JPH06107683A - ハンガリー産マイマイ由来神経ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 新規神経ペプチドを提供する。 【構成】 次のアミノ酸配列式（１）を有するペプチ
ド。 ｐ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（１） （式中、ｐ−Ｇｌｕはピログルタミン酸残基、ＮＨ_２は
Ｃ末端がアミド化されていることを示す。）

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なペプチドに関し、
更に詳細にはハンガリー産マイマイ（Ｈｅｌｉｘ ｐｏ
ｍａｔｉａ）の神経節から得られる新規な筋収縮修飾性
ペプチドに関する。

【０００２】

【従来の技術】軟体動物の神経系は一般に高等動物に較
べて単純であるので、情報処理の機構の解明に利用する
ことが出来る。軟体動物より得られた知見は、少なくと
もそれが細胞下レベルの機構に関するものであれば、高
等動物の神経系にも一般化できると考えられる。その
際、神経伝達物質の探索が必要不可欠であり、古典的伝
達物質に加えて、ペプチド性の伝達物質あるいはニュー
ロモデュレーターの探索が精力的に行われている。

【０００３】本発明者らは、先にムラサキイガイ（Ｍｙ
ｔｉｌｕｓ ｅｄｕｌｉｓ）の神経節より、ムラサキイ
ガイの足糸前牽引筋の電気刺激による強収縮に対する作
用を指標に得られた、次のアミノ酸配列式（９）： Ｈ−Ｇｌｙ−Ｘ−Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ｎ
Ｈ_２ （９） （本明細書中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢ
の定める３文字表記により表記し、ＸはＳｅｒ残基また
はＡｌａ残基を示し、ＮＨ_２はＣ末端がアミド化されて
いることを示す。）で表される新規なペプチド（ＭＩ
Ｐ：ＭｙｔｉｌｕｓＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉ
ｄｅ）が、内因性神経ペプチドであることを見出すと共
に、これらのペプチドを合成し、特許出願を行った（特
開平１−２２１３９２号公報参照）。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】現在までに、軟体動物
からは上記のＭＩＰの他にも、Ｍｙｏｍｏｄｕｌｉｎ
（Ｃｒｏｐｐｅｒ，Ｔｅｎｅｎｂａｕｍ，Ｋｏｌｋｓ，
Ｋｕｐｆｅｒｍａｎｎ，Ｗｅｉｓｓ， Ｐｒｏ．Ｎａｔ
ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４，５４８３〜５４
８６ １９８７）、ＣＡＲＰ（Ｃａｔｃｈ−Ｒｅｌａｘ
ｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅ：平田、久保田、高畠、桑原、
宗岡 Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．，４４２ ３７３〜３７
６）、ＳＣＰ（Ｓｍａｌｌ Ｃａｒｄｉｏａｃｔｉｖｅ
Ｐｅｐｔｉｄｅ：Ｌｌｏｙｄ，Ｋｕｐｆｅｒｍａｎ
ｎ，Ｗｅｉｓｓ，Ｊ．Ｃｏｍｐ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，Ａ
１５６，９５９〜６６７ １９８５）等が報告されてい
るが、神経ペプチドの構造−活性相関、種特異性等の研
究のためには、さらに多くの神経ペプチドを見出すこと
が必要とされている。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記に鑑
み、ハンガリー産マイマイの神経節から、ムラサキイガ
イの足糸前牽引筋（Ａｎｔｅｒｉｏｒ Ｂｙｓｓｕｓ
ＲｅｔｒａｃｔｏｒＭｕｓｃｌｅ：ＡＢＲＭ）の電気刺
激による強収縮に対する作用を指標に、〔図１〕に示す
様に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を系統的
に組合わせて内因性神経ペプチドを単離すべく鋭意研究
を行い、活性物質を得た。

【０００６】これらの活性物質の構造解析により、８種
類の新規なペプチドを見出し、固相法によりそれぞれの
ペプチドを合成し、その構造を確認して本発明を完成し
た。

【０００７】すなわち、本発明によれば、次のアミノ酸
配列式（１〜８）： ｐ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（１） Ｈ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ （２） Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−ＯＨ （３） Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ＯＨ （４） Ｈ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒ ｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｌｅ ｕ−ＮＨ_２ （５） Ｈ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｓ ｎ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｔｒｐ−ＯＨ （６） Ｈ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒ ｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌ ｅ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＮＨ_２ （７） ｐ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−Ｐｈｅ−ＯＨ （８） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
る３文字表記により表記し、ｐ−Ｇｌｕはピログルタミ
ン酸残基、ＮＨ_２はＣ末端がアミド化されていることを
示す。）で表される新規神経ペプチドが提供される。

【０００８】本発明のペプチドを得るには、ハンガリー
産マイマイの神経節を原料として以下の方法により単
離、精製することができる。例えば、ハンガリー産マイ
マイの神経節をアセトン中でホモジナイズし、得られた
ホモジネートを遠心分離して得られた上清をＣ１８カー
トリッジに吸着させ、吸着画分を０．１％トリフルオロ
酢酸（以下ＴＦＡと略記）／メタノールで溶出し、これ
を逆相クロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフ
ィー等に付し、最終的に２２０ｎｍの紫外吸収（以下Ｕ
Ｖ_２２０と略記）モニターで単一のピークを示すまで精
製することにより、目的とするペプチドを分離、精製す
ることができる。

【０００９】また、本発明のペプチドはオリゴペプチド
であるため、市販のペプチド合成機（例えばアプライド
バイオシステム社製全自動ペプチド合成機４３０Ａ型）
により容易に合成することができる。これらの方法で得
られた粗ペプチドは、例えばＣ１８逆相高速液体クロマ
トグラフィー等に付し、目的とするペプチドを分離、精
製することができる。

【００１０】

【作用】本発明のペプチドは、ムラサキイガイ足糸前牽
引筋の電気刺激による強収縮を修飾する生理活性を示
し、神経伝達系研究における有用な試薬として利用する
ことができる。また、神経伝達系の研究を通して医薬お
よび農薬研究の新しい糸口を与えることができる。

【００１１】

【実施例】次に実施例によって本発明をさらに説明する
が、本発明の範囲はこれらのみに限定されるものではな
い。

【００１２】実施例１．ハンガリー産マイマイよりのペ
プチドの精製 ａ．粗抽出 ハンガリー産マイマイ１，０７５匹分の脳神経節および
食道下神経節を１８０ｍｌの１００％アセトン中０℃下
でホモジナイズし、４℃、１６，０００×ｇで４０分間
遠心分離し、上清を集めた。沈澱は１７０ｍｌの８０％
アセトンで抽出後、同条件で遠心分離し、上清を集め
た。得られた沈澱はさらに１００ｍｌの８０％アセトン
で抽出後、同条件で遠心分離し、上清を集めた。これら
の操作で得られた上清を集め、１ｍｌまで減圧濃縮し、
これに０．１Ｎ塩酸３０ｍｌを加えて再び同条件で遠心
分離し、上清を抽出液とした。

【００１３】ｂ．Ｃ１８カートリッジへの吸着 ａ．で得られた抽出液を直列に連結した３個のＳｅｐ−
Ｐａｋ Ｃ１８カートリッジ（日本ミリポア・リミッテ
ド社製）に通液した。カートリッジを０．１％ＴＦＡで
洗浄した後、保持物質を７ｍｌの０．１％ＴＦＡ／メタ
ノールで溶出して減圧下に濃縮乾固した。

【００１４】ｃ．逆相カラムクロマトグラフィー ｂ．で得られた濃縮乾固物を０．５ｍｌの０．１％ＴＦ
Ａに溶解し、Ａｓａｈｉｐａｋ ＯＤＰ−５０（旭化成
工業（株）製、φ７．６×２５０ｍｍ）を用いたＣ−１
８逆相高速液体カラムクロマトグラフィーに付し、流速
１ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、
１２０分間で０％から６０％のアセトニトリルの直線濃
度勾配で溶出し、２ｍｌづつ分画した。生物検定によ
り、５つの画分（保持時間の短い画分から順に、画分Ｉ
〜Ｖと称する）を得た。

【００１５】ｄ．陽イオン交換カラムクロマトグラフィ
ー ｃ．で得られた画分Ｉを、ＴＳＫｇｅｌ ＳＰ−５ＰＷ
（東ソー（株）製、φ７．５×７５ｍｍ）を用いた陽イ
オン交換カラムクロマトグラフィーに付し、流速０．５
ｍｌ／ｍｉｎで、１０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．９）
中、６０分間で０Ｍから０．６ＭのＮａＣｌの直線濃度
勾配で溶出し、１ｍｌずつ分画した。生物検定により、
画分１から４個の活性画分（保持時間の短い画分から順
に、Ｆ１〜４と称する）を得た。同様にして、画分ＩＩ
から８個の活性画分（同様にＦ５〜１２と称する）、画
分ＩＩＩから５つの活性画分（同様にＦ１３〜１７と称
する）を得た。

【００１６】画分ＩＶおよびＶについては、溶出条件を
７０分間で０Ｍから０．７ＭのＮａＣｌの直線濃度勾配
に変更して陽イオン交換カラムクロマトグラフィーを行
うことにより、画分から２個の活性画分（同様にＦ１８
〜１９と称する）、画分Ｖから２個の活性画分（同様に
Ｆ２０〜２１と称する）を得た。

【００１７】ｅ．化合物１の精製 ｄ．で得られたＦ６画分をＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ ８０
Ｔ_Ｍ（東ソー（株）製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用い
たＣ１８逆相高速液体カラムクロマトグラフィーに付
し、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ
２．２）中、５０分間で１２％から２２％のアセトニト
リルの直線濃度勾配で溶出した。化合物１は、生物検定
により得られた４個の活性ピークのうちの３番目のピー
クを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、溶出濃度より
０．５％〜１％程度高いアセトニトリル濃度のイソクラ
ティックモードで、逆相高速液体カラムクロマトグラフ
ィーを、最終的にＵＶ_２２０モニターで単一のピークを
示すまで繰り返すことにより得られた。

【００１８】ｆ．化合物２の精製 ｄ．で得られたＦ９画分をＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ ８０
Ｔ_Ｍ（東ソー（株）製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用い
たＣ１８逆相高速液体カラムクロマトグラフィーに付
し、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ
２．２）中、５０分間で１２％から２２％のアセトニト
リルの直線濃度勾配で溶出した。化合物２は、生物検定
により得られた１個の活性ピークを、０．１％ＴＦＡ
（ｐＨ２．２）中、溶出濃度より０．５％〜１％程度高
いアセトニトリル濃度のイソクラティックモードで、逆
相高速液体カラムクロマトグラフィーを、最終的にＵＶ
_２２０モニターで単一のピークを示すまで繰り返すこと
により得られた。

【００１９】ｇ．化合物３の精製 ｄ．で得られたＦ１８画分をＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ ８
０Ｔ_Ｍ（東ソー（株）製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用
いたＣ１８逆相高速液体カラムクロマトグラフィーに付
し、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ
２．２）中、５０分間で１９％から２９％のアセトニト
リルの直線濃度勾配で溶出した。化合物３は、生物検定
により得られた６個の活性ピークのうちの５番目のピー
クを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、溶出濃度より
０．５％〜１％程度高いアセトニトリル濃度のイソクラ
ティックモードで、逆相高速液休カラムクロマトグラフ
ィーを、最終的にＵＶ_２２０モニターで単一のピークを
示すまで繰り返すことにより得られた。

【００２０】ｈ．化合物４の精製 ｄ．で得られたＦ１９画分をＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ ８
０Ｔ_Ｍ（東ソー（株）製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用
いたＣ１８逆相高速液体カラムクロマトグラフィーに付
し、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ
２．２）中、５０分間で１９％から２９％のアセトニト
リルの直線濃度勾配で溶出した。化合物４は、生物検定
により得られた６個の活性ピークのうちの１番目のピー
クを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、溶出濃度より
０．５％〜１％程度高いアセトニトリル濃度のイソクラ
ティックモードで、逆相高速液体カラムクロマトグラフ
ィーを、最終的にＵＶ_２２０モニターで単一のピークを
示すまで繰り返すことにより得られた。

【００２１】ｉ．化合物５の精製 ｄ．で得られたＦ２０画分をＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ ８
０Ｔ_Ｍ（東ソー（株）製、φ４．６×１５０ｍｍ）を用
いたＣ１８逆相高速液体カラムクロマトグラフィーに付
し、流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ
２．２）中、５０分間で２１％から３１％のアセトニト
リルの直線濃度勾配で溶出した。化合物５は、生物検定
により得られた１３個の活性ピークのうちの３番目のピ
ークを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、溶出濃度よ
り０．５％〜１％程度高いアセトニトリル濃度のイソク
ラティックモードで、逆相高速液体カラムクロマトグラ
フィーを、最終的にＵＶ_２２０モニターで単一のピーク
を示すまで繰り返すことにより得られた。

【００２２】ｊ．化合物６の精製 化合物７は、ｉで得られた１３個の活性ピークのうちの
４番目のピークを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、
溶出濃度より０．５％〜１％程度高いアセトニトリル濃
度のイソクラティックモードで、逆相高速液体カラムク
ロマトグラフィーを、最終的にＵＶ_２２０モニターで単
一のピークを示すまで繰り返すことにより得られた。

【００２３】ｋ．化合物７の精製 化合物７は、ｉで得られた１３個の活性ピークのうちの
７番目のピークを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）中、
溶出濃度より０．５％〜１％程度高いアセトニトリル濃
度のイソクラティックモードで、逆相高速液体カラムク
ロマトグラフィーを、最終的にＵＶ_２２０モニターで単
一のピークを示すまで繰り返すことにより得られた。

【００２４】ｌ．化合物８の精製 化合物８は、ｉで得られた１３個の活性ピークのうちの
１０番目のピークを、０．１％ＴＦＡ（ｐＨ２．２）
中、溶出濃度より０．５％〜１％程度高いアセトニトリ
ル濃度のイソクラティックモードで、逆相高速液体カラ
ムクロマトグラフィーを、最終的にＵＶ_２２０モニター
で単一のピークを示すまで繰り返すことにより得られ
た。

【００２５】実施例２．ペプチドの同定 これらのペプチドのアミノ酸組成は、東ソーＣＣＰ−８
０００型アミノ酸分析システムにより測定した。結果を
〔表１〕に示す。

【００２６】

【表１】

【００２７】化合物１および８を除く６つのペプチドの
アミノ酸配列は、島津ＰＳＱ−１型全自動エドマン分解
気相シークエンサーにより測定した。結果を〔表２〕に
示す。

【００２８】

【表２】

【００２９】さらに、これらのペプチドのマススペクト
ルは、日本電子ＪＭＳ−ＨＸ−１１０／１１０Ａ型ＦＡ
Ｂ質量分析機により測定した。結果を〔表３〕に示す。

【００３０】

【表３】

【００３１】また、化合物１および８については、得ら
れた天然物が非常に微量であったため、直接質量分析を
行い、タンデムＭＳの手法でアミノ酸配列を検討した。
これらのデーダから、化合物１〜８はそれぞれ、配列番
号１〜８のアミノ酸配列で表されることが明らかになっ
た。

【００３２】実施例３ 固相法によるペプチドの合成 ペプチドの合成は、Ｎ末端がフリーの場合はＨＭＰ−樹
脂（アプライドバイオシステム社製）、Ｎ末端がアミド
化されている場合はＦｍｏｃ−ａｍｉｎｏｅｔｈｙｌ
ＳＡＬ樹脂（渡辺科学工業（株））を担体とし、Ｆｍｏ
ｃ−Ａｌａ，Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ），Ｆｍｏｃ−
Ａｓｎ（Ｔｒｔ），Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕ^ｔ），Ｆ
ｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ），Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｕ
^ｔ），Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ，Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒ
ｔ），Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ，Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，Ｆｍｏｃ
−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ｐｒｏ，Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｕ
^ｔ），Ｆｍｏｃ−Ｔｒｐ，Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（Ｂ
ｕ^ｔ），Ｆｍｏｃ−Ｖａｌおよび Ｐｙｒｏｇｌｕｔａ
ｍｉｃ ａｃｉｄを用い、アプライドバイオシステム社
の全自動ペプチド合成機４３０Ａ型を用いて、Ｆａｓｔ
Ｍｏｃ^ＴＭの固相法により合成した。（但し、ＨＭＰ＝
４−（Ｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌ）−ｐｈｅｎｏｘｙ
ｍｅｔｈｙｌ，Ｆｍｏｃ＝９−Ｆｌｕｏｒｅｎｙｌｍｅ
ｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ，ＳＡＬ＝Ｓｕｐｅｒ Ａ
ｃｉｄ Ｌａｂｉｌｅ，Ｐｍｃ＝２，２，５，７，８−
Ｐｅｎｔａｍｅｔｈｙｌｃｈｒｏｍａｎ−６−ｓｕｌｆ
ｏｎｙｌ，Ｔｒｔ＝Ｔｒｉｔｙｌ，Ｂｕ^ｔ＝ｔ−Ｂｕｔ
ｙｌを示す。）

【００３３】ペプチド樹脂からのペプチドの切り放しと
粗ペプチドの脱保護は、当業者に良く知られているよう
に、アミノ酸の保護基の種類により、試薬Ａ（９５％Ｔ
ＦＡ／５％水）、試薬Ｂ（６．２５％フェノール／２．
１％１，２−エタンジチオール／４．２％チオアニソー
ル／４．１％水／８３．３％ＴＦＡ）および試薬Ｃ
（２．５％１，２−エタンジチオール／２．５％水／９
５．０％ＴＦＡ）を使い分けた。但し、化合物６につい
ては、Ｔｒｐに対する副反応を防ぐために、ＴＦＡ１ｍ
ｌ当たり２ｍｇの２−メチルインドールを加えた試薬Ｃ
を用いた。ペプチド樹脂１ｇ当たり約１０ｍｌのＡ〜Ｃ
いずれかの試薬を加え、室温で１．５〜３時間処理して
脱保護および切断を行い、エーテルを加えてペプチドを
沈澱させ、沈澱をエーテルで３回洗浄して粗ペプチドを
得た。粗ペプチドはＣ−１８逆相高速液体クロマトグラ
フィーおよび強酸性イオン交換高速液体クロマトグラフ
ィーにより精製した。

【００３４】精製ペプチドは、ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ８
０Ｔ_Ｍを用いる逆相クロマトグラフィーおよびＴＳＫｇ
ｅｌ ＳＰ−５ＰＷを用いる陽イオン交換クロマトグラ
フィーにおいて、保持時間が天然品と全く一致した。ま
た、ムラサキイガイ足糸前牽引筋の電気刺激による強収
縮の抑制においても、天然品と同様であった。

【００３５】実施例４ ムラサキイガイ足糸前牽引筋収
縮試験 ムラサキイガイ足糸前牽引筋を用いた生物活性検定試験
は、宗岡らの方法（宗岡ら：Ｊ．Ｐｈａｒｍｃ．ｅｘ
ｐ．Ｔｈｅｒ．，Ｖｏｌ．２０２，Ｐ６０１−６０９，
１９７７）に従って実施した。即ち、分離したムラサキ
イガイ足糸前牽引筋の上端と下端を木綿糸で結紮し、２
ｍｌのチャンバーに取り付けた。検定すべき試料は、Ｎ
ａＣｌ：４４５ｍＭ，ＫＣｌ：１０ｍＭ，ＣａＣｌ_２：
１０ｍＭ，ＭｇＣｌ_２：５５ｍＭを含む、ｐＨ７．８の
１０ｍＭトリス−塩酸緩衝液に溶解して用いた。強収縮
は、上下の木綿糸に接触させた一対の銀電極に１０分お
きに１５Ｖ，３ｍｓｅｃ，１０Ｈｚ，５０ｐｕｌｓｅの
電気刺激を与えて誘発した。試料は電気刺激の８分前か
ら作用させておき、収縮を記録した後は速やかに上述の
緩衝液で洗浄した。

【００３６】本発明のペプチドのムラサキイガイ足糸前
牽引筋の強収縮に対する作用を〔図２〕〜〔図９〕に示
す。図に示すように、本発明のペプチドは、ムラサキイ
ガイの電気刺激による足糸前牽引筋の強収縮を修飾す
る。

【００３７】

【発明の効果】本発明のペプチドは、ムラサキイガイ足
糸前牽引筋の強収縮を修飾する神経ペプチドであり、神
経伝達系を解明するための生化学試薬として有用であ
る。さらに、神経伝達系の研究を通して医薬および農薬
研究の新しい糸口を与えることができる。

【配列表】

【００３８】配列番号：１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列の特徴： 他の特徴：Ｎ末端のピログルタミン酸残基 存在位置：１ 特徴を決定した方法：Ｅ 他の特徴：Ｃ末端アミド化 存在位置：７ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列：

【００３９】配列番号：２ 配列の長さ：５ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列：

【００４０】配列番号：３ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列：

【００４１】配列番号：４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列：

【００４２】配列番号：５ 配列の長さ：１８ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列の特徴： 他の特徴：Ｃ末端アミド化 存在位置：１８ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列：

【００４３】配列番号：６ 配列の長さ：１３ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列：

【００４４】配列番号：７ 配列の長さ：２２ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列の特徴： 他の特徴：Ｃ末端アミド化 存在位置：７ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列：

【００４５】配列番号：８ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 配列の種類：ペプチド 起源： 生物名：ヘリックス ポマシア（Ｈｅｌｉｘ ｐｏｍａ
ｔｉａ） 配列の特徴： 他の特徴：Ｎ末端のピログルタミン酸残基 存在位置：１ 特徴を決定した方法：Ｅ 配列：

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、本発明のペプチド精製のスキームを示
す図面である。

【図２】図２の（ａ）は試料添加前、（ｂ）は化合物１
の６匹分に相当する量をチャンバーに加えた時の、
（ｃ），（ｄ）および（ｅ）は緩衝液で洗浄後のムラサ
キイガイ足糸前牽引筋の強収縮を経時的に記録した図面
である。化合物１は強収縮を増強し、その効果は洗浄後
も暫く持続する。

【図３】図３の（ａ）は試料添加前、（ｂ）は化合物２
の６匹分に相当する量をチャンバーに加えた時の、
（ｃ）は緩衝液で洗浄後のムラサキイガイ足糸前牽引筋
の強収縮を経時的に記録した図面である。化合物２は強
収縮を抑制する。

【図４】図４の（ａ）は試料添加前、（ｂ）は化合物３
の６匹分に相当する量をチャンバーに加えた時の、
（ｃ），（ｄ）および（ｅ）は緩衝液で洗浄後のムラサ
キイガイ足糸前牽引筋の強収縮を経時的に記録した図面
である。化合物４は強収縮を抑制し、その効果は洗浄後
も暫く持続する。

【図５】図５の（ａ）は試料添加前、（ｂ）は化合物４
の６匹分に相当する量をチャンバーに加えた時の、
（ｃ）は緩衝液で洗浄後のムラサキイガイ足糸前牽引筋
の強収縮を経時的に記録した図面である。化合物４は強
収縮を抑制する。

【図６】図６は同様に、化合物５の６匹分に相当する量
をチャンバーに加えた時の図面である。化合物５は強収
縮を抑制する。

【図７】図７は同様に、化合物６の６匹分に相当する量
をチャンバーに加えた時の図面である。化合物６は強収
縮を抑制する。

【図８】図８は同様に、化合物７の６匹分に相当する量
をチャンバーに加えた時の図面である。化合物７は強収
縮を抑制する。

【図９】図３は同様に、化合物８の６匹分に相当する量
をチャンバーに加えた時の図面である。化合物８は強収
縮を抑制する。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】次のアミノ酸配列式（１）： ｐ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
   −Ｔｙｒ−ＮＨ_２ （１） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記し、ｐ−Ｇｌｕはピログルタミ
   ン酸残基、ＮＨ_２はＣ末端がアミド化されていることを
   示す。）で表される新規ペプチド。
2. 【請求項２】次のアミノ酸配列式（２）： Ｈ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨ
   （２） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記する。）で表される新規ペプチ
   ド。
3. 【請求項３】次のアミノ酸配列式（３）： Ｈ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ
   −Ｐｒｏ−ＯＨ（３） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記する。）で表される新規ペプチ
   ド。
4. 【請求項４】次のアミノ酸配列式（４）： Ｈ−Ｐｈｅ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
   −ＯＨ（４） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記する。）で表される新規ペプチ
   ド。
5. 【請求項５】次のアミノ酸配列式（５）： Ｈ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−Ｓｅｒ
   −Ａｓｎ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−
   Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｕ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｎ
   Ｈ_２ （５） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記し、ＮＨ_２はＣ末端がアミド化
   されていることを示す。）で表される新規ペプチド。
6. 【請求項６】次のアミノ酸配列式（６）： Ｈ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
   −Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−
   Ｔｒｐ−ＯＨ（６） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記する。）で表される新規ペプチ
   ド。
7. 【請求項７】次のアミノ酸配列式（７）： Ｈ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｌｅｕ
   −Ａｒｇ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｉｌｅ−
   Ｔｙｒ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇ
   ｌｕ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−ＮＨ_２ （７） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記し、ＮＨ_２はＣ末端がアミド化
   されていることを示す。）で表される新規ペプチド。
8. 【請求項８】次のアミノ酸配列式（８）： ｐ−Ｇｌｕ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ
   −Ｐｈｅ−ＯＨ（８） （式中、アミノ酸残基はＩＵＰＡＣおよびＩＵＢの定め
   る３文字表記により表記し、ｐ−Ｇｌｕはピログルタミ
   ン酸残基を示す。）で表される新規ペプチド。