JPH0454128A - 心臓の機能不全を治療する薬剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

［０００１］

【本発明の技術的背景】

ジギタリス、ジゴキシン、ウワバイン及び関連物質は植
物から誘導された強心性配糖体である。強心性配糖体の
主な薬理学的な性質は、投薬量依存的な方式で心筋の収
縮の力を増加する能力である（正筋変力性効果−ｐＯ３
ｉｔｉＶｅ　１ｎｏｔｒｏｐｉｃ　ｅｆ−ｆｅｃｔ）。 直接的正筋変力性効果の最も可能性ある説明は、強心性
配糖体が膜−結合性Ｎａ　　Ｋ−活性化アデノシントリ
ホスファターゼ（Ｎａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼ）を阻害
する能力であるとされる。Ｔｈｅ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ
　　１ｃａｌ　Ｂａ５ｉｓ　ｏｆ　Ｔｈｅｒａ−匪切歩
下（グツドマン［Ｇｏｏｄｍａｎ］及びジルマン［Ｇｉ
１ｍａｎ］編）７３２頁（１９８０）所載のＢ、Ｆ、ホ
フマン［Ｈｏｆｆｍａｎｌ及びＪ、　Ｔ、ビッガー・ジ
ュニア［Ｂｉｇｇｅｒ、　Ｊｒｌによる’Ｄｉｇｉｔａ
−１ｉｓ　ａｎｄ　Ａ１１ｉｅｄ　Ｃａｒｄｉａｃ　Ｇ
ｌｙｃｏｓｉｄｅ”参照。この酵素によるアデノシン三
燐酸（ＡＴＰ）の加水分解がナトリウム・カリウムポン
プのエネルギーを与える。 ［０００２］ Ｎａ　　Ｋ−ＡＴＰアーゼの内因的調節についてはあま
り知られていない。カテコールアミン（Ｊ、　Ｗ、　７
　イリス［Ｐｈ１ｌｌｉｓ］、Ｃｅ１ｌ　Ｔｉ５ｓｕｅ
　ａｎｄ　Ｏｒ　ａｎ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ　１ｎＮｅｕ
ｒｏｂｉｏｌｏ　　　９３−９７頁（１９７８）　：　
Ｂ、Ａ、ホロヴイッッ［Ｈｏｒｗｉｔｚ］、Ｆｅｄ、　
Ｐｒｏｃ、、３８：２１７０−２１７６頁（１９７９）
、甲状せんホルモン（Ｔ、　Ｊ、スミス［Ｓｍ１ｔｈ］
及び１．　Ｓ、　ニーデルマン［Ｅｄｅ１ｍａｎコ、Ｆ
ｅｄ、　Ｐｒｏｃ、、３８：２１５０−２１５３頁（１
９７９）　）　　アルドステロン（Ｂ、Ｃ，ロジャー［
Ｒｏｓｓｉｅｒ］等、５ｃｉｅｎｃｅ、　１２：４８３
−４８７（１９８７））、リノール酸及びリルイン酸（
Ｊ。 Ｎ、ビダード［Ｂｉｄａｒｄ］等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
Ｂｉ　　ｈ　ｓ、　Ａｃｔａ、７６９；２４７（１９８
４）　；Ｍ、タムラ［Ｔａｍｕｒａ］等、Ｊ、　Ｂｉｏ
ｌ、　Ｃｈｅｍ、　、２６０：９６７２（１９８５）　
：及びバナジウム（Ｌ、　Ｃ，カントレー・ジュニア［
Ｃａｎｔｌｅｙ、　Ｊｒｌ等、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ
ｅｍ、　、２４３ニア３６１−７３６８（１９７８））
は総て酵素活性に及ぼす直接又は間接的な効果に結び付
いている。 ［０００３］ 多くの研究者は阻害剤が上昇している状況で、ジギトキ
シンの放射免疫測定法を用いて血漿中の免疫反応性を測
定することにより、ジギタリス又はウワバインに類似し
ている力叩甫乳類起源の形質膜Ｎａ　　Ｋ　−ＡＴＰア
ーゼの特異的内因性阻害剤を単離することを試みた。キ
リンゲスミュラー［Ｋｉ　１１　ｉｎｇｓｍｕｅ　１１
　ｅｒ］等はＮａ　−負荷された正常人の被験者の尿中
にジキタリス様の免疫反応性を見出しな′（キリンゲス
ミュラー等、Ｋ１１ｎ、　Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ、、６
０：１２４９−１２５３（１９８２））　。Ｓ、Ｗ、グ
レーゲス（Ｇｒａｖｅｓ）等は尿毒症の血漿中で類似の
観察を行った（Ｓ、　Ｗ、グレーゲス等、Ａｎｎ、　Ｉ
ｎｔｅｒｎ、　Ｍｅｄ、、９９：６０４−６０８（１９
８３））。 ［０００４］ 血漿、尿又は組織のＮａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼ阻害剤
の明確な構造は未知である（　Ｔｈｅ　Ｎａ　　Ｋ　−
Ｐｕｍ　　Ｐａｒｔ　Ｂ：Ｃｅ１ｌｕｌａｒ　Ａ　　　
ｔｓ；Ｊ、Ｃ，スコウ［５ｋｏｕ１等編、Ｇ、　Ｔ。 ホーバート・ジュニア［Ｈａｕｐｅｒｔ、　Ｊｒ］、２
９７−３２０（１９８８））　。更に各種の候補化合物
も最も大きな生化学的な細目点で強心性配糖体ジギタリ
ス及びウワバインとの幾分かの差があることを特徴とし
ているので、これらの物質が構造又は機能のいずれかの
点で真に゛′ジギタリス様゛′である度合は議論の分か
れる所である。（Ｃ，Ｔ。 カリリ［Ｃａｒｉｌｌｉ］等、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈ
ｅｍ、　、２６０：１２９（１９８５）；Ｍ、クラボス
［Ｃｒａｂｏｓ］等、ＥｕｒＪ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、、
１６２：１２９（１９８７）；Ｍ、タムラ、Ｂｉｏｃｈ
ｅｍ、　、２７　：４２４４−４２５３　（１９８８）
　）。 ［０００５］ 例えばグレーゲスにより単離されたジギタリス様因子（
ＤＬＦ）は抗−ジギトキシン抗体と交差反応する（Ｓ、
　Ｗ、グレージス米国特許第４，７８０，３１４号）。 しかしＤＬＦは内因性調節体の場合期待されるような、
生理学的阻害剤であることは示されていない。生理学的
という意味は、酵素に極めて高い結合親和性を有する阻
害剤である；可逆的に結合して阻害する；膜Ｎａ　　　
Ｋ　−ＡＴＰアーゼに高い特異性を有する；及び適当な
刺激に応答することである。それらの正筋変力性効果の
ために、強心性配糖体（例えばジギタリス及びウワバイ
ン）は心不全の治療上の価値が無類である。強心性配糖
体はうっ血性の心不全の患者の血行の適正を増大するた
めに、及び心房細動及び粗動の存在において心室速度を
遅くするだめに治療上置も多く使用されている。 ［０００６］ しかし強心性配糖体は治療指数が狭く、それらの使用は
しばしば激しく又は致死的であり得る毒性効果を伴って
いる。患者に対する危険の点からいえば、最も重要な毒
性効果は心臓に起こる効果（例えば心臓調律の異常性及
び房室伝導の障害）である。胃腸障害、神経学的効果、
食欲不審、視力障害、吐き気及び嘔吐は他の共通した強
心性配糖体の反応である。 ［０００７］

【本発明の総括】

本発明は視床下部阻害因子（Ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ
　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　Ｆａｃｔｏｒ）　（ＨＩ　Ｆ
）が心筋細胞に正筋変力性効果を有するという本発明出
願者の発見に関する。即ち本発明は一つの具体化におい
ては、正筋変力性効果を生じる量のＨＩＦを哺乳類宿主
に投与することにより該宿主に正筋変力性効果を生じる
方法を含んで成る。 ［０００８］ ＨＩＦは強心性配糖体と同じ毒性プロフィルを呈さない
。従ってＨＩＦを用いる心臓機能不全の治療は患者に対
する毒性の危険を少なくして遂行できる。 ［０００９］ 本発明は更に強心性配糖体中毒、浮腫的疾患及び低血圧
の処置に治療的に投与できるという発見に関する。又Ｈ
ＩＦは高血圧の予防の特異的な治療法を開発するために
使用できる。 ［００１０］

【本発明の詳述】

生理学的Ｎａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼ調節体が牛の視床
下部から単離され、視床下部阻害因子（ＨＩＦ）と名付
けられた（Ｇ、　Ｔ、ホーバート・ジュニア等、Ａｍ、
　Ｊ。 ｂ於頬し　不η、Ｆ９１９　（１９８４）　）。ＨＩＦ
を単離する方法は実施例工に詳細に記載されている。 ［００１１］ ＨＩＦはＮａ　ポンプの生理′学的調節体として必須な
幾つかの生化学的基準を満足している（Ｇ、　Ｔ、ホー
バート・ジュニア及びＪ、　Ｍ、サンナＥ　［５ａｎｃ
ｈｏ］、Ｐｒｏｃ、　ＮａｔｌＡｃａｄ、　Ｓｃｉ、　
ＵＳＡ、７６：４６５８−４６６０（１９７９））　。 ＨＩ　Ｆは精製されたＮａＫ−ＡＴＰアーゼを可逆的に
阻害し、高い親和性（Ｋ、＋１．４ｎｍ）を有する（Ｇ
、　Ｔ、ホ−パート・ジュニア等、Ａｍ、毘工肥■４匣
エ　２４７．　Ｆ９１９（１９８４））。更にその効果
は特異的である（Ｃ，Ｔ、カリリ等、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、
　Ｃｈｅｍ、、２６０：１２９（１９８５））精製され
た視床下部阻害因子（ＨＩＦ）は上記のように心臓の筋
肉細胞（即ち筋細胞）に正筋変力性効果を有することが
新規に見出された。“′正筋変カ性効果″という用語は
、細胞の収縮性が投薬量に依存する方式で高められるこ
とを意味する。 ［００１２］ ＨＩＦの正筋変力性効果を生じる量は心臓機能不全（例
えばうつ血性心臓不全発作性心房性頻脈、心房細動及び
粗動）を処置するため“′哺乳類宿主″（例えばヒト）
に投与することができる。投与は腸内的（即ち経口的）
又は非経口的（例えば、静脈、皮下又は筋肉内注射を経
由して）であることができる。更にＨＩＦは強心性配糖
体と同じ毒性プロフィルを呈さないから、ＨＩＦを用い
る心臓機能不全の治療は患者に対する毒性の危険を少な
くして遂行することができる。 ［００１３］ 図１は５Ｘ１０”Ｍウワバインと対照して１単位／ｍ１
のＨＩＦに暴露された心筋細胞に及ぼす正筋変力性効果
：及びｌＸ１０’Ｍウワバインに暴露された心筋細胞に
及ぼす毒性効果に対照してＨＩＦの効果を示すグラフで
ある。１単位のＨＩＦは３７℃における標準的分析条件
下で、１μｇの高度に精製されたＮａ”Ｋ−ＡＴＰアー
ゼを５０％だけ阻害するのに必要な量である。これは約
領７５ｐモルＨＩＦ　（約１５ｎＭ　ＨＩＦに等しい、
５０マイクロリツトル中１単位）であると見積もられた
。（Ｇ、　Ｔ、ホーバート・ジュニア等、Ａｍ、　Ｊ、
　Ｐｈ　５ｉｏ１．　　賛７、Ｆ９１９（１９８４）　
）。収縮性実験のプロトコルは実施例ｌｌＩＣに記載さ
れている［００１４］ 一般に収縮の振幅（即ち正筋変力性の度合）は位相差ビ
デオ運動検量装置を用いて心収縮性運動の振幅（ＡＳＭ
）として単一の脈動する心筋細胞中で測定された。同じ
検出装置がＡＳＭ中の減少、最大弛緩（Ｍ　Ｒ）位置の
変化、及び拍動頻度の増大として立証される毒性を測定
するために使用された。 ［００１５］ 図ＩＢはこれらの細胞に最高に豹変カ性的であるが非毒
性の投薬量である、５Ｘ１０’Ｍウワバインが心収縮性
運動の振幅（ＡＳＭ）を４１％だけ増大するが対照期間
（図ＩＡ）における同じ細胞に比較して拍動頻度の減少
を起こしたことを示している。°“治療範囲″であるが
無毒効果を示す、最大弛緩（Ｍ　Ｒ）位置の変化はなか
った。 ［００１６］ 図ＩＣは１μＭ濃度のウワバインは、総てこれらの高度
な投薬量が収縮する心筋細胞に″毒性範囲″の効果を及
ぼすことを示す、ＡＳＭの減少、ＭＲの位置の上昇、及
び拍動頻度の増大を起こすことを示している。 ［００１７］ 図ＩＥは１単位／ｍｌのＨＩＦが対照（図Ｄ）に比較し
て、拍動頻度の減少及びＭＲ位置の不変と共に、３７±
３％のＡＳＭの減少を起こすことを示している。 従って１単位／ｍｌは治療範囲内であるが、毒性効果を
呈しない。 ［００１８］ 図ＩＦは同じ細胞がＨＩＦを含まない緩衝液で潅流され
る際に、１分間の“濯ぎ出じ′による結果を示す。ＡＳ
Ｍ及び拍動頻度は対照水準に戻り、ＨＩＦにより起こさ
れた正筋変力性効果の迅速な可逆性を示している。 ［００１９］ ウワバイン処理された新生児ラットの心筋細胞が対照水
準よりも高い収縮性に戻るためには５分間の濯ぎ出し期
間が必要であるから、ＨＩＦの効果はウヮバインよりも
一層容易に可逆的である（Ｋ、ワーダン［Ｗｅｒｄａｎ
］等、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ。 蔓：１８７３−１８８６（１９８４）　）。 ［００２０］ 心臓機能不全を処置するために使用する以外に、ＨＩＦ
の製薬学的組成物は重篤な又は生命の危険のある強心性
配糖体中毒に罹患した患者を治療するために投与（例え
ば腸内的に又は非経口的に）できる。現在強心性配糖体
中毒は一般に患者にカリウム又は抗−不整脈薬剤を投与
するが、又はとりわけ特異的強心性配糖体製剤に対する
抗体フラグメントを投与することにより治療されている
。重篤な毒性を持った患者は一般の治療方法には反応が
ない。更に抗体フラグメントを用いる治療は血行中の強
心性配糖体を中和するが、抗体は心臓組織に結合した強
心性配糖体には有効ではない。更に、抗体は蛋白質であ
るから、静脈的に投与され及びアレルギー反応を起こす
ことがある。 ［００２１］ 対照的に、ＨＩＦは循環する強心性配糖体をＮａ　　Ｋ
　−ＡＴＰアーゼへの結合から遮断するのみならず、恐
らく強心性配糖体結合部位を互いに競合又は妨害するこ
とによって、以前に結合した強心性配糖体をＮａ　　Ｋ
　−ＡＴＰアーゼから溶離又は“′追い出す′°。“追
い出じ°実験は精製されたＮａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼ
がリポゾームに再構成される分析方式（Ｂ、Ｍ、アナ−
［Ａｎｎｅｒ］及びＭ、ムースマイヤー［Ｍｏｏｓｍａ
ｙｅｒ］、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉ　　ｈ　ｓ、　Ｒｅ
ｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、、１２９：１０２−１０８（１９
８５））を用いて行われた。この実験の詳細なプロトコ
ルは実施例ＩＶに記載されている。一般に、機能的なＮ
ａ　　Ｋ−ＡＴＰアーゼ分子を含むリポゾームは、Ｎａ
　　ＫＡＴＰアーゼ上の結合部位に結合している特異的
なウワバインの測定が可能である３Ｈ−ウワバインと共
にインキュベートされた。リポゾーム−ＮａＫ−ＡＴＰ
アーゼーウワパイン複合体は次いで２５℃で１０分間各
種の薬量のＨＩＦに暴露された。結合した３Ｈ−ウワバ
インは投薬量に依存する方式で、２．５マイクロリツト
ルのりポゾーム当たり０．５単位のＨＩＦ濃度で、結合
したウワバインの完全溶離まで、ＨＩＦによりＮａ　　
　Ｋ　−ＡＴＰアーゼから溶離された。 ［００２２］ かようにＨＩＦはジギタリス化合物のＮａ　　Ｋ　−Ａ
ＴＰアーゼへの結合を防ぐことかできるだけでなく、こ
れらの実験で示されたように、既にＮａＫ−ＡＴＰアー
ゼに結合した強心性配糖体に置き換わることができる。 従ってＨＩＦを用いる強心性配糖体中毒の治療は心臓に
対する毒性効果を迅速に逆転させる高度に特異的な治療
法として役立つことができよう。更に、非ペプチドであ
るからＨＩＦの経口投与が可能である。 ［００２３］ ＨＩＦは又血圧異常性の治療の際に投与（腸内的に又は
非経口的に）することができる。研究の結果によれば、
Ｎａ　　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼの内因性循環阻害体の過
剰は、或種の又は多くの患者において、本質的な低血圧
の原因となることが示されている。（Ｈ，Ｅ、デワード
ナ−［ＤｅＷａｒｄｅｎｅｒ］及びＧ、　Ｗ、　？クグ
レガー［ＭａｃＧｒｅｇｏｒ］　、Ｋｉｄｎｅｙ　Ｉｎ
ｔ、　、１８：１−９　（１９８０）　）　ｏ恐ら＜Ｎ
ａ　　　Ｋ　−ＡＴＰ７−ゼヘノ阻害剤の結合の結果で
ある細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が血管の収縮及
び低血圧を生じるのであろう。（Ｍ、　Ｐ、ブローシュ
テーン［Ｂｌａｕｓｔｅｉｎ］、Ａｍ、　Ｊ、　Ｐｈ　
５ｉｏ１．．２３２　：Ｃ１６５−Ｃ１７３（１９７７
）　）。 ［００２４］ ＨＩＦの血管収縮性を測定するために実験が行われた。 これらの実験のプロトコルは実施例Ｖに詳細に託載され
ている。一般にスプラーグードーレー（Ｓｐｒａｇｕｅ
−Ｄａｗｌｅｙ）ラットに麻酔をかけ、腹部大動脈が外
科的に取り出される。２ｍｍの血管輪が力変換器に取り
付けられ、及び緩衝液中に浸けられ、及び張力は１．５
ｇに調節された。組織の生存力が記録され、血管収縮応
答が塩化カリウム及びノルエピネフリンのような既知の
血管収縮剤を用いて校正された。こうして調製された血
管が次いでＨＩＦの薬量を変えて試、験された。 ［００２５］ ＨＩＦは効能のある可逆的な血管収縮を生じ、これらの
応答は薬量に依存的であった。血管はＨＩＦに暴露後も
完全に生存したままであり、毒性効果の不存在を証明し
た。最大の血管収縮応答は標準として使用される既知の
血管収縮剤物質により生じるものと類似していた。 ［００２６］ 低血圧、異常に低い血圧は、心臓の出口が細いこと、不
適切な血管収縮、又は両者が同時に起こることにより生
じることがある。ＨＩＦは心臓細胞の収縮の強度を増し
、及び血管の収縮を促進することの両者を示したから、
その治療的量の投与は低血圧の効果的な治療となるであ
ろう。 ［００２７］ ＨＩＦは又過剰な血管収縮及びその結果としての高血圧
を予防する特異な治療法を開発するために使用できる。 かような治療法は下記の事項を含むが、それらに限定さ
れない：　（１）受動免疫のためにＨＩＦへの抗体を投
与すること；（２）高血圧に対して能動免疫のためにＨ
ＩＦの免疫原体を投与すること；及び（３）天然ＨＩＦ
の血管細胞Ｎａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼへの結合及び作
用を防止又は変調（ｍｏｄｕ　１　ａｔｅ）することが
できるＨＩＦの類似体を投与すること。 ［００２８］ 更に腎臓管状細胞のＮａ　　Ｋ−ＡＴＰアーゼ活性を効
果的に阻害し、及びナトリウムの分泌を促進することに
よって、ＨＩＦの製薬学的な組成物は、うっ血性心不全
、肝硬変、及びネフローゼ性症候群として共通の臨床的
状態に罹患している患者の腎臓による過剰な塩及び水の
分泌を促進する天然の利尿剤として使用することができ
る。ＨＩＦがＮａ　　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼに対して有
する特異的阻害剤効果のために、ＨＩＦを用いる利尿治
療法は、現在使用されている利尿薬により共通的に生じ
る副作用（例えば、不能症、発疹、血液脂質の異常）を
伴わずに遂行することができる。 ［００２９］ 本発明は更に下記の実施例により説明されるが、それが
いずれかの方式によっても本発明を限定するものと解釈
すべきではない。 ［００３０］

【実施例】

■、　且工月Ω裂遺法 Ｎａ　　Ｋ−ＡＴＰアーゼ阻害剤は前記（Ｃ，Ｔ、カリ
リ等、Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　、２６０：１０
２７−１０３１（１９８５）　）のように牛の視床下部
から製造された。新しく集められ、直ちにドライアイス
上で凍結された視床下部を解凍し、ホモジネートとして
メタノール：水（４：１、容量：容量）で抽出した。フ
ラッシュ蒸発によってメタノールを除去し、残った水性
相を石油エーテル及びクロロホルムで抽出することによ
り脂質を取り出した。ＨＩＦの始めの分離は親油性ゲル
クロマトグラフィー（Ｃ０Ｔ、カリリ等、Ｊ、　Ｂｉｏ
ｌ、　Ｃｈｅｍ、　、２６０：１０２７−１０３１（１
９８５））を用いて行った。それ以上の精製は逐次陽イ
オン及び陰イオン交換クロマトグラフィーを用いて遂行
された。親油性ゲルクロマトグラフィーからの約１００
単位のＨＩＦが１０ｍ１の二回蒸留した水（ｄｄＨ２０
）中に溶解され、１０ｍ１のプロトン形のスルホン酸陽
イオン交換樹脂（アマ−ジャム［Ａｍｅｒｓｈａｍ］、
ｌＲ１２０）を含む小さいカラムにかけられ、及び１ｍ
ｌ／分でｄｄＨ２０で溶離した。溶離液を集め、凍結乾
燥し、残渣を１ｍｌのｄｄＨ２０中に溶出し、ヒドロキ
シル形の１．５ｍｌのＱＡＥセファデックス（ファルマ
シア［Ｐｈａｒｍａｃｉａ］　）を含むカラムにかげた
。カラムを順次１ベツド（ｂｅｄ）容量のｄｄＨ２０、
及び１ベツド容量の１０ｍＭ酢酸で溶離した（後者はＨ
ＩＦ上のカルボキシル基（Ｃ，Ｔ、カリリ等、Ｊ、　　
Ｂｉｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、、２６０：１０２７−１０３
１（１９８５）との相互作用の結果、陰イオン交換体に
吸着されたＨＩＦを回収するために使用された）。酢酸
を凍結乾燥により除去し、残渣を再分散し、ＨＩＦ活性
度の濃度を測定するために、酵素共役活性測定法（ｃｏ
ｕｐｌｅｄ−ｅｎｚｙｍｅ　ａｓｓａｙ）　（Ｇ、Ｔ、
ホーパニト等、Ａｍ、　Ｊ、　Ｐｈ　５ｉｏ１．．２４
７：Ｆｅ１２−９２４（１９８４））　及ヒヒ）赤血球
８６Ｒｂ”摂取分析（Ｃ，Ｔ、カリリ等、Ｊ、　　Ｂｉ
ｏｌ、　　Ｃｈｅｍ、、２６０：１０２７−１０３１（
１９８５））により、特異的Ｎａ”Ｋ−ＡＴＰアーゼ阻
害活性（ＨＩＦ）を分析した。陽イオン交換段階は少量
のガンマアミノ安息香酸、セリン、スレオニン及びグル
タミン酸を、陰イオン交換段階は痕跡量の乳酸塩を充分
に除去した。これら総ては親油性ゲルクロマトグラフィ
ーによる活性画分の質量スペクトル分析により検出され
ていたものである。ＨＩＦの回収はイオン交換段階によ
り定量的であった。上記の処理後のＨＩＦは、適切なバ
イオアッセーにおいて干渉することが示されている、バ
ナジン酸塩（発光分光分析）　ＮＨ４イオン（還元的ア
ミノ化、シグマ［Ｓｉｇｍａ］キット１７０−Ａ）を含
まず、遊離の脂肪酸及びリゾ燐脂質（ガスクロマトグラ
フィー−質量スペクトル分析）を含んでいない。 ［００３１］ Ｉｌ、　　心臓組胞Ω叫製 心筋細胞は、従来記載（Ｓ、　　［Ｙａｇｅｖ］等、Ｉ
ｎ　Ｖｉｔｒｏ、　２０：８９３−８９８（１９８４）
）された２＋ Ｃａ　　及びＭｇ２＋を含まないハンクス（Ｈａｎｋｓ
）緩衝塩溶液（ＨＢＳＳ）中の一連のトリプシン処理に
より、生後１日のスプラーグードーレーラットの心臓の
心室フラグメントから単離された。トリプシン処理され
た細胞は２０％の血清及び抗生物質を含むハムＦＩＯ培
地中にデカンテーションし、１１００ｒｐで１０分間遠
心した。胎児牛血清及び１０％の馬血清を０．１％のペ
ニシリン−ストレプトマイシンと共に含むハムＦＩＯ培
地中に細胞ペレットを再分散し、５×１０５細胞／ｍｌ
の濃度まで希釈した。細胞ゾル性の遊離のカルシウム濃
度（［Ｃａ２＋］ｉ）その期間に実、験が行われた。 ［００３２］ チレーション媒体中で計数した。 ［００３３］ プ仲介摂取（６００ｎモル／蛋白質ｍｇ７１０分間）は
合計摂取、及び５ｍＭウワバインの存在における差とし
て計算される。 ［００３４］ ウワバイン（５ｍＭ）は８１０ｎモル／蛋白質ｍｇの対
照水準から２１０ｎモル／ｍｇ（７４％）まで摂取を減
少させたが、同時にＨＩＦ（２単位／ｍｌ）は対照水準
から３７７ｎモル／ｍｇ（５４％）まで摂取を減少させ
た。ウワバイン・プラス・ＨＩＦの組み合わせは相加的
ではなく、従来ヒトの赤血球（Ｃ，Ｔ、カリリ等、ζＢ
ｉｏ１．　　Ｃｈｅｍ、、２６０：１０２７−１０３１
（１９８５））及び腎臓管状細胞（Ｈ，Ｆ、カンチエ口
［Ｃａｎｔｉｅｌｌｏ］等、Ａｍ、　Ｊ、　Ｐｈ　５ｉ
ｏ１．．２５５：Ｆ５７４−Ｆ５８０（１９８８）　）
にライて示されたように、ＨＩＦの阻害効果はＮａ　　
Ｋ−ＡＴＰアーゼによるＫの輸送に特異的であることを
示している。こうしてＨＩＦ（２単位／ｍｌ）は心筋細
胞中におけるウワバインー感受性に輸送を７４％だけ阻
害した。 ［００３５］ ＨＩＦ阻害の濃度依存性は０．５単位／ｍｌ、０．８単
位／ｍｌ、１単位／ｍｌ、２単位／ｍｌ及び４単位／ｍ
ｌ濃度で２０分間ＨＩＦで細胞を予備インキュベートす
ることにより測定された。８６ＲｂＣ１（２マイクロＣ
ｉ／ウエル）が次いでフラックスを行うために添加され
た。 ［００３６］ 図３は新生児ラットの心筋細胞におけるクワバイン−感
受性Ｒｂ摂取のＨＩＦ阻害の濃度依存性（Ｎａ　　Ｋ−
ＡＴＰアーゼ活性の特異的尺度）を示す。各値は各濃度
におけるｎ＝４測定値の平均±ＳＥＭである。ＨＩＦ−
仲介Ｎａポンプ阻害は薬量に依存的であり、心筋細胞が
阻害剤に暴露される時間的量に関係する。新生児ラット
の心筋細胞におけるＮａボ／プ活性の９０％がＨＩＦの
最大投薬量（４単位／ｍｌ）により阻害される。図３（
挿入図版）は心筋細胞がＨＩＦ　（２単位／ｍｌ）に暴
露される時間の関数として活性に輸送の阻害を図示して
いる。最大阻害効果（即ち、心筋細胞のＮａ　　Ｋ　−
ＡＴＰアーゼ活性の約９０％の阻害）にはＨＩＦと共に
２０−３０分間の予備インキュベーションを必要とする
。 ［００３７］ しかし、重要なポンプ阻害は又短時間のＨＩＦへの暴露
後にも生じた。新生児ラットの心筋細胞におけるポンプ
阻害のＩＤ５ｏは、約領５単位／ｍｌのＨＩＦ濃度で生
じる。これは培養されたブタの腎臓管状細胞よりも約３
０倍少なく　　（Ｈ，Ｆ。 カンチエ口等、ヤニＪ、　Ｐｈ　５ｉｏ１．、μｓ影Ｆ
５７４−Ｆ５８０（１９８８）　）、従って新生児ラッ
トの心筋細胞はＨＩＦに対し比較的高い親和性を有する
ことを示唆している。 ［００３８］ ２＋　　・ ［Ｃａ］　１の変化は蛍光試験薬、　フラー２（Ｇ、グ
リンキエビツチ［Ｇｒｙｎｋｉｅｗ　ｉ　ｃｚ］等、Ｊ
、　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ、、２６０：３４４０−３４５
０（１９８５））を用いて検出された。心筋細胞を付着
させた長方形のカバーガラスを緩衝塩溶液（下記物質を
各ｍＭ単位で含むＢＳＳ：ＮａＣ１１４０、ＫＣＩ　　
５、ＣａＣ１１、ＭｇＣｌ２１、グルコ−ス　１０、Ｎ
ａ２ＨＰＯ４１、ＨＥＰＥＳ−）す、Ｚ、　　１０　　
（ｐＨ７，４））中に入れ、それに５μＭのフラー２／
ＡＭを添加し、湿潤した５％ＣＯ２−９５％空気中で３
７℃において１時間インキュベートした。更に混入培地
を添加し、フラー２７ＡＭの加水分解を完結するために
１５分間インキュベーションを継続した。細胞を洗浄し
、更に３０分間ＢＳＳ中でインキュベートした。添加さ
れた心筋細胞を有するカバーガラスを、２ｍｌのＢＳＳ
及び指示されたような各種の添加量のＨＩＦ又はウワバ
インを含む恒温（３７℃）キュベツト中に挿入した。Ｐ
ＴＩデルタスキャン（ＤｅｌｔａＳｃａｎ）　１蛍光分
光光度計を用いて蛍光を連続的に記録した。二重の励起
波長が３４０ｎｍ及び３８０ｎｍの間を迅速（６０Ｈｚ
）に交番し、発光波長は５０５ｎｍである。［Ｃａ２＋
］　ｉの値は下記式：％式％） 上式中、Ｋｄは２２５ｎｍである、 用いて［Ｃａ２＋］ｉを周囲［Ｃａ２＋］と平衡させ（
Ｒｍａｘ）　　及びＭ　ｎ　Ｃ１２（０。 １ｍＭ）及びＥＧＴＡ　（１ｍＭ）を添加する（Ｒｍｉ
ｎ）別な実験で測定された。バックグラウンドの自己蛍
光は未充填のセル中で測定され、総ての測定値から差し
引かれた。 ［００３９］ 図４は培養された心筋細胞中の細胞ゾルの遊離カルシウ
ムイオン（［Ｃａ２＋］ｉ）含量に及ぼすＨＩＦ　（１
単位／ｍ１）の効果を示す。級衝塩溶液（ＢＳＳ）中で
培養されたフラー２充填心筋細胞の蛍光を連続的に記録
した。対照値（１３８ｎＭ）はＨＩＦの添加（矢印）に
先立つＢＳＳ中の細胞に対するものである。ＨＩＦに暴
露後３０分間（′２５０ｎｍ）及び６０分間（４３２ｎ
ｍ）後に示された。細胞ゾルの遊離のＣａ２＋ｉ度は、
３０分間及び６０分間ＨＩＦへの暴露後、ぞれぞれ１３
８ｎＭの基線から２５０ｎＭ及び４３２　ｎＭに増加し
た。 ［００４０］ ＨＩＦにより生起した［Ｃａ２＋］　ｉの変化の開始は
１５分内に起こり６０分までに新しい定常状態の濃度に
達し、この水準に少なくとも２時間安定に留まる。 ［００４１］ 強心性配糖体の毒性及びこれらの薬剤に特徴的な狭い治
療指数の背後にある生化学的事象は、緊張性の（ｔｏｎ
ｉｃ）ポンプ阻害と関連した持続的に高い細胞内Ｎａ”
に派生的な、過剰な細胞内の遊離のＣａ２＋が中心的な
役割を有すると仮定されている（Ｒ，Ｗ、チェノ［Ｔｓ
ｉｅｎ］及びＢ、　Ｕ、カーペンタ−［Ｃａｒｐｅｎｔ
ｅｒ］、Ｆｅｄ、　Ａｍ、　Ｓｏｃ、　ＥｘＢｉｏｌ、
　、３７　：２１２７Ｌ２１３１（１９７８）　）が、
完全には理解されていない。 ［００４２］ 表１はＨＩＦの各種の投薬量により誘発された定常的な
［Ｃａ２”］ｉの増加を示す。投薬量一応答関係は、０
．５単位／ｍ１ＨＩＦを用いて心筋細胞中の［Ｃａ２＋
］　　１を、同じ実験条件下で１μＭのウワバインによ
り起こされる（２８７±１５ｎＭ）のと同様な水準（３
０３±１５ｎＭ）まで、増加することが見出された。Ｈ
ＩＦ　（１単位／ｍ１）は［Ｃａ２”］　ｉを１μＭの
ウワバインにより誘発されたよりも著しく大きい水準ま
で引き上げた。 ［００４３］ 表　１：ウワバイン及び各種の濃度のＨＩＦ＊で処理さ
れた心筋細胞中の定常状態の細胞ゾルの遊離のＣａ２＋
（［Ｃａ２＋］　ｉ）の変化＊値は平均±ＳＥＭである
；ｎ＝各濃度毎に３回測定１μＭのウワバインはＣａ２
”Ｏ濃度を２８７±１５ｎＭに上昇させ、及び明瞭な毒
性を起こす（図ＩＣ）が、１単位／ｍｌのＨＩＦは同じ
細胞中の細胞内Ｃａ２＋の濃度を極めて高い水準、４３
２±１８ｎＭまで上げるカミ毒性の兆候がなく　（図Ｉ
Ｅ）安定な、最大の筋交カ性効果を伴う。 ［００４４］ Ｃ５心筋収組法Ｏ世定 収縮性細胞運動の振幅（ＡＳＭ）として測定される収縮
性、及び拍数頻度はバーリ（Ｂａｒｒｙ）等の方法（Ｗ
、Ｈ，バーり等、Ｃ１ｒｃ、　Ｒｅｓ、　、５６：２３
１−２４１（１９８５））による位相差顕微鏡ビデオ運
動検出装置を用いて個々の細胞内で測定された。培養さ
れた心筋細胞を取り付けたカバーガラスを、媒体潅流用
の入り口及び出口を備える室内に入れた。室を３７℃で
ルサイ）　（Ｌｕｃｉｔｅ）箱中に閉じ込め、逆転した
位相差顕微鏡の台上に置く。細胞をＨＩＦ又はウワバイ
ンを含む１ｍｌの培地で覆う。連続的潅流の間、カバー
ガラスの中心で細胞を浸す媒体は１５秒の一定時間で０
．９６ｍ１／分の流速で交換した。画像は４０ｘの対物
レンズを用いて拡大され、運動は顕微鏡に取り付けた低
光レベルのＴＶカメラにより監視され、２６２本のラス
ター線で校正された。運動検出器は選択されたラスクー
線セグメントを監視しラスター線に沿って動く細胞層内
の微小球の画像境界のために、１６ｍ秒毎に新しい位置
データを提供する。運動検出器からのアナログ電圧出力
は低域フィルターで濾過され、実際の運動のμｍを指示
するように校正され、微分値が電子的に得られ、μｍ７
秒の運動の速度として記録される。収縮の拍数、振幅及
び速度は対照潅流の際数時間に亙って安定であった。ウ
ワバイン又はＨＩＦにより誘発された収縮性の変化は、
ウワバイン又はＨＩＦの添加前の同じ細胞の収縮性と比
較して計算された。 ［００４５］ 表２は各種の投薬量のＨＩＦの関数としてのＡＳＭ及び
拍数頻度を総括している。ＨＩＦの濃度を増大すると、
ＡＳＭの漸進的な増大及び拍数の減少が起こる。ＡＳＭ
の最大の増大は、ウワバインの最大の、無毒的投薬量（
５Ｘ１０’Ｍ）に等しい水準である、約０．５単位／ｍ
１（３９±６％）のＨＩＦ濃度で起こった［００４６］ 表　２：各種の濃度のＨＩＦ、及びウワバイン（○Ｕ）
による心筋細胞中の収縮運動の振幅（ＡＳＭ）及び心拍
数に及ぼす効果＊ＨＩＦ　　（’位ｍ１　　　　　　更
己犯−０，２０，２５０，３３０，５１，０５ｘｌＯ’
ＡＳＭ、増加％１５±２２２±１３２±９３９±６３７
±３４１±３心拍数、減少％１２±１１５±１２５±７
　４０±２４９±６２３±２＊値は平均±ＳＥＭである
；ｎ＝各濃度毎に３回測定″追い出じ゛実験は精製され
たＮａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼがホスファチジルコリン
リポゾームに再構成される分析系を用いて行われた。分
散したランダムに配向したＮａ　　　Ｋ−ＡＴＰアーゼ
分子を含むＡＴＰ−含有りポゾームは、アナ−（Ｂ、Ｍ
、アナ−及びＭ、ムースマイヤー、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　
Ｂｉ　　ｈ　ｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、、１２９
：１０２−１０８（１９８５））によるコレート−透析
法により製造された。本出願者はこの小形化したニー側
面試、験法を用いて、０．１単位ＨＩＦ　（約７５ｆモ
ル）の単一投薬量、及び１．０単位（７）ＨＩＦ（約７
５０ｆｔ−ル）の膜透過によるＮａ　　Ｋ　−ＡＴＰア
ーゼ阻害が測定可能となり、単位当たりのＨＩＦ分子の
最小数の見積もりが可能であることを示した。他の提案
された内因性のＮａ　　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼ阻害剤を
含めて多数の物質の試、験を行ったにも拘らず、ＨＩＦ
はかような驚くべき輸送阻害を示す精製系において今ま
で試、験された唯一の化合物（強心性配糖体以外の）で
ある。 ［００４７］ ′追い出じ′実験のために機能性のＮａ　　　Ｋ　−Ａ
ＴＰアーゼ分子を含むリポゾームを３Ｈ−ウワバイン（
１０μＭ）と共に２５℃で１０分間インキュベートし、
次いで各種の薬量でＨＩＦを添加し、そして２５℃で１
０分間インキュベーションを継続した。反応は１２５μ
ｍの氷冷した停止溶液を添加して阻止され、試料は遊離
の３Ｈ−ウワバインから結合したものを分離することが
可能である、２０ｃｍセファデックスＧ−５０媒体カラ
ムにかけて溶離（０℃）した。結合した３Ｈ−ウワバイ
ンは表３に示すように薬量に依存する方式でＨＩＦによ
りＮａ”Ｋ　−ＡＴＰアーゼから溶離された。 ［００４８］ 表　３：各種の薬量（７）ＨＩ　Ｆによる２、５μｌの
Ｎａ　　Ｋ　−ＡＴＰアーゼ・リポゾームに結合した３
Ｈ−ウワバインの溶離−ＨＩ　Ｆ　　　　　　　＋ＨＩ
　Ｆ （単位　２．５１リポゾーム ０．１２５　０．２５　０．５ 結合した３Ｈ−ウワバイン（ｃｐｍ）　　　２９０２　
１７８　　１１１　４５体重２５０−３５０ｇのスプラ
ーグードーレーラットを腹腔内にベンドパルビタールを
注射して麻酔し、腹部大動脈を迅速に切除し、下記の組
成、ｍＭ：ＮａＣ１，１１８，３；ＫＣＩ、４，７：Ｍ
ｇＳ○　１．２；ＫＨ２ＰＯ４，１，２：Ｃａ４ゝ ＣＩ　　２．５　：ＮａＨＣＯ２，２５，０：　Ｎａ−
ＥＤＴＡ、　０．０１６　：及びグルコ２ゝ −ス、１１．１、を有する冷却したクレブスーヘンゼラ
イト（Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅ　ｌ　ｅ　ｉ　ｔ）炭酸
水素塩緩衝液中で総ての緩い結合組織を切り離した。２
−３ｍｍ（長さ）の血管輪を切除し、力変換器に取り付
け、９５％の○及び５％のＣＯ３でガス処理されま た上記の緩衝液５ｍｌを含む温水（３７℃）ジャケット
を備えた器官箱中に浸した。等張力の測定はグラース（
Ｇｒａｓｓ）　７９　ＤポリグラフＤＣ増幅器に取り付
けたグラースカ変位変換器を用いて得られ、２−チャン
ネルのキップ（Ｋｉｐｐ）ゾーネン（Ｚｏｎｅｎ）記録
計で記録された。校正の研究によれば、１．５ｇの張力
下に置かれた大動脈輪がＫＣＩ復極後の最大収縮応答を
発生することを示したので、従って総ての輪は実験の開
始前に１．５ｇの張力下で平衡化された。個々の実験の
場合の組織の生存性は塩化カリウム及びノルエピネフリ
ンのような既知の血管収縮剤を用いて証明された。こう
して調製された血管は次いで薬量を変えたＨＩＦを用い
で試験され、応答の大きさをＫＣｌ−誘発収縮と比較し
た。ＨＩＦは強力な可逆的な血管の収縮を生じ、及びこ
れらの応答は表４に示すように薬量に依存性であった。 ［００４９］ 表　４　：　１．５ｇの静止張力以上の増加％として示
された、各種の濃度のＨＩＦ及びＫＣＩによるラットの
腹部大動脈輪の血管張力に及ぼす効果０．１　　　０．
１　　　０．４　　　０．８　　　　　　２０増加　％
　　２５１２２６　　　　　２０血管はＨＩＦの濯ぎ出
し後のＫＣＩの応答の保存により判断されるように、Ｈ
ＩＦに暴露後も完全に生存しており；毒性的効果の欠如
を証明している。最大の血管収縮応答はＫＣＩ投薬で復
極する膜により生じるものと同様であった。これらの研
究はＨＩＦが血管の調整において提示された役割及び高
血圧症の病因に有効な役割に適合する有効な血管収縮物
質であることを確証するものである。 ［００５０１ 等価物 当業者は日常的な実験以上のものを使用せずに、本文中
で詳細に記載された本発明の特定の具体化に対する多数
の等価物を認識し、又は確認することが可能であろう。 かような等価物は特許請求の範囲内に包含されることを
意図するものである。 ［００５１］ 本発明の主なる特徴及び態様は以下の通りである。 ［００５２］ １、哺乳類宿主に正筋変力性効果を生じる量の視床下部
阻害因子（ＨＩＦ）投与することにより、該宿主中に正
筋変力性効果を生ぜしめる方法。 ［００５３］ ２、心臓の機能不全に罹患している患者に正筋変力性効
果を生じる量のＨＩを を投与することにより、該患者の心臓の機能不全を治療
する方法。 ［００５４］ ３、心臓の機能不全がうつ血性心不全、発作性心房性頻
脈又は心房細動である上記２に記載の方法。 ［００５５］ ４、正筋変力性効果を生じる量のＨＩＦが約０．１ない
し１単位／ｍｌ　（０，０７５−０，７５ｎＭ）である
、上記３に記載の方法。 ［００５６］ ５、正筋変力性効果を生じる量の視床下部阻害因子（Ｈ
ＩＦ）及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有して
成る心臓の機能不全に罹患した患者を治療するのに有用
な製薬学的組成物。 ［００５７］ ６、正筋変力性効果を生じる量のＨＩＦが約０．１ない
し１単位／ｍｌ　（０，０７５−０，７５ｎＭ）である
、上記５に記載の製薬学的組成物。 ［００５８］ ７、強心性配糖体中毒を治療するための治療的に有効な
量の視床下部阻害因子（ＨＩＦ）及び製薬学的に許容し
得るキャリヤーを患者に投与することを含んで成る、強
心性配糖体中毒に罹患した患者を治療する方法。 ［００５９］ ８、治療的に有効な量の視床下部阻害因子（ＨＩＦ）及
び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有して成る、強
心性配糖体中毒に罹患した患者を治療するのに有用な製
薬学的組成物。 ［００６０１ ９、治療的に有効な量のＨＩＦを患者に投与することを
含んで成る、浮腫性の疾患・に罹患した患者を治療する
方法。 ［００６１］ １０、浮腫性の疾患がうつ血性心不全、肝硬変又はネフ
ローゼ症候群である、上記９に記載の方法。 ［００６２］ １１．治療的に有効な量の視床下部阻害因子（ＨＩＦ）
及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有して成る、
浮腫性の疾患に罹患した患者を治療するのに有用な製薬
学的組成物。 ［００６３］ １２、患者にＨＩＦへの抗体を投与することを含んで成
る、受動免疫による高血圧症に罹患している患者を治療
する方法。 ［００６４］ １３、患者にＨＩＦの免疫抗原体を投与することを含ん
で成る、能動免疫による低血圧症に罹患している患者を
治療する方法。 ［００６５］ １４、天然のＨＩＦの結合を防止又は変調するＨＩＦの
類似体を患者に投与することを含んで成る、低血圧症に
罹患している患者を治療する方法。 ［００６６］ １５、患者に治療的に有効な量のＨＩＦを投与すること
を含んで成る、低血圧症に罹患している患者を治療する
方法。 ［００６７］ １６、治療的に有効な量の視床下部阻害因子（ＨＩＦ）
及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有して成る、
低血圧症に罹患している患者を治療するのに有用な製薬
学的組成物。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は心筋細胞の収縮性に及ぼすウワバイン（上部区画
）及びＨＩＦ　（下部区画）の効果を示す位相差顕微鏡
のビデオ運動検出器により生じたグラフである。

【図２】 図２は新生児ラットの心筋細胞による全８６Ｒｂ＋の摂
取に及ぼすＨＩＦ（２単位／ｍｌ）及びウワバイン（５
ｍＭ）又は両者の阻害効果をプロットするグラフである
。

【図３】 図３は心筋細胞におけるウワバインー感受性８６Ｒｂ”
Ｏ摂取（ナトリウム・ポンプ活性） に及ぼすＨＩＦの投薬量の増大とその阻害効果をプロッ
トするグラフである。

【図４】 図４は培養された心筋細胞中における細胞ゾルの遊離の
Ｃａ＋２含量に及ぼす３Ｏ及び６０分間暴露されたＨＩ
Ｆ （１単位／ｍ１）の効果を示す蛍光信号である。

【書類名】

図面

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

Claims (12)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】哺乳類宿主に正筋変力性効果を生じる量の
   視床下部阻害因子（ＨＩＦ）を投与することにより、該
   宿主中に正筋変力性効果を生ぜしめる方法。
2. 【請求項２】心臓の機能不全症に罹患している患者に正
   筋変力性効果を生じる量のＨＩＦを投与することにより
   、該患者の心臓の機能不全を治療する方法。
3. 【請求項３】正筋変力性効果を生じる量の視床下部阻害
   因子（ＨＩＦ）及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを
   含有して成る心臓の機能不全に罹患した患者を治療する
   のに有用な製薬学的組成物。
4. 【請求項４】強心性配糖体中毒を治療するための治療的
   に有効な量の視床下部阻害因子（ＨＩＦ）及び製薬学的
   に許容し得るキャリヤーを患者に投与することを含んで
   成る、強心性配糖体中毒に罹患した患者を治療する方法
   。
5. 【請求項５】治療的に有効な量の視床下部阻害因子（Ｈ
   ＩＦ）及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有して
   成る、強心性配糖体中毒に罹患した患者を治療するのに
   有用な製薬学的組成物。
6. 【請求項６】治療的に有効な量のＨＩＦを患者に投与す
   ることを含んで成る、浮腫性の疾患に罹患した患者を治
   療する方法。
7. 【請求項７】治療的に有効な量の視床下部阻害因子（Ｈ
   ＩＦ）及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有して
   成る、浮腫性の疾患に罹患した患者を治療するのに有用
   な製薬学的組成物。
8. 【請求項８】患者にＨＩＦへの抗体を投与することを含
   んで成る、受動免疫による高血圧症に罹患している患者
   を治療する方法。
9. 【請求項９】患者にＨＩＦの免疫抗原体を投与すること
   を含んで成る、能動免疫による低血圧症に罹患している
   患者を治療する方法。
10. 【請求項１０】天然のＨＩＦの結合を防止又は変調する
    ＨＩＦの類似体を患者に投与することを含んで成る、低
    血圧症に罹患している患者を治療する方法。
11. 【請求項１１】患者に治療的に有効な量のＨＩＦを投与
    することを含んで成る、低血圧症に罹患している患者を
    治療する方法。
12. 【請求項１２】治療的に有効な量の視床下部阻害因子（
    ＨＩＦ）及び製薬学的に許容し得るキャリヤーを含有し
    て成る、低血圧症に罹患している患者を治療するのに有
    用な製薬学的組成物。