JPH05111397A - ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化方法及び安定化剤並びに安定化された二酸化炭素測定用組成物 - Google Patents
ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化方法及び安定化剤並びに安定化された二酸化炭素測定用組成物Info
- Publication number
- JPH05111397A JPH05111397A JP30426491A JP30426491A JPH05111397A JP H05111397 A JPH05111397 A JP H05111397A JP 30426491 A JP30426491 A JP 30426491A JP 30426491 A JP30426491 A JP 30426491A JP H05111397 A JPH05111397 A JP H05111397A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- carbon dioxide
- carboxylase
- phosphoenolpyruvic
- ammonium sulfate
- organic solvent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
の安定性を大幅に改善し、安定化された二酸化炭素測定
用組成物を提供する。 【構成】 （ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸素原子を含む
不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もしくは糖アルコ
ールを含むホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
の安定化剤、並びにホスホエノールピルビン酸、還元型
補酵素、リンゴ酸脱水素酵素、ホスホエノールピルビン
酸カルボキシラーゼ及び前記安定化剤を含む安定化され
た二酸化炭素測定用組成物。
の安定性を大幅に改善し、安定化された二酸化炭素測定
用組成物を提供する。 【構成】 （ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸素原子を含む
不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もしくは糖アルコ
ールを含むホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ
の安定化剤、並びにホスホエノールピルビン酸、還元型
補酵素、リンゴ酸脱水素酵素、ホスホエノールピルビン
酸カルボキシラーゼ及び前記安定化剤を含む安定化され
た二酸化炭素測定用組成物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明ホスホエノールピルビン酸
カルボキシラーゼ（ＥＣ．４．１．１．３１以下ＰＥＰ
Ｃａｓｅと略す）およびＰＥＰＣａｓｅを含んでなる二
酸化炭素測定用組成物の安定化に関する。
カルボキシラーゼ（ＥＣ．４．１．１．３１以下ＰＥＰ
Ｃａｓｅと略す）およびＰＥＰＣａｓｅを含んでなる二
酸化炭素測定用組成物の安定化に関する。
【０００２】高等生物の血液は恒常性により常にある一
定のｐＨ範囲内に調節されているが、ある種の疾病では
このｐＨが異常に酸性、もしくはアルカリ性に傾くこと
が知られている。このような血液のｐＨ変化は体液中の
ナトリウム、カリウム、リン酸、炭酸等の各イオンのバ
ランスが変化することによってもたらされるものであ
り、病態を把握するために血液中の二酸化炭素量を測定
することは、臨床的に非常に意義のあることである。
定のｐＨ範囲内に調節されているが、ある種の疾病では
このｐＨが異常に酸性、もしくはアルカリ性に傾くこと
が知られている。このような血液のｐＨ変化は体液中の
ナトリウム、カリウム、リン酸、炭酸等の各イオンのバ
ランスが変化することによってもたらされるものであ
り、病態を把握するために血液中の二酸化炭素量を測定
することは、臨床的に非常に意義のあることである。
【０００３】二酸化炭素の測定には電極を用いる方法と
酵素を用いる方法が知られているが、特別な検出装置を
必要とせず、多数の検体を短時間に測定できるため酵素
法が有利である。ＰＥＰＣａｓｅは下記化１に示すよう
に二酸化炭素をホスホエノールピルビン酸（以下ＰＥＰ
と略す）に付加しオキザロ酢酸を生成する反応を触媒す
る酵素で、下記化２に示す反応系を利用した二酸化炭素
の酵素的測定法に用いられている。
酵素を用いる方法が知られているが、特別な検出装置を
必要とせず、多数の検体を短時間に測定できるため酵素
法が有利である。ＰＥＰＣａｓｅは下記化１に示すよう
に二酸化炭素をホスホエノールピルビン酸（以下ＰＥＰ
と略す）に付加しオキザロ酢酸を生成する反応を触媒す
る酵素で、下記化２に示す反応系を利用した二酸化炭素
の酵素的測定法に用いられている。
【０００４】
【化１】
【０００５】
【化２】
【０００６】
【従来の技術】ＰＥＰＣａｓｅは広く天然界に分布し、
とうもろこし等のＣ4植物由来のものが特に有名である
が、Ｃ3 植物、藍藻類、大腸菌・シュウドモナス属細菌
をはじめ微生物由来のものも知られ、多くの報告がなさ
れている。〔Ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍｅ（３ｒｄ ｅ
ｄ．），６．ｐ１１７−１６８（１９７２），Ｐｌａｎ
ｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ５７，９０６−９１０（１９７
６），Ｂ．Ｂ．Ｒ．Ｃ．１３３，４３６−４４１（１９
８５）等〕
とうもろこし等のＣ4植物由来のものが特に有名である
が、Ｃ3 植物、藍藻類、大腸菌・シュウドモナス属細菌
をはじめ微生物由来のものも知られ、多くの報告がなさ
れている。〔Ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍｅ（３ｒｄ ｅ
ｄ．），６．ｐ１１７−１６８（１９７２），Ｐｌａｎ
ｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ ５７，９０６−９１０（１９７
６），Ｂ．Ｂ．Ｒ．Ｃ．１３３，４３６−４４１（１９
８５）等〕
【０００７】一般にこの酵素の安定ｐＨ域はその由来に
関わらず弱酸性から中性でありアルカリ性側では急速に
失活する。しかし、弱酸性では測定対象の二酸化炭素が
飛散してしまうため実際にこの酵素が使用されるのはｐ
Ｈ７．５〜８．０の弱アルカリ性であり、反応試薬中で
のＰＥＰＣａｓｅの安定性の悪さは、酵素法による二酸
化炭素測定における大きな問題のひとつであった。
関わらず弱酸性から中性でありアルカリ性側では急速に
失活する。しかし、弱酸性では測定対象の二酸化炭素が
飛散してしまうため実際にこの酵素が使用されるのはｐ
Ｈ７．５〜８．０の弱アルカリ性であり、反応試薬中で
のＰＥＰＣａｓｅの安定性の悪さは、酵素法による二酸
化炭素測定における大きな問題のひとつであった。
【０００８】従来ＰＥＰＣａｓｅの安定性を改善するた
め、多くの検討が加えられている。例えば、アスパラギ
ン酸・硫安・ＥＤＴＡの添加〔Ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍｅ
（３ｒｄ ｅｄ．）６，ｐ１１７−１６８（１９７
２）、米国特許第３，９６３，５７８号〕や、タンパク
質分解酵素阻害剤の添加（特開平１−９５７７９）があ
る。しかし、これらの安定化剤が二酸化炭素測定用試薬
に添加するのに不適当なものであったり、安定化剤の添
加によってもＰＥＰＣａｓｅのアルカリ側での安定性が
必ずしも大きく改善されないこともあり、反応試薬中の
酵素の寿命は極端に短いものであった。
め、多くの検討が加えられている。例えば、アスパラギ
ン酸・硫安・ＥＤＴＡの添加〔Ｔｈｅ Ｅｎｚｙｍｅ
（３ｒｄ ｅｄ．）６，ｐ１１７−１６８（１９７
２）、米国特許第３，９６３，５７８号〕や、タンパク
質分解酵素阻害剤の添加（特開平１−９５７７９）があ
る。しかし、これらの安定化剤が二酸化炭素測定用試薬
に添加するのに不適当なものであったり、安定化剤の添
加によってもＰＥＰＣａｓｅのアルカリ側での安定性が
必ずしも大きく改善されないこともあり、反応試薬中の
酵素の寿命は極端に短いものであった。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】一般に多価アルコール
等の不揮発性有機溶媒や糖・糖アルコールは、溶液の極
性を低下させる作用を持ち、硫安等の塩類による塩析効
果を妨げるため、酵素の安定性を改善する目的で併用さ
れている例を見ない。また、先に記載した参考文献等の
中にも硫安と有機溶媒あるいは糖・糖アルコールを共存
させている記載は無く、グリセロールの添加については
反応性を向上させる目的で添加している例があるが〔Ｐ
ｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．５７，９０６−９１０（１
９７６）〕、硫安と共存させておらず、安定性の向上に
ついてもなんら言及するものではない。
等の不揮発性有機溶媒や糖・糖アルコールは、溶液の極
性を低下させる作用を持ち、硫安等の塩類による塩析効
果を妨げるため、酵素の安定性を改善する目的で併用さ
れている例を見ない。また、先に記載した参考文献等の
中にも硫安と有機溶媒あるいは糖・糖アルコールを共存
させている記載は無く、グリセロールの添加については
反応性を向上させる目的で添加している例があるが〔Ｐ
ｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌ．５７，９０６−９１０（１
９７６）〕、硫安と共存させておらず、安定性の向上に
ついてもなんら言及するものではない。
【００１０】本発明者らは、二酸化炭素測定用試薬の性
能を実質的に低下させずＰＥＰＣａｓｅを安定化する手
段について種々検討を加えた結果、硫安の存在下、分子
中に酸素原子を含む不揮発性有機溶媒、及び／または糖
・糖アルコールを添加することによってＰＥＰＣａｓｅ
の安定性が弱酸性から中性域においてのみならず弱アル
カリ性域においても飛躍的に向上することを見いだし、
本発明を完成するに至った。
能を実質的に低下させずＰＥＰＣａｓｅを安定化する手
段について種々検討を加えた結果、硫安の存在下、分子
中に酸素原子を含む不揮発性有機溶媒、及び／または糖
・糖アルコールを添加することによってＰＥＰＣａｓｅ
の安定性が弱酸性から中性域においてのみならず弱アル
カリ性域においても飛躍的に向上することを見いだし、
本発明を完成するに至った。
【００１１】
【課題を解決するための手段】本発明者の要旨は、
（１）ＰＥＰＣａｓｅに（ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸
素原子を含む不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もし
くは糖アルコールを共存させることを特徴とするＰＥＰ
Ｃａｓｅの安定化方法、（２）（ａ）硫安、（ｂ）分子
中に酸素原子を含む不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）
糖もしくは糖アルコールを含むことを特徴とするホスホ
エノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化剤、並び
に（３）ホスホエノールピルビン酸、還元型補酵素、Ｐ
ＥＰＣａｓｅ及びリンゴ酸脱水素酵素を含んでなる二酸
化炭素測定用組成物において、（ａ）硫安、（ｂ）分子
中に酸素原子を含む不揮発性溶媒及び／又は（ｃ）糖も
しくは糖アルコールを共存させることを特徴とする安定
化された二酸化炭素測定用組成物に存する。
（１）ＰＥＰＣａｓｅに（ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸
素原子を含む不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もし
くは糖アルコールを共存させることを特徴とするＰＥＰ
Ｃａｓｅの安定化方法、（２）（ａ）硫安、（ｂ）分子
中に酸素原子を含む不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）
糖もしくは糖アルコールを含むことを特徴とするホスホ
エノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化剤、並び
に（３）ホスホエノールピルビン酸、還元型補酵素、Ｐ
ＥＰＣａｓｅ及びリンゴ酸脱水素酵素を含んでなる二酸
化炭素測定用組成物において、（ａ）硫安、（ｂ）分子
中に酸素原子を含む不揮発性溶媒及び／又は（ｃ）糖も
しくは糖アルコールを共存させることを特徴とする安定
化された二酸化炭素測定用組成物に存する。
【００１２】本発明で言う分子中に酸素原子を含む不揮
発性有機溶媒とは、グリセロール、エチレングリコール
等の多価アルコール及びその重・縮合体及びその誘導
体、ジメチルスルホキシド、エーテル化合物、エステル
化合物およびこれらの誘導体等を指すものである。
発性有機溶媒とは、グリセロール、エチレングリコール
等の多価アルコール及びその重・縮合体及びその誘導
体、ジメチルスルホキシド、エーテル化合物、エステル
化合物およびこれらの誘導体等を指すものである。
【００１３】また、糖とは、マンノース、ガラクトース
等の単糖類、シュークロース、トレハロース等の二糖
類、サリシン等の少糖類を含むものであり、糖アルコー
ルとは、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、
グルシトール等を言うものである。
等の単糖類、シュークロース、トレハロース等の二糖
類、サリシン等の少糖類を含むものであり、糖アルコー
ルとは、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、
グルシトール等を言うものである。
【００１４】本発明を実施するにあたり、用いるＰＥＰ
Ｃａｓｅは市販されているとうもろこし由来酵素または
小麦由来酵素を利用することもできるし、藍藻や微生物
の培養物から精製により調製することもできる。酵素濃
度は実施者が設定した任意の濃度に溶解することが出来
るが、本発明の方法によればＰＥＰＣａｓｅが０．１Ｕ
／ｍｌ以下の酵素希薄溶液に於いても効果を示すことが
出来る。しかし、本発明はＰＥＰＣａｓｅの給源または
存在状態を何等限定するものではない。
Ｃａｓｅは市販されているとうもろこし由来酵素または
小麦由来酵素を利用することもできるし、藍藻や微生物
の培養物から精製により調製することもできる。酵素濃
度は実施者が設定した任意の濃度に溶解することが出来
るが、本発明の方法によればＰＥＰＣａｓｅが０．１Ｕ
／ｍｌ以下の酵素希薄溶液に於いても効果を示すことが
出来る。しかし、本発明はＰＥＰＣａｓｅの給源または
存在状態を何等限定するものではない。
【００１５】また、本発明で酵素安定化の為に添加する
安定化剤は酵素の共存物質として従来頻繁に用いられて
おり、単独でもまたは組合せでも二酸化炭素測定用試薬
中の他の酵素に悪影響を及ぼすものではなく、自動分析
機での測定にも適したものである。
安定化剤は酵素の共存物質として従来頻繁に用いられて
おり、単独でもまたは組合せでも二酸化炭素測定用試薬
中の他の酵素に悪影響を及ぼすものではなく、自動分析
機での測定にも適したものである。
【００１６】安定化剤は酵素を含む試薬を取り扱う上で
不都合の無い範囲内で添加量を調整することができる
が、例えば硫安、有機溶媒ともに１％（ｗ／ｖ）以下と
いった測定試薬の浸透圧や粘性を著しく高める恐れの無
い底濃度で効果を示すことができる。このように低濃度
で効果が得られることは用手法のみならず自動分析機で
測定する場合にも、測定値の日間変動、日内変動を抑制
する上で重要なことである。
不都合の無い範囲内で添加量を調整することができる
が、例えば硫安、有機溶媒ともに１％（ｗ／ｖ）以下と
いった測定試薬の浸透圧や粘性を著しく高める恐れの無
い底濃度で効果を示すことができる。このように低濃度
で効果が得られることは用手法のみならず自動分析機で
測定する場合にも、測定値の日間変動、日内変動を抑制
する上で重要なことである。
【００１７】本発明に用いるバッファー種及びその濃度
は特に限定されるものてはないが、ｐＨ５．５〜８．５
の間で緩衝能を有し、かつ必要十分な緩衝能を保つ濃度
に設定されていることが望ましい。この様なバッファー
種として汎用的なリン酸バッファーやトリスバッファー
を使用することもできるし、ＢＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＴＥ
Ｓ等のグッドバッファーを使用することもできる。バッ
ファー濃度は好ましくは１０ｍＭ〜０．５Ｍ、さらに好
ましくは５０ｍＭ〜０．１Ｍである。また、バッファー
中にキレート剤、スルフヒドリル化合物、無機塩類、牛
血清アルブミン、アミノ酸、界面活性剤、抗生物質等を
含有することもできる。
は特に限定されるものてはないが、ｐＨ５．５〜８．５
の間で緩衝能を有し、かつ必要十分な緩衝能を保つ濃度
に設定されていることが望ましい。この様なバッファー
種として汎用的なリン酸バッファーやトリスバッファー
を使用することもできるし、ＢＥＳ、ＨＥＰＥＳ、ＴＥ
Ｓ等のグッドバッファーを使用することもできる。バッ
ファー濃度は好ましくは１０ｍＭ〜０．５Ｍ、さらに好
ましくは５０ｍＭ〜０．１Ｍである。また、バッファー
中にキレート剤、スルフヒドリル化合物、無機塩類、牛
血清アルブミン、アミノ酸、界面活性剤、抗生物質等を
含有することもできる。
【００１８】二酸化炭素測定試液中に空気中の二酸化炭
素が溶解し、還元型補酵素やＰＥＰが消費されるのを防
ぐために試薬を保存している容器を密閉することの他、
窒素のばっ気、炭酸イオン吸収体添加などの処理を施す
ことは常法である。
素が溶解し、還元型補酵素やＰＥＰが消費されるのを防
ぐために試薬を保存している容器を密閉することの他、
窒素のばっ気、炭酸イオン吸収体添加などの処理を施す
ことは常法である。
【００１９】
【実施例】以下実施例によって本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明はこれらによって限定されるもので
はない。 実施例１ 硫安１．０％（ｗ／ｖ）を含む５０ｍＭのトリス塩酸バ
ッファーに各化合物５．０％（ｗ／ｖ）を共存させとう
もろこし由来ＰＥＰＣａｓｅを０．２Ｕ／ｍｌになるよ
うに溶解した。これを２５℃に保存してＰＥＰＣａｓｅ
の残存活性を追跡した。結果は表１に示すように、各化
合物の共存によって高い安定化効果が得られることが明
らかである。 表１ 添加物 残存率（８日後） なし １５（％） グリセロール ５０ エチレングリコール ４８ ジメチルスルホキシド ３６ イノシトール ２８ ソルビトール ３３
説明するが、本発明はこれらによって限定されるもので
はない。 実施例１ 硫安１．０％（ｗ／ｖ）を含む５０ｍＭのトリス塩酸バ
ッファーに各化合物５．０％（ｗ／ｖ）を共存させとう
もろこし由来ＰＥＰＣａｓｅを０．２Ｕ／ｍｌになるよ
うに溶解した。これを２５℃に保存してＰＥＰＣａｓｅ
の残存活性を追跡した。結果は表１に示すように、各化
合物の共存によって高い安定化効果が得られることが明
らかである。 表１ 添加物 残存率（８日後） なし １５（％） グリセロール ５０ エチレングリコール ４８ ジメチルスルホキシド ３６ イノシトール ２８ ソルビトール ３３
【００２０】実施例２ 硫安１．０％（ｗ／ｖ）を含む５０ｍＭのトリス塩酸バ
ッファーに各化合物を５．０％（ｗ／ｖ）を共存させ小
麦由来ＰＥＰＣａｓｅを０．２Ｕ／ｍｌになるように溶
解した。これを２５℃に保存してＰＥＰＣａｓｅの残存
活性を追跡した。結果は表２に示すように、各化合物の
共存によって高い安定化効果が得られことが明らかであ
る。 表２ 添加物 残存率（８日後） なし １４（％） グリセロール ４８ エチレングリコール ６０ ジメチルスルホキシド ４５ イノシトール ４７ ソルビトール ４０ サッカロース ３１
ッファーに各化合物を５．０％（ｗ／ｖ）を共存させ小
麦由来ＰＥＰＣａｓｅを０．２Ｕ／ｍｌになるように溶
解した。これを２５℃に保存してＰＥＰＣａｓｅの残存
活性を追跡した。結果は表２に示すように、各化合物の
共存によって高い安定化効果が得られことが明らかであ
る。 表２ 添加物 残存率（８日後） なし １４（％） グリセロール ４８ エチレングリコール ６０ ジメチルスルホキシド ４５ イノシトール ４７ ソルビトール ４０ サッカロース ３１
【００２１】実施例３ とうもろこし由来ＰＥＰＣａｓｅを０．１ＭのＢＥＳバ
ッファー、ｐＨ８．０に溶解し、硫安及びグリセロール
またはエチレングリコールの添加量を変化させ、２５℃
で保存して残存活性を追跡した。その結果を表３に示
す。表３から明らかなよすに硫安及び各化合物はその添
加濃度を上げることによって安定化効果が増加するが１
％以下の低濃度でもなおかつ効果が表れる。 表３ 濃度（％） 残存率（％） 硫安 グリセロール エチレングリコール ４日目 ７日目 ０ ０ １６ ３ ０．５ ０．１ ８８ ４２ １．０ ０．５ ９８ ６８ １．５ ５．０ ９８ ７７ ０．５ ０．１ ５７ ３２ １．０ ０．５ ７３ ４５ １．０ １．０ ８６ ６６ １．５ １０．０ ８８ ７６
ッファー、ｐＨ８．０に溶解し、硫安及びグリセロール
またはエチレングリコールの添加量を変化させ、２５℃
で保存して残存活性を追跡した。その結果を表３に示
す。表３から明らかなよすに硫安及び各化合物はその添
加濃度を上げることによって安定化効果が増加するが１
％以下の低濃度でもなおかつ効果が表れる。 表３ 濃度（％） 残存率（％） 硫安 グリセロール エチレングリコール ４日目 ７日目 ０ ０ １６ ３ ０．５ ０．１ ８８ ４２ １．０ ０．５ ９８ ６８ １．５ ５．０ ９８ ７７ ０．５ ０．１ ５７ ３２ １．０ ０．５ ７３ ４５ １．０ １．０ ８６ ６６ １．５ １０．０ ８８ ７６
【００２２】実施例４ メタノール資化性微生物ハイポマイクロビウム属に属す
る微生物を培養し、その培養物からＰＥＰＣａｓｅを調
製した。このＰＥＰＣａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになる
ように１．５％の硫安と５％のエチレングリコールを含
む５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．３に溶解
し、２５℃で保存して酵素の残存活性を追跡した。
る微生物を培養し、その培養物からＰＥＰＣａｓｅを調
製した。このＰＥＰＣａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになる
ように１．５％の硫安と５％のエチレングリコールを含
む５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．３に溶解
し、２５℃で保存して酵素の残存活性を追跡した。
【００２３】比較例１ ハイポマイクロビウム属に属する微生物由来のＰＥＰＣ
ａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになるように５０ｍＭのＨＥ
ＰＥＳバッファー、ｐＨ７．３に溶解し、２５℃で保存
して酵素の残存活性を追跡した。
ａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになるように５０ｍＭのＨＥ
ＰＥＳバッファー、ｐＨ７．３に溶解し、２５℃で保存
して酵素の残存活性を追跡した。
【００２４】比較例２ ハイポマイクロビウム属に属する微生物由来のＰＥＰＣ
ａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになるように１．５％の硫安
含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．３に溶
解し、２５℃で保存して酵素の残存活性を追跡した。
ａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになるように１．５％の硫安
含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．３に溶
解し、２５℃で保存して酵素の残存活性を追跡した。
【００２５】比較例３ ハイポマイクロビウム属に属する微生物由来のＰＥＰＣ
ａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになるように５％のエチレン
グリコールを含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐ
Ｈ７．３に溶解し、２５℃で保存して酵素の残存活性を
追跡した。表４に実施例４と比較例１〜３の結果を併せ
て示す。これらの結果から、硫安とエチレングリコール
の間に強い相乗効果の存在することが明らかである。
ａｓｅを０．０５Ｕ／ｍｌになるように５％のエチレン
グリコールを含む５０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐ
Ｈ７．３に溶解し、２５℃で保存して酵素の残存活性を
追跡した。表４に実施例４と比較例１〜３の結果を併せ
て示す。これらの結果から、硫安とエチレングリコール
の間に強い相乗効果の存在することが明らかである。
【００２６】
【００２７】実施例５ 溶存している二酸化炭素を除去するために、脱気後窒素
をばっ気した１％の硫安及び１．５％のグリセロールを
含む０．１ＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．５にホ
スホエノールピルビン酸１０ｍＭ、ホスホエノールピル
ビン酸カルボキシラーゼ１．５Ｕ／ｍｌ、還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド０．５ｍＭ、リンゴ酸
脱水素酵素２Ｕ／ｍｌ、塩化マグネシウム１ｍＭ、エチ
レンジアミンテトラアセテート０．１ｍＭ、界面活性剤
０．１％濃度になるように添加溶解し二酸化炭素測定用
試液を調製した。この試液を窒素ばっ気した後密栓し２
５℃３日間保存した後、炭酸水素カリウム塩を試料とし
て検量線を作成した。
をばっ気した１％の硫安及び１．５％のグリセロールを
含む０．１ＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．５にホ
スホエノールピルビン酸１０ｍＭ、ホスホエノールピル
ビン酸カルボキシラーゼ１．５Ｕ／ｍｌ、還元型ニコチ
ンアミドアデニンジヌクレオチド０．５ｍＭ、リンゴ酸
脱水素酵素２Ｕ／ｍｌ、塩化マグネシウム１ｍＭ、エチ
レンジアミンテトラアセテート０．１ｍＭ、界面活性剤
０．１％濃度になるように添加溶解し二酸化炭素測定用
試液を調製した。この試液を窒素ばっ気した後密栓し２
５℃３日間保存した後、炭酸水素カリウム塩を試料とし
て検量線を作成した。
【００２８】比較例４ ０．１ＭのＨＥＰＥＳバッファー、ｐＨ７．５をもちい
て硫安とグリセロールを含まないことを除いて実施例５
と同様に二酸化炭素測定用試液を調製した。この試液を
実施例５と同様に処理した後、炭酸水素カリウム塩を試
料として検量線を作成した。図１に実施例５と比較例４
の結果を併せて示す。この結果から、本発明により二酸
化炭素測定用試液の安定性が向上していることが解る。
て硫安とグリセロールを含まないことを除いて実施例５
と同様に二酸化炭素測定用試液を調製した。この試液を
実施例５と同様に処理した後、炭酸水素カリウム塩を試
料として検量線を作成した。図１に実施例５と比較例４
の結果を併せて示す。この結果から、本発明により二酸
化炭素測定用試液の安定性が向上していることが解る。
【００２９】
【発明の効果】本発明によればＰＥＰＣａｓｅの安定性
が大幅に改善され、安定化された二酸化炭素測定用組成
物が提供される。
が大幅に改善され、安定化された二酸化炭素測定用組成
物が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の二酸化炭素測定用試液と、安定化剤を
含まない二酸化炭素測定用試薬について、炭酸水素カリ
ウムを試料として作成した検量線である。
含まない二酸化炭素測定用試薬について、炭酸水素カリ
ウムを試料として作成した検量線である。
１：本発明の二酸化炭素測定用試薬 ２：安定化剤を含まない二酸化炭素測定用試薬
Claims (3)
- 【請求項１】 ホスホエノールピルビン酸カルボキシラ
ーゼに（ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸素原子を含む不揮
発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もしくは糖アルコール
を共存させることを特徴とするホスホエノールピルビン
酸カルボキシラーゼの安定化方法。 - 【請求項２】 （ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸素原子を
含む不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もしくは糖ア
ルコールを含むことを特徴とするホスホエノールピルビ
ン酸カルボキシラーゼの安定化剤。 - 【請求項３】 ホスホエノールピルビン酸、還元型補酵
素、ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼ及びリ
ンゴ酸脱水素酵素を含んでなる二酸化炭素測定用組成物
において、（ａ）硫安、（ｂ）分子中に酸素原子を含む
不揮発性有機溶媒及び／又は（ｃ）糖もしくは糖アルコ
ールを共存させることを特徴とする安定化された二酸化
炭素測定用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3304264A JP3041839B2 (ja) | 1991-10-22 | 1991-10-22 | ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化方法及び安定化剤並びに安定化された二酸化炭素測定用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3304264A JP3041839B2 (ja) | 1991-10-22 | 1991-10-22 | ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化方法及び安定化剤並びに安定化された二酸化炭素測定用組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05111397A true JPH05111397A (ja) | 1993-05-07 |
| JP3041839B2 JP3041839B2 (ja) | 2000-05-15 |
Family
ID=17930959
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3304264A Expired - Fee Related JP3041839B2 (ja) | 1991-10-22 | 1991-10-22 | ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化方法及び安定化剤並びに安定化された二酸化炭素測定用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3041839B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1084954A (ja) * | 1996-07-25 | 1998-04-07 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素を熱活性化する方法 |
-
1991
- 1991-10-22 JP JP3304264A patent/JP3041839B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1084954A (ja) * | 1996-07-25 | 1998-04-07 | Rikagaku Kenkyusho | 酵素を熱活性化する方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3041839B2 (ja) | 2000-05-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3130670B1 (en) | Biocatalyst solvent using ionic liquid, and biocatalyst solution containing biocatalyst and said solvent | |
| US4277562A (en) | Stabilized liquid enzyme and coenzyme compositions | |
| JPS5934119B2 (ja) | クレアチンキナ−ゼ測定用組成物 | |
| JP3041839B2 (ja) | ホスホエノールピルビン酸カルボキシラーゼの安定化方法及び安定化剤並びに安定化された二酸化炭素測定用組成物 | |
| JPH04229192A (ja) | 安定な水性ｎａｄｈ試薬及びキット | |
| EP0719345B1 (en) | Reagent for enzymatic determination of serum bicarbonate levels | |
| Oliveira et al. | Some observations on the urea-degrading enzyme of the diatom Cyclotella cryptica and the role of nickel in its production | |
| Jedziniak et al. | Lens polyol dehydrogenase | |
| Fish et al. | [93] 2-Keto-3-deoxy-d-glucarate aldolase | |
| US6312687B1 (en) | Stabilized lactoperoxidase and glucose oxidase concentrate | |
| JP7300142B2 (ja) | Ｎａｄｈ及びｎａｄｐｈの安定化法 | |
| JPH01179689A (ja) | 生体触媒安定化剤 | |
| Large et al. | An enzymic method for the micro estimation ofmethylamine, ethylamine, and n-propylamine | |
| EP1083235A2 (en) | Reduced coenzyme solution | |
| US5188955A (en) | Method of preserving arylacylamidase in aqueous solution | |
| JP2008206491A (ja) | ｐ−ヒドロキシ安息香酸水酸化酵素の安定化方法 | |
| US5721111A (en) | Method for determination of urea nitrogen | |
| US6884416B2 (en) | Stable PQQ-dependent glucose dehydrogenase composition | |
| EP0721986A2 (en) | Creatine kinase reagent | |
| Dundas | Ornithine carbamoyltransferase from Halobacterium salinarium | |
| JPH0195779A (ja) | 安定な酵素組成物および酵素組成物の安定化方法 | |
| Gaisser et al. | Inhibition of NADH oxidase and lactate dehydrogenase of mycoplasma gallisepticum by copper complexes of 2, 2'-bipyridyl analogues | |
| AU682882B2 (en) | Reagent | |
| JPH08248028A (ja) | 生理活性物質測定用液状試薬 | |
| US20070048813A1 (en) | Agent for assaying analyte of patient by enzyme |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080310 Year of fee payment: 8 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090310 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090310 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100310 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Year of fee payment: 10 Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100310 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (prs date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110310 Year of fee payment: 11 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |