JPH0614790A - α−グルコシル糖化合物の製造方法 - Google Patents
α−グルコシル糖化合物の製造方法Info
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- JPH0614790A JPH0614790A JP35128791A JP35128791A JPH0614790A JP H0614790 A JPH0614790 A JP H0614790A JP 35128791 A JP35128791 A JP 35128791A JP 35128791 A JP35128791 A JP 35128791A JP H0614790 A JPH0614790 A JP H0614790A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 α−グルコシル糖供与体と単糖類あるいはオ
リゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、シクロマルトデ
キストリングルカノトランスフェラーゼを作用させるこ
とを特徴とするα−グルコシル糖化合物の製造方法。 【効果】 本発明によれば、α−グルコシル糖供与体と
単糖類あるいはオリゴ糖類を共存せしめた基質溶液にシ
クロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを
作用させることにより効率よくα−グルコシル糖化合物
を製造することができる。 このα−グルコシル糖化合
物は、食品工業，医薬品工業などの分野での利用が期待
され、例えば甘味剤，抗う蝕性食品，ビフィズス菌増殖
性食品などとしての利用が期待される。
リゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、シクロマルトデ
キストリングルカノトランスフェラーゼを作用させるこ
とを特徴とするα−グルコシル糖化合物の製造方法。 【効果】 本発明によれば、α−グルコシル糖供与体と
単糖類あるいはオリゴ糖類を共存せしめた基質溶液にシ
クロマルトデキストリングルカノトランスフェラーゼを
作用させることにより効率よくα−グルコシル糖化合物
を製造することができる。 このα−グルコシル糖化合
物は、食品工業，医薬品工業などの分野での利用が期待
され、例えば甘味剤，抗う蝕性食品，ビフィズス菌増殖
性食品などとしての利用が期待される。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、オリゴ糖の製造方法に
関し、詳しくはα−グルコシル糖供与体と単糖類あるい
はオリゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、シクロマル
トデキストリングルカノトランスフェラーゼ（以下、Ｃ
ＧＴase と略記する。）を作用させてα−グルコシル糖
化合物を製造する方法に関する。
関し、詳しくはα−グルコシル糖供与体と単糖類あるい
はオリゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、シクロマル
トデキストリングルカノトランスフェラーゼ（以下、Ｃ
ＧＴase と略記する。）を作用させてα−グルコシル糖
化合物を製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】ＣＧＴ
ase は澱粉に作用してシクロデキストリン（以下、ＣＤ
と略記する。）を合成する酵素として著名である。しか
し、この酵素はＣＤ合成作用以外に、適当な受容体が存
在すると、そのものにマルトオリゴシル基を転移させる
作用（カップリング反応）を有しており、さらにオリゴ
糖間の不均化反応をも行う。したがって、ＣＧＴase の
有する作用であるカップリング反応を利用することによ
り、各種の転移生成物を製造することができる。
ase は澱粉に作用してシクロデキストリン（以下、ＣＤ
と略記する。）を合成する酵素として著名である。しか
し、この酵素はＣＤ合成作用以外に、適当な受容体が存
在すると、そのものにマルトオリゴシル基を転移させる
作用（カップリング反応）を有しており、さらにオリゴ
糖間の不均化反応をも行う。したがって、ＣＧＴase の
有する作用であるカップリング反応を利用することによ
り、各種の転移生成物を製造することができる。
【０００３】ＣＧＴase の転移作用を利用して製造され
た物質の中には、ショ糖にグルコシル基をα−１，４結
合で結合させたマルトオリゴシル・シュクロース（カッ
プリングシュガー）がある。この糖質は、甘くて粘い
が、虫歯の原因菌であるストレプトコッカス・ミュタン
ス(Streptococcus mutans)によるショ糖からの不溶性グ
ルカンの合成を阻害し、抗う蝕性の性質を有している。
しかも、非還元性の糖質であるため、アミノ酸，蛋白質
などと加熱しても褐変しない等の特徴を有しており、現
在各種の食品に使用されている。
た物質の中には、ショ糖にグルコシル基をα−１，４結
合で結合させたマルトオリゴシル・シュクロース（カッ
プリングシュガー）がある。この糖質は、甘くて粘い
が、虫歯の原因菌であるストレプトコッカス・ミュタン
ス(Streptococcus mutans)によるショ糖からの不溶性グ
ルカンの合成を阻害し、抗う蝕性の性質を有している。
しかも、非還元性の糖質であるため、アミノ酸，蛋白質
などと加熱しても褐変しない等の特徴を有しており、現
在各種の食品に使用されている。
【０００４】しかし、バチルス・メガテリウム(Bacillu
s megaterium) ，バチルス・マセランス(B.macerans)の
ＣＧＴase の糖転移作用において有効な受容体になりう
るためには、糖は水溶液中においてピラノース環を形成
し、そのＣ２−，Ｃ３−，Ｃ４−ＯＨは欠くことができ
ず、しかもそれらの立体配座はＤ−グルコースと同じく
すべてエクアトリアルであることが必要であると言われ
ている。つまり、Ｄ−グルコース，Ｌ−ソルボース，Ｄ
−キシロース，６−デオキシ−Ｄ−グルコースなどは、
受容体として優れているが、Ｄ−グルコースとはＣ２−
ＯＨの立体配置のみが異なったＤ−マンノース，Ｃ２−
ＯＨが−ＮＨ2 または−ＮＨＣＯＣＨ3に置換されたＤ
−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン，６−デオキシ−Ｄ−グルコースとはＣ２−ＯＨの立
体配置のみが異なったＬ−ラムノースは、いずれも受容
体になり得ない。同様に、Ｃ−３位に関しては、Ｄ−キ
シロースとはＣ３−ＯＨの立体配置のみが異なったＤ−
リボースが受容体になり得ず、Ｃ−４位に関しては、Ｄ
−グルコースとはＣ４−ＯＨの立体配置のみが異なった
Ｄ−ガラクトース、またＤ−キシロースとはＣ４−ＯＨ
の立体配置のみが異なったＬ−アラビノースがいずれも
殆ど受容体になり得ないと報告されている。
s megaterium) ，バチルス・マセランス(B.macerans)の
ＣＧＴase の糖転移作用において有効な受容体になりう
るためには、糖は水溶液中においてピラノース環を形成
し、そのＣ２−，Ｃ３−，Ｃ４−ＯＨは欠くことができ
ず、しかもそれらの立体配座はＤ−グルコースと同じく
すべてエクアトリアルであることが必要であると言われ
ている。つまり、Ｄ−グルコース，Ｌ−ソルボース，Ｄ
−キシロース，６−デオキシ−Ｄ−グルコースなどは、
受容体として優れているが、Ｄ−グルコースとはＣ２−
ＯＨの立体配置のみが異なったＤ−マンノース，Ｃ２−
ＯＨが−ＮＨ2 または−ＮＨＣＯＣＨ3に置換されたＤ
−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン，６−デオキシ−Ｄ−グルコースとはＣ２−ＯＨの立
体配置のみが異なったＬ−ラムノースは、いずれも受容
体になり得ない。同様に、Ｃ−３位に関しては、Ｄ−キ
シロースとはＣ３−ＯＨの立体配置のみが異なったＤ−
リボースが受容体になり得ず、Ｃ−４位に関しては、Ｄ
−グルコースとはＣ４−ＯＨの立体配置のみが異なった
Ｄ−ガラクトース、またＤ−キシロースとはＣ４−ＯＨ
の立体配置のみが異なったＬ−アラビノースがいずれも
殆ど受容体になり得ないと報告されている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上述した
ような現状に鑑み、上記した受容体になり得ない糖質Ｄ
−マンノース，Ｄ−グルコサミン，Ｎ−アセチル−Ｄ−
グルコサミン，Ｄ−ガラクトース，Ｌ−アラビノース，
Ｄ−リボースなどへグルコシル基が転移したα−グルコ
シル糖化合物を効率良く合成すべく鋭意研究を重ねた。
その結果、バチルス・ステアロサーモフィルス(B.stear
othermophilus)およびバチルス・サーキュランス(B.cir
culans) などに由来するＣＧＴase を用いて転移反応を
行うことにより、Ｄ−マンノース，Ｄ−グルコサミン，
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン，Ｄ−グルクロン酸，
Ｄ−リボース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−アラビノース，
Ｌ−アラビノース，Ｄ−フコース，Ｌ−フコース，Ｌ−
ラムノース，Ｄ−ガラクトサミンなどへグルコシル基が
転移したα−グルコシル糖化合物を得られることが分
り、本発明を完成した。
ような現状に鑑み、上記した受容体になり得ない糖質Ｄ
−マンノース，Ｄ−グルコサミン，Ｎ−アセチル−Ｄ−
グルコサミン，Ｄ−ガラクトース，Ｌ−アラビノース，
Ｄ−リボースなどへグルコシル基が転移したα−グルコ
シル糖化合物を効率良く合成すべく鋭意研究を重ねた。
その結果、バチルス・ステアロサーモフィルス(B.stear
othermophilus)およびバチルス・サーキュランス(B.cir
culans) などに由来するＣＧＴase を用いて転移反応を
行うことにより、Ｄ−マンノース，Ｄ−グルコサミン，
Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン，Ｄ−グルクロン酸，
Ｄ−リボース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−アラビノース，
Ｌ−アラビノース，Ｄ−フコース，Ｌ−フコース，Ｌ−
ラムノース，Ｄ−ガラクトサミンなどへグルコシル基が
転移したα−グルコシル糖化合物を得られることが分
り、本発明を完成した。
【０００６】本発明は、α−グルコシル糖供与体と単糖
類あるいはオリゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、Ｃ
ＧＴase を作用させることを特徴とするα−グルコシル
糖化合物の製造方法を提供するものである。
類あるいはオリゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、Ｃ
ＧＴase を作用させることを特徴とするα−グルコシル
糖化合物の製造方法を提供するものである。
【０００７】本発明で用いるα−グルコシル糖供与体、
すなわちα−グルコース残基供与体と単糖類あるいはオ
リゴ糖類、すなわちα−グルコース残基受容体を含む溶
液は、いわゆる基質溶液と呼ばれるもので、ＣＧＴase
によるグルコシル基転移反応において、α−グルコース
残基の供与体となる物質とα−グルコース残基の受容体
となる物質を含有する水溶液である。該溶液中の供与体
と受容体の配合割合（モル比）は約１：５０〜５０：１
が望ましく、基質濃度は約５〜５０W/W ％が好適であ
る。
すなわちα−グルコース残基供与体と単糖類あるいはオ
リゴ糖類、すなわちα−グルコース残基受容体を含む溶
液は、いわゆる基質溶液と呼ばれるもので、ＣＧＴase
によるグルコシル基転移反応において、α−グルコース
残基の供与体となる物質とα−グルコース残基の受容体
となる物質を含有する水溶液である。該溶液中の供与体
と受容体の配合割合（モル比）は約１：５０〜５０：１
が望ましく、基質濃度は約５〜５０W/W ％が好適であ
る。
【０００８】なお、本発明においてα−グルコース残基
の供与体となる物質としては、澱粉や該澱粉の部分分解
物、さらにはシクロデキストリン等を挙げることがで
き、これらは単独で、もしくは２種以上の混合物として
用いられる。ここで、α−グルコース残基とは該供与体
の分解により生成するグルコシル基，マルトオリゴシル
基や分岐を持つデキストリンを意味する。
の供与体となる物質としては、澱粉や該澱粉の部分分解
物、さらにはシクロデキストリン等を挙げることがで
き、これらは単独で、もしくは２種以上の混合物として
用いられる。ここで、α−グルコース残基とは該供与体
の分解により生成するグルコシル基，マルトオリゴシル
基や分岐を持つデキストリンを意味する。
【０００９】次に、本発明で用いる単糖類あるいはオリ
ゴ糖類とは、ＣＧＴase の転移反応の受容体になり、α
−グルコシル糖化合物を生成しうる単糖類あるいはオリ
ゴ糖類である。これらの具体例として、Ｄ−フラクトー
ス，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノース，Ｄ−リボー
ス，Ｄ−グルコサミン，Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン，Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビノース，Ｄ−グルク
ロン酸，Ｄ−フコース，Ｌ−フコース，Ｌ−ラムノー
ス，Ｄ−ガラクトサミンなどを挙げることができ、これ
らは単独で用いられるほか２種以上を適宜組合せて用い
てもよい。
ゴ糖類とは、ＣＧＴase の転移反応の受容体になり、α
−グルコシル糖化合物を生成しうる単糖類あるいはオリ
ゴ糖類である。これらの具体例として、Ｄ−フラクトー
ス，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノース，Ｄ−リボー
ス，Ｄ−グルコサミン，Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミ
ン，Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビノース，Ｄ−グルク
ロン酸，Ｄ−フコース，Ｌ−フコース，Ｌ−ラムノー
ス，Ｄ−ガラクトサミンなどを挙げることができ、これ
らは単独で用いられるほか２種以上を適宜組合せて用い
てもよい。
【００１０】ＣＧＴase としては、上記基質溶液に作用
させたとき、澱粉等の供与体を分解し、生成したグルコ
シル基，マルトオリゴシル基などを受容体に転移してオ
リゴ糖を生成し得る酵素であればよい。このような酵素
の具体例としては、種々の微生物、例えばバチルス・サ
ーキュランス(B.circulans) ，バチルス・ステアロサー
モフィルス(B.stearothermophilus)などに由来するＣＧ
Ｔase がある。これらの酵素は純品のほか粗酵素の状態
であってもよい。また、これらの酵素は前記溶液中に懸
濁状態で用いてもよく、固定化状態で用いてもよい。
させたとき、澱粉等の供与体を分解し、生成したグルコ
シル基，マルトオリゴシル基などを受容体に転移してオ
リゴ糖を生成し得る酵素であればよい。このような酵素
の具体例としては、種々の微生物、例えばバチルス・サ
ーキュランス(B.circulans) ，バチルス・ステアロサー
モフィルス(B.stearothermophilus)などに由来するＣＧ
Ｔase がある。これらの酵素は純品のほか粗酵素の状態
であってもよい。また、これらの酵素は前記溶液中に懸
濁状態で用いてもよく、固定化状態で用いてもよい。
【００１１】α−グルコシル糖化合物を生成するための
反応条件としては、前記の供与体と受容体を共存せしめ
た基質溶液にＣＧＴase をｐＨ４〜８、好ましくは５〜
６、温度２０〜７０℃、好ましくは４５〜５５℃で作用
させればよい。例えばバチルス・サーキュランス由来の
ＣＧＴase を用いる場合、ｐＨ5.６、温度４５℃が好適
であり、バチルス・ステアロサーモフィルス由来のＣＧ
Ｔase を用いる場合、ｐＨ6.０、温度５０℃が好適であ
る。
反応条件としては、前記の供与体と受容体を共存せしめ
た基質溶液にＣＧＴase をｐＨ４〜８、好ましくは５〜
６、温度２０〜７０℃、好ましくは４５〜５５℃で作用
させればよい。例えばバチルス・サーキュランス由来の
ＣＧＴase を用いる場合、ｐＨ5.６、温度４５℃が好適
であり、バチルス・ステアロサーモフィルス由来のＣＧ
Ｔase を用いる場合、ｐＨ6.０、温度５０℃が好適であ
る。
【００１２】このようにして製造したα−グルコシル糖
化合物を反応液から分離・精製するには、既知の方法を
適用すればよい。例えば反応液を１００℃，１０分間加
熱して酵素を熱失活させた後、濾過，遠心分離等の固−
液分離手段を適用し、次いで活性炭カラムクロマトグラ
フィー，高速液体クロマトグラフィー等の精製手段によ
り転移反応生成物を分取し、目的とするα−グルコシル
糖化合物を得ることができる。
化合物を反応液から分離・精製するには、既知の方法を
適用すればよい。例えば反応液を１００℃，１０分間加
熱して酵素を熱失活させた後、濾過，遠心分離等の固−
液分離手段を適用し、次いで活性炭カラムクロマトグラ
フィー，高速液体クロマトグラフィー等の精製手段によ
り転移反応生成物を分取し、目的とするα−グルコシル
糖化合物を得ることができる。
【００１３】
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明はこれらにより制限されるものではない。
るが、本発明はこれらにより制限されるものではない。
【００１４】実施例１ 供与体として可溶性澱粉１００ｍｇ、受容体としてＤ−
ガラクトース，Ｄ−リボース，Ｄ−フラクトース，Ｄ−
マンノース，Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビノース，Ｄ
−フコース，Ｌ−フコース，Ｌ−ラムノースおよびＤ−
グルコサミンのうちのいずれかを１００ｍｇ含む基質溶
液（ｐＨ5.６）１mlにバチルス・ステアロサーモフィル
ス，バチルス・サーキュランスまたはバチルス・マセラ
ンス由来のＣＧＴase を７００単位添加し、４５℃で１
７時間反応させた。また、対照として受容体を全く加え
ず、供与体のみを含む基質溶液にも同様にＣＧＴase を
作用させた。
ガラクトース，Ｄ−リボース，Ｄ−フラクトース，Ｄ−
マンノース，Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビノース，Ｄ
−フコース，Ｌ−フコース，Ｌ−ラムノースおよびＤ−
グルコサミンのうちのいずれかを１００ｍｇ含む基質溶
液（ｐＨ5.６）１mlにバチルス・ステアロサーモフィル
ス，バチルス・サーキュランスまたはバチルス・マセラ
ンス由来のＣＧＴase を７００単位添加し、４５℃で１
７時間反応させた。また、対照として受容体を全く加え
ず、供与体のみを含む基質溶液にも同様にＣＧＴase を
作用させた。
【００１５】その後、反応液の一部を下記の条件で薄層
クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。
クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。
【００１６】ＨＰＬＣ分析 カラム Asahipak NH2P-50(4.6×250mm) 溶媒 ７０％アセトニトリル 流速 1.０ml/min 温度 ４０℃ 検出器 示差屈折計 ＴＬＣ分析 プレート MERCK Kieselgel-60(20 ×20cm) 溶媒 酢酸エチル：酢酸：水（３：１：１） 発色 硫酸：メタノール（１：１）
【００１７】図１にＴＬＣの結果を示す。図中、Ｒはリ
ファレンスに用いた各種糖の展開で、Ｇ１はグルコー
ス，Ｇ２はマルトース，Ｇ３はマルトトリオース，Ｇ４
はマルトテトラオースをそれぞれ示す。また、Ｂは各試
験に用いた受容体のみを展開したもの、Ｓ，Ｃ，Ｍは供
与体と各試験で用いた受容体にそれぞれバチルス・ステ
アロサーモフィルス由来のＣＧＴase を用いた場合
（Ｓ）、バチルス・サーキュランス由来のＣＧＴase を
用いた場合（Ｃ）、バチルス・マセランス由来のＣＧＴ
ase を用いた場合（Ｍ）の展開である。さらに、（１）
は受容体を加えず供与体だけの場合、（２）は受容体と
してＤ−ガラクトースを用いた場合、（３）は受容体と
してＤ−リボースを用いた場合、（４）は受容体として
Ｄ−フラクトースを用いた場合、（５）は受容体として
Ｄ−マンノースを用いた場合、（６）は受容体としてＤ
−アラビノースを用いた場合、（７）はＬ−アラビノー
スを用いた場合、（８）はＤ−フコースを用いた場合、
（９）はＬ−フコースを用いた場合、（１０）は受容体
としてＬ−ラムノースを用いた場合、（１１）は受容体
としてＤ−グルコサミンを用いた場合をそれぞれ示す。
ファレンスに用いた各種糖の展開で、Ｇ１はグルコー
ス，Ｇ２はマルトース，Ｇ３はマルトトリオース，Ｇ４
はマルトテトラオースをそれぞれ示す。また、Ｂは各試
験に用いた受容体のみを展開したもの、Ｓ，Ｃ，Ｍは供
与体と各試験で用いた受容体にそれぞれバチルス・ステ
アロサーモフィルス由来のＣＧＴase を用いた場合
（Ｓ）、バチルス・サーキュランス由来のＣＧＴase を
用いた場合（Ｃ）、バチルス・マセランス由来のＣＧＴ
ase を用いた場合（Ｍ）の展開である。さらに、（１）
は受容体を加えず供与体だけの場合、（２）は受容体と
してＤ−ガラクトースを用いた場合、（３）は受容体と
してＤ−リボースを用いた場合、（４）は受容体として
Ｄ−フラクトースを用いた場合、（５）は受容体として
Ｄ−マンノースを用いた場合、（６）は受容体としてＤ
−アラビノースを用いた場合、（７）はＬ−アラビノー
スを用いた場合、（８）はＤ−フコースを用いた場合、
（９）はＬ−フコースを用いた場合、（１０）は受容体
としてＬ−ラムノースを用いた場合、（１１）は受容体
としてＤ−グルコサミンを用いた場合をそれぞれ示す。
【００１８】この図より明らかなように、バチルス・ス
テアロサーモフィルスおよびバチルス・サーキュランス
由来のＣＧＴase は、いずれお受容体に対しても転移生
成物を多量に生成していた。また、図２〜６にＨＰＬＣ
の結果を示す。図から明らかなように、いずれの受容体
を用いた場合にも、未反応の受容体分子以外に、受容体
への転移生成物と思われるピーク（Ａ１，Ａ２，Ａ３，
Ｂ１，Ｂ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３）が検出さ
れた（図２は受容体を加えず供与体だけの場合、図３は
受容体としてＤ−フラクトースを用いた場合、図４は受
容体としてＤ−ガラクトースを用いた場合、図５は受容
体としてＤ−マンノースを用いた場合、図６は受容体と
してＤ−アラビノースを用いた場合をそれぞれ示
す。）。
テアロサーモフィルスおよびバチルス・サーキュランス
由来のＣＧＴase は、いずれお受容体に対しても転移生
成物を多量に生成していた。また、図２〜６にＨＰＬＣ
の結果を示す。図から明らかなように、いずれの受容体
を用いた場合にも、未反応の受容体分子以外に、受容体
への転移生成物と思われるピーク（Ａ１，Ａ２，Ａ３，
Ｂ１，Ｂ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３）が検出さ
れた（図２は受容体を加えず供与体だけの場合、図３は
受容体としてＤ−フラクトースを用いた場合、図４は受
容体としてＤ−ガラクトースを用いた場合、図５は受容
体としてＤ−マンノースを用いた場合、図６は受容体と
してＤ−アラビノースを用いた場合をそれぞれ示
す。）。
【００１９】反応液を１００℃で１０分間加熱して酵素
を熱失活させた後、それぞれＡ１，Ａ２，Ａ３，Ｂ１，
Ｂ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３を分取用ＨＰＬＣ
により単離した。
を熱失活させた後、それぞれＡ１，Ａ２，Ａ３，Ｂ１，
Ｂ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３を分取用ＨＰＬＣ
により単離した。
【００２０】次いで、Ａ１，Ａ２，Ａ３，Ｂ１，Ｂ２，
Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３各１ｍｇを５０ｍＭ，ｐ
Ｈ4.５の酢酸緩衝液５０μｌに溶解し、α−グルコシダ
ーゼを加え、４０℃で３０分間反応させた。反応液をＨ
ＰＬＣにより分析した結果、生成物Ａ１，Ａ２，Ａ３，
Ｂ１，Ｂ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３はいずれも
加水分解され、Ａ１，Ｂ１，Ｃ１，Ｄ１ではグルコース
とそれぞれ受容体として用いたＤ−フラクトース，Ｄ−
ガラクトース，Ｄ−マンノース，Ｄ−アラビノースを等
モル生成した。また、Ａ２，Ｂ２，Ｃ２，Ｄ２では、用
いた受容体と、その受容体に対して２倍モルのグルコー
スを生成し、Ａ３，Ｄ３では、用いた受容体と、その受
容体に対して３倍モルのグルコースを生成した。
Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３各１ｍｇを５０ｍＭ，ｐ
Ｈ4.５の酢酸緩衝液５０μｌに溶解し、α−グルコシダ
ーゼを加え、４０℃で３０分間反応させた。反応液をＨ
ＰＬＣにより分析した結果、生成物Ａ１，Ａ２，Ａ３，
Ｂ１，Ｂ２，Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３はいずれも
加水分解され、Ａ１，Ｂ１，Ｃ１，Ｄ１ではグルコース
とそれぞれ受容体として用いたＤ−フラクトース，Ｄ−
ガラクトース，Ｄ−マンノース，Ｄ−アラビノースを等
モル生成した。また、Ａ２，Ｂ２，Ｃ２，Ｄ２では、用
いた受容体と、その受容体に対して２倍モルのグルコー
スを生成し、Ａ３，Ｄ３では、用いた受容体と、その受
容体に対して３倍モルのグルコースを生成した。
【００２１】したがって、ＣＧＴase の作用特異性を考
えあわせると、生成物Ａ１，Ａ２，Ａ３，Ｂ１，Ｂ２，
Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３はそれぞれα−グルコシ
ル−フラクトース，α−マルトシル−フラクトース，α
−マルトトリオシル−フラクトース，α−グルコシル−
ガラクトース，α−マルトシル−ガラクトース，α−グ
ルコシル−マンノース，α−マルトシル−マンノース，
α−グルコシル−Ｄ−アラビノース，α−マルトシル−
Ｄ−アラビノース，α−マルトトリオシル−−Ｄ−アラ
ビノースであることが明らかである。
えあわせると、生成物Ａ１，Ａ２，Ａ３，Ｂ１，Ｂ２，
Ｃ１，Ｃ２，Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３はそれぞれα−グルコシ
ル−フラクトース，α−マルトシル−フラクトース，α
−マルトトリオシル−フラクトース，α−グルコシル−
ガラクトース，α−マルトシル−ガラクトース，α−グ
ルコシル−マンノース，α−マルトシル−マンノース，
α−グルコシル−Ｄ−アラビノース，α−マルトシル−
Ｄ−アラビノース，α−マルトトリオシル−−Ｄ−アラ
ビノースであることが明らかである。
【００２２】実施例２ 供与体としてα−シクロデキストリン１００ｍｇ、受容
体としてＤ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マ
ンノース，Ｄ−グルコサミン，Ｄ−アラビノースおよび
Ｌ−アラビノースのいずれか１種１００ｍｇを含む基質
溶液（ｐＨ5.６）１mlにバチルス・ステアロサーモフィ
ルス由来のＣＧＴase を５００単位添加し、５０℃で１
７時間反応させた。また、対照として受容体を全く加え
ず、α−シクロデキストリンのみを含む基質溶液にも同
様にＣＧＴase を作用させた。その後、反応液の一部を
実施例１と同じ方法でＨＰＬＣにて分析した。
体としてＤ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マ
ンノース，Ｄ−グルコサミン，Ｄ−アラビノースおよび
Ｌ−アラビノースのいずれか１種１００ｍｇを含む基質
溶液（ｐＨ5.６）１mlにバチルス・ステアロサーモフィ
ルス由来のＣＧＴase を５００単位添加し、５０℃で１
７時間反応させた。また、対照として受容体を全く加え
ず、α−シクロデキストリンのみを含む基質溶液にも同
様にＣＧＴase を作用させた。その後、反応液の一部を
実施例１と同じ方法でＨＰＬＣにて分析した。
【００２３】結果を図７〜１３に示す。図から明らかな
ように、いずれの受容体を用いた場合にも、未反応の受
容体分子以外に、受容体への転移生成物と思われるピー
ク（ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，ｃ１，ｃ２，ｄ
１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ２，ｆ３）が検
出された（図７は受容体を加えずα−シクロデキストリ
ンだけの場合、図８は受容体としてＤ−フラクトースを
用いた場合、図９は受容体としてＤ−ガラクトースを用
いた場合、図１０は受容体としてＤ−マンノースを用い
た場合、図１１は受容体としてＤ−グルコサミンを用い
た場合、図１２は受容体としてＤ−アラビノースを用い
た場合、図１３は受容体としてＬ−アラビノースを用い
た場合をそれぞれ示す。）。
ように、いずれの受容体を用いた場合にも、未反応の受
容体分子以外に、受容体への転移生成物と思われるピー
ク（ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，ｃ１，ｃ２，ｄ
１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ２，ｆ３）が検
出された（図７は受容体を加えずα−シクロデキストリ
ンだけの場合、図８は受容体としてＤ−フラクトースを
用いた場合、図９は受容体としてＤ−ガラクトースを用
いた場合、図１０は受容体としてＤ−マンノースを用い
た場合、図１１は受容体としてＤ−グルコサミンを用い
た場合、図１２は受容体としてＤ−アラビノースを用い
た場合、図１３は受容体としてＬ−アラビノースを用い
た場合をそれぞれ示す。）。
【００２４】反応液を１００℃で１０分間加熱して酵素
を熱失活させた後、それぞれａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，
ｂ２，ｃ１，ｃ２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ
１，ｆ２，ｆ３を分取用ＨＰＬＣにより単離した。
を熱失活させた後、それぞれａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，
ｂ２，ｃ１，ｃ２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ
１，ｆ２，ｆ３を分取用ＨＰＬＣにより単離した。
【００２５】次いで、ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，
ｃ１，ｃ２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ
２，ｆ３各１ｍｇを５０ｍＭ，ｐＨ4.５の酢酸緩衝液５
０μｌに溶解し、α−グルコシダーゼを加え、４０℃で
３０分間反応させた。反応液をＨＰＬＣにより分析した
結果、生成物ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，ｃ１，ｃ
２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ２，ｆ３
はいずれも加水分解され、ａ１，ｂ１，ｃ１，ｄ１，ｅ
１，ｆ１では、グルコースとそれぞれ受容体として用い
たＤ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノー
ス，Ｄ−グルコサミン，Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビ
ノースを等モル生成した。また、ａ２，ｂ２，ｃ２，ｄ
２，ｅ２，ｆ２では用いた受容体と、その受容体に対し
て２倍モルのグルコースを生成し、ａ３，ｅ３，ｆ３で
は用いた受容体と、その受容体に対して３倍モルのグル
コースを生成した。
ｃ１，ｃ２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ
２，ｆ３各１ｍｇを５０ｍＭ，ｐＨ4.５の酢酸緩衝液５
０μｌに溶解し、α−グルコシダーゼを加え、４０℃で
３０分間反応させた。反応液をＨＰＬＣにより分析した
結果、生成物ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，ｃ１，ｃ
２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ２，ｆ３
はいずれも加水分解され、ａ１，ｂ１，ｃ１，ｄ１，ｅ
１，ｆ１では、グルコースとそれぞれ受容体として用い
たＤ−フラクトース，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−マンノー
ス，Ｄ−グルコサミン，Ｄ−アラビノース，Ｌ−アラビ
ノースを等モル生成した。また、ａ２，ｂ２，ｃ２，ｄ
２，ｅ２，ｆ２では用いた受容体と、その受容体に対し
て２倍モルのグルコースを生成し、ａ３，ｅ３，ｆ３で
は用いた受容体と、その受容体に対して３倍モルのグル
コースを生成した。
【００２６】したがって、ＣＧＴase の作用特異性を考
えあわせると、生成物ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，
ｃ１，ｃ２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ
２，ｆ３はそれぞれα−グルコシル−フラクトース，α
−マルトシル−フラクトース，α−マルトトリオシル−
フラクトース，α−グルコシル−ガラクトース，α−マ
ルトシル−ガラクトース，α−グルコシル−マンノー
ス，α−マルトシル−マンノース，α−グルコシル−グ
ルコサミン，α−マルトシル−グルコサミン，α−グル
コシル−Ｄ−アラビノース，α−マルトシル−Ｄ−アラ
ビノース，α−マルトトリオシル−Ｄ−アラビノース，
α−グルコシル−Ｌ−アラビノース，α−マルトシル−
Ｌ−アラビノース，α−マルトトリオシル−Ｌ−アラビ
ノースであることが明らかである。
えあわせると、生成物ａ１，ａ２，ａ３，ｂ１，ｂ２，
ｃ１，ｃ２，ｄ１，ｄ２，ｅ１，ｅ２，ｅ３，ｆ１，ｆ
２，ｆ３はそれぞれα−グルコシル−フラクトース，α
−マルトシル−フラクトース，α−マルトトリオシル−
フラクトース，α−グルコシル−ガラクトース，α−マ
ルトシル−ガラクトース，α−グルコシル−マンノー
ス，α−マルトシル−マンノース，α−グルコシル−グ
ルコサミン，α−マルトシル−グルコサミン，α−グル
コシル−Ｄ−アラビノース，α−マルトシル−Ｄ−アラ
ビノース，α−マルトトリオシル−Ｄ−アラビノース，
α−グルコシル−Ｌ−アラビノース，α−マルトシル−
Ｌ−アラビノース，α−マルトトリオシル−Ｌ−アラビ
ノースであることが明らかである。
【００２７】
【発明の効果】本発明によれば、α−グルコシル糖供与
体と単糖類あるいはオリゴ糖類を共存せしめた基質溶液
にシクロマルトデキストリングルカノトランスフェラー
ゼを作用させることにより効率よくα−グルコシル糖化
合物を製造することができる。このα−グルコシル糖化
合物は、食品工業，医薬品工業などの分野での利用が期
待され、例えば甘味剤，抗う蝕性食品，ビフィズス菌増
殖性食品等としての利用が期待される。
体と単糖類あるいはオリゴ糖類を共存せしめた基質溶液
にシクロマルトデキストリングルカノトランスフェラー
ゼを作用させることにより効率よくα−グルコシル糖化
合物を製造することができる。このα−グルコシル糖化
合物は、食品工業，医薬品工業などの分野での利用が期
待され、例えば甘味剤，抗う蝕性食品，ビフィズス菌増
殖性食品等としての利用が期待される。
【図１】 薄層クロマトグラフィーの結果を示す。
【図２】 実施例１における受容体を加えず供与体だけ
の場合の高速液体クロマトグラムを示す。
の場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図３】 実施例１における受容体としてＤ−フラクト
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図４】 実施例１における受容体としてＤ−ガラクト
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図５】 実施例１における受容体としてＤ−マンノー
スを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
スを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図６】 実施例１における受容体としてＤ−アラビノ
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図７】 実施例２における受容体を加えず供与体だけ
の場合の高速液体クロマトグラムを示す。
の場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図８】 実施例２における受容体としてＤ−フラクト
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図９】 実施例２における受容体としてＤ−ガラクト
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図１０】 実施例２における受容体としてＤ−マンノ
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図１１】 実施例２における受容体としてＤ−グルコ
サミンを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
サミンを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図１２】 実施例２における受容体としてＤ−アラビ
ノースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ノースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
【図１３】 実施例２における受容体としてＬ−アラビ
ノースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
ノースを用いた場合の高速液体クロマトグラムを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 桑原 宣洋 神奈川県横浜市鶴見区大黒町13番46号 塩 水港精糖株式会社内 (72)発明者 北畑 寿美雄 大阪府泉南郡熊取町野田621−440 (72)発明者 中野 博文 大阪府豊中市服部西町３丁目14番３号
Claims (1)
- 【請求項１】 α−グルコシル糖供与体と単糖類あるい
はオリゴ糖類とを共存せしめた基質溶液に、シクロマル
トデキストリングルカノトランスフェラーゼを作用させ
ることを特徴とするα−グルコシル糖化合物の製造方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35128791A JP3200129B2 (ja) | 1991-12-13 | 1991-12-13 | α−グルコシル糖化合物の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35128791A JP3200129B2 (ja) | 1991-12-13 | 1991-12-13 | α−グルコシル糖化合物の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0614790A true JPH0614790A (ja) | 1994-01-25 |
| JP3200129B2 JP3200129B2 (ja) | 2001-08-20 |
Family
ID=18416290
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP35128791A Expired - Fee Related JP3200129B2 (ja) | 1991-12-13 | 1991-12-13 | α−グルコシル糖化合物の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3200129B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6268182B1 (en) | 1994-08-11 | 2001-07-31 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Method and producing phosphorylated saccharides |
| WO2017110517A1 (ja) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | 国立大学法人北海道大学 | ダブル及びシングルアンカー型イソマルトメガロ糖、その製造方法及びその利用 |
-
1991
- 1991-12-13 JP JP35128791A patent/JP3200129B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6268182B1 (en) | 1994-08-11 | 2001-07-31 | Ezaki Glico Co., Ltd. | Method and producing phosphorylated saccharides |
| WO2017110517A1 (ja) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | 国立大学法人北海道大学 | ダブル及びシングルアンカー型イソマルトメガロ糖、その製造方法及びその利用 |
| JP2017114943A (ja) * | 2015-12-21 | 2017-06-29 | 国立大学法人北海道大学 | ダブル及びシングルアンカー型イソマルトメガロ糖、その製造方法及びその利用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3200129B2 (ja) | 2001-08-20 |
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