JPH04504841A - 赤血球及び血小板のための合成された、血漿を含まない輸血可能な貯蔵媒体 - Google Patents

Abstract

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Description

【発明の詳細な説明】 赤血球及び血小板のための合成された、血漿を含まない輸血可能な貯蔵媒体 免豆立１遣 、Ｌ工ＪＬＬ迂１ 本発明は、赤血球及び血小板のための合成された、血漿を含まない輸血可能な貯 蔵媒体に関する。さらに詳細に言うと、本発明は、（１）血漿及び他のタンパク 質を含まず、（２）赤血球及び血小板の輸血のための貯蔵可能期間を、これらの 成分の濃縮物の品質を維持したまま延長することができ、そして（３）必須的で ない有機化合物を含まない、赤血球及び血小板のための合成された、血漿を含ま ない輸血可能な保存媒体に関する。

ｉ−血困ユｌ 血液は２つの主な部分から成り立っている。これらの部分は血液試料を採取し、 凝固を妨げた時に認識することができる。試料を含む容器の底部で凝固する部分 は「血餅Ｊ　（ｆｏｒｍｅｄ　ｅｌｅｎ＋ｅｎｔｓｌ　と呼ばれる。血餅は、赤 血球並びに白血球及び血小板のような他の血球成分を含む。血小板はまたトロン ボサイトとも呼ばれる。血餅は通常、正常ヒト血清の４０％〜５０％を占める。

血液試料において凝固しない濁った液体は血漿と呼ばれる。血漿は主に水から成 るが、無機及び有機物質並びに溶解ガス及び雑多な外来物質を含む、血漿に含ま れる無機物質は主として電解質である。正常なヒト血漿中に通常見出される最も 有意義な電解質を１度と共に表１に示す。

ム」。

ナトリウム　１４２．ＯｍＥｑ／１ カリウム　４．３　ｍＥｑ／１ カルシウム　５．０　ｍＥｑ／１ マグネシウム　３．４　ｍＥｑ／１ 塩化物　１０４．Ｏｎ＋Ｅｑ／１ 炭酸水素化物　２７．ＯｍＥｑ／１ リン酸化物　２．３　ｍＥｑ／１ 硫化物　０．６　ａ＋Ｅｑ／１ 血漿中に見出される最も有意義な有機物質は乳酸、アミノ酸、クレアチニン、ゲ ルコール、ホルモン、タンパク質、アルブミン及びグロブリンである。

現代医学において、生体内で血液に添加され及び／又は生体外で血液と混合され る溶液が開発されつつある。生体内の血液に添加されるものは主として、寝たき り患者のための静脈内点滴、医薬賦形剤及び／又は電解質交換のために用いられ る。これらの溶液は主として水及びデキストロースを含み、さらに任意的に電解 質を含む。デキストロースはこれらの溶液中に通常５％程度存在し、血球細胞及 び組繊細胞に栄養を与える。これらの溶液中に含まれる電解質は大きく異なる。

血漿に最もよ（似た溜液は、表１に示した複数の電解質を含む。デキストロース 及び電解質を含む、生体内添加に適した溶液の１例としてロッケーリンゲル溶液 （１０Ｃｋ６−Ｒｉｎｇｅｒ’５ｓｏｌｕｔｉｏｎｌ　を挙げることができる。

ロッケーリンゲル溶液の組成を表２に示す。

表１ 塩化ナトリウム試薬　９．０ｇ 塩化カリウム試薬　０．４２　ｇ 塩化カルシウム試薬　０．２４　ｇ 塩化マグネシウム試薬　０．２ｇ 炭酸水素ナトリウム　０．５ｇ 生体内の血液に添加するために適した他の溶液は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ　Ｐ ｈａｒａｍａｅｅｕｔｉｃａｌ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈ ｎｇ　Ｃｏｍｐａｎｙ、　１４版（１９７０１，８１５〜８４７ページに記載さ れている。

生体外の血液に添加される溶液は単に全血又は分離された血液成分を限られた期 間だけ保存することを主な目的とした抗凝固栄養剤又は赤血球、血小板、白血球 若しくはこれらの成分の混合物の保存期間を延長するために最適化された特定の 栄養溶液である。赤血球と共に回収され生体外で保存される血液の１成分として 血小板が含まれる場合には、活性の低い抗凝固剤を用いることが望ましい。

採取された全血に添加される抗凝固剤として最もよス」又はｒＡｃＤＪとして知 られている。この抗凝固剤溶液は抗凝固剤と栄養素との混合物であって、具体的 にはｉｌｌ非生理的なｐｉ（を創出することなくカルシウムをキレートするのに 十分な最適濃度のクエン酸及びクエン酸ナトリウム、並びに（２）血液又はその 成分、特に赤血球を短時間保存するために十分な濃度のデキストロースを含む。

全血及び他の細胞性画分を保存するために望ましいものであることがわかったよ り酸性の低い溶液は「クエン酸塩−リン酸塩−デキストロース抗凝固溶液」又は ｒＣＰＤＪとして知られている。クエン酸塩−リン酸塩−デキストロース抗凝固 溶液の組成は表３に示されている。

表ユ クエン酸（無水）　３．０　ｇ クエン酸ナトリウム（二水塩）　２６．３　ｇデキストロース　２５．５　ｇ 血球成分の特定の要素は分離することができ、種々の温度において後で輸血する ためにより良く保存され得る。白血球及び血小板を採取及び保存するためにハイ ドロキシアパタイト単純な分離方法を採用することができ、これらは赤血球にと って好適な保存温度である４℃ではな（２２℃で最も良く保存される。

輸血のために赤血球を４℃で貯蔵すると、時間が経つにつれて細胞が劣化する。

この細胞の劣化は「貯蔵障害」と呼ばれ、これは溶血が増加し、輸血後の赤血球 細胞の生存率が減少することにより特徴づけられる。あるの減少、ナトリウム及 びカルシウムイオンの増加、２．３−ジホスホグリセレート（２，３ＤＰＧＩの 損失及びそれに伴う酸素輸送特性の変化、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）の減少 並びに膜骨格の変化及びそれに伴う柔軟性の減少及び脆性の増加等の細胞内変化 を包含する。

赤血球は従来、通常、１部の栄養素−抗凝固剤と７部の血漿（酸−クエン酸塩− デキストロース）から成る混合栄養素−抗凝固剤混合物中で保存されていた。貯 蔵障害の進行により赤血球の貯蔵可能期間は限定される。

赤血球の貯蔵可能期間は一般的に２１日に限定されている。

より最近、血漿及び血小板を除去した後の赤血球と混合される添加剤により、赤 血球の貯蔵可能期間が４９日まで延長された。通常、これらの添加剤溶液は、ア デニン、グルコース及び溶血及び２，３　ＤＰＧの損失を遅らせるために添加さ れる他の微量成分が添加された食塩水から成る。これらの添加溶液と共に用いら れる主な容器は、便利さのために上記ＣＰＯを加えた単純な抗凝固剤のみを含む 。採血後、抗凝血処理された全血が遠心され、血小板を豊富に含む血漿及び赤血 球細胞がサテライトバッグ（ｓａｔｅｌｌｉｔｅ　ｂａｇｌに移される。赤血球 添加溶液が次に赤血球と混合される。添加溶液を、分離された赤血球細胞と混合 することにより、赤血球細胞添加溶液が他の分離された血球成分で汚染されるこ とが防止される。赤血球の所望の流体性は、適量の添加溶液を用いることによっ て維持される。

赤血球細胞のための添加溶液としては多（のものが市販され又は研究室内で用い られている。赤血球のための典型的な添加溶液は、食塩−アデニン−グルコース （ＳＡＧ）媒体から誘導される。ＳＡＧは１９７０年代の半ばにスウェーデンで 開発されたものであり、従来の抗凝固剤−栄養素混合物を用いて可能であった２ １日に比べ、赤血球の貯蔵可能期間を３５日間と許容できる水準にまで延長した ものである。ＳＡＧは、３５日間の貯蔵期間にわたってＡＴＰ濃度を許容可能な 範囲内に維持する。ＳＡＧ中で３５日間赤血球細胞を貯蔵すると、貯蔵最終日に おける平均瀉血は約１％であり、これはＣＰＤ又はＡＣＤを用いた場合に通常起 きる０、１％に比べてはるかに大きいものである。クエン酸ナトリウム、デキス トロース、クエン酸及び−塩基性リン酸ナトリウム並びに現在ではアデニン（Ｃ ＰＤＡ−１１が補強されて貯蔵可能期間が３５日にまで延長された単純な溶液中 で保存する場合に比べて、ＳＡＧ中で赤血球を保存した場合に溶血が増加する原 因は、血漿タンパク質の非存在下において白血球プロテアーゼが赤血球膜に対し て作用すること、あるいは非生理的な貯蔵溶液に起因する浸透圧的不安定化によ るものと信じられる。

修飾ＳＡＧはマニトール（２９＋ｗＭ）を含み、記号ＳＡＧ−Ｍとして知られて いる。この添加剤溶液は、膜の安定化をもたらし溶血を減少させる。ＳＡＧ−Ｍ と類似の組成を何するものとしてＡＤＳＯＬ　（登録商りブランドの貯蔵媒体が 知られている。米国内での市販が許可されたＡＤＳＯＬ　（登録商標）は、７５ ０　Ｂ／ｄｉのマニトールに加えて、ＳＡＧ−Ｍよりも５０％多くのアデニンと １５０％多くのグルコースを含む。この製品はバクスター社、イリノイ州６００ １５ディアフィールド、レーククックロードにより生産されている。ＡＤＳＯＬ 　（登録商標）ブランドの貯蔵媒体の組成は表４に示されている。

」Ａ デキストロース　２．２ｇ 塩化ナトリウム　９００．０Ｉ１ｇ マニトール　７５０．０　ｍｇ アデニン　２７．０　ｍｇ 水　全量を１００．０　ｍｌにする量 ＡＤＳＯＬ　（登録商標）ブランドの貯蔵媒体中のマニトールの存在により、白 血球プロテアーゼが存在下においてさえ溶血が減少する。ＡＤＳＯＬ　（登録商 標）ブランドの貯蔵媒体中の高濃度のデキストロースは、他の赤血球パラメータ ーに対して望ましい効果を与えるものと信じられる。ＡＤＳＯＬ　（登録商標） ブランドの貯蔵媒体を用いると、赤血球を有効に４２日間貯蔵することができる 。

しかしながら、現在の赤血球貯蔵媒体には欠点及び問題点がある。これらの媒体 は、唯一のカチオンとしてナトリウムのみを含んでおり、イオン的なアンバラン スを有している。赤血球細胞の能動カナオン輸送システムは低温下で阻害される ので、カチオンの受動的拡散により赤血球細胞中での正常な濃度勾配が損なわれ る。これにより、細胞が膨潤し、最終的に溶解され得る。マニトールやソルビト ールのような膜安定化剤、すなわち「浸透圧調節剤」をこれらの溶液に添加する ことによっては、これらの溶液中での赤血球細胞の環境的悪影響を完全に補償す ることはできない。

現在の赤血球添加溶液は、緩衝能力が限定されている。緩衝能力が低いために、 ４℃で約４２日間鼻血球濃縮物を貯蔵するとｐＨが６．５にまで低下する。この ようなｐＨレベルにおいては、ＡＴＰ減少を伴うグリコリシスのために、貯蔵中 の赤血球細胞の生存率が低下する。２，３０ＰＧ濃度もまた、貯蔵中のｐＨの低 下には非富に感受性が高い。２，３０ＰＧが欠損すると、赤血球の酸素結合特性 が変化する。

特殊な添加溶液中での血小板の貯蔵は、特殊な、すなわち「第２世代」容器中に おいて一般に行なわれる。

これらの容器は、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）で作られた「第１世代」の血液貯蔵 容器よりもガス透過性である。

これらの特殊な容器を使うと、血液成分の貯蔵中に二酸化炭素（ＣＯ，］ガスを 逃がすことができる。ＣＯ，ガスが逃げることにより、貯蔵溶液中での貯蔵中に おける炭酸の生成が減少する。溶液中の炭酸が減少することにより、貯蔵溶液中 で生理的に許容できるｐＨが維持される期間が延長される。

ロックらに与えられた米国特許第４．４４７，４１５号は血小板を貯蔵するため の無血漿の液体貯蔵媒体を開示している。該発明の媒体は、食塩水、抗凝固剤デ キストロース含有溶液であって望ましくはＣＰＤ−チロード溶液を形成するもの に１又は２以上の添加物を加えたものから成る。該発明において開示された、適 当な添加物は（１）インドメタシン、グイナクリン又はビタミンＥのような有機 化合物である可逆的阻害剤及び（２）プロスタグランジンＥ１、Ｄ２又は■２の ような、サイクリックアデノシン−リン酸濃度を高める物質を包含する。これら の添加物の多くは人体に輸血するための安全性及び基準適合性を欠いており、従 って、実験的使用又は生体外での使用についてのみ適当である。該発明において 用いるのが適当であると開示されている他の添加剤は（１）フラクトース及び他 の糖、アデニン又はアセチルＣｏＡ及び（２）リン酸及びある種のアミノ酸緩衝 液のような緩衝液を包含する。栄養素とされる有機化合物又は添加剤によっては 、媒体中にデキストロースが存在する必要性はなくならない、添加剤及び血漿に 随伴されるグルコースの組合わせによって、５日間までの貯蔵期間について血小 板の栄養要求が満足され、緩衝剤とされる添加剤によっては、この期間を越えて 血小板を貯蔵した場合の適正なｐＨを維持することはできない、このグルコース 濃度は明らかに赤血球貯蔵のためには不十分であるし、これらの緩衝剤では、４ ±２℃の温度下で貯蔵される生きた懸濁赤血球細胞によって生産される乳酸を十 分に緩衝することができないので、ｐＨ低下による細胞の死滅が起き易い。

従って、この溶液は、血小板に対しては潜在的に許容できるが、赤血球細胞の貯 蔵には用いることができない。

従って、上記開示は、赤血球についてのものではない。

産業界には、血漿及び有機化合物を含まず、長期間にわたって赤血球細胞及び血 小板を貯蔵することができ、人体にも安全に適用できる血液細胞貯蔵添加媒体が ない。

２１日と直！」１１団 第１図は、本発明の種々の実施例の赤血球細胞貯蔵媒体中又は対照の貯蔵媒体中 で赤血球を４９日間貯蔵した際のＡＴＰの損失率百分率をグラフ的に比較する図 である。

第２図は、本発明の種々の実施例の赤血球細胞貯蔵媒体中又は対照の貯蔵媒体中 で赤血球を４９日間貯蔵した際の溶血の百分率をグラフ的に比較する図である。

第３図は、本発明の種々の実施例の赤血球細胞貯蔵媒体中又は対照の貯蔵媒体中 で赤血球を４９日間貯蔵した際のｐＨをグラフ的に比較する図である。

第４図は、本発明の種々の実施例の赤血球細胞貯蔵媒体中又は対照の貯蔵媒体中 で赤血球を４９日間貯蔵した際の２．３０ＰＧの損失百分率をグラフ的に比較す る図である。

及ｌ」１１！ 本発明は、赤血球細胞及び／又は別個に若しくは赤血球と一緒に長蔵される血小 板を包含する血液成分のための、無菌の、無血漿の貯蔵培地に関する。本発明の 最も望ましい実施例は、無菌の、無血漿の赤血球細胞貯蔵媒体である。この赤血 球細胞貯蔵媒体は、生理的に適合性のある電解質水溶液を包含する。この電解質 溶液１リツトル中には約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロース と、約３．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グ ラムないし約４．２グラムの炭酸水素ナトリウムを含む。この赤血球細胞貯蔵媒 体は、貯蔵される血液と等張であり、約６．８ないし約７．４のｐＨを有する。

この赤血球貯蔵媒体は、少なくとも約４℃の温度下で少なくとも４９日赤血球を 貯蔵及び保存することを可能にする０本発明の最も好ましい実施例においては、 約２７　ｍｇ／ｄＬのアデニンが含まれる。

この赤血球細胞貯蔵媒体は、媒体１リツトル中約６．４グラムないし約７．６グ ラムの塩化ナトリウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウム と、約０．１グラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラム ないし約０．４グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グ ラムの一塩基性リン酸ナトリウムとを含むことができる。

本発明はまた、赤血球を無菌の、無血漿貯蔵培地中で保存する方法をも提供する 。

日の詳細な口日 本発明は、赤血球細胞及び血小板を包含する血液成分のための、無菌の、無血漿 貯蔵媒体に関する。本発明の最も望ましい実施例は、無菌の、無血漿赤血球細胞 貯蔵媒体である。この赤血球細胞貯蔵媒体は生理的に適合性を有する電解質水溶 液を包含する。この電解質溶液１リドツル中には、約３．０グラムないし約２５ ．０グラムのグルコース又はより好ましくはデキストロースと、約３．０グラム ないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムないし約４．２ グラムの炭酸水素ナトリウムとを含む。赤血球貯蔵培地は、ヒト又は他の貯蔵さ れる血液と等張であり約６．８ないし約７．４のｐＨを有する。好ましくはデキ ストロースである栄養源となる糖、クエン酸又はクエン酸誘導体及び炭酸水素ナ トリウム並びにい（つかの実施例におけるアデニンを除いては、本発明の赤血球 貯蔵媒体は有機物添加剤を含まない。この明細書において「生きた」赤血球細胞 とは、赤血球細胞貯蔵培地中に懸濁された分離された血小板のうちのかなりのも のが、赤血球細胞が輸血のために適しており、受容者に輸血された後に機能する 程度に、その正常な本来の生理的、機能的及び構造的性質を維持していることを 意味する。

本発明の生理的に適合性を有する電解質水溶液は、貯蔵能力に対する些細な効果 においてのみ異なることができる。この赤血球細胞貯蔵媒体の最も望ましい具体 例においては、血漿中に見出される最も有意義な電解質が含まれる。電解質は、 この赤血球細胞貯蔵媒体中に、正常な血漿中とほぼ同じ濃度で含まれる。最も望 ましい電解質はクエン酸ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、硫酸マグ ネシウム及び−塩基性リン酸ナトリウムを包含する。

上記したような電解質及び他の電解質は水溶液の形態で受容者に注射又は点滴す ることができる。赤血球細胞貯蔵媒体の調製において、これらの電解質の濃度は 公知の方法により変化させて等張液を得ることができる。

赤血球細胞貯蔵媒体の好ましい実施例では、１リツトルの媒体中に、約６．４グ ラムないし約７．６グラムの塩化ナトリウムと、約０，２グラムないし約０．４ グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの硫酸マグネ シウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基性リン酸ナトリウムと を含む。

赤血球細胞のための好ましい貯蔵溶液は、血液に最も類似した電解質を含むもの である。無タンパク質血漿を真似るイオン環境を採用することにより、赤血球貯 蔵細胞に対して膜への悪影響がより小さくなり溶血も少なくなる。より安定な膜 により、ＡＴＰ及び２．３　ＤＰＧが維持され、乳酸の生産量が減少するという ように赤血球細胞の正常な代謝を改善する。正常な代謝により、アデニン、マニ トール及び高濃度グルコースのような特殊な赤血球細胞添加剤を用いる必要性が 少なくなる。

デキストロースの形態にあるグルコースは赤血球細胞にとっての天然の栄養素で ある。デキストロースは、３５日を越えて赤血球を貯蔵するための、貯蔵媒体の 能力に有意に寄与する０本発明の赤血球細胞貯蔵媒体は、貯蔵赤血球細胞のため の唯一の有意な栄養素としてデキストロースを用いている。他の栄養素が少量存 在したりラセミ体のグルコースが存在しても本発明の赤血球細胞貯蔵媒体の有効 性は認識できる程度に変化しない。他の栄養素が存在することは好ましくない。

なぜなら、他の栄養素は赤血球細胞の長期保存においてデキストロースはどは有 効ではないからである。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体中のデキストロースの濃度は、全血又は血液成分に ついて用いられる溶液中での典型的な濃度よりも、より高濁度のデキストロース は、全貯蔵期間を通して貯蔵赤血球に栄養を供給するのに十分でなければならな い。デキストロースは、赤血球細胞貯蔵媒体中に望ましくは少なくとも約３．０ グラム／２、最も望ましくは約７．２グラム／１２である。通常、１リットル当 り約４．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロース濃度が本発明に従っ て貯蔵される赤血球に対して少な（とも約４９日間にわたって栄養を供給するの に十分である。本発明の実施例におけるデキストロース濃度は少なくとも１リッ トル当り約３．０グラムであり、望ましくは約３．０グラムないし約７．５グラ ムである。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体の緩衝系は少なくとも約４９日間赤面球を貯蔵する ことを成功させるために重要である。実質的な量の炭酸水素ナトリウムを用いる ことにより、赤血球細胞貯蔵中に生成される乳酸の多くを中和することができる 。炭酸水素ナトリウムの濃度は、全貯蔵期間を通じて、約６．５を越えるｐＨを 維持するために十分でなければならない。約６．５未満のｐＨは、生体外でのパ ラメーターに現われているように貯蔵赤血球細胞に損傷を与え得る。これらの生 体外パラメーターは、（１）赤血球細胞膜の変化及びそれに伴う柔軟性の欠如及 び脆性の増加並びに瀉血、（２１ＡＴＰの不足並びに（３）２．３０ＰＧの欠如 及びそれに伴う酸素輸送特性の変化を包含する。研究により、赤血球懸濁培地に 高濃度（１１０＋ｉＭ）の炭酸水素ナトリウムを加えることによって貯蔵赤血球 細胞の９Ｈレベルを維持することができ、２，３０ＰＧの濃度を安定化すること ができることがわかった。このように高い、非生理的な濃度の炭酸水素ナトリウ ムを用いるためには、代謝及び膜への悪影響を紡糸するためにアデニン及びマニ トールが溶液中に存在していることが必要である。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体は、主たるアルカリ剤として炭酸水素ナトリウムを 用いている。炭酸水素ナトリウムは、赤血球細胞を貯蔵する間中、緩衝剤を沈殿 せしめることなく所望のｐＨを維持するのに十分な量用いられる。好ましくは、 炭酸水素ナトリウムは、ＩＩ２の赤血球細胞貯蔵媒体中約２、ログラムないし約 ４．２グラム存在する。本発明の赤血球細胞貯蔵媒体の緩衝系は、好ましくは一 塩基性リン酸ナトリウムを含む。他の低濃度の塩も本発明における緩衝系に用い ることができる。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体に用いられる抗凝固剤はクエン酸ナトリウムを含む 。本発明の最も好ましい実施例においては、クエン酸が含まれる０本発明におい て、抗凝固剤は、長期貯蔵期間中、赤血球が実質的に凝固することを防止するの に十分な濃度存在していなければならない。好ましくは、赤血球細胞貯蔵媒体Ｉ Ｉ２中にクエン酸ナトリウムが約３．０グラムないし約６．０グラム、クエン酸 が約０．４グラムないし約０．６グラム存在する。低濃度の他の抗凝固剤も本発 明の赤血球細胞貯蔵媒体に採用することが可能である。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体は、好ましくは表５に示す化学成分から成る０本発 明の最も好ましい実施例では、赤血球細胞貯蔵媒体はこれらの化合物から本質的 に成り、他のあらゆる化合物を実質的な濃度で含まない。

他の化合物を本発明の赤血球細胞貯蔵媒体から排除することは、受容者の感作を 防止し、赤血球細胞の貯蔵期間を最大化するために望ましい。

敷ニ ーー１工亘皿−止ｌ二旦１１ 塩化ナトリウム　６．４−７．６　ｇ／ｌ　６．４５０　ｇ／ｌ塩化カリウム　 ０．２−０．４　ｇ／ｌ　０．３７５　ｇ／Ｌ塩化カルシカルシウム　０．１− ０．４　ｇ／Ｉ　Ｏ，２４８ｇ／ｌ硫酸マグネシウム　０．２−０．４　ｇ／ｌ 　Ｏ，２００ｇ／ｌデキストロース　３．０−２５．０　ｇ／ｌ　７．２　ｇ／ ｌクエン酸　０．４−０．６　ｇ／ｌ　Ｏ，５１０ｇ／ｌクエン酸三ナトリウム 　３．０−６．０　ｇ／ｌ　４．４７１　ｇ／ｌ炭酸水素ナトリウム　２．０− ４．２　ｇ／ｌ　３．０００　ｇ／ｌアデニン　０．２６−０．２８　ｇ／ｌ　 ０．２７０　ｇ／ｌ溶液中のここのイオン濃度を■Ｅｑ／１で示すと表６のよう になる。

五旦 り工ｍ亙旦−ましいイオン Ｈａ”　１９８．８０−２３６．１０　２０７．６０ｒ　２．６８−　５．３６ 　５．０３ Ｃａ”　１．３６−　５．４５　３．３８Ｍｇ”　１．７０−３．４０　１．７ ０ＨＰＯ，”　１．３８−　５．５０　２．５８Ｃ１−１１０，００−１３８， ００１１７，３８５０４”−１，７０−３，４０１，７０ＨＣＯ，−２３，８０ −５０，００３５，７１赤血球細胞貯蔵媒体のｐ）［は約６．８ないし約７．４ の範囲内に維持される。貯蔵媒体のｐＨは、容器中に存在するＣＯ２の量により 変化し得る。高濃度の００１が存在すると、貯蔵媒体のｐＨは下がる。貯蔵媒体 のｐＨが高いと、デキストロースを炭酸水素ナトリウム含有貯蔵媒体とは別個に 滅菌する必要が生じ得る。なぜならデキストロースは約６．４以上のｐＨでは容 易に滅菌されないからである。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体を調製するために用いるのに適当な基本溶液及び成 分は、無菌の、非発熱性の注射可能な多くの市販のものから得ることができる。

成分の製造者は、例えば、メディカル・エコノミクス・カンパニー・インコーホ レーテッド、ニューシャーシー州オラデルから出版されているｒ　Ｐｈｙｓｉｃ ｉａｎ’ｓ　ＤｅｓｋＲｅｆｅｒｅｎｃｅ　Ｊやｒ　Ｒｅｄ　ＢｏｏｋＪのよう な一般的な出版物に記載されている。以下に例示する市販の成分は、本発明に用 いることができる。米国薬局方リンゲル注射液は、注射のための無菌の非発熱性 の水１ε中に８．６グラムの塩化ナトリウム、０．３グラムの塩化カリウム及び ０．３３グラムの塩化カルシウムを含む、注射のための滅菌水は静脈内点滴のた めの非発熱性の水である。米国薬局方硫酸マグネシウム注射液は、注射のための 無菌の非発熱性の水中に５０％の硫酸マグネシウムを含む、米国薬局方炭酸水素 ナトリウム注射液は、゛注射用の無菌、非発熱性の水中に８．４％の炭酸水素ナ トリウムを含む。米国薬局方デキストロース注射液は、注射のための無菌の非発 熱性の水中に５０％のデキストロースを含む、米国薬局方塩化カリウム注射液は 、注射のための無菌の非発熱性の水中に２２％の塩化カリウムを含む、クエン酸 塩−リン酸塩−デキストロース抗凝固剤溶液は、１２の無菌の非発熱性の水中に ３．０グラムのクエン酸と、２６．３グラムのクエン酸ナトリウムと、２．２２ グラムの炭酸水素ナトリウムと、２５．５グラムのデキストロースを含み、５０ ０　ｍｌの全血に対し７０ｍ１用いられる。アデニンは、合成及び天然の供給源 から粉末状のものが入手可能である。

上記列挙した成分は、本発明の好ましい実施例においては以下の量づつ混合され る。赤血球細胞貯蔵媒体溶液は、　７５０　ｍｌのリンゲル液、１７０■１のＣ ＰＤ、４０＋１の炭酸水素ナトリウム、５．４　ｍｌのデキストロース注射液、 ０．７　ｍｌの塩化カリウム、０．４　ｍｌの硫酸マグネシウム溶液、３３．５ ｍｌの注射用滅菌水及び２７０　ｍｇのアデニンを含む。全ての成分は無菌条件 下で混合される。赤血球細胞貯蔵媒体に赤血球を接種する前に、該混合物は、組 織培養培地の真空ろ過のために設計された０、２ミクロンフィルターユニットを 用いて滅菌される。

本発明の赤血球細胞貯蔵媒体の好ましい組成とＣＰＤ−血漿の組成を比較したも のを表７に示す。

表ユ ・・　細　Ω」た工二二１し哲。

ｍＥｑ／Ｌ　ｍＥｑ／１ ナトリウム　２Ｇ？、６０　１７３．０−１８０．０カリウム　５．Ｑ３　１． ９−３．８ カルシウム　３．３８３．４−４．０ マグネシウム　１．７０　１．１−１．９リン酸塩　２．５８　３．９ 炭酸水素塩　４０．００　２０．９ クエン酸塩　１５．００　２２−４ 硫酸塩　１，７０　０．４−１．１ 塩化物　１１７．３８　７５．０−８０．０タンパク質　０．ロ　１２．２ 有機Ｍ　Ｏ，０４，４ クエン酸　２．６０　ｍｍｏｌ／１　３．９　ｍｎ＋ｏｌ／１アデニン　２．０ ０　ｍｍｏｌ／ｌ　Ｏ，Ｏｍｍｏｆ／１＊この濃度は、クエン酸塩、クエン酸及 びリン酸塩が赤血球細胞内に入らず、ヘマトクリットが４２．５で血清中の化学 組成がハーバ−のレビエー・オブ・バイオケミストリーに記載されているような 正常値の範囲内である全血５０００１１に対して７０ｔＬのＣＰＤ−抗凝固剤溶 液を用いたと仮定した場合の値である。

赤血球細胞貯蔵媒体を調製した後、赤血球細胞の保存及び貯蔵の方法においては 、赤血球細胞を他の血液成分から分離することが必要である。血漿は［絞り出さ れＪ　ｆｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｏｆｆ）　、サテライトバッグ中に回収される０ 次いで、赤血球細胞を収容している容器に赤血球細胞貯蔵媒体を輸送することが できる。この輸送は、赤血球細胞貯蔵媒体を収容するサテライトバッグと管を通 じることによって、あるいは回収バッグセットにもともとついていない容器から 媒体を輸送することができる、市販の無菌接続装置により行なうことができる。

赤血球細胞を赤血球細胞貯蔵媒体中に懸濁した後、赤血球細胞は４℃で貯蔵され る。

従来のＰＬ−７３２赤血球細胞容器は高いＣＯ２透過性を有する。市販の薄いポ リ塩化ビニル（ＰＶＣ）バッグのようなガス透過性の容器中で赤血球を保存する と、ＣＯ２を逃がすことができるので、赤血球細胞貯蔵媒体中での炭酸水素ナト リウムの必要性が小さくなる。

なぜなら、容器からＣＯ２が逃げることによって、収容される溶液中に保持され る炭酸の量が少なくなるからである、血小板貯蔵容器を用いた血小板貯蔵の研究 において、３０ｍ１４の乳酸を中和して最終ｐＨを６．８以上とするのに４０ｍ Ｍの炭酸水素ナトリウムで十分であった。４℃で４２日間赤血球を貯蔵するとｐ Ｈは６．８になると予想される。本発明の赤血球細胞貯蔵媒体は、血小板の貯蔵 に用いられるＣ０２透過性容器のような、ジエチルへキシルフタレー）−（ＤＥ ＨＰ）で可塑化された薄いポリビニル貯蔵容器中での貯蔵を可能にする。これら の容器を用いると、より多量のＣＯ□を容器から逃げ、少ない炭酸が溶液中に溶 解されるので、炭酸水素ナトリウムの必要性が少なくなる。容器中にＤＥＨＰが 可塑剤として存在することにより、貯蔵される赤血球細胞の品質が高められる。

本発明の貯蔵媒体の、血液成分貯蔵に対する効果を示すために、生体外及び生体 内実験を行なってアデニン又は他の膜安定化化合物の非存在下に貯蔵した血小板 濃　−縮物の品質を比較した。実施例１ないし７及びそれに対応する比較例Ａな いし工がこれらの試験の結果を示している。これらの実施例及び比較例において 、貯蔵媒体は血小板を貯蔵することについての有用性が調べられ、ここでは「血 小板貯蔵培地」又はｒＰＳＭＪと表示されている。

以下の実施例は本発明の例であり、比較例は本発明の例ではない。

１ない　５　び　ＡないしＥ これらの実施例及び比較例において採用された、血小板分離及び貯蔵媒体調製の ための方法もよ、上８己及び米国特許第４，６９５，４６０号の血小板について の好ましし＼実施例に記載されている１本発明の血小板貯蔵媒体るこつｌ／Ｘで 提供されたデータは記号ｒＰＳＭＪで示され、本発明の実施例（記号Ｅｘ、で示 す）１ないし５＆こ記載されてし）る、ＣＰＤ−血漿中での血小板貯蔵につし＼ てのデータＧ±記号ｒＣＰＤ−ｐＨで示され、比較例（記号！’　Ｃ，Ｅｘ、　 Ｊで示す）ＡないしＥに示されている。

これらの実施例及び比較例において、血小板を分離し、それぞれの媒体中で貯蔵 し、第１日、第５日、第１０日及び第１４日に試験した。これらの日４こ行なわ れた試験においては、第１日の血小板数に対する百分率、ＡＤＰによる血小板の 形態変化に伴う吸光度の増加百分率、低張ショックに対する応答百分率、血小板 中のＡＴＰ濃度、及び血小板から放出される乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）に よって示される溶解した血小板の量をｉ＋＋定した。これらの試験の結果をそれ ぞれ表８なし＼し表１２に示す。

表８ 第１日　の　ハ　に　する　 ＬＵ　慕」し旦　１」旦　第１４日 Ｅｘ、　Ｉ　ＰＳＭ　１００　９４±３９１±２８２±４Ｃ，Ｅｘ、　Ａ　ＣＰ Ｄ−ｐｉ　１００　９４±３８４±６７７±３表９ Ｅｘ、　２　ＰＳＭ　１６±１　１４±１　１０±１７±ＩＣ，Ｅｘ、　Ｂ　Ｃ ＰＤ−ｐｌ　１６±１１１±１５±１４±１表１０ シ目ツク店　、％１ 第」一旦　１旦ユ　第ユ旦旦　第ユ土旦Ｅｘ、３　ＰＳＭ　７５±６　６５±４ 　６３±５　４０±３Ｃ，Ｅｘ、ＣＣＰＤ−ｐｉ　８２±３　７８±５　４９± ２　１２±５表１１ Ｅｘ、４　ＰＳＭ　８．Ｓ±０．４　７．７±０．３　５．４±０．４　３．１ ±０．４Ｃ，Ｅｘ、Ｄ　ＣＰＤ−ｐｌ、　７．５±０．７　６．０±０．４　３ ．５±０．３　０．８±０．２Ｅｘ、５　ＰＳＭ　１３８±１６　１７７±２２ 　３０５±３３　４３０±４３Ｃ，Ｅｘ、Ｅ　ＣＰＤ−ｐｉ、　１２０±８２１ ５±１５　４３０±２３　５８５±３５これらの比較試験の結果は、下記に述べ るように、血小板貯蔵媒体中で貯蔵した血小板がより完全な形態的及び生理的性 質を維持していることを示している。本発明の血小板貯蔵媒体中に懸濁した血小 板は、試験期間にわたる血小板の数の差から明らかなように、より良く保存され る。血小板数の減少は血小板の凝集及び／又は溶解を示している。本発明の血小 板貯蔵媒体中に懸濁された血小板は、形態変化を起こす能力及び生理的活性化剤 を用いて活性化される能力をより良く維持していた６本発明の血小板貯蔵媒体中 に懸濁された血小板は、ＣＰＤ−血漿中に懸濁された血小板よりも、低張ショッ クから回復する能力が高かった。本発明の血小板貯蔵媒体中に懸濁された血小板 は、血小板細胞のエネルギー状態を反映するＡＴＰ濃度をより高く維持していた 。本発明の血小板媒体中に懸濁された血小板は、貯蔵期間中の細胞内ＬＤＨのよ り少ない損失により示される、膜の完全さをより良く維持していた。

これらの実施例及び比較例は、血小板貯蔵媒体中での血小板濃厚物物の非凍結温 度又は少なくとも約２２℃の温度における貯蔵第１０日ないし第１４日月の生体 外での品質（これは生体内での生存率を反映する）が、ＣＰＤ−血漿中での血小 板の貯蔵における第５日ないし第１０日程度の品質と同等であることを示してい る。

ＩＲ里玉 ＦないしＨ この実施例及び比較例は、実施例１ないし５及び比較例ＡないしＥと同じ方法を 用いた。この実施例及び比較例は、種々の血小板貯蔵媒体中で種々の量のクエン 酸ナトリウム、塩化ナトリウム、硫酸マグイネシウム、リン酸水素ナトリウム、 炭酸水素ナトリウム、ｐｃ’ｓ張力、デキストロース及び血漿を用いた場合の効 果を示している。これらの例では、種々の血小板貯蔵媒体中で１０日間貯蔵した 場合の（１）血小板数、（２）低張ショック応答百分率、（３）大きさのばらつ き、血小板凝集物の外観、バルーン形態（ｂａｌｌｏｏｎ　ｆｏｒｓｓｌ、顕微 鏡観察で判定される断片及びＬＤＨ放出によって特徴づけられる血小板の形態的 完全さ、（４１ＡＤＰによる形態変化の程度によって特徴づけられる血小板機能 並びに（５）血小板エネルギー代謝すなわち酸素吸収速度、乳酸生産速度、グル コース消費速度及びＡＴＰ濃度に対する影響を比較した。これらの特性を示すデ ータを表１３ないし１７にそれぞれ示す。

実施例６は、本発明の血小板貯蔵媒体についての上記５つの特性を示し、ｒＰＳ ＭＪという記号で表示されている。

比較例は、記号ｒＢＳＭＪ、ｒＢＳＭ＋グルコース」及びｒＤＭＳＭＪで示され る血小板貯蔵媒体についての上記５つのデータを示す。記号ｒＢＳＭＪは、デキ ストロースを含まないこと及び塩化ナトリウムの濃度がｌＩ２当り５．２３グラ ムと低いことを除いて本発明の好ましい血小板貯蔵媒体と同じ組成を有する貯蔵 媒体を示す。

記号ｒＢＳＭ＋デキストロース」は、塩化ナトリウムの濃度がｌＩ２当り５．２ ３グラムと低いことを除いて、デキストロースを含む本発明の好ましい血小板貯 蔵媒体と同じ組成を宵する貯蔵媒体を示す。記号ｒＤＭＳＭＪは、デキストロー スを含まないことを除いて本発明の好ましい血小板貯蔵媒体と同じ組成を有する 貯蔵媒体を示す。比較例は本発明の例ではない。

Ｃ，Ｅｘ、　Ｆ　ＢＳＭ　６６±８　４７±１１Ｃ，Ｅｘ、　Ｇ　ＢＳＭ＋デキ 　８３±８　７３±１０ストロース Ｃ，Ｅｘ、ＨＤＭＳＭ　８２±１０　５６±９Ｅｘ、６　ＰＳＭ　９５±２　９ １±３Ｃ，Ｅｘ、Ｆ　ＢＳＭ　２８±５　２０±６　４±ｌＯＣ，Ｅｘ、　Ｇ　 ＢＳＭ÷デキ　４４±１０　４４±１０２２±ｌＯストロース Ｃ，Ｅｘ、　ＨＤＭＳＭ　７５±１３　４１ｆ：１０　８±５εｘ、　６　ＰＳ Ｍ　７３±２０６１±１３　５１±６表１５ Ｃ，Ｅｘ、Ｆ　ＢＳＭ　１３±２　７±３　２±２（：、Ｅｘ、　Ｇ　ＢＳＭ　 ＋デキ　１６±３　１０±４　５±３ストロース Ｃ，Ｅｘ、　ＨＤＭＳＭ　１５±３　８±２　１±ＩＥｘ、　６　ＰＳＭ　１７ ±４　１４±２　１０±３表１６ Ｃ，Ｅｘ、Ｆ　ＢＳＭ　１．０±０．１　０．５±０．３　０．３±０．１Ｃ， Ｅｘ、　Ｇ　ＢＳＭ＋デキ　１．０±０．３　０．６±０．１　０．＋１±０． ＋′ストロース Ｃ，Ｅｘ、　ＨＤＭＳＭ　Ｏ，９±０．３　０．６±０．１　０．２±０．ＩＥ ｘ、　６　ＰＳＭ　１．０±０．１　０．７±０．１　０．４±０．３Ｃ，Ｅｘ 、　ＨＤＭＳＭ　７．１±１．５　５．３±２．２　０．７±０．２Ｅｘ、　６ 　ＰＳＭ　８．５±１．５　８．４±１．３　６．５±０．８本結果は平均上標 準偏差を示す。

この実施例及び比較例の結果は以下のことを示して＋１１血小板の凝集及びそれ に続く血小板の劣化を避けるためには１ｆ２当り最低３００口ないし６０００　 ｍｇのクエン酸ナトリウムが必要であった。

（２）塩化ナトリウムの濃度が１β当り６４０００ないし７６０００　ｍｇの時 に血小板の円盤状の形態が良く維持され、凝集がほとんど起きなかった。表１３ に示すように、塩化ナトリウムの濃度が１ミリリットル当り５．２３グラムの場 合には血小板濃厚物の品質は劣っていた。

（３）二価のカチオン（Ｍｇ”及びＣａ”ｌは、血小板の円盤状の形態を維持す るために必要であった。塩化カルシウムをｌＩ２当り１００ないし４００ミリグ ラム、塩化マグネシウムをｌＩ２当り２００ないし４００ミリグラム用いて良好 な結果を得ることができる。

（４）塩化カリウムは、正常な形態を維持するために必須であり、１β当り２２ ０ないし４００ミリグラム用いて良好な結果が得られた。

（５）リン酸水素ナトリウムをｌＩ２当り１００ないし５８０ミリグラム用いて 良好な結果が得られた。

（６）炭酸水素ナトリウムを１１？、当り２９０口ないし４２００ミリグラム用 いて良好な結果が得られた。７日を超えて貯蔵する場合にｐＨの低下を防止する ためには少なくとも１β当り２９００ミリグラムが必要であることがわかった。

（７）添加した炭酸水素ナトリウムの量に応じて２．５ないし７．５％の二酸化 炭素雰囲気を、一定のｐＨを維持するために成功的に用いることができた。

（８）表１３のデータに示されるように、グルコース（デキストロース）は血小 板の生体外での良好な品質を維持するために必須的であった。デキストロースを ｌＩ２当り３０００ないし７５００　ｍｇ用いて良好な結果が得られた。

（９）血小板貯蔵媒体のｐＨは、２２℃で測定して６，８ないし７．４に維持さ れた。約７．４を超えるｐＨは血小板の凝集をもたらし、一方、６．８よりも低 いｐＨは膨潤を引き起こし円盤状の形態を失わしめた。

７　び　例　Ｉ 血小板貯蔵媒体の化学的及び生理的属性がＣＰＤ−血漿と類似していることは、 血小板又は赤血球細胞貯蔵媒体が本来的に無毒で安全であり、患者に点滴可能で あることを示唆している。従って、本発明の血小板貯蔵培地中で保存された血小 板の生体内実験を行なった。ここに記載する実験は、１０組の実験を包含する０ 組実験は、２１歳以上の、精神的及び身体的欠陥が知られておらず薬剤治療を受 けていない健常人男性を用いて行なった。ボランティアは、従来の血小板アファ レシス（ａｐｈａｒｅｓｉｓｌ技術を用いて採取された血小板を豊富に含む血漿 １ユニツトを提供した。血小板濃厚物は、現在許可されている方法を用いて、Ｃ ＰＤ−血漿中又は赤血球細胞貯蔵媒体中で２２℃で７日間貯蔵した。

血小板濃厚物を攪拌ｉ／ゼインキュベーター中約２２℃で貯蔵した。ＣＰＤ−血 漿中の血小板濃厚物は通常の空気中で貯蔵した。血小板貯蔵媒体中の血小板濃厚 物は、７．５％ＣＯ□雰囲気下で貯蔵した。この処理及びＣＰＤ−血漿中での貯 蔵は、現在許可されている方法である。

血小板の生体内での生存性は、例えばｒ　ＰｌａｔｅｌｅｔＫｉｎｅｔｉｃｓ　 ａｎｄ　ＩｍａｇｉｎｇＪ　、第１巻、Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ　ａｎｄＮｏｒｍ ａｌ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｋｉｎｅｔｉｃｓ、　ヘインスら、ＣＲＣブレス社、 フロリダ州ポカレイトン（１９８５］に記載されているような、放射ｍ議決を用 いた従来の回収百分率及び生存率パラメーターに基づいて測定した。

７日間の貯蔵終了時に、ｌｏｍｌの血小板濃厚物を採っテＩ　ｌ　＋インジウム ーオキシン（Ｏｘｉｎｅｌで血小板を標識した。標識及び洗浄した血小板を６ｍ ｌの非放射性の同一起源の点滴用血漿中に懸濁し、元の提供者に注入した。提供 者から、注入の１時間後、２時間後及び３時間後並びにその後毎日７日間、２＋ ｗｌの血液試料を採取し、生体内での回収百分率及び生存時間（ｓｕｒｖｉｖａ ｌｓｌ　を計算した。この実験の第１段階では、５人の提供者に本発明の血小板 貯蔵媒体中で貯蔵した血小板を注入し、５人の提供者にＣＰＤ−血漿中で貯蔵し た血小板を注入した。

２か周径の第２段階において、用いた貯蔵媒体を反対にして提供者に同様に注入 した６回収百分率及び生存時間は、ガンマファンクションマルチブルヒ・ントブ ログラム（ｇａｍａｍａ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｈｉｔ　ｐｒ ｏｇｒａｍ）を用しλて決定した０組ｔ−テストを用いて有意差を検出した。血 小板の生体外生存率は、低張ショック及びＡＤＰによる形態変化の程度により評 価した。生体内回収百分率及び生存時間はそれぞれ表１８及び１９に示す。

表１８ ユ生五旦皇上 Ｃ，Ｅｘ、Ｉ　Ｅｘ、７ Ｂ　２８　３７ 表１９ 生体内回収百分率及び生存時間の平均は、赤血球細胞貯蔵媒体中で貯蔵された血 小板濃厚物がそれぞれ５１±８％及び１４４±１６時間であるのに対しＣＰＤ− 血漿中で貯蔵された血小板濃厚物のそれは３７±１１％及び１１０±３２時間で あり、赤血球細胞貯蔵媒体中で貯蔵されたものの方が有意に高かった。この差は 、ｔ−テスト値がｐ　＜　ｏ、ｏｏｓであることによって示されるように、統計 学的に高度に有意なものである。生体外での生存性は生体内での結果と符合して 、表２０及び２１に示されるように、血小板貯蔵媒体中に貯蔵された血小板濃厚 物の方が優れており、これは組を一試験値がＰ＜０．０１と統計学的に有意であ ることが示された。

表２０ Ｃ，Ｅｘ、　Ｉ　Ｅｘ、　７ ２　３９　、　５７ 表２１ この実施例及び比較例の結果は、ＣＰＤ−血漿中での血小板の貯蔵に比べて本発 明の血小板貯蔵媒体中での血小板貯蔵が、血小板濃厚物の生体内での生存性を有 意に改善するものであることを示している。

８ないし１５　び　Ｊ これらの実施例及びこの比較例において全血から赤血球細胞を分離する方法及び 貯蔵媒体を調製する方法は上述の方法と同じである。実施例８ないし１５は、本 発明の赤血球細胞貯蔵媒体の例を示す。比較例Ｊは、赤血球細胞貯蔵媒体の現在 の技術水準を示す、比較例Ｊは、ＡＤＳＯＬ　（登録商標）の商標で市販されて いる赤血球細胞貯蔵媒体を用いている。

実施例８ないし１５及び比較例Ｊは、ＣＰＤ抗凝固剤中に回収された１０個の単 位であって、無菌的に４つのサブユニットに分けられた合計４０個の試験単位に ついて行なったものである。血液は、１５０ｍ１のＦｅｎｗａｌＰＬ−１４６ブ ラシチツク輸送バツク中に回収した。血液を遠心した後、十分な量のろ過、滅菌 した貯蔵媒体を、最終へマドクリットが６０±５％になるように注射した。

実施例８は、ｌＪ２当り７グラムのデキストロースを含む低グルコース濃度（Ｌ Ｇ）の本発明の赤血球細胞貯蔵媒体中で赤血球細胞を貯蔵することに関する。

実施例９は、１２当り２０グラムのデキストロースを含む高グルコース濃度（Ｈ Ｇ）の本発明の赤血球細胞貯蔵媒体中で赤血球細胞を貯蔵することに関する。

実施例１０は、実施例８の低グルコース濃度及び２．５グラム（３０ｍＭ）の炭 酸水素ナトリウムを有する本発明の赤血球細胞貯蔵媒体（ＬＧ／Ｂ）中での赤血 球細胞の貯蔵に関する。

実施例１１は、実施例９の高グルコース濃度及び２．５グラム（３０■−）の炭 酸水素ナトリウムを有する本発明の赤血球細胞貯蔵媒体（ＨＧ／Ｂ）中での赤血 球細胞の貯蔵に関する。

実施例１２は、実施例８の低グルコース濃度とＩＱ当り２７０ミリグラムのアデ ニンを有する本発明の赤血球細胞貯蔵媒体（ＬＧ／Ａ）中での赤血球細胞の貯蔵 に関する。

実施例１３は、実施例９の高グルコース濃度と１β当り２７０ミリグラムのアデ ニンを有する本発明の赤血球細胞貯蔵媒体（ＨＧ／Ａ）中での赤血球の貯蔵に関 する。

実施例１４は、実施例８の低グルコース濃度並びにＩＩ２当り２．５グラムの炭 酸水素ナトリウム及び２７０ミリグラムのアデニンを有する本発明の赤血球細胞 貯蔵媒体（ＬＧ／Ｂ＋Ａ）中での赤血球細胞の貯蔵に関する。

実施例１５は、実施例９の高グルコース濃度並びに１！当り２．５グラムの炭酸 水素ナトリウムと２７０ミリグラムのアデニンを有する本発明の赤血球細胞貯蔵 媒体（ＨＧ／Ｂ＋Ａ）中での赤血球細胞の貯蔵に関する。

比較例Ｊは、ｉｆｆ当り９グラムの塩化ナトリウムと、７．５グラムのマニトー ルと、２２グラムのデキストロースと、２７０ミルグラムのアデニンとを含む、 ＡＤＳＯＬ（登録商標）の商標で販売されている赤血球細胞貯蔵媒体中での赤血 球細胞の貯蔵に関する。

上記実施例及び比較例のそれぞれにおいて、６ｍｌづつ貯蔵赤血球細胞の試料を 生化学的分析のために採取した。これらの試料は、それぞれの貯蔵溶液中で４℃ で７日、１４日、２１日、３５日及び４９日間培養した赤血球細胞と共に調製し た後直ちに試料を採取した。生化学的分析においてはＡＴＰの損失百分率、溶血 百分率、溶液のｐＨ及び赤血球細胞の２．３０ＰＧの損失百分率を測定した。

第１図ないし第４図は、４９日の貯蔵期間後に行なった上記４つの生化学的分析 の結果をグラフ的に示す、これらの図は、実施例８ないし１５に用いた赤血球細 胞貯蔵媒体の８つの実施例のそれぞれについての５つの実験結果の平均値上標準 偏差を示す、これらのデータは、ＡＤＳＯＬ　（登録商標）ブランドの貯蔵培地 中で貯蔵された６サブユニツトの血液についての平均値と比較される。

第１図及び第２図に示されるように、これらの実施例及び比較例の結果は、炭酸 水素ナトリウム及びアデニンを補充した貯蔵媒体中で貯蔵した赤血球細胞がＡＤ ＳＯＬ（登録商標）ブランドの貯蔵媒体中で貯蔵された赤血球細胞よりも４９日 後のＡＴＰの維持率が高く、瀉血も少ないことを示している。驚くべきことに、 良好なＡＴＰ濃度は、アデニンを含まない本発明の赤血球細胞貯蔵媒体において 達成された。これらの実施例において観察された結果は、ＡＤＳＯＬ　（登録商 標）媒体について観察された結果よりもわずかに少なかった。

第１図及び第２図に示されるこれらの実施例及び比較例の結果は、炭酸水素ナト リウムを補充した貯蔵媒体中で貯蔵された赤血球細胞は、所望の高ｐＨ及び２． ３ＤＰＧ濃度を有していることを示している。本発明の赤血球細胞貯蔵媒体にお けるグルコース濃度の高低は、ＡＤＳＯＬ（登録商標）ブランドの貯蔵媒体中で 貯蔵する場合に比べると有意な違いをもたらさなかった。

これらの実施例及び比較例は、炭酸水素ナトリウム及びアデニンを補充した本発 明の赤血球細胞貯蔵媒体が貯蔵期間中所望のＡＴＰ濃度を維持することを示して いる。

１６　び　Ｋ　いし０ 実施例１６において採用した全血からの赤血球細胞の分離及び貯蔵媒体の調製は 、ｌＪ２中のデキストロースが７．０グラムであり、炭酸水素ナトリウムが３グ ラムであることを除いては上記と同様に行なった。比較例しないしＯは発明者の 実験室で行なったわけではなく、他人によって報告されたデータを示している。

この実施例及び比較例のデータは、標準的な血液銀行の方法によって５人の提供 者から採取され処理された全血について行なった試験から得られた。実施例にお いては、１２当り２７０ミリグラムのアデニンを含む好ましい実施例の血小板貯 蔵媒体の１００＋ｓｌ中に赤血球細胞を懸濁した。懸濁赤血球細胞は、６００■ ｌのＦｅｎｗａｌ　ＰＬ−１４６プラスチツクバツグ中に４℃で５６日間貯蔵し た。

この実施例及び比較例において得られた結果は表２２及び２３に示した。

処　タ　タ この実施例及び比較例の結果は、本発明の赤血球細胞貯蔵媒体中で４９日を超え て貯蔵された赤血球細胞は、他の赤血球細胞貯蔵媒体中で貯蔵された赤血球細胞 に比べて、より望ましいＡＴＰ濃度を与え瀉血も少なＩＩＮことを示している。

！１里エユ 実施例１７で用いた全血からの赤血球の分離方法及び貯蔵媒体の調製方法は上記 のものと同じである。

実施例１６について記載した試験では、１２当り３グラムの炭酸水素ナトリウム を含む血小板貯蔵媒体及びＰＬ−１４６プラスチツク容器を用いた。その結果、 貯蔵２８日後の赤血球細胞溶液のｐＨは６．６未満に下がった。

実施例１７においては、実施例１６の方法に従って赤血球細胞を貯蔵したが、薄 いポリ塩化ビニル（ＰｖＣ）プラスチックとジエチルへキシルフタレート（ＤＥ ＨＰ）とから成るテルモＸＴ−６１２血小板容器をＰＬ−１４６容器の代わりに 用いた。さらに、赤血球細胞を、実施Ｗ４１６の場合の半分の厚さで貯蔵し、炭 酸水素ナトリウムを１！当り４グラムに高めた。４０Ｃ）ａｌテルモＸＴ−６１ ２中で用いた赤血球細胞の体積は元の体積の２／３であった。これは、容器の容 積に対する赤血球細胞の体積を、実施例１６において６００＋ａｌのＰＬ−１４ ６を用いたのと同じにする。

テルモ容器の高い００８透過性によって、貯蔵後のｐｔｒが高（維持され赤血球 の品質が高められるか否かを調べるための５つの実験を行なった。テルモＸＴ− ６１２容器を用いた場合のｐＨは６．４２±０．０８であり、ＰＬ−１４６容器 を用いた場合の６．３９±０．０９よりもわずかに高いだけであった。

驚くべきことに、テルモの容器中で貯蔵された赤血球細胞は、ＰＬ−１４６容器 中で貯蔵された赤血球細胞に比べてＡＴＰ濃度が高（瀉血も少なかった。５６日 間の貯蔵後、平均ＡＴＰ濃度は２．５４±０．５７μｍｏｌ／ｇＨｂであり、瀉 血は０．３８±１９％であった。この実施例は、本発明の貯蔵媒体を用いると、 他の市販の保存溶液を用いた場合よりも赤血球細胞を長（貯蔵できることを示し ている。さらに、この実施例は、血小板及び赤血球細胞を同一種類のプラスチッ ク容器中で貯蔵できることを示している。

補正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の７第１項）平成１年３月２２日頃和 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、特許出願の表示　ＰＣＴ／ｕｓ８８１０３２６８３、特許出願人 ４、代理人 ５、補正書の提出年月日 平成２年３月２２日 ６、添付書類の目録 （１）補正書の翻訳文　１通 請求の範囲 １．１２当り約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約３ ．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムない し約４．２グラムの炭酸水素ナトリウムとを含む生理的に適合性を有する電解質 水溶液を含む無菌で、血漿を含まず、等張で、そのｐＨが約６．８ないし約７． ４であり、少なくとも４℃の温度下で少なくとも約４９日間浄血球を保存するこ とができる赤血球細胞貯蔵媒体。

２．１４当り約０．５１グラムのクエン酸及び約０．２６グラムないし約０．２ ８グラムのアデニンなさらに含み、前記デキストロースの濃度が１２当り約７． ０３５グラムであり、前記クエン酸ナトリウムの濃度が１２当り約４．４７１グ ラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度が１４当り約３．０グラムである請 求項１記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

３、前記電解質溶液はｌＪ２当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナ トリウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１ グラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０． ４グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基 性リン酸ナトリウムを含む請求項１記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

４、前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グラ ムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラム の硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含む 請求項３記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

５、ＩＱ当り約０，５１グラムのクエン酸及び約０．２６グラムないし約０．２ ８グラムのアデニンをさらに含み、前記デキストロースの濃度はｌＩ２当り約７ ，２グラムであり、前記クエン酸ナトリウムの濃度は１２当り約４．４７１グラ ムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度はｌＩ２当り約３．０グラムである請 求項４記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

６、ヒト赤血球細胞濃厚物をさらに含む請求項５記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

７．１ｊ２当り約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約 ３．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約０．４グラムな いし約０．６グラムのクエン酸と、約２．０グラムないし約４．２グラムの炭酸 水素ナトリウムと、約０．２６グラムないし約０６２８グラムのアデニンを含む 生理的に適合性を有する電解質水溶液から本質的になり、血漿を含まず、等張で 、そのｐｕが約６．８ないし約７．４であり、少なくとも４℃の温度下で少なく とも約４９日間赤面球を保存することができる赤血球細胞貯蔵媒体。

８、前記デキストロースの濃度は１２当り約７．２グラムであり、前記クエン酸 ナトリウムの濃度はｌＩ２当り約４、４７１グラムであり、前記クエン酸の濃度 はＩＱ当り約０．５１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度は１ε当り 約３．０グラムである請求項８記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

９、前記電解質溶液は１２当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナト リウムと、約０，２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１グ ラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０．４ グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基性 リン酸ナトリウムを含む請求項７記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

１０、前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グ ラムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラ ムの硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含 む請求項９記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

１１、前記デキストロースの濃度は１２当り約７．２グラムであり、前記クエン 酸ナトリウムの濃度はＩβ当り約４．４７１グラムであり、前記クエン酸の濃度 は１４当り約０．５１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度はｌｅ当り 約３．０グラムである請求項１０記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

１２、ｌＩ２当り約５．４グラムないし約７６６グラムの塩化ナトリウムと、約 ０，２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１グラムないし約 ０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの硫酸 マグネシウムと、０．１グラムないし０．６グラムの一塩基性リン酸ナトリウム と、約３．ログラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約３．０グラ ムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムないし約４， ２グラムの炭酸水素ナトリウムと、約０．２６グラムないし約０．２８グラムの アデニンを含む蒸留水から本質的になり、等張で、約６．８ないし約７．４のｐ ｌ（を有する、無菌の、血漿を含まない赤血球細胞貯蔵媒体。

１３、前記デキストロースの濃度はＩＰ当り約２０．ログラムであり、前記クエ ン酸ナトリウムの濃度はｌβ当り約４．４７１グラムであり、前記クエン酸の濃 度は１２当り約０．５１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度はｌβ当 り約３．０グラムである請求項１２記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

１４、前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グ ラムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラ ムの硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含 む請求項１３記載の赤血球細胞貯蔵媒体。

１５．１β当り約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約 ３．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムな いし約４．２グラムの炭酸水素ナトリウムとを含む生理的に適合性を有し、等張 で、そのｐＨが約６．８ないし約７．４である電解質水溶液を調製する工程と、 該溶液に赤血球細胞を懸濁し、少なくとも約４℃の温度下で少な（とも約４９日 間、前記赤血球細胞のがなりの部分を生かしたまま貯蔵する工程とを含む、無菌 の、血漿を含まない赤血球細胞貯蔵媒体中で赤血球細胞を保存する方法。

１６、ｌＩ２当り約（１，５１グラムのクエン酸及び約０．２６グラムないし約 ０．２８グラムのアデニンをさらに含み、前記デキストロースの濃度が１β当り 約７．２グラムであり、前記クエン酸ナトリウムの濃度が１β当り約４．４７１ グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度がｌＩ２当り約３．０グラムであ る請求項１５記載の方法。

１７、前記電解質溶液は１２当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナ トリウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１ グラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０． ４グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基 性リン酸ナトリウムを含む請求項１６記載の方法。

１８、前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グ ラムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラ ムの硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含 む請求項１７記載の方法。

１９、請求項１５に記載された方法による生成物。

２０．請求項１８に記載された方法による生成物。

国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．１ｌ当り約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約３ ．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムない し約４．２グラムの炭酸水素ナトリウムとを含む生理的に適合性を有する電解質 水溶液を含む無菌で、血漿を含まず、等張で、そのｐＨが約６．８ないし約７． ４であり、少なくとも４℃の温度下で少なくとも約４９日間赤血球を保存するこ とができる赤血球細胞貯蔵媒体。 ２．１ｌ当り約０．５１グラムのクエン酸をさらに含み、前記デキストロースの 濃度が１ｌ当り約７．０３５グラムであり、前記クエン酸ナトリウムの濃度が１ ｌ当り約４．４７１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度が１ｌ当り約 ３．０グラムである請求項１記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 ３．前記電解質溶液は１ｌ当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナト リウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１グ ラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０．４ グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基性 リン酸ナトリウムを含む請求項１記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 ４．前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グラ ムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラム の硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含む 請求項３記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 ５．１ｌ当り約０．５１グラムのクエン酸をさらに含み、前記デキストロースの 濃度は１ｌ当り約７．２グラムであり、前記クエン酸ナトリウムの濃度は１ｌ当 り約４．４７１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度は１ｌ当り約３． ０グラムである請求項４記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 ６．ヒト赤血球細胞濃厚物をさらに含む請求項５記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 ７．１ｌ当り約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約３ ．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約０．４グラムない し約０．６グラムのクエン酸と、約２．０グラムないし約４．２グラムの炭酸水 素ナトリウムとを含む生理的に適合性を有する電解質水溶液から本質的になり、 血漿を含まず、管張で、そのｐＨが約６．８ないし約７．４であり、少なくとも ４℃の温度下で少なくとも約４９日間赤血球を保存することができる赤血球細胞 貯蔵媒体。 ８．前記デキストロースの濃度は１ｌ当り約７．２グラムであり、前記クエン酸 ナトリウムの濃度は１ｌ当り約４．４７１グラムであり、前記クエン酸の濃度は １ｌ当り約０．５１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度は１ｌ当り約 ３．０グラムである請求項８記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 ９．前記電解質溶液は１ｌ当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナト リウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１グ ラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０．４ グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基性 リン酸ナトリウムを含む請求項７記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 １０．前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グ ラムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラ ムの硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含 む請求項９記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 １１．前記デキストロースの濃度は１ｌ当り約７．２グラムであり、前記クエン 酸ナトリウムの濃度は１ｌ当り約４．４７１グラムであり、前記クエン酸の濃度 は１ｌ当り約０．５１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度は１ｌ当り 約３．０グラムである請求項１０記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 １２．１ｌ当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナトリウムと、約０ ．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１グラムないし約０ ．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの硫酸マ グネシウムと、０．１グラムないし０．６グラムの一塩基性リン酸ナトリウムと 、約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約３．０グラム ないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムないし約４．２ グラムの炭酸水素ナトリウムを含む蒸留水から本質的になり、等張で、約６．８ ないし約７．４のｐＨを有する、無菌の、血漿を含まない赤血球細胞貯蔵媒体。 １３．前記デキストロースの濃度は１ｌ当り約２０．０グラムであり、前記クエ ン酸ナトリウムの濃度は１ｌ当り約４．４７１グラムであり、前記クエン酸の濃 度は１ｌ当り約０．５１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度は１ｌ当 り約３．０グラムである請求項１２記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 １４．前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グ ラムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラ ムの硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含 む請求項１３記載の赤血球細胞貯蔵媒体。 １５．１ｌ当り約３．０グラムないし約２５．０グラムのデキストロースと、約 ３．０グラムないし約６．０グラムのクエン酸ナトリウムと、約２．０グラムな いし約４．２グラムの炭酸水素ナトリウムとを含む生理的に適合性を有し、等張 で、そのｐＨが約６．８ないし約７，４である電解質水溶液を調製する工程と、 該溶液に赤血球細胞を懸濁し、少なくとも約４℃の温度下で少なくとも約４９日 間、前記赤血球細胞のかなりの部分を生かしたまま貯蔵する工程とを含む、無菌 の、血漿を含まない赤血球細胞貯蔵媒体中で赤血球細胞を保存する方法。 １６．１ｌ当り約０．５１グラムのクエン酸をさらに含み、前記デキストロース の濃度が１ｌ当り約７．２グラムであり、前記クエン酸ナトリウムの濃度が１ｌ 当り約４．４７１グラムであり、前記炭酸水素ナトリウムの濃度が１ｌ当り約３ ．０グラムである請求項１５記載の方法。 １７．前記電解質溶液は１ｌ当り約６．４グラムないし約７．６グラムの塩化ナ トリウムと、約０．２グラムないし約０．４グラムの塩化カリウムと、約０．１ グラムないし約０．４グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラムないし約０． ４グラムの硫酸マグネシウムと、約０．１グラムないし約０．６グラムの一塩基 性リン酸ナトリウムを含む請求項１６記載の方法。 １８．前記電解質溶液は約６．４５グラムの塩化ナトリウムと、約０．３７５グ ラムの塩化カリウムと、約０．２４８グラムの塩化カルシウムと、約０．２グラ ムの硫酸マグネシウムと、約０．３５５グラムの一塩基性リン酸ナトリウムを含 む請求項１７記載の方法。 １９．請求項１５に記載された方法による生成物。 ２０．請求項１８に記載された方法による生成物。