JPH05502227A

JPH05502227A - 前立腺炎および乾癬の治療におけるジベレリンの使用

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Publication number: JPH05502227A
Application number: JP3501393A
Authority: JP
Inventors: オーデン，ペル
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1989-12-12
Filing date: 1990-12-10
Publication date: 1993-04-22
Also published as: DE69026511D1; AU6913891A; DK627289D0; ATE136465T1; NO922136D0; CA2069002A1; EP0504254B1; AU648529B2; DE69026511T2; ES2087279T3; EP0504254A1; KR920703088A; NO922136L; WO1991008751A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】前立腺炎および乾癖の治療におけるジベレリンの使用発明の分野本発明は、前立腺の肥大および過形成腺腫を包含する前立腺炎および乾癖治療用の医薬組成物の製造におけるジベレリンとして知られている化合物の使用、ならびにジベレリンまたはその医薬的に許容し得る塩またはラクトンを投与することによりこれらのおよび他の疾患を治療する方法に関するものである。

発明の背景ジベレリンは、植物およびあるカビにおいて見出される化合物群である。ジベレリンは、植物生長調節剤（植物ホルモン）であって、極めて小量で植物の生長および分化を刺激する。約７５種のジベレリンが単離されそして文献に報告されている。

ジベレリンは、二重結合および８個の不斉炭素を含有する環系を有する弱酸でありそして四環式ジテルペノイド炭化水素エンド−カウル−１６−エンから合成することができる。

ジベレリンの約半数は、２０個の炭素原子を有しそしてこれらはＣＺａ−ジベレリンと称される。２０個の炭素原子数を有していない残りのジベレリンは、Ｃ１９−ジベレリンと称される。炭素原子の番号は、四環式ジテルペンに対して認められている規則［ＭｃＣｒｉｎｄｌｅおよび０ｖｅｒｔｏｎ。

八ｄｖａｎ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｗ、　１９６５．５．４７−１１．３３により行いそして本明細書中において使用した（式Ｉ参照）。系統的命名法は、“カララン”および“ジベレリン”に基づきそしてジベレリンはこれらの化合物に対するエナンチオマーであるので、Ｃ２Ｇ−ジベレリンはエントージベレランと称されそしてＣロージベレリンはエンド−２０−ノルジベレリンと称される。便宜のために、ジベレリンは普通、標準番号系（例えばジベレリンＡ、またはＧＡ、）により参照されそしてまた、この系を本明細書において使用する。

本発明に関連してジベレリンは上記の環構造を有する任意の化合物を包含するものである。

花粉がヒトに対する一般的な強化作用ならびに前立腺の慢性炎症に対する特異的作用を有しているということは一般的に認められている（Ｂｒ、　Ｊ、　Ｕｒｏｌ、　６４（１９８９）４９６〜４９９頁、６６（１９９０）３９３〜３９７頁、６６（１９９０）３９８〜４０４頁〕。

慢性前立腺炎に対する花粉製剤〔例えば、スエーデン製剤セルニルトン（Ｃｅｒｎｆｌ、ｔｏｎ）およびセルニトール（Ｃｅｒｎ−ｉｔｏｌ）　）の正の作用は科学的に証明されておりそしてこのような製剤は、ある国において医薬として登録されている。花粉は本来ジベレリンに富んでいるが、このようなジベレリンの存在が花粉の有益な作用と関係があるか否かについてはこれまで研究されていない。これらの花粉製剤は、乾燥した水−抽出液でありそしてジベレリンの含量はこの抽出液からの乾燥物質１ｇ当たり０〜１μ９である。

他の天然医薬カールビシン（Ｃｕｒｂｉｃｉｎ）はバンブキン種子の抽出液およびドワルフパーム（ｄｗａｒｆ　ｐａｌｍ）　０）果実から製造されそしてバンブキン種子がジベレリンに富んでいることが知られているが、この医薬の中のジベレリンの作用は研究されていない。

ジベレリンは従来、治療的処方および化粧処方に対して提案されている。例えばｔｏ−Ａ−８４１０１７１０、ＵＳ−Ａ−４、５０８，７０７，４，４２４，２３２および４．５１．８．６１４を参照されたい。

哺乳動物における抗炎症作用のような生物学的作用は科学文献　Ｅｘｐｅｒｉｎｔｉａ（１９７７）１５４４−４５頁；　Ｃ，Ｒ，Ｓ！ａｎｃｅｓＳｏｃ、Ｒｉｏｔ、Ｆｉｌｉａｌｅｓ　１６３　（１９６９）　１３０２−６頁；　Ｇｅｎ、Ｐｈｙ−ｓｉｏｌ、、Ｂｉｏｐｈｙｓ、６　（１９８７）　２７９−８３頁；　Ｎｅｏｐｌａｓｍａ　（２７，２１９８０）２０３−９頁；Ｒｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ、　Ｃｈｅｓ、Ｐａｔｈ、　Ｐｈａｒｍ、２８（１９８０）　１２３−３２頁およびＪ、＾ｍ、　Ｐｏｄ、　１ｌｅｄ、＾ｓｓ、　７９（１９８９）２４−２６頁に記載されている。去勢されたラットに投与されたジベレリン酸が前立腺重量の回復を与えるということは知られている（Ｃ，Ｒ，５６ａｎｃｅｓ　Ｓａｃ、　Ｂｉｏｌ、　Ｆｉｌｉａｌｅｓ１６３（１９６９）１３０２−６頁〕。

発明の詳細な説明ジベレリンは、これまで知られていなかったある重要な治療的性質を有しているということが見出された。本発明の着想によれば、ジベレリンは上述のような前立腺炎および（または）乾癖の治療に価値あるものである。

すなわち本発明の一見地は、前立腺炎（上述したような）および乾癖の治療用の医薬組成物の製造における活性ジベレリンの使用に関するものである。好ましい方法においては使用されるジベレリンは次の構造（式Ｉ）を有する化合物およびその医薬的に許容し得る塩およびラクトンである。

上記式において、１？’ハ、Ｈ＊　タハ基−０−Ｒ２’　（式中、Ｒ２ｏハＨテアル）テするかまたはＲ２またはＲＩＧと一緒になって単一結合（それぞれＣ，−Ｃ，またはＣ， −Ｃ，。二重結合）を形成し、Ｒ２は、Ｈまたは基−０−Ｒ２Ｉ〔式中、Ｒ２＋はＨ、グリコジルエーテル基（グリコシドエーテル）であるかまたはＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕であるかまたはＲ１またはＲ３と一緒になって単一結合（それぞれＣ，−Ｃ２またはＣ２−Ｃ，二重結合）を形成し、Ｒ３は、Ｈ１＝０または一〇−Ｒ”　［式中、Ｒ２４はＨまたはグリコツルエーテル基（グリコシドエーテル）である〕であるかまたはＲ２と一緒になって単一結合（Ｃｍ　−Ｃ３二重結合）を形成し、Ｒ４は、ＯＢであるかまたはＲ２３またはＲ２１と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成し、Ｒ５は、■］または一〇−Ｒ２２［式中、Ｒ２２はＨまたはグリコツルエステル（グリコノドエステル）である〕であり、Ｒ６は、ＨまたはＯＨであるかまたはＲ７と一緒になって単一結合（Ｃ＋□−ＣＩ３二重結合）を形成し、Ｒフは、Ｈ，＝Ｏまり１ｌ−０−Ｒ”　［：式中、Ｒ２５ハＨマタハグリコリルエーテル基（グリコシドエーテル）である］であるかまたはＲ６と一緒になって単一結合（Ｃ１ｌ−ＣＩ２二重結合）を形成し、Ｒ８は、Ｈまたは一〇−１？”　Ｃ式中、Ｒ２８はＨまたはグリコジルエーテル基（グリコシドエーテル）である〕であり、Ｒ９は、ＨまたはＯｔｌであり、）７１０は、ＨＳＣ■１、Ｃｌ１Ｏ１ｃｏｏｉ＋または該ＣＯＯ［Ｉのグリコジルエステル（グリコンドエステル）、ＣＨ，０−Ｒ”３または−０−Ｒ”　Ｃ式中、Ｒ２３はＨであるかまたはＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕であるかまたはＲ１と一緒になって単一結合（Ｃｌ　−Ｃｌ。二重結合）を形成し、Ｒ１＋は、０■であるかまたは存在せず、Ｒ１２は、ＣＨ３、ＣＩ’ ＋２０１’ｌ、Ｃ００Ｉ’ｌまたは該ＣＯＯ［Ｉのグリコジルエステル（グリコシドエステル）である。

点線は実線と一緒になって、点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子間に二重結合が位置し得ることを示す。但しＲ１１がＯＨ基である場合は二重結合は存在しない。

式Ｉは普通の原子価規則に従う。すなわち、炭素原子は常に４個の原子価を有し、酸素は２個の原子価を有しそして水素は１個の原子価を有す。その結果、（ｉ）Ｒ＋。

およびｌｉｔおよび（または）　Ｒ２およびＲ３が単一結合を形成する場合はＲ１およびＲ２は単一結合を形成することができなく、そして（Ｈ）　ＲＩＧおよびＲ２３が単一結合を形成する場合はＲＩＧおよびＲ１は単一結合を形成することができなくそして（ｉｆｉ）Ｒ’およびＲ２１が単一結合を形成する場合はＲ２およびＲ１またはＲ２およびＲ３は単一結合を形成することができない。

式Ｉにおいて３ｆｔＡの原子価のみを有する炭素原子において省略された原子価は水素に結合している（図示していない）。

他の見地においては、本発明は前立腺炎（上述したような）および乾癖を治療する方法に関するものであり、この方法は前立腺炎にかかった患者に、活性ジベレリン、好ましくは式■を有するジベレリンまたはその医薬的に許容し得る塩またはラクトンの有効量を投与することからなる。

これまで医薬として使用されたことのない式Ｉの化合物に関して、本発明はこれらの化合物を、特に前立腺炎（上述したような）および乾癖、火傷および放射線火傷の治療および創治癒の刺激に対する医薬として使用することに関するものである。

特にこの方法は非去勢個人の治療に関するものである。

本発明に使用される化合物は、前立腺炎および乾癖の症状を軽減するという意味において活性である（“作用の機構゛参照）。

発明の詳細な説明本発明に使用される好ましいジベレリンは６つの主なグループＡ−Ｆに分類することができる。

グループＡはγ−ラクトン１２−０［Ｔジベレリンからなる。

グループＡのジベレリンは、Ｒ７がＯＨでありそしてＲ１０が−０−Ｒ２３Ｃ式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する］である式Ｉの化合物からなる。グループＡのサブグループは、ＲＩおよびＲ２が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合を形成するグループである。他のサブグループは、Ｒ１がＨまたはＯｌｌであり、Ｒ２がＨまたはＯＨでありそしてＲ５がｇ−Ｒ２！であるグループである。他のサブグループにおいては、Ｒ１はＨまたはＯｉｌであり、Ｒ２はＨまたはＯＨであり、Ｒ３はＦ（、ＯＨまたは＝０であり、Ｒ５はＯＨであり、Ｒ８はＨであり、Ｒ８はＨであり、Ｒ９はＨであり、Ｒ１＋は存在しない、そして点線は実線と一緒になって、点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す。

グループＡの特に好ましい化合物は、ＧＡ３゜、ＧＡ３８、ＧＡ３３、ＧＡ４ｓ、ＧＡ４．、ＧＡ５．、ＧＡ６９、ＧＡ７゜およびＧＡ７１である。

グループＢはγ−ラクトン１３−０■ジベレリンからなる。

グループＢのジベレリンは、Ｒ８がＯｔｌでありそしてＲＩＯがＱｇ’ｌＳ　Ｃ式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合を形成する〕である式Ｉの化合物からなる。グループＢの１つのサブグループは、Ｒ１およびＲ２が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合を形成するグループである。他のサブグループにおいては、Ｒ１はＨまたは０［１でありそしてＲ５はＱ−Ｒ２２である。さらに他のサブグループにおいては、Ｒ１はＨまたはＯＲであり、Ｒ２はＨまたは基−Ｑ−１７２１（式中、ｇ２＋はＨである）であるかまたはＲ３と一緒になって単一結合（Ｃｚ　−Ｃｓ二重結合）を形成し、Ｒ３はＨまたはＯｌｌであり、Ｒ５は０■であり、Ｒ６はＨであり、Ｒ７はＨであり、Ｒ１１は存在しない、そして点線は実線と一緒になって、点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す。モしてＲ１およびＲ２は一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３は一緒になって単一結合を形成することができる。

グループＢの特に好ましい化合物は、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ６、ＧＡ６、ＧＡ８．６＾７３、ＧＡ２２、ＧＡ２０、ＧＡ５．、ＧＡ、７、ＧＡ、、、ＧＡ、。、ＧＡ、７およびＧＡ７２である。

グループＣは、γ−ラクトン３−オキソジベレリンまたは３−位にヒドロキシ基を有するかまたは有していないジベレリンからなる。グループＣのジベレリンは、ＲＩＧが一〇−Ｒ２３（式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合を形成する）である式Ｉの化合物からなる。グループＣの１つのサブグループにおいては、Ｒ１およびＲ２が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合（３−オキソジベレリンに対してでない）を形成する。他のサブグループにおいては、Ｒ１はＨまたはＯＨであり　Ｒ２はＨまたはＯｎでありそしてＲ５は０−Ｒ２２である。他のサブグループは、Ｒ３がＨまたは０■ であるグループである。さらに他のサブグループは、Ｒ１がＨまたは０■であり、Ｒ２がＨまたは０１１であり、Ｒ３がＨまたは０１１であり、Ｒ５がＯＨでありそしてＲ１２がＣ１１３であるグループである。

グループＣの特に好ましい化合物は、３−オキソジベレリン例えば３−オキソ− ＧＡ１および３−オキソ−ＧＡ３および３−位にヒドロキシ基を有しているかまたは有していないジベレリン、例えばＧＡ１、ＧＡ、、ＧＡ３、ＧＡ４、ＧＡ７、ＧＡ、、ＧＡ０、ＧＡ２．、ＧＡ３゜、ＧＡ８．、ＧＡ３１、ＧＡ、、、ＧＡ４□、ＧＡ４８、ＧＡ４１、ＧＡ、。、ＧＡ、４、ＧＡｓｓ、ＧＡ、６、ＧＡ、７、ＧＡ５１１．　ＧＡ、、およびＧＡ７＋である。

グループＤは、ジベレリンプレカーサーからなる。グループＤのジベレリンプレカーサーは、Ｒ７がＨまたはＯＲである式Ｉの化合物からなる。グループＤの１つのサブグループは、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨでありそしてＲ３がＨまたはＯｌｌであるグループである。このサブグループにおいて、Ｒ１はＨであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ３はＨまたはＯｌ’ｌであり、Ｒ５はＨまたはＯＩＴであり、Ｒ６はＨであり、Ｒ９はＨであり、ＲｌｏはＣ１１３、Ｃ［ｌＯまたはＣＨ，０− Ｒ”　（式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合を形成する）であり、Ｒ１１は存在せず、Ｒ１２はＣ１１，でありそして点線は実線と一緒になって、点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す。

グループＤの特に好ましい化合物は、ＧＡ１□−アルデヒド、ＧＡ、□、１２α −０ＨＧＡ、２−アルデヒド、１２α−０ＨＧＡ、、、１２α−ＯＨＧＡ、、、１２α−０１ｌ　ＧＡ１３．１２α−ＯＨＧＡｓｔ、ＧＡ１゜およびＧＡ６．である。

グループＥは種々な他のジベレリンからなる。グループＥのジベレリンは、ＲＩ＋が存在せずモしてＲ１２がＣｌ１３である式１の化合物からなる。グループＥの１つのサブグループにおいては　１１０および１が一緒になって単一結合を形成するか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって単一結合を形成するか、またはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合を形成する。他のサブグループにおいては、ＲＩはＨであり、Ｒ２はＨでありそしてＲ６はＨである。さらに他のサブグループは、Ｒ３がＨまたは０■でありそしてＲ７がＨまたは０■であるグループである。さらに他のサブグループは、Ｒ１がＨであり、Ｒ１がＨであり、Ｒ３がＨまたはＯＨであり、Ｒ５がＨまたは０■であり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨまた＋１０［１テアリ、Ｒ９がＨであり、ＲＩＧがＣＬ、Ｃｌｌ０−ＣＬＯ−Ｒ” または−〇−Ｒ”　（式中、Ｒ２３はＨであるかまたはＲ４と一緒になって単一結合を形成する）でありそして点線が実線と一緒になって点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示すグループである。

グループＥは、ＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ４、ＧＡ７、ＧＡ０、ＧＡ、□、ＧＡ、２ −アルデヒド、ＧＡ、４、ＧＡ、、−アルデヒド、ＧＡ８３、ＧＡ、、、ＧＡ１８−アルデヒド、ＧＡ、９、ＧＡ２０ｚ　ＧＡ２３、ＧＡ２４、ＧＡ、。、ＧＡ、、、ＧＡ３□、ＧＡ３．、ＧＡ４．およびＧＡ、３−アルデヒドのようなジベレリンからなる。

グループＦは、ジベレリンエーテルおよびエステルのようなジベレリン結合体（ｃａｎ　ｊｕｇａｔｅｓ）からなる。エーテルの例は、好ましいグリコシド結合がＯ−β−Ｄ−グリコンド結合でありその糖成分がグルコース、ガラクトース、アラビノースおよびキノロースからなる群から選択されたものであるグリコンドエステル（グリコンドエステル）である。一般に、エーテルジベレリン結合体は式■の他の位置においても形成されるけれども、式■のＲＺＩＳＲ２４、Ｒ２Ｓおよび（または）Ｒ２６位において形成される。

これらの位置の１個または２個以上の位置がエーテル基に変換される。特に好ましいジベレリンエーテルは、Ｇ＾＋−３−０−β−Ｄ−グルコシド、Ｇ＾＋−１３−０−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ３３−０−β−Ｄ−ゲルコンド、ＧＡ５１３ −０−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡＳ　−３，１３−ジーＯ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ、−３−０−β−Ｄ−ゲルコンド、ＧＡ７−３−０−β−Ｄ−グルコシド、Ｇ＾＋ｅ−Ｌ３−０−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ、。−１３−〇−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ、。−１２−〇−β−Ｄ−グルコシドおよびＧＡ５３〜１３−Ｏ −β−Ｄ−グルコソドである。好ましいエステルは、糖がα−Ｄ１α〜Ｌ１β− りまたはβ−上糖であるグリコンドエステル（グリコンドエステル）である。

一般に、エステルは式ＩのＲ２２位において形成される。

しかしながらエステルはカルボン酸官能基を有する位置、例えばＲ１１＋および（または）Ｒ１２基がｃｏｏｒ＋基であるときは、それぞれＲＩＯまたはＨＩ３の位置において形成することができる。エステルのアルコール部分は典型的には糖残基、特にグルコース、ガラクトース、アラビノースおよびキシロース（これらのすべてがグリコシジル基の形態にある）からなる群から選択された糖残基である。好ましい化合物は、Ｉ？２２の位置において形成されたエステル結合がβ −Ｄ−グルコシジル、α−Ｄ−グルコシジル、β−Ｄ−ガラクトシジル、α−Ｌ −アラビノシジル、およびβ−Ｄ−キジロンシルエステル結合からなる群から選択された化合物である。好ましいジベレリンエステルは、ＧＡ、−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ３−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ、−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ、−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ９−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ、。

−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ２゜−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ３゜−Ｄ −グルコシルエステルおよびＧＡ５３　ｐ−グルコシルエステル環構造（炭水化物部分は上述した位置においてンベレリン環構造に結合することができる）のようなα−およびβ−グリコシドエステルである。

多数の天然に存在するジベレリンが商業的に入手される。市販されていないジベレリンは、例えば商業的に入手できるジベレリンを出発物質として使用して化学合成によってまたはカビによる合成によって製造することができる。必要に応じて、合成は単離された化合物を所望のジベレリンに変換する工程を伴う。

ジベレリンプレカーサーおよびジベレリンの全合成は非常に複雑であり、時間がかかりそして非常に費用がかかる。普通、収率もまた非常に低い。それ故に可能な場合は、特定のジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびジベレリン結合体を合成するように具体的に企図されたカビ培養を使用する方法を選定する。もしこの方法が可能でない場合は、文献（Ｍｏｒｉ等、１９６９．　Ｔｅｔｒａｈｅｄｏｎ２５＋　１２９３；　Ｎａｇａｔａ　等、　１９７１．　Ｊ　、Ａｍ、　Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　９３：５７４０；　Ｃｏｒｅｙ等、１９７８．　Ｊ、＾（Ｃｈｅｗ、　Ｓｏｃ、　１００：　８０３４：蓋ａｎｄｅｒ、１９８２．　５ｅａｒｃｈ、１３：　１８８）に記載されている全合成の方法を使用する。ＧＡ、、３−オキソ−ＧＡ１．３−オキソ−ＧＡ、、ＧＡ４、ＧＡ５およびＧＡ、。

を製造する簡単な方法は、出発物質として商業的に入手できるＧＡ、を使用することである。ＧＡ３からこれらのジベレリンを製造する方法は、実施例４に記載されている。他の所望のジベレリンは、同様に適当なジベレリンを出発物質として使用することにより製造することができる。

カビによる合成化学的合成が可能であるけれども、ジベレリンを大規模で製造する最善の方法はおそらくカビによる合成である。この場合、場合によっては単離した化合物を他のジベレリン化合物に変換する。天然に存在するジベレリン−生産カビ（特に、Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ　ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ　；そしてまたＳｐｈａｃａｅｏｌｏｍａ属）は、主としてＧＡ３、ＧＡ４およびＧＡ７を生産する。他のジベレリンは突然変異されたカビ菌株により生産することができる。突然変異は、特にＵＶ処理により達成されるが、例えば化学処理のような他の突然変異法もまた使用することができる。突然変異菌株の同定は特にジベレリン抗体を使用する免疫技術により遂行される。

医薬組成物治療的に活性なジベレリンに関して使用される処方は、普通の非毒性の医薬的に許容し得る担体および賦形剤を含有する投与形態で経口的または非経口的に投与されるように企図される。

経口的に使用される処方は、錠剤、例えば起泡錠剤または咀哨錠剤、ロゼンジ、カプセル、粉末、顆粒、混合物、シロップ、溶液、懸濁液、乳濁液などを包含する。

固体の投与形態（例えば錠剤、カプセル、顆粒など）は、非毒性の医薬的に許容し得る担体および（または）賦形剤と混合された活性成分を含有することができる。

これらは結合剤、例えば殿粉、ゼラチン、アラビヤゴムまたはポリビニルピロリドン、充填剤、例えばラクトース、微小結晶性セルロース、馬鈴薯殿粉、とうもろこし殿粉、燐酸カルシウム、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、糖またはソルビトール、顆粒化剤または崩壊剤、例えば馬鈴薯殿粉またはアルギン酸、湿潤剤、例えば硫酸ラウリルナトリウムおよび滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ステアリン酸、ポリエチレングリコールまたはシリカを包含する。

経口的投与に使用される液状製剤（例えば混合物、ンロツブ、溶液、懸濁液、乳濁液など）は、適当な医薬的に許容し得る添加剤、例えば懸濁剤、例えばゼラチン、メチルセルローズ、ヒドロキシエチルセルローズ、ナトリウムカルボキシメチルセルローズ、ヒドロキシプロピルセルローズ、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガントゴムおよびアラビヤゴム、乳化剤、例えばレシチンおよびソルビタンモノオレエート、分散または湿潤剤、例えばレシチンおよびポリオキソエチレンエステル（例えばポリオキシエチレンステアレート）、非水性ベヒクル、例えば植物油（アラキン油、オリーブ油、アーモンド油、胡麻油、ヤシ油）および鉱物油（パラフィン）、防腐剤、例えばメチル、エチルまたはｎ −プロピルｐ−ベンゾエートおよび１種または２種以上の着色剤、風味剤および（または）甘味剤、例えばシュクロースまたはサッカリンと混合した活性成分を含有する。

錠剤処方は被覆されていないものであってもよくまたは活性物質の放出するためにまたは胃腸管における崩壊および吸収を遅延するために公知の技術により被覆することもできる。

非経口的使用に使用される処方は、注射、注入および移植可能な組成物を包含する。有力な投与方法は静脈内、筋肉内または皮下投与である。注射用の処方は、単位投与形態、例えばアンプルまたは防腐剤を添加した多数回投与容器として与えることができる。組成物は溶液、懸濁液または乳濁液の形態になし得るまたは使用前に水または他の適当なベヒクルで再構成される乾燥粉末として与えることもできる。これらの組成物は適当な医薬的に許容し得る担体および（または）賦形剤と混合された活性成分を含有する。これらの組成物はさらに懸濁液、安定剤および（または）分散剤のような処方剤を含有することができる。

経口的および非経口的投与方法が上述した前立腺炎の治療に対して特に好ましい。

さらに、上述したジベレリンは非毒性の医薬的に許容し得る担体および（または）賦形剤と混合された活性成分を含有する投与形態または組成物として皮膚に局所的に投与することができる。局所的使用に使用される処方は、クリーム、軟膏、ロー７ョン、擦剤、ゲル、ヒドロゲル、溶液、懸濁液、乳濁液、ペースト、プラスターおよび他の種類の経皮性供給系を包含する。医薬的に許容し得る担体または賦形剤は、例えば軟膏基剤（例え（ｉパラフィン、植物油、ポリエチレングリコール、スノ々ンＬ″］およびトウィーン＋Ｒ１）、懸濁剤、乳化剤（例えばレシチン、アラビヤゴムおよびソルビタンモノオレエート誘導体）、ゲル−形成剤（例えばカルボポール、アルギン酸塩、ゼラチンおよびセルローズ誘導体）、抗酸化剤（例えばアスコルビン酸、トコフェロールおよびその誘導体およびブチル化ヒドロキシアニソール）、緩衝剤、防腐剤（例えばベンザルコニウムクロライドおよび）＜ラベン）、軟釈剤（例えばグリセリン、プロピレングリコールおよび尿素）、浸透強化剤（例えばプロピレングリコール、ＤＭＳＯ、アゾン３″ ）およびトリエタノールアミン）および香料および皮膚保護剤である。

局所的方法による本発明のジベレリンの投与は、乾癖、火傷および放射線火傷の治療および創治癒の刺激に対して特に好ましい。

上述した組成物の処方は医薬処方の技術に精通せし者によく知られている。組成物を処方する具体的な説明は“Ｒａ＋ｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ”　（１６ｔｈ、　Ｅｄ。

（１９８０）、　１ｌａｃｋ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　Ｅａｓｔｏｎ、　Ｕ、Ｓ、Ａ）　ｉこ見出すことができる。

投与量治療的に活性なジベレリンの治療的投与量範囲は患者の年令および体重および治療される特定の疾患および選択される具体的なジベレリンのような多数の因子に依存する。

錠剤またはカプセルのような単位投与形態は、普通本発明の活性化合物約１０μ ９〜５１ｇ、特に約１００〜５００μすを含有する。体重約７０ｋｑのヒト成人の治療に使用される１日当たりの投与量は、１日当たり約５０〜１０００＋１９、好ましくは１日当たり約１００〜５００μりでありそして投与方法および治療される疾患によって１日につき約１〜３回の投与回数において投与することができる。

前立腺炎を治療するための、特に男性のヒトの前立腺における肥大および過形成腺腫を阻害および減少するための有効な投与量は、３週間の期間１日当たりジベレリン、ジベレリンプレカーサーまたはジベレリン結合体約１００〜５００１１９である。前立腺における肥大および過形成腺腫の治療に対する最も有効なジベレリンは、１２位においてヒドロキシル化されたラクトンＣ−１９ジベレリン、例えばＧＡ３゜、ＧＡ３１、ＧＡ、３、ＧＡ４ｍ−、ＧＡ４１、ＧＡ、、、ＧＡ、、、ＧＡ、。、ＧＡ７．である。他の治療的に活性なジベレリンは、１３−位においてヒドロキシル化されたラクトンＣ−１９ジベレリン、例えばＧＡ、、　ＧＡ３、ＧＡ６、ＧＡい　ＧＡ８、ＧＡ、、、ＧＡ、□、ＧＡ３．、ＧＡｓａ、ＧＡ５□、ＧＡ５９、ＧＡ、。、ＧＡ６７、ＧＡ７２および３−位においてヒドロキシル基を有していないかまたはヒドロキシル基を有しているラクトンＣ−１９ジベレリン、例えばＧＡ１、ＧＡ、、ＧＡ、、ＧＡ４、ＧＡ７、ＧＡ８、ＧＡ１、ＧＡ７８、ＧＡ３０ｓＧ＾３２・ＧＡ３４・ＧＡ３５・ＧＡ、、、・ＧＡ４８・ＧＡ４ｅ・ＧＡｓｏ、　ＧＡ５４・ＧＡ８５、ＧＡ、６、ＧＡ、７、ＧＡ５いＧＡＩｌｌ１１Ｇ＾７１である。さらに、ＧＡ、２−アルデヒド、ＧＡ、、、１２α−０■ＧＡ、２−アルデヒド、１２α−ＯＨＧＡ、２．１２α−ＯＨＧＡ、４．１２α−０［Ｉ　ＧＡ、、、１２α−０１１１ＧＡｓｔ、ＧＡ５．およびＧＡ１．のようなジベレリンおよびジベレリンプレカーサーを含有する製剤も治療的に活性である。

本発明による医薬組成物は他の治療剤と組み合わせて投与することができる。

花粉の抽出からの抽出液を使用するジベレリンの場合においては、本発明の組成物は抽出液中の乾燥物質１ｇ当たり１Ｏｕ９より大なる量のジベレリンを含有する。

優先口において知られている本発明の最善の方式は実施例５および６により示される。

作用の機構特定の理論により制限されることを望むものではないけれども、ジベレリンの機能は以下に記載する通りであると信じられる。

ジベレリン、ジベレリンプレカーサーおよびジベレリン結合体の作用は、主としてステロイド一様作用に依存するものと信じられる。構造的にはステロイド一様ではないけれども、生理学的作用はステロイド様であると信じられる。ジベレリン結合体の活性は遊離ジベレリンへの加水分解に依存する。この加水分解は酵素的開裂、例えばグルコシダーゼによってまたは過度なｐＨ値により起る。前立腺炎に対するジベレリンおよびジベレリンプレカーサーの作用を説明するために次のモデルが提案される。このモデルはまた、ジベレリンおよびジベレリンプレカーサーの同化およびリビドー増加作用の説明を与える。

ジベレリンおよびジベレリンプレカーサーはテストステロンと構造的に類似しており、そしてそれ故にテストステロン受容体に結合する。ジベレリンまたはジベレリンプレカーサー受容体−複合体は、機能的にテストステロンおよびテストステロン受容体−複合体と類似している。それ故に、テストステロンに示される生理学的作用はジベレリンおよびジベレリンプレカーサーにより模倣される。前立腺の過形成または肥大生長に対する作用はまた、テストステロン一様活性の結果である。この場合においてジベレリンまたはジベレリンプレカーサーは、普通テストステロンをジヒドロテストステロンに変換する酵素５−αレダクターゼに結合するものと考えられる。

ジヒドロテストステロンは、普通前立腺ならびに他の標的組織におけるテストステロンから合成されそして前立腺の肥大を起す。もし前立腺におけるジベレリンまたはジベレリンプレカーサーの濃度が十分に高い場合は、５−αレダクターゼはジベレリンまたはジベレリンプレカーサーによってブロックすることができる。これはジヒドロテストステロンの量の減少を起しそして結果として前立腺の肥大を減少する。

ジベレリンおよびジベレリンプレカーサーはまた、明らかにその作用において消炎性である。ジベレリンＧＡ４１厘９の投与４時間後にすぐに前立腺の膨張の減少が、前立腺の過形成腺腫にかかった男性の患者に対する直腸触診により観察される。消炎作用は、おそらくジベレリンまたはジベレリンプレカーサーのグルココルチコイド一様作用による。前立腺における減少された局所炎症は、部分的にＧＡ４によるホスホリパーゼの阻害によるものであると考えられる。このホスホリパーゼの阻害は燐脂質からのアラキドン酸の放出の低下を招く。これは結果としてロイコトリエン、トロンボキサン、プロスタグランジンおよびプロスタサイクリンの減少された形成を生ずる。ジベレリンまたはジベレリンプレカーサーはまた、リゾソーム膜を安定化そしてリソソームの増大した安定性において得られるリソソーム酵素を阻害するものと考えられる。

ジベレリンおよびジベレリンプレカーサーの他の非常に重要な作用は、これらの化合物がアデニレートおよびグアニレ−トノクラーゼの活性を増大するということである。それ故にジベレリンおよびジベレリンプレカーサーの投与によって環状ＡＭＰおよび環状ＧＭＰの細胞内濃度を増大させることができる。それから環状ＡＭＰおよび環状ＧＭＰの上昇は、リンパ球刺激およびヒスタミンおよびリソソーム酵素のような炎症性メジエータ−の放出のような広い範囲のプロ炎症機能の阻害を生ずる。

環状ＧＭＰおよび環状ＡＭＰの増大はまた表面細胞の細胞分裂および細胞増殖の正常化を与える。

ジベレリン、ジベレリンプレカーサーおよびジベレリン結合体の作用はまた、投与後に非特異的抗体の量が増加するために、免疫活性を有するということが判った。

本発明をさらに以下の非限定的実施例によって説明する。

実施例　１種々な種類の植物からの花粉、バンプキン（Ｃｕｃｕｒｂｉ　ｔａｍａｘｉａ＋ａ　Ｌ、）種子、５ａｂａｌ　５ｅｒｒｕｌａｔａ（Ｉｌｕｎｃｈ）Ｂｅｎｔｈ、ｅｔＨｏｏｋからの果実および＾ｌｏｅ　ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓ　１ｌｉｌｌの実質性ゲルからのジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびジベレリン結合体の単離（ａ）ジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびその結合体の抽出および精製種々な種類の植物（Ｓｅｃａｌｅ　ｃｅｒｅａｌｅ、　Ｚｅａ　ＩＩａｙｓ、＾１ｎｕｓｉｎｃａｎａ、Ｐｉｎｕｓ　５ｙｌｖｅｓｔｒｉｓ、　Ｐｉｃｅａ　ａｂｉｅｓ）からの花粉、Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｍａｘｉｍａからの種子、Ａｌｏｅ　ｂａｒｂａｄｅｎｓｉｓからのゲルまたは５ａｂａｌ　５ｅｒｒｕｌａｔａからの果実を、植物物質１ｇ（新鮮な重量）当りエタノール（ＥｔＯＨ）　ｌ（１＋Ａ’中で均質化する。試料は、連続的に撹拌しながら４℃で暗所で２時間抽出する。ワットマンＯＯＨフィルターを通して濾過した後、組轍残屑を新鮮なＥｔＯｌｌ　２００ｍＡ’で洗浄する。０．５Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＦＩ８．ｏ）　１．０＋＋／を、プールしたＥｔＯＨに加えモしてＦ、ｔＯＢを、４０ ℃で減圧下で蒸発乾固する。水性残留物を水で約１０＋＋／の容量に調節しそしてｐＦＩをＮａＯＨまたは肛ｌで８．０に調節する。この抽出液を不溶性ポリ− Ｎ−ビニルポリピロリドンを充填した３００　Ｘ　２０ｍｍ（内部直径）（ｉ、ｄ、）のカラムに適用しそして次に０．１Ｍ燐酸ナトリウム緩衝液（ｐＦｌｌｌｌ、　Ｏ）で溶離する。０〜２００■ｌのフラクションを集め、６ＭＨＣ／で酸性にしてｐＨ２，７となし次に酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）　１００＋４’で５回抽出する。ＥｔＯＡｃによる抽出後、緩衝液相を水−飽和ｎ−ブタノール（ｎ　 −ＢｕＯＲ）　１００ｍ１で５回抽出する。遊離ジベレリンを含有する酸性のＥｔＯＡｃ抽出液を合しそして水を凍結により除去し次に濾過する。ＥｔＯＡｃを４０℃で減圧下で蒸発乾固する。結合ジベレリンを含有する酸性のｎ−ブタノールフラクションを合しそして溶剤を７０℃で減圧下で蒸発乾固する。

（ｂ）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）５ｕ＋のＰｏｌｙｇｏｓｉｌ　ＣＢ　（Ｓｋａｎｄｉｎａｖｉｓｋａ　Ｇｅｎｅｔｅｃ　ＡＢ。

Ｋｕｎｇｓｂａｃｋａ、　Ｓｗｅｄｅｎ）を充填したｌＯ＋ｍ（ｉ、　ｄ、　）　Ｘ　２５０ｍｍのスチールカラムに連結した２個のＷａｔｅｒｓ　Ｍ５０１ポンプ（Ｉｌｉｌｌｉｐｏｒｅ　ＡＢ、　Ｖａｓｔｒａ　Ｆｒｏｌｕｎｄａ、　Ｓｗｅｄｅｎ）からなる逆相ＨＰＬｃ系を使用して、酸性のＥｔＯＡｃ抽出液および酸性のｎ　−Ｂｕｒｎ抽出液を、さらに精製する。ポンプは、ｆａｔｅｒｓＭ６８０系コントローラーにより調節しそしてインゼクターはＷａｔｅｒｓ　Ｕ６にである。移動相は、水および酸性（９９：１゜ｖ／ｖ）〜メタノール（Ｍｅ０１’ｌ）および酢酸（９９：１．　ｖ／ｖ）の線状勾配からなる。勾配溶出時間（ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｓｗｅｅｐ　ｔｉｍｅ）は６０分でありそして流速は１　ｍｌ　ｗｉｎ−’である。６ｏの１ｕｌずつのフラクションを集めそして５ａｖａｎｔ　５ｐｅｅｄ　Ｖａｃコンセントレータ−（Ｔｅｃｔｕｍ　Ｉｎ５ｔｒｕＩｌｅｎｔｓ、　Ｕｍｅａ、　Ｓｗｅｄｅｎ）中で蒸発する。これらのフラクションのそれぞれを９５％エタノール５ｈｌに溶解しそしてＴａｎ−ｇｆｎｂｏｚｕ　ｄｗａｒｆ　ｒｉｃｅｍｉｃｒｏｄｒｏｐ生物検定（ＩｌｕｒａｋａＩＩｉ、１９６８．　Ｂｏｔ、ｌａｇ、８１：３３）を使用してＧＡ一様活性度についてｌ／１００部分において試験する。この試験は、０．５ｕｌの微小滴の使用により変形した。

生物活性を示すフラクションの残りの部分を、さらに、分析用の標準相ＨＰＬＣにより精製する。この系は、静止相を形成する５１１１のＮｕｃｌｅｏｓｉｌ　ＮＯ２（Ｓｋａｎｄｉｎａｖｉｓｋａ　Ｇｅｎｅ−ｔｅｃ　ＡＢ、Ｋｕｎｇｓｂａｃｋａ、Ｓｗｅｄｅｎ）を充填した１５０ｍｇＸ４６ｍｍ（ｉ、　ｄ、　）カラムを使用した上述したと同じＷａｔｅｒｓ装置からなる。移動相は、水中の０．５Ｍギ酸で半一飽和したｎ−ヘブタン〜ＥｔＯ八へ−水−ギ酸（９８，５：　１　：　０．５．　ｖ／ｖ）の線状勾配である。勾配溶出時間は６０分でありそして流速は、２＊（ｌ　ｍ１ｎ−’である。６０の２Ｈ１ずつのフラクションを集めそして５ｐｅｅｄ　Ｖａｃコンセントレータ−中で蒸発しそしてＴａｎ−ｇｉｎｂｏｚｕ　ｄｗａｒｆ　ｒｉｃｅ生物検定（ｌｌｕｒａｋａＩＩｌｊ、　１９６８）を使用してＧＡ一様活性度を試験する。検定された種々なジベレリンの確認は、以下に記載するガスクロマトグラフィーおよび質量分析法により評価する。

（Ｃ）ガスクロマトグラフィーおよび質量分析法ガスクロマトグラフィーおよび質量分析法による分析に対して企図された試料を、エーテル性ジアゾメタンでメチル化する。蒸発後、Ｎ、０−ビス（トリメチルンリル）トリフルオロアセトアミド５０μｌを、１％のトリメチルクロロシランとともに、それぞれの試料に加えそして混合物を９０℃に６０分加熱する。蒸発後、メチル化およびトリメチルンリル化された試料をヘプタンに溶解しそしてＨｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　５９７０８　Ｍａｓｓ　５ｅｌｅｃｔｉｖｅ　Ｄｅｔｅｃｔｏｒおよび［ｌｅｗｌｅｔｔ　Ｐａｃｋａｒｄ　５９９７０Ｂ　ｆｏｒｋｓｔａｔｉｏｎ　（ＨｅｗｌｅｔｔＰａｃｋａｒｄ　Ｓｐａｎｇａ、　Ｓｗｅｄｅｎ）に連結した融解ソリ力キャビラソー力ラム（ＳＥ−３０化学結合した相、長さ２５麿、内径０、２５ｍｍおよびフィルム厚さ０．２５ｊｍ）　（Ｑｕａｄｒｅｘ　Ｃｏ、。

Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　）にスプリットレス注入する。もし化合物がメチルエステルのみであると疑われる場合は、溶剤はメタノールである。注入温度は、２３０℃ である。カラム温度は、６０℃に１分維持し、それから２００℃まで２０℃■ｉｎ−’ずつ上昇させ次いで２５０℃まで４℃ｍ１ｎ−’ずつ上昇させる。

カラム流出液は、２７５℃の界面温度を有するイオン源に導き入れる。電子エネルギーは、７０ｅＶである。抽出液フラクションの電子衝撃スペクトルを記録しそして標準のスペクトルと比較する。また、試料および標準物をｎ−アルカンＣ２３〜Ｃ２ｇを使用して一緒に注入する（Ｇａｓｋｉｎ等、　１９７１．　Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　１０：　１１５５）。保持時間と炭素の数との間に線状回帰をつくる。保持時間を炭素の数に変換しそして最後にこれに１００を掛けることによって、Ｋｏｖａｔｓ保持指数（Ｊｏｖａｔｓ、１９５９．　Ｈｅ１ｖ、Ｃｈｉｍ、＾ｃｒａ４１　：　１９１５）を計算する。

（ｄ）結晶化上記方法で精製されたジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびジベレリン結合体を、小量のシクロヘキサンに溶解し、−２０℃で結晶化させそして以下に記載するような治療試験に使用する。この方法において、花粉試料からＧＡ、、　ＧＡ８、ＧＡ１、ＧＡ、、、ＧＡ２ｏおよびＧＡ５．が得られ、バンプキン種子（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　５ａｘｉ＋ｗａ　Ｌ、）からＧＡ３゜が得られ、ＡｌｏｅゲルからＧＡ、およびＧＡ７が得られそしてドヮルフバーム（Ｓａｂａｌ　５ｅｒｒｕｌａｔａ）からＧＡ、、−アルデヒドが得られる。

エタノール抽出に対する注釈エタノール中の花粉の抽出によって、生理学的に活性なジベレリンが、高収率で得られる。エタノール抽出は、また、蛋白質、複合炭水化物およびアミノ糖のような高分子量の化合物が有効に抽出されないので、有利である。

また、抽出液は４５＋＋ｍの濾過器および１０．０００ダルトンの濾過器を通して濾過されるので、抽出液中の化合物の分子サイズが制限される。これは、水性媒質中の抽出に比較して、抽出液をより低いアレルギン発現性のものとなしそして活性化合物をより濃厚なものにする。花粉のエタノール抽出後の乾燥物質含量は、水抽出の場合における約３０〜５０％の乾燥物質含量に比較して、約１０％である。

水性媒質中における酵素法によるジベレリンの分解は、非常に著しい。この分解は、エタノールを溶剤として使用する場合は、酵素が沈殿するので、減少される。これらの理由のために、適当に製造した場合、エタノール抽出液は、１質量単位抽出液（＋５ａｓｓ　ｕｎｉｔ　ｅｘｔｒａｃｔ）当り１０〜１００倍以上の活性化合物ジベレリンを含有する、すなわち、エタノール抽出液の乾燥物質は、Ｉｈ／９またはそれ以上、普通１０〜１０００　ｐ　９　／　ｑを含有する。抽出前の花粉の最適の取扱いは、さらに最終抽出液中の活性化合物の濃度を増加する。

実施例　２カビＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ　ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ（Ｓａｔ、）ｔｏｌｌまたは無性形態のＦｕｓａｒｊｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｅ（Ｓｈｅｌｄ、）ｌｉｎｅｌによるジベレリンの合成カビＧｉｂｂｅｒｅｌｌａ　ｆｕｊｉｋｕｒｏｊ（Ｓａｗ、）Ｗｏｌｆまたは無性形態のＦｕｓａｒｉｕｍ　ｍｏｎｉｌｉｆｏｒ＊ｅ（Ｓｈｅｌｄ、）　Ｗｉｎｅｌの培養によってジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびそれらの結合体を生産する。これらの菌は、何れも土壌から単離されるものである。ジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびそれらの結合体の高生産のために選択された種々なカビの菌株を、寒天２０９、グルコース５ｇ、馬鈴薯ジュース１００ｍｊ！および水９０（ｂ／を含有する培地上で４℃に維持する。この培地は、オートクレーブ処理しそしてカビを接種しそして２８℃で１０〜１４日生長させる。次に、カビを４℃で約２ケ月貯蔵する。ジベレリン生産は、シュクロース２００ｇ、クエン酸水素二アンモニウム１５ｇ、Ｃａ（ＮＯ３）２’４１’１２０　１９、Ｋ口、Ｐｏ、０．２５９、Ｍｇ５Ｏ＜４ＨｚＯＯ，３ｑ、ＦｅＳＯ４・７０２００．０１９、ＺｎＳＯ４４［１ｚ００．０３ｇ、Ｋ（Ｊ！　０．１．ｑおよび蒸留水１０００ｉｊ’を含有する予備培養培地にカビを接種することにより開始する。培地は、使用前にオートクレーブ処理する。貯蔵培地からとったカビ１ｇを、接種しそして予備培養培地１００ｍｆ中において２８℃で３〜４日生長させる。

次に、菌糸を濾去し、蒸留水で洗浄し、次に乳ばちおよび乳棒を使用しておだやかに機械的に破砕して小片にする。次に、グルコース５０９、Ｎ［１４ＮＯ３１，２９、ＫＩＴ１ＰＯ＋　５９、Ｍｇ５Ｏａ”７１’ｌｚ０１９および蒸留水１０１００Ｏ！当りＦｅＳＯ４・７ＨｚＯＬ９、Ｎａ２Ｂ４０ｉ’１０１１２０８８１９、ＣｕＳＯ４・５Ｈｚ０３９２Ｋｇ、ＭｎＣ１＝４２０７２−ｇ、ＣＮＨ４）ａＭＯｔｏｘ＜・４ＦＩ２０３１ｍｑおよびＺｎＳＯ４４Ｈ２０２２ｍｚからなる微量元素溶液２ｍｌからなる培地に、カビを接種する。これらの混合物は、蒸留水で１０００ｍ／の容量にしそしてＨＣｌまたはＮａＯ［ｌでｐＨ４，５にする。カビは、振盪機上で２８℃で１０日生長させる。次に、実施例１に記載した操作によって、ジベレリンプレカーサー、ジベレリンおよびそれらの結合体を培地から単離する。

実施例　３Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌａ　ｆｕｊｉｋｕｒｏｉ（Ｓａｗ、）ｆａｌｌの高ジベレリン−生産性菌株の突然変異および選定Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−二トロソグアニジン（ＮＴＧ）によるカビ原形体の突然変異後、ジベレリン−特異的抗体によるスクリーニングによって、ジベレリンＧＡ、、　ＧＡ８、ＧＡ４、ＧＡ０、ＧＡ７およびＧＡ２．の生産の高い菌株を単離する。

原形体生産カビの菌糸を、濾過により予備培地培養物（実施例２参照）から単離しそしてセルラーゼ“０ｎｏｚｕｋａ　Ｒ−１０”（トリコデルマピリド）１．３Ｕ／＋＊ｇ（Ｓｅｒｖａ、　Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒｍａｎｙ。

ＥＣ３，２，１，４）２０ｇｇ／肩！およびドリセラーゼ２６．５Ｕ／菖９（Ｆｌｕｋａ、５ｗ１ｔｚｅｒｌａｎｄ）　５ｔｒｇ／菖１からなる溶解酵素液（ｌｙｔｉｃ　ｅｎｚｙｍｅ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ）　１０ｍＪ中で培養する。

酵素は、浸透性の安定剤としてのＭｇＳＯ４の０．７Ｍ溶液に溶解しそして菌糸を往復振盪により３２℃で４時間処理する。培養後、原形体溶液をガラスウールを通して濾過し次に５００Ｘｇで１０分遠心分離する。次に原形体ベレットを０．７Ｍ　ｍｇｓｏ、　１（１＋ｊ！で洗浄し次に５００×９で１０分遠心分離する。

次に、ベレットを、Ｎ−メチル−Ｎ′−二トローＮ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ、＾１ｄｒｉｃｈ、　Ｗｅｓｔ　Ｇｅｒｍａｎｙ）　０．１ｕ＋＋を含有する０、７Ｍ　）ＩｇＳＯｉ溶液１（１＋１中で懸濁させる。

室温で１時間培養した後、原形体を、５００Ｘ９で１０分遠心分離する。上澄液を捨てそしてベレットを０．７Ｍ１１ｇ５０４１０＋＋４で洗浄しそして５００Ｘｙで１０分遠心分離する。

洗浄操作を、５回反復する。原形体をうすめそして水１００ｗ１当’）　寒天２ｇ、グルコース０．５ｇおよび馬鈴薯ジュースｉ　Ｑ　ｙｓ　ｌを含有する固体培地上に接種する。０．７Ｍマンニトールを、浸透性の安定剤として培地に加える。プレートを２８℃で７日間培養しそして再生した原形体を単離しそしてグルコース５０９、ＮＦ１４ＮＯ３１，２９、ＫＷ、ＰＯ４５ｇ、Ｍｇ５Ｏ，・７１１２０１ｇおよび実施例２の微量元素溶液２ｍｌからなる生産培地Ｑ、　’１ｍｌに懸濁する。この混合物を、蒸留水で１ｏ００麿／の容量に調節しそしてｐｌ ’１４．５に調節する。カビは、２８℃で７日ミクロタイタープレートの壁で生長する。

培地を、その後、ＧＡ、、ＧＡ３、ＧＡいＧＡ７、ＧＡ、およびＧＡ２゜に対する抗体を使用して放射免疫測定法においてジベレリン−結合活性について試験する。

放射免疫測定法牛血清アルブミンに対するＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡいＧＡ、、ＧＡ。

およびｃ＾ｚｏノ結合を、ＷｅｉｌｅｒおよびＷｉｅｃｚｏｒｅｋ（１９８１）Ｐｌａｎｔａ　１５２　：　１５９）により行う。ウサギ免疫および抗血清生産をＤａｋｏｐａｔｔｓ、　Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、　Ｄｅｎｍａｒｋにより行う。これらのポリクローン性抗体の結合性を、使用前に試験する。試料および標準物を、放射免疫測定法（ＲＩＡ）前にエーテル性ジアゾメタンでメチル化する。

試験混合物は、食塩燐酸塩緩衝液（ＰＢＳ）ｐ［＋８．０　（０，０１Ｍ燐酸塩および０．１５Ｍ　ＮａＣ／）　３００ｐｊ！＋Ｐ８Ｓ緩衝液中のｌチル化標準物（ＧＡ１、ＧＡ４またはＧＡ、。）、メチル化試料またはメチル化ブランク試料１００μ／＋ＰＢＳ緩衝液１００Ｉ１１中のメチル化トレーサー約１００Ｂｑ　（（１，２−”Ｈ］ＧＡ＋、１．　ＩＴＢｑ／ミリモル。

［１，２−’＋１）ＧＡ４．　３７ＧＢｑ／ミリモル、［２，３−３■）ＧＡｅ、１．７ＴＢｑ／ミリモル、［１，２−３１１］ＧＡｘｏ、　１．１ＴＢＱ／ミリモル）十血清１００ｕｌからなる。血清を除くことにより、非−特異的結合を測定する。バイアルの内容物を混合しそして２時間培養し、飽和硫酸アンモニウム溶液０．６ｍｌをバイアルに加えそして２０００Ｘ９で０，５時間遠心分離した後に上澄液を捨て、ペレットを水１００μｌに分散し、ミニリア２ｏ液体ンンチレータ−１，ｍｌを加えそして放射能を液体シンチレーションスペクトロメトリーにより測定する。抽出液フラクションの抗体結合活性を、式（Ｂ−Ｎ）／　（Ｂａ−Ｎ）　Ｘ　１００　（式中、Ｂは標準物または試料の存在下におけるトレーサー結合であり、Ｂｏは標準物また試料の不存在におけるトレーサー結合でありモしてＮは非−特異的結合である）を使用して計算する。

放射免疫測定法において結合を抑制するコロニー生産物質を単離しそして大なる容量の予備培養培地中で生長させ、生産培地に移しそしてジベレリンを実施例１に記載したように抽出しそして単離する。ジベレリンをＨＰＬＣによって分離しそしてガスクロマトグラフィーおよび質量分析法によって確認する。

実施例４ジベレリンの化学的合成商業的に入手できるジベレリンＧＡ３を、ＧＡ、、３−オキソ−ＧＡ、、３−オキソ−ＧＡ５、ＧＡ４、ＧＡ、およびＧＡ２゜を製造する出発物質として使用することができる。ＧＡ３を、はじめに、エーテル中でジアゾメタンを使用してメチル化する（　Ｓ　ｃ　ｈ　１．　ｅ　ｎ　ｋおよびＧｅｌｌｅｒｍａｎ、１９６０．　＾ｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅ＋ｗｉｓｔｒｙ　３２　：　１４１２）　ｏ次にＧＡ３−１１ｅ中の１．２−二重結合を、酢酸エチルおよびピリジン中で２％パラジウム付炭酸バリウムを使用して水素添加（Ｊｏｎｅｓおよび１Ｉｃｃ１ｏｓｋｅｙ。

１９６３、　Ｊ、　Ａｐｐｌ、　Ｃｈｅｌｌ、　１３：　３２４）してＧ＾ビトを得る。次に、このメチルエステル結合を０．５Ｍ水酸化カリウム中で７０℃で２時間加水分解してＧＡ１を得る。また、ＧＡ３−Ｍｅの３β−ヒドロキシ基を塩化メチレン中でマンガン酸バリウムで２日酸化することもできる。これは、３ −オキソ−ＧＡ３−Ｍｅを与える。このものは、さらに、酢酸エチルおよびピリジン中で２％パラジウム付炭酸バリウムで水素添加して３−オキソ−ＧＡ、を得ることができる（　ＪｏｎｅｓおよびＭｃＣｌｏｓｋｅｙ、　１９６３）　、それから、メチルエステル結合を０．５Ｍ水酸化カリウム中で７０℃で２時間加水分解して３−オキソ−ＧＡ３および３−オキソ−ＧＡ、を得ることができる。また、はじめにＧＡ、−１１ｅをピリジンに溶解しそして６％（Ｗ／Ｖ）の塩化トシルを加えることにょす３−トンルーＧ＾ビＭｅを製造することによって、ＧＡ、−ＭｅをＧＡ５−Ｍｅに変換することができる。反応生成物は１゜日後に単離しそしてＩＮ’Ｌｃにより分離する。ＧＡ５−Ｍｅは、０．５Ｍ水酸化カリウム中で７０℃で２時間加水分解することにより遊離酸に変換される。ＧＡ５−）ｌｅは、また、２％パラジウム付炭酸バリウム上で水素添加することにより、ＧＡ２（、−Ｍｅに変換される。このＧＡ２６−Ｍｅは、０．５Ｍ水酸化カリウム中で７０℃で２時間加水分解することにより遊離酸に変換することができる。

実施例　５ジベレリンＧＡ２０およびＧＡ、ｏによる前立腺炎、前立腺における肥大および過形成腺腫の治療ジベレリンＧＡ２ｏおよびＧＡ３ｏのそれぞれ５０厘すを９５％エタノール１１に溶解しそして使用前にこの溶液を水でｌ　Ｑ　ｍ　ｌの容量にうすめることによって医薬組成物を製造する。

次に、これらのジベレリンをラットの飼料に加えそして１、００　Ａ　Ｉ、２０ μｌ、１０μｌおよび２μｌの量でラットに与える。

この投与量を、雄のウィスターラット（１投与当り３匹のラット）に３ケ月間毎日投与する。

結果３ケ月の期間のジベレリンＧＡ２゜およびＧＡ３゜のそれぞれ５０μ９による雄のウィスターラットの処理は、比較対照動物に比較して、１９％の体重の有意な増加をきたす。ジベレリンＧ＾２゜およびＧＡ、。で３ケ月間処理した動物は、比較対照動物の２４９ｇに比較して、２９６ｇの平均体重を有す。全体に対する前立腺の重量は、上述した方法でジベレリンで処理した動物においては有意に小さい。全体の体重の％で示した前立腺の重量は、比較対照動物に対しては、０．２７％（６７２１９）でありそしてジベレリンで処理した動物に対しては０１８％（５６２＋＋ｇ）である。若い動物のような去勢されたラットを同じ方法で処理した場合、同様な応答が得られる。

ジベレリンは、また、去勢されたラットに対して有意な同化および筋栄養作用を示す。ジベレリンによる去勢ラットの処理は、未処理の去勢動物に比較して、９％の体重の増加を与える。前立腺の重量は、また、ジベレリンによる処理によって有意に増加される。ジベレリンにより処理した去勢ラットにおいては３５Ｌｖの平均前立腺重量が得られるけれども、未処理の動物においては８０１１ｇの平均前立腺重量が得られる。これは、未処理の去勢ラットにおける全体重に対する０、０４％の前立腺重量および処理した去勢ラットにおける全体重に対する０、１４％の前立腺重量に相当する。

また、ジヒドロテストステロンによるラットにおける前立腺の実験的に誘起された肥大生長は、ジベレリンによって抑制される。３ケ月間のジヒドロテストステロンの５０１９の毎日の投与量による雄の成熟した未去勢ラットの処理は、前立腺の肥大生長を招く。前立腺の重量は８１４＋＋ｇであって、これは全体重の約０．３４％に相当する。

同時に毎日ジベレリンＧＡ、。およびＧＡ３゜のｌｏＯｐｇの投与量を与えた場合は、前立腺の重量の増加は、検出されない。

この場合における前立腺の重量は５８２ｍｇであって、これは全体重の０．２０％に相当する。

男性のヒトの前立腺の過形成および肥大生長は、また、ジベレリンＧＡ！、およびＧ＾５．による処理により減少される。

これらの物質は、３週間１日当り１０μ９．５０１１ｇ、】００μ９．５００１１９および１禦９の投与量を含有する弱エタノール溶液として経口的に投与した。この処理は、前立腺の膨張を減少しそして前立腺の生長を減少する。ジベレリンによる処理は、また、体重のわずかな増加およびリビトのわずかな増加を与える。

実施例　６乾量の処理に対するジベレリンＧ＾７の使用ジベレリンＧ＾７をエタノールに溶解しそして次にこの溶液を、０．０５％のアスコルビン酸を有する医薬ワセリンからなるクリームに加えることによって、局所的に適用される医薬組成物を製造する。このクリームは、Ｏ，］、Ｉ９／ｇ、０．５す／９．１す７ｇ、５菖９／９またはＩＯ翼９／９の濃度でジベレリンＧ＾７を含有する。このクリームは、３週間１日当り２回雌の患者の乾量皮疹に局所的に適用される。

１週間の使用によって乾量皮疹の程度の有意な減少が得られる。

要　約　書前立腺炎および／または乾量治療用の医薬組成物の製造における活性ジベレリンの使用である。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成４年６月１１日

Claims

【特許請求の範囲】

１．前立腺炎および（または）乾癬の治療用の医薬組成物の製造における活性ジベレリンの使用。
２．ジベレリンが一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼Ｉ（上記式において、Ｒ１は、Ｈまたは基−Ｏ−Ｒ２０（式中、Ｒ２０はＨである）であるかまたはＲ２またはＲ１０と一緒になって単一結合（それぞれＣ１−Ｃ２またはＣ１−Ｃ１０二重結合）を形成し、Ｒ２は、Ｈまたは基−Ｏ−Ｒ２１〔式中、Ｒ２１はＨ、グリコシルエーテル基（グリコシドエーテル）であるかまたはＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕であるかまたはＲ１またはＲ３と一緒になって単一結合（それぞれＣ１−Ｃ２またはＣ２−Ｃ３二重結合）を形成し、Ｒ３は、Ｈ、＝Ｏまたは−Ｏ−Ｒ２４〔式中、Ｒ２４はＨまたはグリコシルエーテル基（グリコシドエーテル）である〕であるかまたはＲ２と一緒になって単一結合（Ｃ２−Ｃ３二重結合）を形成し、Ｒ４は、ＯＨであるかまたはＲ２３またはＲ２１と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成し、Ｒ５は、Ｈまたは−Ｏ−Ｒ２２〔式中、Ｒ２２はＨまたはグリコシルエステル（グリコシドエステル）である〕であり、Ｒ６は、ＨまたはＯＨであるかまたはＲ７と一緒になって単一結合（Ｃ１２−Ｃ１３二重結合）を形成し、Ｒ７は、Ｈ、＝Ｏまたは−Ｏ−Ｒ２５〔式中、Ｒ２５はＨまたはグリコシルエーテル基（グリコシドエーテル）である〕であるかまたはＲ６と一緒になって単一結合（Ｃ１１−Ｃ１２二重結合）を形成し、Ｒ８は、Ｈまたは−Ｏ−Ｒ２６〔式中、Ｒ２６はＨまたはグリコシルエーテル基（グリコシドエーテル）である〕であり、Ｒ９は、ＨまたはＯＨであり、Ｒ１０は、Ｈ、ＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＯＯＨまたは該ＣＯＯＨのグリコシルエステル（グリコシドエステル）、ＣＨ２Ｏ−Ｒ２３または−Ｏ−Ｒ２３〔式中、Ｒ２３はＨであるかまたはＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕であるかまたはＲ１と一緒になって単一結合（Ｃ１−Ｃ１０二重結合）を形成し、Ｒ１１は、ＯＨであるかまたは存在せず、Ｒ１２は、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、ＣＯＯＨまたは該ＣＯＯＨのグリコシルエステル（グリコシドエステル）である）の化合物およびその医薬的に許容し得る塩およびラクトンである請求項１記載の使用。
３．Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１１のせいぜい４個がＨである請求項１記載の使用。
４．Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２４、Ｒ２５および（または）Ｒ２６がグルコース、ガラクトース、アラビノースおよびキシロースからなる群から選択されたものでありそしてこれらのすべてがそれぞれＯＲ２１、ＯＲ２２、ＯＲ２４、ＯＲ２５またはＯＲ２６における酸素原子にグリコシド的に結合しているものである請求項２〜３の何れかの項記載の使用。
５．ＯＲ２１、ＯＲ２４、ＯＲ２５および（または）ＯＲ２６がＯ−β−Ｄ−グリコシジル、好ましくはＯ−β−Ｄ−グルコシジルである請求項２〜４の何れかの項記載の使用。
６．ジベレリンがＧＡ１−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ１−１３−Ｏ−β −Ｄ−グルコシド、ＧＡ３−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ３−１３−Ｏ− β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ３−３，１３−ジ−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ４ −３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ７−３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ１９−１３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ２０−１３−Ｏ−β−Ｄ−グルコシド、ＧＡ３０−１２−Ｏ−β−Ｄ−グルコシドおよびＧＡ５３−１３−Ｏ−β−Ｄ −グルコシドからなる群から選択されたものである請求項５記載の使用。
７．Ｒ１０、Ｒ１２およびＣＯＲ５の少なくとも１個がアルコール部分が好ましくはＣＯＲ５におけるＯ−α−Ｄ−グルコシジル、Ｏ−β−Ｄ−ガラクトシジル、Ｏ−α−Ｌ−アラビノシジルおよびＯ−β−Ｄ−キシロシジルのようなグリコシジルから選択されたものであるエステル基である請求項２〜４の何れかの項記載の使用。
８．ジベレリンがＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ４、ＧＡ７、ＧＡ９、ＧＡ１９、ＧＡ２０、ＧＡ３０およびＧＡ５３のジベレリンＤ−グルコシジルエステル（ＧＡ１− Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ３−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ４−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ７−Ｄ−グルコシルエステル、ＣＡ９−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ１９−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ２０−Ｄ−グルコシルエステル、ＧＡ３０−Ｄ−グルコシルエステルおよびＧＡ５３−Ｄ−グルコシルエステル）からなる群から選択されたものである請求項７記載の使用。
９．Ｒ７がＯＨでありそしてＲ１０が−Ｏ−Ｒ２３〔式中Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕である請求項２〜８の何れかの項記載の使用。
１０．Ｒ２およびＲ２が単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が単一結合を形成する請求項９記載の使用。
１１．Ｒ１がＨまたはＯＨであり、Ｒ２がＨまたはＯＨでありそしてＲ５がＯ− Ｒ２２である請求項９〜１０の何れかの項記載の使用。
１２．Ｒ１がＨまたはＯＨであり、Ｒ２がＨまたはＯＨであり、Ｒ３がＨ、ＯＨまたは＝Ｏであり、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ８がＨであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１１が存在せずそして点線が実線と一緒になって点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す請求項９〜１１の何れかの項記載の使用。
１３．ジベレリンがＧＡ３０、ＧＡ３１、ＧＡ３３、ＧＡ４８、ＧＡ４９、ＧＡ５８、ＧＡ６９、ＧＡ７０およびＧＡ７１からなる群から選択されたものである請求項９〜１１の何れかの項記載の使用。
１４．Ｒ８がＯＨであり、そしてＲ１０が−Ｏ−Ｒ２３〔式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕である請求項２〜８の何れかの項記載の使用。
１５．Ｒ１およびＲ２が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合を形成する請求項１４記載の使用。
１６．Ｒ１がＨまたはＯＨでありそしてＲ５がＯ−Ｒ２２である請求項１４〜１５の何れかの項記載の使用。
１７．Ｒ１がＨまたはＯＨであり、Ｒ２がＨまたは基−Ｏ−Ｒ２１〔式中、Ｒ２１はＨである〕であるかまたはＲ３と一緒になって単一結合（Ｃ２−Ｃ３二重結合）を形成し、Ｒ３がＨまたはＯＨであるかまたはＲ２と一緒になって単一結合（Ｃ２−Ｃ３二重結合）を形成し、Ｒ５がＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨであり、Ｒ１１が存在せずそして点線が実線と一緒になって点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す請求項１４〜１６の何れかの項記載の使用。
１８．ジベレリンがＧＡ１、ＧＡ３、ＧＡ５、ＧＡ６、ＧＡ８、ＧＡ２１、ＧＡ２２、ＧＡ２９、ＧＡ５６、ＧＡ５７、ＧＡ５９、ＧＡ６０、ＧＡ６７およびＧＡ７２からなる群から選択されたものである請求項１４〜１７の何れかの項記載の使用。
１９．Ｒ１０が−Ｏ−Ｒ２３〔式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕である請求項２〜８の何れかの項記載の使用。
２０．Ｒ１およびＲ２が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合を形成する請求項１９記載の使用。
２１．Ｒ１がＨまたはＯＨでありＲ２がＨまたはＯＨでありそしてＲ５がＯ−Ｒ２２である請求項１９〜２０の何れかの項記載の使用。
２２．Ｒ３がＨまたはＯＨである請求項１９〜２１の何れかの項記載の使用。
２３．Ｒ１がＨまたはＯＨであり、Ｒ２がＨまたはＯＨであり、Ｒ３がＨまたはＯＨであり、Ｒ５がＯＨでありそしてＲ１２がＣＨ３である請求項１９〜２２の何れかの項記載の使用。
２４．ジベレリンが３−オキソ−ＧＡ１および３−オキソ−ＧＡ３からなる群から選択されたものである請求項１９〜２１の何れかの項記載の使用。
２５．ジベレリンがＧＡ１、ＧＡ２、ＧＡ３、ＧＡ４、ＧＡ７、ＧＡ８、ＧＡ９、ＧＡ２６、ＣＡ３０、ＧＡ３２、ＧＡ３４、ＧＡ３５、ＧＡ４７、ＧＡ４８、ＧＡ４９、ＧＡ５０、ＧＡ５４、ＧＡ５５、ＧＡ５６、ＧＡ５７、ＧＡ５８、ＧＡ６８およびＧＡ７１からなる群から選択されたものである請求項１９〜２３の何れかの項記載の使用。
２６．Ｒ７がＨまたはＯＨである請求項２〜８の何れかの項記載の使用。
２７．Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨでありそしてＲ３がＨまたはＯＨである請求項２６記載の使用。
２８．Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたはＯＨであり、Ｒ５がＨまたはＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＣＨ３、ＣＨＯまたはＣＨ２Ｏ−Ｒ２３〔式中、Ｒ２３はＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕でありＲ１１が存在せず、Ｒ１２がＣＨ３でありそして点線が実線と一緒になって点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す請求項２６〜２７の何れかの項記載の使用。
２９．ジベレリンがＧＡ１２−アルデヒド、ＧＡ１２、１２α−ＯＨＧＡ１２− アルデヒド、１２α−ＯＨ　ＧＡ１２、１２α−ＯＨ　ＧＡ１４、１２α−ＯＨ　ＧＡ１５、１２α−ＯＨ　ＧＡ３７、ＧＡ１９およびＧＡ５３から選択されたものである請求項２６〜２８の何れかの項記載の使用。
３０．Ｒ１１が存在せずそしてＲ１２がＣＨ３である請求項２〜８の何れかの項記載の使用。
３１．Ｒ１０およびＲ１が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ１およびＲ２が一緒になって単一結合を形成するかまたはＲ２およびＲ３が一緒になって単一結合を形成する請求項３０記載の使用。
３２．Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨでありそしてＲ６がＨである請求項３０〜３１の何れかの項記載の使用。
３３．Ｒ３がＨまたはＯＨでありそしてＲ７がＨまたはＯＨである請求項３０〜３２の何れかの項記載の使用。
３４．Ｒ１がＨであり、Ｒ２がＨであり、Ｒ３がＨまたはＯＨであり、Ｒ５がＨまたはＯＨであり、Ｒ６がＨであり、Ｒ７がＨまたはＯＨであり、Ｒ９がＨであり、Ｒ１０がＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＨ２Ｏ−Ｒ２３または−Ｏ−Ｒ２３〔式中、Ｒ２３はＨであるかまたはＲ４と一緒になって単一結合（ラクトン）を形成する〕でありそして点線が実線と一緒になって、点線および実線により連結されている３個の炭素原子の２個の炭素原子の間に二重結合が位置していることを示す請求項３０〜３３の何れかの項記載の使用。