JPH0466538A

JPH0466538A - 抗潰瘍剤

Info

Publication number: JPH0466538A
Application number: JP2175390A
Authority: JP
Inventors: Yoshikazu Tanaka; 良和田中; Eisuke Sato; 英介佐藤; Kouzou Uchiumi; 内海　耕慥; Masayasu Inoue; 正康井上
Original assignee: Suntory Ltd
Current assignee: Suntory Ltd
Priority date: 1990-07-04
Filing date: 1990-07-04
Publication date: 1992-03-02

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野　コ本発明は、抗潰瘍剤に関し、更に詳細には胃や十二指腸
に発生する消化性潰瘍の予防や治療に使用される抗潰瘍
剤に関する。

［従来の技術及びその課題］胃や十二指腸に発生する消化性？ｊＦ瘍は、胃液にさら
されている範囲内の消化管壁に於ける部分的な組織欠撰
であり、一般に消化管１■織の粘膜面板以上のＭｉ織欠
損を指称する。

従来、消化性潰瘍は、塩酸やペプシン、壁細胞集塊、粘
膜外傷等の攻Ｖ因子と、粘ｍ抵抗、粘膜、局所粘膜血液
循環等の防御因子との間のバランスの崩れに起因するも
のとされており、これらに対応した種々の抗潰瘍剤が開
鈍されている。

例えば、攻撃因子抑制剤としては、制酸剤、抗コリン剤
、抗ペプシン剤、抗ガストリン剤、Ｈ２受容体拮抗剤、
プロトンポンプ抑制剤等が、また、防御因子増強剤とし
ては、粘膜保護剤、粘膜分泌促進剤、微小循環改善剤、
組織代謝賦活剤、プラスタグランジン製剤及びグロスタ
グランシン合成促進剤等が知られている。

これらの薬剤によって、消化側潰瘍を内相的に治療する
ことが多くの場合可能にはなってきているが、上記した
ように、消化性潰瘍には多くの因子が関係しているので
、一種類の薬剤ですべて治療できるわけでなく、更に新
しい抗潰瘍剤の開発が求められている。

［請願を解決するための手段］本発明者は、種々の化合物についてその薬理作用を検討
していたところ、プロスタグランジンやロイコトリエン
等の産生抑制や免疫反応抑制作用を有することが知られ
ているすボコルチンが抗潰瘍作用を有することを見いだ
し本発明を完成した。

すなわち本発明は、リポコルチンを有効成分として含有
する抗潰瘍剤を提供するものである。

本発明において用いられるリポコルチンは、グルココル
チコイドの抗炎症作用のメカニズムを解明する過程て発
見されたタンパク質てあり、好中球等に存在する。

このリポコルチンをｕｔａａとして得るには、例えばサ
トウらの方法（５ａｔｏ　ｅｔ　ａｌ、　ＦＥＢＳＬｅ
ｔｔ、、　２２７．　ｐ１３１（１９８８））により、
まず血液を採取し、血中の好中球を集め、その細胞を破
壊し、次いで、カルシウムの存在下でリポコルチンをリ
ポソームに吸着させた後、ＥＧＴＡ（キレート）処理を
行い、カルシウムを除去後通常のカラムクロマトグラフ
処理に付せば良い。

しかし、臨床で使用するには、大量のりボコルチンを安
価に入手することが要求されるので、遺伝子操作によっ
て得られる天然型リポコルチンを利用することが好まし
い。

具体的な遺伝子操作によって天然型リボコルチンを収得
するための方法は、例えば出願人らが先に見いたしてい
るので（特願平１２０３９３０号）、この方法に従えば
よい。

本発明の抗潰瘍剤を調製するには、有効量のりボコルチ
ンを公知の医薬用担体に配合し、常法により製剤化すれ
ばよい。

本発明の抗潰瘍剤の投与形態については特に制限はなく
、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤等の
経口剤や、７を射剤、外用剤、平削等の非経口剤のいず
れによっても投与することがてきる。

医薬用担体は、投与形態及び剤型に広じて選択すること
ができるが、経口剤の場合は、例えばデンプン、乳糖、
白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コー
ンスターチ、無機塩等が利用され、更に、結合剤、崩壊
剤、界面活性剤、滑沢剤、７Ａ動悸促進剤、矯味剤、着
色剤、香！４等を配合することができる。

より具体的には、デンプン、デキストリン、アラビアゴ
ム宋、セラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチル
セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、
ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチ
ルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等
の結合剤、デンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カ
ルホキジメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチ
ルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース
、低１換ヒドロキシプロピルセルロース等の崩壊剤、ラ
ウリル硫酸ナトリウム、大豆レシチン、ショ糖脂肪酸エ
ステル、ポリソルベー１〜８０等の界面活性剤、タルク
、ロウ類、水累添加植物油、ショ糖脂肪酸エステル、ス
テアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ス
テアリン酸アルミニウム、ポリエチレングリコール等の
滑沢剤、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムケ／
１、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マクネシウム等の
流！！Ｉ］性促進剤が挙げられる。

また、経口用の液剤として、懸濁液、エマルジョン剤、
シロップ剤、エリキシル剤とすることができ、これらの
各種剤型には＋ｉＲ昧、矯臭剤、着色剤を配合すること
もてきる。

更に、ｌ［経口剤は、常法に従い本発明の有効成分を希
釈剤としての注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖水溶
液、注射用蒸留水、コマ油、ラッカセイ油、ダイズ油、
　トウモロコシ油、プロピレングリコール、ポリエチレ
ングリコール等に溶解ないし懸濁させ、必要に応じて、
殺菌剤、防腐剤、安定剤、等張化剤、無痛化剤等を加え
ることにより調製される。

その他の非経口剤としては、外用液剤、軟膏剤等の塗布
剤、直腸内投与のための平削等が挙げられ、これらは常
法にしたがって調製される。

本発明の抗潰瘍剤は、経口及び１１経口により投与する
ことができるが、例えば、経口投与する場合は、大人−
人１日あたりリポコルチンとして５〜１０ｍｇ／ｋｇを
１〜３回に分け、服用すれば良い。

［作　　　用　　］リポコルチンのどのような作用が胃潰瘍の発生を抑制す
るかについては、未だ明確でない部分もあるが、白血球
の遁走を抑えることにより、胃粘膜病変の発生を抑制す
るものと考えられている。

［発明の効果コ本発明の抗潰瘍剤の有効成分であるリボコルチンは、後
記実施例にも示すように優れた抗潰瘍作用を有し、しか
も、実験動物にがなりな量を投与しても全く死亡例が発
生しないだけでなく、臓器に対する障害も引き起こさな
いことからも理解されるように、安全性も高いものであ
る。

従って、本発明の抗潰瘍剤は、新しい消化性潰瘍の予防
、治療剤として有用なものであ〔実施例　］次に実施例、参考例及び製剤例を挙げ、本発明を更に詳
しく説明する。

参考例（１）リポコルチン遺伝子の酵母発現ベクターへの導入
：基本的にサトウらの方法（Ｓａｔｏ　ｅｔ　ａｌ、　Ｆ
ＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、　２４４．１０８．　（＋９８９）
）に従いモルモットのりボコルチンｃＤＮＡを得た。し
かし、佐藤らの方法では発現可能な形の完全長ｃＤＮＡ
が得られないので、完全長ｃＤＮＡを以下のようにして
構築した。

すなわち、佐藤らの方法により得たりボコルチンのｃ　
ＤＮＡを含むクローンの　ＤＮＡλｇＰＬ７、λｇｐ　
Ｌ８及び　ｃＤＮＡ中の制限酵素Ｈｈａ　Ｉ部位とＢｇ
ｌ１１部位を含むλｇＰ　Ｌ９の計３種から、制限酵素
ＥｃｏＲＩでｃＤＮＡの断片を切り出し、これをｐＵｃ
９にサブクローニングした。　得られたサブクローンを
それぞれｐＧＰＬ７．ｐＧＰＬ８．　ｐＧＰＬ９とした
。　ｐＧＰＬ７から　Ｂｇｌｌｌと５ａｌｌて切り出さ
れる約８００ｂｐのＤＮＡ断片、　　ｐＧＰＬ！ｌから
ＢｇｌｌｌとＨｈａ　Ｉて切り出される約２００ｂｐの
ＤＮＡ断片およびｐＧＰＬ８からＨｈａ　Ｉと　Ｅｃｏ
ＲＩで切り出される約４００ｂρのＤＮＡ断片の３種を
、ｐＹＨＣＣＩＯＩ　（特開平１−３７２９１号参照：
　尚、ｐＹＨｃｃｌｏｌで形質転換された酵母はサツカ
ロマイセス・セレビシェ　Ｓ　ＡＭ　０７５０　（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　　Ｓ
ＡＤ　０７５０）と命名され、工業技術院微生物工業研
究所に微工研菌寄第９４７５号（ＦＥＲＮ　　Ｐ−９４
７５）として寄託されている）からＥｃｏＲＩと５ａｌ
ｒで切り出される約８Ｋｂの断片と共にライゲーション
し、ｐＹＧＰＬ　１００を得た。　　このプラスミドは
、大腸菌と酵母のシャトルベクターであり、大腸菌での
選択マーカーとしてアンピシリン耐性遺伝子を、酵母で
の選択マーカーとしてＴＲＰＩ遺伝子を持ち、酵母にお
いてリポコルチン遺伝子が酵母のプロモーターであるグ
リセルアルデヒド３リン酸デヒドロゲナーゼプロモータ
ーの制御下に転写される。　　紐換えＤＮＡに関する方
法は例えばマニアティスら（Ｍａｎｉａ、ｔｉｓ　ｅｔ　ａｌ、、　？１ｏｌｅｃ
ｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｆｎｇ。

ＣｏＬｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｌａｂ、、（１９８２））の
方法によった。

又、制限酵素等は東洋紡林式会社から請人した。

（２）！母でのりボコルチンの発現；ｐＹＧＰＬＩｏｏて酵母Ｇ−１３１，５株　（Ｍａｔａ
、ｔｒｐｌ；　　Ｙｏｓｈｉｚｕｍｉ　ｅｔ　ａｌ、　
Ｊ、　Ｊｐｎ、　５ａｃＳｔａｒｃｈ　Ｓｃｉ、、　３
４．１４８．　（＋９８７）ンを形質転換した。　形質
転換は伊東らの方１（Ｉｔｏｅｔａｌ、、　　Ｊ、　８
ａｃｔｅｒｉｏ１．１５３．１６３　（＋９８７））に
よった。　トワブトファンの合成能の回復した形質転換
株をＧ−１３１５（ｐＹＧＰＬｆｏｏ　）とした（尚、
この形質転換体は、サツカロマイセス・セレヒ゛シｘ　
　ＳＡＭ　　１３８２　（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｃｅｒｅｖｉｓｊａｅ　　ＳＡＭ１３Ｂ２）と命名され
、微生物工業技術研究所に微工研菌寄第１０８５０号（
ＦＥＲＮＰ−１０８５０）として寄託されている）、。

この形質転換株を、２ｍｌのパークホルダー培地（Ｂｕ
ｒｋｈｏｌｄｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、、　Ａｍ、　Ｊ、　
Ｂａｔ、、　３０゜２０６．（１９４３）　）中、３０
″Ｃで４０時間振盪培養した。１．５ｍｌを集菌後、ヤ
ッフェらの方法（Ｙａｆｆｅ　ｅｔ　ａｌ、　Ｐｒｏｃ
、　Ｎａｔｌ、　Ａｅａｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ、、　８１．４８１９　（１９８４））で酵母菌
体から蛋白質を得て、ＳＯＤポリアクリルアミドゲル電
気泳動を行なった。　　泳動後、ウェスタンプロティン
グを行ない、抗モルモットリポコルチン抗体を用いる酵
素抗体法（例えば、金環ら、純生化学実験講座　蛋白質
の化学、東京化学同人（１９８７））により、その抗体
と反応するものを検出したどころ、−本のバンドがみら
れ、その位置は天然のモルモットリポコルチンのものと
一致していた。　従って、酵母においてリポコルチンが
発現したことが確認できた。又、このことから組換えリ
ポコルチンは天然のりボコルチンと免疫化学的に同じで
あることがわかる。

（３）リポコルチンの精Ｖ：Ｇ−１３１５（ｐＹＧＰｌ、１００）を１０￥Ｎ（１）
パークホルダー培地にて培養して約３００グラムの菌体
を得た。　この酵母を、２０ｍＭ　ｈリス塩酸（ｐＨ７
，５）、１＊Ｍ　ＥＧＴＡ、１ｍＭ　ＡＰＭＳＦ、０，
０１％　ロイペプチンに懸濁し、ビーズヒーダー（バイ
オスペックプロダクツ社）にて、菌体を破壊した。　遠
心分離により菌体の断片などを除去したものを出発物質
として、カルシウム存在下にリポソーム膜に結合させる
佐藤らの方法（Ｓａｔ○ｅｔ　ａｌ、、　ＦＥＢＳ　Ｌ
ｅｔ、、　２２７．１３１．　　（１９８８））により
、５ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動法において
単一なハンドをなす組換えリポコルチンを得た。　その
移動度は天然のものと同じであった。　また組換えリポ
コルチンも天然リポコルチンと同様にカルシュラム存在
下でリポソームに結合することもわかった。

実施例ストレス性胃潰瘍にたいする保護効果・広田らの方法（胃粘膜病変とフリーラジカル、日本医学
餌料　６３　（１９８７）参照）に従い、リポコルチン
のストレス性胃潰瘍にたいする保護効果を調べた。

すなわち、参考例で得た組換えリボコルチンを１６時間
絶食したウィスター系ラット（２２０ｇ）に様々なドー
ズでｎ腟内投与し、３０分経過後、無麻酔下でラットに
水種拘束負荷（２２°Ｃ１６時間）を与えた。　　つい
て、ラットの胃を取り出し、胃粘膜を１％ホルマリンで
固定後、生じた？ｆｆ瘍の長さを測定し、これから潰瘍
係数を求めた。

この結果を第１表に示す。

（以下余白）第 ■ 表投　　与　　量潰瘍係数（μｇ／ラット）（ｍｍ　）０（対照）　　　　　３２．６＋８．４４０　　　　　
　　　　　　　　　　１４．５８０　　　　　　　　　
　　　　　　１．６．０１６０　　　　　　　　　　　
　　　１３．５この結果から明らかなように、　１ノボ
コルチンは胃潰瘍の発生を朗らか（こ抑制している。

また、リポコルチンの投与によるｂ１器の障害を調べた
が、何れの投与によっても障害は認められなかっｆ：。

製　　剤　　例　　ｌ顆粒・細粒剤。

ポリビニルピロリドン（コリトン３０）１部を滅菌精製
水に溶かし、ここにアスコルビン［１０部及びＬ−シス
ティン・塩酸塩５部を加え、均一な溶液としたのち、リ
ポコルチン１０部を加え均一とした。

この溶液を賦形剤（マンニトールまたは乳糖）５９部及
び崩壊剤（コーン・スターチまたはヒドロキシプロピル
セルロース（ＬＨ−２２））１５部に加え練合、造粒し
、乾燥させた復篩別した。

製　　剤　　例　　２錠　　　　　剤　：製剤例１で作った活性成分の均一溶液に、乳糖５８部、
微結晶セルロース１５部を混合したのち、更にステアリ
ン酸マグネシウム１部を加え混合し、打錠して錠剤を得
た。

製　　剤　　例　　３カプセル剤：製剤例１で作った剤形の物をカプセルに充填した。　　
但し、滑沢剤としてステアリン酸マグネシウムを０．２
％添加して製剤したものを用いた。

製　　剤　　例　　４注　　射　　剤　：リポコルチン　　　　　　　１．５ｇアスコルビン酸　　　　　　１，５ｇＬ〜システィン・塩酸塩　　０・５ｇマンニトール　　　　　　６．５ｇ上記成分を滅菌精製水に溶かし、１００ｍ１として除菌
したものを、１ｍｌまたは２ｍｌずつバイアルまたはア
ンプルに取り、凍結乾燥後密封して注射剤を得た。

製　　剤　　例　　５座　　　　　剤　：リポコルチンアスコルビン酸し−システィン・塩酸塩１５０部１５０部５０部上記成分を用い、均一な粉末にしたものをカカオ泊９９
５０部に分散させ、座剤を得た。

以上

Claims

【特許請求の範囲】

（１）リポコルチンを有効成分として含有する抗潰瘍剤
。