JPH06116281A

JPH06116281A - キサントキノジンａ、ｂ、ｃ、ｄおよび／またはキサントキノジンｅ物質並びにその製造法

Info

Publication number: JPH06116281A
Application number: JP4270484A
Authority: JP
Inventors: Satoshi Omura; 智大村; Hiroshi Koda; 洋供田; Rokurou Masuma; 碌郎増間; Katsuji Haneda; 勝二羽田; Yuzuru Iwai; 譲岩井
Original assignee: Kitasato Institute
Current assignee: Kitasato Institute
Priority date: 1992-10-08
Filing date: 1992-10-08
Publication date: 1994-04-26

Abstract

(57)【要約】【目的】この物質はフミコーラ・エスピー．ＦＯ−８
８８により生産され、特にポリエーテル系化合物に対し
薬剤耐性を獲得したコクシジウムに対して有効な薬剤で
ある。【構成】フミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属に属し、
キサントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キ
サントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質および
／またはキサントキノジンＥ物質を生産する能力を有す
る微生物を培地に培養して培養中にキサントキノンジン
Ａ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノンジン
Ｃ物質、キサントキノジンＤ物質および／またはキサン
トキノジンＥ物質を蓄積せしめ、該培養物からキサント
キノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキ
ノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質および／または
キサントキノジンＥ物質を採取する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は養鶏産業上、重要な疾病
であるコクシジウム症に対する治療剤ならびに予防剤と
して有用なキサントキノジンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄおよび／ま
たはキサントキノジンＥ物質並びにその製造法に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】従来、抗コクシジウム剤としては、サル
ファ剤、キノリン剤、抗チアミン剤、抗生物質等が実用
化されており、最近では、ポリエーテル系抗生物質、例
えば、モネンシン、サリノマイシン、ラサロシド等が広
く使用されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、これらの薬剤
に耐性のコクシジウムが出現し、その効果が弱まってお
り、これらに代わる抗コクシジウム剤が要望されてい
る。本発明の目的は、上記の観点から、薬剤非耐性のコ
クシジウムは勿論、特にポリエーテル系化合物に対して
耐性を獲得したコクシジウムに対して有効な薬剤を提供
するものである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】一般に薬剤の交叉耐性
は、構造の類似あるいは作用機序の類似する場合に成立
し、従来のコクシジウム剤と構造的に、あるいは、作用
機序が相違する化合物はコクシジウム症の治療剤あるい
は予防剤として有用である。本発明らは、従来の薬剤に
耐性を獲得したコクシジウム原虫に対しても有効な新規
薬剤を自然界から見出すべく種々の研究を続け、モネン
シン耐性のコクシジウム原虫を試験生物として、微生物
の生産する代謝産物の中から探索した結果、新たに青森
県八戸市の土壌から分離したＦＯ−８８８菌株の培養液
中にコクシジウムに有効な物質が産生されることを見出
した。

【０００５】次いで、該培養物から抗コクシジウム活性
物質を分離、精製したところ、後記の理化学的性状を有
する物質をキサントキノジン（Ｘａｎｔｈｏｑｕｉｎｏ
ｄｉｎ）Ａ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキ
ノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質およびキサント
キノジンＥ物質は従来全く知られていないことから、キ
サントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサ
ントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質およびキ
サントキノジンＥ物質（以下、総称してキサントキノジ
ン物質と呼称することもある）と命名した。本発明は、
かかる知見に基いて完成されたものであって、後記の物
理化学的性状を有するキサントキノジンＡ物質、キサン
トキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサント
キノジンＤ物質および／またはキサントキノジンＥ物質
からなる群より選ばれたキサントキノジンＡ、Ｂ、Ｃ、
Ｄおよび／またはキサントキノジンＥ物質を提供するも
のである。

【０００６】更に、本発明は、フミコーラ属に属し、キ
サントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサ
ントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質および／
またはキサントキノジンＥ物質を生産する能力を有する
微生物を培地に培養して培養物にキサントキノジンＡ物
質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物
質、キサントキノジンＤ物質および／またはキサントキ
ノジンＥ物質を蓄積せしめ、該培養物からキサントキノ
ジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジ
ンＣ物質、キサントキノジンＤ物質および／またはキサ
ントキノジンＥ物質を採取することを特徴とするキサン
トキノジンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄおよび／またはキサントキノ
ジンＥ物質の製造法を提供するものである。

【０００７】本発明のキサントキノジンＡ物質、キサン
トキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサント
キノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ物質の物理化
学的性状を述べると次のとおりである。〔１〕キサントキノジンＡ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０５％、Ｈ４．２５％、Ｏ
３０．７０％（２）分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁ （３）分子量：計算値５７２．１３１７実測値５７２．１３２４（４）比旋光度〔α〕_D ²⁷＋２０°（Ｃ＝０．１、メタ
ノール中）（５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル中で測定
した紫外部吸収スペクトルは図１に示す通りであり、２
３２、２７９、３７８ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示
す。（６）赤外部吸収スペクトル：ＣＣl₄溶液による赤外部
吸収スペクトルは図２に示す通りであり、１７８３、１
７５２、１６０５ｃｍ^-1に吸収帯を有する。（７）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアンＸＬ−４０
０、４００ＭＨ８、ＮＭＲスペクトロメータをそれぞれ
用いて重クロロホルム溶液中で測定した¹H−ＮＭＲは図
３に示す通りであり、重メタノール溶液中で測定した¹³
Ｃ−ＮＭＲは図４に示す通りである。又、水素および炭
素の化学シフトは表１に示す通りである。

【０００８】

【表１】

【０００９】〔２〕キサントキノジンＢ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０２％、Ｈ４．２４％、Ｏ
３０．７４％（２）分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁ （３）分子量：計算値５７２．１３１７実測値５７２．１３１７（４）比旋光度〔α〕_D ²⁷＋４８８°（Ｃ＝０．１、メ
タノール中）（５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル中で測定
した紫外部吸収スペクトルは図５に示す通りであり、２
２６、２７３、３３３ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示
す。（６）赤外部吸収スペクトル：ＣＣl₄による赤外部吸収
スペクトルは図６に示す通りであり、１７３５、１６８
０、１６０５、１５６５ｃｍ^-1に吸収帯を有する。（７）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアンＸＬ−４０
０、４００ＭＨ８、ＮＭＲスペクトロメータをそれぞれ
用いて重クロロホルム溶液中で測定した¹H−ＮＭＲは図
７に示す通りであり、重メタノール溶液中で測定した¹³
Ｃ−ＮＭＲは図８に示す通りである。又、水素および炭
素の化学シフトは表２に示す通りである。

【００１０】

【表２】

【００１１】〔３〕キサントキノジンＣ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０３％、Ｈ４．２５％、Ｏ
３０．７２％（２）分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁ （３）分子量：計算値５７２．１３１７実測値５７２．１３１６（４）比旋光度〔α〕_D ²⁷＋４０４°（Ｃ＝０．１、メ
タノール中）（５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル中で測定
した紫外部吸収スペクトルは図９に示す通りであり、２
３０、２７３、３３５ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を示
す。（６）赤外部吸収スペクトル：ＣＣl₄溶液による赤外部
吸収スペクトルは図１０に示す通りであり、１７３５、
１６８０、１６００、１５７０ｃｍ^-1に吸収帯を有す
る。（７）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアンＸＬ−４０
０、４００ＭＨ８、ＮＭＲスペクトロメータをそれぞれ
用いて重クロロホルム溶液中で測定した¹H−ＮＭＲは図
１１に示す通りであり、重メタノール溶液中で測定した
¹³Ｃ−ＮＭＲは図１２に示す通りである。又、水素およ
び炭素の化学シフトは表３に示す通りである。

【００１２】

【表３】

【００１３】〔４〕キサントキノジンＤ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０３％、Ｈ４．２６％、Ｏ
３０．７１％（２）分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁ （３）分子量：計算値５７２．１３１７実測値５７２．１３１９（４）比旋光度〔α〕_D ²⁷＋２２４°（Ｃ＝０．１、メ
タノール中）（５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル中で測定
した紫外部吸収スペクトルは図１３に示す通りであり、
２３０、２７３、３３５ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を
示す。（６）赤外部吸収スペクトル：ＣＣl₄による赤外部吸収
スペクトルは図１４に示す通りであり、１７３５、１６
８５、１６０５、１５７０ｃｍ^-1に吸収帯を有する。（７）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状；黄色粉末（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアンＸＬ−４０
０、４００ＭＨ８、ＮＭＲスペクトロメータをそれぞれ
用いて重クロロホルム溶液中で測定した¹H−ＮＭＲは図
１５に示す通りであり、重メタノール溶液中で測定した
¹³Ｃ−ＮＭＲは図１６に示す通りである。又、水素およ
び炭素の化学シフトは、表４に示す通りである。

【００１４】

【表４】

【００１５】〔４〕キサントキノジンＥ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０１％、Ｈ４．２５％、Ｏ
３０．７４％（２）分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁ （３）分子量：計算値５７２．１３１７実測値５７２．１３０１（４）比旋光度〔α〕_D ²⁷＋２５８°（Ｃ＝０．１、メ
タノール中）（５）紫外部吸収スペクトル：アセトニトリル中で測定
した紫外部吸収スペクトルは図１７に示す通りであり、
２２６、２７４、３３４ｎｍ付近に特徴的な吸収極大を
示す。（６）赤外部吸収スペクトル：ＣＣl₄溶液による赤外部
吸収スペクトルは図１８に示す通りであり、１７３５、
１６８０、１６０５、１５６５ｃｍ^-1に吸収帯を有す
る。（７）溶剤に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末（１０）核磁気共鳴スペクトル：バリアンＸＬ−４０
０、４００ＭＨ８、ＮＭＲスペクトロメータをそれぞれ
用いて重クロロホルム溶液中で測定した¹H−ＮＭＲは図
１９に示す通りであり、重メタノール溶液中で測定した
¹³Ｃ−ＮＭＲは図２０に示す通りである。又、水素およ
び炭素の化学シフトは、表５に示す通りである。

【００１６】

【表５】

【００１７】キサントキノジンＡ物質、キサントキノジ
ンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノジン
Ｄ物質および／またはキサントキノジンＥ物質を生産す
る能力を有する微生物（以下、キサントキノジン物質生
産菌と称する）は、フミコーラ属に属するが、例えば本
発明者らが分離したフミコーラ属に属するフミコーラ・
エスピー・ＦＯ−８８８菌株は、本発明の最も有効に使
用される菌株の一例であって、本菌株の菌学的性状を示
すと次の通りである。

【００１８】本菌株はポテトデキストロース寒天培地、
ツァペック寒天培地、コーンミール寒天培地、マルトエ
キス寒天培地およびＹｐＳｓ寒天培地で良好に生育（コ
ロニー直径５５〜８０ｍｍ、２５℃、１４日間）し、褐
色〜黒色の分生子を多量に着成する。栄養菌糸はほとん
ど無色である。分生子形成様式はアレウロ型で栄養菌糸
上に直生したり、短い分生子柄上に生じる。分生子は１
細胞で形は、球形から亜球形で、多くは単生であるが、
２〜３個も連鎖もみられる。色は暗褐色〜黒色、分生子
の直径は１４〜１７μｍであった。前記のすべての培地
には、菌の生育に伴う分泌液および菌核の形成は観察さ
れなかった。

【００１９】本菌株の生理学的性状は、以下の通りであ
った。（１）生育温度範囲：８〜３２℃、至適生育温度範囲：
１７〜３０℃ （２）生育ｐＨ範囲：４〜１１、至適生育ｐＨ範囲：５
〜８（３）好気性、嫌気性の区別：好気性上記ＦＯ−８８８株の培養上の諸性状、形態的特徴、生
理学的性状に基づき既知菌種との比較を試みた結果、本
菌株をフミコーラ（Ｈｕｍｉｃｏｌａ）属に属する一菌
株と同定し、フミコーラ・エスピー・ＦＯ−８８８と命
名した。本菌株はフミコーラ・エスピー．ＦＯ−８８８
として工業技術院微生物工業技術研究所に寄託されてい
る。（ＦＥＲＭＰ−１３１６０号）。

【００２０】以上、キサントキノジンＡ物質、キサント
キノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキ
ノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ物質生産菌につ
いて説明したが、菌の一般的性状として菌学上の性状は
きわめて変異し易く、一定したものではなく、自然的に
あるいは通常行われる紫外線照射または変異誘導体、例
えばＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジ
ン、エチルメタンスルホネートなどを用いる人工的変異
手段により変異することは周知の事実であり、このよう
な人工的変異株は勿論、自然変異株も含め、フミコーラ
属に属し、キサントキノジンＡ物質およびキサントキノ
ジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノジ
ンＤ物質および／あるいはキサントキノジンＥ物質を生
産する能力を有する菌株はすべて本発明に使用すること
ができる。また、細胞融合、遺伝子操作などの細胞工学
的に変異させた菌株もキサントキノジン物質生産菌とし
て包含される。

【００２１】本発明においては、先ずフミコーラ属に属
するキサントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物
質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質
およびまたはキサントキノジンＥ物質生産菌が培地に培
養される。本菌の培養においては、通常真菌の培養法が
一般に用いられる。培地としては、微生物が同化し得る
炭素源、資化し得る窒素源、さらには必要に応じて無機
酸塩などを含有させた栄養培地が使用される。同化し得
る炭素源としては、ブドウ糖、ショ糖、糖密、デキスト
リン、セルロースなどが単独または組み合わせて用いら
れれる。

【００２２】すなわち、炭素源としては、たとえばグル
コース、グリセロール、フラクトース、マルトース、マ
ンニトール、キシロース、ガラクトース、リボース、澱
粉またはその加水分解物等の炭水化物が使用できる。そ
の濃度は、通常培地に対して０．１％〜５％が望まし
い。また、グルコン酸、ピルビン酸、乳酸、酢酸等の各
種有機酸、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種
アミノ酸、さらにはメタノール、エタノール等のアルコ
ール類やノルマルパラフイン等の非芳香属炭化水素、あ
るいは植物もしくは動物性の各種油脂等も使用可能であ
る。

【００２３】窒素源としては、例えばアンモニア、塩化
アンモニウム、リン酸アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム等の各種無機酸あるいは有機酸の
アンモニウム塩類、尿素、ペプトン、ＮＺ−アミン、肉
エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーンスチープリカ
ー、カゼイン加水分解物、フイッシュミールあるいはそ
の消化物、大豆粉あるいはその消化物、脱脂大豆あるい
はその消化物、加水分解物などの含窒素有機物質、さら
には、グリシン、グルタミン酸、アラニン等の各種アミ
ノ酸が使用可能である。

【００２４】無機物としては、例えば各種リン酸塩、硫
酸マグネシウム、食塩、さらには微量の重金属塩が使用
される。また、栄養要求性を示す変異株を用いる場合に
は、当然その栄養要求性を満足させる物質を培地に加え
なければならないが、この種の栄養素は、天然物を含む
培地を使用する場合には、とくに添加を必要としない場
合がある。

【００２５】培養は通常振とうまたは通気攪拌培養など
の好気的条件下で行うのがよい。工業的には深部通気攪
拌培養が好ましい。培養のｐＨはたとえば５．０〜８．
０であるが、中性付近で培養を行うのが好ましい。培養
温度は２０〜４０℃で行い得るが、通常は２６〜３２℃
（好ましくは２７℃付近）に保つのがよい。培養時間
は、液体の場合、通常３〜６日間培養を行うと、本キサ
ントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサン
トキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質およびキサ
ントキノジンＥ物質が蓄積されるので、培養中の蓄積量
が最大に達した時に、培養を終了すればよい。

【００２６】これらの培地組成、培地の液性、培養温
度、通気量などの培養条件は使用する菌株の種類や外部
の条件などに応じて好ましい結果が得られるように適宜
調節、選択されることはいうまでもない。液体培養にお
いて、発泡があるときは、シリコン油、植物油、界面活
性剤などの消泡剤を適宜使用できる。

【００２７】このようにして得られた培養物に蓄積され
る本キサントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物
質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質
およびキサントキノジンＥ物質は菌体内および培養濾液
中に含有されるので、培養物を遠心分離して培養濾液と
菌体とに分離し、各々から本キサントキノジンＡ物質、
キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キ
サントキノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ物質を
採取するのが有利である。キサントキノジンＡ物質、キ
サントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサ
ントキノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ物質を採
取するには、通常微生物の培養物から代謝物を採取する
のに用いられる手段が単独あるいは任意の順序に組み合
わせて、または反復して用いられる。

【００２８】すなわち、例えば抽出濾過、遠心分離、透
析、濃縮、乾燥、凍結、吸着、脱着、各種溶媒に対する
溶解度の差を利用する例えば沈澱、結晶化、再結晶、転
溶、向流分配法、クロマトグラフイー等の手段が用いら
れる。培養液からキサントキノジンＡ物質、キサントキ
ノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノ
ジンＤ物質およびキサントキノジンＥ物質を採取するに
は、培養液を酢酸エチル等の非親水性有機溶媒で抽出す
るか、あるいは培養濾液あるいは菌体抽出液を活性炭、
アルミナ、多孔性合成高分子樹脂、イオン交換樹脂等に
吸着させ、酢酸エチル等の溶出溶媒で溶出し、得られた
抽出液を減圧濃縮後、ヘキサン等の有機溶媒で抽出すれ
ばよい。得られた粗物質は、さらに脂溶性物質の精製に
おいて通常用いられている公知の方法、例えばシリカゲ
ル、アルミナ等の担体を用いるカラムクロマトグラフイ
ーあるいはＯＤＳ担体を用いる逆相クロマトグラフイー
により精製することができる。

【００２９】以上に述べた本発明のキサントキノジンＡ
物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物
質、キサントキノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ
物質の鶏に対する抗コクシジウム活性については以下の
通りである。

【００３０】鶏コクシジウム生育阻害物質モネンシンに耐性の鶏コクシジウム、エイメリアテネラ
のオーシストを用い、宿主であるハムスター腎由来細胞
（ＢＨＫ−２１細胞）上での生育阻害作用を、大永らの
方法（大永、石井：日本獣医医師会雑誌、３１，５９２
−５９６（１９７８年））に準じて測定した結果、本キ
サントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサ
ントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質およびキ
サントキノジンＥ物質の生育阻害作用濃度は、何れも
０．０２μｇ／ｍｌであった。なお、本キサントキノジ
ンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジン
Ｃ物質、キサントキノジンＤ物質およびキサントキノジ
ンＥ物質は、宿主細胞であるハムスター腎由来細胞（Ｂ
ＨＫ−２１細胞）に対してはエイメリア・テネラの生育
阻害活性を示す濃度、０．０２μｇ／ｍｌにおいて細胞
毒性は認められなかった。

【００３１】一方、既知鶏コクシジウム生育阻害剤モネ
ンシンについても同様の投与実験を行った。その結果、
モネンシンでは、コクシジウム生育阻害活性は認められ
ず、０．０２μｇ／ｍｌ投与で宿主細胞に毒性が認めら
れた。本キサントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ
物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物
質およびキサントキノジンＥ物質は、既知鶏コクシジウ
ム生育阻害剤モネンシンに比して低毒性であるというこ
とができる。

【００３２】

【発明の効果】以上のように、本キサントキノジンＡ物
質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物
質、キサントキノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ
物質は、ポリエーテル系抗生物質モネンシンに耐性のコ
クシジウム原虫の生育阻害活性を有することから、コク
シジウム病の寛解に導くことが可能となる。また、公知
の抗コクシジウム剤の薬物の効果を著しく持続せしめる
併用剤として用いることもできる。

【００３３】

【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明
する。実施例１５００ｍｌ容三角フラスコにグルコース２．０％、酵母
エキス０．２％、ペプトン０．５％、硫酸マグネシウム
０．０５％、リン酸１カリウム０．１％、寒天０．１％
を含む液体培地（ｐＨ６．０）１００ｍｌを分注し、１
２１℃で１５分間蒸気滅菌した。これに寒天斜面培地に
生育させたフミコーラ・エスピー．ＦＯ−８８８（ＦＥ
ＲＭＰ−１３１６０）株の菌体を白金耳にて無菌的に
接種し、２７℃で２日間振とう培養して種培養液を得
た。次いで、５００ｍｌ容三角フラスコ３本にそれぞれ
シュークロース２．０％、グルコース１．０％、コーン
スチープリカー１．０％、肉エキス０．５％、リン酸１
カリウム０．１％、炭酸カルシウム０．３％、寒天０．
１％を含む液体培地（ｐＨ６．０）１００ｍｌを分注
し、１２１℃で１５分間蒸気滅菌した。これらに蒸気の
種培養液１ｍｌを接種し、２７℃、７日間振とう培養し
た。

【００３４】この培養液（３００ｍｌ）を遠心分離して
上清と菌体に分け、上清に０．２％リン酸存在下、等量
の酢酸エチルを加えて攪拌した後、遠心分離して酢酸エ
チル層と水層を分ける操作を３回繰り返した。菌体に
０．２％リン酸存在下、等量のアセトンを加えて抽出
し、減圧濃縮してアセトンを留去して残った水層に酢酸
エチルを加えて酢酸エチル抽出液を得た。上清および菌
体の酢酸エチル抽出液を合わせて濃縮乾固して粗物質２
８９．３ｍｇを得た。この粗物質を逆相（ＯＤＳ）系の
高速クロマトグラフイー（展開溶媒、アセトニトリル：
０２％リン酸＝８：２）にかけ、キサントキノジンＡ物
質１１ｍｇ、キサントキノジンＢ物質１７ｍｇ、キサン
トキノジンＣ物質７３ｍｇ、キサントキノジンＤ物質１
６ｍｇおよびキサントキノジンＥ物質２ｍｇをそれぞれ
得た。

【００３５】実施例２５００ｍｌ容三角フラスコにグルコース２．０％、酵母
エキス０．２％、ペプトン０．５％、硫酸マグネシウム
０．０５％、リン酸１カリウム０．１％、寒天０．１％
を含む液体培地（ｐＨ６．０）１００ｍｌを分注し、１
２１℃で１５分間、蒸気滅菌した。これに寒天斜面培地
に生育させたフミコーラ・エスピー．ＦＯ−８８８株の
菌体を白金耳に接種し、２７℃２日間振とう培養して種
培養液を得た。次いで、３０l 容ジャー培養槽にシュー
クロース２．０％、グルコース１．０％、コーンスチー
プリカー１．０％、肉エキス０．５％、リン酸１カリウ
ム０．１％、炭酸カルシウム０．３％、寒天０．１％を
含む液体培地（ｐＨ６．０）２０ｌを仕込み、１２１℃
で２０分間、蒸気滅菌した。これに上記の種培養液２０
０ｍｌを接種し、２７℃６日間通気攪拌培養した。この
培養液１８l を遠心分離して上清と菌体に分け、上清に
は０．２％リン酸存在下に１８l の酢酸エチルを加えて
攪拌した後、遠心分離して酢酸エチル層を分離した。

【００３６】菌体には０．２％リン酸存在下１８l のア
セトンを加えて得た抽出液を減圧濃縮してアセトンを留
去した後、水層に酢酸エチル１５l を加え攪拌下した
後、遠心分離して酢酸エチル層を分離した。上清及び菌
体の酢酸エチル抽出液を合わせて濃縮乾固して粗物質１
８．５ｇを得た。この粗物質３ｇをシリカゲルクロマト
グラフイー（展開溶媒：クロロホルム：ＭｅＯＨ）によ
り粗精製物を得、次いでＯＤＳ担体による逆相クロマト
グラフイー（展開溶媒、アセトニトリル：０．２％リン
酸）にかけて、キサントキノジンＡ物質１２０ｍｇ、キ
サントキノジンＢ物質１８５ｍｇ、キサントキノジンＣ
物質７５５ｍｇ、キサントキノジンＤ物質１６８ｍｇお
よびキサントキノジンＥ物質２５ｍｇをそれぞれ得た。

【００３７】実施例３キサントキノジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キ
サントキノジンＣ物質、キサントキノジンＤ物質および
キサントキノジンＥ物質の鶏コクシジウム生育阻害活
性：モネンシンに耐性の鶏コクシジウム、エイメリアテ
ネラのオーシストを用い、宿主であるハムスター腎由来
細胞（ＢＨＫ−２１細胞）上での生育阻害作用を、大永
らの方法（大永、石井：日本獣医師会雑誌、３１，５９
２−５９６（１９７８年）に準じて測定した結果を表６
に示した。

【００３８】

【表６】抗コクシジウム活性

【００３９】キサントキノジンＡ物質、キサントキノジ
ンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノジン
Ｄ物質およびキサントキノジンＥ物質の鶏コクシジウム
に対する生育阻害作用濃度は、いずれも約０．０２μｇ
であつた。なお、本キサントキノジンＡ物質、キサント
キノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキ
ノジンＤ物質およびキサントキノジンＥ物質は、宿主細
胞であるハムスター腎由来細胞（ＢＨＫ−２１細胞）に
対してはエイメリア・テネラの生育阻害活性を示す濃
度、０．０２μｇ／ｍｌにおいて細胞毒性は認められな
かった。一方、既知の鶏コクシジウム生育阻害剤モネン
シンについても同様の投与実験を行った。その結果、モ
ネンシンではコクシジウム阻害活性は認められず、０．
０２μｇ／ｍｌ投与で宿主細胞に毒性が認められた。

【図面の簡単な説明】

【図１】キサントキノジンＡ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。（メタノール溶液として測定）

【図２】キサントキノジンＡ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。（ＣＣl₄中）

【図３】キサントキノジンＡ物質のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。（クロロホルム溶液）

【図４】キサントキノジンＡ物質のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。（重メタノール溶液）

【図５】キサントキノジンＢ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。（メタノール溶液として測定）

【図６】キサントキノジンＢ物質の赤外線吸収スペクト
ルである。（ＣＣl₄中）

【図７】キサントキノジンＢ物質のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。（クロロホルム溶液）

【図８】キサントキノジンＢ物質のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。（重メタノール溶液）

【図９】キサントキノジンＣ物質の紫外線吸収スペクト
ルである。（メタノール溶液として測定）

【図１０】キサントキノジンＣ物質の赤外線吸収スペク
トルである。（ＣＣl₄中）

【図１１】キサントキノジンＣ物質のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。（クロロホルム溶液）

【図１２】キサントキノジンＣ物質のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。（重メタノール溶液）

【図１３】キサントキノジンＤ物質の紫外線吸収スペク
トルである。（メタノール溶液として測定）

【図１４】キサントキノジンＤ物質の赤外線吸収スペク
トルである。（ＣＣl₄中）

【図１５】キサントキノジンＤ物質のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。（クロロホルム溶液）

【図１６】キサントキノジンＤ物質のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。（重メタノール溶液）

【図１７】キサントキノジンＥ物質の紫外線吸収スペク
トルである。（メタノール溶液として測定）

【図１８】キサントキノジンＥ物質の赤外線吸収スペク
トルである。（ＣＣl₄中）

【図１９】キサントキノジンＥ物質のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。（クロロホルム溶液）

【図２０】キサントキノジンＥ物質のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。（重メタノール溶液）

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者羽田勝二東京都港区白金５丁目９番１号社団法人北里研究所内 (72)発明者岩井譲東京都港区白金５丁目９番１号社団法人北里研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】次の理化学的性質を有するキサントキノ
ジンＡ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジ
ンＣ物質、キサントキノジンＤ物質、キサントキノジン
Ｅ物質からなる群より選ばれたキサントキノジン物質。〔１〕キサントキノジンＡ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０５％、Ｈ４．２５％、Ｏ
３０．７０％（２）推定分子式；Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁（高分解能スペクトル
による）（３）分子量：５７２（高分解能マススペクトルによ
る）（４）比旋光度：〔α〕_D ²⁷＋２０° （５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：図１に
示す通り（６）赤外線吸収スペクトル（四塩化炭素中）：図２に
示す通り（７）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性の区別；弱酸性（９）物質性状：黄色粉末〔２〕キサントキノジンＢ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０２％、Ｈ４．２４％、Ｏ
３０．７４％（２）推定分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁（高分解能スペクトル
による）（３）分子量：５７２（高分解能マススペクトルによ
る）（４）比旋光度：〔α〕_D ²⁷＋４８８° （５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：図５に
示す通り（６）赤外線吸収スペクトル（四塩化炭素中）：図６に
示す通り（７）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末〔３〕キサントキノジンＣ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０３％、Ｈ４．２５％、Ｏ
３０．７２％（２）推定分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁（高分解能スペクトル
による）（３）分子量：５７２（高分解能マススペクトルによ
る）（４）比旋光度：〔α〕_D ²⁷＋４０４° （５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：図９に
示す通り（６）赤外線吸収スペクトル（四塩化炭素中）：図１０
に示す通り（７）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末〔４〕キサントキノジンＤ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０３％、Ｈ４．２６％、Ｏ
３０．７１％（２）推定分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁（高分解能スペクトル
による）（３）分子量：５７２（高分解能マススペクトルによ
る）（４）比旋光度：〔α〕_D ²⁷＋２２４° （５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：図１３
に示す通り（６）赤外線吸収スペクトル（四塩化炭素中）：図１４
に示す通り（７）溶媒に対する溶解性；メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状；黄色粉末〔５〕キサントキノジンＥ物質（１）元素分析値：Ｃ６５．０１％、Ｈ４．２５％、Ｏ
３０．７４％（２）推定分子式：Ｃ₃₁Ｈ₂₄Ｏ₁₁（高分解能スペクトル
による）（３）分子量：５７２（高分解能マススペクトルによ
る）（４）比旋光度：〔α〕_D ²⁷＋２５８° （５）紫外線吸収スペクトル（メタノール中）：図１７
に示す通り（６）赤外線吸収スペクトル（四塩化炭素中）：図１８
に示す通り（７）溶媒に対する溶解性：メタノール、エタノール、
アセトン、酢酸エチルエステル、クロロホルムに可溶、
ｎ−ヘキサンに難溶性、水に不溶である（８）塩基性、酸性、中性の区別：弱酸性（９）物質性状：黄色粉末
【請求項２】フミコーラ属に属し、キサントキノジン
Ａ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ
物質、キサントキノジンＤ物質および／またはキサント
キノジンＥ物質を生産する能力を有する微生物を培地に
培養して培養中にキサントキノジンＡ物質、キサントキ
ノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサントキノ
ジンＤ物質および／またはキサントキノジンＥ物質を蓄
積せしめ、該培養物からキサントキノジンＡ物質、キサ
ントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ物質、キサン
トキノジンＤ物質および／またはキサントキノジンＥ物
質を採取することを特徴とするキサントキノジンＡ、
Ｂ、Ｃ、Ｄおよび／またはキサントキノジンＥ物質の製
造法。
【請求項３】フミコーラ属に属し、キサントキノジン
Ａ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ
物質、キサントキノジンＤ物質および／またはキサント
キノジンＥ物質を生産する能力を有する微生物が、フミ
コーラ・エスピー．ＦＯ−８８８（Ｈｕｍｉｃｏｌａ
ｓｐ．ＦＯ−８８８ＦＥＲＭＰ−１３１６０）であ
る請求項２記載の製造法。
【請求項４】フミコーラ属に属し、キサントキノジン
Ａ物質、キサントキノジンＢ物質、キサントキノジンＣ
物質、キサントキノジンＤ物質および／またはキサント
キノジンＥ物質を生産する能力を有する微生物。
【請求項５】微生物がフミコーラ・エスピー．ＦＯ−
８８８である請求項４記載の微生物。