JPH05260996A - リン脂質定量用試薬とリン脂質の定量法 - Google Patents
リン脂質定量用試薬とリン脂質の定量法Info
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- JPH05260996A JPH05260996A JP6074192A JP6074192A JPH05260996A JP H05260996 A JPH05260996 A JP H05260996A JP 6074192 A JP6074192 A JP 6074192A JP 6074192 A JP6074192 A JP 6074192A JP H05260996 A JPH05260996 A JP H05260996A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ホスホリパーゼＤ、コリンキナーゼ、および
アデノシン５′−三燐酸を含有するリン脂質定量用試薬
によって、リン脂質とホスホリパーゼＤとの酵素反応に
より生じたコリンをコリンキナーゼにより定量する。 【効果】 リン脂質の測定において、試料中に存在する
リン脂質のほぼ１００％を迅速かつ高精度で測定でき、
臨床検査その他に有用である。
アデノシン５′−三燐酸を含有するリン脂質定量用試薬
によって、リン脂質とホスホリパーゼＤとの酵素反応に
より生じたコリンをコリンキナーゼにより定量する。 【効果】 リン脂質の測定において、試料中に存在する
リン脂質のほぼ１００％を迅速かつ高精度で測定でき、
臨床検査その他に有用である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、リン脂質定量用試薬
と、リン脂質の定量法に関するものである。さらに詳し
くは、この発明は、血清中のリン脂質量を簡便かつ高精
度に定量する方法と、そのための定量用試薬に関するも
のである。
と、リン脂質の定量法に関するものである。さらに詳し
くは、この発明は、血清中のリン脂質量を簡便かつ高精
度に定量する方法と、そのための定量用試薬に関するも
のである。
【０００２】
【従来の技術】従来より、各種疾病の診断方法として、
血清中に含まれる種々の物質の濃度を測定するという方
法が利用されている。これは疾病と血清中の特定物質の
濃度との間に有意な相関関係が存在するという知見に基
づくものである。例えば最近の死亡原因の上位を占める
ようになっている肝臓疾患と血清中の総リン脂質との間
には密接な関係があることが知られている。このため肝
臓疾患の診断法の一つとして、血清総リン脂質の定量が
用いられている。
血清中に含まれる種々の物質の濃度を測定するという方
法が利用されている。これは疾病と血清中の特定物質の
濃度との間に有意な相関関係が存在するという知見に基
づくものである。例えば最近の死亡原因の上位を占める
ようになっている肝臓疾患と血清中の総リン脂質との間
には密接な関係があることが知られている。このため肝
臓疾患の診断法の一つとして、血清総リン脂質の定量が
用いられている。
【０００３】現在のところ、主なリン脂質の定量法とし
ては以下のようなものが用いられている。 １）試料よりリン脂質を抽出・灰化した後、灰化試料中
のリン酸をリン−モリブテン酸試薬により比色・定量す
る方法 たとえば２）試料にホスホリパーゼＣを作用させ、生成
したコリンリン酸のフォスファターゼ処理により生じた
リン酸を比色定量する方法 また、３）試料にホスホリパーゼＣを作用させ、生成し
たグリセロ脂肪酸のリゾホスホリパーゼ処理により生じ
たグリセリンを定量する方法 ４）試料にホスホリパーゼＤを作用させ、生成したコリ
ンをコリンオキシダーゼを用いて定量する酵素法
ては以下のようなものが用いられている。 １）試料よりリン脂質を抽出・灰化した後、灰化試料中
のリン酸をリン−モリブテン酸試薬により比色・定量す
る方法 たとえば２）試料にホスホリパーゼＣを作用させ、生成
したコリンリン酸のフォスファターゼ処理により生じた
リン酸を比色定量する方法 また、３）試料にホスホリパーゼＣを作用させ、生成し
たグリセロ脂肪酸のリゾホスホリパーゼ処理により生じ
たグリセリンを定量する方法 ４）試料にホスホリパーゼＤを作用させ、生成したコリ
ンをコリンオキシダーゼを用いて定量する酵素法
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の方法にはそれぞれ固有の問題点があり、簡便かつ高精
度なリン脂質の定量は困難であった。以下にその問題点
を列挙する。 １）の方法では、リン脂質の総量を高精度で測定できる
が、試料からのリン脂質の抽出操作が繁雑である、反応
が強酸性下で行われる、などの理由のため病院の検査室
などでの一般的使用には適さない。
の方法にはそれぞれ固有の問題点があり、簡便かつ高精
度なリン脂質の定量は困難であった。以下にその問題点
を列挙する。 １）の方法では、リン脂質の総量を高精度で測定できる
が、試料からのリン脂質の抽出操作が繁雑である、反応
が強酸性下で行われる、などの理由のため病院の検査室
などでの一般的使用には適さない。
【０００５】２）〜４）の方法はリン脂質の抽出操作は
不要であり、１）に比べると格段に簡便である。しかし
定量性などには問題が残る。２）の方法では、リン脂質
の量は最終的にはリン酸の比色定量によって求められる
ため、１）の場合と同様に操作が繁雑となる。 ３）の方法ではグリセロリン脂質しか測定できないた
め、血清中のその他のリン脂質、例えば血清リン脂質の
約２０％を占めるスフィンゴミエリンなどが測定できな
い。そのため測定値として検出できるのは総リン脂質の
約８０％にすぎず、正確な総リン脂質値であるとはいい
がたい。
不要であり、１）に比べると格段に簡便である。しかし
定量性などには問題が残る。２）の方法では、リン脂質
の量は最終的にはリン酸の比色定量によって求められる
ため、１）の場合と同様に操作が繁雑となる。 ３）の方法ではグリセロリン脂質しか測定できないた
め、血清中のその他のリン脂質、例えば血清リン脂質の
約２０％を占めるスフィンゴミエリンなどが測定できな
い。そのため測定値として検出できるのは総リン脂質の
約８０％にすぎず、正確な総リン脂質値であるとはいい
がたい。
【０００６】４）は現在最も一般的に用いられている方
法である。その利点としては、酵素法であるため１）〜
３）の方法に比べて共存物質の影響を受けにくい、操作
が簡便で高精度であるなどが挙げられる。この方法の基
本原理は、臨床検査講座［医歯薬出版株式会社発行、１
９８６年］などに記載され、すでに公知であり、現在上
市されているリン脂質測定用の臨床検査試薬のほとんど
がこの原理に基づいている。しかしこの方法では酵素の
特性上、血清リン脂質の約５％を占めるフォスファチジ
ルエタノールアミンが測定できないため、測定値とリン
脂質の総量とは必ずしも一致しない。またいずれの検査
試薬も発色法を用いるため、血清中の有色成分である赤
血球やビリルビンの影響を受け易いばかりでなく、色原
体として用いているフェノールによる水質汚染の恐れも
あり、使用および使用後の廃液処理には充分な注意が必
要となる。
法である。その利点としては、酵素法であるため１）〜
３）の方法に比べて共存物質の影響を受けにくい、操作
が簡便で高精度であるなどが挙げられる。この方法の基
本原理は、臨床検査講座［医歯薬出版株式会社発行、１
９８６年］などに記載され、すでに公知であり、現在上
市されているリン脂質測定用の臨床検査試薬のほとんど
がこの原理に基づいている。しかしこの方法では酵素の
特性上、血清リン脂質の約５％を占めるフォスファチジ
ルエタノールアミンが測定できないため、測定値とリン
脂質の総量とは必ずしも一致しない。またいずれの検査
試薬も発色法を用いるため、血清中の有色成分である赤
血球やビリルビンの影響を受け易いばかりでなく、色原
体として用いているフェノールによる水質汚染の恐れも
あり、使用および使用後の廃液処理には充分な注意が必
要となる。
【０００７】以上のように、現在一般的に用いられてい
る血清総リン脂質の測定法には、操作性、精度などに関
して各々に固有の問題点があり、臨床検査試薬として日
常的に用いるのに、必ずしも万全な方法であるとは言い
難たかった。この発明は、以上の通りの事情に鑑みてな
されたものであり、従来方法の欠点を解消し、血清中の
リン脂質量を１００％に近い精度で、簡便に測定できる
定量法と、そのための定量用試薬を提供することを目的
としている。
る血清総リン脂質の測定法には、操作性、精度などに関
して各々に固有の問題点があり、臨床検査試薬として日
常的に用いるのに、必ずしも万全な方法であるとは言い
難たかった。この発明は、以上の通りの事情に鑑みてな
されたものであり、従来方法の欠点を解消し、血清中の
リン脂質量を１００％に近い精度で、簡便に測定できる
定量法と、そのための定量用試薬を提供することを目的
としている。
【０００８】
【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、ホスホリパーゼＤ、コリンキナ
ーゼ、およびアデノシン５′−三燐酸を含有することを
特徴とするリン脂質定量用試薬を提供する。さらにこの
発明は、リン脂質とホスホリパーゼＤとの酵素反応によ
って生じたコリンをコリンキナーゼを用いて定量するこ
とを特徴とするリン脂質の定量法をも提供する。
を解決するものとして、ホスホリパーゼＤ、コリンキナ
ーゼ、およびアデノシン５′−三燐酸を含有することを
特徴とするリン脂質定量用試薬を提供する。さらにこの
発明は、リン脂質とホスホリパーゼＤとの酵素反応によ
って生じたコリンをコリンキナーゼを用いて定量するこ
とを特徴とするリン脂質の定量法をも提供する。
【０００９】以下、この発明の構成についてさらに詳し
く説明する。この発明における血清総リン脂質の定量法
の特徴は、以下の反応式に示したように、リン脂質とホ
スホリパーゼＤ（以下、ＰＬＤと略記する）との反応に
よって生じたコリンに、コリンに対する特異性の極めて
高いコリンキナーゼ（以下、ＣｈＫと略記する）を共役
酵素として作用させ、その生成物を定量することであ
る。
く説明する。この発明における血清総リン脂質の定量法
の特徴は、以下の反応式に示したように、リン脂質とホ
スホリパーゼＤ（以下、ＰＬＤと略記する）との反応に
よって生じたコリンに、コリンに対する特異性の極めて
高いコリンキナーゼ（以下、ＣｈＫと略記する）を共役
酵素として作用させ、その生成物を定量することであ
る。
【００１０】
【化１】
【００１１】
【化２】
【００１２】この場合、ＣｈＫの特異的な作用によって
生じる生成物の定量法は特に限定されないが、通常はＰ
ＬＤによる反応式１、ＣｈＫによる反応式２の２つの反
応を連続的に行うことにより生成するコリンリン酸また
はアデノシン５′−二リン酸（以下、ＡＤＰと略記す
る）のいずれかを定量するのが一般的である。コリンリ
ン酸の定量は、コリンリン酸のフォスファターゼ処理に
より生じたリン酸の比色定量、またはコリンの色原体存
在下でのコリンオキシダーゼ処理による呈色反応によっ
て定量することができる。また、ＡＤＰは、ピルビン酸
キナーゼ（以下、ＰＫと略記する）と乳酸脱水素酵素
（以下、ＬＤＨと略記する）との共役反応を利用するこ
とによって定量可能である。この定量法は、全反応が酵
素反応であるため、血清中の共存物質の影響を受けにく
く、日常的に行われる臨床検査にとってきわめて有利な
方法である。さらにこのＡＤＰを定量する場合には、リ
ン脂質量は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド（以下、ＮＡＤＨと略記する）の減少による紫外部
（３４０nm）の吸光度の測定により容易に高精度で定量
できる。しかもＰＫの作用によってＡＤＰからＡＴＰが
再生されるため、コリンに対するＣｈＫの作用が増強さ
れ、高感度の測定が可能となる。以下にその反応を示
す。
生じる生成物の定量法は特に限定されないが、通常はＰ
ＬＤによる反応式１、ＣｈＫによる反応式２の２つの反
応を連続的に行うことにより生成するコリンリン酸また
はアデノシン５′−二リン酸（以下、ＡＤＰと略記す
る）のいずれかを定量するのが一般的である。コリンリ
ン酸の定量は、コリンリン酸のフォスファターゼ処理に
より生じたリン酸の比色定量、またはコリンの色原体存
在下でのコリンオキシダーゼ処理による呈色反応によっ
て定量することができる。また、ＡＤＰは、ピルビン酸
キナーゼ（以下、ＰＫと略記する）と乳酸脱水素酵素
（以下、ＬＤＨと略記する）との共役反応を利用するこ
とによって定量可能である。この定量法は、全反応が酵
素反応であるため、血清中の共存物質の影響を受けにく
く、日常的に行われる臨床検査にとってきわめて有利な
方法である。さらにこのＡＤＰを定量する場合には、リ
ン脂質量は還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチ
ド（以下、ＮＡＤＨと略記する）の減少による紫外部
（３４０nm）の吸光度の測定により容易に高精度で定量
できる。しかもＰＫの作用によってＡＤＰからＡＴＰが
再生されるため、コリンに対するＣｈＫの作用が増強さ
れ、高感度の測定が可能となる。以下にその反応を示
す。
【００１３】
【化３】
【００１４】
【化４】
【００１５】この発明に用いるＰＬＤとしては植物組
織、微生物由来のいずれもが利用できる。またＣｈＫと
しては微生物・動物組織のいずれに由来するものも利用
できるが、中でも酵母由来のＣｈＫは、コリンに対する
親和力が極めて強い（コリンに対するミハエリス定数：
1.5 ×１０-5Ｍ）うえ、エタノールアミンキナーゼ活性
も合わせ持つため、現在多用されているコリンオキシダ
ーゼ法では測定できないフォスファチジルエタノールア
ミンの測定が可能となる。その結果、血清総リン脂質を
ほぼ１００％測定でき、最適であるといえる。
織、微生物由来のいずれもが利用できる。またＣｈＫと
しては微生物・動物組織のいずれに由来するものも利用
できるが、中でも酵母由来のＣｈＫは、コリンに対する
親和力が極めて強い（コリンに対するミハエリス定数：
1.5 ×１０-5Ｍ）うえ、エタノールアミンキナーゼ活性
も合わせ持つため、現在多用されているコリンオキシダ
ーゼ法では測定できないフォスファチジルエタノールア
ミンの測定が可能となる。その結果、血清総リン脂質を
ほぼ１００％測定でき、最適であるといえる。
【００１６】またＰＫとＬＤＨとしては、各種の微生物
または動物組織由来のものなどを適宜使用すれば良い
が、特に兎や豚の筋肉組織由来のものが好適である。Ｐ
Ｋ、ＬＤＨ、ホスホエノールピルビン酸（以下、ＰＥＰ
と略記する）、およびＮＡＤＨの使用量に特に限定はな
いが、通常の使用量はそれぞれ３〜３０ユニット／ml，
１〜２０ユニット／ml、0.1 〜２mMである。
または動物組織由来のものなどを適宜使用すれば良い
が、特に兎や豚の筋肉組織由来のものが好適である。Ｐ
Ｋ、ＬＤＨ、ホスホエノールピルビン酸（以下、ＰＥＰ
と略記する）、およびＮＡＤＨの使用量に特に限定はな
いが、通常の使用量はそれぞれ３〜３０ユニット／ml，
１〜２０ユニット／ml、0.1 〜２mMである。
【００１７】この発明における上記の定量法では、ＰＬ
Ｄ、ＣｈＫ、およびＡＴＰを含有する溶液を定量用試薬
として使用することが有効である。その濃度は通常はそ
れぞれ0.1 〜２ユニット／ml、0.1 〜５０ユニット／ml
および0.5 〜５０mMである。さらに、このような定量用
試薬には、通常よく用いられる添加剤（例えば塩化ナト
リウムをはじめとする各種の塩類、トリトンＸ−１００
をはじめとする各種の界面活性剤など）、安定化剤（例
えばＮ−アセチルシステイン、グルコースなど）、防腐
剤（例えばアジ化ナトリウムなど）および賦形剤（例え
ばラクトースなど）等を適宜共存させても良い。また定
量用試薬の試薬形態としては、全ての成分を１つの試薬
にした、いわゆる一試薬系でも良いが、ＰＬＤ、ＣｈＫ
を主成分とする第一試薬とＡＴＰを主成分とする第二試
薬とに分けて調製する、いわゆる二試薬系にしても良
い。この形態の場合には、たとえば第一試薬と試料を測
定温度（例えば３７℃）に所定の時間（例えば５分間）
保持した後、測定温度に保持した恒温セル内に入れ、こ
れに第二試薬を添加・攪拌後、３４０nmにおける吸光度
の減少を測定すれば良い。
Ｄ、ＣｈＫ、およびＡＴＰを含有する溶液を定量用試薬
として使用することが有効である。その濃度は通常はそ
れぞれ0.1 〜２ユニット／ml、0.1 〜５０ユニット／ml
および0.5 〜５０mMである。さらに、このような定量用
試薬には、通常よく用いられる添加剤（例えば塩化ナト
リウムをはじめとする各種の塩類、トリトンＸ−１００
をはじめとする各種の界面活性剤など）、安定化剤（例
えばＮ−アセチルシステイン、グルコースなど）、防腐
剤（例えばアジ化ナトリウムなど）および賦形剤（例え
ばラクトースなど）等を適宜共存させても良い。また定
量用試薬の試薬形態としては、全ての成分を１つの試薬
にした、いわゆる一試薬系でも良いが、ＰＬＤ、ＣｈＫ
を主成分とする第一試薬とＡＴＰを主成分とする第二試
薬とに分けて調製する、いわゆる二試薬系にしても良
い。この形態の場合には、たとえば第一試薬と試料を測
定温度（例えば３７℃）に所定の時間（例えば５分間）
保持した後、測定温度に保持した恒温セル内に入れ、こ
れに第二試薬を添加・攪拌後、３４０nmにおける吸光度
の減少を測定すれば良い。
【００１８】この発明の定量法における反応温度には特
に制限はなく、従来から臨床検査に常用されている温
度、（例えば２５℃、３０℃あるいは３７℃）を適宜用
いることができる。また測定機器としては、紫外部領域
の測定波長を有する分光光度計や自動分析装置が使用で
きるが、中でも測定用組成物を入れるセルを恒温に保つ
ことのできる機器の使用が望ましい。
に制限はなく、従来から臨床検査に常用されている温
度、（例えば２５℃、３０℃あるいは３７℃）を適宜用
いることができる。また測定機器としては、紫外部領域
の測定波長を有する分光光度計や自動分析装置が使用で
きるが、中でも測定用組成物を入れるセルを恒温に保つ
ことのできる機器の使用が望ましい。
【００１９】以下、実施例を示してこの発明をさらに詳
細かつ具体的に説明するが、この発明はこれらの実施例
に限定されるものではない。
細かつ具体的に説明するが、この発明はこれらの実施例
に限定されるものではない。
【００２０】
【実施例】実施例１ 一試薬系定量用試薬によるリゾレシチンの定量測定 （１）試薬の調製 以下の組成からなる定量用試薬を作成した。
【００２１】 グリシルグリシン緩衝液（ｐＨ7.5 ） １００mM ＭｇＣｌ2 ５mM ＫＣｌ ５mM ＣａＣｌ2 ５mM ＰＥＰ 0.84mM ＮＡＤＨ 0.25mM ＰＫ ５ユニット／ml ＬＤＨ １１ユニット／ml ＰＬＤ 0.25ユニット／ml ＣｈＫ 0.3 ユニット／ml なお、ＡＴＰ、ＮＡＤＨ、ＰＫ（ウサギ筋肉由来）、Ｌ
ＤＨ（ウサギ筋肉由来）はベーリンガー・マンハイム山
之内社より購入し、ＰＬＤ（微生物由来）は東洋紡社よ
り購入した。 （２）方法と結果 上記組成の定量用試薬５００μｌを３７℃で５分間イン
キュベートした後、これに測定試料である卵黄由来リゾ
レシチン（Ｓｉｇｍａ社製）の溶液２μｌを各々、０，
２，４，６，８，１０mg／mlの濃度として添加し、攪拌
して、それぞれの３４０nmにおける吸光度の変化を測定
した。
ＤＨ（ウサギ筋肉由来）はベーリンガー・マンハイム山
之内社より購入し、ＰＬＤ（微生物由来）は東洋紡社よ
り購入した。 （２）方法と結果 上記組成の定量用試薬５００μｌを３７℃で５分間イン
キュベートした後、これに測定試料である卵黄由来リゾ
レシチン（Ｓｉｇｍａ社製）の溶液２μｌを各々、０，
２，４，６，８，１０mg／mlの濃度として添加し、攪拌
して、それぞれの３４０nmにおける吸光度の変化を測定
した。
【００２２】この測定結果は、表１および図１に示した
通りである。これらの結果から明らかなように、一試薬
系として構成したこの発明の定量用試薬は、少なくとも
１０mg／mlまでの濃度の試料に対して良好な定量感度を
示した。
通りである。これらの結果から明らかなように、一試薬
系として構成したこの発明の定量用試薬は、少なくとも
１０mg／mlまでの濃度の試料に対して良好な定量感度を
示した。
【００２３】
【表１】
【００２４】実施例２ 二試薬系定量用試薬によるエタノールアミンの定量測定 （１）試薬の調製 各々、以下の組成からなる第１試薬および第２試薬を作
成した。 第１試薬： グリシルグリシン緩衡液(pH7.5) １００mM ＭｇＣｌ2 ５mM ＫＣｌ ５mM ＣａＣｌ2 ５mM ＰＥＰ 0.84mM ＮＡＤＨ 0.25mM ＰＫ ５ユニット／ml ＬＤＨ １１ユニット／ml ＰＬＤ 0.25ユニット／ml ＣｈＫ 0.3 ユニット／ml 第２試薬： ＡＴＰ １５mM なお、ＡＴＰ、ＮＡＤＨ、ＰＫ（ウサギ筋肉由来）、Ｌ
ＤＨ（ウサギ筋肉由来）はベーリンガー・マンハイム山
之内社より購入し、ＰＬＤ（微生物由来）は東洋紡社よ
り購入した。
成した。 第１試薬： グリシルグリシン緩衡液(pH7.5) １００mM ＭｇＣｌ2 ５mM ＫＣｌ ５mM ＣａＣｌ2 ５mM ＰＥＰ 0.84mM ＮＡＤＨ 0.25mM ＰＫ ５ユニット／ml ＬＤＨ １１ユニット／ml ＰＬＤ 0.25ユニット／ml ＣｈＫ 0.3 ユニット／ml 第２試薬： ＡＴＰ １５mM なお、ＡＴＰ、ＮＡＤＨ、ＰＫ（ウサギ筋肉由来）、Ｌ
ＤＨ（ウサギ筋肉由来）はベーリンガー・マンハイム山
之内社より購入し、ＰＬＤ（微生物由来）は東洋紡社よ
り購入した。
【００２５】（２）方法と結果 上記組成の第１試薬５００μｌに、測定試料であるエタ
ノールアミン（Ｓｉｇｍａ社製）１０μｌを、各々、
０，0.2 ，0.4 ，0.6 ，0.8 ，1.0mg ／mlの濃度として
添加、混和し、３７℃で５分間インキュベートした後、
第２試薬５０μｌを添加、攪拌して、３４０nmにおける
５分間の吸光度の変化を測定した。
ノールアミン（Ｓｉｇｍａ社製）１０μｌを、各々、
０，0.2 ，0.4 ，0.6 ，0.8 ，1.0mg ／mlの濃度として
添加、混和し、３７℃で５分間インキュベートした後、
第２試薬５０μｌを添加、攪拌して、３４０nmにおける
５分間の吸光度の変化を測定した。
【００２６】また、比較例として、上記と同一の測定試
料を、コリンオキシダーゼを用いた発色法（以下、ＣＯ
Ｄ法と記載する）により測定した。これらの測定結果
は、表２に示した通りである。この表２から明らかなよ
うに、従来のＣＯＤ法ではエタノールアミンの測定が不
可能であるのに対し、この発明の定量用試薬を用いた定
量方法は、エタノールアミンの定量に対して良好な感度
を示した。
料を、コリンオキシダーゼを用いた発色法（以下、ＣＯ
Ｄ法と記載する）により測定した。これらの測定結果
は、表２に示した通りである。この表２から明らかなよ
うに、従来のＣＯＤ法ではエタノールアミンの測定が不
可能であるのに対し、この発明の定量用試薬を用いた定
量方法は、エタノールアミンの定量に対して良好な感度
を示した。
【００２７】
【表２】
【００２８】実施例３ 二試薬系定量用試薬による標準血清の定量測定 （１）試薬の調製 実施例２と同一組成からなる第１試薬および第２試薬を
作成した。 （２）方法と結果 第１試薬５００μｌと、測定試料である人血清（ｎ＝
５）１０μｌを混和し、３７℃で５分間インキュベート
した後、第２試薬５０μｌを添加、攪拌し、３４０nmに
おける５分間の吸光度変化を測定した。また、比較例と
して、ＣＯＤ法による測定も行なった。
作成した。 （２）方法と結果 第１試薬５００μｌと、測定試料である人血清（ｎ＝
５）１０μｌを混和し、３７℃で５分間インキュベート
した後、第２試薬５０μｌを添加、攪拌し、３４０nmに
おける５分間の吸光度変化を測定した。また、比較例と
して、ＣＯＤ法による測定も行なった。
【００２９】これらの測定結果は、表３に示した通りで
あり、この発明の定量方法では、ＣＯＤ法と比較して平
均で約３％高い測定値が得られた。このことは、ＣＯＤ
法では検出不可能なフォスファチジルエタノールアミン
を、この発明の定量方法はその測定値に含んでいるため
と考えられる。
あり、この発明の定量方法では、ＣＯＤ法と比較して平
均で約３％高い測定値が得られた。このことは、ＣＯＤ
法では検出不可能なフォスファチジルエタノールアミン
を、この発明の定量方法はその測定値に含んでいるため
と考えられる。
【００３０】
【表３】
【００３１】
【発明の効果】以上詳しく説明した通り、この発明によ
って、血清総リン脂質のほぼ１００％を、血清成分に影
響されることなく迅速かつ高精度で定量することが可能
となり肝機能検査において信頼性の高いデータが提供さ
れるようになる。
って、血清総リン脂質のほぼ１００％を、血清成分に影
響されることなく迅速かつ高精度で定量することが可能
となり肝機能検査において信頼性の高いデータが提供さ
れるようになる。
【図１】各レシチン濃度に対する吸光度変化量を示した
相関図である。
相関図である。
Claims (2)
- 【請求項１】 ホスホリパーゼＤ、コリンキナーゼ、お
よびアデノシン５′−三燐酸を含有することを特徴とす
るリン脂質定量用試薬。 - 【請求項２】 リン脂質とホスホリパーゼＤとの酵素反
応によって生じたコリンをコリンキナーゼを用いて定量
することを特徴とするリン脂質の定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6074192A JPH05260996A (ja) | 1992-03-17 | 1992-03-17 | リン脂質定量用試薬とリン脂質の定量法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6074192A JPH05260996A (ja) | 1992-03-17 | 1992-03-17 | リン脂質定量用試薬とリン脂質の定量法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05260996A true JPH05260996A (ja) | 1993-10-12 |
Family
ID=13150993
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6074192A Pending JPH05260996A (ja) | 1992-03-17 | 1992-03-17 | リン脂質定量用試薬とリン脂質の定量法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05260996A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112522363A (zh) * | 2019-09-18 | 2021-03-19 | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 | 经改善的用于检测磷脂酶c的酶活力的方法及产品 |
-
1992
- 1992-03-17 JP JP6074192A patent/JPH05260996A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112522363A (zh) * | 2019-09-18 | 2021-03-19 | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 | 经改善的用于检测磷脂酶c的酶活力的方法及产品 |
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