JPH04507100A

JPH04507100A - Ｈｉｖのペプチドフラグメント

Info

Publication number: JPH04507100A
Application number: JP2511801A
Authority: JP
Inventors: マクマイケル，アンドリュー・ジェイムズ; ニクソン，ダグラス・フレイザ; タウンセンド，アラン・ロバート・マイケル
Original assignee: ユナイテッド・バイオメディカル・インコーポレイテッド
Priority date: 1989-08-09
Filing date: 1990-08-07
Publication date: 1992-12-10
Also published as: GB9201468D0; EP0412766B1; DE69007571D1; GB2250994A; GB8918200D0; US5700635A; HK141494A; CA2064691A1; ES2054256T3; DK0412766T3; EP0412766A1; WO1991001996A1; SG130094G; DE69007571T2; GB2250994B; ATE103294T1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】名称：ＨＩＶのペプチドフラグメントこの発明は、ＨＩｖ（ヒト免疫不全ウィルス）のペプチドフラグメントおよびＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）に対する効力のあるワクチンにおけるそれの使用に関し、かつ診断のおよび治療の目的のためのものである。

発明の背景本出願の優先臼より後に発行された英国特許出願第８９１２６５１．０号（公報第２２２０９３９号）は、とりわけ、細胞障害性Ｔ　ＩＪンパ球免疫を刺激するために、特定のヒト白血球抗原（ＨＬ　Ａ）クラス１分子と特異的に相互作用するＨＩＶのフラグメントのアミノ酸配列を有するペプチドを開示し、かつ請求する。

先行の出願において特に開示された１つのそのようなペプチドは、配列ＮＨ２− リジンーアルギニンートリプトファン−イソロイシン−イソロイシン−ロイシン −グリシン−ロイシン−アスパラギン−リジン−イソロイシン−バリン−アルギニン−メチオニン−チロシン−システィン−Ｃ００Ｈを有し、それは、残基２６３および２７７の間のＨＩＶのｇａｇ（グループ関連の抗原）ｐ２４タンパク質（すなわち内部のコアタンパク質の１つ）から誘導される。

このペプチドは、ｐ２４−１４として知られている。カルボキシ末端システィンは、そのｇａｇ配列の一部ではなく、化学共役反応を促進するために加えられる。このペプチドは、ＨＬＡ　Ｂ２７と特異的に相互作用し、かつＨＬＡＢ２７を有する個体（コーカシアン（Ｃａｕｃａｓｉａｎ）群の約７％）は、そのペプチドに応答し、ｇａｇおよびＨＬＡ　Ｂ２７に対して特異的でかつＨＩＶにより感染させられた細胞を溶解することが可能な細胞障害性１９２８球（ＣＴＬ）の生産を結果としてもたらすべきである。

この出願は、今同定されたもう１つのそのようなペプチドに関する。

発明の概要この発明の１つの局面によれば、細胞障害性１９２８球免疫を刺激するために、特定のヒト白血球抗原（ＨＬ　Ａ）クラス１分子と特異的に相互作用するＨＩＶのフラグメントのアミノ酸配列を有するペプチドが提供され、そのペプチドは、配列ＮＨ２−アスパラギンープロリン−プロリン−イソロイシン−プロリン−バリン−グリシン−グルタメート−イソロイシン−チロシン−リジン−アルギニン −トリプロファン−イソロイシン−イソロイシン−システィン−ＣＯＯＨを有する。

この配列は、ＨＩＶのｇａｇ　（グループ関連の抗原）ｐ２４タンパク質（すなわち内部コアタンパク質の１つ）から誘導される。カルボキシ−末端システィンは、そのｇａｇ配列の一部ではなく、化学共役反応を促進するために加えられる。このペプチドは、ｐ　２４−１３として知られる。

このペプチドは、ＨＬＡ　Ｂ８と特異的に相互作用し、かつＨＬＡ　Ｂ８を有する個体（コーカシアン（Ｃａｕｃａｓｉａｎ）群の約１５％）は、そのペプチドに応答し、ｇａｇおよびＨＬＡ　Ｂ８に対して特異的であり、ＨＩＶにより感染させられた細胞を溶解することが可能な細胞障害性１９２８球（ＣＴＬ）の生産を結果としてもたらすべきである。

説明のために、ｇ　ａ　ｇのようなウィルスタンパク質は、感染させられた細胞の表面上のより大きいＨＬＡクラスＩ分子に結合された分解されたペプチドフラグメント（約１５アミノ酸）としてＴ細胞に提示されることが示されている。異なったペプチド領域（エピトープ）が認識され、異なったＨＬＡクラスＩ分子と特異的に相互作用する。ＣＴＬは、ただＨＬＡクラスＩを共有する標的細胞を認識し、すなわちＴ細胞は、ウィルス抗原プラス自己ＨＬＡの組み合わせを認識する。おそらく約１２０の異なったＨＬＡクラスＩ分子があり、かつ各個体のヒトは、制限された選択を有し、かつしたがっであるエピトープだけに反応するであろう。

異なったＨＬＡで認識されたエピトープは、公知の態様で同定されかつ単離されるかまたは公知の技術を使用してタンパク質合成により作られることができる。

この発明にしたがったペプチドは、関連のＨＬＡに応答するＣＴＬの生産を刺激し、かつしたがってＣＴＬの応答を開始することにより、ＡＩＤＳに対するワクチンの基礎として使用することができる。

さらなる局面において、この発明は、こうしてこの発明のペプチドを含む、ＡＩＤＳに対するワクチンを提供する。

そのワクチンは、１つより多くのペプチドを含んでもよく、かつ効力を増加させるために、より通常のＨＬＡクラスＩ分子のいくつかに応答する１つまたはより多くのペプチドを付加的に含んでもよい。

そのワクチンは、種々の異なった形状をとってよい。たとえば、そのワクチンは、投与のために溶液、または不溶性物質への吸収物またはアジュバントとの混合物におけるペプチドまたはペプチドの混合物を含んでもよい。そのペプチドアミノ酸配列は、公知の組換えＤＮＡ技術により関連のペプチドエピトープを含む合成または融合タンパク質を構成するために代替的に使用することができる。これらのタンパク質は、可溶性のタンパク質として免疫化するために使用されるかまたは不溶性物質へ吸収されるかまたはアジュバントと混合されるかすることができる。代替的に、その配列情報は、それら自身のタンパク質において関連の配列を発現するであろう公知の技術を使用する組換え微生物を構成するために使用することができる。例は、組換えワクシニアウィルス、組換え灰白髄炎ウィルス、組換えＢＣＧ、組換えサルモネラ、組換えアデノウィルスであろう。

その配列情報の他の使用は、ペプチドの類似体または他の化学薬品であって、関係するＨＬＡ分子または関係するＴ細胞受容体へのｅｇ結合と相互作用し、この形状の免疫応答を妨げるかまたは刺激するものを構成することである。

この型式の免疫の抑制は、もしこの免疫応答がＨＩＶにより引起こされる病理学のいずれかにおいて有害な役割を演じれば、重要であるかもしれない。もしそうであるなら、有益なおよび有害な効果の間のバランスを達成するように、ＨＩＶ漿液陽性の個体におけるこの型式のＴ細胞免疫のレベルを調節することが重要であるかもしれない。そのような薬剤による刺激は、漿液陰性の個体における免疫応答を誘導する代替的な方法であってもよい。

この発明にしたがったペプチドは、また診断の目的のためにも使用される。特定的には、比較的簡単な検定法においてＴリンパ球反応を同定するために愚人かの患者でそのペプチドを使用することが可能であることがわかっている。

簡単にいえば、新鮮な末梢血単核細胞（または生体組織検査材料から得られたリンパ球）が準備され、かつ５ｏ：１．２５：１および１０：１の比率において、関連のＨＬ　Ａ分子に対して整合された１０　−クロムにより標識されるＢリンパ球芽細抱き加えられる。患者のＨＬ　Ａの型は、組織型別および公知のＨＬＡの型（再び組織型別により公知の態様において決定される）の供与体から得られかつ公知の技術を使用してエプスタイン−バール（Ｅｌ）Ｓｔｅｉｎ　Ｂａｒｒ）で変換されたＢリンパ球芽細抱きより、公知の態様において決定される。関連のＨＬＡ分子と相互作用するこの発明にしたがったペプチドが、また、１ｏないし１００ｕモルの濃度において、細胞に加えられる。４時間のインキュベーションの後で、上清が除去され、かつ遊離された５１−クロムが測定される。その遊離された５１−クロムは、界面活性剤において標識された細胞のインキュベーションにより遊離され、最大値を与えるものおよび培地単独においてインキュベートされた標識された細胞により遊離され、最小値を与えるものと比較される。もし溶解（最小値の少なくとも２倍の５１−クロム遊離により規定される）が観察されれば、それは、患者の単核細胞に細胞障害性１９２８球があり、かつこれらはＨｌＶによる感染を示しそうであることを意味する。

抗体測定と一緒のそのような検定法は、患者のＨＩＶへの一般的な免疫応答の測定のためにも有用であるかもしれず、かつ予後と密接な関係を有するであろう。

この方策は、ＨＩＶ漿液陽性の患者における細胞媒介免疫を測定するために使用されることができる非常に簡単な方法を表わすがもじれない。その方法を自動化することもできるかもしれない。

したがって、さらなる局面において、この発明は、関連のＨＬ　Ａの型と相互作用するこの発明のペプチドの存在においてＨＬＡの型に対して整合される標識されたＢリンパ球芽細抱きともにインキュベートすることと、遊離されたラベルの量を決定することとを含む、細胞障害性１９２８球の存在のために細胞を検定する方法を提供する。

遊離されたラベルの量を公知の標準物質と比較することにより、溶解の度合のおよびしたがってＨＩＶによるありそうな感染の指標を得ることができる。

この発明のペプチドは、また療法において効力のある使用を有するであろう。これおよび類似のペプチド（および我々がインフルエンザウィルスについての研究において以前に同定している他のペプチドエピトープ）は、細胞障害性１９２８球を生体外で成長するように刺激するために使用されている。その方法は、細胞障害性１９２８球を含む培養された末梢血単核細胞を、約１０ないし１１００ｕ／ｍ１で適当なペプチドで１時間処理され、次いで組織培養培地において洗浄されかつ３０００ラドに照射されている、自己由来の細胞、単核細胞またはＢリンパ珠芽細胞系に露出することを含む。細胞は、次いで１０ｕｎｉｔｓ／ｍｌでインターロイキン−２の存在において培養される。この方法を使用してそのペプチドに対して特異的な細胞障害性Ｔリンパ球細胞系が成長させられ、かつこれらの系は、１０８細胞まで増殖されている。これらの増殖された細胞障害性Ｔ細胞系は、自己輸血により患者を治療するために使用することができる。

予備データは、ＡＩＤＳまたはＡＩＤＳ関連の複合体を有する患者は、低いレベルの細胞障害性Ｔ細胞活性を示すのに対して、ＨＩＶにより感染させられているが健康な患者は高いレベルを示すことを示す。したがって、免疫不全症候群の一部は、欠陥のある細胞障害性Ｔ細胞活性の結果であるかもしれない。したがって、提案は、合成ペプチドが適用された細胞上で生体外で成長した自己由来の細胞障害性Ｔ細胞を自己輸血することであろう。初めに以前に高い細胞障害性Ｔ細胞活性を有した患者が、これらの細胞の彼等のレベルが下がっていた段階において治療されるであろう。細胞障害性Ｔ細胞系は、患者の感染におけるより早くに採られた凍結リンパ球から準備することができるであろう。

したがって、他の局面において、この発明は、ＡＩＤＳまたは関連の状態に対して患者を治療する方法を提供し、それは、患者に存在するＨＬＡ分子と相互作用するこの発明にしたがったペプチドで処理された細胞障害性Ｔ細胞を投与することを含む。

その細胞障害性Ｔ細胞は、好ましくはより早い段階において患者から採られたリンパ球から誘導される。そのリンパ球は、細胞障害性Ｔ細胞系の準備のために使用されるまで凍結された状態において貯蔵されてもよい。

加えて、この発明にしたがったペプチドによる予防接種によりＡＩＤＳまたは関連の状態に対して患者を治療することが有用であろう。

ＨＬＡ−８２７により特定部位を切断されたＨＩＶ　ｇａｇ　ｐ２４からのペプチドエピトープは、ＨＩＶＩおよびＨＩＶ２の異なった株の間でかなりよく保存されることがわかっており、かっＨＩＶＩにより感染させられた患者からの細胞障害性１９２８球が、ＨＩＶ’２ペプチド配列に交差反応したことがわかった。

類似の特性が、この発明のペプチドにあてはまるであろう。この場合には、この発明のペプチドは、ＨＩＶＩおよびＨＩＶ２の双方に対する防御を刺激するためにワクチンにおいて、かつまたＨ　Ｉ　Ｖ　１および／またはＨＩ　Ｖ　２により感染させられた患者での診断のおよび治療の目的のために有用であろう。

この発明は、以下の例において、例示のためにさらに述べられるであろう。

例配列ＮＨ２−アスパラギンープロリン−プロリン−イソロイシン−プロリン−バリン−グリシン−グルタメート−イソロイシン−チロシン−リジン−アルギニン −トリプトファン−イソロイシン−イソロイシン−システィン−ＣＯＯＨを有するペプチドに作業が行なわれた。そのペプチドは、ＨＩＶのｇａｇ　ｐ２４タンパク質から誘導される。

カルボキシ末端システィンは、ＨＩＶｇａｇ配列の一部ではなく、化学共役反応を促進するために加えられた。後にこのペプチドをなおより正確に規定することが可能であろう。

末梢血における細胞障害性１９２８球の循環する前駆体を生体外でＨＩＶに対して特異的な活性の細胞障害性１９２８球に分化するように刺激することから、１つの方法が導き出されている。これは、以下により詳細に述べられるが、簡単に言うと、末梢血リンパ球の小さい断片をマイトジェンフィトへマグルチニン（ＰＨＡ）で２４時間刺激し、かつ次いでこれらの細胞を残余するリンパ球に加えることを含む。そのＰＨＡ活性化は、おそら＜ＨＩＶゲノムを、ＨＩＶウィルス性タンパク質が合成されるように活性化する。７日間の培養の後に、１個のＨＩＶタンパク質を発現する組換えワクシニアウィルスにより感染させられている自己由来の標的細胞（エプスタイン−バールウィルス変換されたＢリンパ珠芽細胞系）での死滅により細胞障害性Ｔリンパ球活性を測定することができる。

７０ないし８０％のＨＩＶ漿液陽性の供与体が、組換えワクシニアウィルスにより発現されたｇａｇタンパク質への細胞障害性１９２８球応答を与えることが示されている。

この細胞障害性１９２８球応答は、ＨＬＡ制限されており、それは、標的細胞が無関係の個体から準備されるとき、ただ応答するＴ細胞とＨＬＡクラスＩ抗原を共有するものだけが溶解されることを意味する。これらの細胞障害性１９２８球を、リンホカインインターロイキン−２を含むＴ細胞成長因子において４週間までの間成長させることが可能である。

これらのＨＩＶ　ｇａｇ特異的細胞障害性Ｔ細胞系をもたらして、それらがＨＩＶ　ｇａｇ配列に基礎を置く短い（２０アミノ酸まで）合成ペプチドの存在において自己由来の標的細胞を溶解することができるかどうかを検査することが可能であった。先の作業は、ｇａｇのようなウィルスタンパク質が、感染させられた細胞の表面上のＨＬＡクラス■分子に結合された分解されたペプチドフラグメントとしてＴ細胞に提示されることを示している。先に発見されかつ発行された原理（１９８６年、タウンセンド（Ｔ。

ｗｎｓｅｎｄ）氏らのＣｅ１ｌ　４４：９５９−９６８．１９８６年、マクマイグル（ＭｃＭｉ　ｃｈａｅ　ｌ）氏らのＪ、Ｅｘ、ｐ、Ｍｅｄ、１６４　：１３９７−１４０６および１９８７年、ボッチ（Ｇｏｔｃｈ）氏らのＮａｔｕｒｅ３２６　：　８８１−８８２）にしたがって、細胞障害性１９２８球、感染させられていない標的細胞および各合成ペプチドは、１０　ｕ　ｇ／ｍ　ｌの最終濃度で混合された。正確なペプチドの存在において、標的細胞は溶解され、かっこの発明のペプチドがｇａｇおよびＨＬＡ　Ｂ８に対して特異的な細胞障害性１９２８球により認識された。関係するＨＬＡクラスエ分子により認識された異なったペプチド領域（エピトープ）があることは、インフルエンザウィルスに対して以前に示されている。ＨＩＶに対して我々はＨＬＡ抗原と関連する上述のペプチドを規定している。インフルエンザウィルスでの我々の先の作業により、我々は、ＨＩＶに応答するＨＬＡ　Ｂ８を有するすべてまたはほとんどの個体は、この特定的なペプチドを認識すると予想する。

末梢血リンパ球の調製およびＨｉＶ特異的なＣＴＬの誘導ＨＩＶ漿液陽性の供与体からの４０ｍ１の静脈の血液が、ヘパリン添加された容器（１００ｕｌのＬＯＯｕｎｔｔｓ／ｍｌの保存薬を含まないヘパリン）に置かれ、かつ血清の不在において、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌペニシリンおよび２００ｕｇ／ｍｌのストレプトマイシンで補われたＲＰＭｌ　１６４０組織培養培地（Ｇｉｂｃｏ）で２：１希釈された。

５ｍｌのリンパ球分離培地（ＬＳＭ、フロー・ラボラトリーズ（Ｆｌｏｗ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ））が、無菌のプラスチックの２５ｍ１の万能容器上で１５ｍ１の血／培地混合物の下に注意深く置かれた。チューブは、室温において１２００ｒｐｍで３０分間遠心分離され、その時間の後に、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が界面から除去された。ＰＢＭＣは、ＲＰＭＩ−１６４０で２度洗浄され、次いで８ｍｌのＲＰＭＩ　１６４０＋１０％の胎児牛血清（ｒＲｌｏＪ）において再び懸濁され、かつ計数された。

８分の１のＰＢＭＣは、１．５Ｘ１０６細胞／ｍｌの濃度まで加えられたＲＩＯで５０ｍ１のフラスコ（ファルコン（Ｆａ、１．ｃｏｎ））においてインキュベートされた。フィトヘマグルチニン（ＰＨＡ−ウェルカム・ダイアグノスティックス（Ｗｅｌｌｃｏｍｅ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）が１／２００の最終濃度（２ｕｇ／ｍｌ）で加えられた。

これらの細胞は、３７℃で空気中に５％のＣＯ２で２４時間インキュベートされた。、ＰＢＭＣの残余する８分の７は、５０［Ｔｌ１組織培養フラスコにおいて５％　ＣＯ２／空気において３７℃でＲＩＯにおいて１．５Ｘ１０６／ｍｌの濃度で培養された。

２４時間後、Ｐ　ＨＡ刺激された細胞は、Ｒ１゜０において２度洗浄され、１．０ＸＩＯ６／ｍｌでＲＩＯにおいて再び懸濁され、かつ刺激されない細胞に加えられた。培養物は、細胞障害性Ｔ細胞検定法においての使用より前に７日間インキューベータに放置された。７日後、′ｒ細胞成長因子（リンホカルト・ティー；バイオテスト（Ｌｙｍｐｂ。

ｃｕｌｉ　７’；　Ｂｔ、ｏｔｅｓｔ））が培養物に１０ｕｎｉ　ｔ　ｓ　／ｍ　ｌで加えられ、かつ成長する細胞は、０，５−ＬＸＬ０６７’ｍｌで、３日毎（こＲ−１０プラス１０ｕ／’ｍＩのＴ細胞成長因子を加えられて、保持された。

標的細胞の調製ＨＬ　ＡクラスＩにおいて自己由来の整合されたまたはミスマツチのエプスタイン−バールウィルス変換されたＢリンパ珠芽細胞系が、洗浄されかつＲＩＯにおいて１−５×１０’／１００ｕｌに再び懸濁された。３００ｕＣｉ　Ｎ”ＣｒＯ（Ｃｒ”’Ａｍｅｒｓｈａｍ）が加えられ、Ｃ２４細胞は５％ＣＯ２−空気において３７℃で１時間インキュベートされた。細胞は一度洗浄され、かつ次いでペプチド溶液（１，ｍ　ｇ　／　ｍ　ＬでＲｈｏにおいて溶解されたペプチドストック）において１０ｕｇ／ｍｌの最終濃度で再び懸濁された。各ペプチドは、個々に検査された。各混合物は、５％　Ｃ０２−空気において３７℃で１時間インキュベートされ、次いで細胞は３度洗浄され、Ｒ１ −０において２×１０５細胞／ｌｙ＋、Ｉに作られ、かつマイクロタイタトレー（９６ウエル丸底−Ｎｕｎｃ）内へ調剤された。

コントロールとして、自己由来のＢリンパ珠芽細胞系は、感染されずかつペプチド処理されない（負のコントロール）かまたは組換えワクシニアウィルスで感染される（空気中に５％　ＣＯ２において３７℃で４時間１０ｐｆｕ／ｅｅ１１）（正のコントロール）（１９８６年、マツクミケル氏らのＪ、Ｇｅｎ、Ｖｉｒｏｌ　６７：７１９）かのどちらかであった。

エフェクタ細胞の調製１５００ｒｐｍで５分間遠心分離することにより、細胞が取出され、かっＣＴＬ検定法における使用のためにＲ１０において再び懸濁された。

ＣＴＬ検定法標的細胞が、５０ｕｌ　Ｒ１０において９６ウエル丸底マイクロタイタトレイにおいて１０４細胞／ウエルで調剤され、かつ１００ｕｌの同一の培地においてエフェクタ細胞が加えられた。

実験ウェルが複製において調剤された。エフェクタ細胞の不在におけるバックグラウンド５１Ｃｒ遊離（培地コントロール）および５％トリトンＸ−１００の存在における最高の５１Ｃｒ遊離（界面活性剤コントロール）のためのコントロールが、４連において塗布された。塗布は、３７℃で４時間インキュベートされ、７５ｕ【の上清がガンマ計数器での計数のために小さいチューブ内へ除去された。７５ｕ１　１０％のりｏｏ（ｃｈｌｏｒｏｓ）が、容器実験室からの除去より前に加えられた。溶解は、式：％式％培地コントロール×１００界面活性剤コントロール− 培地コントロールから計算された。

培地単独における標的細胞による自発的５１Ｃｒ遊離は、トリトンＸ、−１００により遊離された計数の８％ないし３０％の間で変化した。　・１、事件の表示国際出願番号：　ＰＣＴ／ＧＢ９０１０１２３０２、発明の名称ＨＩＶのペプチドフラグメント３、特許出願人住　所　イギリス、ダブリュ・トエヌ　４・エイ・エル、ロンドン、パーク・クレッセント、２０５゜補正書の提出年月日１９９１年　８月１３日６、添付書類の目録補正書の写しく翻訳文）　１通請求の範囲１．細胞障害性Ｔリンパ球免疫を刺激するために、特定的なヒト白血球抗原（ＨＬ　Ａ）クラス１分子と特異的に相互作用するＨＩＶのフラグメントのアミノ酸配列を有するペプチドであって、そのペプチドは、配列Ｎ　Ｈ２−アスパラギン −プロリン−プロリン−イソロイシン−プロリン−バリン−グリシン−グルタメート−イソロイシン−チロシン−リジン−アルギニン−トリプトファン−イソロイシン−イソロイシン−ＣＯＯＨを有する。

２、カルボキシ末端システ（ンをさらに含む、請求項１に記載のペプチド。

３、請求項１または２にしたがったペプチドを含む、ＡＩＤ□Ｓに対するワクチン。

４．１つより多（のペプチドを含み、各ペプチドは異なったＨ　Ｌ　Ａクラス■ 分子に応答する、請求項３に記載のワクチン。

５、投与のために溶液中におけるか、または不溶性物質へ吸収されるかまたはアジュバントと混合されたペプチドまたはペプチドの混合物を含む、請求項３または４に記載のワクチン。

６、投与のために溶液中におけるか、または不溶性物質へ吸収されるかまたはアジュバントと混合された、関連のペプチドエピトープを含む合成または融合タンパク質を含む、請求項３または４に記載のワクチン。

７、関連のペプチド配列を発現するように構成された組換え微生物を含む、請求項３または４に記載のワクチン。

８、細胞障害性Ｔリンパ球の存在のために細胞を検定する方法であって、関連のＨＬＡの型と相互作用する、請求項１または２にしたがったペプチドの存在においてＨＬ　Ａの型に対して整合された標識されたＢリンパ珠芽細胞とともに細胞をインキュベートするステップと、遊離されたラベルの量を決定するステップとを含む、方法。

９、ＡＩＤＳまたは関連の状態に対しで患者を治療する方法であって、患者に存在するＨＬＡ分子と相互作用する請求項１または２にしたがったペプチドで処理された細胞障害性Ｔ細胞を患者に投与することを含む、方法。

１．０．ＡＩＤＳまたは関連の状態に対して患者を治療する方法であって、請求項１または２にしたがったペプチドにより予防接種することを含む、方法。

国際調査報告自−＋−１−ＩＩＩＩＡ１１＊ｎ＋＝蟲言−’１−ＰＣＴ／ＧＢ９Ｃ’１０１２３０国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．細胞障害性Ｔリンパ球免疫を刺激するために、特定的なヒト白血球抗原（ＨＬＡ）クラスＩ分子と特異的に相互作用するＨＩＶのフラグメントのアミノ酸配列を有するペプチドであって、そのペプチドは、配列ＮＨ２−アスパラギン−プロリン−プロリン−イソロイシン−プロリン−バリン−グリシン−グルタメートーイソロイシン−チロシンーリジン−アルギニン−トリプトファン−イソロイシン−イソロイシン−ＣＯＯＨを有する。
２．カルボキシ末端システインをさらに含む、請求項１に記載のペプチド。
３．請求項１または２にしたがったペプチドを含む、ＡＩＤＳに対するワクチン。
４．１つより多くのペプチドを含み、各ペプチドは異なったＨＬＡクラスＩ分子に応答する、請求項３に記載のワクチン。
５．投与のために溶液、または不溶性物質上の吸収物またはアジュバントとの混合物におけるペプチドまたはペプチドの混合物を含む、請求項３または４に記載のワクチン。
６．投与のために溶液中におけるか、または不溶性物質へ吸収されるかまたはアジュバントと混合された、関連のペプチドエピトープを含む合成または融合タンパク質を含む、請求項３または４に記載のワクチン。
７．関連のペプチド配列を発現するように構成された組換え微生物を含む、請求項３または４に記載のワクチン。
８．細胞障害性Ｔリンパ球の圧力のために細胞を検定する方法であって、関連のＨＬＡの型と相互作用する、請求項１または２にしたがったペプチドの存在においてＨＬＡの型に対して整合された標識されたＢリンパ球芽細胞とともに細胞をインキュベートするステップと、遊離されたラベルの量を決定するステップとを含む、方法。
９．ＡＩＤＳまたは関連の状態に対して患者を治療する方法であって、患者に存在するＨＬＡ分子と相互作用する請求項１または２にしたがったペプチドで処理された細胞障害性Ｔ細胞を患者に投与することを含む、方法。
１０．ＡＩＤＳまたは関連の状態に対して患者を治療する方法であって、請求項１または２にしたがったペプチドにより予防接種することを含む、方法。