JPH05502220A

JPH05502220A - チアルブリン抗真菌および抗生剤

Info

Publication number: JPH05502220A
Application number: JP3500613A
Authority: JP
Inventors: タワーズ，ジー．，エイチ．，ニール; バルザ，フェリップ; ロペツ―バゾッチ，イザベル; ブルエニング，レイマー　シー．; アブラモウスキー，ジタ
Original assignee: ザユニバーシティオブブリティッシュコロンビア
Priority date: 1989-12-07
Filing date: 1990-12-07
Publication date: 1993-04-22
Also published as: US5202348A; EP0504186A1; CA2070650A1; WO1991009027A1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】チアルブリン抗真菌および抗生剤関連出願の文献本出願は、１９８９年１２月７日に出願された特許出願第０７／４４７．８９３号の一部継続出願であり、参照によりここに引用する。

発明の分野本発明は、抗真菌および抗生剤として有用な、チアルブリン（Ｔｈｉａｒｕｂｒｉｎｅ）物質および緊密に関連する誘導体の新規な群に関する。さらに本発明は、チアルブリン物質の新規な単離方法に関“カエナクチス・ドウブラシ（Ｃｈａｅｎａｃｔｉｓ　ｄｏｕｇｌａｓｉｉ）およびエリフィラム・ラナタム（Ｅｒｉｐｈｙｌｌｕｍ　ｌａｎａｔｕｍ）からのジチアシクロへキサジエンポリアセチレン”　（Ｎｏｒｔｏｎ、Ｒ，Ａ、　；　Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ、　Ａｊ、　；　Ｔｏｗｅｒｓ、　Ｇ、Ｈ，Ｎ、　；　ＰｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒＹ、　２４（２）、　３５６−７　（１９８５））と題する公開物は、カエナクチス・ドウブラシの根および、エリフィラム・ラナタムの植物根並びに種培養物から単離した２つのジチアポリアセチレンを開示している。２つのジチアポリアセチレンはそれぞれ、化学名３−（ｌ−プロピニル）６（５−ヘキセン−３−イン−１−イニル）−１，２−ジチアシクロヘキサ−３，５−ジエンおよび３（ベント−３−イン−１−イニル）６（３−ブテン−１−イニル）−１，２−ジチアシクロヘキサ −３，５−ジエンである。これらの化合物には、通称名チアルブリンＡとチアルブリンＢが、それぞれ付けられている。

“カエナクチス・ドウブラシのクラウンゴール腫瘍系による抗生チアルブリンの製造”（Ｃｏｓｉｏ、　Ｅ、Ｇ、　；　Ｎｏｒｔｏｎ、　Ｒ，Ａ、　：　Ｔｏｗｅｒｓ。

Ｅ、；　Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ、Ａ、Ｊ、：Ｒａｄｒｉｇｕｅｚ、Ｅ、：Ｔａｗｅｒｓ、Ｇ、Ｈ，Ｎ、；　Ｊ、Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｏｌ、、　１２４　（１−２）、１５５−６４　（１９８６））と題する、もう１つの公開物はかなり抗菌活性を示すジチアシクロへキサジエンポリアセチレンを開示している。これらの化合物を蓄積した培養物は、カエナクチス・ドウブラシのクラウンゴール腫瘍培養物から赤色領域の選択で得られた。腫瘍は、アグロバクテリウム・ツメフェシエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｃｅ）株Ａ２７７て誘導された。発見された、主要なアセチレン生成物は、２つのチアルブリン、ＡとＢ１およびその相当するチオフェンであった。チアルブリンとチオフェンの平均収量はそれぞれ、２．５および０．２４　ｍｇ／ｇ乾燥重量であったが、無傷植物での値と類似している。生成物は維管束組織の中心部の回りに配置している細胞間隙に蓄積し、大きさが変わる赤い根瘤を形成する。その構造は、これらの化合物が蓄積する唯一の器官である、この植物の根の組織機構と天然のままで類似している。しかしながら、細根の形成は、腫瘍の増殖中のどの段階でも生じなかった。あきらかに、腫瘍系でのこれらのポリアセチレンの蓄積は、細胞トランスフォーメーションの直接の結果ではなく、現存する組織分化の二次作用である。

公開物“カエナクチス・ドウブラシの毛根培養物でのチアルブリン蓄積”　（Ｃｏｎｓｔａｂｅｌ、　Ｃ，Ｐ、　；　Ｔｏｗｅｒｓ、　Ｇ、Ｈ，Ｎ、；　Ｊ、　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ、、　１３３（１）、　６７−７２　（１９８８））は、アグロバクテリウム・リゾゲネス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）株ＴＲ７を使用して確立したＣ、ドウブラシの毛根培養物を開示している。１つの培養系が、急速な増殖を維持しながら、非−トランスフオーム対照根培養物と比較して２倍の量の抗真菌ポリイン、チアルブリンＡとＢを蓄積した。

培地への外因性ＮＡＡの添加では、速い増殖と高度のチアルブリン蓄積の組み合わせを、対照において倍増できなかった。毛根培養物は、対照と比較して、チアルプリンＡに対して少量のチアルブリンＢも産生した。

“天然に存在するポリインであるチアルブリンへの抗ウイルス特性”　（Ｈｕｄｓｏｎ　Ｊ、　Ｂ、　；　Ｇｒａｈａｍ　Ｅ、Ａ、　；　Ｆｏｎｇ　Ｒ；　Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ　Ａ、　Ｊ、。

Ｔｏｗｅｒｓ　Ｇ、）１．Ｎ、　；　Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄ　０（１）、　１９８６．５ｌ−５４）と題する公開物は、天然に存在するポリインであるチアルプリンＡに関する。

長波ＵＶ線（ＵＶ−Ａ）の存在下および非存在下での、その抗ウイルス特性を評価した。４つのウィルスと哺乳類細胞系を標的として使用した。２つの哺乳類ウィルス、ネズミサイトメガロウイルスとシンドビスウイルスは、両者とも膜を存しているが、ＵＶ−Ａ線の存在下でのみ化合物に非常に感受性であった。バクテリオファージＴ４は、ＵＶ−Ａでのみ、わずかに影響されたが、バクテリオファージＭ１３は完全に影響されなかった。それ故、チアルブリンＡは膜を含むウィルスに対して光活性である。対照的にマウス細胞は、ＵＶ−Ａの存在下で中程度に化合物に感受性で、暗闇でやや感受性が低かった。

チアルブリンＡは、“天然に存在するジチアシクロへキサジエンポリインであるチアルブリンＡの抗生特性”　（Ｔｏｗｅｒｓ　Ｇ、Ｈ，Ｎ、　；Ａｂｒａｍｏｗｓｋｉ　ｚ；　Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ　Ａ、Ｊ、　；　Ｚｕｃｏｏｎｉ　Ａ；　Ｐｌａｎｔａ　Ｍｅｄ　Ｏ（３）。

１９８５、２２５−２２９）にも論じられている。カエナクチス・ドウブラシの根からのジチアシクロへキサジエンであるチアルブリンＡは、アンホテリシンＢに匹敵できる濃度で、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）およびアルベルギルス・フミガッス（Ａｓｐｅｒｇｉる。チアルブリンＡは、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ）、枯草菌（Ｂａｃされたチオフェンは、光毒性で、生物学的作用にはＵＶ−Ａ光を必要とした。チアルブリンＡ１チオフェンＡおよびアルファーターチェニルの、上記の微生物並びにＣＩＯ細胞に対する作用を比較した。

ポリアセチレン群およびチオフェンは、“天然に存在するチオフェンとポリアセチレンの抗ウィルス作用の比較″（Ｈｕｄｓｏｎ　Ｊ、Ｂ。

；　Ｇｒａｈａｍ　Ｅ、　Ａ、　；　Ｃｈａｎ　Ｇ；　Ｆｉｎｌａｙｓｏｎ　Ａ、　Ｊ、　；　Ｔｏｗｅｒｓ　Ｇ、）１．Ｎ、　；　Ｐｌａ■ ｔａ　Ｍｅｄ　Ｏ（６）、　１９８６　（Ｒｅｅｄ、　１９８７）、　４５３− ４５７）に開示されている。

種々のチオフェンとポリアセチレン群を含む５つの天然に生じる化合物を、両者とも膜を有する２つの動物ウィルス、ネズミサイトメガロウイルスとシンドビスウイルスに対する光毒性活性に関して比較した。アルファーターチェニルは、両方のウィルスに非常に毒性であったが、長波紫外線の存在下でのみ毒性であった。

効力の順序は、アルファーターチェニルチアルプリンーＡ〉フェニルヘプタトリイン＞　ＡＣＢＰ−チオフェン〉　チオフェン−Ａ（チアルブリンＡの加水分解生成物）であった。ネズミ−ＣＭＶは、これらの化合物のいずれによっても不活性化されたが、依然として培養マウス細胞に有効に浸透し、通常のウィルス複製部位である細胞核に達することができた。結果を、光毒性チオフェンとポリアセチレンの可能な作用機構の見地から論じる。

１９８４年６月２６日に発行されたＴｏｗｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、のカナダ特許第１゜１６９．７６７号は、天然に存在する抱合ポリアセチレンを含む殺セル力リア組成物と、それを使用したセルヵリアの駆除法を開示する。

１９８４年８月１４日に許可された、Ｔｏｗｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、のカナダ特許第１、１７２．４６０号は、天然に存在する抱合ポリアセチレンを使用する、雑草の防除法を開示する。

１９８４年９月４日に許可された、Ｔｏｗｅｒｓ　ｅｔ　ａｌ、のカナダ特許第１、１７３．７４３号は、天然に存在する抱合ポリアセチレンを使用する、ベストの防御法を開示している。

本発明は、式：１式中、Ｒ１はＣＨ，またはＣＨ２Ｒ２であり；Ｒ，ｌｉＨ；　ＯＨ；　−ＣＨｏ；　Ｃ０ＯＨまたハＣ０ｏＲ４テアリ、ココニおいてＲ，はアルコールから誘導され；ＨａはＦ；　Ｃ１；　Ｂｒ；または■であり：ｎは１または２であり；そしてｍは１または２である：ただしＲ１がＣＨｌであり、ｎがｌでｍが２である場合、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ２ではなく；そしてＲ１がＣＬで、ｎが２でｍが１である場合、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ２ではない１で表される、抗真菌および抗細菌活性を育する新規な物質および薬学的に許容されるその塩を意図している。

抗真’ｍＭチｙルフＵンＥ　（ＣＨｊ−Ｃ−Ｃ−Ｒ−ＣＣ−Ｃ）２−ｃＨｏｗ− ｃＨ２ｏＨ＞：抗真菌１４７／ｌｚフｌＪンＦ　（ＣＨ３−ｃ−ｃ−Ｒ−（Ｃ− Ｃ）２−ｃＨｃｌ−ｃＨ２ｏＨ）；抗Ｘ菌ｉチア、＋ｌ、＋’＋ＪンＧ　（ＣＨ３−ｃ−ｃ−ａ−＜ｃ、ｃン、、−ｃｕｏＨ−ｃＨ２ｃｘ＞；オヨＵ抗真菌薬ｆフルｌ＋Ｊ　：／Ｈ（ＨＯＣＨ２−Ｃ″Ｃ−Ｒ−（（Ｃ）２−ＣＨ＝ＣＨ２）；［式中、Ｒはである１も意図する。

細菌は、約３２０−４００ナノメーターの波長帯の光と共に、あるいは特に、波長約３５０ナノメーターの光と共にチアルブリン物質で処置できる。

本発明は、式：［式中、Ｒ＋はＣＨｊまたはＣＨＪ３であり；Ｒ２はＨ：　ＯＨ；　−ＣＨｏ：　Ｃ００Ｉ（またはＣＯＯＲ４であり、ここにおいてＲ４はアルコールから誘導され；ＨａはＦ；　ＣＩ　Ｂｒ；またはｒであり；ｎは１または２であり；そしてｍは１または２である；ただしＲ１がＣＨｚであり、ｎが１でｍは２である場合、Ｒ２はＣ）ｌ＝ｃＨ２ではなく；そしてＲ１がＣＨ３であり、ｎか２でｍが１である場合、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ２ではない１のチアルブリン物質および薬学的に許容されるその誘導体を、製剤学的に許容される担体と共に含有してなる抗真菌組成物も意図する。

組成物では、Ｈａは塩素、Ｒ３は０ＨＳＲ３は０ＨＳｎは１およびｍは２であり得る。担体は、蒸留水、食塩水または他の製剤学的に許容される担体でありうる。

組成物は、暗闇で、さらに効果的には約３２０−４００ナノメーターの波長を有する、または特に、約３５０ナノメーターの波長を育する光の存在下で、大腸菌、黄色ブドウ球菌、糞便レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ　）　、ミコバクテリウム種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓス、アスペルギルス・フミガラスまたはクリプトコックス・ネオ）すルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）の防除にも同様に使用できる。

前述のチアルブリン物質は、組成物中に約１−１００ナノグラム／ｍｌ担体の濃度、または特に、約１０ナノグラム／ｍｌ担体の濃度で存在する。

本発明は、カンジダ・アルビカンスまたはアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉ　１ｌｕｓ）に感染している宿主を、抗真菌組成物の、式：Ｈ：　−ＨＣＣＩ−ＣＨｚＯｆ（；　ＣＨＯＨＣＨ２ＣｌまたはＣＨ＝ＣＨ，テある］の化合物にさらすことから成る、カンジダ・アルビカンスまたはアスペルギルスの防除方法も意図する。

カンジダ・アルビカンスは、カンジダ・アルビカンスに対して、約１．０＝約１００ナノグラム／ｍｌ蒸留水の範囲のチアルブリンの濃度で処置できる。

本発明は、チアルブリンＤおよび製剤学的に許容できる担体から成る抗真菌組成物に関する。チアルブリンＤは、７ナノグラム／ｍｌ担体の濃度で組成物中に存在できる。組成物中の担体は水または他のいずれの製剤学的に許容できる担体であってもよい。

本発明は、カリフォルニア州南部からカナダのブリティッシュ＝コロンビア州までの範囲の海岸地域にみられる一般的なブタフサ、アンプロシア・カミソニスＣＡｍｂｒｏｓｉａ　ｃｈａｒｎｉｓｓｏｎｉｓ）アステラセア（ＡｓｔｅｒａｃｅａｅＸヘリアンチ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｅａｅ）族）の抽出物から単離した、新規なジチアシクロへキサジエン化合物群の発見に基づく。根組織の抽出物から単離した新規な化合物は、著しい抗真菌および抗細菌活性を存することが見いだされた。

カエナクチス・ドウブラシ、Ａ、カミソニア、および他の種を含むアステラセア科のものから以前に単離されたジチアシクロへキサジエンに構造がいくらか類似している化合物、すなわちチアルブリンＡとＢは総称的に造語チアルブリンと称されてきた。

発見された新規なチアルブリン物質および、その緊密に関係している同族体は以下の一般式：［式中、Ｒ＋はＣＨ，またはＣＨ，Ｒ，であり；Ｒ２は：Ｒ３はＨ；　ＯＨ；　−ＣＨｏ；　Ｃ０ＯＨまたはＣＯＯＲ４てあり、ここにおいてＲ４はアルコールから誘導され；ｆ（ａはＦ；　Ｃ１；　Ｂｒ；　Ｉであり；ｎは１または２であり；そしてｍは１または２である；ただしＲ＋がＣＨ３であり、ｎが１でｍが２である場合は、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ７ではなく、Ｒ１がＣＨ３、ｎが２でｍが１である場合は、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ２ではない］で表される。

一連の５つの新規な物質が化学的に同定され、総称者チアルブリンと指名され、以下の文字表示が与えられた：２、チアルブＵ　ンＥ：ＣＣＨ３−Ｃ＝Ｃ−Ｒ− ＣＣ＝Ｃ）２−ＣＨＯＨ−ＣＨ２０Ｈ）：３、チアルブ’Ｊ　ンＦ：（ＣＨ，− Ｃ’Ｃ−Ｒ−（Ｃ＝Ｃ）２−ＣＨＣＩ−ＣＨｚＯＨ）；４、チア／Ｉ、プリンＧ：（ＣＨｓ−Ｃ＝Ｃ−Ｒ−（Ｃ＝Ｃ）ｚ−ＣＨＯＨ−ＣＨｘＣυ；および５、チア）Ｉｖブ’）　：／　ｌ（：　（ＨＯＣＨ２−ＣＥＣ−Ｒ−（ＣＥＣ）　！− ＣＨＥＣＨ２）　；ここでＲは治療上有効なチアルブリン抗真菌および抗細菌剤は、以下の工程から成る方法で製造する：（ａ）全植物、植物の部分またはその組織培養物を含む、例えばアンプロシア・カミソニス（ｖａｒ、　）のような、チアルブリンを含むアステラセア科の植物組織を水で洗い、自然乾燥するか、凍結するか、あるいは種々の有機溶媒（すなわちヘキサン、メタノール等）中で保存する；（ｂ）　（ａ）で得られた根および／または種々の植物部分（すなわち根、葉、茎等）を、直接凍結乾燥するか、または根の皮を剥がしモして／または凍結乾燥するか、または混合し、あるいは直接使用する；（Ｃ）　（ａ）または（１＋）で得られた植物部分を、種々の有機溶媒（ヘキサン、酢酸エチル、メタノール等）でパーコレーションにより、あるいは種々の溶媒（ヘキサン、メタノール等）を使用した冷有機溶媒抽出とその後の濾過または遠心分離により、または超臨界流体抽出法（ＳＦＥＸすなわち抽出用溶媒として二酸化炭素またはアンモニアを使用）により抽出する；（ｄ）工程（Ｃ）から得られた有機溶媒含有抽出物を真空で濃縮し、移動相として水＋水混和性有機溶媒を用いてゲル濾過（例えばセファデックスで）にかける；または、これとは別に（ｅ）工程（Ｃ）から得られた有機溶媒含有抽出物を真空で濃縮し、移動相として緩衝液の存在または不在下に水、および／または水＋水混和性有機溶媒を使用して、逆相ＴＬＣ、カラムまたはＨＰＬＣクロマトグラフィーにかける：あるいは、これとは別に、（ｆ）工程（Ｃ）から得られた有機溶媒含有抽出物を真空で濃縮し、移動相として種々の有機溶媒（すなわちフレオン、低沸点炭化水素、単独でまたは例えばジエチルエーテル、酢酸エチル等の極性調節剤と混合して）を用いてシリカゲルＴＬＣ，、カラムまたはＨＰＬＣクロマトグラフィーにかける；あるいはこれとは別に（ｇ）工程（Ｃ）から得られた有機溶媒含有抽出物を真空で濃縮し、種々のガスを単独で使用するか、または極性調節剤（すなわち水、メタノール等）と混合して５ＦＥ（超臨界流体抽出法）または５ＦＣ（超臨界流体クロマトグラフィー）を実施する；または、これとは別に（ｈ）工程（Ｃ）から得られた有機溶媒含有抽出物を真空で濃縮し、無水二相系（すなわちヘキサン／アセトニトリル等）を使用して向流分配クロマトグラフィーにかける：または、これとは別に（ｉ）工程（Ｃ）から得られた有機溶媒含有抽出物を真空で濃縮し、ガスクロマトグラフィーにかける：（ｊ）チアルブリン含有画分は、赤あるいは赤／茶の発色団バンドを示し、ＵＶまたは可視（λ＝２００−５５０ｎｍ）検知器で検出する；（ｋ）工程（ｄ）の通りに、［ＪＶ／可視−活性画分を集め濃縮して、チアルブリンを得る；または、これとは別に（１）工程（ｅ）の通りに、ＵＶ／可視−活性画分を集め濃縮して、チアルブリンを得る；または、これとは別に（ｍ）工程（ｆ）の通りに、ＵＶ／可視−活性画分を集め濃縮して、チアルブリンを得る；または、これとは別に（ｎ）工程（ｇ）の通りに、ＵＶ／可視−活性画分を集め濃縮して、チアルブリンを得る；または、これとは別に（０）工程（ｈ）の通りに、ＵＶ／可視−活性画分を集め濃縮して、チアルブリンを得る；または、これとは別に（ｐ）工程（ｉ）の通りに、ＵＶ／可視−活性画分を集め濃縮して、チアルブリンを得る４、３　チアルブリンの適用本発明の新規なチアルブリン化合物は、暗闇で強い抗真菌活性を示し、３２０− ４００ｎｍの波長帯の、特に３５０ｎｍの紫外線Ａ光と共に強い抗真菌および殺菌活性を示す。

これらの物質は、暗闇でカンジダ・アルビカンス、アルベルギルス・フミガラス、クリプトコックス・ネオフォルマンスの株を死滅させるのに有効である。これらは、大腸菌、黄色ブドウ球菌、糞便レンサ球菌、ミコバクテリウムおよびエンテロバクタ−・アエロゲネスを死滅させるのに有効である。

それ故、チアルブリン化合物は、有利には、上記の真菌および細菌により誘発された感染の治療に使用する。例えばチアルブリンＤと称するエポキシド化合物は、新規な複合イオウ含有物質である。チアルブリンＤは特定の式コで表すことができる。

非常に低濃度での極めて高い抗真菌活性は、’ｈｎ　ｖｉｖｏすなわちヒト患者に対する有用性を示唆する。

化学薬品、チアルブリンＤは光感受性であり、光線下で相当するチオフェンに分解する。それ故、この化学薬品を暗闇で保存し、有効であるためには青色光線および紫外線の不在下で抗真菌治療を実施する必要がある。

以下の表にした一連の試験で、チアルブリンＤ、Ｅ、Ｆ、ＧおよびＨが非常に低い濃度で、すなわちナノグラム／ｍｌの範囲で、カンジダ・アルビカンスの増殖を阻止することを示す。

以下の実施例は本発明を説明するものであるが、いかなる場合もその制限を意図するものではない。

アンプロシア・カミソニスは、カルフォルニア州マリン力つンティ（Ｍａｒｉｎ　Ｃｏｕｎｔｙ）から、およびブリティッシュエコロンビア州タイアスワーセン（Ｔｉａｓｗａａｓｓｅｎ）から採集した。

凍結乾燥根（３５０−５００ｇ）を、冷ＭｅＯＨで抽出し、３０°Ｃで真空濃縮し、ＭｅＣＮに再溶解した。合わせた抽出物をＣＨＣｌ、に取り、乾燥し蒸発させた。残留物をシリカゲル６０カラム（Ｍｅｒｃｋ７０−２３０メツシユ）でクロマトグラフィーにかけ、ｎ−へブタン−〇−ヘキサン（１：４）から勾配を付けてｎ−ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（２：３）に変え、最後にＥｔＯＡｃで溶出した。抽出物とＨＰＬＣ分析の画分を乾燥させ、ＭｅＣＮに再懸濁した。

試料（２０および１００μｌ）を、流速１．０ｍｌ／分でＭｅＣＮ−ＨＪ（１８ニア）を使用し、ＭＣｌ−１０逆相カラム（４ｘ　３００＋ｎｍ）を用いたパリアン（Ｖａｒｉａｎ）５０００液体クロマトグラフに注入した。チアルブリンＦとＧとＨの良好な分割はＭｅＣＮ−ＨＪ（２：３および１：１）で達成され、各化合物は回収ＨＰＬＣ画分をＣＨＣｌ、ｚで抽出して単離した。全ての処理は、化合物の光分解を防ぐために薄明かりで実施した。

チアルブリンＤ：　ｕｖλＭｅＣＮ　、、、　ｎｍ：４８４．３４４．２７２　；　ＭＳ　ｍ／ｚ（相対強度）：２４４　（Ｍ）　＋（１００）　、　２１４　、（７５）、１８２　（２１）、１７０　（９８）。

チアルブリンＥ：ＵＶλＭｅＣＮ　、、、　ｎｍ：４８２．３４２．３２６（ｓｈ）；　ＭＳ　ｍ／Ｚ（相対強度’）：　２６２　（Ｍ）＋（１００）　、２３１　、（Ｍ−ＣＨ２Ｏｆ（）　＋（８０）、！９９（Ｍ−ＣＨ２０Ｈ−３）　＋　（１５）。

チアルブリンＦ：　ＵＶ−ｖｉｓ　λＭｅＣＮ　、、、　ｎｍ：４８４．３４４．２３０　；ＭＳ　ｍ／２（相対強度’）：　２７９．９７８３　（Ｍ）　＋（８０）、２４９　［Ｍ−ＣＨ２０Ｈ］　’　（３０）、２４８　（Ｍ−３）”　（５０）、２１７　ｃＭ−ｓ−ｃＨ，ｏｔｕ　＋、（４８）。

チアルブリンＱ：ＩＪＶ−ｖｉＳλＭｅＣＮ　、、、　ｎｍ：４８４．３４２．２２Ｂ　；ＭＳ　ｍ／２（相対強度）：　２７９．９７８０　（Ｍ）　”　、（１００）　、２４８　（Ｍ−Ｓ）　”　、　（＋８）　２４４　（Ｍ−ＨＣＩ） ”　（５０）、２３１　、［Ｍ−ＣＨ２０Ｈ］　”　（９８）、１９９　（Ｍ− ＣＨ２Ｃ１−３）”　（３０）。

チアルブリンＨ：　［ＪＶ−ｖｉｓλＭｅＣＮ　、、、　ｎｍ：　４９０．３５４．２３２　、ＭＳｍ／ｚ（相対強度）：　２４４．０００９　（Ｍ）　”　、（１００）、２２７（Ｍ−ＯＨ）　”、（５）、２１２　（Ｍ−３）　”　（６５）、１９５　（Ｍ−３−ＯＨ）”　（６）。

５．２．　チアルブリンの生物学的活性以下の実験は、本発明のチアルブリンの生物学的活性を説明する。

（本頁以下余白）表１２４時間さらしている間に５０％成長阻止（μｇ／ｍｌ）を引力ンノダ・アルビカンス　０．０２８　０．０００６　０．００！４　０．０３７Ｐ８１５　０．．０３５　０．１２　０．０２４　＞　５．０Ｌ１２１０　０．０３５　０．０４７　０．０２７　２．８ＷＥＨＩ−３０，０２７０，０５０，Ｏｊ　１．９３丁３　０．４５　０．４８　０．１２　＞　５．０Ｐ８１５　＝マウス肥満細胞腫Ｌ１２１０　＝マウスリンパ球白血病ＷＥＨＩ−３＝マウス骨髄性単球３Ｔ３＝マウス線維芽細胞表２異なる動物細胞系に対する、チアルブリンと表２は、動物細胞の５０％成長阻止に必要な濃度が、カンジダ・アルビカンスの５０％成長阻止に必要な用量より何倍、高いかを示す。

！ｌ　八　＝；　々　Ｐ１８！Ｉ１８！Ｉ　閣　會　シ　印駆　全　圏！、２亥ト一二へ　二　女　ＦｉＥ　旬表５２　糞便レノサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｌｓ）　２９２１２　１０．０００３　大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｌｃｈｌｉ　ｃｏｌｔ）　２５９９２　１．０００４　緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｅｉｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｌｎｏｓｉ）　２７８５３　１０．０００５　黄色ブドウ球１ＩＩ（Ｓｆ富ｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅＩＩｓ）　２９２１３　１０．０００６１ノテＣバクター・ア１０ゲ本Ｘ（Ｆ、ｎＬｅｒｏｂｉｃＬｅｒｉｅｒｏｇｅｎｅｓ）３５０２９１０．０００７　肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｌｅｌｌａ　ｐｎｅ＋ＩＩ＋ｏｎｌａｅ）　３３４９５　１０．０００８　表皮ブドウ球菌（Ｓｌａｐｈｙｌｏｃ＋＋ｃｃａｓ　ｅｐｌｄｅｒｓｌｓ）　２９９７２　１０．０００９　クリ１トプテカス°ネｆ７ｔｈ７ンス（Ｃｒｙｐｌｏｃｏｃｃｎｓ　ｎｅｏｆｏｒｍｘｎｓ）　Ｆ５４８　６４１０、ｊンブダ・＆ｘ−Ｆ）Ｏビカリス（ＣｔｎｄｌｄａＰｓｅｕｄｏｔｒｏｐｌｃｉｌｌｓ）１０．０００１１　黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ（ｓｅ４ｍｃｙｌｌｌｕｒｅｓ、））’１０．０００１２　緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｘｓ　ａｅｒｕｇｌｎｏｓａ＋　１４１　＞　１０．０００１３　緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｓｏｎｘｓ　ｉｅｒｕｇｌｎｏｓａ）　２０５　＞　１０．０００１４　緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎｘｓ　ｉｅｒｕｇｌｎｏｓａ）　３Ｅ５　１０．０００１５ヂノトモｔス・マルトフイリ７（Ｘａｎｌｈｏｓｏｎａｓｍａｌｌｏｐｈｌｌｌａ１３Ｂ６１０．０００１６　黄色ブドウ球菌（ＳＬａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｏｓ　ａｕｒｅｕｓ（ｍｅｌａｅｙｌｌｌｕ　ｒｅｓ、））　８４２８７　１０．０００１７．１’ｉＮバクター（Ａｃｌｎｅｔｏｂａｃｌｅｒ）Ｃ４２１，０００１８，７ノ＄１バククー（Ａｃｌｎｅｔｏｂａｅｌｅｒ）６Ｃ１０１，０００１９エツチσバクター・クロアカｚ（Ｅ＋ｕｅｒｏｂａｃ＋ｅｒｃｌｏａｅｏｅ＋Ｉ＾５１．０００２０エノテロバクター・クロアカニ（Ｅｎ＋ｅｒｏｂｉｃｌｅｒｃｌｏｍｃｏＩり９Ｅ５１．０００２１、　７スベルギルス（Ａｓｐｅｒｇｌｌｌｕｓ）　０５　３２２２、カンジダ（Ｃａｎｄｌｄａ）　０１　１６２３　カンジダ（Ｃａｎｄｌｄａ）　０２　１６２４　カンジダ（Ｃｉｎｄｌｄｉ）　０３　６４２５　カンジダ（Ｃａｎｄｌｄｍ）　Ｒ４１９７＋６２６エンテａバクター５ｐ（Ｅｎｌｅｒｏｂｉｃｊｅｒｓｐ、）９Ｅ７１０．０００２７　霊菌（Ｓｅｒｒｍｌｌａ　ｍａｒｓｃｅｎｅｓ）　３Ａ３　１０．０００２８　単球症リステリア（Ｌｌｓｌｅｒｌｍ　ｓｏｎｏｃｙｌｏｇｅｎｅｓ）　１０６　１０．０００２９　単球症リステリア（Ｌｌｓｌｅｒｌａ　ａｏｎｏｃｙｌｏｇｅｎｅｓ）　３０１　１０．０００３０　エッチｏｆｆ＋倉Ｘ・７ｒ１食リス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｆｉｅｃｉｌｌｓ）　ＩＡ３　１０．０００３１　クレブシラ種（にＩｅｂｓｌｅｌｌｍ　ｓｐ、）　１．０００３２　カッシダ（Ｃａｎｄｌｄａ）　Ｆ６１７　８３３、　エンテロコテカスげンタマインノ耐性）（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ（ｇｅｎｔａｓｙｃｌｎ　ｒ、ｅｎ、、））　１０３４、　Ｔスベｌｆｌス（Ａｓｐｅｒｇｌｌｌｕｓ）　Ｆ２Ｏ３６４３５１ノテロゴ９１ス・フｒＸｊリス（Ｅｎｌｅｒｏｃｏｅｃｕ　ｆｉｅｃａｌｌｓ）　２０７　１．０００結果は寒天希釈法で得た。

種々の用量のＴｈＤの入ったミューラ・ヒントン（Ｍｕｔｔｅｒ　ＨＩｎ＋ｏｎ）寒天プレート（ｐＨ−７，４）にｌｏ’ｃｆｕ／スポットで接種し、３４℃で２１時間、インキュベートした。

ＭＩＣは増殖しない最小濃度である。

表６チアルブリンＡ、Ｄ、Ｅ、に対するアスペルギルス・フミガラスチアルブリンＡ　１０，０００　．２７チアルブリンＤ　１０．０００　３２チアルブリンＥ　１０，０００　５０結果は寒天希釈法で得た。ディスクの直径−６ｍｍ、−°＝アイスクの直径以上のゾーンなし表７異なる方法によるＬＣ６゜（２４時間）データ２４時間中にカンジダ・アルビカンスの５０％増殖阻止に必要な用カンジダ・アルビカンス　４０７６　６４５６Ｐ８１５肥満細胞腫　８１　８５　２８　５０．０００チアルブリンＤ　（ＴｈＤ）の分解に間するデータは、２４時間の暴露でカンジダ・アルビカンスの５０％増殖阻止（ＬＣ，。２４時間）に必要な濃度の変化として表した。

表８Ａ “ペンヂクール・ホワイト・ライト（“Ｂｅｎｃｈ″Ｃｏｏ１２４時間　”５，０００６時間　’　５．００００．５時間　１４００分　７表８Ｂ水溶液（サブロー・デキストロース培地）中のＴｈＤの温度および時間依存分解２４時間　２１０　１１０６時間　８５４２２時間　３３２２０．５時間　２０１６０時間　７７表９種々のｐＨ（５，６，７，８）のリン酸ナトリウム緩衝液にＴｈＤを２時間さらした時の影響表１０サブロー・デキストロース培地（ＳＡＢ）へのＳＡＢ　＋　５％ＦＢＳ　１４ＳＡＢ　＋　１０％　ＦＢＳ　、　１６表１２種々の細胞数のカンジダ・アルビカンスを阻１０’／ｍ１　１６１．０”／ｍｌ　４２表１３３種のチアルブリンＦ、Ｇ、Ｈ１および化合物Ｘが単離され、その有効性が見い出されたカンジダ・アルビカンス　６　８　４　’５．０００Ｐ８１５肥満細胞腫　１．４０　９０　５９　−植物中の濃度　ＨＬ−ＨＨＬＬＬ分解物質　ＴＴＴＴＴＴＴＴ安定性　ＬＬＬＨＨＨＨＨ抗−カンジダ　ＹＹＹＹＹＹＹＹ抗−アスペルギルス　ＹＹＹＹＹＹＹ？抗−細菌　ＹＹＹＹＹＹＹ？記号の説明Ｈ＝高：Ｌ＝低；Ｔ＝チオフェン、Ｙ＝育；ｙ＝低活性；？＝試験せず当分野で習熟した者にはあきらかであるように、前述の開示にかんがみて、本発明の実施にあたり本発明の精神と範囲を逸脱することなく、多くの変更並びに修飾が可能である。

夏杓本発明は抗真菌剤および抗生物質として宵月な、新規チアルブリン物質並びに密接に関連した誘導体に関する。

国際調査報告国際調査報告Ｃ＾９０００４３５ＳＡ　４２４２６

Claims

【特許請求の範囲】

１．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１はＣＨ３またはＣＨ２Ｒ３であり；Ｒ２は▲数式、化学式、表等があります▼；−ＣＨＲ２−ＣＨ２Ｒ２；−ＨＣＨａ−ＣＨ２Ｒ３；−ＣＨＲ３− ＣＨ２Ｈａ；ＣＨ＝ＣＨ２であり；Ｒ３はＨ；ＯＨ；−ＣＨＯ；ＣＯＯＨまたはＣＯＯＲ４であり、ここにおいてＲ４はアルコールから誘導され；ＨａはＦ；Ｃｌ；Ｂｒ；またはＩであり；ｎは１または２であり；そしてｍは１または２である；ただしＲ１がＣＨ３であり、ｎが１でｍが２である場合は、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ２ではなく；そしてＲ１がＣＨ３であり、ｎが２でｍが１である場合は、Ｒ２はＣＨ＝ＣＨ２ではない］で表される抗真菌および抗細菌活性を有する物質およびその薬学的に許容できる塩。
２．Ｈａは塩素である、請求項１に記載の物質。
３．Ｒ３はＯＨである、請求項１に記載の物質。
４．Ｒ３はＯＨである、請求項２に記載の物質。
５．ｎは１でｍは２である、請求項４に記載の物質。
６．抗真菌薬チアルブリンＤ（Ｔｈｉａｒｕｂｒｉｎｅ　Ｄ）。 ▲数式、化学式、表等があります▼
７．抗真菌薬チアルブリンＥ（Ｔｈｉａｒｕｂｒｉｎｅ　Ｅ）。 ▲数式、化学式、表等があります▼
８．抗真菌薬チアルブリンＦ（Ｔｈｉａｒｕｂｒｉｎｅ　Ｆ）。 ▲数式、化学式、表等があります▼
９．抗真菌薬チアルブリンＧ（Ｔｈｉａｒｕｂｒｉｎｅ　Ｇ）。 ▲数式、化学式、表等があります▼
１０．抗真菌薬チアルブリンＨ（Ｔｈｉａｒｕｂｒｉｎｅ　Ｈ）。 ▲数式、化学式、表等があります▼
１１．細菌を、約３２０−４００ナノメーターの波長帯の光と共にチアルブリン物質で処置する、請求項４に記載の物質。
１２．細菌を、約３５０ナノメーターの波長の光と共にチアルブリン物質で処置する、請求項４に記載の物質。
１３．式： ▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１はＣＨ３またはＣＨ２Ｒ３であり；Ｒ２は▲数式、化学式、表等があります▼；−ＣＨＲ３−ＣＨ２Ｒ３；−ＨＣＨａ−ＣＨ２Ｒ３；−ＣＨＲ３− ＣＨ２Ｈａ；ＣＨ＝ＣＨ２であり；Ｒ３はＨ；ＯＨ；−ＣＨＯ；ＣＯＯＨまたはＣＯＯＲ４であり、ここでＲ４はアルコールから誘導され；ＨａはＦ；Ｃｌ；Ｂｒ；またはＩであり；ｎは１または２であり；そしてｍは１または２である；ただしＲ１がＣＨ３で、ｎが１でｍが２である場合はＲ２はＣＨ＝ＣＨ２ではなく；Ｒ１がＣＨ３で、ｎが２でｍが１である場合はＲ２はＣＨ＝ＣＨ２ではない］で表されるチアルブリン物質またはその薬学的に許容できる塩および製剤学的に許容できる担体を含有して成る抗真菌組成物。
１４．Ｈａは塩素である、請求項１３に記載の組成物。
１５．Ｒ３はＯＨである、請求項１３に記載の組成物。
１６．Ｒ３はＯＨである、請求項１４に記載の組成物。
１７．ｎが１でｍが２である、請求項１６に記載の組成物。
１８．担体は蒸留水である、請求項１６に記載の組成物。
１９．波長約３２０−４００ナノメーターを有する光線の不在または存在下で、大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）、糞便レンサ球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）、ミコバクテリウム種（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ）、またはエンテロバクター・アエロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ　ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）の防除に使用する、請求項１６に記載の組成物。
２０．波長約３５０ナノメーターを有する光の存在下で、大腸菌、黄色ブドウ球菌、糞便レンサ球菌、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、またはエンテロバクター・アエロゲネスの防除に使用する、請求項１６に記載の組成物。
２１．カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａａ　ａｌｂｉｃａｎｓ）の防除に使用する、請求項１６に記載の組成物。
２２．アスペルギルス病を防御するために使用する、請求項１６に記載の組成物。
２３．チアルブリン物質が、約１−１００ナノグラム／ｍｌ担体の濃度で組成物中に存在する、請求項１６に記載の組成物。
２４．チアルブリン物質が、約１０ナノグラム／ｍｌ担体の濃度で組成物中に存在する、請求項１６に記載の組成物。
２５．カンジダ・アルビカンスまたはアルペルギルス・フミガツス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｕｍｉｇａｔｕｓ）を、抗真菌有効量の、式：▲数式、化学式、表等があります▼ ［式中、Ｒ１はＣＨ３またはＣＨ２ＯＨであり；そしてＲ２は▲数式、化学式、表等があります▼；ＣＨＯＨ−ＣＨ２ＯＨ；−ＨＣＣｌ−ＣＨ２ＯＨ；ＣＨＯＨ −ＣＨ２ＣｌまたはＣＨ＝ＣＨ２である］の化合物にさらすことから成るカンジダ・アルビカンスまたはアルペルギルス・フミガツスを防除する方法。
２６．カンジダ・アルビカンスを処置する、請求項３０に記載の方法。
２７．カンジダ・アルビカンスを、約１．０−１００ナノグラム／ｍｌ蒸留水の範囲の、カンジダ・アルビカンスに対するチアルブリン濃度で処置する請求項２６に記載の方法。
２８．（ａ）アンブロシア・カミソニス（Ａｍｂｒｏｓｉａ　ｃｈａｍｉｓｓｏｎｉｓ）の植物またはその一部を、ヘキサン、酢酸エチルおよびメタノールから成る群から選ばれる溶媒で、あるいは二酸化炭素またはアンモニアから成る組成物で抽出し；（ｂ）工程（ａ）で得られた抽出物を濃縮し、この濃縮抽出物を、ゲル濾過、逆相薄層クロマトグラフィー、高圧液体クロマトグラフィー、超臨界流体クロマトグラフィー、超臨界流体抽出、ガスクロマトグラフィーおよび向流分配クロマトグラフィーから成る群から選ばれる分離法にかけ；そして（ｃ）λ＝２００−５５０ｎｍで紫外線または可視光線検知器で検知されるチアルブリン含有画分を集める；ことから成る、チアルブリン組成物を得る方法。