． 20-クロロ-プレグナ-1,4,9(11),17(20)-テトラ
エン-21-ア−ル-3-オン 12ａ． プレドニソロン 13ａ． 6α-メチル-プレドニソロン 14ａ． 21-アセトキシ-11β,17-ジヒドロキシ-16β-メ
チル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び11β,17,21
-トリヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,
20-ジオン 15ａ． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,17-ジヒド
ロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン
及び9α-フルオロ-11β,17,21-トリヒドロキシ-16β-メ
チル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン 16ａ． 21-アセトキシ-9β、11β-エポキシ-17-ヒドロ
キシ-16β-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及
び9β,11β-エポキシ-17,21-ジヒドロキシ-16β-メチル
-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン 17ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジヒドロキシ-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 18ａ． 21-アセトキシ-16α,17-ジヒドロキシ-プレグ
ナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び16α,17,21-ト
リヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオ
ン 19ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 20ａ． 21-ベンジロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-
プレグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 21ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 22ａ． 21-アセトキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン及び21-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(1
1),16-テトラエン-3,20-ジオン 23ａ． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-1,4,9
(11),16-テトラエン-3,20-ジオン及び6α-フルオロ-21-
ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラエン-3,20-
ジオン
ある。番 号 名 前 １ａ． アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン ２ａ． 6α-フルオロ-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ３ａ． 6α-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエン
-3,17-ジオン ４ａ． 16β-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ５ａ． 17α-ヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-20-イ
ン-3-オン ６ａ． 17α-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11)-トリエ
ン-20-イン-3-オン ７ａ． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-20-イン-3-オン ８ａ． 11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-1,4,17(20)-
トリエン-3-オン ９ａ． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-1,
4,17(20)-トリエン-3-オン及び11β,21-ジヒドロキシ-
プレグナ-1,4,17(20)-トリエン-3-オン 10ａ． 6α-メチル-11β,21-ジヒドロキシ-プレグナ-
1,4,17(20)-トリエン-3-オン 11ａ． 20-クロロ-プレグナ-1,4,9(11),17(20)-テトラ
エン-21-ア−ル-3-オン 12ａ． プレドニソロン 13ａ． 6α-メチル-プレドニソロン 14ａ． 21-アセトキシ-11β,17-ジヒドロキシ-16β-メ
チル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び11β,17,21
-トリヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,
20-ジオン 15ａ． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,17-ジヒド
ロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン
及び9α-フルオロ-11β,17,21-トリヒドロキシ-16β-メ
チル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン 16ａ． 21-アセトキシ-9β、11β-エポキシ-17-ヒドロ
キシ-16β-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及
び9β,11β-エポキシ-17,21-ジヒドロキシ-16β-メチル
-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン 17ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジヒドロキシ-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 18ａ． 21-アセトキシ-16α,17-ジヒドロキシ-プレグ
ナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び16α,17,21-ト
リヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオ
ン 19ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 20ａ． 21-ベンジロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-
プレグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 21ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 22ａ． 21-アセトキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン及び21-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(1
1),16-テトラエン-3,20-ジオン 23ａ． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-1,4,9
(11),16-テトラエン-3,20-ジオン及び6α-フルオロ-21-
ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラエン-3,20-
ジオン
【００３７】参考例４ 二つの異なるステロイドを発酵液中のＡ．シンプレック
ス菌体及び乾燥したＡ．シンプレックス菌体によって生
物転化した。各生物転化が終了したと判断されたあと
（残留基質水準がそれ以上減少しないことで示され
る）、混合物のステロイドを抽出、単離し、各条件に対
する収率デ−タを得た。下の表はこの結果をまとめたも
のである。
ス菌体及び乾燥したＡ．シンプレックス菌体によって生
物転化した。各生物転化が終了したと判断されたあと
（残留基質水準がそれ以上減少しないことで示され
る）、混合物のステロイドを抽出、単離し、各条件に対
する収率デ−タを得た。下の表はこの結果をまとめたも
のである。
【００３８】
【表１】 ａ） 有用ステロイドの定義は、その後の合成に使用で
きるΔ1化合物、又は生成物をつくるために別の生物転
化に再循環できる1,2-ジヒドロ基質のいずれかである。 ｂ） その他の望ましくないステロイド分子の相当量も
回収された。
きるΔ1化合物、又は生成物をつくるために別の生物転
化に再循環できる1,2-ジヒドロ基質のいずれかである。 ｂ） その他の望ましくないステロイド分子の相当量も
回収された。
【００３９】参考例５ アルトロバクタ−・シンプレックスを５ｌの「マイクロ
ファ−ム」発酵器で生育させ、ステロイド-1-脱水素酵
素の合成を誘発させ、遠心分離によって収穫した。回収
された菌ペ−ストの一部を二つの異なる分離方法にかけ
た。第一は本明細書に記載の手順で、減圧下に５５℃で
菌体を乾燥させるものであった。第二の方法は、アセト
ン乾燥された菌体の調製について合衆国特許第3,360,43
9号で勧告された手順であった。菌をアセトンと混合
し、収穫して減圧下で５℃で乾燥した。次に乾燥菌調製
剤を使用して、振盪フラスコ内でｌ当り１０gの菌とｌ
当り１０gのステロイドでΔ9,11-アンドロステンジオン
を生物転化した。
ファ−ム」発酵器で生育させ、ステロイド-1-脱水素酵
素の合成を誘発させ、遠心分離によって収穫した。回収
された菌ペ−ストの一部を二つの異なる分離方法にかけ
た。第一は本明細書に記載の手順で、減圧下に５５℃で
菌体を乾燥させるものであった。第二の方法は、アセト
ン乾燥された菌体の調製について合衆国特許第3,360,43
9号で勧告された手順であった。菌をアセトンと混合
し、収穫して減圧下で５℃で乾燥した。次に乾燥菌調製
剤を使用して、振盪フラスコ内でｌ当り１０gの菌とｌ
当り１０gのステロイドでΔ9,11-アンドロステンジオン
を生物転化した。
【００４０】 異なる方法で乾燥させたＡ．シンプレックス菌体の生物転化能力の比較 生物転化活性+ 試料採取時 残留基質 （生ずる生成物g）菌形態 （時間） （％） 時間／菌g アセトン乾燥 １ ９８．７ ．０１３ ４ ９５．５ ．０１１ ２４ ８４．１* ．００７ 加熱乾燥 １ ８５．１ ．１４９ ４ ２３．２ ．１９２ ２４ ７．２* ．０３９ (+) 生物転化活性を次のように計算した。 生ずる生成物ｇ／培養時間／添加菌体ｇ＝活性 (*) 残留水準はそれ以上培養しても低下しなかった。
【００４１】参考例６ 参考例１の6α-メチルハイドロコ−チゾン又は参考例２
のアンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオンの代りに
以下に列挙した基質を使用して対応する列挙された生成
物が得られる。基 質 １． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ２． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,16α,1
7-トリヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-16,17
-アセトニド ３． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-1
6α-メチル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ４． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β,17-ヒドロキ
シ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ５． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,17-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ６． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-16,17-アセ
トニド ７． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-6α-フルオロ
-16α,17-ジヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-
16,17-アセトニド ８． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16α-ヒドロ
キシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ９．21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16α,17-ジヒド
ロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-16,17-アセトニ
ド
のアンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオンの代りに
以下に列挙した基質を使用して対応する列挙された生成
物が得られる。基 質 １． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ２． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,16α,1
7-トリヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-16,17
-アセトニド ３． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-1
6α-メチル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ４． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β,17-ヒドロキ
シ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ５． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,17-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ６． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-16,17-アセ
トニド ７． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-6α-フルオロ
-16α,17-ジヒドロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-
16,17-アセトニド ８． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16α-ヒドロ
キシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン ９．21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16α,17-ジヒド
ロキシ-プレグナ-4-エン-3,20-ジオン-16,17-アセトニ
ド
【００４２】生成物 １． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び9α-
フルオロ-11β,16α,17,21-テトラヒドロキシ-プレグナ
-1,4-ジエン-3,20-ジオン ２． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,16α,1
7-トリヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン-1
6,17-アセトニド及び6α,9α-フルオロ-11β,16α,17,2
1-テトラヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン
-16,17-アセトニド ３． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-1
6α-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び6α-
フルオロ-11β,21-ジヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ
-1,4-ジエン-3,20-ジオン ４． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β,17-ヒドロキ
シ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び6α-フルオロ
-11β,17,21-トリヒドロキシ-1,4-ジエン-3,20-ジオン ５． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,17-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジ
オン及び6α,9α-ジフルオロ-11β,17,21-トリヒドロキ
シ-1,4-ジエン-3,20-ジオン ６． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン-16,17-
アセトニド ７． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-6α-フルオロ
-16α,17-ジヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジ
オン-16,17-アセトニド ８． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16-ヒドロキ
シ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び9β,11β-エ
ポキシ-16α,21-ジヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,
20-ジオン ９．21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16α,17-ジヒド
ロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン-16,17-アセ
トニド
ヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び9α-
フルオロ-11β,16α,17,21-テトラヒドロキシ-プレグナ
-1,4-ジエン-3,20-ジオン ２． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,16α,1
7-トリヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン-1
6,17-アセトニド及び6α,9α-フルオロ-11β,16α,17,2
1-テトラヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン
-16,17-アセトニド ３． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-1
6α-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び6α-
フルオロ-11β,21-ジヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ
-1,4-ジエン-3,20-ジオン ４． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-11β,17-ヒドロキ
シ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び6α-フルオロ
-11β,17,21-トリヒドロキシ-1,4-ジエン-3,20-ジオン ５． 21-アセトキシ-6α,9α-ジフルオロ-11β,17-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジ
オン及び6α,9α-ジフルオロ-11β,17,21-トリヒドロキ
シ-1,4-ジエン-3,20-ジオン ６． 21-アセトキシ-9α-フルオロ-11β,16α,17-トリ
ヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン-16,17-
アセトニド ７． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-6α-フルオロ
-16α,17-ジヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジ
オン-16,17-アセトニド ８． 21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16-ヒドロキ
シ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン及び9β,11β-エ
ポキシ-16α,21-ジヒドロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,
20-ジオン ９．21-アセトキシ-9β,11β-エポキシ-16α,17-ジヒド
ロキシ-プレグナ-1,4-ジエン-3,20-ジオン-16,17-アセ
トニド
【００４３】参考例７ １１β-ヒドロキシ-アンドロス
タ-4-エン-3,17-ジオンの生物変換 参考例２に記載のようにつくられたＡ．シンプレックス
乾燥菌体１gをpH7.5の５０mM燐酸緩衝液100mlに再懸濁
した。３Ａエタノ−ルに溶解したメナジオンを86mg/lの
最終濃度に加えた。11β-ヒドロキシ-アンドロステンジ
オン0.5gをフラスコに加えた。混合物を３１℃の回転振
盪機上で培養した。１日の培養後採取すると、塩化メチ
レン抽出物の薄層クロマトグラフィによって２生成物が
得られた。ステロイドの約９５％は11β-ヒドロキシ-ア
ンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオンとして存在した。
残りは未転化基質であった。
タ-4-エン-3,17-ジオンの生物変換 参考例２に記載のようにつくられたＡ．シンプレックス
乾燥菌体１gをpH7.5の５０mM燐酸緩衝液100mlに再懸濁
した。３Ａエタノ−ルに溶解したメナジオンを86mg/lの
最終濃度に加えた。11β-ヒドロキシ-アンドロステンジ
オン0.5gをフラスコに加えた。混合物を３１℃の回転振
盪機上で培養した。１日の培養後採取すると、塩化メチ
レン抽出物の薄層クロマトグラフィによって２生成物が
得られた。ステロイドの約９５％は11β-ヒドロキシ-ア
ンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオンとして存在した。
残りは未転化基質であった。
【００４４】参考例８ 参考例７の条件に従って、Ｃ-11位置が変更された次の
アンドロステンジオン誘導体が、下記生成物へ1-脱水素
化できる。 基質→生成物 (1) 11β-ヒドロキシ-16β-メチル-アンドロスタ-4-エ
ン-3,17-ジオン → 11β-ヒドロキシ-16β-メチル-アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (2) 11β-ヒドロキシ-16α-メチル-アンドロスタ-4-エ
ン-3,17-ジオン → 11β-ヒドロキシ-16α-メチル-アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (3) 6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-アンドロスタ-4-
エン-3,17-ジオン → 6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-
アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (4) 6α-メチル-11β-ヒドロキシ-アンドロスタ-4-エ
ン-3,17-ジオン → 6α-メチル-11β-ヒドロキシ-アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (5) 11α-ヒドロキシ-アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオ
ン → 11α-ヒドロキシ-アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17
-ジオン (6) アンドロスタ-4-エン-3,11,17-トリオン → アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,11,17-トリオン
アンドロステンジオン誘導体が、下記生成物へ1-脱水素
化できる。 基質→生成物 (1) 11β-ヒドロキシ-16β-メチル-アンドロスタ-4-エ
ン-3,17-ジオン → 11β-ヒドロキシ-16β-メチル-アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (2) 11β-ヒドロキシ-16α-メチル-アンドロスタ-4-エ
ン-3,17-ジオン → 11β-ヒドロキシ-16α-メチル-アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (3) 6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-アンドロスタ-4-
エン-3,17-ジオン → 6α-フルオロ-11β-ヒドロキシ-
アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (4) 6α-メチル-11β-ヒドロキシ-アンドロスタ-4-エ
ン-3,17-ジオン → 6α-メチル-11β-ヒドロキシ-アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン (5) 11α-ヒドロキシ-アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオ
ン → 11α-ヒドロキシ-アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17
-ジオン (6) アンドロスタ-4-エン-3,11,17-トリオン → アン
ドロスタ-1,4-ジエン-3,11,17-トリオン
【００４５】実施例１ １）反応容器（１ｌのもの）内で次のものを一緒にす
る。 ａ） ５０mM KPO4緩衝液（pH7.5）0.9ｌ ｂ） Ａ．シンプレックス乾燥菌体3.66g ｃ） メナジオン0.08g ｄ） 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16-トリエン-
3,20-ジオン8g ｅ） トルエン100ml ２）１５cal/l minでかきまぜる。 ３）反応容器のガス空間で酸素を約３〜６％に保つため
に、必要に応じて空気を送る。 ４）温度を２８℃±１℃に保持する。 ５）２５時間後、トルエン相を集める。 本実施例でトルエン相のステロイドは次の通りであっ
た。 94.3% 21-アセトキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン 4.2% 21-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン 1.5% 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16-トリエン-
3,20-ジオン
る。 ａ） ５０mM KPO4緩衝液（pH7.5）0.9ｌ ｂ） Ａ．シンプレックス乾燥菌体3.66g ｃ） メナジオン0.08g ｄ） 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16-トリエン-
3,20-ジオン8g ｅ） トルエン100ml ２）１５cal/l minでかきまぜる。 ３）反応容器のガス空間で酸素を約３〜６％に保つため
に、必要に応じて空気を送る。 ４）温度を２８℃±１℃に保持する。 ５）２５時間後、トルエン相を集める。 本実施例でトルエン相のステロイドは次の通りであっ
た。 94.3% 21-アセトキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン 4.2% 21-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン 1.5% 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16-トリエン-
3,20-ジオン
【００４６】上の段階に対して次の範囲の変数を使用で
きる。段階１） ａ） 緩衝液pHは６〜１０の範囲にありうる。 ｂ） Ａ．シンプレックス量を、反応終了に導くのに十
分なだけの水準に減少させる。典型的な水準は、ステロ
イドｇ当り0.05〜1.0gである。酸素の微生物給源はアル
トロバクタ−（コリネバクテリウム）シンプレックス
（ATCC 6946）又はバクテリウム・シクロオキシダンス
（ATCC 12673）である。
きる。段階１） ａ） 緩衝液pHは６〜１０の範囲にありうる。 ｂ） Ａ．シンプレックス量を、反応終了に導くのに十
分なだけの水準に減少させる。典型的な水準は、ステロ
イドｇ当り0.05〜1.0gである。酸素の微生物給源はアル
トロバクタ−（コリネバクテリウム）シンプレックス
（ATCC 6946）又はバクテリウム・シクロオキシダンス
（ATCC 12673）である。
【００４７】微生物の調製：Ａ．シンプレックスの菌体
を、この技術で周知のように発酵液中で使用するか、又
は菌体を集め乾燥し、アセトン処理又は固定によって変
更する。
を、この技術で周知のように発酵液中で使用するか、又
は菌体を集め乾燥し、アセトン処理又は固定によって変
更する。
【００４８】ｃ） 電子受容体と次のものから選択でき
る。メナジオン（2-メチル-1,4-ナフトキノン）、メナ
ジオン重亜硫酸塩、1,4-ナフトキノン及びその他のビタ
ミンＫ型化合物類。電子受容体水準は価格と反応速度に
対する配慮によって決る。反応速度はメナジオン濃度に
直線的に比例している。典型的な水準はステロイドkg当
り約５〜約４０gである。
る。メナジオン（2-メチル-1,4-ナフトキノン）、メナ
ジオン重亜硫酸塩、1,4-ナフトキノン及びその他のビタ
ミンＫ型化合物類。電子受容体水準は価格と反応速度に
対する配慮によって決る。反応速度はメナジオン濃度に
直線的に比例している。典型的な水準はステロイドkg当
り約５〜約４０gである。
【００４９】ｄ） ステロイド濃度は、効率的な転化が
ある限り、できるだけ高くすべきである。ステロイドは
3-ケト-Δ4-アンドロステン又は3-ケト-Δ4-プレグネン
系に属し、好ましくは有機溶媒中で５g/l以上の溶解度
をもつ。
ある限り、できるだけ高くすべきである。ステロイドは
3-ケト-Δ4-アンドロステン又は3-ケト-Δ4-プレグネン
系に属し、好ましくは有機溶媒中で５g/l以上の溶解度
をもつ。
【００５０】ｅ） 芳香族炭化水素はトルエン、ベンゼ
ン又はキシレンから選ばれる。これらの溶媒は一緒に使
用してもよいし、ヘプタン又は塩化メチレンのような水
と混ざらない別の溶媒で希釈してもよい。芳香族炭化水
素は、出発ステロイド又は生成物ステロイドの最も易溶
のものを溶解するのに必要な量の約半量から、出発ステ
ロイド又は生成物ステロイドの最も難溶のものを溶解す
るのに必要な量の約４倍までの範囲にある。本実施例で
は、反応終了時にステロイドを溶解するのに十分なだけ
の水準のトルエンを添加した。芳香族炭化水素をステロ
イドと一緒に加えるのが好ましい。しかし、芳香族炭化
水素を後から、又は早い時期に添加できる。
ン又はキシレンから選ばれる。これらの溶媒は一緒に使
用してもよいし、ヘプタン又は塩化メチレンのような水
と混ざらない別の溶媒で希釈してもよい。芳香族炭化水
素は、出発ステロイド又は生成物ステロイドの最も易溶
のものを溶解するのに必要な量の約半量から、出発ステ
ロイド又は生成物ステロイドの最も難溶のものを溶解す
るのに必要な量の約４倍までの範囲にある。本実施例で
は、反応終了時にステロイドを溶解するのに十分なだけ
の水準のトルエンを添加した。芳香族炭化水素をステロ
イドと一緒に加えるのが好ましい。しかし、芳香族炭化
水素を後から、又は早い時期に添加できる。
【００５１】段階２）できるだけ高いかきまぜ力でかき
まぜる。反応速度はかきまぜ力の強い関数である。
まぜる。反応速度はかきまぜ力の強い関数である。
【００５２】段階３）反応は、最終水素（電子及び陽
子）受容体として酸素を必要とする。しかし、芳香族炭
化水素が存在するため、反応器のガス空間に爆発環境が
存在する。この災害を克服するために、ガス空間の酸素
濃度を燃焼用最少酸素量より十分に低い濃度に保持する
のが有利である。ベンゼンの場合、最少酸素量は11.2％
である。キシレン類の場合、引火点より低温で反応を行
なうことも可能である。m-キシレン、o-キシレン及びp-
キシレンの引火点は、それぞれ29、32及び39℃である。
子）受容体として酸素を必要とする。しかし、芳香族炭
化水素が存在するため、反応器のガス空間に爆発環境が
存在する。この災害を克服するために、ガス空間の酸素
濃度を燃焼用最少酸素量より十分に低い濃度に保持する
のが有利である。ベンゼンの場合、最少酸素量は11.2％
である。キシレン類の場合、引火点より低温で反応を行
なうことも可能である。m-キシレン、o-キシレン及びp-
キシレンの引火点は、それぞれ29、32及び39℃である。
【００５３】段階４）反応温度は約０〜約４５℃であり
うる。段階５） 反応は典型的には２日間行なわれる。数時間か
ら数週間まで反応を行なえる。
うる。段階５） 反応は典型的には２日間行なわれる。数時間か
ら数週間まで反応を行なえる。
【００５４】実施例２ トルエン手順と水性手順の比較 (Ａ) 手順 次のものを一緒にする。 Ａ．シンプレックス菌体 0.4g ５０mM KPO4 緩衝液（pH7.5）50ml ２時間又は均質スラリ−が得られるまでかきまぜる。２
５mlフラクション２本を取り、125mlフラスコに入れ
る。各フラスコに次のものを加える。 ３Ａアルコ−ル中の５mMメナジオン 0.25ml アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオン 0.2g 密栓されたフラスコの一つにトルエン２mlを加える。手
首動作（リストアクション）振盪機上で４日間かきまぜ
る。４日後トルエン25mlで抽出する。抽出物を分析す
る。
５mlフラクション２本を取り、125mlフラスコに入れ
る。各フラスコに次のものを加える。 ３Ａアルコ−ル中の５mMメナジオン 0.25ml アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオン 0.2g 密栓されたフラスコの一つにトルエン２mlを加える。手
首動作（リストアクション）振盪機上で４日間かきまぜ
る。４日後トルエン25mlで抽出する。抽出物を分析す
る。
【００５５】 (Ｂ) 結果 手 順 基 質 水性 トルエン アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-ジオン 17.7％ 0.00％ アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエン-3,17-ジオン 82.3％ 100.00％
【００５６】実施例３ 実施例１に記載の条件に従って、Ａ．シンプレックスの
乾燥菌体へ次のステロイド化合物を露出し、対応する1,
2-デヒドロ誘導体を得た。番号 名 前 １． アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン ２． 6α-フルオロ-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,1
7-ジオン ３． 6α-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-
ジオン ４． 16β-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17
-ジオン ５． 17α-ヒドロキシプレグネ-4-エン-20-イン-3-オ
ン ６． 17α-ヒドロキシプレグネ-4,9(11)-ジエン-20-イ
ン-3-オン ７． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-20-イン-3-オン ８． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-4,17
(20)-ジエン-3-オン ９． 20−クロロ-プレグナ-4,9(11),17(20)-トリエン-
21-ア−ル-3-オン 10． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-3,20-ジオン 11． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 12． 21-ベンゾイロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-
プレグナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 13． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 14． 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16-トリエン-
3,20-ジオン 15． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-4,9(11),
16(17)-トリエン-3,20-ジオン
乾燥菌体へ次のステロイド化合物を露出し、対応する1,
2-デヒドロ誘導体を得た。番号 名 前 １． アンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン ２． 6α-フルオロ-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,1
7-ジオン ３． 6α-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17-
ジオン ４． 16β-メチル-アンドロスタ-4,9(11)-ジエン-3,17
-ジオン ５． 17α-ヒドロキシプレグネ-4-エン-20-イン-3-オ
ン ６． 17α-ヒドロキシプレグネ-4,9(11)-ジエン-20-イ
ン-3-オン ７． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-20-イン-3-オン ８． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-4,17
(20)-ジエン-3-オン ９． 20−クロロ-プレグナ-4,9(11),17(20)-トリエン-
21-ア−ル-3-オン 10． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-4,9(11)
-ジエン-3,20-ジオン 11． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 12． 21-ベンゾイロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-
プレグナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 13． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プレ
グナ-4,9(11)-ジエン-3,20-ジオン 14． 21-アセトキシ-プレグナ-4,9(11),16-トリエン-
3,20-ジオン 15． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-4,9(11),
16(17)-トリエン-3,20-ジオン
【００５７】転化から得られる対応生成物は次の通りで
ある。番号 名 前 １ａ． アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン ２ａ． 6α-フルオロ-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ３ａ． 6α-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエン
-3,17-ジオン ４ａ． 16β-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ５ａ． 17α-ヒドロキシプレグナ-1,4-ジエン-20-イン
-3-オン ６ａ． 17α-ヒドロキシプレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-20-イン-3-オン ７ａ． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-20-イン-3-オン ８ａ． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-1,
4,17(20)-トリエン-3-オン及び11β,21-ジヒドロキシ-
プレグナ-1,4,17(20)-トリエン-3-オン ９ａ． 20−クロロ-プレグナ-1,4,9(11),17(20)-テト
ラエン-21-ア−ル-3-オン 10ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジヒドロキシ-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 11ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 12ａ． 21-ベンゾイロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチ
ル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 13ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 14ａ． 21-アセトキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン及び21-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(1
1),16-テトラエン-3,20-ジオン 15ａ． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-1,4,9
(11),16-テトラエン-3,20-ジオン及び6α-フルオロ-21-
ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラエン-3,20-
ジオン
ある。番号 名 前 １ａ． アンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン ２ａ． 6α-フルオロ-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ３ａ． 6α-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエン
-3,17-ジオン ４ａ． 16β-メチル-アンドロスタ-1,4,9(11)-トリエ
ン-3,17-ジオン ５ａ． 17α-ヒドロキシプレグナ-1,4-ジエン-20-イン
-3-オン ６ａ． 17α-ヒドロキシプレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-20-イン-3-オン ７ａ． 17α-ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-20-イン-3-オン ８ａ． 21-アセトキシ-11β-ヒドロキシ-プレグナ-1,
4,17(20)-トリエン-3-オン及び11β,21-ジヒドロキシ-
プレグナ-1,4,17(20)-トリエン-3-オン ９ａ． 20−クロロ-プレグナ-1,4,9(11),17(20)-テト
ラエン-21-ア−ル-3-オン 10ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9
(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジヒドロキシ-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 11ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16α-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16α-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 12ａ． 21-ベンゾイロキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチ
ル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン 13ａ． 21-アセトキシ-17-ヒドロキシ-16β-メチル-プ
レグナ-1,4,9(11)-トリエン-3,20-ジオン及び17,21-ジ
ヒドロキシ-16β-メチル-プレグナ-1,4,9(11)-トリエン
-3,20-ジオン 14ａ． 21-アセトキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラ
エン-3,20-ジオン及び21-ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(1
1),16-テトラエン-3,20-ジオン 15ａ． 21-アセトキシ-6α-フルオロ-プレグナ-1,4,9
(11),16-テトラエン-3,20-ジオン及び6α-フルオロ-21-
ヒドロキシ-プレグナ-1,4,9(11),16-テトラエン-3,20-
ジオン
【００５８】1,2-デヒドロステロイド類の有用性はよく
知られている。例えば合衆国特許第3,284,447号を参
照。この特許は、炭素１６が置換された利尿性コ−チコ
ステロイドの合成におけるΔ1,4,9(11)プレグネトリエ
ン類の有用性を明らかにしている。合衆国特許第4,041,
055号はΔ1,4-アンドロステンジオン誘導体からのコ−
チコステロイドの合成法を明らかにしており、1,2-デヒ
ドロアンドロステン類の有用性を、医学的に有用なステ
ロイドの製造における重要な中間体として示している。
知られている。例えば合衆国特許第3,284,447号を参
照。この特許は、炭素１６が置換された利尿性コ−チコ
ステロイドの合成におけるΔ1,4,9(11)プレグネトリエ
ン類の有用性を明らかにしている。合衆国特許第4,041,
055号はΔ1,4-アンドロステンジオン誘導体からのコ−
チコステロイドの合成法を明らかにしており、1,2-デヒ
ドロアンドロステン類の有用性を、医学的に有用なステ
ロイドの製造における重要な中間体として示している。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ティモシィ ウエンデル エバンス アメリカ合衆国 ミシガン州 スリ−リバ −ス ウエスト ミシガン 16710
Claims (8)
- 【請求項１】 芳香族炭化水素からなる水と混ざらない
溶媒と外因性電子キャリヤ−の存在下に、アルトロバク
タ−・シンプレックス又はバクテリウム・シクロオキシ
ダンスに1,2-飽和ステロイドを露出することからなる、
1,2-飽和ステロイドを1,2-デヒドロステロイドへ変換す
る改良法。 - 【請求項２】 電子キャリヤ−がメナジオン、1,4-ナフ
トキノン、メナジオン重亜硫酸塩又はその他のビタミン
Ｋ型化合物類であり、芳香族炭化水素がトルエン又はキ
シレンである、特許請求の範囲第１項による方法。 - 【請求項３】 芳香族炭化水素からなる水と混ざらない
溶媒が、ステロイド基質又は生成物ステロイドの最も易
溶なものを溶解させるのに必要な量の約半量、ないしス
テロイド基質又は生成物ステロイドの最も難溶なものを
溶解させるのに必要な量の約４倍量存在する、特許請求
の範囲第１項による方法。 - 【請求項４】 芳香族炭化水素からなる水と混ざらない
溶媒と外因性電子キャリヤ−の存在下に、1,2-飽和ステ
ロイドをアルトロバクタ−シンプレックス又はバクテリ
ウムシクロオキシダンスに露出し、その場合に燃焼に必
要な最小酸素量より酸素濃度を低く保つように酸素を加
えることからなる、1,2-飽和ステロイドを1,2-デヒドロ
ステロイドに転化する改良法である特許請求の範囲第１
項に記載の方法。 - 【請求項５】 電子キャリヤ−がメナジオン、1,4-ナフ
トキノン、メナジオン重亜硫酸塩又は他のビタミンＫ型
化合物であり、芳香族炭化水素がベンゼン、トルエン又
はキシレンである、特許請求の範囲第３項による方法。 - 【請求項６】 芳香族炭化水素からなる水と混ざらない
溶媒及び外因性電子キャリヤ−の存在下に、1,2-飽和ス
テロイドをアルトロバクタ−シンプレックス又はバクテ
リウムシクロオキシダンスに露出し、その場合に有機溶
媒の引火点より低温で反応を行なうことからなる、1,2-
飽和ステロイドを1,2-デヒドロステロイドへ転化する改
良法である特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - 【請求項７】 電子キャリヤ−がメナジオン、フェナジ
ンメトサルフェ−ト、1,4-ナフトキノン、メナジオン重
亜硫酸塩、又はその他のビタミンＫ型化合物類であり、
芳香族炭化水素がキシレンである、特許請求の範囲第６
項による方法。 - 【請求項８】 水と混ざらない溶媒を別の水と混ざらな
い溶媒で希釈する、特許請求の範囲第１、４又は６項に
よる方法。
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US40394982A | 1982-07-30 | 1982-07-30 | |
| US06/436,552 US4524134A (en) | 1982-07-30 | 1982-10-25 | Process for preparing 1,2-dehydro steroids |
| US47543783A | 1983-03-15 | 1983-03-15 | |
| US436,552 | 1983-03-15 | ||
| US475,437 | 1983-03-15 | ||
| US403,949 | 1983-03-15 |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13453683A Division JPH0614874B2 (ja) | 1982-07-30 | 1983-07-25 | ステロイド転化プロセス |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06225792A true JPH06225792A (ja) | 1994-08-16 |
| JPH0824596B2 JPH0824596B2 (ja) | 1996-03-13 |
Family
ID=27410563
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13453683A Expired - Lifetime JPH0614874B2 (ja) | 1982-07-30 | 1983-07-25 | ステロイド転化プロセス |
| JP5250926A Expired - Lifetime JPH0824596B2 (ja) | 1982-07-30 | 1993-09-14 | ステロイド転化プロセス |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13453683A Expired - Lifetime JPH0614874B2 (ja) | 1982-07-30 | 1983-07-25 | ステロイド転化プロセス |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JPH0614874B2 (ja) |
| CH (1) | CH657871A5 (ja) |
| DD (1) | DD213242A5 (ja) |
| DE (1) | DE3322120A1 (ja) |
| FR (1) | FR2531101B1 (ja) |
| GB (2) | GB2123833B (ja) |
| IE (1) | IE55533B1 (ja) |
| NL (1) | NL8302596A (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2568908B1 (fr) * | 1984-08-10 | 1986-12-26 | Doris Dev Richesse Sous Marine | Plate-forme oscillante sur pieux flexibles pour travaux en mer |
| US5380841A (en) * | 1985-09-12 | 1995-01-10 | The Upjohn Company | Pyridinylpiperazinyl steroids |
| USRE35053E (en) * | 1985-09-12 | 1995-10-10 | The Upjohn Company | Amines useful in producing pharmaceutically active CNS compounds |
| US5099019A (en) * | 1985-09-12 | 1992-03-24 | Upjohn Company | Amines useful in producing pharmaceutically active CNS compounds |
| AU1340888A (en) * | 1987-03-12 | 1988-10-10 | Upjohn Company, The | 1,2-dehydrogenation of steroidal 21-esters with a. simplex |
| AU2006334054B2 (en) * | 2005-12-28 | 2012-11-01 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for production of dried microorganism cell |
| HU227367B1 (en) * | 2007-09-11 | 2011-04-28 | Richter Gedeon Nyrt | Method for producing 6-hydroxymethyl-1,4-androstadiene-3,17-dion |
| ES2744879T3 (es) * | 2008-05-28 | 2020-02-26 | Reveragen Biopharma Inc | Moduladores esteroideos no hormonales de NF-kappaB para el tratamiento de enfermedades |
| US20120178124A1 (en) | 2009-01-07 | 2012-07-12 | Mitsubishi Chemical Corporation | Sterol side chain-cleaving enzyme protein and use thereof |
| WO2011127048A2 (en) | 2010-04-05 | 2011-10-13 | Validus Biopharma | NON-HORMONAL STEROID MODULATORS OF NF-ĸB FOR TREATMENT OF DISEASE |
| US10799514B2 (en) | 2015-06-29 | 2020-10-13 | Reveragen Biopharma, Inc. | Non-hormonal steroid modulators of NF-kappa beta for treatment of disease |
| US11382922B2 (en) | 2019-03-07 | 2022-07-12 | Reveragen Biopharma, Inc. | Aqueous oral pharmaceutical suspension compositions |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB883500A (en) * | 1958-09-15 | 1961-11-29 | Wisconsin Alumni Res Found | Improvements in a microbiological process for the preparation of steroids and ketones |
| FR1262182A (fr) * | 1960-07-01 | 1961-05-26 | Olin Mathieson | Procédé de déshydrogénation sélective du noyau a des stéroïdes |
| US3087864A (en) * | 1961-04-28 | 1963-04-30 | American Cyanamid Co | Process for the 1, 2-hydrogenation of steroids by the use of dried thalli |
| CH414063A (de) * | 1962-11-23 | 1966-05-31 | Eprova Ag | Röntgenkontrastmittel |
| US3360439A (en) * | 1964-08-19 | 1967-12-26 | Squibb & Sons Inc | Process for preparing 1-dehydro steroids |
| US3549498A (en) * | 1968-04-02 | 1970-12-22 | Squibb & Sons Inc | 11alpha-substituted steroids and process |
| FR2285137A1 (fr) * | 1974-09-18 | 1976-04-16 | Roussel Uclaf | Nouveaux derives steroides 17-spirosultines, les g-hydroxyacides correspondants, leur procede de preparation et leur application comme medicament |
| US4035236A (en) * | 1975-10-24 | 1977-07-12 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione |
| US4041055A (en) * | 1975-11-17 | 1977-08-09 | The Upjohn Company | Process for the preparation of 17α-hydroxyprogesterones and corticoids from androstenes |
-
1983
- 1983-06-20 DE DE19833322120 patent/DE3322120A1/de active Granted
- 1983-06-27 GB GB08317422A patent/GB2123833B/en not_active Expired
- 1983-07-08 CH CH378483A patent/CH657871A5/de not_active IP Right Cessation
- 1983-07-15 DD DD25312383A patent/DD213242A5/de not_active IP Right Cessation
- 1983-07-20 NL NL8302596A patent/NL8302596A/nl active Search and Examination
- 1983-07-25 JP JP13453683A patent/JPH0614874B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1983-07-27 IE IE176783A patent/IE55533B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-07-29 FR FR8312564A patent/FR2531101B1/fr not_active Expired
-
1984
- 1984-02-01 GB GB08402640A patent/GB2131811B/en not_active Expired
-
1993
- 1993-09-14 JP JP5250926A patent/JPH0824596B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| BIOTECHNOL.BIOENG=1979 * |
| CHEM.PHARM.BULL=1975 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3322120A1 (de) | 1984-02-02 |
| DD213242A5 (de) | 1984-09-05 |
| GB2123833A (en) | 1984-02-08 |
| GB8317422D0 (en) | 1983-07-27 |
| JPH0614874B2 (ja) | 1994-03-02 |
| FR2531101B1 (fr) | 1985-11-15 |
| DE3322120C2 (ja) | 1992-10-08 |
| JPS5939299A (ja) | 1984-03-03 |
| NL8302596A (nl) | 1984-02-16 |
| IE831767L (en) | 1984-01-30 |
| GB2131811A (en) | 1984-06-27 |
| CH657871A5 (de) | 1986-09-30 |
| GB8402640D0 (en) | 1984-03-07 |
| JPH0824596B2 (ja) | 1996-03-13 |
| FR2531101A1 (fr) | 1984-02-03 |
| IE55533B1 (en) | 1990-10-24 |
| GB2131811B (en) | 1986-06-11 |
| GB2123833B (en) | 1986-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Mahato et al. | Current trends in microbial steroid biotransformation | |
| Sedlaczek et al. | Biotransformations of steroids | |
| Mahato et al. | Steroid transformations by microorganisms-III | |
| Mahato et al. | Steroid transformations by microorganisms—II | |
| ES2389383T3 (es) | Procedimiento para la preparación de derivados de esteroides mediante la reducción de compuestos oxoesteroides o mediante la oxidación de compuestos hidroxiesteroides usando una hidroxiesteroide deshidrogenasa | |
| Vischer et al. | Enzymic transformations of steroids by microorganisms. | |
| Rohman et al. | Application of microbial 3-ketosteroid Δ1-dehydrogenases in biotechnology | |
| US4524134A (en) | Process for preparing 1,2-dehydro steroids | |
| JPH06225792A (ja) | ステロイド転化プロセス | |
| US4749649A (en) | Microbial Δ1-dehydrogenation process using a scavenger of toxic oxygen | |
| IE44515B1 (en) | Process for the manufacture of 4-androstene-3,17-dione derivatives | |
| RU2425052C1 (ru) | Способ получения 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона из андрост-4-ен-3,17-диона, способ получения 6-метиленандроста-1,4-диен-3,17-диона (эксеместана) с использованием полученного 6-метиленандрост-4-ен-3,17-диона | |
| US4397947A (en) | Microbial process for 9α-hydroxylation of steroids | |
| US4528271A (en) | Process for the intensification of microbiological conversions of steroids using cyclodextrin additives | |
| US4704358A (en) | Δ1 -dehydrogenation with heat or air-dried B. cyclooxidans | |
| Megges et al. | Microbial steroid hydroxylating enzymes in glucocorticoid production | |
| US4684610A (en) | Process for converting 1,2-saturated steroids to 1,2-dehydro steroids | |
| US2863806A (en) | 17alpha hydroxylation of steroids by trichoderma viride | |
| Madyastha | Novel microbial transformations of steroids | |
| US3801460A (en) | Simultaneous steroid oxygenation and 1-dehydrogenation with bacillus cereus | |
| GB1560850A (en) | Immobilized microorganisms | |
| IE55534B1 (en) | Steroid bioconversion | |
| US2796382A (en) | Selective oxido-reduction of beta-hydroxy and ketosteroids containing 3 beta groups and 17 beta groups | |
| EP1504021B1 (en) | Process for dehydrogenation of azaandrostane compounds | |
| CN118308280A (zh) | 一种可用于酶法制备甾体药物中间体的工程菌及其应用 |