JPH0616690A - アントラサイクリン類のグリコシルプロドラツグ - Google Patents
アントラサイクリン類のグリコシルプロドラツグInfo
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- JPH0616690A JPH0616690A JP3029120A JP2912091A JPH0616690A JP H0616690 A JPH0616690 A JP H0616690A JP 3029120 A JP3029120 A JP 3029120A JP 2912091 A JP2912091 A JP 2912091A JP H0616690 A JPH0616690 A JP H0616690A
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- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/244—Anthraquinone radicals, e.g. sennosides
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- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【構成】下記式Ｉ
〔式中、Ｒ1，Ｒ2及びＲ3は水素、ヒドロキシル又はメ
トキシ、Ｒ4，Ｒ5及びＲ6は水素、ヒドロキシル、ハロ
ゲン又は脂肪族アシルオキシなど、Ｒ7は Ｒ8はメチル、ヒドロキシメチルなど、Ｒ9，Ｒ10及びＲ
11は水素、ヒドロキシル、アシルオキシなどを示す〕で
示される化合物及びそれらの無機又は有機酸との塩。 【効果】腫瘍特異的酵素接合体の作用により細胞傷害活
性物質に分解され得るプロドラッグとしての１４−０−
グリコシルアントラサイクリン類で、癌の治療に適して
いる。
トキシ、Ｒ4，Ｒ5及びＲ6は水素、ヒドロキシル、ハロ
ゲン又は脂肪族アシルオキシなど、Ｒ7は Ｒ8はメチル、ヒドロキシメチルなど、Ｒ9，Ｒ10及びＲ
11は水素、ヒドロキシル、アシルオキシなどを示す〕で
示される化合物及びそれらの無機又は有機酸との塩。 【効果】腫瘍特異的酵素接合体の作用により細胞傷害活
性物質に分解され得るプロドラッグとしての１４−０−
グリコシルアントラサイクリン類で、癌の治療に適して
いる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はアントラサイクリン類の
グリコシルプロドラッグ、それらの製造方法およびそれ
らを癌治療のために官能化された腫瘍特異的酵素接合体
（コンジュゲート）と併用して用いることに関する。詳
細には本発明は腫瘍特異的酵素接合体の作用により細胞
傷害活性物質に分解され得るプロドラッグとしての１４
−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン類に関する。この
場合において遊離される活性物質はその細胞傷害活性の
故に癌の治療に適している。
グリコシルプロドラッグ、それらの製造方法およびそれ
らを癌治療のために官能化された腫瘍特異的酵素接合体
（コンジュゲート）と併用して用いることに関する。詳
細には本発明は腫瘍特異的酵素接合体の作用により細胞
傷害活性物質に分解され得るプロドラッグとしての１４
−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン類に関する。この
場合において遊離される活性物質はその細胞傷害活性の
故に癌の治療に適している。
【０００２】
【従来の技術】プロドラッグと腫瘍特異的酵素接合体の
組合せを治療剤として試験可能なモデルが専門文献に記
載されている。これは、特定組織に対するものであって
プロドラッグ分解性酵素を共有結合的に結合させた抗体
をこの組織を移植済みの動物に注射することより成る。
ＭＡｂ−酵素接合体を標的組織に局在させた後、その酵
素によって活性化され得るプロドラッグ化合物を投与す
る。組織に係留された抗体−酵素接合体の作用によりプ
ロドラッグは移植組織に対し細胞傷害作用を及ぼすサイ
トトキシンに変化する。
組合せを治療剤として試験可能なモデルが専門文献に記
載されている。これは、特定組織に対するものであって
プロドラッグ分解性酵素を共有結合的に結合させた抗体
をこの組織を移植済みの動物に注射することより成る。
ＭＡｂ−酵素接合体を標的組織に局在させた後、その酵
素によって活性化され得るプロドラッグ化合物を投与す
る。組織に係留された抗体−酵素接合体の作用によりプ
ロドラッグは移植組織に対し細胞傷害作用を及ぼすサイ
トトキシンに変化する。
【０００３】WO 88／07378は２成分を含み、抗体−酵素
成分とその酵素により活性化され得るプロドラッグ成分
とで構成される治療系を記載している。この場合に非哺
乳動物性酵素を用いて抗体−酵素接合体を調製し、また
非特異的活性物質放出の可能性があるため内生酵素の使
用は排除される。外生酵素は生物により異物抗原として
認識されるので、その使用には、これら非内生物質に対
する免疫応答が生じそのために抗体に固定された酵素の
失活を招きまた場合によっては接合体全体の消失を招く
といった欠点が伴う。更にこの場合に、その化学的半減
期が比較的短く好ましくは５.０〜１７.０時間の範囲に
あるｐ−ビス−Ｎ−（２−クロロエチル）アミノベンジ
ルグルタミン酸およびそれらの誘導体がプロドラッグと
して用いられる。プロドラッグが化学的に不安定である
ことは、副作用が予測されるため一つの欠点である。
成分とその酵素により活性化され得るプロドラッグ成分
とで構成される治療系を記載している。この場合に非哺
乳動物性酵素を用いて抗体−酵素接合体を調製し、また
非特異的活性物質放出の可能性があるため内生酵素の使
用は排除される。外生酵素は生物により異物抗原として
認識されるので、その使用には、これら非内生物質に対
する免疫応答が生じそのために抗体に固定された酵素の
失活を招きまた場合によっては接合体全体の消失を招く
といった欠点が伴う。更にこの場合に、その化学的半減
期が比較的短く好ましくは５.０〜１７.０時間の範囲に
あるｐ−ビス−Ｎ−（２−クロロエチル）アミノベンジ
ルグルタミン酸およびそれらの誘導体がプロドラッグと
して用いられる。プロドラッグが化学的に不安定である
ことは、副作用が予測されるため一つの欠点である。
【０００４】同じくEPA 0302473 A2は２成分を含み、腫
瘍組織に局在する抗体−酵素接合体がプロドラッグ化合
物を細胞傷害活性物質に分解する治療系を記載してい
る。
瘍組織に局在する抗体−酵素接合体がプロドラッグ化合
物を細胞傷害活性物質に分解する治療系を記載してい
る。
【０００５】この中で特記されているプロドラッグとし
てのアドリアマイシンのＮ−フェノキシアセチル誘導体
およびアドリアマイシンを遊離させるための抗体固定Ｌ
６ペニシリンＶアミダーゼの組合せ使用は細菌性酵素に
免疫原性があるため不利である。かかるプロドラッグの
もう一つの不利な点は、アドリアマイシンのアミノ基が
アシル化されるためにプロドラッグの脂肪親和性が高ま
りそのため血漿への溶解度が低下することであり、また
プロドラッグの細胞膜への非特異的吸着が生じ得る。
てのアドリアマイシンのＮ−フェノキシアセチル誘導体
およびアドリアマイシンを遊離させるための抗体固定Ｌ
６ペニシリンＶアミダーゼの組合せ使用は細菌性酵素に
免疫原性があるため不利である。かかるプロドラッグの
もう一つの不利な点は、アドリアマイシンのアミノ基が
アシル化されるためにプロドラッグの脂肪親和性が高ま
りそのため血漿への溶解度が低下することであり、また
プロドラッグの細胞膜への非特異的吸着が生じ得る。
【０００６】１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン
類の合成は今日まで、２−デオキシ−Ｌ−フコースでア
ドリアマイシンをグリコシド化する際の望ましくない副
反応としてのみ記載されるに過ぎなかった（Horton et
al., Carbohydrate Research９４，１１〜２５，１９８
１）。
類の合成は今日まで、２−デオキシ−Ｌ−フコースでア
ドリアマイシンをグリコシド化する際の望ましくない副
反応としてのみ記載されるに過ぎなかった（Horton et
al., Carbohydrate Research９４，１１〜２５，１９８
１）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】驚くべきことに、アン
トラサイクリンのおよびグリコシル供与体の保護基の特
定のパターンを用いることにより１４位におけるアント
ラサイクリン類のグリコシド化が可能であることが明ら
かとなった。この知見に基づき、そしてプロドラッグと
抗体−酵素接合体のこれまでの組合せに伴う前述の不利
な点を考慮しつつ、本発明は癌の治療に適した、可酵素
分解性合成１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン
類、および腫瘍特異的に官能化された酵素すなわち腫瘍
細胞に結合するように変化させた酵素を調製することを
課題とした。
トラサイクリンのおよびグリコシル供与体の保護基の特
定のパターンを用いることにより１４位におけるアント
ラサイクリン類のグリコシド化が可能であることが明ら
かとなった。この知見に基づき、そしてプロドラッグと
抗体−酵素接合体のこれまでの組合せに伴う前述の不利
な点を考慮しつつ、本発明は癌の治療に適した、可酵素
分解性合成１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン
類、および腫瘍特異的に官能化された酵素すなわち腫瘍
細胞に結合するように変化させた酵素を調製することを
課題とした。
【０００８】
【課題を解決するための手段】この課題は、併用時に細
胞静止活性試験において効果を示す式Ｉで示される化合
物および腫瘍特異的に官能化された酵素を調製すること
により解決された。
胞静止活性試験において効果を示す式Ｉで示される化合
物および腫瘍特異的に官能化された酵素を調製すること
により解決された。
【０００９】本発明は式Ｉ
【化５】 〔式中、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、各々独立的に、水素、
ヒドロキシル、メトキシであり、Ｒ4、Ｒ5およびＲ
6は、各々独立的に、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、
脂肪族アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベンゾイルオキシ
または置換ベンゾイルオキシ例えばパラ−ニトロベンゾ
イルオキシ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アリルオ
キシ、ベンジルオキシまたは置換ベンジルオキシ、テト
ラヒドロピラニルオキシ、アミノ、ＮＨ−アシル（Ｃ１
−Ｃ８）、ＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニ
ル）、モルホリノまたは置換モルホリノ、好ましくは３
−Ｏ−メチルモルホリノまたは２−シアノモルホリノで
あり、Ｒ7は式II
ヒドロキシル、メトキシであり、Ｒ4、Ｒ5およびＲ
6は、各々独立的に、水素、ヒドロキシル、ハロゲン、
脂肪族アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベンゾイルオキシ
または置換ベンゾイルオキシ例えばパラ−ニトロベンゾ
イルオキシ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アリルオ
キシ、ベンジルオキシまたは置換ベンジルオキシ、テト
ラヒドロピラニルオキシ、アミノ、ＮＨ−アシル（Ｃ１
−Ｃ８）、ＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニ
ル）、モルホリノまたは置換モルホリノ、好ましくは３
−Ｏ−メチルモルホリノまたは２−シアノモルホリノで
あり、Ｒ7は式II
【化６】 で示される炭水化物であり、そしてこの式において、Ｒ
8はメチル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル
（Ｃ１−Ｃ８）、アルキルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ
８）、ベンジルオキシメチル、アリルオキシメチル、カ
ルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシアリル
であり、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、各々独立的に、水
素、ヒドロキシル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベン
ゾイルオキシまたは置換ベンゾイルオキシ例えばパラ−
ニトロベンゾイルオキシ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ
８）、アリルオキシ、ベンジルオキシまたは置換ベンジ
ルオキシ、アミノ、ＮＨ−アシル（Ｃ１−Ｃ８）または
ＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であ
る〕で示される１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリ
ン類およびそれらの無機または有機酸との塩に関する。
8はメチル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル
（Ｃ１−Ｃ８）、アルキルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ
８）、ベンジルオキシメチル、アリルオキシメチル、カ
ルボキシル、カルボキシメチルまたはカルボキシアリル
であり、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、各々独立的に、水
素、ヒドロキシル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベン
ゾイルオキシまたは置換ベンゾイルオキシ例えばパラ−
ニトロベンゾイルオキシ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ
８）、アリルオキシ、ベンジルオキシまたは置換ベンジ
ルオキシ、アミノ、ＮＨ−アシル（Ｃ１−Ｃ８）または
ＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であ
る〕で示される１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリ
ン類およびそれらの無機または有機酸との塩に関する。
【００１０】アルファ−Ｌ−デオキシフコース立体配座
（コンフォメーション）においてＲ4＝Ｒ5＝Ｒ9＝Ｒ10
＝Ｏ−アセチルおよびＲ6＝Ｒ11＝Ｈである化合物は除
外される。
（コンフォメーション）においてＲ4＝Ｒ5＝Ｒ9＝Ｒ10
＝Ｏ−アセチルおよびＲ6＝Ｒ11＝Ｈである化合物は除
外される。
【００１１】アシル基は更にモノ−、ジ−またはトリハ
ロゲノアセチル基をも意味し、またそれらハロゲン原子
としては弗素または塩素が好ましい。
ロゲノアセチル基をも意味し、またそれらハロゲン原子
としては弗素または塩素が好ましい。
【００１２】置換ベンジルオキシは好ましくは１個また
は２個のメトキシ基により置換されたベンジルオキシを
意味する。
は２個のメトキシ基により置換されたベンジルオキシを
意味する。
【００１３】官能化された腫瘍特異的酵素は本発明の範
囲内においては、式III Ａ−Ｓｐ−Ｅ III 〔式中、Ａは腫瘍関連抗原に対し特異性を有する抗体ま
たはその断片、または腫瘍中に蓄積する生体分子、例え
ばＥＧＦ（上皮細胞増殖因子）、ＴＧＦ−α（transfor
ming growth factor α，形質転換成長因子α）、ＰＤ
ＧＦ（血小板由来成長因子）、ＩＧＦ Ｉ＋II（インス
リン様成長因子 Ｉ＋II）またはａ＋ｂ ＦＧＦ（酸性＋
塩基性線維芽細胞成長因子）などであり、Ｅは、免疫原
性がほとんどまたは全くないグリコシダーゼ、好ましく
は哺乳動物性グリコシダーゼ、例えばα−またはβ−グ
ルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、α−またはβ−
マンノシダーゼ、α−フコシダーゼ、Ｎ−アセチル−α
−ガラクトサミニダーゼ、Ｎ−アセチル−β−／Ｎ−ア
セチル−α−グルコサミニダーゼまたはβ−グルクロニ
ダーゼであり、そして Ｓｐ（スペーサー）は式 Ｘ(Ｓ)nＹ または (Ｓ)n （式中、ＸまたはＹは−ＣＯ−Ｒ12−（Ｎ−スクシンイ
ミド）−または−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−であ
り、そしてＲ12は−ＣＨ2−ＣＨ2−、１,４−シクロヘ
キシリデン、１,３−または１,４−フェニレンまたはメ
トキシカルボニル−またはクロロ−１,４−フェニレン
でありまたＲ13はＯまたはＮＨであり、Ｙは−Ｃ（＝Ｒ
13）−ＣＨ2−ＣＨ2−（式中Ｒ13は前述の意味を有す
る）であり、そしてｎは１または２である）で示される
二官能性スルフィドまたはジスルフィド含有基であるか
またはポリペプチドスペーサーである〕で示される酵素
を意味する。
囲内においては、式III Ａ−Ｓｐ−Ｅ III 〔式中、Ａは腫瘍関連抗原に対し特異性を有する抗体ま
たはその断片、または腫瘍中に蓄積する生体分子、例え
ばＥＧＦ（上皮細胞増殖因子）、ＴＧＦ−α（transfor
ming growth factor α，形質転換成長因子α）、ＰＤ
ＧＦ（血小板由来成長因子）、ＩＧＦ Ｉ＋II（インス
リン様成長因子 Ｉ＋II）またはａ＋ｂ ＦＧＦ（酸性＋
塩基性線維芽細胞成長因子）などであり、Ｅは、免疫原
性がほとんどまたは全くないグリコシダーゼ、好ましく
は哺乳動物性グリコシダーゼ、例えばα−またはβ−グ
ルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、α−またはβ−
マンノシダーゼ、α−フコシダーゼ、Ｎ−アセチル−α
−ガラクトサミニダーゼ、Ｎ−アセチル−β−／Ｎ−ア
セチル−α−グルコサミニダーゼまたはβ−グルクロニ
ダーゼであり、そして Ｓｐ（スペーサー）は式 Ｘ(Ｓ)nＹ または (Ｓ)n （式中、ＸまたはＹは−ＣＯ−Ｒ12−（Ｎ−スクシンイ
ミド）−または−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−であ
り、そしてＲ12は−ＣＨ2−ＣＨ2−、１,４−シクロヘ
キシリデン、１,３−または１,４−フェニレンまたはメ
トキシカルボニル−またはクロロ−１,４−フェニレン
でありまたＲ13はＯまたはＮＨであり、Ｙは−Ｃ（＝Ｒ
13）−ＣＨ2−ＣＨ2−（式中Ｒ13は前述の意味を有す
る）であり、そしてｎは１または２である）で示される
二官能性スルフィドまたはジスルフィド含有基であるか
またはポリペプチドスペーサーである〕で示される酵素
を意味する。
【００１４】ＶＨ、ＣＨ１、ヒンジおよび酵素遺伝子よ
り成る融合遺伝子の現れである腫瘍特異的に官能化され
た酵素は真核細胞での発現に適しそして選択マーカーを
有する発現プラスミドにクローン化することができる。
前記融合遺伝子を有する発現プラスミドは抗体に属する
軽鎖遺伝子を含む発現プラスミドと共に真核細胞にトラ
ンスフェクションされる。適当な抗生物質で選択後、そ
れら発現プラスミドを含むトランスフェクトーマクロー
ンを同定する。
り成る融合遺伝子の現れである腫瘍特異的に官能化され
た酵素は真核細胞での発現に適しそして選択マーカーを
有する発現プラスミドにクローン化することができる。
前記融合遺伝子を有する発現プラスミドは抗体に属する
軽鎖遺伝子を含む発現プラスミドと共に真核細胞にトラ
ンスフェクションされる。適当な抗生物質で選択後、そ
れら発現プラスミドを含むトランスフェクトーマクロー
ンを同定する。
【００１５】適当な検出方法（BioDot、ELISA)を用いて
抗体と酵素より成る式IIIで示される融合タンパク質を
分泌するトランスフェクトーマクローンを同定する。
抗体と酵素より成る式IIIで示される融合タンパク質を
分泌するトランスフェクトーマクローンを同定する。
【００１６】本発明において好ましい式Ｉの化合物は、
ラジカルであるＲ1がヒドロキシルまたはメトキシであ
り、Ｒ2およびＲ3がヒドロキシルであり、Ｒ4が水素、
ヒドロキシル、テトラヒドロピラニルオキシ、アミノま
たはアシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）であり、Ｒ5がヒドロ
キシル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アミノ、ＮＨ−
アシル（Ｃ１−Ｃ８）またはＮＨ−（９−フルオレニル
メトキシカルボニル）であり、Ｒ6が水素、ヒドロキシ
ル、ハロゲンまたはアシルオキシであり、Ｒ7が式IIで
示される炭水化物であり、その場合においてＲ8がメチ
ル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ
８）、アルキルオキシメチル、カルボキシル、カルボキ
シメチル、カルボキシベンジルまたはカルボキシアリル
であり、そしてＲ9、Ｒ10およびＲ11が、各々独立的
に、水素、ヒドロキシル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）
またはアルキルオキシである化合物であるが、ただしα
−Ｌ−デオキシフコース立体配座においてＲ4＝Ｒ5＝Ｒ
9＝Ｒ10＝Ｏ−アセチルおよびＲ6＝Ｒ11＝Ｈである化合
物は除外される。
ラジカルであるＲ1がヒドロキシルまたはメトキシであ
り、Ｒ2およびＲ3がヒドロキシルであり、Ｒ4が水素、
ヒドロキシル、テトラヒドロピラニルオキシ、アミノま
たはアシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）であり、Ｒ5がヒドロ
キシル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アミノ、ＮＨ−
アシル（Ｃ１−Ｃ８）またはＮＨ−（９−フルオレニル
メトキシカルボニル）であり、Ｒ6が水素、ヒドロキシ
ル、ハロゲンまたはアシルオキシであり、Ｒ7が式IIで
示される炭水化物であり、その場合においてＲ8がメチ
ル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ
８）、アルキルオキシメチル、カルボキシル、カルボキ
シメチル、カルボキシベンジルまたはカルボキシアリル
であり、そしてＲ9、Ｒ10およびＲ11が、各々独立的
に、水素、ヒドロキシル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）
またはアルキルオキシである化合物であるが、ただしα
−Ｌ−デオキシフコース立体配座においてＲ4＝Ｒ5＝Ｒ
9＝Ｒ10＝Ｏ−アセチルおよびＲ6＝Ｒ11＝Ｈである化合
物は除外される。
【００１７】更に、式IIIで示される官能化された腫瘍
特異的酵素であってその式IIIにおけるＡが腫瘍関連抗
原に対する特異性を有する抗体またはその断片、または
腫瘍上または腫瘍中に蓄積する生体分子、例えばＥＧＦ
（上皮細胞増殖因子）、ＴＧＦ−α（形質転換成長因子
α)、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ＩＧＦ Ｉ＋II
（インスリン様成長因子 Ｉ＋II）またはａ＋ｂ ＦＧＦ
（酸性＋塩基性線維芽細胞成長因子）であり、Ｅが免疫
原性がほとんどまたは全くないグリコシダーゼ、好まし
くは哺乳動物性グリコシダーゼ、特にα−またはβ−グ
ルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、α−またはβ−
マンノシダーゼ、α−フコシダーゼ、Ｎ−アセチル−α
−ガラクトサミニダーゼ、Ｎ−アセチル−β−／Ｎ−ア
セチル−α−グルコサミニダーゼまたはβ−グルクロニ
ダーゼであり、 Ｓｐが式IV Ｘ(Ｓ)nＹ IV （式中、ＸまたはＹは−ＣＯ−Ｒ12−（Ｎ−スクシンイ
ミド）−または−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−であ
り、またその場合においてＲ12は−ＣＨ2−ＣＨ2−また
は１,４−フェニレンであり、そしてＲ13はＯまたはＮ
Ｈであり、Ｙは−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−（式中
Ｒ13は前述の意味を有する）であり、ｎは１または２で
ある）で示される二官能性ジスルフィド含有基であるか
または適当なポリペプチドスペーサーであるものも好ま
しい。
特異的酵素であってその式IIIにおけるＡが腫瘍関連抗
原に対する特異性を有する抗体またはその断片、または
腫瘍上または腫瘍中に蓄積する生体分子、例えばＥＧＦ
（上皮細胞増殖因子）、ＴＧＦ−α（形質転換成長因子
α)、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、ＩＧＦ Ｉ＋II
（インスリン様成長因子 Ｉ＋II）またはａ＋ｂ ＦＧＦ
（酸性＋塩基性線維芽細胞成長因子）であり、Ｅが免疫
原性がほとんどまたは全くないグリコシダーゼ、好まし
くは哺乳動物性グリコシダーゼ、特にα−またはβ−グ
ルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、α−またはβ−
マンノシダーゼ、α−フコシダーゼ、Ｎ−アセチル−α
−ガラクトサミニダーゼ、Ｎ−アセチル−β−／Ｎ−ア
セチル−α−グルコサミニダーゼまたはβ−グルクロニ
ダーゼであり、 Ｓｐが式IV Ｘ(Ｓ)nＹ IV （式中、ＸまたはＹは−ＣＯ−Ｒ12−（Ｎ−スクシンイ
ミド）−または−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−であ
り、またその場合においてＲ12は−ＣＨ2−ＣＨ2−また
は１,４−フェニレンであり、そしてＲ13はＯまたはＮ
Ｈであり、Ｙは−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−（式中
Ｒ13は前述の意味を有する）であり、ｎは１または２で
ある）で示される二官能性ジスルフィド含有基であるか
または適当なポリペプチドスペーサーであるものも好ま
しい。
【００１８】本発明はまた、式Ｖ
【化７】 （式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は前述の意
味を有する）で示されるアントラサイクリンを式VI
味を有する）で示されるアントラサイクリンを式VI
【化８】 〔式中、Ｒ8はメチル、アシルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ
８）、アルキルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ８）、ベンジル
オキシメチル、アリルオキシメチル、カルボキシメチ
ル、カルボキシベンジルまたはカルボキシアルキルであ
り、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は各々独立的に、水素、アシ
ルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベンゾイルオキシまたは置換
ベンゾイルオキシ例えばパラ−ニトロベンゾイルオキ
シ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アリルオキシ、ベ
ンジルオキシ、置換ベンジルオキシ、ＮＨ−アシルまた
はＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であ
り、そしてＺは離脱基、例えばハロゲン原子、ヒドロキ
シル基、トリ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルシリルオキシ基、
酸素原子を介して結合したアシル保護基または酸素原子
を介して結合したトリクロロアセトイミデートである〕
で示される炭水化物成分と、促進剤、および適切な場合
には酸捕捉剤および／または乾燥剤の存在下に溶媒中で
−５０°〜＋８０℃で反応させて式Ｉ（式中すべてのラ
ジカルＲ1〜Ｒ11は既に定義されたとおりの意味を保有
する）で示される１４−Ｏ−グリコシルアントラサイク
リン誘導体を得、そして適切な場合にこれら化合物中に
存在する保護基または保護基の一部を加水分解によりま
たは適当な触媒を用いて除去することより成る前述の諸
定義を有する式Ｉの化合物の製造方法にも関する。
８）、アルキルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ８）、ベンジル
オキシメチル、アリルオキシメチル、カルボキシメチ
ル、カルボキシベンジルまたはカルボキシアルキルであ
り、Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は各々独立的に、水素、アシ
ルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベンゾイルオキシまたは置換
ベンゾイルオキシ例えばパラ−ニトロベンゾイルオキ
シ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アリルオキシ、ベ
ンジルオキシ、置換ベンジルオキシ、ＮＨ−アシルまた
はＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であ
り、そしてＺは離脱基、例えばハロゲン原子、ヒドロキ
シル基、トリ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルシリルオキシ基、
酸素原子を介して結合したアシル保護基または酸素原子
を介して結合したトリクロロアセトイミデートである〕
で示される炭水化物成分と、促進剤、および適切な場合
には酸捕捉剤および／または乾燥剤の存在下に溶媒中で
−５０°〜＋８０℃で反応させて式Ｉ（式中すべてのラ
ジカルＲ1〜Ｒ11は既に定義されたとおりの意味を保有
する）で示される１４−Ｏ−グリコシルアントラサイク
リン誘導体を得、そして適切な場合にこれら化合物中に
存在する保護基または保護基の一部を加水分解によりま
たは適当な触媒を用いて除去することより成る前述の諸
定義を有する式Ｉの化合物の製造方法にも関する。
【００１９】そのための特定の手順は次のとおりであ
る：式Ｖで示されるアントラサイクリンがラジカル
Ｒ4、Ｒ5またはＲ6の一つとしてアミノ基を有する場合
には最初にこの基を例えばＮＨ−トリフルオロアセテー
トまたはＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニ
ル）として保護する必要がある。
る：式Ｖで示されるアントラサイクリンがラジカル
Ｒ4、Ｒ5またはＲ6の一つとしてアミノ基を有する場合
には最初にこの基を例えばＮＨ−トリフルオロアセテー
トまたはＮＨ−（９−フルオレニルメトキシカルボニ
ル）として保護する必要がある。
【００２０】アントラサイクリンの１４位のグリコシド
化に用いられる式VIで示される官能化された炭水化物成
分は、酸素を介してラジカルを有する場合は典型的には
Ｒ9、Ｒ10およびＲ11としてＯ−アシル、Ｏ−アルキル
またはＯ−アリルを含む。ラジカルＲ8も同じくアシル
オキシメチル、アルキルオキシメチルまたはカルボキシ
アルキルとして保護される。
化に用いられる式VIで示される官能化された炭水化物成
分は、酸素を介してラジカルを有する場合は典型的には
Ｒ9、Ｒ10およびＲ11としてＯ−アシル、Ｏ−アルキル
またはＯ−アリルを含む。ラジカルＲ8も同じくアシル
オキシメチル、アルキルオキシメチルまたはカルボキシ
アルキルとして保護される。
【００２１】それら炭水化物誘導体はアノマー中心に適
当な離脱基Ｚを有していなければならない。例えば、Ｈ
Ｆ、ＨＣｌ、ＨＢｒまたはＴｉＢｒ4を用いて１−Ｏ−
アシル誘導体からグリコシルハライド例えばフルオライ
ド、クロライドまたはブロマイドなどを製造する。トリ
クロロアセトイミデートなどの離脱基を有する、そして
またＲ8〜Ｒ11について様々なパターンの保護基を有す
るその他の化合物は炭水化物化学において慣用される方
法により製造される。
当な離脱基Ｚを有していなければならない。例えば、Ｈ
Ｆ、ＨＣｌ、ＨＢｒまたはＴｉＢｒ4を用いて１−Ｏ−
アシル誘導体からグリコシルハライド例えばフルオライ
ド、クロライドまたはブロマイドなどを製造する。トリ
クロロアセトイミデートなどの離脱基を有する、そして
またＲ8〜Ｒ11について様々なパターンの保護基を有す
るその他の化合物は炭水化物化学において慣用される方
法により製造される。
【００２２】促進剤はグリコシル供与体と結合能のある
アントラサイクリンのグリコシド化に必要である。炭水
化物のグリコシルフルオライド、１−ヒドロキシグリコ
シド、１−アシルオキシグリコシドまたは１−トリクロ
ロアセトイミデートを用いる場合はルイス酸例えばＢＦ
3・エーテルまたはトリメチルシリルトリフレートが用
いられ、グリコシルクロライドおよびブロマイドの場合
には銀または水銀塩が用いられる。
アントラサイクリンのグリコシド化に必要である。炭水
化物のグリコシルフルオライド、１−ヒドロキシグリコ
シド、１−アシルオキシグリコシドまたは１−トリクロ
ロアセトイミデートを用いる場合はルイス酸例えばＢＦ
3・エーテルまたはトリメチルシリルトリフレートが用
いられ、グリコシルクロライドおよびブロマイドの場合
には銀または水銀塩が用いられる。
【００２３】グリコシド化は非プロトン有機溶媒または
混合溶媒例えばアセトン、エチルアセテート、エーテ
ル、トルエン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、アセ
トニトリル、ニトロメタンなどの中で行われる。この反
応はグリコシル供与体の反応性に応じて−５０°〜＋８
０℃の温度で、また適切な場合には酸捕捉剤または乾燥
剤、例えば分子ふるいを添加して行われる。引き続いて
の保護基の除去は炭水化物化学において慣用される方法
により行われる。
混合溶媒例えばアセトン、エチルアセテート、エーテ
ル、トルエン、ジクロロメタン、ジクロロエタン、アセ
トニトリル、ニトロメタンなどの中で行われる。この反
応はグリコシル供与体の反応性に応じて−５０°〜＋８
０℃の温度で、また適切な場合には酸捕捉剤または乾燥
剤、例えば分子ふるいを添加して行われる。引き続いて
の保護基の除去は炭水化物化学において慣用される方法
により行われる。
【００２４】Ａ−Ｓｐ−Ｅを製造するには、スペーサー
（Ｓｐ）をアミノ基を介して酵素にそして抗体に結合す
ることができ、あるいは生体分子を導入されたまたはジ
スルフィド橋の分解により発生させたＨＳ基を介して結
合することができ、あるいはＡ、ＳｐおよびＥ部をコー
ドする核酸配列を分子生物学的方法を用いて融合遺伝子
が得られるように共有結合的に結合させそしてＡ−Ｓｐ
−Ｅを遺伝子工学的方法により製造する。
（Ｓｐ）をアミノ基を介して酵素にそして抗体に結合す
ることができ、あるいは生体分子を導入されたまたはジ
スルフィド橋の分解により発生させたＨＳ基を介して結
合することができ、あるいはＡ、ＳｐおよびＥ部をコー
ドする核酸配列を分子生物学的方法を用いて融合遺伝子
が得られるように共有結合的に結合させそしてＡ−Ｓｐ
−Ｅを遺伝子工学的方法により製造する。
【００２５】これは様々な方法で行うことができる： Ａ） 制限切断部位Ａは特異的突然変異誘発により免疫
グロブリンの重鎖遺伝子中のＣＨ１エクソンの３′位末
端に導入される。同じ制限切断部位Ａをスペーサーとし
て働くオリゴペプチドをコードするオリゴヌクレオチド
の５′末端に設ける。両制限切断部位Ａは、免疫グロブ
リン遺伝子を読み取り枠を乱すことなく制限切断部位Ａ
を介してオリゴヌクレオチドに連結できるような部位に
設定する。制限切断部位Ｂをオリゴヌクレオチドの３′
末端に設ける。この制限切断部位Ｂは酵素をコードする
遺伝子の、その成熟タンパク質をコードする核酸配列が
始まるところに導入される。次に酵素遺伝子は制限切断
部位Ｂを介して免疫グロブリン遺伝子−リンカー構築物
(construct)に連結される。制限切断部位Ｂは連結して
も読み取り枠が乱されないような部位に設定される。免
疫グロブリン重鎖のＶＨおよびＣＨ１−リンカー酵素よ
り成る融合遺伝子は真核細胞での発現に適しそして選択
マーカーを有する発現プラスミドにクローン化される。
グロブリンの重鎖遺伝子中のＣＨ１エクソンの３′位末
端に導入される。同じ制限切断部位Ａをスペーサーとし
て働くオリゴペプチドをコードするオリゴヌクレオチド
の５′末端に設ける。両制限切断部位Ａは、免疫グロブ
リン遺伝子を読み取り枠を乱すことなく制限切断部位Ａ
を介してオリゴヌクレオチドに連結できるような部位に
設定する。制限切断部位Ｂをオリゴヌクレオチドの３′
末端に設ける。この制限切断部位Ｂは酵素をコードする
遺伝子の、その成熟タンパク質をコードする核酸配列が
始まるところに導入される。次に酵素遺伝子は制限切断
部位Ｂを介して免疫グロブリン遺伝子−リンカー構築物
(construct)に連結される。制限切断部位Ｂは連結して
も読み取り枠が乱されないような部位に設定される。免
疫グロブリン重鎖のＶＨおよびＣＨ１−リンカー酵素よ
り成る融合遺伝子は真核細胞での発現に適しそして選択
マーカーを有する発現プラスミドにクローン化される。
【００２６】融合遺伝子を含む発現プラスミドは抗体に
属する軽鎖の遺伝子を有する他の発現プラスミドと共に
真核細胞（例えばミエローマ細胞）にトランスフェクシ
ョンさせる。適当な抗生物質を用いて選択を行って融合
遺伝子および軽鎖遺伝子を有するプラスミドを含む細胞
クローンを単離する（トランスフェクトーマ）。
属する軽鎖の遺伝子を有する他の発現プラスミドと共に
真核細胞（例えばミエローマ細胞）にトランスフェクシ
ョンさせる。適当な抗生物質を用いて選択を行って融合
遺伝子および軽鎖遺伝子を有するプラスミドを含む細胞
クローンを単離する（トランスフェクトーマ）。
【００２７】適当な検出方法（BioDot；ELISA）を用い
てＭＡｂ Ｆａｂ部、リンカーポリペプチドおよび酵素
より成る式Ａ−Ｓｐ−Ｅで示される融合タンパク質を分
泌するトランスフェクトーマを同定する。
てＭＡｂ Ｆａｂ部、リンカーポリペプチドおよび酵素
より成る式Ａ−Ｓｐ−Ｅで示される融合タンパク質を分
泌するトランスフェクトーマを同定する。
【００２８】Ｂ） 制限切断部位Ａを免疫グロブリンの
重鎖の遺伝子のヒンジエクソンの３′末端に導入する。
制限切断部位Ａは酵素遺伝子中の、成熟タンパク質をコ
ードするヌクレオチド配列が始まるところに導入され
る。ＶＨ、ＣＨ１およびヒンジエクソンを有する免疫グ
ロブリン重鎖の遺伝子断片を制限切断部位Ａを介して酵
素遺伝子に結合する。
重鎖の遺伝子のヒンジエクソンの３′末端に導入する。
制限切断部位Ａは酵素遺伝子中の、成熟タンパク質をコ
ードするヌクレオチド配列が始まるところに導入され
る。ＶＨ、ＣＨ１およびヒンジエクソンを有する免疫グ
ロブリン重鎖の遺伝子断片を制限切断部位Ａを介して酵
素遺伝子に結合する。
【００２９】制限部位Ａは連結しても読み取り枠が乱さ
れないような部位に設けられる。この構成において抗体
のヒンジ部はポリペプチドスペーサーとして働く。Ｖ
Ｈ、ＣＨ１−ヒンジおよび酵素遺伝子より成る融合遺伝
子を真核細胞での発現に適しそして選択マーカーを有す
る発現プラスミドにクローン化する。融合遺伝子を含む
発現プラスミドを抗体に属する軽鎖遺伝子を含む他の発
現プラスミドと共に真核発現細胞にトランスフェクショ
ンさせる。適当な抗生物質で選択後、発現プラスミドを
含むトランスフェクトーマクローンを同定する。適当な
検出方法（BioDot、ELISA）を用いて抗体と酵素より成
る式IIIで示される融合タンパク質を分泌するトランス
フェクトーマクローンを同定する。
れないような部位に設けられる。この構成において抗体
のヒンジ部はポリペプチドスペーサーとして働く。Ｖ
Ｈ、ＣＨ１−ヒンジおよび酵素遺伝子より成る融合遺伝
子を真核細胞での発現に適しそして選択マーカーを有す
る発現プラスミドにクローン化する。融合遺伝子を含む
発現プラスミドを抗体に属する軽鎖遺伝子を含む他の発
現プラスミドと共に真核発現細胞にトランスフェクショ
ンさせる。適当な抗生物質で選択後、発現プラスミドを
含むトランスフェクトーマクローンを同定する。適当な
検出方法（BioDot、ELISA）を用いて抗体と酵素より成
る式IIIで示される融合タンパク質を分泌するトランス
フェクトーマクローンを同定する。
【００３０】酵素と抗体、その断片または生体分子の間
の結合は文献（A.H. BlairおよびT.I. Ghose, J. Immun
olog. Methods ５９（１９８３）１２９〜１４３；T.I.
Ghose et al. Methods in Enzymology Vol. ９３（１
９８３）２８０〜３３３）に記載の方法により行われ
る。これは酵素をまずスクシンイミジル−Ｎ−マレイミ
ド−アルキリデン−、シクロアルキリデン−またはアリ
ーレン−１−カルボキシレートを用いてそのアミノ基を
介して官能化し、該マレイミド基の二重結合を官能化さ
れた抗体、その断片または生体分子のＨＳ基と反応させ
てチオエーテル官能価を形成することによって行われ
る。抗体−酵素接合体の調製にはモノクローナル抗体、
例えばＥＰ−Ａ−Ｏ １４１ ０７９に記載されているも
の、好ましくは抗体４３１／２６、２５０／１８３、７
０４／１５２および４９４／３２を用いることができ
る。これら抗体の腫瘍関連抗原に対する特異性はすでに
免疫シンチグラフィーおよび免疫組織化学により動物お
よび人間で実証されている。これらモノクローナル抗体
のＶ遺伝子のヌクレオチド配列はドイツ特許出願ＤＥ−
Ａ−39 09 799.4に記載されている。
の結合は文献（A.H. BlairおよびT.I. Ghose, J. Immun
olog. Methods ５９（１９８３）１２９〜１４３；T.I.
Ghose et al. Methods in Enzymology Vol. ９３（１
９８３）２８０〜３３３）に記載の方法により行われ
る。これは酵素をまずスクシンイミジル−Ｎ−マレイミ
ド−アルキリデン−、シクロアルキリデン−またはアリ
ーレン−１−カルボキシレートを用いてそのアミノ基を
介して官能化し、該マレイミド基の二重結合を官能化さ
れた抗体、その断片または生体分子のＨＳ基と反応させ
てチオエーテル官能価を形成することによって行われ
る。抗体−酵素接合体の調製にはモノクローナル抗体、
例えばＥＰ−Ａ−Ｏ １４１ ０７９に記載されているも
の、好ましくは抗体４３１／２６、２５０／１８３、７
０４／１５２および４９４／３２を用いることができ
る。これら抗体の腫瘍関連抗原に対する特異性はすでに
免疫シンチグラフィーおよび免疫組織化学により動物お
よび人間で実証されている。これらモノクローナル抗体
のＶ遺伝子のヌクレオチド配列はドイツ特許出願ＤＥ−
Ａ−39 09 799.4に記載されている。
【００３１】腫瘍特異的酵素接合体を調製するために、
以下に特定される酵素を特定された文献の方法により指
定された給源から精製することができる： − ヒト胎盤からのα−ガラクトシダーゼＡ：Bishop,
D.F. (１９８１), J. Biol. Chem. ２５６, １３０７〜
１３１６、またはトランスフェクションされた哺乳動物
細胞からのα−ガラクトシダーゼＡ：Tsuji, S.（１９
８７)，Eur. J. Biochem. １６５, ２７５〜２８０ − ヒト胎盤からのβ−グルクロニダーゼ：Brot, F.E.
（１９７８）Biochemistry １７, ３８５〜３９１ − トランスフェクションされた哺乳動物細胞からのヒ
トβ−グルクロニダーゼ：Oshima, A.(１９８７）Proc.
Natl. Acad. Sci. USA ８４，６８５〜６８９ − ヒト肝臓からのα−Ｌ−フコシダーゼ：Dawson,
G., Tsay, G.（１９７７）Arch. Biochem. Biophys. １
８４, １２〜１３ − ヒト肝臓からのα−マンノシダーゼ：Grabowski,
G.A., Ikonne, J.U., Desnick, R.J.（１９８０）Enzym
e ２５，１３〜２５ − ヒト胎盤からのβ−マンノシダーゼ：Noeske, C.,
Mersmann, G. (１９８３）Hoppe Seylers Z Physiol. C
hem. ３６４, １６４５〜１６５１ − ヒト胃、腸粘膜からのα−グルコシダーゼ：Asp,
N.-G., Gudmand-Hoeyer,E., Christiansen, P.M., Dahl
quist, A. (１９７４）Scand. J. Clin. LabInvest. ３
３, １５, ２３９〜２４５ − ヒト肝臓からのβ−グルコシダーゼ：Daniels, L.
B., Coyle, P.J., Chiao,Y.-B., Glew, R.H. (１９８
１) J. Biol, Chem. ２５６, １３００４〜１３０１３ − ヒト胎盤からのβ−グルコセレブロシダーゼ：Furb
ish, F.S., Blair, H.E., Shiloach, J., Pentcheu, P.
G., Brady, R.O.(１９７７）Proc. Natl. Acad. Sci, U
SA ７４, ３５６０〜３５６３ − ヒト胎盤からのα−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ：Roehrborn, W., vonFigura, K.（１９７８）Hoppe
Seylers Z. Physiol. Chem. ３５９, １３５３〜１３６
２ − ヒト羊膜からのβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ：Orlacchio, A., Emiliani, C., D；Renzo, G.C., C
osmi, E.V.(１９８６）Clin. Chim. Acta １５９, ２７
９〜２８９ − α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ：Salvayr
e, R., Negre, A., Maret, A., Douste−Blazy, L.(１
９８４）Pathol. Biol.（Paris）３２, ２６９〜２８４
による方法。
以下に特定される酵素を特定された文献の方法により指
定された給源から精製することができる： − ヒト胎盤からのα−ガラクトシダーゼＡ：Bishop,
D.F. (１９８１), J. Biol. Chem. ２５６, １３０７〜
１３１６、またはトランスフェクションされた哺乳動物
細胞からのα−ガラクトシダーゼＡ：Tsuji, S.（１９
８７)，Eur. J. Biochem. １６５, ２７５〜２８０ − ヒト胎盤からのβ−グルクロニダーゼ：Brot, F.E.
（１９７８）Biochemistry １７, ３８５〜３９１ − トランスフェクションされた哺乳動物細胞からのヒ
トβ−グルクロニダーゼ：Oshima, A.(１９８７）Proc.
Natl. Acad. Sci. USA ８４，６８５〜６８９ − ヒト肝臓からのα−Ｌ−フコシダーゼ：Dawson,
G., Tsay, G.（１９７７）Arch. Biochem. Biophys. １
８４, １２〜１３ − ヒト肝臓からのα−マンノシダーゼ：Grabowski,
G.A., Ikonne, J.U., Desnick, R.J.（１９８０）Enzym
e ２５，１３〜２５ − ヒト胎盤からのβ−マンノシダーゼ：Noeske, C.,
Mersmann, G. (１９８３）Hoppe Seylers Z Physiol. C
hem. ３６４, １６４５〜１６５１ − ヒト胃、腸粘膜からのα−グルコシダーゼ：Asp,
N.-G., Gudmand-Hoeyer,E., Christiansen, P.M., Dahl
quist, A. (１９７４）Scand. J. Clin. LabInvest. ３
３, １５, ２３９〜２４５ − ヒト肝臓からのβ−グルコシダーゼ：Daniels, L.
B., Coyle, P.J., Chiao,Y.-B., Glew, R.H. (１９８
１) J. Biol, Chem. ２５６, １３００４〜１３０１３ − ヒト胎盤からのβ−グルコセレブロシダーゼ：Furb
ish, F.S., Blair, H.E., Shiloach, J., Pentcheu, P.
G., Brady, R.O.(１９７７）Proc. Natl. Acad. Sci, U
SA ７４, ３５６０〜３５６３ − ヒト胎盤からのα−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ：Roehrborn, W., vonFigura, K.（１９７８）Hoppe
Seylers Z. Physiol. Chem. ３５９, １３５３〜１３６
２ − ヒト羊膜からのβ−Ｎ−アセチルグルコサミニダー
ゼ：Orlacchio, A., Emiliani, C., D；Renzo, G.C., C
osmi, E.V.(１９８６）Clin. Chim. Acta １５９, ２７
９〜２８９ − α−Ｎ−アセチルガラクトサミニダーゼ：Salvayr
e, R., Negre, A., Maret, A., Douste−Blazy, L.(１
９８４）Pathol. Biol.（Paris）３２, ２６９〜２８４
による方法。
【００３２】官能化された腫瘍特異的酵素の解糖活性は
特定の至適ｐＨでｐ−ニトロフェニルグリコシドを用い
た比較試験で測定した。
特定の至適ｐＨでｐ−ニトロフェニルグリコシドを用い
た比較試験で測定した。
【００３３】更に本発明は、本発明による１４−Ｏ−グ
リコシルアントラサイクリンおよび官能化された腫瘍特
異的酵素接合体を含むパックに関する。
リコシルアントラサイクリンおよび官能化された腫瘍特
異的酵素接合体を含むパックに関する。
【００３４】組み合わせて順次使用することの活性を試
験するために、移植されたマウスに官能化された酵素を
投与し、酵素の血漿レベルが実質的に零まで低下するま
で待って１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリンを投
与しそして移植組織の成長停止および退行が起こるかど
うかを観察した。
験するために、移植されたマウスに官能化された酵素を
投与し、酵素の血漿レベルが実質的に零まで低下するま
で待って１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリンを投
与しそして移植組織の成長停止および退行が起こるかど
うかを観察した。
【００３５】
【実施例】以下の実施例は本発明を更に詳細に説明する
ものであるが、それを限定するものではない。
ものであるが、それを限定するものではない。
【００３６】〔Ａ プロドラッグの合成〕製造された化
合物の構造は二次元ＮＭＲ法および他のマルチパルスＮ
ＭＲ法を含む1Ｈ−および13Ｃ−ＮＭＲ分光法およびＭ
Ｓ、ＵＶおよびＩＲ分光法によって決定した。反応の進
行および生成化合物は薄層クロマトグラフィーまたはＨ
ＰＬＣ法により調べた。
合物の構造は二次元ＮＭＲ法および他のマルチパルスＮ
ＭＲ法を含む1Ｈ−および13Ｃ−ＮＭＲ分光法およびＭ
Ｓ、ＵＶおよびＩＲ分光法によって決定した。反応の進
行および生成化合物は薄層クロマトグラフィーまたはＨ
ＰＬＣ法により調べた。
【００３７】〔実施例１〕 ２−Ｏ−アリル−１,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル
−α−Ｄ−ガラクト−ヘキソピラノース（１） １,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラク
トピラノース（３.４８ｇ＝１０mmol）およびアリルト
リクロロアセトイミデート（１４m1の３０％強度ヘキサ
ン溶液）のジクロロメタン（１５m1）中の溶液にトリフ
ルオロメタンスルホン酸（０.２５m1）を添加し、そし
てその混合物を４０℃で４時間撹拌した。冷却後それを
濾過し、その濾液を水性重炭酸ナトリウム溶液と共に振
盪することにより抽出した。
−α−Ｄ−ガラクト−ヘキソピラノース（１） １,３,４,６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−ガラク
トピラノース（３.４８ｇ＝１０mmol）およびアリルト
リクロロアセトイミデート（１４m1の３０％強度ヘキサ
ン溶液）のジクロロメタン（１５m1）中の溶液にトリフ
ルオロメタンスルホン酸（０.２５m1）を添加し、そし
てその混合物を４０℃で４時間撹拌した。冷却後それを
濾過し、その濾液を水性重炭酸ナトリウム溶液と共に振
盪することにより抽出した。
【００３８】有機相をカラムクロマトグラフィー（移動
相：酢酸エチル／石油エーテル＝１：４）にかけた。
相：酢酸エチル／石油エーテル＝１：４）にかけた。
【００３９】収率：1.52ｇ (3.9mmol＝39％)、m.p. 133
℃、〔α〕D 25 ＋68.6（ｃ＝1.0 ジクロロメタン中）。1 H NMR (300 MHz，CDCl3）δ6.40 (d, 1H, J1,2=3.6 H
z, H-1)、 5.83 (dddd, 1H，アリル)、5.47（dd, 1H,
J3,4=3.3 Hz, J4,5=1.2 Hz, H-4)、 5.32〜5.17（m, 3H,
アリル, H-3)、 4.30 (dt, J4,5=1.2 Hz, J5,6a=J5,6b=
6.6 Hz, H-5)、 4.16〜4.06 (m, 4H, H-6a, H-6b, アリ
ル)、 3.88 (dd, 1H, J1,2=3.6 Hz, J2,3=10.5 Hz, H-
2)、 2.17 (s, 3H，OAc)、 2.15 (s, 3H, OAc)、 2.04 (s,
3H, OAc)、 2.03 (s, 3H, OAc)。13 C NMR (50 MHz, CDCl3）δ117.4 (アリル)、 93.5 (ア
リル)、 89.7 (C-1)、 71.8 (アリル)、 71.7 (C-2)、 69.0
(C-3)、 68.2 (C-5)、 67.4 (C-4)、 61.0 (C-6)、 20.6
(OAc)、 20.4 (OAc)、 20.3 (OAc)、 20.1 (OAc)。
℃、〔α〕D 25 ＋68.6（ｃ＝1.0 ジクロロメタン中）。1 H NMR (300 MHz，CDCl3）δ6.40 (d, 1H, J1,2=3.6 H
z, H-1)、 5.83 (dddd, 1H，アリル)、5.47（dd, 1H,
J3,4=3.3 Hz, J4,5=1.2 Hz, H-4)、 5.32〜5.17（m, 3H,
アリル, H-3)、 4.30 (dt, J4,5=1.2 Hz, J5,6a=J5,6b=
6.6 Hz, H-5)、 4.16〜4.06 (m, 4H, H-6a, H-6b, アリ
ル)、 3.88 (dd, 1H, J1,2=3.6 Hz, J2,3=10.5 Hz, H-
2)、 2.17 (s, 3H，OAc)、 2.15 (s, 3H, OAc)、 2.04 (s,
3H, OAc)、 2.03 (s, 3H, OAc)。13 C NMR (50 MHz, CDCl3）δ117.4 (アリル)、 93.5 (ア
リル)、 89.7 (C-1)、 71.8 (アリル)、 71.7 (C-2)、 69.0
(C-3)、 68.2 (C-5)、 67.4 (C-4)、 61.0 (C-6)、 20.6
(OAc)、 20.4 (OAc)、 20.3 (OAc)、 20.1 (OAc)。
【００４０】〔実施例２〕 ２−Ｏ−アリル−３,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−α−
Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシルブロマイド（２） 化合物１（９４０mg＝２.４２mmol）をジクロロメタン
（２m1）に溶解しそして０℃で氷酢酸（１１m1；３３％
ＨＢｒ溶液）を添加し、そしてその混合物をこの温度で
２時間撹拌した。その反応混合物を氷中に注ぎそしてジ
クロロメタンと共に振盪することにより抽出した。その
有機相を反応液が弱塩基性となるまで水性重炭酸ナトリ
ウム溶液と共に振盪することにより抽出し、硫酸ナトリ
ウムで乾燥しそしてトルエンと共に数回蒸発させた。
Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシルブロマイド（２） 化合物１（９４０mg＝２.４２mmol）をジクロロメタン
（２m1）に溶解しそして０℃で氷酢酸（１１m1；３３％
ＨＢｒ溶液）を添加し、そしてその混合物をこの温度で
２時間撹拌した。その反応混合物を氷中に注ぎそしてジ
クロロメタンと共に振盪することにより抽出した。その
有機相を反応液が弱塩基性となるまで水性重炭酸ナトリ
ウム溶液と共に振盪することにより抽出し、硫酸ナトリ
ウムで乾燥しそしてトルエンと共に数回蒸発させた。
【００４１】収率：930mg（2.27mmol＝94％）、シロッ
プ。1 H NMR (200 MHz, CDCl3) δ6.58 (d, 1H, J1,2=3.8 H
z, H-1)、 5.90 (dddd, 1H, アリル)、5.49（dd, 1H,
J3,4=3.4 Hz, J4,5=1.3 Hz, H-4)、 5.38〜5.20（m, 3H,
H-3, アリル)、 4.48 (dt, 1H, J4,5=1.3 Hz, J5.6a=
J5,6b=6.3 Hz, H-5)、 4.23〜4.04 (m, 4H, アリル, H-6
a, H-6b)、 3.77 (dd, 1H, J1,2=3.8 Hz,J2,3=10.3 Hz,
H-2)、 2.17 (s, 3H，OAc)、 2.08 (s, 3H, OAc)、 2.03
(s, 3H,OAc)。13 C NMR (50 MHz, CDCl3）δ170.2 (OAc)、 169.7 (OA
c)、 169.6 (OAc)、 133.7(アリル)、 117.9 (アリル)、 9
0.6 (C-1)、 72.8 (C-2)、 71.7 (アリル)、 70.9 (C-5)、
69.9 (C-3) 、 67.2 (C-4)、 60.8 (C-6)、 20.6 (OAc)、
20.5 (OAc)、 20.4 (OAc)。
プ。1 H NMR (200 MHz, CDCl3) δ6.58 (d, 1H, J1,2=3.8 H
z, H-1)、 5.90 (dddd, 1H, アリル)、5.49（dd, 1H,
J3,4=3.4 Hz, J4,5=1.3 Hz, H-4)、 5.38〜5.20（m, 3H,
H-3, アリル)、 4.48 (dt, 1H, J4,5=1.3 Hz, J5.6a=
J5,6b=6.3 Hz, H-5)、 4.23〜4.04 (m, 4H, アリル, H-6
a, H-6b)、 3.77 (dd, 1H, J1,2=3.8 Hz,J2,3=10.3 Hz,
H-2)、 2.17 (s, 3H，OAc)、 2.08 (s, 3H, OAc)、 2.03
(s, 3H,OAc)。13 C NMR (50 MHz, CDCl3）δ170.2 (OAc)、 169.7 (OA
c)、 169.6 (OAc)、 133.7(アリル)、 117.9 (アリル)、 9
0.6 (C-1)、 72.8 (C-2)、 71.7 (アリル)、 70.9 (C-5)、
69.9 (C-3) 、 67.2 (C-4)、 60.8 (C-6)、 20.6 (OAc)、
20.5 (OAc)、 20.4 (OAc)。
【００４２】〔実施例３〕 Ｎ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−ドキソ
ルビシン（３） ナトリウムメタノレート溶液（メタノール中３０％強
度）を反応液が弱アルカリ性になるまでドキソルビシン
塩酸塩（１０７mg＝０.１８４mmol）の無水メタノール
（１０m1）中の懸濁液に添加すると、物質は溶解した。
次いで（無水）炭酸ナトリウム（９８mg＝０.９２mmo
l）および９−フルオレニルメトキシカルボニルクロラ
イド（１４２mg＝０.５５２mmol）を室温で１時間撹拌
しつつ添加した。濾過および濃縮後カラムクロマトグラ
フィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール／蟻酸＝
２０：１：０.１）にかけた。
ルビシン（３） ナトリウムメタノレート溶液（メタノール中３０％強
度）を反応液が弱アルカリ性になるまでドキソルビシン
塩酸塩（１０７mg＝０.１８４mmol）の無水メタノール
（１０m1）中の懸濁液に添加すると、物質は溶解した。
次いで（無水）炭酸ナトリウム（９８mg＝０.９２mmo
l）および９−フルオレニルメトキシカルボニルクロラ
イド（１４２mg＝０.５５２mmol）を室温で１時間撹拌
しつつ添加した。濾過および濃縮後カラムクロマトグラ
フィー（移動相：ジクロロメタン／メタノール／蟻酸＝
２０：１：０.１）にかけた。
【００４３】収率：139mg（0.181mmol＝98％)、m.p. 16
5〜166℃、 〔α〕D 25 ＋156°（ｃ＝0.02 クロロホルム
中）。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）δ13.86 (s, 1H, OH-6)、 13.
09 (s, 1H, OH-11)、 7.98〜6.70 (m, 11H, H-1, H-2, H
-3, 8 Fmoc 芳香族 H)、 5.39 (bs, 1H, H-1′)、 5.14
(m, 2H, NH, H-7)、 4.71 (s, 2H, H-14)、 4.48 (s, 2H,
Fmoc-CH)、 4.25 (s, 1H, Fmoc-CH)、 4.07 (q, 1H, H-
5′)、 3.99 (s, 3H, OMe)、 3.80 (m,2H, H-3′, H-
4′)、 3.55 (bs, 1H, OH)、 3.15 (d, 1H，J10a,10b=18.
7 Hz，H-10a)、 2.99 (bs, 1H, OH)、 2.82 (d, 1H, J=
10a,10b=18.7 Hz, H-10b)、 2.48〜2.03(m, 4H, H-8a, H
-8b, H-2a′, H-2e′)、 1.23 (d, 3H, J5′,6′=6.5Hz,
CH3-6′)。 FAB-MS，m／z＝766（M＋H）。
5〜166℃、 〔α〕D 25 ＋156°（ｃ＝0.02 クロロホルム
中）。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）δ13.86 (s, 1H, OH-6)、 13.
09 (s, 1H, OH-11)、 7.98〜6.70 (m, 11H, H-1, H-2, H
-3, 8 Fmoc 芳香族 H)、 5.39 (bs, 1H, H-1′)、 5.14
(m, 2H, NH, H-7)、 4.71 (s, 2H, H-14)、 4.48 (s, 2H,
Fmoc-CH)、 4.25 (s, 1H, Fmoc-CH)、 4.07 (q, 1H, H-
5′)、 3.99 (s, 3H, OMe)、 3.80 (m,2H, H-3′, H-
4′)、 3.55 (bs, 1H, OH)、 3.15 (d, 1H，J10a,10b=18.
7 Hz，H-10a)、 2.99 (bs, 1H, OH)、 2.82 (d, 1H, J=
10a,10b=18.7 Hz, H-10b)、 2.48〜2.03(m, 4H, H-8a, H
-8b, H-2a′, H-2e′)、 1.23 (d, 3H, J5′,6′=6.5Hz,
CH3-6′)。 FAB-MS，m／z＝766（M＋H）。
【００４４】〔実施例４〕 １４−Ｏ−（２−Ｏ−アリル−３,４,６−トリ−Ｏ−ア
セチル−α−Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ
−トリフルオロアセチル−ドキソルビシン(４) 炭酸銀（９０mg＝０.３３mmol）および過塩素酸銀（２
３mg＝０.１１mmol）を分子ふるい（４Å）を含む無水
トルエンと無水ニトロメタン（７m1；１：１）より成る
混合溶媒中Ｎ−トリフルオロアセチル−ドキソルビシン
(７０mg＝０.１１mmol）の溶液に添加し、そしてその混
合物を室温で１時間撹拌した。化合物２（１３４mg＝
０.３３mmol）の無水トルエン（１m1）中の溶液をこの
混合物に添加し、次いでそれを室温で２２時間撹拌し
た。濾過し、トルエン洗浄しそしてジクロロメタンを添
加した後重炭酸ナトリウム溶液、次いで水と共に振盪
し、そして有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。カラム
クロマトグラフィー（移動相ジクロロメタン／メタノー
ル／蟻酸＝２０：１：０.１）により生成物を結晶とし
て得た。
セチル−α−Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ
−トリフルオロアセチル−ドキソルビシン(４) 炭酸銀（９０mg＝０.３３mmol）および過塩素酸銀（２
３mg＝０.１１mmol）を分子ふるい（４Å）を含む無水
トルエンと無水ニトロメタン（７m1；１：１）より成る
混合溶媒中Ｎ−トリフルオロアセチル−ドキソルビシン
(７０mg＝０.１１mmol）の溶液に添加し、そしてその混
合物を室温で１時間撹拌した。化合物２（１３４mg＝
０.３３mmol）の無水トルエン（１m1）中の溶液をこの
混合物に添加し、次いでそれを室温で２２時間撹拌し
た。濾過し、トルエン洗浄しそしてジクロロメタンを添
加した後重炭酸ナトリウム溶液、次いで水と共に振盪
し、そして有機相を硫酸ナトリウムで乾燥した。カラム
クロマトグラフィー（移動相ジクロロメタン／メタノー
ル／蟻酸＝２０：１：０.１）により生成物を結晶とし
て得た。
【００４５】収率：48mg（0.05mmol＝45％)、m.p. 131
〜132℃、 〔α〕D 25 ＋220（ｃ＝0.02，クロロホルム
中）。1 H NMR (300 MHz, CDCl3）δ14.01 (s, 1H, OH-6)、 13.
23 (s, 1H, OH-11)、 8.04 (d, 1H, J1,2=8.7 Hz, H-1)、
7.79 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.5 Hz, H-2)、 7.40(d, 1H,
J2,3=8.3 Hz, H-3)、 6.72 (d, 1H, J3,NH=8.2 Hz, N
H′)、 5.93 (dddd, 1H, アリル)、 5.54 (d, 1H,
J3″,4″=3.4 Hz, H-4″)、 5.50 (d, 1H, J1′,2a′=2.
9 Hz, H-1′)、 5.44〜5.17 (m, 4H, H-7, H-3′, 2×ア
リル)、 5.15(d, 1H, J1″,2″=3.6 Hz, H-1″)、 5.00
(d, 1H, J14a,14b=19.5 Hz, H-14a)、 4.86 (d, 1H, J
14a,14b=19.5 Hz, H-14b)、 4.49 (t, 1H, J5″,6a″=
J5″,6b″=6.5 Hz, H-5″)、 4.18 (m, 6H, 2×アリル,
H-3′, H-5′, H-6a″,H-6b″)、 4.09 (s, 3H, OMe)、
3.87 (dd, 1H, J1″,2″=3.5 Hz, J2″,3″=10.5 Hz, H
-2″)、 3.67 (d, 1H, J3′,4′=3.7 Hz, H-4′)、 3.27
(d, 1H, J10a,10b=19.0 Hz, H-10a)、 2.98 (d, 1H, J
10a,10b=19.0 Hz, H-10b)、 2.36〜1.7 (m,4H, H-8a, H-
8b, H-2a′, H-2e′)、 2.16 (s, 3H, OAc)、 2.07 (s, 3
H, OAc)、2.04 (s, 3H, OAc)、 1.33 (d, 3H，J5′,6′=
6.5 Hz, CH3-6)。 FAB-MS, m／z＝990（M＋Na）。
〜132℃、 〔α〕D 25 ＋220（ｃ＝0.02，クロロホルム
中）。1 H NMR (300 MHz, CDCl3）δ14.01 (s, 1H, OH-6)、 13.
23 (s, 1H, OH-11)、 8.04 (d, 1H, J1,2=8.7 Hz, H-1)、
7.79 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.5 Hz, H-2)、 7.40(d, 1H,
J2,3=8.3 Hz, H-3)、 6.72 (d, 1H, J3,NH=8.2 Hz, N
H′)、 5.93 (dddd, 1H, アリル)、 5.54 (d, 1H,
J3″,4″=3.4 Hz, H-4″)、 5.50 (d, 1H, J1′,2a′=2.
9 Hz, H-1′)、 5.44〜5.17 (m, 4H, H-7, H-3′, 2×ア
リル)、 5.15(d, 1H, J1″,2″=3.6 Hz, H-1″)、 5.00
(d, 1H, J14a,14b=19.5 Hz, H-14a)、 4.86 (d, 1H, J
14a,14b=19.5 Hz, H-14b)、 4.49 (t, 1H, J5″,6a″=
J5″,6b″=6.5 Hz, H-5″)、 4.18 (m, 6H, 2×アリル,
H-3′, H-5′, H-6a″,H-6b″)、 4.09 (s, 3H, OMe)、
3.87 (dd, 1H, J1″,2″=3.5 Hz, J2″,3″=10.5 Hz, H
-2″)、 3.67 (d, 1H, J3′,4′=3.7 Hz, H-4′)、 3.27
(d, 1H, J10a,10b=19.0 Hz, H-10a)、 2.98 (d, 1H, J
10a,10b=19.0 Hz, H-10b)、 2.36〜1.7 (m,4H, H-8a, H-
8b, H-2a′, H-2e′)、 2.16 (s, 3H, OAc)、 2.07 (s, 3
H, OAc)、2.04 (s, 3H, OAc)、 1.33 (d, 3H，J5′,6′=
6.5 Hz, CH3-6)。 FAB-MS, m／z＝990（M＋Na）。
【００４６】〔実施例５〕 １４−Ｏ−（２−Ｏ−アリル−３,４,６−トリ−Ｏ−ア
セチル−α−Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ
−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−ドキソル
ビシン（５） 化合物３（９３mg＝０.１２２mmol）を実施例４に記載
の条件の下に炭酸銀（１１１mg＝０.３６６mmol）、過
塩素酸銀（２５mg＝０.１２２mmol）および化合物２
（１５０mg＝０.３６６mmol）と反応させそして後処理
した。
セチル−α−Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ
−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）−ドキソル
ビシン（５） 化合物３（９３mg＝０.１２２mmol）を実施例４に記載
の条件の下に炭酸銀（１１１mg＝０.３６６mmol）、過
塩素酸銀（２５mg＝０.１２２mmol）および化合物２
（１５０mg＝０.３６６mmol）と反応させそして後処理
した。
【００４７】収率：65mg（0.06mmol＝49％)、m.p. 148
〜149℃、 〔α〕D 25 ＋170°（ｃ＝0.02, クロロホルム
中）。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）13.97 (s, 1H, OH-6)、 13.20
(s, 1H, OH-11)、 8.08〜7.01 (m, 11H, H-1, H-2, H-
3, 8×Fmoc−芳香族 H)、 5.95 (dddd, 1H, アリル)、 5.
52 (d, 1H, J3″,4″=3.0 Hz, H-4″)、 5.45 (d, 1H, J
1′,2a′=2.8 Hz, H-1′)、 5.43〜5.11 (m, 5H, 2×ア
リル, H-7, H-1″, H-3″)、 4.94(m, 2H, H-14a, H-14
b)、 4.57〜4.03 (m, 13H, OMe, 2×アリル, 3×Fmoc, H
-6a″, H-6b″, H-3′, H-5′, H-5″)、 3.87 (dd, 1H,
J1″,2″=3.3 Hz, J2″,3″=10.4 Hz, 2″-H)、 3.67
(m, 1H, H-4′)、 3.25 (d, 1H, J14a,14b=19.0 Hz, H-1
4a)、 2.93(d, 1H, J14a,14b=19.0 Hz, H-14b)、2.15
(s, 3H, OAc)、2.06 (s, 3H, OAc)、 2.03 (s, 3H, OAc)、
1.31 (d, 3H, J5′,6′=6.3 Hz, CH3-6′)。 FAB-MS, m／z＝1116（M＋Na）。
〜149℃、 〔α〕D 25 ＋170°（ｃ＝0.02, クロロホルム
中）。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）13.97 (s, 1H, OH-6)、 13.20
(s, 1H, OH-11)、 8.08〜7.01 (m, 11H, H-1, H-2, H-
3, 8×Fmoc−芳香族 H)、 5.95 (dddd, 1H, アリル)、 5.
52 (d, 1H, J3″,4″=3.0 Hz, H-4″)、 5.45 (d, 1H, J
1′,2a′=2.8 Hz, H-1′)、 5.43〜5.11 (m, 5H, 2×ア
リル, H-7, H-1″, H-3″)、 4.94(m, 2H, H-14a, H-14
b)、 4.57〜4.03 (m, 13H, OMe, 2×アリル, 3×Fmoc, H
-6a″, H-6b″, H-3′, H-5′, H-5″)、 3.87 (dd, 1H,
J1″,2″=3.3 Hz, J2″,3″=10.4 Hz, 2″-H)、 3.67
(m, 1H, H-4′)、 3.25 (d, 1H, J14a,14b=19.0 Hz, H-1
4a)、 2.93(d, 1H, J14a,14b=19.0 Hz, H-14b)、2.15
(s, 3H, OAc)、2.06 (s, 3H, OAc)、 2.03 (s, 3H, OAc)、
1.31 (d, 3H, J5′,6′=6.3 Hz, CH3-6′)。 FAB-MS, m／z＝1116（M＋Na）。
【００４８】〔実施例６〕 １４−Ｏ−（３,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−
ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ−（９−フルオレ
ニルメトキシカルボニル）−ドキソルビシン（６） １,５−シクロオクタジエン−ビス〔メチルジフェニル
ホスフィン〕イリジウムヘキサフルオロホスフェート
（５mg）の無水テトラヒドロフラン（５m1）中の溶液を
大気圧下に脱色されるまで水素添加し、化合物５（４４
mg＝０.０４ミリモル）の無水テトラヒドロフラン中の
溶液を添加しそしてその混合物を２時間撹拌した。次に
水（１m1）と沃素を添加しそしてその混合物を更に３０
分間撹拌した。その反応混合物にジクロロメタンを添加
し、それをまず水性チオ硫酸ナトリウム溶液、次いで水
性重炭酸ナトリウム溶液と共に振盪することにより抽出
した。硫酸ナトリウムで乾燥しそして濃縮を行った後、
カラムクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／
メタノール／蟻酸＝２０：１：０.１）。収率：１５mg
（０.０１４mmol＝３５％）。
ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ−（９−フルオレ
ニルメトキシカルボニル）−ドキソルビシン（６） １,５−シクロオクタジエン−ビス〔メチルジフェニル
ホスフィン〕イリジウムヘキサフルオロホスフェート
（５mg）の無水テトラヒドロフラン（５m1）中の溶液を
大気圧下に脱色されるまで水素添加し、化合物５（４４
mg＝０.０４ミリモル）の無水テトラヒドロフラン中の
溶液を添加しそしてその混合物を２時間撹拌した。次に
水（１m1）と沃素を添加しそしてその混合物を更に３０
分間撹拌した。その反応混合物にジクロロメタンを添加
し、それをまず水性チオ硫酸ナトリウム溶液、次いで水
性重炭酸ナトリウム溶液と共に振盪することにより抽出
した。硫酸ナトリウムで乾燥しそして濃縮を行った後、
カラムクロマトグラフィー（移動相：ジクロロメタン／
メタノール／蟻酸＝２０：１：０.１）。収率：１５mg
（０.０１４mmol＝３５％）。
【００４９】〔実施例７〕 １４−Ｏ−（３,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−
ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−ドキソルビシン
（７） 化合物６（１２mg＝０.０１１mmol）のモルホリン（２m
1）中の溶液を室温で３時間撹拌し、次いで２回トルエ
ンと共に蒸発させた。ジクロロメタンにとった後、水性
アセテート緩衝液（ｐＨ５）と共に振盪することにより
抽出した。
ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−ドキソルビシン
（７） 化合物６（１２mg＝０.０１１mmol）のモルホリン（２m
1）中の溶液を室温で３時間撹拌し、次いで２回トルエ
ンと共に蒸発させた。ジクロロメタンにとった後、水性
アセテート緩衝液（ｐＨ５）と共に振盪することにより
抽出した。
【００５０】収率：9mg（0.0103mmol＝94％）。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）δ8.03 (d, 1H, J1,2=7.7 H
z, H-1)、 7.79 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.0, H-2)、 7.39
(d, 1H, J2,3=8.2 Hz, H-3)、 5.52 (m, 1H, H-4″)、 5.
46 (d, 1H, J1′,2a′=3.3 Hz, H-1′)、 5.34 (m, 1H,
H-7)、 5.26 (dd,1H, J2″,3″=10.5 Hz, J3″,4″=3.2
Hz, H-3″)、 4.98 (d, 1H, J1″,2″=3.8 Hz,, H-1″)、
4.92 (m, 2H, H-14a, H-14b)、 4.39 (t, 1H,
J5″,6a″=J5″,6b″=6.5 Hz, H-5″)、 4.14〜3.97 (m,
6H, OMe, H-5′, H-6a″, H-6b″)、 3.49 (s, 1H, H-
4′)、 3.27 (d, 1H, J10a,10b=19.0 Hz, H-10a)、 2.99
(d,1H, J10a,10b=19.0 Hz, H-10b)、 2.15 (s, 3H, OA
c)、 2.07 (s, 6H, 2×OAc)、 1.36 (d, 3H, J5′,6′=6.
6 Hz, CH3-6)。
z, H-1)、 7.79 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.0, H-2)、 7.39
(d, 1H, J2,3=8.2 Hz, H-3)、 5.52 (m, 1H, H-4″)、 5.
46 (d, 1H, J1′,2a′=3.3 Hz, H-1′)、 5.34 (m, 1H,
H-7)、 5.26 (dd,1H, J2″,3″=10.5 Hz, J3″,4″=3.2
Hz, H-3″)、 4.98 (d, 1H, J1″,2″=3.8 Hz,, H-1″)、
4.92 (m, 2H, H-14a, H-14b)、 4.39 (t, 1H,
J5″,6a″=J5″,6b″=6.5 Hz, H-5″)、 4.14〜3.97 (m,
6H, OMe, H-5′, H-6a″, H-6b″)、 3.49 (s, 1H, H-
4′)、 3.27 (d, 1H, J10a,10b=19.0 Hz, H-10a)、 2.99
(d,1H, J10a,10b=19.0 Hz, H-10b)、 2.15 (s, 3H, OA
c)、 2.07 (s, 6H, 2×OAc)、 1.36 (d, 3H, J5′,6′=6.
6 Hz, CH3-6)。
【００５１】〔実施例８〕 １４−Ｏ−（３,４,６−トリ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−
ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ−トリフルオロア
セチル−ドキソルビシン（８） 化合物４を実施例７で特定された条件下に反応させた。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）δ14.05 (s, 1H, OH-6)、 13.
28 (s, 1H, OH-11)、 8.06 (dd, 1H, J1,2=7.8 Hz, J1,3
=0.8 Hz, H-1)、 7.80 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.0Hz, H-2)、
7.40 (dd, 1H, J2,3=8.7 Hz, J1,3=0.8 Hz, H-3)、 6.6
7 (d, 1H, J3′,NH=8.5 Hz, NH)、 5.57 (d, 1H,
J3″,4″=2.8 Hz, H-4″)、 5.45 (d, 1H,J1′,2a′=3.6
Hz, H-1′)、 5.33 (m, 1H, H-7)、 5.23 (dd, 1H,
J2″,3″=10.5 Hz, J3″,4″=2.9 Hz, H-3″)、 5.02
(d, 1H, J1″,2″=3.8 Hz,, H-1″)、4.87 (m, 2H, H-1
4a, H-14b)、 4.37 (t, 1H, J5″,6a″=J5″,6b″=6.5 H
z,H-5″)、 4.20 (q, 1H, J5′,6′=6.3 Hz, H-5′)、 4.
09 (s, 3H, OMe), 3.65(m, 1H, H-4′)、 3.33 (d, 1H,
J10a,10b=18.5 Hz, H-10a)、 2.98 (d, 1H, J1 0a,10b=1
8.5 Hz, H-10b)、 2.15 (s, 3H, OAc)、 2.08 (s, 3H, OA
c)、 2.04 (s,3H, OAc)、 1.32 (d, 3H, J5′,6′=6.5 H
z, CH3-6′)。
ガラクト−ヘキソ−ピラノシル）−Ｎ−トリフルオロア
セチル−ドキソルビシン（８） 化合物４を実施例７で特定された条件下に反応させた。1 H NMR (200 MHz, CDCl3）δ14.05 (s, 1H, OH-6)、 13.
28 (s, 1H, OH-11)、 8.06 (dd, 1H, J1,2=7.8 Hz, J1,3
=0.8 Hz, H-1)、 7.80 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.0Hz, H-2)、
7.40 (dd, 1H, J2,3=8.7 Hz, J1,3=0.8 Hz, H-3)、 6.6
7 (d, 1H, J3′,NH=8.5 Hz, NH)、 5.57 (d, 1H,
J3″,4″=2.8 Hz, H-4″)、 5.45 (d, 1H,J1′,2a′=3.6
Hz, H-1′)、 5.33 (m, 1H, H-7)、 5.23 (dd, 1H,
J2″,3″=10.5 Hz, J3″,4″=2.9 Hz, H-3″)、 5.02
(d, 1H, J1″,2″=3.8 Hz,, H-1″)、4.87 (m, 2H, H-1
4a, H-14b)、 4.37 (t, 1H, J5″,6a″=J5″,6b″=6.5 H
z,H-5″)、 4.20 (q, 1H, J5′,6′=6.3 Hz, H-5′)、 4.
09 (s, 3H, OMe), 3.65(m, 1H, H-4′)、 3.33 (d, 1H,
J10a,10b=18.5 Hz, H-10a)、 2.98 (d, 1H, J1 0a,10b=1
8.5 Hz, H-10b)、 2.15 (s, 3H, OAc)、 2.08 (s, 3H, OA
c)、 2.04 (s,3H, OAc)、 1.32 (d, 3H, J5′,6′=6.5 H
z, CH3-6′)。
【００５２】〔実施例９〕 １４−Ｏ−（２−Ｏ−アリル−α−Ｄ−ガラクト−ヘキ
ソ−ピラノシル）−Ｎ−トリフルオロアセチル−ドキソ
ルビシン（９） 化合物４（１５mg＝０.０１５mmol）のメタノール（２m
1）中の溶液を触媒量のナトリウムメタノレートと混合
しそして室温で１時間撹拌した。次いでその混合物を酸
性イオン交換樹脂（Dowex WX50）で中和し、濾過しそし
て濃縮した。
ソ−ピラノシル）−Ｎ−トリフルオロアセチル−ドキソ
ルビシン（９） 化合物４（１５mg＝０.０１５mmol）のメタノール（２m
1）中の溶液を触媒量のナトリウムメタノレートと混合
しそして室温で１時間撹拌した。次いでその混合物を酸
性イオン交換樹脂（Dowex WX50）で中和し、濾過しそし
て濃縮した。
【００５３】収率：12mg（0.014mmol＝93％）。1 H NMR (400 MHz, CDCl3＋CD3OD）δ14.02 (s, 1H, OH-
6)、 13.28 (s, 1H, OH-11)、 8.03 (d, 1H, J1,2=7.8 H
z, H-1)、 7.80 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.0 Hz, H-2)、 7.40
(d, 1H, J2,3=8.5 Hz, H-3)、 6.01 (m, 1H, アリル)、
5.55 (m, 1H,H-1′)、 5.26 (m, 1H, H-7)、 5.17 (d, 1
H, J1″,2″=3.5 Hz, H-1″)、 4.94(d, 1H, J14a,14b=1
9.0 Hz, H-14a)、 4.85 (d, 1H, J14a,14b=19.0 Hz, H-1
4b)、 4.08 (s, 3H, OMe)、 3.28 (d, 1H, J10a,10b=18.5
Hz, H-10a)、 3.02 (d,1H, J10a,10b=18.5 Hz, H-10b)、
1.32 (d, 3H, J5′,6′=6.5 Hz, CH3-6′)。
6)、 13.28 (s, 1H, OH-11)、 8.03 (d, 1H, J1,2=7.8 H
z, H-1)、 7.80 (t, 1H, J1,2=J2,3=8.0 Hz, H-2)、 7.40
(d, 1H, J2,3=8.5 Hz, H-3)、 6.01 (m, 1H, アリル)、
5.55 (m, 1H,H-1′)、 5.26 (m, 1H, H-7)、 5.17 (d, 1
H, J1″,2″=3.5 Hz, H-1″)、 4.94(d, 1H, J14a,14b=1
9.0 Hz, H-14a)、 4.85 (d, 1H, J14a,14b=19.0 Hz, H-1
4b)、 4.08 (s, 3H, OMe)、 3.28 (d, 1H, J10a,10b=18.5
Hz, H-10a)、 3.02 (d,1H, J10a,10b=18.5 Hz, H-10b)、
1.32 (d, 3H, J5′,6′=6.5 Hz, CH3-6′)。
【００５４】〔実施例１０〕 １４−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトヘキソピラノシル−ドキソ
ルビシン（１０） ａ) 化合物７（４mg＝０.００５mmol）を実施例９で特
定された条件下に反応させた。収率：２.８mg（０.００
４mmol＝８０％） ｂ) 化合物８（１１mg＝０.０１２mmol）のメタノール
（１m1）および０.５Ｎ水酸化ナトリウム溶液（０.５m
1）中の溶液を室温で９０分間撹拌した。希塩酸で中和
後トルエンと共に数回蒸発させ、次いでメタノールにと
り、セライトを通して濾過しそして濃縮した。ＨＰＬＣ
（移動相：ホスフェート緩衝液／アセトニトリル／テト
ラヒドロフラン＝３０：６０：１０）により精製した。
ルビシン（１０） ａ) 化合物７（４mg＝０.００５mmol）を実施例９で特
定された条件下に反応させた。収率：２.８mg（０.００
４mmol＝８０％） ｂ) 化合物８（１１mg＝０.０１２mmol）のメタノール
（１m1）および０.５Ｎ水酸化ナトリウム溶液（０.５m
1）中の溶液を室温で９０分間撹拌した。希塩酸で中和
後トルエンと共に数回蒸発させ、次いでメタノールにと
り、セライトを通して濾過しそして濃縮した。ＨＰＬＣ
（移動相：ホスフェート緩衝液／アセトニトリル／テト
ラヒドロフラン＝３０：６０：１０）により精製した。
【００５５】1H NMR (200 MHz, CDCl3＋CD3OD）δ7.90
(d, 1H, J1,2=7.6 Hz, H-1)、 7.73(t, 1H, J1,2=J2,3=8
Hz, H-2)、 7.22 (d, 1H, J2,3=8.4 Hz, H-3)、 5.37
(s, 1H, H-1′)、 5.12 (s, 1H, H-7)、 4.85 (s, 2H, H-
14a, H-14b)、 4.75 (m, 1H, H-1″)、 3.98 (s, 3H, OM
e)、 2.29 (d, 1H, J10a,10b=15.5 Hz, H-10a)、 2.06
(d, 1H, J10a,10b=15.5 Hz, H-10b)、 1.21 (d, 3H,
J4′,5′=6.6 Hz, CH3-6)。
(d, 1H, J1,2=7.6 Hz, H-1)、 7.73(t, 1H, J1,2=J2,3=8
Hz, H-2)、 7.22 (d, 1H, J2,3=8.4 Hz, H-3)、 5.37
(s, 1H, H-1′)、 5.12 (s, 1H, H-7)、 4.85 (s, 2H, H-
14a, H-14b)、 4.75 (m, 1H, H-1″)、 3.98 (s, 3H, OM
e)、 2.29 (d, 1H, J10a,10b=15.5 Hz, H-10a)、 2.06
(d, 1H, J10a,10b=15.5 Hz, H-10b)、 1.21 (d, 3H,
J4′,5′=6.6 Hz, CH3-6)。
【００５６】〔Ｂ 酵素によるプロドラッグの分解〕 〔実施例１１〕 ヒト胎盤α−ガラクトシダーゼＡによる１４−Ｏ−α−
Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル−ドキソルビシン
（化合物１０）の分解 ０.５mgの出発化合物をヒト胎盤から単離された０.０３
Ｕ／m1のα−ガラクトシダーゼＡを含む０.５m1のホス
フェート緩衝液（ｐＨ５）に溶解し、そして暗所中３７
℃でインキュベートした。インキュベーション混合物の
サンプルを様々なインキュベーション時間後に採取し高
圧液体クロマトグラフィー（カラム：Nucleosil １００
（ＲＰ１８、５μm粒径、１２５×４.６mm）；移動相：
溶液ＡおよびＢの勾配：０分−２０％Ａ、１０分−３０
％Ａ、１５分−３０％Ａ、溶液Ａ＝１００％アセトニト
リル、溶液Ｂ＝０.０２Ｍホスフェート緩衝液（ｐＨ３.
０）；流速：１m1／分；検出：蛍光、Ｅｘ４９５nm、Ｅ
ｍ５６０nm）により直接分析した。これらのクロマトグ
ラフィー条件下の出発化合物の保持時間は９.０分であ
った。インキュベーション中に生成した化合物は１２.
６分にアドリアマイシンと同じ保持時間を有した。
Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル−ドキソルビシン
（化合物１０）の分解 ０.５mgの出発化合物をヒト胎盤から単離された０.０３
Ｕ／m1のα−ガラクトシダーゼＡを含む０.５m1のホス
フェート緩衝液（ｐＨ５）に溶解し、そして暗所中３７
℃でインキュベートした。インキュベーション混合物の
サンプルを様々なインキュベーション時間後に採取し高
圧液体クロマトグラフィー（カラム：Nucleosil １００
（ＲＰ１８、５μm粒径、１２５×４.６mm）；移動相：
溶液ＡおよびＢの勾配：０分−２０％Ａ、１０分−３０
％Ａ、１５分−３０％Ａ、溶液Ａ＝１００％アセトニト
リル、溶液Ｂ＝０.０２Ｍホスフェート緩衝液（ｐＨ３.
０）；流速：１m1／分；検出：蛍光、Ｅｘ４９５nm、Ｅ
ｍ５６０nm）により直接分析した。これらのクロマトグ
ラフィー条件下の出発化合物の保持時間は９.０分であ
った。インキュベーション中に生成した化合物は１２.
６分にアドリアマイシンと同じ保持時間を有した。
【００５７】前述の条件下での分解半減期は約５４時間
（外挿値）であった。この出発化合物を酵素不含緩衝溶
液中でインキュベートした場合には、該化合物はこの時
間全体にわたって安定したままであった。
（外挿値）であった。この出発化合物を酵素不含緩衝溶
液中でインキュベートした場合には、該化合物はこの時
間全体にわたって安定したままであった。
【００５８】〔実施例１２〕 コーヒー豆α−ガラクトシダーゼによる１４−Ｏ−α−
Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル−ドキソルビシン
（化合物１０）の分解 出発化合物を０.０３Ｕ／m1コーヒー豆α−ガラクトシ
ダーゼ（Sigma社）を共存させて実施例１１に記載した
ものと同じ条件下にインキュベートした。酵素の存在下
における半減期は約２０分であった。
Ｄ−ガラクト−ヘキソ−ピラノシル−ドキソルビシン
（化合物１０）の分解 出発化合物を０.０３Ｕ／m1コーヒー豆α−ガラクトシ
ダーゼ（Sigma社）を共存させて実施例１１に記載した
ものと同じ条件下にインキュベートした。酵素の存在下
における半減期は約２０分であった。
【００５９】〔Ｃ 酸素接合体の酵素活性〕 〔実施例１３〕 β−グルクロニダーゼ接合体の酵素活性の測定 前記方法によって精製されたβ−グルクロニダーゼを抗
体または生体分子に結合しそして酵素の活性および接合
体の活性を次のようにして測定した：測定すべき酵素接
合体溶液５００μlを１００mM ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒ
ドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン
酸）（ｐＨ５）中の２.５mMｐ−ニトロフェニルβ−Ｄ
−グルクロニド溶液５００μlに添加した。そのアッセ
イ混合物を３７°でインキュベートし、そして６分後に
５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ１０.８）で停
止させた。遊離したｐ−ニトロフェノールは４０５nmで
の吸光度を測定することにより測定した。
体または生体分子に結合しそして酵素の活性および接合
体の活性を次のようにして測定した：測定すべき酵素接
合体溶液５００μlを１００mM ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒ
ドロキシエチルピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン
酸）（ｐＨ５）中の２.５mMｐ−ニトロフェニルβ−Ｄ
−グルクロニド溶液５００μlに添加した。そのアッセ
イ混合物を３７°でインキュベートし、そして６分後に
５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ１０.８）で停
止させた。遊離したｐ−ニトロフェノールは４０５nmで
の吸光度を測定することにより測定した。
【００６０】〔結果〕前記接合体はほんのわずかな酵素
活性低下を示した。
活性低下を示した。
【００６１】〔実施例１４〕 α−Ｄ−グラクトシダーゼＡ接合体の酵素活性の測定 前記方法により精製されたα−ガラクトシダーゼＡを抗
体または生体分子に結合し、そして酵素の活性および接
合体の活性を次のように測定した：測定すべき酵素接合
体溶液５００μlを１００mM ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒド
ロキシエチル−ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン
酸）（ｐＨ５）中の２.５mM ｐ−ニトロフェニルα−Ｄ
−ガラクトピラノシド溶液５００μlに添加した。その
アッセイ混合物を３７°でインキュベートし、そして６
分後に５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ１０.
８）で停止した。次に遊離したｐ−ニトロフェノールを
４０５nmでの吸光度を測定することにより測定した。
体または生体分子に結合し、そして酵素の活性および接
合体の活性を次のように測定した：測定すべき酵素接合
体溶液５００μlを１００mM ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−ヒド
ロキシエチル−ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスルホン
酸）（ｐＨ５）中の２.５mM ｐ−ニトロフェニルα−Ｄ
−ガラクトピラノシド溶液５００μlに添加した。その
アッセイ混合物を３７°でインキュベートし、そして６
分後に５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ１０.
８）で停止した。次に遊離したｐ−ニトロフェノールを
４０５nmでの吸光度を測定することにより測定した。
【００６２】〔結果〕前記接合体はほんのわずかな酵素
活性低下を示した。
活性低下を示した。
【００６３】〔Ｄ ヒト血漿中の酵素の存在〕 〔実施例１５〕 ヒト血漿中のβ−Ｄ−グルクロニダーゼの存在 ５００μlのヒト血漿を１００mM ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−
ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸）（ｐＨ７.４）中の２.５mM ｐ−ニトロフェニ
ル β−Ｄ−グルクロニド溶液５００μlに添加した。そ
のアッセイ混合物を３０°でインキュベートし、そして
３０分後に５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ １
０.８）で停止させた。次いで遊離したｐ−ニトロフェ
ノールを４０５nmでの吸光度を測定することにより測定
した。
ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸）（ｐＨ７.４）中の２.５mM ｐ−ニトロフェニ
ル β−Ｄ−グルクロニド溶液５００μlに添加した。そ
のアッセイ混合物を３０°でインキュベートし、そして
３０分後に５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ １
０.８）で停止させた。次いで遊離したｐ−ニトロフェ
ノールを４０５nmでの吸光度を測定することにより測定
した。
【００６４】〔結果〕これらの試験条件下でβ−Ｄ−グ
ルクロニダーゼ酵素の活性は全く検出し得なかった。
ルクロニダーゼ酵素の活性は全く検出し得なかった。
【００６５】〔実施例１６〕 ヒト血漿中のα−Ｄ−ガラクトシダーゼの存在 ５００μlのヒト血漿を１００mM ＨＥＰＥＳ（Ｎ−２−
ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸）（ｐＨ７.４）中の２.５mM ｐ−ニトロフェニ
ル α−Ｄ−ガラクトピラノシド溶液５００μlに添加し
た。そのアッセイ混合物を３０°でインキュベートしそ
して３０分後に５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ
１０.８）で停止させた。次いで遊離したｐ−ニトロフ
ェノールを４０５nmでの吸光度を測定することにより測
定した。
ヒドロキシエチル−ピペラジン−Ｎ′−２−エタンスル
ホン酸）（ｐＨ７.４）中の２.５mM ｐ−ニトロフェニ
ル α−Ｄ−ガラクトピラノシド溶液５００μlに添加し
た。そのアッセイ混合物を３０°でインキュベートしそ
して３０分後に５００μlの０.４Ｍグリシン溶液（ｐＨ
１０.８）で停止させた。次いで遊離したｐ−ニトロフ
ェノールを４０５nmでの吸光度を測定することにより測
定した。
【００６６】〔結果〕これら試験条件下ではα−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼ酵素の活性は全く検出し得なかった。
ラクトシダーゼ酵素の活性は全く検出し得なかった。
【００６７】〔Ｅ 生体内抗腫瘍効果〕 〔実施例１７〕 １４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリンプロドラッグ
系の生体内抗腫瘍効果 ３０匹のＮＭＲＩ ｎｕ／ｎｕ系マウスに０日目に各匹
あたり径が約５mmのＣｏＣａ ４ ヒト腫瘍片を皮下接種
した。このヒト腫瘍組織がそれらマウス内で増殖した後
（７〜１４日目）にａ、ｂ、ｃ各群６匹に５×５００μ
gのＭＡｂ ＢＷ４９４／３２−ガラクトシダーゼ接合体
を、ｄ群には５×５００μgのＭＡｂ ＢＷ ４９４／３
２を、ｅ群には５×５００μgのガラクトシダーゼおよ
び５×５００μlのＰＢＳを５日間連続静脈内注射して
投与した。
系の生体内抗腫瘍効果 ３０匹のＮＭＲＩ ｎｕ／ｎｕ系マウスに０日目に各匹
あたり径が約５mmのＣｏＣａ ４ ヒト腫瘍片を皮下接種
した。このヒト腫瘍組織がそれらマウス内で増殖した後
（７〜１４日目）にａ、ｂ、ｃ各群６匹に５×５００μ
gのＭＡｂ ＢＷ４９４／３２−ガラクトシダーゼ接合体
を、ｄ群には５×５００μgのＭＡｂ ＢＷ ４９４／３
２を、ｅ群には５×５００μgのガラクトシダーゼおよ
び５×５００μlのＰＢＳを５日間連続静脈内注射して
投与した。
【００６８】ＭＡｂ ＢＷ ４９４／３２、ガラクトシダ
ーゼ、ＭＡｂ ＢＷ ４９４／３２、ガラクトシダーゼま
たはＰＢＳの注射終了後５、６および７日目の各日に、
ａ、ｄおよびｅ群マウスに１匹あたり最大耐量（ＭＴ
Ｄ）の1/3の１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン
を静脈内注射して投与した。ｂ群マウスには各々ＭＴＤ
の1/10を、そしてｃ群にはＭＴＤの1/20を同日に投与し
た。
ーゼ、ＭＡｂ ＢＷ ４９４／３２、ガラクトシダーゼま
たはＰＢＳの注射終了後５、６および７日目の各日に、
ａ、ｄおよびｅ群マウスに１匹あたり最大耐量（ＭＴ
Ｄ）の1/3の１４−Ｏ−グリコシルアントラサイクリン
を静脈内注射して投与した。ｂ群マウスには各々ＭＴＤ
の1/10を、そしてｃ群にはＭＴＤの1/20を同日に投与し
た。
【００６９】〔結果〕ｄ群およびｅ群に認められた腫瘍
増殖はｆ群に認められたものと有意な差はなかった。
ａ、ｂおよびｃ群は際立った腫瘍増殖阻害を示し、そし
てその効果はａ群が最も顕著であった。
増殖はｆ群に認められたものと有意な差はなかった。
ａ、ｂおよびｃ群は際立った腫瘍増殖阻害を示し、そし
てその効果はａ群が最も顕著であった。
【００７０】比較し得る結果はＣｏＣａ４ 異種移植片
系においてＭＡｂ ＢＷ ４３１／２６、ＢＷ ２５０／
１８３を用いても、またＭ２１異種移植片系においてＭ
ＡｂＢＷ ７０４を用いても得られた。
系においてＭＡｂ ＢＷ ４３１／２６、ＢＷ ２５０／
１８３を用いても、またＭ２１異種移植片系においてＭ
ＡｂＢＷ ７０４を用いても得られた。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 マンフレート・クラウゼ ドイツ連邦共和国デー−6000フランクフル ト・アム・マイン．ギンハイマーシユタト ヴエーク155 (72)発明者 イエルク・チエツク ドイツ連邦共和国デー−3550マルブルク. ヘーエンヴエーク３ (72)発明者 クラウス・ボスレツト ドイツ連邦共和国デー−3550マルブルク. アム・シユラーク５ (72)発明者 ゲールハルト・ゼーマン ドイツ連邦共和国デー−3550マルブルク. アウフデアエーベルト１ (72)発明者 デイーター・ホフマン ドイツ連邦共和国デー−3551ラーンター ル．フオイアドルンヴエーク12 (72)発明者 ハンス−ハーラルト・ゼトラツエク ドイツ連邦共和国デー−3550マルブルク. ゾネンハング３
Claims (16)
- 【請求項１】 式Ｉ 【化１】 〔式中、 Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、各々独立的に、水素、ヒドロキ
シル、メトキシであり、 Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は、各々独立的に、水素、ヒドロキ
シル、ハロゲン、脂肪族アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、
ベンゾイルオキシまたは置換ベンゾイルオキシ例えばパ
ラ−ニトロベンゾイルオキシ、アルキルオキシ（Ｃ１−
Ｃ８）、アリルオキシ、ベンジルオキシまたは置換ベン
ジルオキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、アミノ、Ｎ
Ｈ−アシル（Ｃ１−Ｃ８）、ＮＨ−（９−フルオレニル
メトキシカルボニル）、モルホリノまたは置換モルホリ
ノ、好ましくは３−Ｏ−メチルモルホリノまたは２−シ
アノモルホリノであり、 Ｒ7は式II 【化２】 で示される炭水化物であり、そしてこの式においてＲ8
はメチル、ヒドロキシメチル、アシルオキシメチル（Ｃ
１−Ｃ８）、アルキルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ８）、ベ
ンジルオキシメチル、アリルオキシメチル、カルボキシ
ル、カルボキシメチルまたはカルボキシアリルであり、 Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、各々独立的に水素、ヒドロキ
シル、アシルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベンゾイルオキシ
または置換ベンゾイルオキシ例えばパラ−ニトロベンゾ
イルオキシ、アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アリルオ
キシ、ベンジルオキシまたは置換ベンジルオキシ、アミ
ノ、ＮＨ−アシル（Ｃ１−Ｃ８）またはＮＨ−（９−フ
ルオレニルメトキシカルボニル）であり、またアシル基
がモノ−、ジ−またはトリハロアセチル基である場合に
は、そのハロゲン原子としては弗素または塩素が好まし
い〕で示される化合物およびそれらの無機または有機酸
との塩（ただしα−Ｌ−デオキシフコース立体配座にお
いてＲ4＝Ｒ5＝Ｒ9＝Ｒ10＝Ｏ−アセチルおよびＲ6＝Ｒ
11＝Ｈである化合物を除く）。 - 【請求項２】 Ｒ1がメトキシであり、Ｒ2、Ｒ3がヒド
ロキシルでありそしてラジカルＲ4〜Ｒ11が請求項１に
記載の意味を有する請求項１記載の化合物。 - 【請求項３】 Ｒ1がメトキシであり、Ｒ2およびＲ3が
ヒドロキシルであり、Ｒ4がヒドロキシルまたはテトラ
ヒドロピラニルオキシであり、Ｒ5がアミノであり、Ｒ6
が水素であり、そしてＲ7がα−Ｄ−ガラクトピラノシ
ルまたはβ−Ｄ−グルクロニル立体配置の炭水化物であ
りかつＲ8〜Ｒ11が請求項１に記載の意味を有する請求
項１記載の化合物。 - 【請求項４】 Ｒ1がメトキシであり、Ｒ2、Ｒ3がヒド
ロキシルであり、Ｒ4がヒドロキシルまたはテトラヒド
ロピラニルオキシであり、Ｒ5がアミノであり、Ｒ6が水
素であり、Ｒ7がα−Ｄ−ガラクトピラノシルでありか
つＲ8がヒドロキシメチルおよびＲ9、Ｒ10およびＲ11が
ヒドロキシルである請求項１記載の化合物。 - 【請求項５】 Ｒ1がメトキシであり、Ｒ2、Ｒ3がヒド
ロキシルであり、Ｒ4がヒドロキシルまたはテトラヒド
ロピラニルオキシであり、Ｒ5がアミノであり、Ｒ6が水
素であり、Ｒ7がβ−Ｄ−グルクロニルでありかつＲ8が
カルボキシルおよびＲ9、Ｒ10およびＲ11がヒドロキシ
ルである請求項１記載の化合物。 - 【請求項６】 Ｒ1がメトキシであり、Ｒ2、Ｒ3および
Ｒ4がヒドロキシルであり、Ｒ5がアミノであり、Ｒ6が
水素であり、Ｒ7がα−Ｄ−ガラクトピラノシルであり
かつＲ8がヒドロキシメチルおよびＲ9、Ｒ10およびＲ11
がヒドロキシルである請求項１記載の化合物。 - 【請求項７】 Ｒ1がメトキシであり、Ｒ2、Ｒ3および
Ｒ4がヒドロキシルであり、Ｒ5がアミノであり、Ｒ6が
水素であり、Ｒ7がβ−Ｄ−グルクロニルでありかつＲ8
がカルボキシルおよびＲ9、Ｒ10およびＲ11がヒドロキ
シルである請求項１記載の化合物。 - 【請求項８】 式Ｖ 【化３】 （式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5およびＲ6は前述の意
味を有する）で示されるアントラサイクリンを式VI 【化４】 〔式中、 Ｒ8はメチル、アシルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ８）、ア
ルキルオキシメチル（Ｃ１−Ｃ８）、ベンジルオキシメ
チル、アリルオキシメチル、カルボキシメチル、カルボ
キシベンジルまたはカルボキシアルキルであり、 Ｒ9、Ｒ10およびＲ11は、各々独立的に、水素、アシル
オキシ（Ｃ１−Ｃ８）、ベンゾイルオキシまたは置換ベ
ンゾイルオキシ例えばパラ−ニトロベンゾイルオキシ、
アルキルオキシ（Ｃ１−Ｃ８）、アリルオキシ、ベンジ
ルオキシ、置換ベンジルオキシ、ＮＨ−アシルまたはＮ
Ｈ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であり、
そしてＺは離脱基、例えばハロゲン原子、ヒドロキシル
基、トリ−Ｃ１−Ｃ４−アルキルシリルオキシ基、酸素
原子を介して結合したアシル保護基または酸素原子を介
して結合したトリクロロアセトイミデートである〕で示
される炭水化物成分と、促進剤、および適切な場合には
酸捕捉剤および／または乾燥剤の存在下に溶媒中、−５
０°〜＋８０℃で反応させて式Ｉ（式中すべてのラジカ
ルＲ1〜Ｒ11は前記において定義されたとおりの意味を
保有する）で示される１４−Ｏ−グリコシルアントラサ
イクリン誘導体を得、そして適切な場合にこれら化合物
中に存在する保護基または保護基の一部を加水分解によ
りまたは適当な触媒を用いて除去することより成る請求
項１記載の化合物の製造方法。 - 【請求項９】 請求項１〜７の少くとも一つに記載の化
合物と、式III Ａ−Ｓｐ−Ｅ III 〔式中、 Ａは腫瘍関連抗原に対し特異性を有する抗体またはその
断片、または腫瘍上または腫瘍中に蓄積する生体分子、
例えばＥＧＦ（上皮細胞増殖因子）、ＴＧＦ−α（形質
転換成長因子α）、ＰＤＧＦ（血小板由来成長因子）、
ＩＧＦ Ｉ＋II（インスリン様成長因子 Ｉ＋II）または
ａ＋ｂ ＦＧＦ（酸性＋塩基性線維芽細胞成長因子）な
どであり、 Ｅは、免疫原性がほとんどまたは全くないグリコシダー
ゼ、好ましくは哺乳動物性グリコシダーゼ、特にα−ま
たはβ−グルコシダーゼ、α−ガラクトシダーゼ、α−
またはβ−マンノシダーゼ、α−フコシダーゼ、Ｎ−ア
セチル−α−ガラクトサミニダーゼ、Ｎ−アセチル−β
−／Ｎ−アセチル−α−グルコサミニダーゼまたはβ−
グルクロニダーゼであり、 Ｓｐは式IV Ｘ(Ｓ)nＹ IV （式中、 ＸまたはＹは−ＣＯ−Ｒ12−（Ｎ−スクシンイミド）−
または−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−であり、そして
Ｒ12は−ＣＨ2−ＣＨ2−または１,４−フェニレンであ
りそしてＲ13はＯまたはＮＨであり、 Ｙは−Ｃ（＝Ｒ13）−ＣＨ2−ＣＨ2−（式中Ｒ13は前述
の意味を有する）であり、そしてｎは１または２であ
る）で示される二官能性ジスルフィド含有基であるかま
たはポリペプチドスペーサーである〕で示される官能化
された腫瘍特異的酵素とを含む包装単位（パッケージ・
ユニット）。 - 【請求項１０】 ＡおよびＥがＳｐにより相互に化学的
に連結されている請求項９記載の包装単位。 - 【請求項１１】 Ａ、ＳｐおよびＥがＳｐがポリペプチ
ドスペーサーである融合遺伝子の構築により相互に連結
されている請求項９記載の包装単位。 - 【請求項１２】 Ａ−Ｓｐ−Ｅが融合遺伝子でトランス
フェクションされた宿主細胞により生産される請求項１
１記載の包装単位。 - 【請求項１３】 宿主細胞が真核性である請求項１１記
載の包装単位。 - 【請求項１４】 宿主細胞が原核性である請求項１１記
載の包装単位。 - 【請求項１５】 請求項１記載の化合物を含有する医
薬。 - 【請求項１６】 請求項１記載の化合物の腫瘍治療剤と
しての使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4002888.7 | 1990-02-01 | ||
| DE4002888A DE4002888A1 (de) | 1990-02-01 | 1990-02-01 | Anthracyclin-glycosyl-prodrugs, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung in kombination mit funktionalisierten tumorspezifischen enzymkonjugaten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0616690A true JPH0616690A (ja) | 1994-01-25 |
Family
ID=6399168
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3029120A Pending JPH0616690A (ja) | 1990-02-01 | 1991-01-31 | アントラサイクリン類のグリコシルプロドラツグ |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0441218A3 (ja) |
| JP (1) | JPH0616690A (ja) |
| KR (1) | KR910021408A (ja) |
| AU (1) | AU7011791A (ja) |
| CA (1) | CA2035385A1 (ja) |
| DE (1) | DE4002888A1 (ja) |
| IE (1) | IE910334A1 (ja) |
| PT (1) | PT96623A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6740509B2 (en) | 2002-05-22 | 2004-05-25 | Ikuko Ishii Karakasa | Method for the production of mucin-type glycopeptide |
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|---|---|---|---|---|
| AU633867B2 (en) * | 1989-02-02 | 1993-02-11 | Eli Lilly And Company | Delivery of cytotoxic agents |
| DE4106389A1 (de) * | 1991-02-28 | 1992-09-03 | Behringwerke Ag | Fusionsproteine zur prodrug-aktivierung, ihre herstellung und verwendung |
| DE3935016A1 (de) * | 1989-10-20 | 1991-04-25 | Behringwerke Ag | Glycosyl-etoposid-prodrugs, verfahren zu ihrer herstellung und ihre anwendung in kombination mit funktionalisiertem tumorspezifischen enzym-konjugaten |
| US5776458A (en) * | 1990-12-05 | 1998-07-07 | Pharmacia & Upjohn S.P.A. | Anthracycline-conjugates |
| GB9026491D0 (en) * | 1990-12-05 | 1991-01-23 | Erba Carlo Spa | Anthracycline-conjugates |
| DE69233669T2 (de) * | 1991-10-23 | 2007-10-25 | Cancer Research Technology Ltd. | Bakterielle nitroreduktase zur reduzierung von cb 1954 und analogen davon in eine zytotoxische form |
| DE4236237A1 (de) | 1992-10-27 | 1994-04-28 | Behringwerke Ag | Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel |
| US5502037A (en) * | 1993-07-09 | 1996-03-26 | Neuromed Technologies, Inc. | Pro-cytotoxic drug conjugates for anticancer therapy |
| EP0647450A1 (en) * | 1993-09-09 | 1995-04-12 | BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft | Improved prodrugs for enzyme mediated activation |
| ES2148259T3 (es) * | 1993-09-22 | 2000-10-16 | Hoechst Ag | Pro-profarmacos, su produccion y uso. |
| DE69533615T2 (de) | 1995-06-27 | 2005-10-13 | Pharmachemie B.V. | Anthracyclin Prodrugs, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung in der selektiven Chemotherapie |
| RU2196604C1 (ru) | 2001-12-21 | 2003-01-20 | Северин Евгений Сергеевич | Полипептид, являющийся аналогом рецепторсвязывающего фрагмента эпидермального фактора роста с 21-й по 31-ю аминокислоту, его конъюгат с доксорубицином и фармацевтическая композиция на его основе |
| WO2018146506A1 (en) * | 2017-02-10 | 2018-08-16 | Universitat Politècnica De València | Therapeutic derivatives |
Family Cites Families (2)
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|---|---|---|---|---|
| GB8705477D0 (en) * | 1987-03-09 | 1987-04-15 | Carlton Med Prod | Drug delivery systems |
| NZ225599A (en) * | 1987-08-04 | 1991-09-25 | Bristol Myers Co | Antibody-enzyme conjugates and combinations with prodrugs for the treatment of tumour cells |
-
1990
- 1990-02-01 DE DE4002888A patent/DE4002888A1/de not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-01-28 EP EP19910101096 patent/EP0441218A3/de not_active Withdrawn
- 1991-01-31 JP JP3029120A patent/JPH0616690A/ja active Pending
- 1991-01-31 PT PT96623A patent/PT96623A/pt unknown
- 1991-01-31 IE IE033491A patent/IE910334A1/en unknown
- 1991-01-31 AU AU70117/91A patent/AU7011791A/en not_active Abandoned
- 1991-01-31 KR KR1019910001612A patent/KR910021408A/ko not_active Application Discontinuation
- 1991-01-31 CA CA002035385A patent/CA2035385A1/en not_active Abandoned
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6740509B2 (en) | 2002-05-22 | 2004-05-25 | Ikuko Ishii Karakasa | Method for the production of mucin-type glycopeptide |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR910021408A (ko) | 1991-12-20 |
| CA2035385A1 (en) | 1991-08-02 |
| PT96623A (pt) | 1991-10-15 |
| IE910334A1 (en) | 1991-08-14 |
| DE4002888A1 (de) | 1991-08-08 |
| EP0441218A2 (de) | 1991-08-14 |
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| AU7011791A (en) | 1991-08-08 |
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