JPH06100440A - グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤 - Google Patents
グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤Info
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- JPH06100440A JPH06100440A JP28135991A JP28135991A JPH06100440A JP H06100440 A JPH06100440 A JP H06100440A JP 28135991 A JP28135991 A JP 28135991A JP 28135991 A JP28135991 A JP 28135991A JP H06100440 A JPH06100440 A JP H06100440A
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- alkylresorcinol
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- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【構成】 アルキル基の炭素数が１４〜１６の範囲にあ
る５−アルキルレゾルシノールを有効成分として含有す
る。 【効果】 ５−アルキルレゾルシノールのグリセロリン
酸脱水素酵素阻害活性の強さは、既存のもので阻害活性
が最も強いと思われるステアリン酸と比べ、少なくとも
１０倍以上強く、肥満防止剤として有望である。
る５−アルキルレゾルシノールを有効成分として含有す
る。 【効果】 ５−アルキルレゾルシノールのグリセロリン
酸脱水素酵素阻害活性の強さは、既存のもので阻害活性
が最も強いと思われるステアリン酸と比べ、少なくとも
１０倍以上強く、肥満防止剤として有望である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、５−アルキルレゾルシ
ノール（１、３−ジヒドロキシ−５−アルキルベンゼ
ン）を有効成分とするグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤
に関する。
ノール（１、３−ジヒドロキシ−５−アルキルベンゼ
ン）を有効成分とするグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤
に関する。
【０００２】
【従来の技術】近年、食生活の欧米化が進むとともに肥
満という問題が大きくクローズアップされるようになっ
てきた。それとともに、肥満になった人々のためにいろ
いろな痩身法が次々と考え出されてきたが、その殆どは
実用化されずに消えていった。その理由は、肥満の主な
原因である中性脂肪は一旦蓄積されると容易には減少し
ないという性質を有するため、該脂肪を減少させるため
には並々ならぬ努力が必要となるからであった。このよ
うな性質が分かってくると、今度は中性脂肪の蓄積され
る主な原因がカロリーの摂取過多にあるとして、カロリ
ーの摂取量を減らすことにより肥満を防止しようとする
動きが出てきた。いわゆるダイエットと呼ばれるもので
あるが、ダイエットをするためにカロリーの摂取量を極
端に減らすことによって起きる拒食症という問題が新た
に発生してきた。
満という問題が大きくクローズアップされるようになっ
てきた。それとともに、肥満になった人々のためにいろ
いろな痩身法が次々と考え出されてきたが、その殆どは
実用化されずに消えていった。その理由は、肥満の主な
原因である中性脂肪は一旦蓄積されると容易には減少し
ないという性質を有するため、該脂肪を減少させるため
には並々ならぬ努力が必要となるからであった。このよ
うな性質が分かってくると、今度は中性脂肪の蓄積され
る主な原因がカロリーの摂取過多にあるとして、カロリ
ーの摂取量を減らすことにより肥満を防止しようとする
動きが出てきた。いわゆるダイエットと呼ばれるもので
あるが、ダイエットをするためにカロリーの摂取量を極
端に減らすことによって起きる拒食症という問題が新た
に発生してきた。
【０００３】そこで、カロリーの摂取量に神経質になる
ことなく肥満を防止できるような物質の開発が望まれて
きた。
ことなく肥満を防止できるような物質の開発が望まれて
きた。
【０００４】一方、アルキル基の炭素数が１４〜１６の
５−アルキルレゾルシノール（以下、単に５−アルキル
レゾルシノールという）は、The Journal of Antibioti
cs，870-875 (1971 年12月) や特開昭４７−３１９５１
号公報などに開示されているが、天然物としてはカシュ
ウナッツ汁（油）や小麦のもみがらから単離されたもの
が知られている。しかしながら、このアルキルレゾルシ
ノールの抗酸化性物質や抗菌性物質としての作用につい
ては知られているが、グリセロリン酸脱水素酵素に対し
て阻害活性があることについては一切言及されていな
い。
５−アルキルレゾルシノール（以下、単に５−アルキル
レゾルシノールという）は、The Journal of Antibioti
cs，870-875 (1971 年12月) や特開昭４７−３１９５１
号公報などに開示されているが、天然物としてはカシュ
ウナッツ汁（油）や小麦のもみがらから単離されたもの
が知られている。しかしながら、このアルキルレゾルシ
ノールの抗酸化性物質や抗菌性物質としての作用につい
ては知られているが、グリセロリン酸脱水素酵素に対し
て阻害活性があることについては一切言及されていな
い。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、肥満防止剤
として利用可能な、グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を
提供することを目的とする。
として利用可能な、グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤を
提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、動物細胞
内におけるブトウ糖から中性脂肪であるトリグリセライ
ド生成までの代謝過程のうち、前段階で作用するグリセ
ロリン酸脱水素酵素に対して阻害活性を有する物質を鋭
意探究したところ、５−アルキルレゾルシノールにその
ような活性があることを見出し、本発明を完成するに至
った。
内におけるブトウ糖から中性脂肪であるトリグリセライ
ド生成までの代謝過程のうち、前段階で作用するグリセ
ロリン酸脱水素酵素に対して阻害活性を有する物質を鋭
意探究したところ、５−アルキルレゾルシノールにその
ような活性があることを見出し、本発明を完成するに至
った。
【０００７】すなわち、本発明は、アルキル基の炭素数
が１４〜１６の範囲にある５−アルキルレゾルシノール
を有効成分として含有することを特徴とするグリセロリ
ン酸脱水素酵素阻害剤を提供する。
が１４〜１６の範囲にある５−アルキルレゾルシノール
を有効成分として含有することを特徴とするグリセロリ
ン酸脱水素酵素阻害剤を提供する。
【０００８】本発明で使用するアルキル基の炭素数が１
４〜１６の範囲にある５−アルキルレゾルシノールは、
前記The Journal of Antibiotics，870-875 (1971 年12
月)や特開昭４７−３１９５１号公報などに開示の方法
により合成することができるが、放線菌の培養物から抽
出したものを用いるのが好ましい。
４〜１６の範囲にある５−アルキルレゾルシノールは、
前記The Journal of Antibiotics，870-875 (1971 年12
月)や特開昭４７−３１９５１号公報などに開示の方法
により合成することができるが、放線菌の培養物から抽
出したものを用いるのが好ましい。
【０００９】このような放線菌としては、ストレプトマ
イセス シアネウス（Streptomycescyaneus）を用いる
のが好ましい。より具体的には、ストレプトマイセス
シアネウス（Streptomyces cyaneus）2299-SV1株（（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−３６０７）である。この菌を、１％可溶
性澱粉，１％ポリペプトン，１％廃糖蜜，１％ Beefex
tract ，ｐＨ７．２なる液体培地、及び、２％グリセリ
ン，１％廃糖蜜，０．５％カゼイン，０．１％ポリペプ
トン，０．４％炭酸カルシウム，ｐＨ７．０なる液体培
地中で、それぞれ、２７°Ｃで培養し、得られた培養液
は遠心分離などにより菌体など固形物を除いた後、目的
物質を適当な溶媒で抽出する。得られた活性物質はその
ままでも使用できるが、さらにカラムクロマトグラフィ
ーなどで精製、単離して使用する等は任意である。
イセス シアネウス（Streptomycescyaneus）を用いる
のが好ましい。より具体的には、ストレプトマイセス
シアネウス（Streptomyces cyaneus）2299-SV1株（（Ｆ
ＥＲＭ ＢＰ−３６０７）である。この菌を、１％可溶
性澱粉，１％ポリペプトン，１％廃糖蜜，１％ Beefex
tract ，ｐＨ７．２なる液体培地、及び、２％グリセリ
ン，１％廃糖蜜，０．５％カゼイン，０．１％ポリペプ
トン，０．４％炭酸カルシウム，ｐＨ７．０なる液体培
地中で、それぞれ、２７°Ｃで培養し、得られた培養液
は遠心分離などにより菌体など固形物を除いた後、目的
物質を適当な溶媒で抽出する。得られた活性物質はその
ままでも使用できるが、さらにカラムクロマトグラフィ
ーなどで精製、単離して使用する等は任意である。
【００１０】上記菌株２２９９−ＳＶ１株は長野県安曇
村梓川の川端で採取した土壌試料より分離された放線菌
である。本菌株の“特徴ずけ”は“特許庁産業別審査基
準”記載の方法によった。本菌株の基生菌糸は分断しな
い。気菌糸は長い主軸を形成し、不規則に分岐し、その
先端に、コンパクトな螺旋状胞子鎖を形成する。胞子は
非運動性で、円柱形から長楕円形を呈し、幅0.４〜0.５
μｍ、長さ0.８〜1.２μｍで、胞子表面は平滑である。
胞子鎖は固く巻き擬似胞子のう様の形態が観察された。
菌核などの特殊形態は観察されない。細胞を壁化学型は
Ｉ型である。
村梓川の川端で採取した土壌試料より分離された放線菌
である。本菌株の“特徴ずけ”は“特許庁産業別審査基
準”記載の方法によった。本菌株の基生菌糸は分断しな
い。気菌糸は長い主軸を形成し、不規則に分岐し、その
先端に、コンパクトな螺旋状胞子鎖を形成する。胞子は
非運動性で、円柱形から長楕円形を呈し、幅0.４〜0.５
μｍ、長さ0.８〜1.２μｍで、胞子表面は平滑である。
胞子鎖は固く巻き擬似胞子のう様の形態が観察された。
菌核などの特殊形態は観察されない。細胞を壁化学型は
Ｉ型である。
【００１１】培養性状を表−１に示す。集落表面の菌叢
色は灰色系列で裏面色は不鮮明色で、pH非感受性、拡散
性色素はチロシン寒天でのみわずかに白茶色が認められ
た。生理的性状を、表−２に示す。本菌株は、中温性で
炭素源の同化能は診断糖を全て利用した。本菌株の形態
的性状と細胞壁化学型から本菌株はストレプトマイセス
(Streptomyces 以後S.と略す）属に位置する。上述の諸
性状を基に既知のＳ属の種について検索し、最も近縁種
としてS.コリナス(S.collinus)を選択した。最近出版さ
れた“バージェイ氏最近系統分類学便覧４巻”（Berge
y's Manual ofSystematic Bacteriology Vol.4 )のＳ属
に関するウイリアムス等（Williams,et, al. ) の記載
によれば、S.コリナスはS.シアネウス（S.cyaneus)のシ
ノニム（異名）となっている。従って、本菌株２２９９
−ＳＶ１はS.シアネウスに含まれる−菌株と同定し、ス
トレプトマイセス．シアネウス(Streptomyces cyaneus)
２２９９−ＳＶ１株と称する。
色は灰色系列で裏面色は不鮮明色で、pH非感受性、拡散
性色素はチロシン寒天でのみわずかに白茶色が認められ
た。生理的性状を、表−２に示す。本菌株は、中温性で
炭素源の同化能は診断糖を全て利用した。本菌株の形態
的性状と細胞壁化学型から本菌株はストレプトマイセス
(Streptomyces 以後S.と略す）属に位置する。上述の諸
性状を基に既知のＳ属の種について検索し、最も近縁種
としてS.コリナス(S.collinus)を選択した。最近出版さ
れた“バージェイ氏最近系統分類学便覧４巻”（Berge
y's Manual ofSystematic Bacteriology Vol.4 )のＳ属
に関するウイリアムス等（Williams,et, al. ) の記載
によれば、S.コリナスはS.シアネウス（S.cyaneus)のシ
ノニム（異名）となっている。従って、本菌株２２９９
−ＳＶ１はS.シアネウスに含まれる−菌株と同定し、ス
トレプトマイセス．シアネウス(Streptomyces cyaneus)
２２９９−ＳＶ１株と称する。
【００１２】表−１ 培養性状 培 地 集落表面の菌叢色 集落の裏面色 拡散性色素 シュクロース・ 着生せず 淡黄色（2ca) なし 硝酸塩寒天 グルコース・アス 灰色系列 淡黄色（2ca)から なし パラギン寒天 明茶味灰色（3gc) グリセリン・アス 灰色系列 明茶味灰色（3gc) なし パラギン寒天 無機塩・スターチ 灰色系列 淡黄茶色（3ie)から なし 寒天 灰味黄茶色（3lg) チロシン寒天 着生せず 明茶味灰色 白茶色 （3ec) （3cb) 栄養寒天 着生せず 明茶味灰色 なし （3ec) イースト・麦芽 灰色系列 茶色（5lg) なし 寒天 オートミール 灰色系列 明茶味灰色（3gc) なし寒天 から淡黄茶色（3ie) ・（ ）内はカラー・ハーモニー・マニュアル（コンテナー・コーポレーション ・オブ・アメリカ、１９５０）の色標コード。
【００１３】表−２ 生理的性状 生育温度範囲 ２０〜４５℃ 最適温度 ２０〜３７℃ メラニン様色素 チロシン寒天 ＋ ペプトン・イースト鉄寒天 ＋ トリプトン・イースト・ブロス ＋ スターチの加水分解 ＋ ゼラチンの液化 ＋ 脱脂粉乳のペプトン化 ＋ 脱脂粉乳の凝固 − 硝酸塩の還元 ＋ 炭素源の同化 Ｄ−グルコース ＋ Ｌ−アラビノース ＋ Ｄ−キシロース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ シュクロース ＋ Ｌ−ラムノース ＋ ラフィノース ＋ ｉ−イノシトール ＋ Ｄ−マンニット ＋
【００１４】本発明におけるグリセロリン酸脱水素酵素
阻害活性の測定は、The Journal ofBiological Chemist
ry 254, 273-275, 1979に記載されているWise and Gree
nの方法に準じて、以下のように行った。２．５ｍＭの
ＥＤＴＡを含んだ１００ｍＭのトリエタノール／ＨＣｌ
バッファー（ｐＨ７．５）２．２５ｍｌを１ｃｍ角のセ
ルに入れ、これに、６ｍＭのジハイドロキシアセトンリ
ン酸０．３ｍｌ，３ｍＭのβ−メルカプトエタノール
０．１ｍｌ及び３．６ｍＭのＮＡＤＨ０．１ｍｌを入
れ、さらに、活性物質（被試験物質）を０．５〜３．０
μｇ／ｍｌの濃度で含有するメタノール溶液０．１ｍｌ
を添加し、よく混合する。これに、２ｕｎｉｔ／ｍｌの
グリセロリン酸脱水素酵素溶液０．１５ｍｌを加え、混
合後、ただちに３４０ｎｍの吸光度をタイムスキャンす
る。このときの３４０ｎｍの吸光度の減少初速度を酵素
活性として、活性物質を含有しないメタノール溶液を添
加した場合の酵素活性を１００としたときの、活性物質
を添加した場合の酵素活性を求める。
阻害活性の測定は、The Journal ofBiological Chemist
ry 254, 273-275, 1979に記載されているWise and Gree
nの方法に準じて、以下のように行った。２．５ｍＭの
ＥＤＴＡを含んだ１００ｍＭのトリエタノール／ＨＣｌ
バッファー（ｐＨ７．５）２．２５ｍｌを１ｃｍ角のセ
ルに入れ、これに、６ｍＭのジハイドロキシアセトンリ
ン酸０．３ｍｌ，３ｍＭのβ−メルカプトエタノール
０．１ｍｌ及び３．６ｍＭのＮＡＤＨ０．１ｍｌを入
れ、さらに、活性物質（被試験物質）を０．５〜３．０
μｇ／ｍｌの濃度で含有するメタノール溶液０．１ｍｌ
を添加し、よく混合する。これに、２ｕｎｉｔ／ｍｌの
グリセロリン酸脱水素酵素溶液０．１５ｍｌを加え、混
合後、ただちに３４０ｎｍの吸光度をタイムスキャンす
る。このときの３４０ｎｍの吸光度の減少初速度を酵素
活性として、活性物質を含有しないメタノール溶液を添
加した場合の酵素活性を１００としたときの、活性物質
を添加した場合の酵素活性を求める。
【００１５】阻害率（％）＝１００−（サンプルの活性
／コントロールの活性）×１００ 本発明における脂肪蓄積防止効果の確認は、Comp. Bioc
hem. Physiol. 96A, 323-326, 1990に記載されているKa
wadaらの方法に準じて、以下のように行った。
／コントロールの活性）×１００ 本発明における脂肪蓄積防止効果の確認は、Comp. Bioc
hem. Physiol. 96A, 323-326, 1990に記載されているKa
wadaらの方法に準じて、以下のように行った。
【００１６】２４穴のマルチディッシュに、牛胎児血清
１０％を含有するダルベッコ変法イーグル培地（日水製
薬社製）０．５ｍｌを張り込み、これにマウス繊維芽細
胞３Ｔ３−Ｌ１細胞を１０００個／１穴の割合で接種し
て、３７°Ｃ，５％ＣＯ2,ｐＨ７．２の条件で６日間培
養する。次いで、培養後の細胞を、上記培地に１〜３．
７μｇ／ｍｌの活性物質を添加した培地に移し、さら
に、前記培地に０．２５ｍＭのデキサメサゾン，０．５
ｍＭの１−メチル−３−イソブチルキサンチン及び１０
μｇ／ｍｌのインシュリンを添加したもの０．０５ｍｌ
を加えて、７日間３７°Ｃ，５％ＣＯ2,ｐＨ７．２の条
件で培養する。培養後、培地を除去し、燐酸バッファー
−生理食塩水にて細胞を洗浄後、１ｍＭのＥＤＴＡを含
む５０ｍＭのトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．５）
を０．３ｍｌ添加して細胞を掻き取り、この懸濁液を超
音波処理して細胞を破壊する。得られた液中のトリグリ
セライド量を酵素法（トリグリセライド Ｇ−テスト
ワコーキット（和光純薬社製）にて測定する。
１０％を含有するダルベッコ変法イーグル培地（日水製
薬社製）０．５ｍｌを張り込み、これにマウス繊維芽細
胞３Ｔ３−Ｌ１細胞を１０００個／１穴の割合で接種し
て、３７°Ｃ，５％ＣＯ2,ｐＨ７．２の条件で６日間培
養する。次いで、培養後の細胞を、上記培地に１〜３．
７μｇ／ｍｌの活性物質を添加した培地に移し、さら
に、前記培地に０．２５ｍＭのデキサメサゾン，０．５
ｍＭの１−メチル−３−イソブチルキサンチン及び１０
μｇ／ｍｌのインシュリンを添加したもの０．０５ｍｌ
を加えて、７日間３７°Ｃ，５％ＣＯ2,ｐＨ７．２の条
件で培養する。培養後、培地を除去し、燐酸バッファー
−生理食塩水にて細胞を洗浄後、１ｍＭのＥＤＴＡを含
む５０ｍＭのトリス−ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．５）
を０．３ｍｌ添加して細胞を掻き取り、この懸濁液を超
音波処理して細胞を破壊する。得られた液中のトリグリ
セライド量を酵素法（トリグリセライド Ｇ−テスト
ワコーキット（和光純薬社製）にて測定する。
【００１７】本発明のグリセロリン酸脱水素酵素阻害剤
は、５−アルキルレゾルシノール自体又は生理的に許容
される担体及び／又は希釈剤などと混合した組成物とし
て、例えば散剤、顆粒、錠剤、カプセル剤、ドライシロ
ップ、注射剤などの形態で経口的または非経口的に投与
することができる。例えば、経口投与する場合、体重１
kg当たり１０〜１００mg、非経口投与の場合体重１kg当
たり２〜２０mgとするのがよい。
は、５−アルキルレゾルシノール自体又は生理的に許容
される担体及び／又は希釈剤などと混合した組成物とし
て、例えば散剤、顆粒、錠剤、カプセル剤、ドライシロ
ップ、注射剤などの形態で経口的または非経口的に投与
することができる。例えば、経口投与する場合、体重１
kg当たり１０〜１００mg、非経口投与の場合体重１kg当
たり２〜２０mgとするのがよい。
【００１８】
【発明の効果】本発明の活性物質のグリセロリン酸脱水
素酵素阻害活性の強さは、既存のもので阻害活性が最も
強いと思われるステアリン酸と比べ、少なくとも１０倍
以上強く、肥満防止剤として有望である。次に、実施例
により本発明を説明する。
素酵素阻害活性の強さは、既存のもので阻害活性が最も
強いと思われるステアリン酸と比べ、少なくとも１０倍
以上強く、肥満防止剤として有望である。次に、実施例
により本発明を説明する。
【００１９】
【実施例１】 （活性物質の製造）大型試験管に、培地（１％可溶性澱
粉，１％ポリペプトン，１％廃糖蜜，１％Beef extrac
t，ｐＨ７．２）１５ｍｌを入れ、これに放線菌ストレ
プトマイセスシアネウス（Streptomyces cyaneus）2299
-SV1株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６０７）を１白金耳接種し
て、２７°Ｃで７２時間振盪培養した。次いで、この培
養液１ｍｌを培地（２％グリセリン，１％廃糖蜜，０．
５％カゼイン，０．１％ポリペプトン，０．４％炭酸カ
ルシウム，ｐＨ７．０）１００ｍｌを入れた容量５００
ｍｌの三角フラスコに移し、さらに２７°Ｃで４日間振
盪培養した。
粉，１％ポリペプトン，１％廃糖蜜，１％Beef extrac
t，ｐＨ７．２）１５ｍｌを入れ、これに放線菌ストレ
プトマイセスシアネウス（Streptomyces cyaneus）2299
-SV1株（ＦＥＲＭ ＢＰ−３６０７）を１白金耳接種し
て、２７°Ｃで７２時間振盪培養した。次いで、この培
養液１ｍｌを培地（２％グリセリン，１％廃糖蜜，０．
５％カゼイン，０．１％ポリペプトン，０．４％炭酸カ
ルシウム，ｐＨ７．０）１００ｍｌを入れた容量５００
ｍｌの三角フラスコに移し、さらに２７°Ｃで４日間振
盪培養した。
【００２０】培養終了後、培養液約１０ｌから遠心分離
にて菌体など固形物を除いた培養液８．２ｌを得、これ
に酢酸エチルを加えて培養液中の生産物を抽出した。次
に、酢酸エチルを分取し、減圧下で酢酸エチルを留去
し、粗抽出物８３０ｍｇを得た。次いで、該粗抽出物を
シリカゲル（ワコーゲルＣ−３００；和光純薬社製）を
担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロ
ロホルム：メタノール＝２００：１）及び、トヨパール
ＨＷ−４０（東ソー社製）を用いたカラムクロマトグ
ラフィー（展開溶媒；メタノール）に付し、白色粉末３
０mgを得た。
にて菌体など固形物を除いた培養液８．２ｌを得、これ
に酢酸エチルを加えて培養液中の生産物を抽出した。次
に、酢酸エチルを分取し、減圧下で酢酸エチルを留去
し、粗抽出物８３０ｍｇを得た。次いで、該粗抽出物を
シリカゲル（ワコーゲルＣ−３００；和光純薬社製）を
担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロ
ロホルム：メタノール＝２００：１）及び、トヨパール
ＨＷ−４０（東ソー社製）を用いたカラムクロマトグ
ラフィー（展開溶媒；メタノール）に付し、白色粉末３
０mgを得た。
【００２１】この物質のＧＣ／ＭＳ分析結果により、約
７成分の混合物であることがわかった（図１）。これら
の物質のＥＩ−ＭＳスペクトルは、いずれもベースピー
クがｍ／ｚ１２４であり、類縁体であることが示唆され
た。さらに、ＯＤＳカラムを用いた分取液体クロマトグ
ラフィー（展開溶媒；９５％メタノール）に付して、そ
れぞれの物質を得た。
７成分の混合物であることがわかった（図１）。これら
の物質のＥＩ−ＭＳスペクトルは、いずれもベースピー
クがｍ／ｚ１２４であり、類縁体であることが示唆され
た。さらに、ＯＤＳカラムを用いた分取液体クロマトグ
ラフィー（展開溶媒；９５％メタノール）に付して、そ
れぞれの物質を得た。
【００２２】このうち主成分について1Ｈ−ＮＭＲ，13
Ｃ−ＮＭＲ，ＩＲ，及びＦＡＢ−ＭＳの各スペクトルか
ら、５−ｎ−ペンタデシルレゾルシノールであることを
確認した。 測定結果：1Ｈ−ＮＭＲ 溶媒；重クロロホルム，図
２参照13 Ｃ−ＮＭＲ 溶媒；重クロロホルム，図３参照 ＩＲ フィルム法，図４参照 高分解能ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３２１．２８７０（Ｍ
＋Ｈ） ３２１．２８４９（ｍ＋Ｈ） その他の物質についても、ＥＩ−ＭＳによる分子イオン
ピークや、1Ｈ−ＮＭＲ分析によるアルキル側鎖末端メ
チル（δ０．８７）のカップリングより側鎖の鎖長及び
末端の形式が判明し、これらの物質は炭素数１４〜１６
のアルキル基を有する５−アルキルレゾルシノール類で
あることを確認した。結果をまとめて表−３に示す。
Ｃ−ＮＭＲ，ＩＲ，及びＦＡＢ−ＭＳの各スペクトルか
ら、５−ｎ−ペンタデシルレゾルシノールであることを
確認した。 測定結果：1Ｈ−ＮＭＲ 溶媒；重クロロホルム，図
２参照13 Ｃ−ＮＭＲ 溶媒；重クロロホルム，図３参照 ＩＲ フィルム法，図４参照 高分解能ＦＡＢ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝３２１．２８７０（Ｍ
＋Ｈ） ３２１．２８４９（ｍ＋Ｈ） その他の物質についても、ＥＩ−ＭＳによる分子イオン
ピークや、1Ｈ−ＮＭＲ分析によるアルキル側鎖末端メ
チル（δ０．８７）のカップリングより側鎖の鎖長及び
末端の形式が判明し、これらの物質は炭素数１４〜１６
のアルキル基を有する５−アルキルレゾルシノール類で
あることを確認した。結果をまとめて表−３に示す。
【００２３】 表−３ No. GC/MS リテ EI-MS 分析(m/z) 1H−NMR 化合物名 ンションタ ベース 分子イオン カップ イム（分） ピーク ピーク リング １ ２0.８ １２４ ３０６ ｄ ５−イソテトラデシル レゾルシノール ２ ２1.１ １２４ ３０６ ｔ ５−ｎ−テトラデシル レゾルシノール ３ ２1.６ １２４ ３２０ ｄ ５−イソペンタデシル レゾルシノール ４ ２1.８ １２４ ３２０ ｔ ５−ｎ−ペンタデシル レゾルシノール ５ ２2.３ １２４ ３３４ ｄ ５−イソヘキサデシル レゾルシノール ６ ２2.４ １２４ ３３４ ７ ２2.６ １２４ ３３４ ｔ ５−ｎ−ヘキサデシル レゾルシノール 表中のｄ、ｔは、 1Ｈ−ＮＭＲにおける末端メチル（δ
0.８７）のカップリングにおけるｄ；ダブレット
ｔ；トリプレットである。
0.８７）のカップリングにおけるｄ；ダブレット
ｔ；トリプレットである。
【００２４】
【実施例２】 （阻害活性）２．５ｍＭのＥＤＴＡを含んだ１００ｍＭ
のトリエタノール／ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．５）
２．２５ｍｌを１ｃｍ角のセルに入れ、これに、６ｍＭ
のジハイドロキシアセトンリン酸０．３ｍｌ，３ｍＭの
β−メルカプトエタノール０．１ｍｌ及び３．６ｍＭの
ＮＡＤＨ０．１ｍｌを入れ、さらに、活性成分を単独あ
るいは混合したものを０．５〜３．０μｇ／ｍｌの濃度
で含有するメタノール溶液０．１ｍｌを添加し、よく混
合した。これに、２ｕｎｉｔ／ｍｌのグリセロリン酸脱
水素酵素溶液０．１５ｍｌを加え、混合後、ただちに３
４０ｎｍの吸光度をタイムスキャンした。
のトリエタノール／ＨＣｌバッファー（ｐＨ７．５）
２．２５ｍｌを１ｃｍ角のセルに入れ、これに、６ｍＭ
のジハイドロキシアセトンリン酸０．３ｍｌ，３ｍＭの
β−メルカプトエタノール０．１ｍｌ及び３．６ｍＭの
ＮＡＤＨ０．１ｍｌを入れ、さらに、活性成分を単独あ
るいは混合したものを０．５〜３．０μｇ／ｍｌの濃度
で含有するメタノール溶液０．１ｍｌを添加し、よく混
合した。これに、２ｕｎｉｔ／ｍｌのグリセロリン酸脱
水素酵素溶液０．１５ｍｌを加え、混合後、ただちに３
４０ｎｍの吸光度をタイムスキャンした。
【００２５】３４０ｎｍの吸光度の減少初速度を酵素活
性として、活性成分を含まないメタノール溶液を添加し
た場合の酵素活性に対する、該活性物質を添加した場合
の酵素活性と該活性物質の濃度との関係を示したものが
図５である。
性として、活性成分を含まないメタノール溶液を添加し
た場合の酵素活性に対する、該活性物質を添加した場合
の酵素活性と該活性物質の濃度との関係を示したものが
図５である。
【００２６】
【実施例３】 （動物細胞での脂肪蓄積防止）２４穴のマルチディッシ
ュに、牛胎児血清１０％を含有するダルベッコ変法イー
グル培地（日水製薬社製）０．５ｍｌを張り込み、これ
にマウス繊維芽細胞３Ｔ３−Ｌ１細胞を１０００個／１
穴の割合で接種して、３７°Ｃ，５％ＣＯ2,ｐＨ７．２
の条件で６日間培養した。次いで、培養後の細胞を、上
記培地に１〜３．７μｇ／ｍｌの活性物質を添加した培
地に移し、さらに、前記培地に０．２５ｍＭのデキサメ
サゾン，０．５ｍＭの１−メチル−３−イソブチルキサ
ンチン及び１０μｇ／ｍｌのインシュリンを添加したも
の０．０５ｍｌを加えて、７日間３７°Ｃ，５％ＣＯ2,
ｐＨ７．２の条件で培養した。培養後、培地を除去し、
燐酸バップァー生理食塩水にて細胞を洗浄後、１ｍＭの
ＥＤＴＡを含む５０ｍＭのトリス−ＨＣｌバッファー
（ｐＨ７．５）を０．３ｍｌ添加して細胞を掻き取り、
この懸濁液を超音波処理して細胞を破壊した。得られた
液中のトリグリセライド量を酵素法（トリグリセライド
Ｇ−テスト ワコーキット（和光純薬社製）にて測定
した。
ュに、牛胎児血清１０％を含有するダルベッコ変法イー
グル培地（日水製薬社製）０．５ｍｌを張り込み、これ
にマウス繊維芽細胞３Ｔ３−Ｌ１細胞を１０００個／１
穴の割合で接種して、３７°Ｃ，５％ＣＯ2,ｐＨ７．２
の条件で６日間培養した。次いで、培養後の細胞を、上
記培地に１〜３．７μｇ／ｍｌの活性物質を添加した培
地に移し、さらに、前記培地に０．２５ｍＭのデキサメ
サゾン，０．５ｍＭの１−メチル−３−イソブチルキサ
ンチン及び１０μｇ／ｍｌのインシュリンを添加したも
の０．０５ｍｌを加えて、７日間３７°Ｃ，５％ＣＯ2,
ｐＨ７．２の条件で培養した。培養後、培地を除去し、
燐酸バップァー生理食塩水にて細胞を洗浄後、１ｍＭの
ＥＤＴＡを含む５０ｍＭのトリス−ＨＣｌバッファー
（ｐＨ７．５）を０．３ｍｌ添加して細胞を掻き取り、
この懸濁液を超音波処理して細胞を破壊した。得られた
液中のトリグリセライド量を酵素法（トリグリセライド
Ｇ−テスト ワコーキット（和光純薬社製）にて測定
した。
【００２７】図６は、マウス繊維芽細胞３Ｔ３−Ｌ１細
胞における、活性成分の濃度とトリグリセライド蓄積量
の関係を示したものである。
胞における、活性成分の濃度とトリグリセライド蓄積量
の関係を示したものである。
【００２８】
【図１】活性成分である５−アルキルレゾルシノールの
ＧＣ／ＭＳ分析におけるトータルイオンクロマトグラム
である。
ＧＣ／ＭＳ分析におけるトータルイオンクロマトグラム
である。
【図２】重クロロホルムを溶媒とした５−ｎ−ペンタデ
シルレゾルシノールの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャート
を示した図である。
シルレゾルシノールの1Ｈ−ＮＭＲスペクトルチャート
を示した図である。
【図３】重クロロホルムを溶媒とした５−ｎ−ペンタデ
シルレゾルシノールの13Ｃ−ＮＭＲスペクトルチャート
を示した図である。
シルレゾルシノールの13Ｃ−ＮＭＲスペクトルチャート
を示した図である。
【図４】フィルム法で測定した５−ｎ−ペンタデシルレ
ゾルシノールのＩＲスペクトルチャートを示した図であ
る。
ゾルシノールのＩＲスペクトルチャートを示した図であ
る。
【図５】５−ｎ−ペンタデシルレゾルシノールと５−イ
ソペンタデシルレゾルシノールの濃度と、グリセロリン
酸脱水素酵素阻害率との関係を示した図である。
ソペンタデシルレゾルシノールの濃度と、グリセロリン
酸脱水素酵素阻害率との関係を示した図である。
【図６】マウス繊維芽細胞３Ｔ３−Ｌ１細胞における、
５−ｎ−ペンタデシルレゾルシノールと５−イソペンタ
デシルレゾルシノールの濃度と、トリグリセライド蓄積
量との関係を示した図である。
５−ｎ−ペンタデシルレゾルシノールと５−イソペンタ
デシルレゾルシノールの濃度と、トリグリセライド蓄積
量との関係を示した図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成５年９月１０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】図４
【補正方法】変更
【補正内容】
【図４】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者 柘植 信昭 大阪府東大阪市御厨栄町１丁目５番７号 ハウス食品工業株式会社内 (72)発明者 溝上 万喜子 大阪府東大阪市御厨栄町１丁目５番７号 ハウス食品工業株式会社内
Claims (1)
- 【請求項１】 アルキル基の炭素数が１４〜１６の範囲
にある５−アルキルレゾルシノールを有効成分として含
有することを特徴とするグリセロリン酸脱水素酵素阻害
剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28135991A JP2805260B2 (ja) | 1991-10-28 | 1991-10-28 | グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28135991A JP2805260B2 (ja) | 1991-10-28 | 1991-10-28 | グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06100440A true JPH06100440A (ja) | 1994-04-12 |
| JP2805260B2 JP2805260B2 (ja) | 1998-09-30 |
Family
ID=17638015
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28135991A Expired - Lifetime JP2805260B2 (ja) | 1991-10-28 | 1991-10-28 | グリセロリン酸脱水素酵素阻害剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2805260B2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006219467A (ja) * | 2005-02-10 | 2006-08-24 | Oriza Yuka Kk | 脂肪蓄積阻害剤 |
| JP2014139166A (ja) * | 2012-12-20 | 2014-07-31 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 耐糖能異常改善剤 |
| WO2015193962A1 (ja) * | 2014-06-17 | 2015-12-23 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 耐糖能異常改善剤 |
-
1991
- 1991-10-28 JP JP28135991A patent/JP2805260B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006219467A (ja) * | 2005-02-10 | 2006-08-24 | Oriza Yuka Kk | 脂肪蓄積阻害剤 |
| JP2014139166A (ja) * | 2012-12-20 | 2014-07-31 | National Institute Of Advanced Industrial & Technology | 耐糖能異常改善剤 |
| WO2015193962A1 (ja) * | 2014-06-17 | 2015-12-23 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 耐糖能異常改善剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2805260B2 (ja) | 1998-09-30 |
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