JPH05500970A

JPH05500970A - アザ大環状化合物を含む結合体化合物及びその製造方法

Info

Publication number: JPH05500970A
Application number: JP3507526A
Authority: JP
Inventors: パーカー，デビッド; ビーリィ，ナイジェル，ロバート，アーノルド; ミリカン，トーマス，アンドリュー
Original assignee: セルテック　リミテッド
Priority date: 1990-04-18
Filing date: 1991-04-18
Publication date: 1993-02-25
Also published as: EP0457438B1; DE69108771T2; AU7672891A; GB9008724D0; CA2058985A1; AU652749B2; ATE120964T1; WO1991016078A1; EP0457438A3; DE69108771D1; EP0457438A2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は官能基化アザ大環状化合物（ａＺａｍａｃｒｏｃｙｃｌｅｓ）を含む結合体化合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　）およびその金属錯体、それらの調製方法、および診断や治療におけるそれらの使用に関する。

発明の背景金属イオンの蛋白、ペプチドそして他の低分子系への結合は急速に拡大している技術であり、研究や産業界そして特に医学において広く応用されており、かつ将来性みをつけている。このような金属標識抗体は特に医学に広く使用されており、例えば金属イオンをインビトロおよびインビボで特異的な組織型に対して結合させることを目標としている。すなわち金属標識抗体は特異的な組織型の検出（例えば何らかの形で金属を検出できるコンピューター断層撮影技術を使用する）や、細胞異常の治療（例えば金属イオンとして細胞毒性核種を使用して哺乳動物の腫瘍を治療）に使用されている。

従来は金属イオンの蛋白（例えば抗体）への結合は、非環状キレート（例えば置換ジエチレントリアミン五酢酸（ガンソウら（Ｇａｎｓｏｗ　Ｏ，Ａ、　ｅｔ　ａｌ、　）　、［ｎｏｒｇ。

Ｃｈｅｍ、第２５巻、２７７２頁（１９８６年））、またはエチレンジアミン四酢酸（メアレスら（Ｍｅａｒｅｓ　Ｃ，Ｆ。

ｅｔ　ａｌ、）　、Ａｃｅ、　Ｃｈｅｍ、　Ｒｅｓ、第１７巻、２０２頁（１９８４年））を抗体に共有結合させて複合体化することにより行われてきた。しかしこのような非環状複合体は、酸−触媒膜複合体化または血清中のＣａ”＋またはＺ　ｎ　”による競合キレート結合、またはトランスフェリンによる競合の結果として、インビボで不安定になりやすい（モーレインら（Ｍｏｅｒｌｅｉｎ、　Ｓ、　Ｍ、　ｅｔ　ａｌ、）　Ｉｎｔ、　Ｊ。

Ｎｕｃ、　Ｍｅｄ、　Ｂｉｏｌ、第８巻、２７７頁（１９８１年））。

安定性かなくなるために非結合金属原子が体内で健康な組織（例えば骨髄）に細胞毒性効果を示すか、またはイメージング法のシグナル対ノイズ比を著しく低下させる。

抗体の標識に非環状キレートを使用することに対する別の方法は、大環状リガンド（ｍａｃｒｏｃｙｃｌｉｃ　ｌｉｇａｎｄｓ　）を使用することであり、これは多くの研究者により提唱されている（ガンソウら（Ｇａｎｓｏｗ　Ｏ，Ａ、　ｅｔ　ａｌ、　）　Ａｍ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｓｙｍｐ、　Ｓｅｒ、　）第２４１巻、２１５頁（１９８４年）：英国特許明細書第２１２２６４１号：国際特許明細書ＷＯ３９１０１４７５号及び８９１０１４７６号、そしてヨーロッパ特許明細書第３０５３２０号：およびモイら（Ｍｏｉ　Ｍ、　Ｋ、　）　Ａｎａｌ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ第１４８巻、２４９−２５３頁（１９８５年））。

我々は新規なりラスの官能基化アザ大環状化合物を見いたし、それらのいくつかは金属イオンと速度論的に不活性の錯体を形成することができる。この大環状化合物は蛋白（特に抗体）への結合に特に有用であり、インビボで有利に安定な複合体を与える良好な会合速度で金属と結合することがてき、有利な生体分布プロフィールを有する結合体化合物を与える。

すなわち本発明の１つの態様によれば、蛋白、ペプチドまたは炭水化物に結合した一般式（１）：（式中、Ａは−Ａｌｋ’−または−Ａｌｋ３Ｎ　（Ｒ”）Ａｌｋ’−基であり；Ａｌｋ’、Ａｌｋ”、Ａｌｋ’およびＡｌｋ’は同じであるかまたは異なっており、それぞれ任意に１つまたはそれ以上のＣ＋−ｓアルキル基で置換されているＣ１−４アルキレン鎖てあり：Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同しであるかまたは異なっており、それぞれ水素原子または−Ａ１ｋＲ５（ここてＡｌｋは任意に置換された直鎖または分岐鎖Ｃ１−６アルキル基であり、Ｒ″は水素原子または−Ｃｏ２Ｈ１−ＣＯＮＲ’　Ｒ７（ここてＲ６とＲ７は同しであるかまたは異なっておりそれぞれ水素原子またはアルキル基である）、または−Ｐ（Ｘ’）（Ｘ”Ｒ”）Ｌ基（ここてＸｌとＸ２はそれぞれ酸素またはイオウ原子であり、Ｒ１は水素原子またはアルキル基であり、Ｌは脂肪族、芳香族、またはへテロ芳香族基またはリンカ−基である）である）であるが、ただしＲｌ　、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つがＡＩｋＰ　（Ｘ’　）（Ｘ”　Ｒ”　）Ｌ　（ここでＬはリンカ−基である）である）の結合体化合物：およびそれらの保護された誘導体ならびにそれらの金属錯体および／または塩が与えられる。

式（１）（そして適宜、本明細書中の後述する式）は、その混合物を含む関連する化合物のすべての立体異性体を包含することは理解されるであろう。

式（１）の化合物は、蛋白、ペプチドまたは炭水化物中へ任意のチオール、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシ、アルデヒド、芳香族またはへテロ芳香族基を介して結合してもよい。

本発明の好適な態様において、抗体に結合した式（１）の化合物またはその金属錯体および／または塩を含む結合体化合物が与えられる。

本発明の結合体化合物は、任意の蛋白、ペプチドまたは炭水化物分子に結合した２つ以上の式（１）の化合物を含有してもよい。

式（１）の化合物中のＡｌｋ’　、Ａｌｋ”　、Ａｌｋ’およびＡｌｋ’は、それぞれ任意に１つまたはそれ以上の０１−６アルキル（例えばメチルまたはエチル基）で置換された一ＣＨ２−１（ＣＨ２）　２−１（ＣＨ２）３−または−（ＣＨ２）４−ｊＪｉでもよい。

Ａｌｋ’　、Ａｌｋ２、Ａｌｋ’およびＡｌｋ’で示される置換アルキル基の例としては、 −ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−またはＣＨ２Ｃ（ＣＨ２）２−がある。

式（１）の化合物中のＬ基が脂肪族の基のとき、例えばそれは任意に１つまたはそれ以上の異種原子が介在する任意に置換された直鎖または分岐鎖アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、またはアルキルチオ基、またはシクロアルキルまたはシクロアルケニル基でもよい。Ｌが芳香族の基のとき、それは例えばアリールまたはアラルキル基でもよい。して示されるヘテロ芳香族基にはへテロアリールやヘテロアラルキル基なとがある。

従って例えば、Ｌは任意に一〇−１−Ｓ−または−ＮＲ”　（ここてＲａは水素原子またはＣ＋−ｔアルキル基である）から選択される１つまたはそれ以上のへテロ原子が介在する任意に置換されたＣ１−２゜アルキル（例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチルまたはｔ−ブチルなとのＣ４−６アルキル）　、Ｃｔ−１ｏアルケニル（例えばエテノ、プロペン、！−ブテン、２−ブテン、または２−メチレンプロペンなどのＣ２−、アルケニル）、Ｃ，、。アルキニル（例えばエテノ、プロピン、ｌ−ブチン、または２− ブチンなど一ブトキシ、Ｓ−ブトキシ、またはｔ−ブトキシなとの０１−、アルコキシ）またはＣ１−１゜アルキルチオ（例えばメチルチオ、エチルチオ、ｎ− プロピルチオ、ｉ−プロピルチオ、ｎ−ブチルチオ、Ｓ〜ブチルチオ、またはｔ −ブチルチオなとのＣ１−６アルキルチオ）基、例えばアルコキシアルキル（例えばメトキシメチル）、アルキルチオアルキル（例えばメチルチオメチル）またはアルコキシアルコキシまたはアルキルチオアルコキシ（例えばメトキシメトキシまたはメチルチオメトキシ）基：またはＣ３−８シクロアルキル（例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシル）またはＣ４−、シクロアルケニル（例えばシクロブテン、シクロペンテン、シクロヘキセン、またはシクロへキサジエン）基がある。

Ｌがアリール基であるとき、それは例えば任意に置換されたＣ　＠−１アリール基（例えば任意に置換されたフェニルまたはナフチル基）でもよい。

Ｌかアラルキル基のとき、それは例えば任意に置換されたＣ１−１□アルＣ３− 、アルキル基（例えばベンジルまたはフェネチルのようなフェンＣ＋−ｓアルキル基）でもよい。

Ｌかへテロアリール基のとき、それは例えば、−〇−１−ＮＨ−または−Ｓ−から選択される１つまたはそれ以上のへテロ原子を含有する任意に置換されたＣ　ａ−＋ｏヘテロアリール基、例えばピリジル、フラニルまたはチェニル基でもよい。

Ｌがヘテロアラルキル基のとき、それは例えば、−〇−１−ＮＨ−または−８− から選択される１つまたはそれ以上のへテロ原子を含有する任意に置換されたＣ４−１゜ヘテロアルＣ＋−ｇアルキル基、例えばチェニルＣ１−６アルキル（例えばチェニルメチル）またはピリジルＣ＋−Ｓアルキル（例えばピリジルメチル）基でもよい。

式（１）の化合物のＬ基中に存在するアルキル、アルコキシ、アリール、アラルキル、ヘテロアリールまたはヘテロアラルキル基上に存在する任意の置換体は、１つまたはそれ以上のハロゲン原子（例えば塩素、臭素、フッ素またはヨウ素原子）、またはヒドロキシＣＩ−ｓアルキル（例えばメチルまたはエチル）、Ｃｔ −アルコキシ（例えばメトキシまたはエトキシ）、Ｃ，−、アルキルチオ（例えばメチルチオ）、アミノ（−ＮＨ，）　、置換アミノ（例えばＮＲ７Ｒ”（ここでＲ７は水素原子またはＣ５−６アルキル基であり、ＲｓはＣ＋−ｓアルキル基（例えばメチルアミノまたはジメチルアミノ）である）、ニトロ、シアノ、カルボキシル、−ＣＯＮＲ＠Ｒ７（例えば−ＣＯＮＨ２）　、−Ｓｏ、ＮＲ１Ｒ２（例えば５０２ＮＨｚ　＞またはＣ３１シクロアルキル（例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルまたはシクロヘキシル）基から選択される１つまたはそれ以上の基を包含する。

式（１）の化合物において、Ｌで示されるリンカ−基の性質は、化合物の育用性に実質的に影響することなく広く変更することができることは理解されるであろう。すなわちリンカ−基りは式−Ｌ’　（Ｚ）Ｗ（ここでＬｌは任意に置換された多価１．特に２価の、脂肪族、芳香族、ヘテロ芳香族またはアル脂肪族（ａｒａＪｉｐｈａｔｉｃ　）化合物の基であり、Ｚは反応性官能基の残基そしてＷはゼロまたは整数の１である）の基である。

Ｌ’が脂肪族の基のとき、それは例えば、−〇−１−Ｓ〜から選択される１つまたはそれ以上のへテロ原子、または１つまたはそれ以上の−Ｎ　ＣＲ”　）　− （ここでＲ９は水素原子またはＣ１−ａアルキル基である）、−ＣＯＮ　（Ｒ” ）−１−Ｎ　（Ｒ”）ＣＯ−、シクロ脂肪族、芳香族、またはへテロ芳香族基が任意に介在する、任意に置換された脂肪族ハイドロカルビル鎖である。

上記の定義において、そして以下に現れるときはいずれも同様の意味において、シクロ脂肪族または芳香族基に適用される「介在する」という用語は、これらの特定の基は大環状化合物に結合した炭素原子に対して鎖の反対の端に位置する、Ｌｌで示されるハイドロカルビル鎖の末端炭素原子に結合して付加的に存在することを意味すると理解すべきである。

すなわち例えば、Ｌｌは、任意に１つまたはそれ以上の一〇−１−８一原子またはｃ　６−１シクロアルキレン（例えばシクロブチレンまたはシクロヘキシレン）、Ｃ＠−１芳香族（例えばフェニレンまたは置換フェニレン）、Ｃ，、−、。

ヘテロ芳香族（例えばフラニル、ピリジル’）　、　−Ｎ　ＣＲ”　）−１−ＣＯＮ　（Ｒ”　）−４たは−Ｎ　（Ｒ’　）Ｃｏ−基か介在する任意に置換された直鎖または分岐鎖Ｃ１−２゜アルキレン、Ｃ２−２゜アルケニレン、またはＣ２−ｔｏアルキニレン鎖でもよい。

Ｌｌが芳香族基のとき、それはアリール基（例えばＣ＠−１２アリール基（例えばフェニル基）でもよい。

Ｌｌがへテロ芳香族基であるとき、それは例えば、−０−１−ＮＨ−１−３−から選択される１つまたはそれ以上のへテロ原子を含有する任意に置換されたヘテロアリールまたはヘテロアラルキル基（例えばＣ４−１゜ヘテロアリールまたはＣａ−＋ｏヘテロアルＣ＋−Ｓアルキル基（例えばピリジル、ピリジルＣ１−６アルキル（例えばピリジルメチル）、フラニル、フラニルＣ３１アルキル（例えばフラニルメチル）、チェニルまたはチェニルＣ１−、アルキル（例えばチェニルメチル）でもよい。

Ｌ１基上の置換体の例としては、１つまたはそれ以上のハロゲン原子（例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素）、ＣＩ−ｓアルキル（例えばメチルまたはエチル）、ＣＩ−ｓアルコキシ（例えばメトキシまたはエトキシ）、ＣＩ−・アルキルチオ（例えばメチルチオ）、ヒドロキシ、ニトロ、−Ｎ（Ｒ”）（Ｒ目）（ここてＲ”は水素原子またはＣ１−、アルキル基であり、Ｒ口はＣＩ−Ｓアルキル（例えば−Ｎ　ＨＣＨａまたは−Ｎ、（ＣＨ，’）　２　））　、または置換アミド（例えば式％式％（はセロまたは１〜４まての整数、Ｒ”は水素原子またはＣ１１アルキル（例えばメチル）であり、Ｒ”は任意に置換されたＣ　＋−ｇアルキル基である）から選択される１つまたはそれ以上の基を包含する。

Ｒ１３て表される置換アルキル基には、例えば１つまたはそれ以上のハロゲン原子で置換されたＣ１−６アルキル、またはニトロ、アミノまたはヒドロキシ基がある。

Ｚて表される反応性官能基の残基は、一般にチオール、アミノ、カルボキシル、ヒドロキシル、アルデヒド、芳香族またはへテロ芳香族基と反応することができる任意の基の残基である。

芳香族基としては例えばフェノール性の基がある。ヘテロ芳香族基としては例えばイミダゾリル基がある。

特にＺは例えば−Ｓ−１−ＮＨ−１−ＮＨＮ−１−Ｎ　（ＣＨ３）Ｎ−１−ＮＨＣＯＮＨＮ−１−ＮＨＣＳＮＨＮ−１−Ｎ　（Ｐｈ）Ｎ−（ここてＰｈは任意に置換されたフェニルである’）　、−ＮＣ（０）−１−ＮＣ（Ｓ）−１−ＣＯ− １式Ｈｅ　ｔ’　Ｃ（Ｈｅ　ｔ２）ＣＨ２のビニル基（ココでＨｅｔ’　とＨｅｔ” は同じであるかまたは異なっており、それぞれ窒素含有複素環式基（例えばピリジル基）であるか、またはＨｅｔ’は窒素含有複素環式基でありＨｅｔ２は水素原子である）（例えば式のビニルピリジル基、アミド、または式のジオン（式中、Ｒ”はＣ１−４アルキル、例えばメチル基である））である。

式（１）の化合物において、Ｒ’　、Ｒ”またはＲ１で表されるアルキル基は、直鎖または分岐鎖の基、例えばＣ１１アルキル基（例えばメチルまたはエチル基）でもよい。

式（１）の化合物中に存在するＣ０ＮＲ’　Ｒ７基は、例えば−ＣＯＮＨ２、− ＣＯＮＨＣＨ，、ＣＯＮ　（ＣＨ３）２　、　Ｃ０ＮＨＣＨ２ＣＨ３またはＣＯＮ　（ＣＨ２ＣＨ−）２でもよい。

式（１）の化合物中のＡｌｋは例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、Ｓ−ブチルまたはｔ−ブチル基でもよい。このような基は、例えば１つまたはそれ以上のハロゲン原子（例えばフッ素または塩素原子）により置換されていてもよい。

八が−Ａｌｋ’　Ｎ　ＣＲ’　）Ａｌｋ’−である式（１）の化合物の金属錯体は、金属が２価または３価陽性であり、６個以上の配位数特に８を有する錯体を包含する。このような金属の例としては、マンガン（Ｍｎ）、鉄（Ｆｅ）、インジウム（Ｉｎ）、銅（Ｃｕ）　、鉛（Ｐｂ）　、ビスマス（Ｂｉ）、イツトリウム（Ｙ）、テルビウム（Ｔｂ）、ガリウム（Ｇａ）、ガドリニウム（Ｇｄ）、スカンジウム（Ｓｃ）、原子番号２１−２９．４２．４３．４４または７５の他の遷移金属、および原子番号５７−７０の他のランタン系列元素などがある。

Ｉｎ、Ｙ、Ｇａ、Ｔｂ、ＧｄそしてＳｃが好ましく、特にＩｎ、Ｙ、Ｇｄ、Ｇａが好ましい。この金属は放射活性同位元素（例えば９０Ｙ）でもよい。

Ａが−Ａｌｋ’−である式（１）の化合物の金属錯体は、金属が２価または３価陽性であり、２〜６の配位数特に６を有する錯体を包含する。このような金属の例としては、インジウム（Ｉｎ）、銅（Ｃｕ）、鉛（Ｐｂ）　、ビスマス（Ｂ　ｉ）　、コバルト（ｃｏ）、ガドリニウム（Ｇｄ）　、ガリウム（Ｇａ）がある。Ｉｎ１Ｇａ、Ｇｄ。

ＣＯそしてＣｕが好ましく、特にＩｎ、Ｇｄ、Ｇａが好ましい。一般にこの金属は放射活性同位元素が好ましい。

インジウム、特に　ＩＩＩ　Ｉｎが特に好ましい。

一般的に式（１）の化合物への金属の最適な結合は、環の大きさそして適宜Ｒｌ　、Ｒ１、ＲｆｆまたはＲ４基から選択により可能な配位数を調製することにより達成することができる。

式（１）の化合物の塩またはその金属錯体としては、無機または有機塩基、例えばアルカリ金属またはアルカリ土類金属塩（例えばリチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウムまたはカルシウム塩）：アミン塩（例えば−級、二級または三級アミン、例えばエタノールアミン、ジェタノールアミン、モルホリン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、またはＮ、Ｎ−ジメチルグルカミン塩）そしてアミノ酸塩（例えばリジン、アルギニンそしてオルニチン塩）がある。薬剤として許容される塩は特に好ましい。

本発明の結合体化合物の特に有用な基は、Ａが−Ａ　Ｉ　ｋ’−または−Ａｌｋ ’　Ｎ　ＣＲ’　）Ａｌｋ’−そしてＡｌｋ’、Ａｌｋ”１．ｌｋ’およびＡｌｋ’がそれぞれ−（ＣＨＩ　）！−Ｍである式（１）の化合物である。

式（１）の化合物の１つの基は式（ｌａ）：（式中、Ｒ’、Ｒ２、Ｒ２、Ａｌｋ ’、Ａｌｋ”およびＡｌｋ’は式（１）て定義したものと同じであるが、Ｒｌ　、　Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つは基Ａ１ｋＰ　（Ｘ”）（Ｘ”　Ｒ”　）Ｌ　（ここでＬはリンカ−基である）である）を存するもの、そしてその金属錯体および／または塩である。

式（１ａ）の化合物のインジウム錯体は特に好ましい。

式（ｌａ）の特に重要な化合物は式（ｌｂ）Ｒ，Ｒｔ（式中、Ｒｌ　、ＲｔおよびＲ３は式（１ａ）で定義したものである）の化合物、およびその金属錯体および／または塩である。

式（ｌａ）の化合物のインジウム錯体は特に好ましし１゜式（１）の化合物の別の基は式（Ｉｃ）：（式中、Ｒ宜、Ｒ”　、Ｒ２およびＲ’、Ａｌｋ’、Ａｌｋ２、Ａｌｋ２およびＡｌｋ’は式（１）で定義したものと同じであるが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ２およびＲ４の少なくとも１つは、基ＡｌｋＰ　（Ｘ’　）（Ｘ”　Ｒ ”　）Ｌ（ここてＬはリンカ−基である）である）を有するしの：およびその保護された誘導体そしてその金属錯体および／または塩である。

式（Ｉｃ）の化合物のイツトリウムとガドリニウム錯体は特に好ましい。

式（ｌｃ）の化合物の重要な基は式（ｌｄ）：（ＣＨｔ　’）　！　（に、Ｈ１）　２（式中、Ｒ’　、Ｒ”　、Ｒ’およびＲ４は式（ｌｃ）で定義したものと同じである）を有するもの：およびその金属錯体および／または塩である。

式（ｌｄ）の化合物のイツトリウムとガドリニウム錯体は特に好ましい。

一般に上記の種々の式の化合物において、基Ａ１ｋＰ　（Ｘ”）（Ｘ２Ｒ”　）Ｌは、存在する場合（こ（よ、基Ａ１ｋＰ　（０）（ＯＲ”　’）Ｌ　（例えば −ＣＨ２Ｆ　（０）（ＯＨ）Ｌのような基ＡＩｋＰ　（０）（ＯＨ）Ｌ）が好ましい。この後者の型の特別の例は、ＬがＣ＋−Ｓアルキル（メチルまたは−Ｌ’ 　−（Ｚ）Ｗである弐ＣＨ，Ｐ　（０）（ＯＨ）Ｌの基である。

上記の種々の式Ｒｌ　、　Ｒ２、Ｒ３およびＲ４基は、好ましくは−Ａ１　ｋＲ５基（ここでＡｌｋは任意に置換された直鎖または分岐したＣ　Ｉ−ｓアルキル基（特にメチレン基）であり、Ｒ５はＣｏ２Ｈ１−ＣＯＮＲ＠Ｒ？または−Ｐ（Ｘ’）（Ｘ２Ｒ”）Ｌ基（特にＰ　（０）（ＯＨ）Ｌ基）である）である。

結合体化合物の金属錯体はイメージング剤（例えばインビトロおよびインビボにおける造影剤）として診断的有用性がある。式（１）の化合物およびその金属錯体および／または塩はまた細胞毒性剤でもあり、異常な細胞疾患（例えば腫瘍）の治療に使用することができる。診断薬および／または治療薬としての使用には、結合体は金属錯体剤についてすでに使用されている従来法（例えば調剤と投与法）で使用することができる。

本発明の特に育用な結合体化合物は、抗体に結合した式（ｌｂ）または式（ｌｄ）の化合物またはその金属錯体および／または塩を含む。これらの結合体のインジウム、イツトリウムおよびガドリニウム錯体は特に重要である。

本発明の結合体中の抗体は一般に任意の免疫グロブリンクラスである。例えばそれは免疫グロブリンＭ抗体または、特に免疫グロブリンＧ抗体でもよい。この抗体分子は動物（例えば哺乳動物）由来でもよいし、たとえばネズミ、ラットまたはヒト由来でもよい。これは天然の抗体またはその断片、または必要な場合は組換え抗体またはその抗体断片（すなわち組換えＤＮＡ法により産生される抗体分子または抗体断片）でもよい。

特別な抗体または抗体断片としては、（１）少なくともその一部が異なる抗体に由来する抗原結合部位（例えばある抗体の高度可変領域または相補性決定領域が２つ目の異なる抗体の可変フレームワーク領域に移植されたもの）（ヨーロッパ特許明細書第２３９４００号に記載）：（２）非Ｆｖ配列か別の異なる抗体の非Ｆｖ配列に置換された組換え抗体または断片（ヨーロッパ特許明細書第１７１４９６．１７３４９４および１９４２７６号に記載）：または（３）実質的に天然の免疫グロブリンの構造を有する組換え抗体または断片であって、ヒンジ領域が天然の免疫グロブリン中のものとはシスティン残基の数が異なるか、または組換え抗体または断片の表面ポケットの１つまたはそれ以上のシスティン残基が天然の免疫グロブリン中に存在する池のアミノ酸残基の代わりにあるもの（それぞれ国際特許出願ＷＯ３９１０１９７４およびＷＯ３９１０１７８２号に記載）がある。

抗体はポリクローナルでもよいが、好ましくはモノクローナル出来である。いくつかの抗原決定基に対して特異的でもよいが、好ましくは１つの抗原決定基に対して特異的である。抗原決定基は任意のハブテンまたは任意の抗原に関連した抗原決定基である。特別な抗原としては、例えばヒトのような動物に関連した抗原（例えば正アルカリ性ホスファターゼのような胎盤性抗原、前立腺酸性ホスファターゼや前立腺特異抗原のような前立腺抗原）、そして体液成分（例えばフィブリンまたは血小板）関連抗原）、ウィルス、細菌そして菌類に関連した抗原がある。

１つの好適な態様において、抗体は腫瘍細胞関連抗原（特にヒトの乳癌や大腸癌に関連したＴＡＧ−７２抗原上の１つまたはそれ以上のエピトープ）を認識し結合することができる。この型の特に好適な抗体はモノクローナル抗体Ｂ７２．３　（：Ｉルチャーら（Ｃｏｌｃｈｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、）、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、第７８巻、３１９９頁（１９８１年））、またはその断片、特にＦ（ａｂ’）ｚ断片がある。

一般に抗体は、本発明の結合体（大環状化合物およびリンカ−）の残りの部分に、適当な反応性原子または基、例えば抗体中の窒素または特にイオウ原子を介して結合する。１つの抗体分子は、大環状化合物およびリンカ−と結合することができる複数の反応性基を有することは理解されるであろう。

本発明の結合体化合物は通常の方法に従って使用に際して製剤化される。すなわち本発明の別の態様において、１つまたはそれ以上の薬剤として許容される担体とともに、蛋白、ペプチドまたは炭水化物に結合した式（１）の化合物またはその金属錯体および／または塩を含む結合体化合物を含む組成物か与えられる。

本発明の特に適した組成物は、非経口投与（特に注射または点滴）に適した組成物である。この型の適当な製剤は、油性または水性賦形剤中の結合体の懸濁溶液または乳液であり、製剤用の薬剤（例えば懸濁剤または安定剤および／または分散剤）を含存していてもよい。あるいは結合体は粉末型で、使用前に適当な賦形剤（例えば無菌のパイロゲンを含まない水）で復元してもよい。必要な場合は結合体は１回量調剤型、および／または１つまたはそれ以上の活性成分またはイメージング剤とともに提供されることができる。この型の適当な製剤は、等張液生理食塩水中の本発明の結合体の溶液である。

本発明の製剤に使用される本発明の結合体の量は、使用目的（特定の目標細胞）により変わるが、この型の試薬に通常使用される方法により容易に決定することかできる。

本発明の結合体は以下の方法により調製されるが、特に明記していない場合は、記号Ａ、Ｒ’、Ｒ’、Ｒ’、Ｒ’、Ｒ５、Ａｌｋ、　Ａｌｋ’　、Ａｌｋ”、Ａｒｋ”およびＡｌｋ’は式（１）で定義したものと同じである。

金属錯体が最終産物として目的の場合は、金属原子との錯体化は、式（１）の化合物の錯体化で後述するように産生方法の最終段階で実施されるか、または、必要な大環状化合物が存在する場合は反応の初期の段階で金属を錯体化することか好ましい。以下の方法において、リンカ−基の官能基が保護された状態の出発物質、または後述するように基の前駆体を含むものを使用するが好ましい。

本発明に使用される金属錯体は式（１）の化合物またはその塩を金属塩（例えば硝酸塩、塩化物のようなハロゲン化物、酢酸塩、炭酸塩または硫酸塩）または金属酸化物と反応させて調製される。

反応は適当な溶媒、例えば水性または非水性溶媒（例えばアセトニトリル、アセトン、プロピレンカーボネート、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシド）中で、０°Ｃ−１００°Ｃの適当な温度（例えば１０℃〜８５°Ｃ）で実施される。

式（１）の化合物の塩は式（１）の化合物を、適当な溶媒、例えば上記の水性または非水性の溶媒中でθ℃〜１００°Ｃの適当な温度で塩基と反応させることにより調製できる。

Ｒ’、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の１つまたはそれ以上がそれぞれＡｔｋＰ　（Ｘ’ 　）（Ｘ’　Ｈ）Ｌである式（１）の化合物は、Ｒ１、Ｒ１、Ｒ２およびＲ４の１つまたはそれ以上がそれぞれＡｌｋＰ　（Ｘ’　）（ＸＩ　Ｒ”　）Ｌ基（ここでＲ＠はアルキル基である）である対応する式（１）の化合物を、酸（例えば塩酸のような無機酸）による高温（例えば還流温度）での処理による相互変換により調製できる。

Ｒ１は基Ａ１ｋＰ　（Ｘ”）（Ｘ”　Ｒ”　）Ｌ　（ここでＬはリンカ−基である）であり、残りの基Ｒ２、Ｒ３およびＲ４はそれぞれ基ＡｌｋＰ　（Ｘ”）（Ｘ”　Ｒ”　）Ｌ　（ここでＲ８はアルキル基である）である、式（１）の化合物は、式（２）（式中、Ｒ１は今定義したものであり、Ａ１はＡＩｋ３またはＡＩｋ”ＮＨＡＩｋ’である）の化合物をホスフィンＬ　（Ｘ’　Ａｌｋ”）（Ｘ”　Ｒ”　）（ここでＲ８は今定義したものであり、Ａｌｋ”はアルキル基、例えばエチル基である）と、ホルムアルデヒド、ノくラホルムアルデヒドまたはアルデヒドＲＣＨＯ（ここてＲはＣ１−５アルキル基である）の存在下で、反応させることにより調製される。

この反応は溶媒、例えば有機溶媒（例えばテトラヒドロフランのような環状エーテルのようなエーテル）中で高温（例えば還流温度）で実施される。

あるいは、Ｒ＋は基ＡｌｋＰ　（Ｘ”）（Ｘ２Ｒ”　）Ｌ（ここでＬはリンカ− 基である）である式（１）の化合物は、式（２）の化合物を、試薬Ｒ’Ａ１ｋＤ（ここでＤは排除可能な基、たとえば塩素原子のようなハロゲン、またはメタンスルホニルオキシ基のようなスルホニルオキシ基）で反応させることにより調製される。

この反応は、水または有機溶媒（例えばアセトニトリルのようなニトリル、エタノールのようなアルコール、またはジメチルホルムアミドのようなアミド）中で、アルカリ金属炭酸塩または水酸化物（炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸セシウム）または水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化リチウムのような塩基の存在下で、高温（例えば還流温度）で実施される。

この反応で、Ｒ５Ａ１ｋＤ中に存在する一ＣＯ２Ｈ基は、例えばエステル（例えばメチルエステル）で保護する必要かある。目的の反応終了後例えば硫酸のような酸を使用して加水分解することにより酸は回収することができる。同様にリンカ−基り中の反応性官能基も保護する必要かある。例えばアミン（ＮＨ２）基はアシル化（例えばアセチルアミノまたはベンゾイルアミノ基として）により保護される。無機酸（例えば塩酸）のような酸と高温で反応させることにより、遊離アミンはこのような基から再生することができる。

式（１）゛の化合物は式（１）の他の化合物から相互変換により調製することかできる。すなわち１つの官能基Ｚは別のものと交換され、必要な場合、適当な操作反応によりリンカ−基りは別のものに変換される。例えばＬがＬ”　−ＮＨＣＯ−Ｌ’　−Ｚ　（ここで−Ｌ’−ＮＨＣＯ−Ｒ２はＲ１基を示す）である式（１）の化合物は、ＬかＲ２−ＮＨｚである対応する化合物を、試薬Ｒ’　Ｏ−Ｌ ”　−Ｚ　（ここでＲ′″は例えばスル基のような置換フェニル基である）と、ジイソプロピルエチルアミンまたはＮ−メチルモルホリンのような三級アミンの存在下で、ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドのような溶媒中で、反応させることにより調製される。

本発明の結合体化合物は式（１）の化合物およびその金属錯体（ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ２およびＲ４の少なくとも１つは基Ａ１ｋＰ　（Ｘ”）（Ｘ”　Ｒ”＞Ｌであり、Ｌは基Ｌ’−Ｚである）を、蛋白、ペプチドまたは炭水化物で、水性溶媒（例えばリン酸緩衝液のような無機緩衝液）中で、例えばＯ″Ｃ〜４０°Ｃの適当な温度（例えば０°ｃ−ｉｏ℃）で反応させることにより調製される。

蛋白、ペプチドまたは炭水化物は当該分野において公知の方法で得られる。必要な場合は、結合反応の前に蛋白、ペプチドまたは炭水化物をまず処理して、式（１）の化合物との反応用の適当な基を得る。例えば蛋白、ペプチドまたは炭水化物を酸化、たとえば過ヨウ素酸酸化によりアルデヒド基を作成するか、または標準的な方法で試薬（例えばトラウド試薬（Ｔｒａｕｔ’ｓ　ｒｅａｇｅｎｔ　）　（２−イミノチオラン）で処理して分子中に遊離のスルフィドリル基を作成する。

式（２）の中間体は式（３）の化合物を、化合物ＤＡ１ｋＰ　（Ｘ’　）（Ｘｔ　Ｒ’　）Ｌと、塩基の存在下で適当な溶媒中で、式（１）の化合物の調製で記載した高温で反応させることにより調製される。式（２）の化合物とＤＡｌｋＰ　（Ｘ’　）（Ｘ”　Ｒ”　）Ｌのモル比を、前者に対して後者が増加（例えば約２：１からｌ：ｌ、そしてそれ以上へ）するように変化させることにより、今定義したＡｌｋＰ　（Ｘ’　）（Ｘ”　Ｒ’　）Ｌ基以上のものを含有する式（２）の化合物を調製することができる。

式（３）の中間体と中間体ＤＡ１ｋＰ　（Ｘ’　）（Ｘ”Ｒ’）Ｌは公知の化合物であるか、または、公知の化合物の調製に使用される方法（例えば以下の中間体や実施例で記載される）に類似の方法を用いて公知の出発物質から調製される。

以下の中間体および実施例により本発明を説明する。

以下の省略形が使用される：Ｐｈ：フェニル；Ｍｓ：ＣＨ２５Ｏ２−：Ｅｔ・エチル。

ジオキサン（１００ｔｎｌ）中のＮ−ベンズアミドアリルアミン（７，４７ｇ）と次亜リン酸（８，６６ｇ、５０％溶液）の溶液中に、過酸化ｔ−ブチル（０，４ｇ）を加え、混合物を加熱して１８時間還流する。減圧下に溶媒を除去し、残渣の’ＨＮＭＲ解析によりオレフィン共鳴が消失した。残渣をジオキサン（５０ｍｌ）中に再溶解し、パラホルムアルデヒド（２５ｇ）を加え、混合物を加熱して７２時間還流した。溶媒を除去後残渣をシリカ上でクロマトグラフィーにかけ（溶出液７０％ジクロロメタン、２５％メタノール、５％ＮＨ，ＯＨ）標題の酸のアンモニウム塩を淡黄色のガラス状物質として得た：δｐ　（Ｄ２０）　＋　４１．　ｌｐｐｍ　；δＣ（Ｄ２０）１７０．０４　（ＣＯＮＨ）、１３４．０１　２７、　２２　（ＣＨ）、５９．　７３　（ＰＣＨ，ＯＨ，ｄ。

Ｊｃ、９９Ｈｚ）　；　４　１．　０　１　（ＣＯＮＨＣＨ２）　；（Ｄ、Ｏ）７．７９　（２Ｈ，ｄｄ、オルトＡｒＨ）、７、　５７　（４Ｈ，ｍｕ　１　ｔ、ＮＨＣＯ＋ＡｒＨ）　；３、　８　１　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．　１Ｈｚ、ＰＣＨ，ＯＨ）　；　３．　７　１　（２Ｈ，ｔ、Ｊ＝ｅ、９Ｈ２Ｓ　ＣＨ２ＮＧＯ）　、　１．　８　（４Ｈ，ｍｕ　Ｉ　ｔ、ＰＣＨ２ＣＨ２）　。

中間体２ＨＯＣＨ，Ｐ　（０）（ＯＥ　ｔ）（ＣＨ，）２　ＮＨＣＯＰｈの調製蒸留水（５０ｍｌ）中の中間体１（５ｇ）にダウエックス（Ｄｏｗｅｘ）強酸性イオン交換樹脂（３０ｇ、Ｈ型）を加え、濾過後減圧下に濾液を蒸発させ、残渣をトリエチルオルトホルメー！−（２５ｍｌ）で処理して、混合物をアルゴン下９０℃で９６時間加熱した。ＨＣ（ＯＥｔ）ｚを減圧下で除去後、残渣をシリカ上でクロマトグラフィーにかけ（ＣＨ２Ｃ１，＝５〜ｌＯ％メタノール勾配）、目的のアルコールエステルと混合物オルトホルメートエステルとの混合物を生成させる。この混合物をエタノール（５０＋ｎｌ、１ｍｌ濃塩酸）で処理した後、加熱して還流ｍ／ｅ　（ｄ、ｃ、ｉ、）２８６　（Ｍ”　＋１）。

δｐ　（ＣＤＣＩｓ　）　５３．　７ｐｐｍ　、δ、（ＣＤＣＩ２）７．７１　（２Ｈ，ｄｄ、オルト、ＣＨ）、７．２５　（３Ｈ，ｍｕｌｔ、芳香族ＣＨ）、６、８５　（ＩＨ，ｂｒｔ、ＮＨＣＯ）　、４、　０５　（ＩＨＳ　ｂｒｓ　ＯＨ）、３、　８１　（２Ｈ，ｄｑ、ＣＨ２０）、３．７０　（ＩＨ，ｂ　ｒ、ｄ、ＣＨ２０Ｈ）；３．３１　（２Ｈ，ｔ、ＨＮＣＨ２）、１．７５　（４Ｈ，ｍｕ　１　ｔ、ＰＣＨ２ＧＨｚ　）；１、　０５　（３Ｈ，ｔ、ＣＨｚ　）。

δｃ　（ＣＤＣＩｊ　／ＣＤｆｆ　ＣＯ２Ｄ）１６８．５６（ＣＯＮＨ）１３２．９８　（Ｃ，Ｈ，旦０）：１３１、　１１，１２７．８２゜１２６．５８　（ＣＨ）；５６、ｌ　６　（ＰＣＨ２０Ｈ，ｄ、Ｊｃ、＝１０９Ｈｚ）；４８．５３（○ＣＨ，ＣＨ，）；３９、　６２　（ＣＯＮＨＣＨ２）；２１．６４　（ＰＣＨ２、ｄ、Ｊｃ−＝９０Ｈｚ）；２０、　３３　（ＣＨｔ　 ’）　；　１５．　３７　（ＣＨｓ　）。

中間体３Ｍ５ＯＣＲ２Ｐ　（０）（ＯＥ　ｔ）（ＣＨｚ　）ｓ　ＮＨＣＯＰｈの調製Ｏ″Ｃの無水テトラヒドロフラン（５０［１１１）中の中間体２　（０，５７ｇ）の懸濁液に、トリエチルアミン（１ｇ）とメタンスルホニルクロリド（１，１４ｇ）をアルゴン下に加えた。２時間攪拌後、エタノール（５ｍｌ）を加え、混合物を０℃で２０分間攪拌し、減圧下に溶媒を除去し、残渣を酢酸エチル（３０ｍｌ）中に取り濾過し蒸発させて残渣を得て、これをシリカゲル上でクロマトグラフィー（溶出液ＣＨ，Ｃ１２中２〜５％メタノール）にかけて標題のメシレートを無色の油として得た　（３９０ｍｇ＞ｍｌｅ（δ、Ｃ，１，、ＣＨ２ＣＩ２　）３６４（Ｍ”＋１）、δｐ　（ＣＤＣＬ　）　４５．９６ｐｐｍ；δ０（ＣＤＣ１，）１６８．６　（ＮＨＣＯ）；１３４．０　（ＣＨｓ　Ｈｓ旦Ｃｏ）；１３１．４．１２８．４．１２９．３　（ＣＨ）；３７’、６　（ＯＳＯ□ＣＲ，）；２４．０　（ＰＣＨ２ＣＨ２、ｄ、ＪＰＣ＝１００Ｈｚ）；２１、　２　（ＣＨ２）、１５．　４　（ＣＨ３）。

無水ジメチルホルムアルデヒド（２５ｍｌ）中の１，４゜７、ＩＯ−テトラザシクロドデカン（ｏ、１６ｇ）の溶液に６０°Ｃで炭酸カリウム（０，１３ｇ）を加え、ジメチルホルムアルデヒド（１５ｍｌ）中の中間体３（０，１６７ｇ）をＮ２下で２時間にわたって加えた。６４時間後、ＨＰＬＣ分析（ＣＭ３００）により反応が進んでいないことが明らかになり、減圧下に溶媒を除去した。粗残渣をジクロロメタン（３０ｍｌ）中に再溶解し、濾過し、蒸発させて、ＣＭ−３００カラム上で精製し、標題のモノアルキル化アミン（０，０５ｇ）を淡黄色の油として得た。Ｒ，＝８．２分（ＣＭ３００ＨＰＬＣ）。δ□１．９７　（５Ｈ，ｍｕ　Ｉ　ｔＳＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋ＮＨ）、２．６４−２．９４　（２０Ｈ，ｍｕｌｔ、ＣＨ２Ｆ）、３．５５　（２Ｈ，ｄ　ｔ、Ｃ０ＮＨＣＨ２）、４．０６　（２Ｈ，ｃｉｑ、ＯＣＨ，）、７．３８−７．４７　（３Ｈ，ｍｕｌｔ、アリールＣＨ）、７．９３　（２Ｈ，ｄｄ、オルトＣＨ）、８．５５　（ＩＨｌｔ、ＣＯＮＨ）ｍ／ｅ　（ｃ、ｔ、）４４０　（Ｍ”　＋１）３９４ＮＨＣＯＰｈであり、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４かそれぞれ−ＣＨ，Ｐ　（０）（ＯＥｔ）ＣＨ３である式（１ｄ）の化合物の調製無水ジメチルホルムアルデヒド（１ｍｌ）中の中間体４（０，０１５ｇ）の溶液にＮ２下で炭酸カリウム（１６ｍｇ）とＭＳＯＣＲ２Ｐ　（ＯＥｔ）２　ＣＨ３（２５ｍｇ）を加えた。８０°Ｃで１６時間加熱後、ＴＬＣ（Ａ　Ｉ　２０．　）とＨＰＬＣ分析（ＣＭ３００）＋：より反応が進んでいないことが明らかになった。減圧下に溶媒を除去した後、残渣をジクロロメタン（１０ｍｌ）で処理し、濾過し、蒸発させて残渣を得て、これをアルミナ上でクロマトグラフィーにより精製しく溶出液ＣＨ２Ｃｌ２中θ〜２％のメタノール）、標題のテトラエステルを無色の油として得た（ＩＩμ）。

ヤｔＲ，（ＣＭ３００、ＨＰＬ、Ｃ）４．６分。

δ、（ＣＤＣｌ３）１．３０　（１２Ｈ，ｔ、Ｊ＝７．２、ＣＨ，ＣＨ２）、　１．　４　９　（９Ｈ，ｄ＋ｄ＋ｄ。

ＰＣＨ，）　、　１．　８０−３．　７０　（３０ＨＳ　ｍｕｌｔ、、ｂ　ｒ、、ＣＨ２Ｎ＋ＣＨ２Ｐ＋ＣＨｚ　Ｃ）４．　０５（８Ｈ，ｄｑ、０ＣＨ２）、７．　３９　（３Ｈ，ｍｕｌ　ｔ。

アリールＣＨ）　、７．．９２　（２ＨＳｄｄ、オルトＣＨ）、８、　３５　（ＩＨ，ｂｒＳ　ＮＨＣＯ）　。

ｍ／ｅ　（ｃ、ｉ、）８００　（Ｍ”−ｊ−１）。

（ｂ’）　Ｒ１が −ＣＨ２Ｐ　（０）（ＯＨ）（ＣＨｔ　）３　ＮＨ，であり、Ｒ２、Ｒ″およびＲ４がそれぞれ −ＣＨ２Ｐ　（０）（ＯＨ）ＣＨ２である式（ｌｄ）の化合物の調製（ａ）のテトラエステルの加水分解（６Ｍ１塩酸、１１０℃、４８時間）により、溶媒除去後標題のアミノテト１．５５−１．８５　（４ＨＳ　ｍ）、２．６− ３、　７　（３０Ｈ，ｍ）　、　７．　３５　（２Ｈ，ｄ）　、８、　３５　（２Ｈ１ｄ）　。

且メ≦口りと恋Δノ１旦ムニ■Ｌ比Ｌ」−息αΣ」〕と比ＸＣＨ，である式（Ｉｄ）の化合物の調製わずかに加熱しながら中間体５　’（ｂ）（２７，５ｍｇ）をジメチルスルホキシド（ｌ　ｍｌ）に溶解した。Ｎ−メチルモルホリン（３５ μｌ）を加え、ジメチルスルホキシド溶液が濁り、沈澱か発生した。直ちにジメチルスルホキシド（１，０＋＋＋Ｉ）中のコハク酸のジー４−二トロフェニルエステル（２５ｍｇンを加え、反応混合物を約１時間１５０°Ｃに加熱し、次に４５℃でさらに９０分間放置した。反応混合物をＨＰＣＬ　（ダイナマックス−ＰｒｏｇＭＡＸ４）により精製し、減圧下に溶媒を蒸発させて標題の化合物を白色の粉末として得た（１０ｍｇ）。

ｍ／ｅ　（ＦＡＢ）８０５　（Ｍ”　＋　１）；δ□　（ＣＤＣ１２）１．２８　（９Ｈ，Ｄ）　、１．５−１．８　（４Ｈ，ｍ）　、２．７５−３．６　（２６Ｈ，ｍ）。

−ＣＨ２Ｐ　（○）　（ＯＥ　ｔ）　（ＣＨ，）ｓ　ＮＨＣＯＰｈでありＲ２とＲ３がそれぞれ−Ｈである式（１ｂ）の化合物の調製無水ジメチルホルムアミド（１０ｃｍ３）中のＩ、４゜７−ドリアザシロナ：ン（１）（０，０７１ｇ、０　、　５５　ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（０，０３８ｇ、０．２８　ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気中で加え、混合物を６０″Ｃに加熱した。中間体３の溶液（無水ジメチルポルムアミド（１０ｃｍ３）中（０，１０ｇ））を２時間かけて滴下して加え、混合物を６０°Ｃてさらに３６時間攪拌した。

冷却した反応混合物を濾過し、減圧下に溶媒を除去して淡黄色の油を得た。調製用ＨＰＬＣ（ｒシンクロパックＪ　（’５ｙｎｃｈｒｏｐａｋ’）　ＣＭ　３００陽イオン交換）で精製して、標題の化合物（０，０３ｇ）を無色の油として得た。

λ＝２５４ｎｍてＨＰＬＣｔＲ６，８分が観察された（「シンクロパックＪ　（ ’５ｙｎｃｈｒｏｐａｋ’）　ＣＭ　３００陽イオン交換）で濃度勾配溶出、１．４ｍｌ　ｍ１ｎ−１Ａ−Ｎ２０、Ｂ＝ｌ、ＯＭ−ＮＨ，ＯＡｃ。

Ｃ＝ＭｅＣＮ；ｔ＝０分、８０％Ａ、０％Ｂ、２０％Ｃ１から、ｔ＝５分、６０％Ａｌ２Ｏ％Ｂ、２０％Ｃ，ｔ＝ｌＯ分、０％Ａ、８０％Ｂ、２０％Ｃへ：δ、（４００ＭＨ２，ＣＤＣｌ３　）１．５６　（３Ｈ１ｔ、Ｊ　６．８Ｈ２，ＰＯＣＨ２ＣＨｓ　）２．２６−２．２７　（２Ｈ，ｍ、ＰＣＨ２ＣＨ２）、２．８８−３、　１８　（１４Ｈ，ｍｕ　１　ｔ、ＣＨ２Ｎ＋ＣＨ２ＰＯ）３　（２ＨＳ　ｄ、ｑｕａｒｔ。

及び９．０５　（ＩＨ，ｂｒ、ｔ。

Ｊ　６Ｈｚ　（ＮＨＣＯＰｈ）　、ｍ／ｚ（ＤＣＩ、ＮＨ，’）　３９８　（Ｍ”　＋２）、無水テトラヒドロフラン（２０ｃｍ’）中の中間体７（０，０３ｇ）の攪拌している溶液に、乾燥Ｎ２雰囲気下てＣＨｓ　Ｐ　（ＯＥ　ｔ）（０，０３ｇ）を加え、次にホルムアルデヒド（０，０１ｇ）を加えた。得られた混合物を、新鮮な活性化４人モレキュラーシーブを用いて乾燥しながら、ツクスレーで１６時間還流した。混合物を冷却後濾過し、減圧下にテトラヒドロフランを除去して淡黄色の油を得た。標題の粗エステルをアルミナクロマトグラフィー溶出液としてＣＨｚ　ＣＩ　を中１３％メタノールで精製して、エステル（０，０２５ｇ）を無色の油として得た。λ＝２５４ＨＰＬＣｔＲ５，１分が観察された（「シンクロパック（’５ｙｎｃｈｒｏｐａｋ’）　ＣＭ　３００陽イオン交換）で濃度勾配溶出、ｌ、４ｍ１ｍ１ｎ −１、Ａ＝８２０、Ｂ＝　１．０Ｍ　ＮＨ４０ＡＣ１Ｃ＝ＭｅＣＮ　；　ｔ＝０分、８０％Ａ、０％Ｂ、２０％Ｃ１から、ｔ＝５分、６０％Ａ、２０％Ｂ、２０％Ｃ，ｔ＝１０分、０％Ａ、８０％Ｂ、２０９６Ｃへ：δＨ（２５０ＭＨｚ、ＣＤＣＩｓ　）特に１．２６（１５Ｈ，ｍｕ　１　ｔ、ＰＭｅ＋０ＣＨｔ　ＣＨｚ　）１．９８　（４Ｈ，ｂｒ、ｍｕ　１　ｔ、ＰＣＨ，、＋ＰＣＨ２ＣＨ２）２，６２　２．９１　（１８Ｈ，ｍ、−緒に３ＸＰＣＨ２Ｎと環ＣＨ２ｓ）　、３．４８−３．７５　（２Ｈ，ｍｕｌｔ、ブロード、ＮＨ，）Ｇ３８　（Ｍ”＋２）、６３７（Ｍ″″＋１）、５４５．２５６そして１０９゜あり、・Ｒ２とＲ３がそれぞれ −ＣＨ２Ｐ　（０）（ＯＨ）ＣＨ，である式（ｌｂ）の化の溶液を１４０°Ｃて４８時間加熱し、完全に加水分解した（Ｈｎｍｒでわかる）。冷却した溶液をまずＣＨ，ＣＬ　（２Ｘ）で洗浄し、次にジエチルエーテル（２Ｘ）で洗浄してから、減圧下に蒸発させ、標題の塩δ、（Ｄ、Ｏ）１．３６−１．５０　’（６Ｈ、ダブμ・ソトのｍｕｌｔ　Ｐ−ＣＨｌ）、１．７５−１．８５（４Ｈ，ｍｕ　Ｉ　ｔ、ＣＨ２ＰＯ＋Ｃ旦、ＣＨ，ＰＯ）、３．０１　（２ｈ、ｍｕｌｔ、ＣＨｚＮＨｓ＋）３．１０−３．５０）　１８Ｈ，ＣＨｔＮ＋ＰＣＨ２Ｎ、ｍｕ　Ｉ　ｔ）ｍ／ｚ　（ｆ、ａ、ｂ、、グリエロール）４４９　（〜ビ　＋１）、４４８　（Ｍ＋）旦圭丈凡二薦ｉ肛至ムニ旦旦しヱ」旦Σユ旦且工ＣＨ，である式（ｌｄ）の化合物の調製標題のニトロフェニルエステルは中間体９を使用して、中間体６の調製で記載したようにジー４−二トロフェニルエステルコハク酸を使用した。

テトラメチルアンモニウムモルホリノエタンスルフェート（ＹＥＳ）緩衝液（０，１Ｍ、ｐＨ６，８，０（５２）の溶液に、３７℃で５μＣｉの１０Ｙ（５μ２　ｍ２のトリクロリドの水溶液）を加え、標識生成物中間体１１と１２を生成させた。０．５時間後生間体１１または１２のいずれかを含む各混合物を、放射能検出（ＬＫＢ放射能検出器）を用いるＨＰ　ＬＣ（ＡＸ３００　：　０．　２Ｍ　ＮＨ４０ＡＣ：　１０％ＣＨｓ　ＣＮ　）で分析し、次に５００倍過剰量のジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）を添加して標識反応の消失を測定した。８２％の放射能標識の収率が得られた（”Ｙ−ＤＴＰＡ　（１５分）に対して”Ｙ−リガンドピーク（４，５分）を積分するＨＰＬＣ放射能測定）。

５００倍過剰量のＤＴＰＡの存在下で２９８にでこのｐＨで錯体を維持した後２４時間、７２時間後に錯体の相対濃度に変化は認められなかった。

例標識生成物、中間体１１と１２を以下の方法を用いてそれぞれ抗体８７２．３に結合させた。

０．１Ｍリン酸緩衝液（２ｍＭのエチレンジアミン４酢酸を含有；ｐＨ８，０；　ｌ　１０μｍ）中のＧ７２．３モツクローナル抗体（コルチャーら（Ｃｏ１ｃｈｅｒ、　Ｄ、　ｅｔａｌ、　）　、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｊ、　ＵＳＡ第７８巻、３１９９頁（１９８１年）；Ｔｒａｕｔの試薬であらかじめ修飾した３、７５ｍｇ）を、中間体１１または１２（２５μｌ）に加え、混合物を３７°Ｃで９０分間インキュベートし、次にＰＤ−１０ゲル濾過クロマトグラフイーで精製して要　約　書蛋白、ペプチドまたは炭水化物に結合した一般式（１）（式中、Ａは−Ａｌｋ’ −または−Ａｌｋ’　Ｎ　（Ｒ”）Ａｌｋ’　−基であり＋Ａ１に’、Ａ１に２、Ａｌｋ３およびＡｌｋ’は同じであるかまたは異なっており、それぞれ任意に１つまたはそれ以上の０１−、アルキル基で置換されている０１〜４アルキレン鎖であり：Ｒ’　、Ｒ２、Ｒ２およびＲ４は同じであるかまたは異なっており、それぞれ水素原子または−Ａ　１　ｋＲ’基（ここでＡｌｋは任意に置換された直鎖または分岐鎖Ｃ１−。

アルキル基であり、Ｒ５は水素原子または−ＣＯ□Ｈ１−ＣＯＮＲ＠Ｒ”　（ここでＲ１とＲ７は同じであるかまたは異なっておりそれぞれ水素原子またはアルキル基である）、または−Ｐ（Ｘ’）（Ｘ”Ｒ”）Ｌ基（ここでＸ’とＸ２はそれぞれ酸素またはイ才つ原子であり。

Ｒ”は水素原子またはアルキル基であり、Ｌは脂肪族、芳香族、またはへテロ芳香族基またはリンカ−基である）である）であるが、ただしＲＩ　ＳＲ１、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つがＡ］ＩｃＰ　（Ｘ’　）（Ｘ２Ｒ’　）Ｌ基（ここでＬはリンカ−基である）である）の化合物：ならびにそれらの金属錯体および／または塩を含む結合体化合物。

この結合体はイメージングや異常細胞疾患（例えば腫瘍）の治療に有用である。

国際調査報告国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．蛋白、ペプチドまたは炭水化物に結合した一般式（Ｉ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉ）（式中、Ａは−Ａｌｋ２−または−Ａｌｋ３Ｎ（Ｒ４）Ａｌｋ４−基であり：Ａｌｋ１、Ａｌｋ２、Ａｌｋ３およびＡｌｋ４は同じであるかまたは異なっており、それぞれ任意に１つまたはそれ以上のＣ１−６アルキル基で置換されているＣ１−４アルキレン鎖であり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は同じであるかまたは異なっており、それぞれ水素原子または−ＡｌｋＲ５基（ここでＡｌｋは任意に置換された直鎖または分岐鎖Ｃ１−６アルキル基であり、Ｒ５は水素原子または−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯＮＲ６Ｒ７（ここでＲ６とＲ７は同じであるかまたは異なっておりそれぞれ水素原子またはアルキル基である）、または−Ｐ（Ｘ１）（Ｘ２Ｒ８）Ｌ基（ここでＸ１とＸ２はそれぞれ酸素またはイオウ原子であり、Ｒ８は水素原子またはアルキル基であり、Ｌは脂肪族、芳香族、またはヘテロ芳香族基またはリンカー基である）である）であるが、ただしＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つがＡｌｋＰ（Ｘ１）（Ｘ２Ｒ８）Ｌ（ここでＬはリンカー基である）である）の結合体化合物；ならびにそれらの保護された誘導体および金属錯体および／または塩。
２．式（Ｉ）の化合物またはその金属錯体または塩は抗体に結合している、請求項１に記載の結合体。
３．請求項１または２に記載の結合体において、式（Ｉ）の化合物は式（Ｉａ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉａ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ａｌｋ１、Ａｌｋ２およびＡｌｋ３は式（Ｉ）で定義したものと同じであるが、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３の少なくとも１つはＡｌｋＰ（Ｘ１）（Ｘ２Ｒ■）Ｌ基（ここでＬはリンカー基である）である）の化合物；ならびにその金属錯体および／または塩である、上記結合体。
４．請求項３に記載の結合体において、式（Ｉａ）の化合物は式（Ｉｂ） ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉｂ）（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は式（Ｉａ）で定義したものである）の化合物、ならびにその金属錯体および／または塩である、上記結合体。
５．式（Ｉｂ）のＲ１、Ｒ２、およびＲ３の少なくとも１つは−ＡｌｋＰ（Ｏ）（ＯＲ８）Ｌ基である、請求項４に記載の結合体。
６．ＡｌｋＰ（Ｏ）（ＯＲ８）Ｌは −ＣＨ２Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｌである、請求項５に記載の結合体。
７．式（Ｉａ）または（Ｉｂ）の化合物はインジウム、イットリウムまたはガドリニウムと錯体を形成している、請求項３〜６に記載の結合体。
８．請求の範囲第１項または第２項に記載の結合体において、式（Ｉ）の化合物は式（Ｉｃ）：▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉｃ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４、Ａｌｋ１、Ａｌｋ２、Ａｌｋ３およびＡｌｋ４は式（Ｉ）で定義したものと同じであるが、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは、ＡｌｋＰ（Ｘ１）（Ｘ２Ｒ８）Ｌ（ここでＬはリンカー基である）である）の化合物：ならびにその保護された誘導体およびその金属錯体および／または塩である、上記結合体。
９．請求項８に記載の結合体において、式（Ｉｃ）の化合物は式（Ｉｄ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｉｄ）（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は式（Ｉｃ）で定義したものと同じである）の化合物：ならびにその金属錯体および／または塩である、上記結合体。
１０．式（Ｉｄ）のＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４の少なくとも１つは−ＡｌｋＰ（Ｏ）（ＯＲ８）Ｌである、請求項９に記載の結合体。
１１．ＡｌｋＰ（Ｏ）（ＯＲ８）Ｌは −ＣＨ２Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）Ｌである、請求項１０に記載の結合体。
１２．式（Ｉｃ）または（Ｉｂ）の化合物はイットリウムまたはガドリニウムと錯体を形成している、請求項８〜１０に記載の結合体。