JPH06183969A

JPH06183969A - 抗補体剤

Info

Publication number: JPH06183969A
Application number: JP15558092A
Authority: JP
Inventors: Tatsuyoshi Nakagami; 辰芳中上; Koji Toyomura; 浩司豊村; Takeshi Nakamura; 丈志中村; Taira Fujita; 平藤田; Shirou Taji; 司郎太治; Seiji Morisawa; 成司森澤
Original assignee: Nippon Meat Packers Inc
Current assignee: NH Foods Ltd
Priority date: 1992-05-22
Filing date: 1992-05-22
Publication date: 1994-07-05

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】一般式（１）で示される基本構造を有し、置
換基を有していてもよいテトラピロール誘導体又はその
薬理学的に許容される塩を有効成分とする抗補体剤。（式中、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ水酸基又は置換された水
酸基を示し、１０位の炭素と１１位の炭素の間は一重結
合又は二重結合を示す）【効果】式（１）のテトラピロール誘導体よりなる抗
補体剤は、補体反応による疾病（例えば、炎症、アレル
ギー疾患など）の治療・予防に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗補体剤に関し、より詳
細には、テトラピロール誘導体を有効成分とする抗補体
剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来から消炎、アレルギー抑制、免疫反
応抑制などを目的として種々の薬剤が用いられている
が、薬効の面や副作用の面から新たな治療手段・方法が
切望されている。そのような新たな治療手段として、抗
補体活性を有する物質(抗補体剤)を用いて補体反応を阻
害したり調整する抗補体療法が提案されている。補体は
血清中に存在する蛋白質であり、約２０種類の補体が知
られているが、主たる成分はＣ１〜Ｃ９の９種である。
補体は、抗原抗体複合体、細菌細胞壁などの種々の物質
により活性化され、細胞溶解反応などの生物活性を示
す。補体が活性化されていく経路には、古典的経路(cla
ssical pathway)と代替経路(alternative pathway)の２
種類の系があり、古典的経路は抗原抗体複合体に補体成
分が順次結合して活性化されていく経路であり、最初は
Ｃ１から始まり、Ｃ４、Ｃ２、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ
７、Ｃ８、Ｃ９と活性化され、膜傷害性複合体が形成さ
れて細胞溶解を誘発する。一方、代替経路は、Ｃ３の活
性化から始まる経路である。また、このような補体の活
性化に伴い、アナフィラトキシンが産生され、肥満細胞
からヒスタミンを遊離する。生体内のアレルギー反応や
免疫反応も最終的には炎症反応として発現され、組織障
害を引き起こす。炎症反応は、補体系、凝固系、線溶
系、カリクレイン・キニン系、レニン・アンギオテンシ
ン血圧調節系などの生体反応系が複雑な相互関係を形成
してもたらされる。このように補体の作用により炎症反
応は増幅されるので、補体系の過剰な反応を阻止するこ
とにより炎症を鎮静化させることが可能となる。抗補体
療法は、このような観点から、補体反応を阻害ないしは
調整することにより、炎症を鎮め、組織障害を防止する
治療法である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】補体反応を阻害ないし
は調整する薬剤としては、アミノ酸系化合物（例えば、
イプシロンアミノカプロン酸など）、ＳＨ化合物（例え
ば、システイン、グルタチオンなど）、ポリアニオン系
化合物（例えば、デキストランサルフェート、ヘパリン
など）、非ステロイド系消炎剤（例えば、フルフェナム
酸、メフェナム酸など）等が知られている。しかし、こ
れらの薬剤は、その効果が不十分であったり、副作用を
有するなどの問題があり、新たな抗補体剤が望まれてい
る。本発明は上記の課題に鑑みてなされたもので、本発
明者らが種々の検討を重ねた結果、特定のテトラピロー
ル誘導体が顕著な抗補体活性を有することを見出して完
成したもので、本発明は新規な抗補体剤を提供すること
を目的とする。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めになされた本発明の抗補体剤は、下記構造式（１）で
示される基本構造を有し、該構造式（１）の２位、３
位、７位、８位、１２位、１３位、１７位及び１８位に
置換基を有していてもよいテトラピロール誘導体又はそ
の薬理学的に許容される塩を有効成分とするものであ
る。

【０００５】

【化２】

【０００６】（式中、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ水酸基又は
置換された水酸基を示し、１０位の炭素と１１位の炭素
の間は一重結合又は二重結合を示す）上記構造式（１）
においては、便宜上、左側の環より順にＡ〜Ｄの記号を
付した。また、構造式（１）の両端のＡ環及びＤ環にお
いて、基Ｒ¹及び／又はＲ²が水酸基の場合、該環は下記
部分構造式（ａ）及び（ｂ）で示されるエノール−ケト
の互変異性をとりえることは当業者に広く知られてい
る。

【０００７】

【化３】

【０００８】本明細書においては、このような互変異性
体を、便宜上、部分構造式（ａ）で表すものとする。本
発明の抗補体剤の有効成分は、上記の構造式（１）で表
される基本構造を有し、該構造式の２位、３位、７位、
８位、１２位、１３位、１７位及び１８位に置換基を有
していてもよいテトラピロール誘導体又はその薬理学的
に許容される塩である。薬理学的に許容される塩として
は、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム
塩など）、アルカリ土類金属塩（マグネシウム塩、カル
シウム塩など）のような無機金属塩、アンモニウム塩、
有機塩基塩（例えば、トリメチルアミン塩、トリエチル
アミン塩、ピリジン塩、ピコリン塩など）、有機酸塩
（例えば、ギ酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、
メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエン
スルホン酸塩など）、無機酸塩（例えば、塩酸塩、臭化
水素酸塩、硫酸塩、リン酸塩など）等が挙げられる。

【０００９】また、構造式（１）の２位、３位、７位、
８位、１２位、１３位、１７位及び１８位に置換し得る
基としては種々の置換基が挙げられるが、好適には、例
えば、低級アルキル基（例えば、メチル、エチル、プロ
ピル、ブチル、イソブチル、第三級ブチル、ペンチル、
ヘキシルなど）、アルケニル基（例えば、ビニル、アリ
ル、１−プロペニル、３−ブテニル、４−ペンテニル、
５−ヘキセニル、フィチル、ファーネシルなど）、カル
ボキシアルキル基及びエステル化されたカルボキシアル
キル基（例えば、カルボキシメチル、カルボキシエチ
ル、メトキシカルボニルメチル、エトキシカルボニルエ
チル、グルクロニドカルボニルエチルなど）等が挙げら
れる。Ｒ¹及びＲ²の置換された水酸基としては、例え
ば、アシルオキシ基（例えば、アセトキシ、プロピオニ
ルオキシ、ベンゾイルオキシなど）、アルコキシ基（例
えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキ
シ、ブトキシ、第三級ブトキシ、ペンチルオキシ、ヘキ
シルオキシなど）等が挙げられる。

【００１０】本発明の抗補体の有効成分であるテトラピ
ロール誘導体は、胆汁色素等の天然成分から採取するこ
とができ、また人工的に合成されたものでもよく、さら
に胆汁色素自体を使用することもできる。特に好適な化
合物としては、ビリベルジン（以下、ＢＶという）及び
ビリルビンが挙げられ、これらの化合物は作用に優れる
と共に正常代謝産物であり副作用も少ないという利点を
有し、ＢＶが特に好ましい。本発明の抗補体剤は補体系
が関与する炎症反応の鎮静化に有用であり、具体的に
は、例えば、ヒトをはじめとするウシ、ウマ、ブタ、ヒ
ツジなどの哺乳動物のＩＩ型アレルギー、ＩＩＩ型アレ
ルギー、膠原病（例えば、全身性エリテマトーデス、進
行性全身性硬化症、結節性多発性動脈炎、リウマチ熱、
関節リウマチ、皮膚筋炎など）等の治療・予防に用いら
れる。

【００１１】本発明の抗補体剤において、有効成分の投
与量は、患者の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与経
路、投与スケジュール、製剤形態等により、適宜選択・
決定されるが、例えば、経口投与の場合、一般に１日当
り０．５〜３００ｍｇ／ｋｇ体重程度とされる。本発明
の抗補体剤は、経口投与又は非経口投与のいずれも採用
することができる。投与に際しては、有効成分を経口投
与、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液
体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形
態で投与することができる。このような製剤としては、
例えば、錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤等の固形剤、
溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げ
られ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調製する
ことができる。上記の医薬用無毒性担体としては、例え
ば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、
デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコ
ール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコー
ル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ア
ミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙
げられる。また、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳
化剤、結合剤、等張化剤等の慣用の添加剤を適宜添加す
ることができる。より具体的には、経口製剤とする場合
には、例えば、有効成分を非イオン系界面活性剤のよう
な分散剤を用いて懸濁液とし、糖、糖アルコール、無水
ケイ酸、非イオン界面活性剤等のような崩壊剤を添加し
た後、凍結乾燥して粉末化し、常法に準じて、任意の剤
形（例えば、カプセル、散剤、粗粒剤、顆粒剤、錠剤、
液剤等）に製剤化することにより得られ、また特開昭６
０−２０８９１０号公報、特開昭６１−２７９６５号公
報等に記載のリポソーム化法を用いれば、リポソーム製
剤とすることができる。また、静注製剤とする場合に
は、有効成分を、例えば、界面活性剤による乳化、シク
ロデキストリンによる包接化、リポソーム化、脂肪乳剤
化等の慣用の手段を用いて製剤化することにより得られ
る。

【００１２】

【発明の効果】本発明の抗補体剤の有効成分である前記
テトラピロール誘導体及びその塩は、補体反応の古典的
活性化経路の阻害作用、特に補体Ｃ１に対する直接的阻
害作用を有する。従って、当該テトラピロール誘導体及
びその塩を有効成分として含有する本発明の抗補体剤
は、補体反応により発生ないし増幅する疾病（例えば、
炎症、アレルギー疾患等）の予防、治療などに極めて有
用である。

【００１３】

【実施例】以下、実施例及び試験例に基づいて本発明を
より詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定され
るものではない。実施例１ＢＶ（２０ｇ）を５W/V％ポリオキシエチレンポリオキ
シプロピレングリコール水溶液５０ｍｌに懸濁し、ガラ
スビーズを用いて湿式粉砕を行った。次いで、得られた
粉砕液５０ｍｌにショ糖脂肪酸エステル３０ｇを加え、
ドライアイス・メタノール浴で凍結後、乾燥して凍結乾
燥製剤を調製した。

【００１４】実施例２ＢＶ（１．８ｍｇ）を１２．５％（W/V)ジメチルβ型シ
クロデキストリンを含むウィテプゾルＷ−３５坐剤用基
剤（４５ｍｇ）に加熱分散した後、常法により坐剤を調
製した。

【００１５】試験例本発明の抗補体剤の効果を調べるため、有効成分の一種
であるＢＶについて、補体関与溶血反応抑制試験及び補
体関与アレルギー反応抑制試験で抗補体作用を試験し
た。以下、その方法及び試験結果を示す。なお、使用し
た材料及びその調製法は以下のとおりである。ＢＶ：ＢＶはウシ胆汁由来ＢＶ（シグマ社製）を用い
た。補体及び補体成分：モルモット補体（以下、ｇｐＣと
いう）血清は、Inoueら(J. Immunol., 119,p65-72, 197
7)の方法により調製した。また、モルモットＣ１並びに
ヒトＣ４及びＣ２はKinoshitaら(J. Biol. Chem., 265,
14444-14449, 1990)の方法により調製した。ヒトＣ１
はダイアメディクス社より入手したものを使用した。ヒツジ赤血球：ヒツジ赤血球（以下、ＳＲＢＣとい
う）は大阪大学微生物病研究所より入手したものを使用
した。家兎抗ＳＲＢＣ抗血清：家兎抗ＳＲＢＣ抗血清は、熱
変性ＳＲＢＣを用い、Mayer(Experimental Immunochemi
stry 2nd ed. Vol.III, p133, 1961)の方法により調製
した。緩衝液：下記の緩衝液を使用した。ＧＶＢ：上記Mayerの文献記載の方法に準じて調製し
た、0.1%ゼラチンを含有する等張化ベロナール緩衝食塩
水(pH7.3)。ＤＧＶＢ：2.5%デキストロース、0.15mM塩化カルシウム
及び1mM塩化マグネシウムを含有するＧＶＢ(pH7.3)。ＥＤＴＡ−ＧＶＢ：９容量部のＧＶＢと１容量部の0.1M
EDTA-Na₃からなる緩衝液(pH7.3)。抗体及び補体で感作したヒツジ赤血球（中間体細胞）
の調製：抗体感作ヒツジ赤血球（以下、ＥＡという）と
補体（Ｃ）との結合は、Kinoshitaら(Biochem. J., 26
1, p743-748, 1989)の方法に準じて行った。その概略は
以下のとおりである。ＥＡＣ１は、ＥＡ（１０⁸細胞／
ｍｌ）とＣ１（２００単位／ｍｌ）とを、ＤＧＶＢ中、
３０℃で１５分間インキュベートすることにより調製し
た。ＥＡＣ１４は、ＥＡＣ１（１０⁸細胞／ｍｌ）と等
容量のＣ４（濃度：０．２−１０μｇ／ｍｌ）とを、Ｄ
ＧＶＢ中、３０℃で３０分間インキュベートすることに
より調製した。ＥＡＣ１４２は、ＥＡＣ１４（１０⁸細
胞／ｍｌ）と等容量のＣ２（濃度：４００単位／ｍｌ）
とを、ＤＧＶＢ中、３０℃で１０分間インキュベートす
ることにより調製した。

【００１６】本発明における補体関与溶血反応抑制試験
の反応工程式を図１に示す。即ち、ｇｐＣ、Ｃ１、Ｃ
４、Ｃ２又はＣ−ＥＤＴＡを、抗補体剤の存在下又は非
存在下に、ＥＡ又は適当な中間体細胞とインキュベート
し、溶血反応の終了後、溶血率を測定し、溶血に対する
ＢＶの効果を評価した。以下、具体的に説明する。試験例１（補体関与溶血反応抑制試験１）ＥＡ（１０⁸細胞／ｍｌ）とｇｐＣ血清（３２００倍希
釈）とを、ＢＶの存在下又は非存在下に、ＤＧＶＢ中、
撹拌しながら３７℃で１時間インキュベートした。５分
間冷却した後、上清の吸光度（４１２ｎｍ）を測定し、
溶血率（％）を求めた。また、ＢＶに代えてコンジュゲ
ートビリルビン（以下、ＣＢＲという）を用い、同様な
試験を行った。その結果を図２に示す。また、ＥＡ（１
０⁸細胞／ｍｌ）を、ＤＧＶＢ中、３７℃で１０、３０
又は６０分間の条件でＢＶ（０又は４０μｇ／ｍｌ）と
インキュベートし、洗浄する前処理を行った。かくして
得られたＢＶ前処理ＥＡを用い、上記と同様にしてｇｐ
Ｃ血清（３２００倍希釈）とインキュベートし、溶血率
を求めた。その結果を図３に示す。なお、ＢＶ及びＣＢ
Ｒは純ＤＭＳＯに溶解し、次いで反応緩衝液に添加し
た。最終ＤＭＳＯ濃度は０．５％となるように調整した
（以下の試験においても同様である）。図２に示される
ように、ＢＶは濃度０−４０μｇ／ｍｌの範囲で、ＣＢ
Ｒは０−８０μｇ／ｍｌの範囲で濃度依存的にｇｐＣ関
与溶血反応を阻害することが明らかとなった。また、図
３に示されるように、ＢＶで前処理したＥＡにおいて
は、インキュベーション時間が６０分間の場合にも、Ｂ
ＶにはｇｐＣ関与溶血反応に対する阻害作用は認められ
なかった。このことから、ＢＶは補体に作用しているこ
とが明らかとなった。

【００１７】試験例２（補体関与溶血反応抑制試験２）試験する各補体成分（Ｃ１、Ｃ４又はＣ２）を、ＢＶの
存在下又は非存在下に、前述した適当な中間体細胞とＤ
ＧＶＢ中、撹拌しながら３７℃で１時間インキュベート
した。生成したＥＡＣ１４２は、最終的にｇｐＣ血清
と、ＥＤＴＡ−ＧＢＶ中、撹拌下、３７℃で１時間イン
キュベートした（Ｃ−ＥＤＴＡ）。次いで、溶血率を測
定し、各補体成分に対するＢＶの溶血反応阻害効果を評
価した。その結果を図４に示す。なお、図中、黒丸はヒ
ト補体を、白丸はモルモット補体を示す。図４のＡ〜Ｄ
をより具体的に説明する。

【００１８】Ａ：ＥＡ（１０⁸細胞／ｍｌ）と１０単位
／ｍｌのヒト補体Ｃ１（黒丸）又はモルモット補体Ｃ１
（白丸）とを、ＢＶの存在下、３０℃で１０分間インキ
ュベートし、次いで洗浄しＢＶを除去した。ＥＡＣ１４
２は、前述の「抗体及び補体で感作したヒツジ赤血球
（中間体細胞）の調製」の項で述べた方法で、ＥＡＣ１
から調製した。生成したＥＡＣ１４２は、最終的に、７
０倍に希釈したｇｐＣを等容量用いて、ＥＤＴＡ−ＧＶ
Ｂ中、３７℃、１時間の条件で溶解し、溶血率を測定し
た。Ｂ：ＥＡＣ１（１０⁸細胞／ｍｌ）と等容量のＣ４（１
５．２μｇ／ｍｌ）とをＢＶの存在下、３０℃で１０分
間インキュベートし、次いで洗浄しＢＶを除去した。生
成したＥＡＣ１４の溶血率は、上記と同様にして測定し
た。Ｃ：ＥＡＣ１４（１０⁸細胞／ｍｌ）と等容量のＣ２
（１０単位／ｍｌ）とをＢＶの存在下、３０℃で１０分
間インキュベートし、次いで洗浄しＢＶを除去した。生
成したＥＡＣ１４２の溶血率は、上記と同様にして測定
した。Ｄ：ＥＡＣ１４２（１０⁸細胞／ｍｌ）は、１６００倍
に希釈したｇｐＣ血清を等容量用いて、ＢＶの存在下、
ＥＤＴＡ−ＧＶＢ中、３７℃、１時間の条件で溶解し、
次いで溶血率を測定した。

【００１９】図４に示されるように、ＢＶはＣ１ステッ
プの処理において顕著な溶血反応阻害効果を示し、特に
ＢＶ濃度４０μｇ／ｍｌにおいては約９０％の阻害率を
示した。それに対して、Ｃ４及びＣ２ステップの処理に
おいては、ＢＶは溶血反応阻害効果を示さなかった。こ
のことから、ＢＶは補体Ｃ１に対して阻害作用を示すこ
とが明らかとなった。また、Ｃ−ＥＤＴＡ（補体成分と
して、Ｃ３、Ｃ５、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８及びＣ９なども含
まれている）ステップの処理においても、ＢＶは緩やか
な溶血反応阻害効果を示した。

【００２０】本発明の抗補体剤の補体関与アレルギー反
応抑制を、モルモット・フォルスマンアナフィラキシー
試験で試験した。すなわち、フォルスマンアナフィラキ
シーは補体反応が関与したアナフィラキシーであり、フ
ォルスマン抗血清を静注されたモルモットはアナフィラ
キシーを惹起し、虚脱状態となり、約５分後に死亡す
る。このアナフィラキシーの抑制により抗補体活性を評
価した。その方法及び結果は以下のとおりである。試験例３（補体関与アレルギー反応抑制試験）モルモット・フォルスマンアナフィラキシーを、Pelcza
rskaら(J. Pharmacol.Exp. Therapeut., 185, p116-12
5, 1973)の方法に準じて誘発させた。概略を示すと、フ
ォルスマン抗血清は、１．０ｍｌの１０％ＳＲＢＣ懸濁
液（日本抗体社製）を１日おきに静注された雄性白子兎
から調製した。最終投与１７日後、血清を集め、凍結し
て保存した。雄性ハートレイモルモット（体重３００−
４００ｇ）に上記血清を静注（投与量：１ｍｌ／ｋｇ体
重）し、アナフィラキシーを惹起させた。試験薬剤は、
血清の静注の２分前に静注投与するか、又は血清の静注
の１時間前に経口投与した。薬剤投与後６０分の実験動
物の状態を観察するとともに薬剤投与２４時間後の生存
動物数を数え、抗補体活性を評価した。また、抗補体作
用を有する非ステロイド系消炎剤であるフルフェナム酸
（シグマ社製）を比較薬剤として用いた。なお、ＢＶ及
びフルフェナム酸は生理食塩水に懸濁させたもの（ＢＶ
濃度：０．５ｍｇ／ｍｌ、２．５ｍｇ／ｍｌ又は２５ｍ
ｇ／ｍｌ；フルフェナム酸：２．５ｍｇ／ｍｌ又は２５
ｍｇ／ｍｌ）を投与した。コントロール群の実験動物に
は、静注投与の場合には生理食塩水（１ｍｌ／ｋｇ）
を、経口投与の場合は蒸留水（２ｍｌ／ｋｇ）を投与し
た。試験結果を表１に示す。

【００２１】

【表１】

【００２２】表１に示されるように、静注投与の場合、
ＢＶは５ｍｇ／ｋｇの投与量で高い生存率を示し、また
死亡時間の有意な遅延も認められた。経口投与の場合、
ＢＶはアナフィラキシーにより誘発される死亡に対して
有効であり、５ｍｇ／ｋｇの投与量で５０％という高い
生存率を示した。このことから、ＢＶは高い抗補体活性
を有することが判明した。一方、比較薬剤であるフルフ
ェナム酸は、静注及び経口のいずれの投与方法でもアナ
フィラキシーを抑制したが、その効果はＢＶより弱いも
のであった。

【図面の簡単な説明】

【図１】補体関与溶血反応抑制試験の反応工程式を示す
図である。

【図２】ｇｐＣ関与溶血反応に対するＢＶ及びＣＢＲの
効果を示す図である。

【図３】ｇｐＣ関与溶血反応において、抗体で感作した
ＳＲＢＣ（ＥＡ）に対するＢＶの前処理効果を示す図で
ある。

【図４】補体関与溶血反応において、各補体成分に対す
るＢＶの効果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者太治司郎大阪市中央区南本町３丁目６番14号 (72)発明者森澤成司西宮市高塚町２丁目22番312号

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式【化１】（式中、Ｒ¹及びＲ²はそれぞれ水酸基又は置換された水
酸基を示し、１０位の炭素と１１位の炭素の間は一重結
合又は二重結合を示す）で示される基本構造を有し、該
構造式の２位、３位、７位、８位、１２位、１３位、１
７位及び１８位に置換基を有していてもよいテトラピロ
ール誘導体又はその薬理学的に許容される塩を有効成分
とする抗補体剤。
【請求項２】有効成分がビリベルジン又はその薬
理学的に許容される塩である請求項１記載の抗補体剤。