JPH0468919B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は、セフアロスポリン化合物の製造法に
関するものである。 化学療法剤として有用なセフアロスポリン化合
物はセフエム構造を有しており、その３位と７位
に種々の置換基を導入することにより特色ある抗
菌活性が発揮される。 これらの化合物を製造する際に繁用される原料
は、セフアロスポリンＣ（以下CPCと略称する）
および３−アセトキシメチル−7β−アミノ−３
−セフエム−４−カルボン酸（以下７−ACAと
略称する）である。ところが、これらの化合物の
３位には、不活性なアセトキシメチル基が存在す
るため、３位に置換基導入を試みる場合には、ま
ず脱アセチル化を行つて活性なヒドロキシメチル
中間体を製造する事が必須である。 〔従来の技術〕 セフアロスポリン化合物の３位のアセトキシメ
チル基からアセチル基を離脱させ、ヒドロキシメ
チル基に導く方法としては、酸またはアルカリ水
溶液を加えて化学的に切断する方法と酵素で緩和
に加水分解する方法とがある。 苛性ソーダや塩酸の如き化学的加水分解試薬に
よる方法は、元来不安定なセフアロスポリン化合
物の分解を招きやすいため、工業的には困難の伴
なう−20〜−40℃の様な低温域での操作が必要で
あり、それにも拘らず酸性試薬との反応では３位
に生成したヒドロキシメチル基と４位のカルボキ
シル基との間にラクトン環が形成されたり、アル
カリ試薬では２重結合（△₃）の転移した△₂体が
副生しやすい。 一方緩和な条件で反応を進め得る酵素的脱アセ
チル化方法としては(イ)柑橘類の果皮から導かれた
エステラーゼを使用する方法（英国特許996222）、
(ロ)小麦胚芽エステラーゼを用いる方法（特公昭42
−7553）、(ハ)バチルス・ズブチリス等の微生物酵
素で加水分解する方法（特公昭49−35993）が知
られえているが、これらについても、工業的な観
点からはなお種々の問題が残されている。例え
ば、(イ)の方法では、酵素源となる均一な果皮の入
手が困難であり、(ロ)の方法では、酵素源は比較的
容易に入手できるものの、エステラーゼを抽出・
精製して用いなければならず、その操作が極めて
繁雑である。一方、(ハ)の方法などの工業的には最
も有望視されている微生物酵素では、各菌種によ
り程度の差はあるが、β−ラクタム環を開裂させ
る酵素（β−ラクタマーゼ）の混入が避け得ず収
率や純度の低下原因となる欠点を有している。 そこで、本発明者等は、３位側鎖の酵素的脱ア
セチル化を行なうに際し、大量安価に入手でき且
つ精製が簡単な酵素源を用い、副反応を伴なわな
い有利な製造法について種々検討の結果本発明を
完成した。 〔発明の構成〕 本発明は、一般式 で表わされる化合物を〓（ふすま）で処理して一
般式 で表わされる化合物を製造する方法である。ただ
し、R₁は水素またはアシル基を意味し、R₂は低
級アルキル基を意味する。R₃はカルボキシル基
もしくはその塩または保護されたカルボキシル基
を意味する。 化合物（）としてはCPCや７−ACAの他に
もセフアログリシン（R₁：C₆H₅CH（NH₂）CO
−）、セフアロチン（R₁：

【式】）、セフアピリン（R₁：

【式】）、セフアタキシム （R₁：

【式】）等、３位に アセトキシメチル基を有し、７位がアミノ基また
はアシルアミノ基である化合物があり、このアシ
ル基の相違によつて３位のアシルオキシメチル基
の脱アシル反応が影響されることは殆んどない。 上記のほかにアシル基の例としては、２−（２
−アミノチアゾール−４−イル）−２−｛（イミダ
ゾール−４−イル）メトキシイミノ｝アセチル基
や特公昭58−43979号公報に示されたものなどを
挙げることができる。 反応液中の化合物（）の濃度は、通常１〜50
mg／mlの範囲であるが、脱アシル反応の速度が大
きいため更に高濃度でも可能である。 〓としては、安価かつ大量に入手できる小麦〓
が好適であり、表面に付着している不純物を一乃
至数回の水洗浄により除去して使用するのが好ま
しい。使用量は水洗前の重量で、基質（化合物
（））に対して４〜40倍重量が普通である。 反応を行なうには、化合物（）の水溶液に水
洗浄した〓を加え、PH６〜８好ましくはPH6.5〜
7.0に保ち、20〜40℃好ましくは25〜30℃で２〜
24時間、通常は５〜13時間処理する。この際、リ
ン酸緩衝液等の通常の緩衝液を用いることができ
るが、緩衝液を用いずに、脱アシルにより生じた
遊離の酸例えば酢酸を適宜アルカリで中和しなが
ら反応を行なうことも可能である。 反応終了液から目的化合物（）を単離するに
は、〓を濾去等の操作で除去し、次いで限外濾過
により着色物質、蛋白等を除き、得られる液を乾
固するか、またはこの溶液にアルコール、アセト
ン、エーテルの如き有機溶媒を加えて目的物を折
出させるのが一般的である。限外濾過は、酢酸セ
ルロース系、ポリアミド系、ポリスルホン系、ポ
リアクリロニトリル系等の市販の限外濾過膜を単
一または組合せて適宜使用することができる。 実施例 １ セフアロスポリンＣナトリウム塩・２水和物
500mgを0.1Mリン酸緩衝液（PH7.0）100mlに溶解
し、小麦〓２ｇを加え、30℃で13時間攪拌した。 〓を濾去後、反応液を液体クロマトグラフイー
で分析したところ３−ヒドロキシメチル−7β−
（Ｄ−５−アミノ−５−カルボキシペンタンアミ
ド）−３−セフエム−４−カルボン酸の生成率は
95％であつた。この反応液を限外濾過した後、非
イオン性多孔性ポリマー樹脂HP−20（三菱化成）
50mlに通液し、流出液をPH7.5に調整した後、凍
結乾燥して３−ヒドロキシメチル体のナトリウム
塩・3.5水和物437mg（純度96.1％）を得た。 この乾固物を水−エタノールで再結晶して得た
精製結晶は、NMRδ（DSS，D₂Ｏ）＝4.4（2H，ｓ，
CH₂OH）、〔α〕²⁰ _D＋107°（H₂Ｏ、Ｃ＝2.0）、E¹%₁cm
260nm＝185を示し標品と一致した。 実施例 ２ 実施例１におけるセフアロスポリンＣの代りに
３−アセトキシメチル−7β−アミノ−３−セフ
エム−４−カルボン酸（７−ACA）を使用し、
小麦〓10ｇ使用する以外は実施例１と同様に処理
し、５時間反応させた。反応液を液体クロマトグ
ラフイーで分析すると、３−ヒドロキシメチル−
7β−アミノセフ−３−エム−４−カルボン酸の
生成率は100％であつた。 〓を濾去後、濾液を限外濾過し、次いでHP−
20 50mlに通液し流出液を約５mlまで濃縮し、酢
酸でPHを4.2に調整した。この濃縮液を氷冷し、
折出物を濾取乾燥し、３−ヒドロキシメチル体
303mgを得た。本品のNMRはδ（DSS，D₂Ｏ）＝
4.4（2H，ｓ，CH₂OH）及びTLC（ｎ−ブタノー
ル：酢酸：ピリジン：水＝15：３：10：12）は
Rf＝0.37を示し標品と一致した。 実施例 ３ ３−アセトキシメチル−7β−〔２−（２−アミ
ノチアゾール−４−イル）−２−｛（イミダゾール
−４−イル）メトキシイミノ｝アセトアミド〕−
３−セフエム−４−カルボン酸・二塩酸塩500mg
を水100mlに溶解し、0.05N−水酸化ナトリウム
液でPH7.0に調整した。この溶液に、小麦〓４ｇ
を冷水20mlで５回洗浄したものを加え、0.05N−
水酸化ナトリウムで系内PHを7.0に保ちつゝ30℃
で13時間反応させた。 〓を濾去後、反応液を液体クロマトグラフイー
で分析したところ、３−ヒドロキシメチル−7β
−〔２−（２−アミノチアゾール−４−イル）−２
−｛（イミダゾール−４−イル）メトキシイミノ｝
アセトアミド〕−３−セフエム−４−カルボン酸
の生成率は95.2％であつた。 この反応液を限外濾過した後、HP−20 50ml
に通液し、その流出液を乾燥凍結し３−ヒドロキ
シメチル体362mg（無水物換算）を得た。 本品のNMRはδ（DSS，D₂Ｏ）＝4.35（2H，ｓ，
CH₂OH）、IRはνmax（KBr）＝1760，1650，1600
を示し、その構造を支持した。 実施例 ４ 実施例３における原料化合物の代りにセフオタ
キシムナトリウムを使用し、小麦〓８ｇを冷水40
mlで５回洗浄して使用する以外は、実施例３と同
様に処理し、反応させた。反応液を液体クロマト
分析すると、３−ヒドロキシメチル−7β−〔２−
（２−アミノチアゾール−４−イル）−２−メトキ
シイミノアセトアミド〕−３−セフエム−４−カ
ルボンナトリウムの生成率は94.7％であつた。 得られた反応液は実施例３と同様に後処理して
３−ヒドロキシメチル体401mg（無水物換算）を
得た。本品のNMRはδ（DSS，D₂Ｏ）＝4.35（2H，
ｓ，CH₂OH）、IRはνmax（KBr）＝1760を示し標
品と一致した。 実施例 ５ 実施例２における７−ACAの代りにセフアロ
チンナトリウム塩を使用し、それ以外は実施例２
と同様に処理し反応させた。反応液を液体クロマ
トグラフイー分析すると３−ヒドロキシメチル−
7β−（チオフエン−２−イルアセトアミド）−３
−セフエム−４−カルボン酸ナトリウムの生成率
は97.9％であつた。得られた反応液に食塩を添加
後、PH3.5に調整し、酢酸エチルで抽出し、酢酸
エチル層を濃縮乾固する。残留液をメタノールで
再結晶して３−ヒドロキシメチル体の結晶を得
た。本品はNMRδ（DSS，D₂Ｏ）＝4.4（2H，ｓ，
CH₂OH）及びUVλmax260nm（ｅ＝8050）より、
標品と同定した。 実施例 ６ 実施例２における７−ACAの代りにセフアピ
リンナトリウム塩を使用する以外は、実施例２と
同様に処理し、反応させた。反応液を液体クロマ
トグラフイー分析すると３−ヒドロキシメチル−
7β−（ピリド−４−イルチオアセタミド）−３−
セフエム−４−カルボン酸ナトリウムの生成率は
97.2％であつた。 得られた反応液は実施例３と同様に後処理して
３−ヒドロキシメチル体の結晶を得、その
NMRδ（DSS，D₂Ｏ）＝4.2（2H，ｓ，CH₂OH）よ
り標品と同定した。 実施例 ７ 実施例２における７−ACAの代りにセフアロ
グリシン・２水和物を使用し、小麦〓を20ｇ使用
する以外は実施例２と同様に処理し2.5時間反応
させた。反応液を液体クロマトグラフイーで分析
すると３−ヒドロキシメチル−7β−（Ｄ−α−ア
ミノフエニルアセタミド）−３−セフエム−４−
カルボン酸の生成率は95.0％であつた。 得られた反応液から実施例３と同様にして単離
した３−ヒドロキシメチル体の結晶はNMRδ
（DSS，D₂Ｏ）＝4.2（2H，ｓ，CH₂OH）及び
UVλmax260nm（ｅ＝8400）より標品と同定し
た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 一般式 で表わされる化合物を〓で処理することを特徴と
   する一般式 で表わされる化合物の製造法。ただし、R₁は水
   素またはアシル基を意味し、R₂は低級アルキル
   基を意味する。R₃はカルボキシル基もしくはそ
   の塩または保護されたカルボキシル基を意味す
   る。