JPH05238913A - 農園芸用殺虫剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【構成】 オリザシスタチン等のフィトシスタチンを有
効成分とする農園芸用殺虫剤。 【効果】 本発明の農園芸用殺虫剤は、貯蔵害虫や子実
害虫等に対する殺虫効果や生育阻害効果等の有効な駆除
効果を示し、また、その有効成分であるフィトシスタチ
ンは生体防御物質であり安全性が高いので安全な殺虫剤
として有利に使用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、農園芸用殺虫剤に関
し、更に詳細には、穀類、豆類等の各種作物に寄生する
ゾウムシ類等の貯蔵害虫やカメムシ類などの子実害虫等
を始めとする多くの害虫に有効でかつ安全性の高い農園
芸用殺虫剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】現在、農作物や穀物に発生する多くの害
虫を駆除するための農園芸用殺虫剤として、ピレスロイ
ド系殺虫剤、有機りん系殺虫剤およびカーバメイト系殺
虫剤などの有機合成化学物質が一般的に広く使用されて
いる。 しかし、これらの人工的に合成された化学物質
の中には、大量に用いた場合、環境汚染や人体に対する
悪影響などの危険性が指摘されている。

【０００３】かかる問題点を解決する一方策として、す
でに植物自身が持っている生体防御物質をそのものを植
物に散布する方法や、更には遺伝子工学的手法を用いて
生体防御物質を植物体内で大量に発現させる方法が提案
されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、貯蔵害
虫や子実害虫等に対して有効な効果を示す明確な生体防
御物質は、未だ見出されておらず、従来公知有機合成物
質を利用しているのが現状であり、これら害虫を駆除す
るためのより安全性の高い方法の開発が求められてい
た。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、昆虫に対
する生体防御物質について鋭意検索していたところ、植
物中に含まれるシステインプロティナーゼインヒビター
であるフィトシスタチンが貯蔵害虫や子実害虫等に対す
る有効な生体防御物質であることを見出し、本発明を完
成した。

【０００６】すなわち本発明は、フィトシスタチンを有
効成分とする農園芸用殺虫剤を提供するものである。

【０００７】本発明において有効成分として用いられる
フィトシスタチンは、植物中に含まれるシステインプロ
ティナーゼインヒビター（シスタチン）であり、イネ、
オオムギ、コムギ、ジャガイモあるいはトウモロコシな
どの栽培植物に由来するものであっても良く、また近年
報告されているバラ科植物等の観賞植物に含まれている
ものであっても良い。

【０００８】上記フィトシスタチン中でも、稲〔Oryza
sativa L. japonica〕種子に由来するオリザシスタチン
は、植物中に初めて見いだされたシスタチンとして知ら
れるものである。 このオリザシスタチンは、それまで
知られていた動物由来のシスタチンとは異なる性質を示
し、これまでに２種類の存在が報告されており、それぞ
れオリザシスタチン−Ｉ〔Abe,K., Emori,Y., Kondo,
H.,Suzuki,K. and Arai,S.: J.Biol.Chem., 262, 16793
-16797 (1987)〕、オリザシスタチン−ＩＩ〔Kondo,H.,
Abe,K., Nishimura,I., Watanabe,H.,Emori,Y. and S
oichi,A.: J.Biol.Chem., 265, 15832-15837 (1990)〕
と命名されている。

【０００９】この２つのオリザシスタチンはパパイン
（papain）、カテプシン（cathepsin）などのシステイ
ンプロティナーゼの活性を強く阻害するタンパク質性の
シスタチンであり、オリザシスタチン−ＩはＮ末端のメ
チオニンよりＣ末端のアラニンまでの合計１０２残基の
アミノ酸より構成されており、オリザシスタチン−ＩＩ
はＮ末端のメチオニンよりＣ末端のアラニンまでの１０
７残基のアミノ酸より構成されている。 このオリザシ
スタチンについては、すでにピコルナウイルス種に属す
るポリオウイルスに対して効果的な増殖阻害作用を持つ
ことが報告されている〔日本農芸化学会誌1991年度大会
講演要旨集253ページ〕。

【００１０】また、その他の栽培植物であるジャガイ
モ、コムギ、オオムギあるいはトウモロコシといったも
のにもシスタチンが存在することが証明されつつあり、
これらの一次構造、遺伝子構造などが判明されるにつ
れ、オリザシスタチンとの類似性が報告され、オリザシ
スタチンを中心とする「 フィトシスタチン・ファミリ
ー（phytocystatin family）」の存在が確認されつつあ
る。

【００１１】更に、１９９０年以降には、他の植物中の
植物シスタチンの存在が次々と報告されるようになっ
た。 例えばバラ科のフジの花の種子より３つのタイプ
のシスタチンの存在が確認され〔Hirasgi-ki,I.,Ogata,
F.,Yoshida,N.,Makisumi,S.,Itou,A.:J.Biochem.,108,6
04−608(1990)〕、そのうちの１つは部分配列ながらオ
リザシスタチン−Ｉと非常によく似ており、このものも
フィトシスタチンに含まれるものとされている。

【００１２】本発明の農園芸用殺虫剤に配合されるフィ
トシスタチンは、上記の各植物の植物体中から抽出した
ものであっても、また、上記各植物の遺伝子を利用し、
遺伝子工学的手法により製造したものでもあってもよ
い。

【００１３】このうち、フィトシスタチンの好適な一例
である、稲種子に由来するオリザシスタチンは、例えば
次の方法により得ることができ、他の植物からのフィト
シスタチンもこれに準じて得ることができる。

【００１４】すなわち、オリザシスタチンは、阿部らの
方法〔Abe,K., Kondo,H. and Arai,S.: Agric.Biol.Che
m., 51, 2763-2768 (1987)〕に従い、稲完熟種子より抽
出するか、または、サムブルークら（Sambrook et a
l.）のモレキュラー・クローニング（Molecular Clonin
g）第２版（Cold Spring Harbor, 1989）に記載の方法
を用い、阿部らの方法〔Abe,K., Emori,Y., Kondo, H.,
Suzuki,K. and Arai,S.: J.Biol.Chem., 262, 16793-16
797 (1987)〕および近藤らの方法〔Kondo,H., Abe,K.,
Nishimura,I., Watanabe,H., Emori,Y. and Soichi,A.:
J. Biol. Chem.,265, 15832-15837 (1990)〕に従っ
て、公知のオリザシスタチンをコードする遺伝子を用い
る遺伝子工学的手法により大腸菌内で発現させて取得す
ることができる。 ここで、オリザシスタチンの収量が
遺伝子工学的手法においては抽出法の約１０万倍である
ので、遺伝子工学的手法により得たものを利用すること
がより好適である。 このフィトシスタチンは、完全精
製品に限らず、粗精製品や部分精製品であっても良い。

【００１５】本発明の農園芸用殺虫剤の製造は、上記の
ようにして得られるフィトシスタチンを有効成分として
配合する以外は、一般に農薬製造分野で行なわれている
方法により製造することができる。

【００１６】この製造に当っては、通常農薬の製剤化に
際して使用される各種担体および各種の補助剤を利用す
ることができ、粉剤、粒剤、液剤、水和剤など所望の形
態とすることができる。 使用される担体の例として
は、クレー、タルク、カオリン、けいそう土、シリカな
どの固体担体や、水、アルコール類（例えば、メタノー
ル、エタノール）などの液体担体が挙げられる。 これ
らに更に、適当な界面活性剤やその他の補助剤、例えば
安定剤、展着剤などを適量配合し、製剤化しても良い。

【００１７】本発明の農園芸用殺虫剤中のフィトシスタ
チン含量は、特に制約はないが、完全精製品として、一
般に０.１〜３０重量％、好ましくは１〜１５重量％の
範囲とすることが適当である。

【００１８】以上のようにして調製される本発明の農園
芸用殺虫剤は、主に貯蔵害虫あるいは子実害虫に有効で
あるが、これのみに限らずシステインプロティナーゼを
有する害虫全般の防除に使用することができる。 ま
た、当該農園芸用殺虫剤はこれを単独で使用しても良い
が、他の殺虫剤、あるいは殺菌剤、殺ネマ剤、殺ダニ
剤、除草剤、植物生長調整剤、肥料、ＢＴ剤等の微生物
農薬、昆虫ホルモン剤その他の農薬等と混合することに
よってさらに効力のすぐれた多目的組成物を作ることも
でき、それらの配合により効力の相乗効果も期待でき
る。

【００１９】

【実施例】次に実施例および参考製造例を挙げ、本発明
を詳しく説明するが、本発明はこれら実施例等になんら
制約されるものではない。

【００２０】製 造 参 考 例 オ リ ザ シ ス タ チ ン の 製 造 ： （１）コメ種子全ＲＮＡの抽出 稲種子から全ＲＮＡの抽出を、日本型栽培稲の開花後２
週目の登熟期にあたる種子を用いて行なった。 すなわ
ち、この登熟途中の稲種子３ｇをコーヒー豆粉砕機を用
いて粉状に粉砕し、これに飽和フェノール溶液１５ｍｌ
を加えて攪拌し、１００ｍＭトリスヒドロキシアミノメ
タン塩酸緩衝液（ｐＨ８.０；５ｍＭ ＥＤＴＡおよび１
％ ラウリル硫酸ナトリウムを含む）を１５ｍｌ加え、
粉砕し、激 しく上下に１０分間振とうした後、遠心し
（４,０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ、，４℃）、水層を得
た。 その水層に対してフェノール溶液１５ｍｌを加
え、攪拌し遠心を行なう操作を３回繰り返した。 得ら
れた水層に対して４５ｍｌのエタノールを添加し、遠心
した後、沈澱画分を凍結乾燥し、約３ｍｇの稲種子全Ｒ
ＮＡを得た。

【００２１】（２）稲種子のｃＤＮＡライブラリーの調
製 上記（１）で得られた全ＲＮＡからのｍＲＮＡの単離、
ｃＤＮＡライブラリーの作製を公知の方法によって行な
った。 すなわち、稲種子の全ＲＮＡよりポリＡ ＲＮＡ
を分画し、これを鋳型としてｃＤＮＡを合成した。 こ
の合成ｃＤＮＡをクローニング用のファージベクター、
例えばλｇｔ１０に組み込み、大腸菌、例えばＣ６００
Ｈｆ１株の宿主を形質転換した。 これをχーブロース
の寒天培地（純水１ｌにトリペプトン２５ｇ、酵母エキ
ス１０ｇ、グルコース１ｇ、硫酸マグネシウム４.９ｇ
および塩化ナトリウム２.５ｇを溶かし、ｐＨ７.５に調
整し、寒天を３％添加したもの）上で培養することによ
り約１２万個の独立なプラークよりなる稲種子のｃＤＮ
Ａライブラリーを作製することができた。

【００２２】（３）オリザシスタチンのｃＤＮＡのスク
リーニング プラークの大きさが直径２ｍｍとなった時点で寒天培地
上にナイロンメンブレンフィルターをのせ、３分後にこ
れをはがし、アルカリ変性溶液（０.５ＭのＮａＯＨ溶
液に１.５ＭのＮａＣｌを含むもの）に５分間浸した
後、風乾した。次に、中和溶液（１.５Ｍのトリス塩酸
緩衝液、１.５ＭのＮａＣｌを含むもの）に２０分間浸
し中和した。 これを２ＸＳＳＣ溶液（１ｌの水に１７.
５ｇのＮａＣｌと８.８ｇのクエン酸ナトリウムを含む
もの）に浸した後、十分に風乾し、更に８０℃で６０分
間加熱処理し、ＵＶランプで１０分間照射することでＤ
ＮＡを固定した。 このフィルターを用いてオリザシス
タチンをコードするｃＤＮＡをスクリーニングすること
ができた。

【００２３】スクリーニングのために用いるプローブ
は、オリザシスタチン−Ｉについては既に公知となって
いるオリザシスタチン−Ｉ遺伝子の塩基配列（Abe,K.,
Emori,Y., Kondo,H., Suzuki,K. and Arai,S., J. Bio
l. Chem., 262, 16793 -16797(1987) ）をもとに２０ｍ
ｅｒ程度の長さのオリゴヌクレオチドプローブ、 例え
ば、５'−ＡＡＧＣＴＣＴＡＴＧＡＡＧＣＴＡＡＧＧＴ
ＣＴＧＧＧ−３'を合成し用いることができる。オリザ
シスタチン−ＩＩについても同様に既に公知となってい
る遺伝子の塩基配列（Kondo,H.,Abe,K.,Nishimura,Ｉ.,
Emori,Y., and Arai,S., J.Biol.Chem., 265, 15832 -
15837 (1990) ）をもとに約２０ｍｅｒ程度のオリゴヌ
クレオチドプローブ、例えば、５'−ＡＧＧＣＡＧＣＡ
ＧＧＴＧＧＴＧＧＧＣＧＧＧＴＴＣ−３'を合成し用い
ることができる。 これらのオリゴヌクレオチドプロー
ブを用いた、ナイロンフィルターに固定された稲種子の
ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニングは、例えば放射
性同位元素化合物γ−³²Ｐ−デオキシＣＴＰを用いてオ
リゴヌクレオチドプローブを標識し、４２℃の温度でハ
イブリダイゼーションを行い、オートラジオグラフィー
によって検出される陽性シグナルをプレート上のプラー
クと照合することによって行なった。

【００２４】陽性シグナルに対応するプレート上プラー
クを含むソフトアガロースをＳＭ溶液（０.１ＭのＮａ
Ｃｌ、８.１ｍＭの硫酸マグネシウム）５μｌに懸濁
し、クロロホルムを一滴加え、溶解することにより、オ
リザシスタチン−ＩをコードするｃＤＮＡインサートを
含むファージクローンを得ることができた。 オリザシ
スタチン−ＩＩについても同様にファージクローンを得
ることができた。 これを適当な制限酵素、例えばＥｃ
ｏＲＩで消化し、その消化断片をクローニング用のプラ
スミドベクター、例えばｐＵＣ１８などにサブクローニ
ングして、既に公知となっているものと同様のオリザシ
スタチン−Ｉ、およびオリザシスタチン−ＩＩの最長を
コードするプラスミドを得ることができた。

【００２５】（４）発現プラスミドの調製 オリザシスタチン−Ｉおよびオリザシスタチン−ＩＩを
大腸菌内で発現させるための発現プラスミドの構築は、
発現ベクタ−として既に公知となっているｐＫＫ ２３
３−２プラスミドを用い、このマルチクローニングサイ
トの制限酵素切断点であるＮｃｏＩとＰｓｔＩに上記
（３）で得られたたｐＵＣ１８プラスミドベクターにク
ローニングされたオリザシスタチン−Ｉおよびオリザシ
スタチン−ＩＩをコードする遺伝子を挿入することによ
り行なった。 ｐＫＫ ２３３−２プラスミドへのオリザ
シスタチン遺伝子の挿入に当っては、オリザシスタチン
−Ｉの場合、そのアミノ酸配列の開始メチオニンの位置
に相当する塩基配列に制限酵素ＮｃｏＩサイトを挿入す
ることにより始めた。

【００２６】このＮｃｏＩサイトの構築はサムブルック
（Sambrook）らのモレキュラー・クローニング第二版（C
old Spring Harbor, 1989）に記載されている部位指定
変異法により行なった。 この場合、オリゴヌクレオチ
ドプローブとして５'−ＧＣＣＡＴＧＧＣＧＡＧＣ−３'
を使用することにより、容易に塩基配列をＧＡＡＧＡＴ
ＧＧＴＣＧＡＧＣからＧＡＣＣＡＴＧＧＧＣＧＡＧＣと
変えることができ、ＣＣＡＴＧＧというＮｃｏＩ制限酵
素サイトを構築することができた。

【００２７】上記したようにＮｃｏＩ制限酵素サイトを
構築した後、ｐＵＣ１８プラスミドベクターにクローニ
ングされたオリザシスタチン−Ｉをコードする塩基配列
をＮｃｏＩとＰｓｔＩサイトで消化することによりＤＮ
Ａ断片を得、更にこれをｐＫＫ２３３−２プラスミドの
ＮｃｏＩとＰｓｔＩサイトに挿入することによりオリザ
シスタチン−Ｉの発現プラスミドを完成させることがで
きた。 得られた発現プラスミドを用いることにより、
後記のように天然の稲に存在するものと同じ１０２残基
のアミノ酸よりなるオリザシスタチン−Ｉを大腸菌内で
生産させることができた。

【００２８】一方、オリザシスタチン−ＩＩに関しても
同様に行なうことができた。 この場合、オリゴヌクレ
オチドプローブとして５'−ＧＧＣＣＡＴＧＧＣＣＧＡ
ＧＧＡ−３'を用いることにより、容易にＧＧＣＧＡＴ
ＧＧＣＣＧＡＧＧＡの塩基配列をＧＧＣＣＡＴＧＧＣＣ
ＧＡＧＧＡと変えることができた。 この場合も得られ
た発現プラスミドを用いることにより、天然の稲に存在
するものと同じ１０７残基のアミノ酸よりなるオリザシ
スタチン−ＩＩを後記のように大腸菌内で生産させるこ
とができた。

【００２９】（５）大腸菌内での生産のための形質転換
大腸菌株の調製 大腸菌、例えば大腸菌ＹＡ２１株を３０ｍｌのＳＯＢ液
体培地（１ｌの水あたり、２０ｇのバクトトリプトン、
１０ｇの酵母エキス、０.６ｇのＮａＣｌおよび０.２ｇ
のＫＣｌを含む）で３７℃、４時間培養し、５５０ｎｍ
で測定した吸光度が約０.４程度の菌濁度となるように
調製する。 遠心後、菌体を１０ｍＭの硫酸マグネシウ
ム水溶液に懸濁し、４℃にて１５分間静置する。 再び
遠心後、菌体を２ｍｌの５０ｍＭ 塩化カルシウム水溶
液に懸濁し、４℃で１０分間静置する。 この菌濁液２
１０μｌに（４）で調製したオリザシスタチン−Ｉある
いはオリザシスタチン−ＩＩのそれぞれの挿入断片を含
む発現プラスミドを添加し、４℃で３０分間静置するこ
とにより大腸菌を形質転換させた。 つづいて、４２℃
で８０秒間熱処理し、再び４℃にて２分間静置した後、
ＳＯＣ（ＳＯＢに１０ｍＭのグルコースを含む）を８０
０μｌ加え、３７℃にて１時間振とう培養し、形質転換
菌を１.５％寒天と、５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを
含むχ−ブロース寒天培地上で３７℃、１８時間選択培
養した。

【００３０】（６）形質転換大腸菌内の培養方法 上記（５）でコロニーとして得られたオリザシスタチン
−Ｉあるいはオリザシスタチン−ＩＩのそれぞれの形質
転換菌を８００ｍｌのχーブロース液体培地で３７℃で
８時間培養した。 続いて、この菌体懸濁培養液を４０
ｌの発現用培地（水１ｌあたり、２５ｇのポリペプト
ン、１０ｇの酵母エキス、４.９ｇの硫酸マグネシウ
ム、１５.２ｇのリン酸水素ナトリウム１２水和物、１.
２ｇのリン酸二水素カリウム、１ｇの塩化アンモニウ
ム、０.７５ｇの塩化ナトリウム、０.０８３５ｇの塩化
マグネシウム６水和物、０.１１５ｇの硫酸ナトリウム
および０.４ｍｌのシリコンＫＭ７２を含む）に添加
し、３７℃で１８時間培養した。 この際、密閉された
５０リットルジャーを用いた。 また、培養終了４時間
前にＩＰＴＧ（イソプロピルガラクトピラノシド）を最
終容量１ｍＭとなるように添加した。

【００３１】（７）菌体内に生産されたオリザシスタチ
ンの抽出方法 上記（６）で得られた菌体培養液を、連続遠心（４℃、
８,０００ｒｐｍ、約５時間）に付すことにより菌体を
回収した。 ４０リットルの培養液から約６００ｇ湿重
量の菌体を得た。 この６００ｇ湿重量の菌体を４リッ
トルの菌抽出液（２５ｍＭ トリスー塩酸緩衝液＜ｐＨ
７.８＞；５ｍＭ ＥＤＴＡおよび３ｍＭメルカプトエタ
ノールを含む）中に懸濁し、ガラスビーズを充填させた
ダイノミルにて菌体を破砕し、菌体内生産物を抽出する
ことができた。 オリザシスタチン−Ｉとオリザシスタ
チン−ＩＩは水溶性タンパク質であるため容易に抽出液
中に溶解させることができた。

【００３２】（８）オリザシスタチンの精製方法 上記（７）で得られたオリザシスタチンＩおよびオリザ
シスタチンＩＩ抽出液のそれぞれを８０℃で１０分間熱
処理し、遠心（７,０００ｒｐｍ、１０分間、４℃）し
て、オリザシスタチン画分を含んだ上清液を得た。 こ
の上清液に対して３％のポリエチレンイミン水溶液を５
容量％添加し、室温にて１０分間攪拌後、遠心（８,０
００ｒｐｍ、１０分間、４℃）することにより不要な核
酸を除いた。 このオリザシスタチンを含む上清液に対
して、２５％から７５％の濃度にて硫酸アンモニウム分
画を行い、それぞれオリザシスタチンを含む最終沈澱画
分を８００ｍｌのＤＥＡＥ用緩衝液（２５ｍＭ トリス
ー塩酸＜ｐＨ７.５＞；５ｍＭ ＥＤＴＡおよび２ｍＭ
メルカプトエタノールを含む）に溶かした。

【００３３】（９）オリザシスタチン−ＩおよびＩＩの
カラムクロマトグラフィーによる精製法 上記（８）にて説明したＤＥＡＥ用緩衝液で平衡化し
た、ＤＥＡＥセルロースカラム（７φ×５０ｃｍ）に
（８）で得られた各オリザシスタチン抽出液を供した。
オリザシスタチンの溶出は０Ｍから０.６ＭのＮａＣｌ
を用いたリニアーグラディエントにより行なった。 オ
リザシスタチン−Ｉおよびオリザシスタチン−ＩＩとも
に０.２Ｍの塩濃度にて溶出される画分に含まれてい
た。 続いて、このオリザシスタチン溶液を集め、最終
濃度３０％となるように硫酸アンモニウムを加えた。
疎水クロマト用緩衝液（２５ｍＭ トリスー塩酸＜ｐＨ
７.５＞；５ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ メルカプトエタノ
ール、３０％硫酸アンモニウムを含む）にて平衡化した
ブチルトヨパール ６５０Ｍカラム（５φ×３０ｃｍ）
に３０％硫酸アンモニウムを加えたオリザシスタチン溶
液を供した。 溶出は３０％から０％の硫酸アンモニウ
ム濃度のリニアーグラディエントにて行なった。 オリ
ザシスタチン−Ｉおよびオリザシスタチン−ＩＩともに
１７％の硫酸アンモニウム濃度にて溶出される画分に含
まれていた。

【００３４】このオリザシスタチン画分をＱＡＥ用緩衝
液（２５ｍＭ トリスー塩酸＜ｐＨ８.２＞；２ｍＭ Ｅ
ＤＴＡを含む。）に対して透析し、この緩衝液にて平衡
化したＱＡＥセルロースカラム（５φ×４０ｃｍ）に供
した。 溶出は０Ｍから０.６ＭのＮａＣｌによるリニア
ーグラディエントにより行なった。 オリザシスタチン
−Ｉおよびオリザシスタチン−ＩＩともに０.４Ｍの塩
濃度にて溶出される画分に含まれていた。 この画分を
水に対して透析後、更に凍結乾燥することにより、オリ
ザシスタチン−Ｉおよびオリザシスタチン−ＩＩの精製
品を４０リットル培養、すなわち菌体湿重量６００ｇあ
たり、それぞれ約４ｇずつ得ることができた。

【００３５】実 施 例 １ ホソヘリカメムシ（Riptortus clavaus）に対する生育
阻害効果：餌であるササゲ粉（Vigana Ungaiculate）
に、オリザシスタチン−Ｉ（参考製造例（９）によって
得た精製品；以下「ＯＣ−Ｉ」と略称する）またはオリ
ザシスタチン−ＩＩ（参考製造例（９）によって得た精
製品；以下「ＯＣ−ＩＩ」と略称する）をそれぞれ０.
１％、０.３％、０.５％、１.０％および２.０％の濃度
で加え、この餌を摂取したホソヘリカメムシの生育阻害
状況を調査した。 飼料は０.５ｇ、放飼虫は５頭の６反
復によりおこなった。 ２１日間飼育した後の生存率を
第１表に示す

【００３６】

【００３７】実 施 例 ２ ホソヘリカメムシ（Riptortus clavatus）の羽化率およ
び齢数に対するＯＣ−ＩまたはＯＣ−ＩＩの効果：試験
例１と同様に飼料中にＯＣ−ＩまたはＯＣ−ＩＩを添加
し、この飼料でホソヘリカメムシを２１日飼育した後の
羽化率を調査した。また、ＯＣ−ＩまたはＯＣ−ＩＩを
それぞれ１.０％および２.０％の濃度で含む餌で２１日
間飼育したホソヘリカメムシの生存虫の平均齢数と死亡
虫の平均齢数を調査した。ホソヘリカメムシについての
羽化率を第２表に、生存虫の平均齢数と死亡虫の平均齢
数を第３表にそれぞれ示す。

【００３８】

【００３９】 * ホソヘリカメムシは５回の不完全変態をして成虫に
なるが、ここで言う「齢」とは、幼虫の１から５までの
それぞれの不完全変態ステージを意味する。

【００４０】第３表の結果から明らかなように、オリザ
シスタチンを含む餌で生育させたホソヘリカメムシは、
死亡虫の平均齢数は無処理のものと比べて若かった。
また、生存虫の平均齢数も無処理のものと比べ若かっ
た。 このことから、オリザシスタチンはホソヘリカメ
ムシの生育を阻害することが明かとなった。

【００４１】なお、表中には記載していないが、１％
ＯＣ−ＩＩで飼育したホソヘリカメムシの生存率は２０
％、２％ ＯＣ−ＩＩで飼育したホソヘリカメムシの生
存率は３.３７％であった。

【００４２】試 験 例 ３ アズキゾウムシに対する生育阻害効果：ササゲ種子粉砕
後のササゲ粉をアズキゾウムシの餌とし、この餌０.５
ｇ中にＯＣ−ＩまたはＯＣ−ＩＩをそれぞれ０.１％、
０.３％、０.５％、１.０％および２.０％の濃度で添加
し、アズキゾウムシの生存率に及ぼす影響を検討した。
個体数は２０頭とし、３反復により試験を行った。 そ
の結果を第４表に示す。

【００４３】

【００４４】試 験 例 ４ オリザシスタチンがアズキゾウムシの羽化率に及ぼす影
響：試験例１と同様に飼料中にＯＣ−ＩまたはＯＣ−Ｉ
Ｉを添加し、この飼料でアズキゾウムシを２１日間飼育
した後の羽化率を調査した。 この結果を第５表に示
す。

【００４５】

【００４６】製 剤 例 １ 粉 剤： （ 組 成 ） 精製オリザシスタチン−Ｉ（またはＩＩ）^* ５％ タ ル ク ９５％ * 製造参考例で得たもの。 （ 製 法 ）オリザシスタチンをタルクと混合し、該混
合物を適当なミル中で磨砕することにより粉剤を得た。

【００４７】製 剤 例 ２ （ 組 成 ） 精製オリザシスタチンＩ（またはＩＩ）^* ８％ カオリン（微粉砕） ９２％ * 製造参考例で得たもの。 （ 製 法 ）製剤例１と同様にして粉剤を得た。

【００４８】製 剤 例 ３ 液 剤 ：精製オリザシスタチンＩ（またはＩＩ）２
ｇ及びポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル１ｇ
を水１００ｍｌ中に溶かし、これにピペロニルブトキシ
サイド５ｇを加えホモミキサー中で均等に混合分散させ
て液剤約１００ｍｌを得た。

【００４９】

【発明の効果】本発明の農園芸用殺虫剤は、貯蔵害虫や
子実害虫等に対する殺虫効果や生育阻害効果等の有効な
駆除効果を示し、また、その有効成分であるフィトシス
タチンは生体防御物質であり安全性が高いので安全な殺
虫剤として有利に使用することができる。

【手続補正書】

【提出日】平成４年４月１７日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００１１】更に、１９９０年以降には、他の植物中の
植物シスタチンの存在が次々と報告されるようになっ
た。例えばバラ科のフジの花の種子より３つのタイプの
シスタチンの存在が確認され〔Ｈｉｒａｓｈｉｋｉ，
Ｉ．，Ｏｇａｔａ，Ｆ．，Ｙｏｓｈｉｄａ，Ｎ．，Ｍａ
ｋｉｓｕｍｉ，Ｓ．，Ｉｔｏ，Ａ．：Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．，１０８，６０４−６０８（１９９０）〕、そのう
ちの１つは部分配列ながらオリザシスタチン−Ｉと非常
によく似ており、このものもフィトシスタチンに含まれ
るものとされている。

【手続補正２】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３７

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３７】実施例 ２ ホソヘリカメムシ（Ｒｉｐｔｏｒｔｕｓ ｃｌａｖａｔ
ｕｓ）の羽化率および齢数に対するＯＣ−ＩまたはＯＣ
−ＩＩの効果：実施例１と同様に飼料中にＯＣ−Ｉまた
はＯＣ−ＩＩを添加し、この飼料でホソヘリカメムシを
２１日飼育した後の羽化率を調査した。また、ＯＣ−Ｉ
またはＯＣ−ＩＩをそれぞれ１．０％および２．０％の
濃度で含む餌で２１日間飼育したホソヘリカメムシの生
存虫の平均齢数と死亡虫の平均齢数を調査した。ホソヘ
リカメムシについての羽化率を第２表に、生存虫の平均
齢数と死亡虫の平均齢数を第３表にそれぞれ示す。

【手続補正３】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４２

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４２】実施例 ３ アズキゾウムシに対する生育阻害効果：ササゲ種子粉砕
後のササゲ粉をアズキゾウムシの餌とし、この餌０．５
ｇ中にＯＣ−ＩまたはＯＣ−ＩＩをそれぞれ０．１％、
０．３％、０．５％、１．０％および２．０％の濃度で
添加し、アズキゾウムシの生存率に及ぼす影響を検討し
た。個体数は２０頭とし、３反復により試験を行った。
その結果を第４表に示す。

【手続補正４】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００４４

【補正方法】変更

【補正内容】

【００４４】実施例４ オリザシスタチンがアズキゾウムシの羽化率に及ぼす影
響：実施例１と同様に飼料中にＯＣ−ＩまたはＯＣ−Ｉ
Ｉを添加し、この飼料でアズキゾウムシを２１日間飼育
した後の羽化率を調査した。この結果を第５表に示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 天知 輝夫 大阪府三島郡島本町若山台１丁目１番１号 サントリー株式会社基礎研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 フィトシスタチンを有効成分とする農園
   芸用殺虫剤。
2. 【請求項２】 フィトシスタチンがオリザシスタチンで
   ある請求項第１項記載の農園芸用殺虫剤。