JPH04500209A

JPH04500209A - トポイソメラーゼ阻害剤または細胞分化誘導剤としての五環式トリテルペノイド化合物

Info

Publication number: JPH04500209A
Application number: JP1510077A
Authority: JP
Inventors: リー，ユー―ウエイ; フアン，キ‐チエン; ワン，ゼン―グオ; リ，デ―ワー; クツク，シー・エドガー
Original assignee: リサーチ・トライアングル・インステイテユート
Priority date: 1988-08-24
Filing date: 1989-08-24
Publication date: 1992-01-16
Anticipated expiration: 2013-11-25
Also published as: AU4303389A; EP0431076B1; AU630374B2; CN1041204C; EP0431076A1; DE68909947T2; CN1043131A; WO1990001937A1; KR100187738B1; DE68909947D1; JP2828295B2; CA1330944C; DK31391A; TW225990B; EP0431076A4; KR900701280A; DK31391D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】本発明は、トポイソメラーゼ阻害活性、細胞分化誘導活性および／または抗癌活性を持つ、例えばα−ボスウェル酸アセテート、β−ボスウェル酸アセテートおよびその類縁化合物のような三環式トリテルペノイド化合物に関する。

ＤＮＡ　トポイソメラーゼＩおよび■は、それぞれ−重鎖または二重鎖ＤＮＡを切断する能力および再結合する能力を持っており、その作用によってＤＮＡおよびクロマチンの構造変化を仲介する核酵素である。これらの酵素は、ＤＮＡの位相幾何異性体間の多種類におよぶ相互変換を触媒することができる。その例としては、鎖状連結作用、脱鎖状連結作用、結節作用、脱結節作用がある。ＤＮＡトポイソメラーゼは、復製、転写、組み換えおよび修復を含む多数の基本的な生物学的機能に作用することが知られている（ＧｃｌｌｃＮ、　Ｍ、、　Ａ６１１．　Ｒｅｙ、ＢｉｏＣｈｌ、。

５０、８７９−９１０　（１９ｇ＋）　：Ｌｎｇ、　］、　ｃ、　、　Ａｎｎ、　Ｒｅｖ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、　５４．６６５−６９５トポイソメラーゼは、各種生物学的起源から単離されており、仔牛胸腺、マウス白血病細胞およびヒト白血病細胞がある（Ｍｉｌｌｅｒ、に、Ｇ、ら、１．　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｌｌ、　２５６．９３３４　（１９ｇ７）、ＰｏａｍｉＣｒ、　Ｙ。

ら、８ｉｏｅｈｃｍ、　２４．６４１０　（１９８５））。

細菌のＥ、ｅｏｔｉにおいて、新しいＩ型のトポイソメラーゼ、すなわち、ＤＮＡトポイソメラーゼ■が発見された。この酵素は、他のＩ型酵素と同様、超螺旋ＤＮＡを負方向に緩和する（Ｌｏｇ。

１９８５）。

トポイソメラーゼのメカニズムの重要な特徴の一つは、反応中に、共有結合により蛋白質−ＤＮＡ複合体を形成する性質である。トポイソメラーゼＩの場合、この複合体形成は、この酵素と切断部位の３′末端との間のホスホチロシル結合形成を含んでおり、トポイソメラーゼ■の場合は、このホスホチロシル結合が５′ 末端との間に形成される。言うまでもなく、このように、ＤＮＡの位相幾何（＋ｏｐｏｌｏｇｒ）に対して作用を及ぼしたり、ＤＮＡ＠を切断したり、再結合したりすることを通じて、トポイソメラーゼは多数の基本的細胞過程に関わっている（ｖｏ＋ｂｅｒｇ、　Ｈ，Ｐ、、ｒ微生物学および免疫学における最近の話題（Ｃｕ　ｒｒｅｎｔ　Ｔｏｐｉｃ＋　ｉｎ　Ｍｉｃ＋ｏｂｉｏｌｏｇ７　ｓａｄ　１ｍｍａｎｏｌｏｇ７）Ｊｐ、１９．　Ｓｐ＋１Ｂｅｒ　Ｖ＋ｒｌＢ、Ｂｅｒｌｉｎ（１９８５）；Ｗｌｎｇ、Ｊ、Ｃ，、Ａｏｎ、Ｒｔｔ。

ｆｌｉｏｃｈｃｌｌｌ、、５４，６６５−６９５（１９８５））。

したがって、トポイソメラーゼの酵素活性を調節することができる薬剤を開発できたならば、それは、遺伝子発現の操作や、癌に対する化学療法にとって相当に有益なものとなるであろう。

２、癌化学療法におけるＤＮＡトポイソメラーゼ１９８０年以来、ＤＮＡ）ポリメラーゼは、癌化学療法の分野においてかなり有望な標的酵素として浮かび上がってきた。以前、ドキソルビシン、ダウノルビシン、アムサシン（−人ＭＳＡ）、ミドキサントロンのような抗癌剤は、ＤＮＡに挿入することによってＤＮＡポリメラーゼおよびＲＮ　Ａポリメラーゼの規則的な作用の進行を阻止して働くのだと考えられていた。しかしながら、この考えでは、各種の挿入剤（ｉｎｔ＠＋ｃ１１ｘｌｉａｇ　＋ｇｅｎ口）間の効能差を完全に説明できないし、また、細胞がこれらの薬剤の作用にさらされるとなぜＤＮＡが切断されるのかも説明できなかった。さらに、エピポドフィロトキシン（ＥＰＰ）、エトポシドおよびテニポシドのような抗癌剤は、ＤＮＡ中に挿入しない。現在では、これら薬剤は、細胞の核酵素ＤＮＡトポイソメラーゼと相互作用を持つことによって、細胞を実際に殺すのである、と考えられている（Ｔｅｖ＜７．　Ｋ、　Ｍ、ら、１．ｏｌ　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｓ、。

急速に証拠が増えてきて明らかになってきたことであるが、トポイソメラーゼエと■は、「切断可能な複合体」を形成することによって、それぞれＤＮＡ複製や遺伝過程において重要な機能を担っているらしい。したがって、トポイソメラーゼの阻害、または、トポイソメラーゼ−ＤＮＡの「切断可能な複合体」の安定化は、その細胞において一種のＤＮＡ損傷と解釈されてもよいであろう。この損傷はさらに、その細胞の側にこの切断可能な複合体を処理しよう、修復しようという努力を誘発させることになり、したがって蛋白質分解酵素を活性化させることになり、しかもその発現は致命的であるため、最終的には細胞の死を招くことになる（ＬｉＩｌ、Ｌ、、Ｎｔｔｉｏｎｚｌ　Ｃｇｏｃｃｒ　ＩｎｓｔｉｔＩｌｔｅｌｎｏｇ＋ａｐｂ＋　（１９ｇ？）ｌ。

ａ、トポイソメラーゼＩ阻害剤トポイソメラーゼエは、最近の薬剤開発分野において、かなり興味を集める標的酵素となっている。例えば、カンプトテシン（ＣＭＴ）は、　ｉｎ　ｙｉｌ＋０で、各種動物およびヒト腫瘍細胞系においてＲＮＡおよびＤＮＡ合成を抑制することが明らかにされている（Ｂｅｎｉｇｎ、　Ｈ，Ｂ、　、　８ｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈ７ｓ、　Ｒｅｄ、Ｃ０ＩＩＩＩＩＩＱ、　、　４１．１４１２（１９７０）　；　ｆｌｏｔｗｉ口」、Ｓ、と）Ｉｏ＋ｖｉｌ＋、　Ｓ、　Ｂ、　、　ＢｉｏｅｈＣｍ、　Ｂｉｏｐｂｙ＋、　Ｒｅｉ。

ＢｈｕＨｎ、　Ｂ、　Ｋ　ら、Ｃ５ｎｃｃ：　Ｒｅ１．　、３３．８Ｈ（１９７３）　＋Ｄｒ＋ｖｉｎｋｏ、　Ｂ　ら、Ｃｇｏｃｃｒ　Ｒｅｓ、、３４．７４７（１９７４））　ｏまた、ｉｎ　ｙｔｔｏでも同様の性質が明らかにされているｆＧｌｌｌｏ、　Ｒ，Ｃ，ら、Ｉ、Ｎ５ｌｉｏｎｘｌ　Ｃ１ｎｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ、　４６．７８９　（１９７１）　：Ｎｅ１ｌ、Ｇ、　Ｌ、ら、Ｃｌ０ｃｅｒ　Ｒｅｄ、べ１３．　ＵＳＦ＋９７３１）。核酸合成の抑制、ＤＮＡ鎖の切断およびｉｎ　ｙｉｖｏでの抗腫瘍活性の間によい相関が認められているが、このことから、ＤＮＡに対する作用こそが細胞毒性の主要決定因子と結論されるに至った。

治療上の用量比を改善したＣＭＴ誘導体の可能な使用について最近関心が高まっているが、この関心の高まりによりて、その細胞毒性の様式に関するさらに広範な研究が展開されるに至によれば、ＣＭＴは、トポイソメラーゼエとＤＮＡとの切断−再結合反応の再結合段階をブロックするという。ＣＭＴは精製されたＤＮＡを切断しないが（Ｉｌｏｒｖｉｌｘ、　Ｍ、　Ｓ、とＨｏ＋ｖｉｔｘ、　Ｓ、　Ｂ、。

イソメラーゼＩの存在下ではＤＮＡの部位特異的な切断を誘発したＣＣｘ！１ｏｒ１．　Ｆ、　１．とＫｅｌｌｃ７．Ｗ、Ｇ、、Ｐｒｏｃ、Ｎ８ｔ１．＾ｅａｄ、　Ｓｃｉ、　８３゜１６８０　（１９８６１１゜一方、このトポイソメラーゼＩは、切断されたＤＮＡ鎖の３′末端に結合する（Ｈ＋ｉｘｎｇ、　Ｙ、　Ｈ，ら、Ｌ　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅａｐ、　。

２６０、＋４８７３（１９８５））。ＤＮＡ！ｄｉ切断の誘発は瞬間的であり、薬剤除去または０．５Ｍ塩とのインキュベーションに対して可逆的であった。ＣＭＴは、−重鎖であれ、二重鎖であれ、ＤＮＡ内には挿入されなかった。ＣＭＴは、精製された哺乳類トポイソメラーゼ■を介してＤＮＡ切断を誘発せず、また、この酵素の触媒活性も抑制しなかった（Ｌｉ！口ｇ＋　ｙ、　Ｉｌ、ら、Ｉ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｂｅｌｌ、　。

２６０、１４８７３　（１９８５））。これらのデータから次のことが明らかである。すなわち、ＣＭＴは、哺乳類トポイソメラーゼエを特異的に阻害すること、また、その細胞毒性作用は酵素とＤＮＡとの間の切断可能な複合体の安定化を起こし、その結果核酸合成の阻害やＤＮＡ鎮切断の誘発が生じることで説明できること、で最近、臨床的に効能のある多数の抗腫瘍剤が、真核細胞由来の精製ＤＮＡ！−ポイソメラーゼ■によって、ＤＮＡ切断を促進することが明らかになった（Ｎｅｌｓｏａ、　ＥｏＭ、ら、Ｐｒｏｃ、　Ｎｅ口、Ａｃｔｄ。

ｆｓ、　Ｒｅｄ、　Ｃｏｇ＋ｍａ＋＋、　、　１２２．１６５（１９８４））。

例えば、挿入性のアミノアクリジン誘導体、即ち４’　−（９−アクリジニルアミノ）メタンスルホン１−アニシド（ｌ−ＡＭＳ＾）は、２０μｍ７ｍ１の濃度の、哺乳類ＤＮＡトポイソメラーゼ■によるＤＮＡ切断を著明に刺激する（Ｎｓｌ＋ｏｎ、εＪ、ら、ＰｒｏＣ，Ｎｒｔｌ、　Ａｃ１ｄ、　Ｓｅｉ、σＳＡ、Ｈ，Ｈ６１（１９８４１゜Ｒｏｖｅ、　Ｔ、　Ｃ，ら、Ｃｌ０ｃｅｒ　Ｒｅｄ、、４６．２０２１１９８６））　ｏ他の、挿入性および非挿入性抗腫瘍剤においても、この中にはアドリアマイシン、５−イミノダウノルビシン、エリブチシン、２−メチル−９−ヒドロキシエリブチシンおよびエピポドフィロトキシン、ＶＰ −１６およびＶ　Ｍ　−２５が含まれるが、ｉｎｉ目ｒＯで同様な作用を示した（Ｒｏｓ＋、Ｗ、ら、Ｃｘｎｅｅｒ　Ｒｅｄ６，４４．５８５７　（１９８４）：Ｍｉｎｏｃｈ墓、。

ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍ＋＋ｎ、　、　１２２．１６５　（１９８４）　；Ｔｅｖｅ７．　Ｋ、帽ら、］、ｏ［Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、２５９．９１８２　（１９８４１）　；Ｔｅｖｅ７．に、Ｍ、ら、５ｃｉｅｎｃｅ、　２２６．４６６　（＋９８４ｂｌ　；Ｃｂｅｏ、　Ｇ、　Ｌ、ら、１．Ｂｉｏｌ、Ｃｂｅｍ、、２５９゜Ｈ５６０（１９１１４）ｌ。このトポイソメラーゼ仲介性のＤＮＡ切断は、Ｌｉ１１のグループによって直接証明された。すなわち、彼らの所見によれば、薬剤によって、変性された酵素は切断部位の５′末端に共有的に結合させられる、という。

近縁の薬剤集団について構造−活性関係を調べた結果、挿入剤およびＥＰＰのいずれも、この酵素と直接の相互作用を持つこと、また、切断可能な複合体の形成を促進すること、を裏付ける強力な証拠が得られた（Ｓｉｌｂｕ、Ｒ，ら、Ｎ１口、　Ｃｕ＋ｃｅ＋Ｉｎ５ｌＮｌｌｉｅ　１１ｏｎｏｇｒｘｐｋ＋　４．１１１１９８７））　ａさらに、細胞毒性と、ｉｎ目マＯおよびｔｏ　ｙ；ｔｒｏにおける切断可能な複合体形成能との間には、優れた相関が見られた（　Ｒｏｖｅ、丁、Ｃ１ら、Ｃｔｎｃｅｒ　Ｒｅｄ、。

４６、２０２１　（１９８６）　：Ｌｏａｔ、　Ｂ、　Ｈら、Ｂｉｏｃｂ＋ｍｉ −＋ｔＢ、　２３．１１１１３　（１９８４）　：Ｂｉｏｅｈｔｉｉｔｔ＋７．２０．６５５３　（１９１１１）　；Ｎｅｌ＋ｏｎ、Ｅ、　Ｍ、ら、Ｆｒｅｅ、　Ｎｕｌｌ、　Ａｅｘｄ。

Ｓｃｉ、ＵＳＡ、８１．１３６１［９８４））　。

これらトポイソメラーゼ仲介性のＤＮＡ破壊が、この薬剤の細胞毒性の原因であろうと考えられている。

３、癌化学寮法における細胞分化癌は、細胞分化の異常と考えるこきができる（　Ｐｌｅｒｃｅ、　Ｇ、ら、「発生生物学の問題（Ａ　Ｐｒｏｂｌｅｍ　ｏｒ　Ｄｅｗ＋ｉｏｐ＠＋ｎ口Ｉ　Ｂｉｏｌｏｇｆ）Ｊ、εＢｌｅｒｏｏｄ　ＣＣ１１ｎ、　ＰｒｅｎＩＩｃｅ　）ＩＪＩＩ、　ｌ９７８：Ｇｒｅｚｙｅｓ、　Ｍ、　Ｆ、、　Ｌ　ＣｅｌｌＰＭ日ｏｆ、、１，１１３−１２５（１９８２））。癌は血液新生物によって容易に説明することができる。癌性変換は、増殖能はそのままで分化が停止してしまうことと定義されているが、これは、中間成熟段階ではどこでも起こり得る。したがって、成熟を停止した細胞が増殖を続け、未成熟の「癌」細胞集団が出現し、悪性の臨床症状を引き起こす（Ｂｌｏｅｂ、　Ａ、　、ｒ癌治療報告（Ｃｘｎｃｃ＋Ｔ＋＋＊Ｉｍｅｎｔ　Ｒｅｐｏ＋１＋）　Ｊ　、６８．１９９（１９８４））。

正常の条件では、増殖と成熟は、成長因子（ＧＦ）と分化誘導因子（Ｄ　Ｆ）によってそれぞれ調節されている。新生物細胞は、これらの因子に対する細胞の感受性を変化させる事象の中から生まれるのかもしれない。この変化が、必然的結果として、ＧＦに対する感受性を増し、ＤＦに対する反応性を低下させ、宿主によるＤＦ産生を減少させ、および新生物細胞自体によるＧＦの内因性産生を導くのであろう（Ｔａｄａｒｏ、　Ｇ、　１．、　Ｆｅｄ、　Ｐｒｏｃ、。

±！、２９８７　（１Ｎ２ン）。

臨床的に有効な抗癌剤のほとんどすべてが、ＤＮＡ合成すなわち転写の阻害剤である（Ｂｌｏｃｈ、Ａ、、ｒ瘍療法の最前線：癌化学寮法におけるプリンとピリミジン類縁物質（ＰＩｌ＋ｉｎｅ　■ｄＰｙｒｉｉｉｄｉｎ＋　Ａｎｘｌｏｌ　ｉｎ　Ｃ５ｏｃ＋ｒ　ＣｈｅａｏｊｈｅｒｉｐＹ　ｉｎ　Ｎｅｗ　Ｌｅｓ＋Ｉｔ　ｉｎＣ！ｏｃｅｔ　Ｔｈｅｒｓｐｅｏｆｉｃｓ）　Ｊ　、（Ｅ、Ｍｉｈｉｃｈ編）、Ｂｏｓｔｏｎ、Ｇ、に、　１ｌｓｌｌＩａｄ　ＣＯ，、１，９８１，Ｈ，６５−７２）　、　Ｄ　Ｎ　Ａを標的とする薬剤に抗腫瘍活性があるのは、その薬剤が、癌性分化の停止段階を過ぎた感受性癌細胞の成熟を誘導する能力をもっためであって、そのため癌細胞の無制限な増殖能力が取り除かれるのだとする説が最近の研究の中で取り入れられている（　Ｔｉｋｅｄｘ、　Ｋ、ら、Ｃ＊ｎｅｔ＋Ｒｅｓ、、４２．５１５２−５１５８（１９８２）　）　、これらの研究ではっきりと示されたことは、ダウノルビシンやシタラビンのようなりＮＡ特異的阻害剤のみが各種骨髄性白血病細胞系の分化を有効に誘導することができる、ということである。

４、ボスウェル酸（ｂｏ＋ｖ！１ｌｉｃ　ｔｃｉｄ＋）乳香（Ｏ１ｉｈ＊ｎｕａ＋）は、８ｓｒ＋ｅｒｔｅｅｔｅ属の仲間によって作られる高価な樹脂であるが、これは、番料産業の分野で広く用いられている。また、これは宗教的な目的や、民間療法において炎症や関節炎を含むいくつかの病気治療に用いられている（中国薬草辞典、１．Ｈ）Ｇ−１３８１（１９７７）　；Ｙｘｄｓマ、　Ｄ、　Ｓ、ら、インド薬学会、「医化学」会議に提出された論文抄録集、２月、１９８５）。化学試験の結果、このものは、多数の化合物を含んでいることが判明した。

その中には、α−ボスウェル酸、β−ボスウェル酸、アセチルα−ボスウェル酸や、その他のトリテルペノイドカルボン酸、および大環状ジテルベノイド（例えば、インセンツール、酸化インセンツール、酸化イソインセンツール）が含まれる（Ｗｉａｔｅ＋５ｔｅｉｎ、人、ら、Ｐｂ４ｓｉｏ１．　Ｃｈｅａ、　、　２０ｇ、　９（１９３２）　；Ｃｈｅｗ。

Ａｂ＋１＋、　、　２６．４３２Ｈ１９３２１；Ｓｉｍｐ＋ｏｎ、　］、　ｃ、　Ｅ、ら、Ｊ、　Ｃｈｔｍ、　Ｓｏｃ、　、　６８６（１９３８）　：Ｂｅｔｏｎ、　Ｌ　Ｌ　ら、Ｌ　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｅ、　、　２９０４　（１９５６）　；Ｃｏ＋５ａｎｏ、　Ｓ。

ら、Ｔｅｌ＋５ｈｅｄ＋ｏｎ、　２３．１９７Ｎ１９６７）　ＨＮｉｃｏｌｓＮ１ｃｏｌｅＮｉｏｒｃｅｌｌｅｔｅ。

−　Ｌ　４丁ｅｌｒｍｈｓｄｒｏａ、２４．６５１９　（１９６８）；Ｎ１ｅｏｌｓｌ目、Ｒ，、Ｆｏｒｃｅｌｌｅｔｅ。

ＭＬ６およびＰｅｌ＋！＋ｉ、Ｕ、、丁＋ｔｒｔｈｅｄ＋ｏａ、　２８．３２５　（１９７２）、　Ｎ１ｃｏｌｅＮｉ。

Ｒ，、５ｇｎ１ｌ＋ｅ１１ｉ。Ｃ０およびＦｏｒｃｅｌｌｅｔｅ、１１．Ｌ、、Ｔｅｌ＋５ｈｅｄ＋ｏｎ　Ｌｅｌｔ、。

３７８３　（１９７３＋　）。現在報告されているところによれば、このものの抗炎症活性や抗関節炎活性は、β−ボスウェル酸やその他の関連トリテルペノイドカルボン酸が存在するためだとされて０る（Ｙｘｄｘマ、　Ｄ、　Ｓ、ら、インド薬学会、「医化学」会議に提出された論文抄録集、２月、１９８５）。こういつた活性があるにもかかわらず、現在までのところ、トリテルペノイド化合物が全てのトポイソメラーゼを阻害したり、あるいは細胞分化を誘導したりすることができる、といったことを認知したものは誰もｔｌない。

したがって、本発明の目的の一つは、トポイソメラーゼエをｉｎ　ｖＮ＋ｏおよびｉｎ　ｖｉｖｏで阻害することのできる組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、トポイソメラーゼ■をｉｎマＮｒｏおよびｉｎ　ｖ口０で阻害することのできる組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、細胞分化を、特に、癌性分化の段階を過ぎた細胞の分化を誘導することのできる組成物を提供することである。

さらに本発明の別の目的は、トポイソメラーゼＩをｉｎマｉｔｒ。

およびｉｃｖ目０で阻害する方法を提供することである。

本発明の別の目的は、トポイソメラーゼ■をｌｆｉ日ＩＩＯおよび１０マ１マＯで阻害する方法を提供することである。

さらに本発明の別の目的は、癌性分化段階を過ぎた細胞分化を誘導する方法を提供することである。

本発明の別の目的は、各種の癌を治療するための組成物を提供することである。

本発明の別の目的は、各種の癌を治療するための方法を提供することである。

本発明の上記の目的およびその他の目的は、以下において直ちに明らかになるように、次の発見によって実現されたものであった。すなわち、ある種の三環式トリテルペノイド化合物、（例えば、α−ボスウェル酸、β−ボスウェル酸、アセチルα−ボスウェル酸、これらの化合物の他の誘導体）がトポイソメラーゼＩおよびトポイソメラーゼ■に対する阻害能力を持っていること、ｉｎ　ｙｉｔｒｏで細胞分化の誘導能力を持っていること、さらに、おそら（ｉｎ　ｖｉｖｏでも同様の能力を持っていることが予想されること、に基づいている。重要なことであるが、これらの分子をベースとする組成物が、腫瘍をもつマウスにおいて強力な抗癌活性を持つことが証明された。この結果、この抗癌活性は、ヒトを含む他の哺乳類でも期待されるものである。

図面の簡単な説明下記の詳細な記述を参照することによって、添付の図面と関連させて考えていけば、本発明をより完全に理解することができ、また、本発明から派生する利点についてもその多くを簡単に把握することができるであろう。その図面の中には、次のものが含まれる。

第１図は、α−ボスウェル酸アセテート（Ａ−１）、α−ボスウェル酸（Ａ−２）、β−ボスウェル酸アセテート（Ｂ−１）およびβ−ボスウェル酸（Ｂ−２）の構造を示す。

第２図は、Ｘ線結晶回折像によって明らかにされた、結晶状態のβ−ボスウェル酸アセテートの構造を示す。

第３図は、本発明のトリテルペノイドの一般構造を示す。ここでは、Ｒ１−Ｒ７が特定されている。

第４図は、Ｂｏｔｖｃｌ１口ｃｉ＋＋＋＋ｉｉ　Ｂｉ＋ｄｖのｏｌｅｏｇａｍ樹液からの分離スキームを示す。

′Ｍ５図は、トポイソメラーゼＩによるＤＮＡ緩和のゲル電気泳動分析の結果を示す。

稟６図は、トポイソメラーゼ■によるＤＮＡ脱結節（ｕｎｋｎｏ目ｉＢ）のゲル電気泳動分析の結果を示す。

本発明の好適実施態様中国の薬草Ｔｉ■−３ｈｉｔｎ−Ｗｉｎは、中国の臨床研究によれば、抗腫瘍活性を持つという。この天然物の複雑な混合物の中に存在する個々の化学物質についての情報は無く、また、その混合物のどの部分が報告される抗腫瘍活性を持つのかについても知られていない。この活性を確認し、言われている臨床所見に対する生物学的、および生化学的基礎を与える目的で、この薬物サンプル（天然起源の混合物から調製したもの）から抽出し、各面分に分離した。

慢性ヒト白血病細胞から精製したトポイソメラーゼＩに対して、これらの両分をテストしてみると、ただ１画分においてのみ、強力な阻害活性が認められた。この画分をさらに精製すると、結晶状の物質が得られ、これは、ＨＰＬＣにより、２個の異なる化合物から成ることが判明した。マススペクトル分析によりこの２個の化合物は異性体であり、その分子式はＣ３２Ｈ５０ｏ４であることが判明した。

この結果と、中国薬草医学文献の知識とから、この二つの化合物がそれぞれα− およびβ−ボスウェル酸のアセテート（第１図のＡ−１、Ｂ−４）であると推定された。

次に、上記２種の化合物を含む、Ｂｏ＋ｖｅｌｌｉｓ　ｃｉｒ＋ｅ＋ｉｔ　Ｂｉ＋ｄｖの樹液を得、その化合物を第４図に示した通りに単離したところ、Ｔｉａｎ−３ｈｉａｎ−Ｌｍから得た物質と同一物であることが判明した。この化合物の構造を、マススペクトル分析によりて決定した。マススペクトル分析では、分子式が得られ、また、他の特徴的なピークの他に、非常に特徴的な逆ディースル・アルダ−フラグメントのピークが得られた。二次元炭素−水素相関スペクトルや炭素−１３ＮＭＲスペクトルの測定を含むＮＭＲスペクトルの結果も、先に示した構造と一致するものであった。Ｘ線結晶回折分析でも、β−ボスウェル酸アセテートの構造が確認された。さらに、α−ボスウェル酸アセテートの二次元Ｎ　Ｍ　Ｒ（２Ｄ−ＮＭＲ）は、Ａ−１構造と一致した。α−およびβ−ボスウェル酸アセテートの両方について、Ｈ目ｓａｇら＜１９８５１の方法にしたがってトポイソメラーゼエおよびトポイソメラーゼ■に対する阻害能を調べた。この両物質が芳香族構造を持たないという点できわめて驚くべきことであるが、これらのボスウェル酸アセテート異性体は共に、トポイソメラーゼＩおよび■に対して高度の活性を持つ（第５．６図参照）。トポイソメラーゼＩ阻害活性分析では、この二つの中では、α異性体Ａ−４の方が活性が高く、標準化合物（カンプトテシン）よりも強力である。異性体Ａ−１およびＢ−１は、トポイソメラーゼ■阻害では同等の強さであり、肺小細胞癌、曇丸癌、リンパ腫、白血病に対して１明な臨床活性を示す（０’　Ｄｖｙｅｒ、　Ｐ、ら、「エトポシド（ＶＰ−１６− ２１３）　、活性抗癌剤の現状（Ｅｌｏｐｏｓｉｄｅ　ｆＶＰ−１６−２Ｈ）。

Ｃｕｒ【ｅｎｔ　５ｔｒｕｔ　ｏｆ　＊ｎ＾ｃ＋ｉｙｅ　Ａａローｃ■ｃｅｒ　ＤｎＢ）　Ｊ　、１ｌｅｖＥＢ１．１．１１ｃｄ、　３１２，６９２−７００（１９８５））標準化合物として１７）　ＶＰ−１６−２１３（エトポシド）よりも強力である。

中華人民共和国、北東、薬物研究所でこの化合物について調べられたが、その研究でも、この化合物が、１０ｕｇ／ｍｌの濃度でＨＬ−６０細胞において分化を誘導することが明らかにされた（実施例４参照）。

さらに重要なことは、これらのｉａ　ｔｉｔｒｏ活性は、薬物研究所での動物実験と一致していることであって、その実験では腫瘍（Ｌ−１２１０）をもつ１０匹のマウスの内４匹が生き残ったが、対照群のマウスの方は全部死亡した（実施例５参照）。

既に述べたように、ボスウェル酸化合物は、医学上重要な利点をもたらす、これまで報告されていない三つの性質を持っている。それは、トポイソメラーゼＩの阻害、トポイソメラーゼ■の阻害および細胞分化誘導能である。この三つの性質はいずれも、抗腫瘍剤においては重要である。

細胞内におけるトポイソメラーゼの存在およびその性質については比較的最近発見された。細胞の成長、複製および機能においてＤＮＡの転写、組み換えおよび修復がきわめて重要であることを考え合わせると、トポイソメラーゼについてもつといろいろなことが分かるようになれば、トポイソメラーゼ阻害剤の他の可能な応用も見いだされるようになるだろう。

本発明の化合物は、その特徴が非芳香族性であることで、この酵素に対する既知の阻害剤とは際だって異質である。さらに、既に示したように、本発明の化合物は、カンプトテシンやｖＰ−１６よりも強力である。したがって、本発明の化合物は、新規の構造形を表わし、ゆえに、現在既知の化合物の毒性副作用の内のあるものを持たない可能性がある。このことは、学問的にもまた実用的にも重要で且つ予期せぬ発見である。

以上まとめると、本発明に基づいて、思いがけず次のことが発見された。すなわち、α−ボスウェル酸アセテート、β−ボスウェル酸アセテートおよびそれらの類縁体は、トポイソメラーゼＩおよび■の強力な阻害剤であること、また、低濃度で細胞分化を誘導できること、である。本発明は初めて、三環式トリテルペノイドがトポイソメラーゼｌおよび■に対して強力な阻害活性を持っていること、また、細胞分化誘導特性を持っていること、を明らかにした。

本発明のトリテルペノイドは、第３図のＣおよびＤ構造を持つ化合物から成る。

ここで、Ｒ１は、−ＣＯＯＲ’であり、Ｒ４は、モノ−、ジー、もしくはトリーサツカライド；−Ｈ；Ｃアルキル；Ｃアルケニル：Ｃ３−４アルキニル；Ｃアリールであり、Ｃ６−８アリールは、置換されていないか、または、ハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミハモノーもしくはジー０１−４アルキルアミハモノーもしくはジ−アセチルアミノ、Ｃアルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されている。

あるいは、Ｒ１は、−ＣＯＮＨ、−ＣＯＮＨＲ５または−ＣＯＮ　Ｒ５ｔであり、ここでＲ５は、モノ−、ジーもしくはトリーサッカライＦ；−ＣＨ；−ＣＨＣ００Ｈ；− ＣＨ２Ｃｌ（２ＣＯＯＨ；Ｃアルキル；Ｃアルケニル、Ｃ２−８アルキニル；Ｃアリールであり、Ｃ６−１アリールは、置換されていないかまたは、ハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミハモノーもしくはジ−０１４アルキルアミハモノーもしくはジ−アセチルアミノ、Ｃアルキル、もしくはＣ２−４アルケニルによって置換されている。また、Ｒ２とＲ３は、水素またはＲ５と、− Ｈ，−ＯＲ’　。

−ＮＨ、−ＮＨＲ、−ＮＨＲ、−０ＣＯＲ５またｌｔ−ＮＨＣＯＲ５との組み合わせであってもよい。ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。

あるいは、Ｒ２とＲ３は、−緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ’であってもよい。ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。また、Ｒ６とＲ７は、水素またはＲ５と、− Ｈ，−ＯＲ’　。

−ＮＨ、−Ｎ）ＩＲ、−ＮＨＲ、−０ＣＯＲ５ｔたｌｔ！＋５ −ＮＨＣＯＲ５との組み合わせであってもよい。ここで、Ｒ４とＲ５は、上に定義した通りである。

あるいは、Ｒ，Ｒ７は、−緒になって、＝０または−Ｎ−ＯＲ’であってもよい。ここでＲ４は上に定義した通りである。

Ｃ１−４アルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、５ｅｅ −ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルを挙げることができよう。Ｃ２−８アルキルとしては、さらに、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチルを挙げることができょう。Ｃ２−４アルケニルとしては、エチニル、１−プロペニル、２−プロペニルを挙げることができよう。Ｃ２−８アルケニルとしては、さらに、１−ペンテニルを挙げることができよう。類似のアルキニル基も考慮の対象となる。

アリールについては、フェニル基、ハロゲンで置換されたフェニル基、ＯＣ＋　 −４−アルキル、スルホンアミド、アミ八Ｃ１−４−アルキルアミノまたはアセチルアミノを挙げることができよう。

七ノー、ジーもしくはトリーサツカライドについては、グルコシル、ガラクトシル、フラクトシル、その他類似のものを挙げることができよう。

Ｒの好ましい基としては、−ＣＯＯＨ，−ＣＯＯＣＨ３゜−ＣＯＯＣ２Ｈ５，− ＣＯＮＨ２がある。

Ｒ３が−ＨであるときのＲ２の好ましい基としては、−Ｒ２−ＯＨ、ＯＡ　ｃ　、ＯＣＯＣ２Ｈｓ　、−Ｎ　ＨＡ　ｃがある。

Ｒが−Ｈの時は、Ｒ３は−Ｈ，−ＯＨ，−０Ａｃ。

−ｏＣＯＣ２Ｈ５または−ＮＨＡｃであることが望ましい。あるいは、ＲＲが＝Ｃ１，＝ＮＯＨ，−ＮＯＣＨ３であることが好ましい。

ＲとＲにとって好ましい基は、Ｒ２，Ｒ３のものと同じである。

好ましい組合せは次のものである。すなわち、Ｒ１が−ＣＯＯＨか−ＣｏＯＣＨ３であり、Ｒ２かＲ３のどちらかが−ＨＴ、もう一方力−ＯＨ、、、−ＯＡ　ｃ　、　−ＯＣＯＣ２Ｈ５または−ＮＨＡｃであり、かつ、Ｒ’　＝Ｒ７＝−Ｈである。

−ＣＯＯＣＲであり、Ｒ２かＲ３のどちらか一方が−Ｈで、モラ一方カーＯＨ、ＯＡ　ｃ　、ＯＣＯＣ２Ｈｓまたは−Ｎ　ＨＡ　Ｃであり、Ｒ６かＲ７のどちらか一方がＨで、もう一方が一〇〇、−０Ａｃまたは一〇　〇　〇　Ｃ２Ｈｓである。

また好ましい組合せとして、Ｒ１が一〇〇ＯＨか−ｃｏｏｃ１１であり、Ｒ２かＲ３のどちらかが−Ｈで、もう一方が一〇Ｈ。

または”　Ｎ　ＯＣＨ３である。

特に好ましい組合せとしては、Ｒ１が−ＣＯＯＨか−ＣＯＯＣＨｔＪ５す、Ｒ３ｂ＜−Ｈであ１）、Ｒ２ｆ）＜　−ＯＨ，。

−ＯＡ　ｃまたは一〇〇ＯＣＲであり、Ｒ６とＲ７が−ＨＲが−ＯＨ，−０Ａｃまたは−０ＣＯＣ２Ｈ５であり、Ｒ。

ＲおよびＲ７がＨである。

ここで、ハロゲンは、好ましくは、Ｃ１，Ｂｒ、■もしくはＦであることを意味する。

さらに本発明の範囲に含まれるものとして、上記の記載内容の範囲内の塩形成可能な化合物の医薬上許容可能な塩がある。。

特に、陰・イオン基がその分子上にある時には、既知の、医薬上許容可能な陽イオンであれば、どのようなものでも、それと結合しＣよい。したがって、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニアを含む四級アミン塩を用いることができる。ナトリウム塩およびカリウム塩を用いるのが好ましい。

さらに、陽イオ゛／を形成することのできる基がその分子とにある時は、医薬上許容可能な陰イオンであれば、どのようなものでも、それと結合してよい。そのような陰イオンの例としては、アセテート、アスパルテート、ベンゾエート、フマレート、エタンスルホネート、塩化水素、ラクテート、オキサレート、トシレート等がある。これらの塩の内、単純な無機塩、例えば、ハロゲン水素塩が好ましい。

本発明はまた、本明細書中に開示された活性化合物に類似の薬剤前駆体化合物にも関する。そのような化合物は一般にそれ自体は不活性であるか、または活性が低いが、ＩＩｌ！目Ｏで、活性化合物に変換される。したがって、例えば、それ自体は活性を持たないか、または活性のきわめて低い、任意の酸官能基のメチルエステルのような薬剤前駆体が、非触媒的に、または、エステラーゼのような酵素によって触媒的に加水分解され、ボスウェル酸のような活性化合物に変わることもあり得る。この上うな薬剤前駆体化合物も、本発明化合物の好ましい治療形態であり得る。このような類縁の薬剤前駆体化合物は、当業者に既によく知られている手法や要素にもとづいて、活性化合物から生産する二とができる。１．たがって、本明細書中で用いられでいる「薬剤前駆体化合物質」とは、「比較的無毒性であって、薬理学的には不活性であるが、ｉｎ　ｖｉｖｏで薬理学的に活性を持つ薬剤に変換される化学物質」を指す（Ｃｏ＋ｕｏｒｔ、　Ｔ、Ａ、。

Ｉｅａｏｂｉｏｌｉｃｓ、　＋６：９７５．　（１９１１６））。さらに特定的にいうと、それは、本発明のトリテルペノイドの誘導体または類縁物質であって、トポイソメラーゼエまたは■を阻害する能力、または細胞分化を誘導する能力、または癌細胞を死滅させる能力は比較的低いかもしくは全然持たないが、生体内で変換されて初めて、そのような能力を持つようになる誘導体または類縁物質を指す。このような薬剤前駆体化合物は、いくつか好都合な性質を備える必要がある。例えば、増強された吸収性、水溶性、低毒性、腫瘍細胞に対する良好な照準性（１＋Ｂｅｌｉｎｇｌ　（これは、例えば、腫瘍細胞に対して親和性が窩いか、または、腫瘍細胞では、正常細胞とは違って、活性化酵素の量が多いために、より高濃度の活性化合物が産生されるためである）である。このような化合物の例としては、メチル、エチル、フェニル、Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノエチルのようなエステル：ベンゾイル、ｐ−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノベンゾイル、Ｎ、Ｎ− ジメチルアミノグリシルのようなアシル誘導体：γ−グルタミル、グリシル、Ｄ −Ｖ！１−Ｌｓａ−Ｌ７＋のようなペプチド誘導体（Ｃｂｘｋ＋ｚｖｘ＋１７．　Ｐ、　Ｋら、ＪＭ＋ｄ、Ｃｂｓｍ、、２６：６６３（１９８３））　；またはグルクロニドのようなグリコシド誘導体［Ｃｏ−ｎｎｏ＋＋、　ＴＡ、とＷｈｉ＋ｓｏｎ、　１４．　、　！１ｘｔｕ＋＋２１０：８６６（１９６６＋１　がある。

エステル化反応、加水分解反応、カルボン酸やエステルのアミド化反応、酸化反応、還元反応または有機金属（例えば、グリニヤール反応）反応のような標準手法を用いると、置換基Ｒ■、Ｒ２およびＲ３の形成に導く。アリル位を酸化もしくは臭素化して、Ｒ６とＲ７がＨもしくはＯＨ，ＨもしくはＢｒ；または＝０である化合物を生成し、その後で、酸化、還元、エステル化または核置換反応のような標準手法を実施すると、置換基Ｒ６およびＲ７の形成に導く。Ｒ２Ｒ３またはＲ６Ｒ７が＝０である化合物は、標準手法によりオキシムやアルコキシムに変換することができる。

本発明の活性（すなわち、非薬剤前駆体）化合物は、トポイソメラーゼＩおよび ■との間にＫ　を有する。この値は、Ｈ＋目Ｏｇ　（１９８５１の方法で定量することができ、下記の実施例で示されるように、５０μＭ以下である。Ｋ　はｌｎＭ〜２０μＭであするのが好ましいだろう。したがって、本明細書中、本発明化合物について用いられる「有効阻害量」とは、その組成物が、問題の酵素の５Ｏ−１００％、好ましくは７Ｏ−１００％の阻害をもたらすのに十分な量を指す。これは、所期のＫ　値を持つ化合物を用いてｉｎマ１ｔｒｏでテストすることによって測定される。

本発明の活性（すなわち、非薬剤前駆体）化合物は、ＨＬ６０細胞において、細胞分化誘導能を持っている。この活性は、ＬａとＨｌｎ　（１９８６）の方法によって測定され、下記の例で示されるが、１００μｇ／ｍｌ以下の濃度で発現される。有効濃度は、ｌｌ１ｇ／ｌから　１００μｍ７ｍ１であることが好ましく、特に、０．１から５０μｇ１０＋１であることが好ましい。本明細書中、本発明化合物について用いられる「分化有効量」とは、その組成物が、２５−１００％、好ましくは５０−１００％の細胞分化をもたらすのに十分な量を指すのであって、これは、所期の細胞分化有効濃度を持つ化合物についてｉｎ　ｖＮ＋ｏテストを行なって測定される。

トポイソメラーゼＩまたは■のいずれか一方、またはその両方に対して阻害活性を持つ化合物は、本発明の範囲内である。

さらにまた、次のことも自明であろう。すなわち、このような化合物を、当業者には明らかであるように、最近よく知られているトポイソメラーゼＩおよび■酵素の阻害に使用するだけでなく、この種の、他の既知の、またはこれから発見されるアイソエンザイムや、関連した活性を持つ他のトポイソメラーゼ酵素（ＤＮＡジャイレース）を阻害するためにも用いることができる。

同様に、本発明の化合物は、当業者には明らかであるように、本実施例のものとは異なる細胞において、細胞分化を誘導するのに用いることができる。

本明細書中に記載した構造式を持つ化合物は、ここに記載した活性のただ一つだけを持つにすぎない。そのような化合物は本発明のほんの一部である。したがって、例えば、ある化合物が、トポイソメラーゼエの阻害能は持っているが、トポイソメラーゼ■の阻害能を持っていないということもあるかもしれない。同様に、本発明のある化合物は、細胞分化を誘導するが、２種のトポイソメラーゼ酵素の内どちらかを阻害しないかもしれない。本明細書中に挙げた活性の内のどのような組合せを持つものであれ、そのような化合物は本発明の一部である。

ＤＮＡトポイソメラーゼＩは、もともと、超螺旋ＤＮＡを緩和することのできる単一酵素活性として、Ｅ＋ｃｂｅ＋１ｃｈｉｓ　ｃｏｌｉから特定されたものであった（Ｌｕ、　１９７１）。その後、たくさんの真核細胞からトポイソメラーゼ酵素性が分離された（Ｃｂｇｓｐｏａｘと（ｌａｌｂｅｃｃｏ、　１９７２；Ｊｎｔａ　ら、１９８１；ＬｉｅとＭｉｌｌｅｔ、　１９８１；Ｃｓ＋ｉｏ＋ｔ。

＋９８６）。この酵素は、ＡＴＰまたはＮＡＤのような高エネルギー補因子を必要としない。この酵素は、共有的に結合した酵素Ｄ　Ｎ　Ａ中間体を形成することによって作用する。この一過性のＤＮＡ切断によって、２つのＤ　Ｎ　Ａ鎖の間の結合数（ｌｉｎｋｉＢｎｕｍｂｅ＋）が変化する。トポイソメラーゼエ酵素は、分子量約１ＨｋＤｚの単量体の蛋白質であって、超螺旋ＤＮＡを負にも、正にも緩和する。確定された所見であるが、５′末端に結合する原核細胞由来の酵素と違って、真核細胞由来のトポイソメラーゼＩは、千ロジン残基を介して、切断されたＤＮＡの３′末端と共存結合した中間体を形成するｆＧｅｌｌｅＮ、　１９８１；Ｌｉｔ、　１９８３；Ｌｌｌｇ、　＋９８５１゜トポイソメラーゼ■は、Ｅ、＋ｏｌｉおよび例えば、子牛胸腺やヒトＨｅＬａ細胞（Ｌｉａ、　！９８１＋Ｇ１口＋ｏｎ、　１９８４）のような真核生物から単離されたｔＢｘｌｄｉ、　１９８０．　Ｈｓｉｅｈ、　１９８０）　、真核細胞トポイソメラーゼ■は、相同な二量体であり、３００ｋＤｓの分子量を持つ（Ｌｉｐら、１９８０）。

真核細胞■型トポイソメラーゼは、５′末端に、同一の切断部位を形成する（　５１ａａｔｒ、　１９８３）。

ある種の抗癌剤が、精製された真核ＤＮ、ｌポイソメラーゼ■によるＤＮＡ切断を促進するという直接的な証拠が得られたという報告がある（Ｎｅｌ＋ｏ３１９８４；ＴｃｖＢ、　１９８４；Ｒｏ＋＋、　１９８４：１１ｉｎｏｃｈｓ、　＋９８４）。

本発明化合物の投与による治療に対して有効な特定の癌としては、肺小細胞価ｆｔｍ１ｌｌ　ｃｅｌｌ　ｌｏｎｇ　ｅｓｎｃ！＋）、畢丸癌、リンパ腫および白血病（類似のＶＰ−１６活性に基づく）；食道癌および胃癌；結腸癌（カンプトテシンと類似の活性に基づり）；乳癌；中枢神経系の癌（この化合物は、血液脳関門を通過するだろうという予想に基づ＜）；肝臓癌；および前立腺癌がある。

他の癌にも、これらの化合物投与に対して有効性を持つものがあるかもしれない。しかも、そのような活性は、当業者ならすぐ分かるように、標準テスト（例えば、胸腺除去したヌードマウスモデルに移植した腫瘍組織に対して活性を見るテスト）を用いて簡単に測定することができる。上記癌と関連する細胞の中に、本発明の化合物あるいは組成物によって、分化が誘導される細胞の例が含まれる。

トポイソメラーゼエまたはトポイソメラーゼ■阻害活性を持つ他の化合物も、ヒト癌やヒト以外の哺乳動物の癌の治療には有効である（　Ｒａｔｅ、　Ｋ、　！Ａ、　、　ＦＡＳＥＢ　Ｌ　２．２４７４−２４７８．１９８８）。

トポイソメラーゼ酵素活性を調節することのできる化合物は、また、遺伝子操作におけるＤＮＡ組み換えにとってかなり重要な価値をもつ。

ヒ゛ト以外の哺乳動物とは、例えば、イヌ、ネコ、サル、ウシ、ウマ等を指す。

これらの動物に含まれる酵素は、ヒト材料から単離したトポイソメラーゼＩやトポイソメラーゼ■と厳密には同一ではないかもしれないが、もしその機能が、ヒト以外の哺乳動物にとっても、ヒトの場合と一般に同じであり、且つ阻害も（本明細書中に特定したような）標準活性測定法で検出可能であるならば、その阻害作用も、本発明の組成物や方法の範囲に入いる。

臨床的に有効な抗癌剤（例えば、ダウノルビシンあるいはンタラビン）は、各種骨髄性白血病細胞の分化を効果的に誘導することができる。したがって、細胞分化誘導特性を持つ化合物は抗癌の目的で使用することができる。

本発明の化合物の投与は、経口的でも、非経口的でも、静注でも、皮膚や粘膜表面を通じての吸収でもよく、これを、薬剤投与に熟練した人々に既知の方法を用いて実施することができる。

治療上の投与目的のためには、活性成分が溶液または懸濁液に取り込まれていなければならない。

溶液または懸濁液はさらに、下記のような成分を含むことができる。すなわち、無菌の　希釈剤（例えば、注射用水、生食液、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、その他の合成溶媒）、溶解度を増すための蛋白質（例えば、血清アルブミン）、抗菌剤（例えば、ベンジルアルコール、メチルパラベン）、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸、重亜硫酸ナトリウム）、キレート剤（例えば、エチレンジアミン四酢酸）、バッファー（例えば、酢酸塩、クエン酸塩、リン酸塩）、浸透圧調整剤（例えば、塩化ナトリウム、デキストロース）である。調製品は、アンプル、ディスポーザブル注射筒、ガラスまたはプラスチック製の多重用量瓶に収容させることができる。

本発明の活性化合物を含む組成物は、特定の腫瘍を標的にするように処方することができる。例えば、本発明の各種化合物のどれでも、腫瘍関連抗原に対するモノクロナール抗体と共有的に結合させることができる。このような結合は、抗体のアミン基とのペプチド結合形成を通じて実現することができる。さらに好ましくは、そのような結合がジスルフィド部分または容易に切断させる他の部分（例えば、ＹｉｌｓＮｉ　ラ（Ｅ、Ｓ、　Ｙｉｌ＋ｌｌｚ、Ｒ，Ｉｅｒｒｏｌｄ　Ｆａｌｌｅｎ、Ｒｉｃｂｔｒｄ　Ｄ、Ｍａ７．Ｍｔｔｋ　Ｔｉ１１．Ｉｏ＋１１ｈｉｎ　Ｗ、υｈ＋。

５ｃｉｅｎｃｅ。２３ｇ＋１０９８（１９８？））が記載しているようなもの）を含んでいるとよい。そのような結合は、ジスルフィド結合の切断によって放出された化合物が、急速に、活性トポイソメラーゼ阻害剤または細胞分化誘導剤に変換されるように設計された。

あるいは、本発明の化合物を、リポソームに付着させたり、内部に封入させることができる。リポソームは、抗癌剤を標的に誘導するのに有効であることが知られているからである（Ｇ、　Ｇ＋ｅｇｏ＋ｉ＋ｄｉ＋、　１．’５ｓｎｉｏ＋および人Ｔｒｏｏｅｌ　（６ｉ集）「薬剤の標的誘導（Ｔｘ＋ｇｅｌｉｎｇ　ｏｆ　Ｄ＋ｕｇ＋）Ｊ　、’　ＮＡＴＯＡｄｙ＋ｎｃｔａ　５ｌｕｄ７！ａｉｔｉｌｕｌ＋　Ｓｅ＋ｉ＋＋、第４７巻、Ｐｌｔｎｕｍ　ＰＩｅｓｌ、１４１ｗ　Ｙｏ＋に、１９８２）。

肝臓癌は、リポソームの標的誘導に対して特に敏感である。

このようなリポソームの調製法および使用法については、Ｇ＋ｅｇｏ＋１−ｔｄ口らの本に論じられている。

したがって、本明細書中で使用される、本発明の化合物を癌発生部位に標的誘導するための薬剤には、その癌発生部位に特異的なモノクロナール抗体、癌発生部位に選択的に吸着されるリポソーム、および癌発生部位に好んで引きつけられたり吸収される、当業者に公知の他の薬剤が含まれる。このような薬剤は、例えば、Ｇｈｏｓｅ、　Ｔら、「癌治療のための抗体結合細胞毒性剤：現状と将来の展望（Ａｎｌｉｂｏｄ７−Ｌｉｎｋｅｄ　ＣｙｌｏｌｏｘｉｃＡｇ＋ｏｆ＋　ｉｏ　Ｉｂｅ　Ｔｒｃ＋１ｍｅ＋＋ｔ　ｏｆ　Ｃｘｎｅ＋＋＋Ｃｕｔｒｅｎｔ　５ｌｔｔ■　ａｎｄＦｕｔｕｒｅ　Ｐｒｏｓｐ＋ｃｌ＋）　Ｊ　、１．Ｎｔｔｌ、Ｃｔｎｃｅ＋　Ｉｎ＋ｔ、６１１９？！ｌ）に記載されている。標的誘導剤の量は、この分野の通常の技術の一つを用いれば、大げさな実験操作なしに決めることができる。一般に、標的誘導剤がモノクロナール抗体か、または本発明による化合物に共有的に結合する別の細胞毒性剤である場合、はぼ等モル以下の量の標的誘導剤が使用される。しかしながら、本発明化合物と、共有的に結合する標的誘導剤とを、別のモル比で使用することも可能である。

本発明に基づいて使用されるモノクロナール抗体と、本発明化合物の標的とすることが可能な関連する癌との特定例としては下記のものがある。

Ｐｚｎｏ＋ｅｘ　ＭＡｂ　Ｃ＋ｎ１ｏｅｏ＋　結腸直腸癌、　フェーズ■（ＩＩｌｌ　ｙｅ　ｔｏ、　Ｐ＋、　）　すい臓癌Ｏｙｘ＋ｉｓｏ　Ｒ丁ＭＡｂ　ＣｔｎｌｏＣｏｒ　卵巣癌　フエーズエ（Ｌｌｙｔ＋ｎ、ＰＣ＞ＭＡｂＣＣ１１Ｉ＋　乳癌　フェーズエ（ＥｍｔＢｗｉｌｌｅ、Ｃ１，）ＭＡｂ　ＤＪｍｏｎ　（ＮｅｅＩｉｈ＊ａ　肺癌　フエーズエＨｅｉｇｋｌ＋、Ｍｓ＋＋、）ＫＳ　Ｉ／４−ＤＡＪＬＢ　Ｅｌｉ　Ｌｉ１ｌ）　ｆｆ、　ｆ１ｇ床試験ＭＡｂ　（Ｉ口ｄｉｘｎｘｐｏｌｉ＋。

ｌａｄ、）ＭＡｂ−Ｌ６　８ｒｉ＋ｔｏｌ−Ｍｙｅｒｔ／　肺癌　７工−ズ■Ｏｎｃｏｇｅｎ（Ｎｅｗ　Ｙｏｌｋ、Ｎ、Ｙ、）ＭＡｂ　Ｉｍｍｏｎｏｍｅｄｉｃｓ　結腸直腸癌　フェーズＩ（Ｎｅｖｘｒｋ、Ｎ、１．）１ｏｈｎ＋ｏｏ　＆　ｊｏｂ＋＋＋ｏｎ（Ｎｏｖ　Ｂ＋ｕ＋＋５ｖｉＣｋ、Ｎ、Ｊ、）他のモノクロナール抗体も、それらが特定の癌発生部位、例えば腫瘍を標的とする限り、使用することができる。

本発明の化合物はまた、他の治療処置、例えば、癌に対する放射線治療と組み合わせて投与することができるし、あるいは、他の抗癌剤、例えば、細胞毒性剤、他のトポイソメラーゼ阻害剤または細胞分化誘導剤と組み合わせて投与することもできる。

投与量は、軽減すべき病状の特定の重症度と共に変化するが、本明細書に記載した化合物の有効量を、そのような治療を要する患者に、経口的に、非経口的に、または、静注によって投与すると、好成績が得られる。適切な用量は、化合物の有効量、本明細書に記載したｉｎ　ｙｉｌ＋ｏテスト、および投与経路による記載化合物の生体内有効率から評価でき、これによって、患者体内の標的部位に有効濃度の記載化合物を生じさせることができる。

しかしながら、銘記しておかなければならないことは、ある特定の患者に対しては、投与処方は、その個人の必要に合わせて、前記化合物を投与する人の、または、投与を監督する人の専門的判断に則って調整されなければならない、ということである。さらに銘記しなければならないことは、前記の投与法は、本発明の範囲や実施内容を限定しないということである。投与は、一時に行なってもよいし、小量の複数の用量に分けて、様々な時間間隔で投与してもよい。

本発明のその他の特徴については、下記に挙げる例示的な実施態様の記載内容から明らかになるであろう。この実施態様は、本発明の説明のためにのみ挙げたのであって、これに限定する意図はない。

第４図に示したように、パーコレーター中で、ｏｌｅｏｇａ＋ｎ樹脂（２９０ｇ）を、７０％アセトン水溶液で徹底的に抽出し、粗抽出物を得た（２４１８ｇ、　８５．７％）。この粗抽出物を塩化メチレンで処理し、塩化メチレン可溶性画分を濃縮した（１９４．８ｇ、　６５．　ＩＸ）。この粗混合物を、塩化メチレン中に上昇濃度を持つように溶解したアセトン溶液を溶出液として、シリカゲル上でクロマトグラフィーにかけた。

塩化メチレン溶出物から、α−およびβ−ボスウェル酸アセテートの粗混合物が得られた（１６ｇｌ。クロマトグラフィーとメタノール中の再結晶を繰り返すと、微細な、無色の、針状結晶（４，５４ｇ）が得られた。ＨＰＬＣ分析によって、結晶状物質は、まだ、混合物であり、約１．１の比率のα−およびβ−ボスウェル酸アセテートから成っていた。

この異性体混合物０．２５ｇを、Ｃ−１８逆相カラム（２５叩！３０口）上で、９２％メタノール水溶液を移動相としてクロマトグラフィーにかけた。純粋なα −およびβ−ボスウェル酸アセテート（ＨＰ　Ｌ　Ｃ分析で決定した）を含む画分を、それぞれを一つに集めて濃縮した。メタノールからさらに再結晶すると、 α−ボスウェル酸アセテート（Ａ−１）５■およびβ−ボスウェル酸アセテート（Ｂ−１）１１■が得られた。

α−ボスウェル酸アセテートおよびβ−ボスウェル酸アセテートの構造は、下記の物理的およびスペクトル分析に基づいて確認した。

α−ボスウェル酸アセテート無色の針状結晶、［α］　２２Ｄ＋６６．２°、ＨＲ，Ｍ　Ｓ　４９８．３６９７、Ｃ３２Ｈ５００４計算値、４９８．３７０９゜そのＩＲスペクトラムは、アセトキン基については１７３７ｃｍ−１に、カルボキシル基については１６９２ｃｍ−１に、カルボニルバンドを示した。ＥＩｌマススペクトル、ａｈ　２８０．　２１８１＝ピークを示した。コノピークハ、△１２−オレアネン（０１＋ａａｅｎｓｌ／ウルセン（ｕ＋＋＋ｎｅ）誘導体のＣ環由来の、特徴的な逆ディールス・アルダ−切断ピークを表わす。その’ＨＮＭＲスペクトルは、８個のメチルシグナルを示した（第１表）。その１３ＣＮＭＲスペクトルからは、３２個の炭素シグナルが明らかにされた。

β−ボスウェル酸アセテート無色の針状結晶、［α］　２２Ｄ＋６０．０°、ＨＲＭＳ　ｕａ、３７０＋、、Ｃ３２Ｈ５ｏＯ４計算値４９８Ｊ７０９゜そのＩＲスペクトルは、アセトキシ基については１７３３■−１に、カルボキシル基については１６９３Ｃ１１１−１にカルボニルバンドを示した。Ｅｌマススペクトルは、α−ボスウェル酸アセテートの場合と同様の、特徴的なピークを示した。その　’ＨＮＭＲスペクトルでも、８個のメチルシグナルが得られたく第工表）。その１３ＣＮＭＲスペクトルでは、３２個の炭素シグナルが明らかにされた。

Ｘ線回折分析（第２図）によって、β−ボスウェル酸アセテートの構造を確定した。

（」 α−およびβ−ボスウェル酸アセテートのＭｅ基の化学シフト（ＴＭＳでのｐｐｍ）β−ボスウェル酸アセテート　０．９１　１．０５　ｉ、１２　１．２５　０．８１　０．８１　０，９１　２．１０実施例２．　トポイソメラーゼ１阻害活性トポイソメラーゼエ阻害活性は、超螺旋ｐＢＲ３２２ＤＮＡ緩和アッセイを用いてモニターした。このアッセイは、既に発表された方法に従った（　ＬｉＤら、Ｐ＋ｏｅ、　Ｎ＆ｔ１．＾ｃｘｄ、ｓｃｉ、、Ｕ、Ｓ、Ａ、、７６゜３４８７（１９８７））。

ＤＮＡトポイソメラーゼエを、慢性ヒト白血病細胞から均賀になるまで精製した。プラスミドｐＢＲ３２２ＤＮＡは、透明な細胞溶解物をフェノールを用いる除蛋白操作に掛け、次に、Ｃ＋ＣＩ／エチジウムによる等密度勾配遠心、およびゲルろ過に掛けて精製された。化合物Ａ−１およびＢ−１のトポイソメラーゼエ阻害活性を第５図にまとめた。α異性体Ａ−１は、カンプトテシン標準よりも高い阻害能（〜３Ｘ）を示した。β異性体Ｂ−１は、カンプトテシン標準と同程度の阻害能を示した。

実施例３、トポイソメラーゼ■陥害活性トポイソメラーゼ■活性は、Ｐ４脱結節アッセイを用いてモニターした（　Ｌｉｕら、Ｎａｃｌｅｉｃ＾ｃｉｄ　Ｒｅｉ、、９．３９７９（１９８１１）。ファージの尾部のないキャプシドから単離した、自然状態で結節化しているＤＮＡを基賀として用いた。トポイソメラーゼ■ は、ヒト白血病細胞から精製した。Ａ−１およびＢ−１両異性体ととも、ＶＰ− １６標準よりも高い阻害能を示した。結果を第６図にまとめた。

実施例４．　細胞分化誘導活性ヒト前骨髄性白血病細胞系、すなわちＩＩＬ−６０の培養物は、化合物Ａ−１およびＢ−１の約１・１混合物によって分化を誘導され、成熟細胞になった。細胞分化は、ＬＤ、とＨｌｎの方法によって評価された（　Ｌｏ、　Ｙ、とＨｘａ、Ｒ，、ｒアクラシノマイシンＢによって誘導される、ヒト前骨髄細胞（ＨＬ−６０）の分化（Ｄ百！ｅ＋ｓｎｔｉｇｌｉｏｎ　ｏｉ　）ｌｕｍｔｎ　Ｐ＋ｏＩＩ）ｔｌｏｃｙｔｉｃ　Ｃｅ１ｌ＋（ＨＬ−６０）Ｉｎｄｕｃｅｄ　Ｊ　Ａ＋ｌ＋ｃｉｎｏｍ７ｃｉｎ　８１　、Ａｃｌ＋　Ａｃａｄｅｍ口ＬｄｉｃｘＳｉｎｉｃ！。８（３７）、　２１＋−２１４（１９８６１）　、種々の濃度の（第ｎ表参照）テスト薬剤混合物の存在下、５培養日数で各々について二濃　度　ＮＢＴ約１：１比で混ぜたＡ−１とＢ−１の混合物。

傘事コントロール細胞に対する、ＮＢＴ減少能の増加実施例５．　ｉｎ　ｙｉｖｏにおける抗腫瘍活性Ｌ−１２１０白血病に対する本発明化合物の作用を、α− ボスウェル酸アセテートとβ−ボスウェル酸アセテートの１：１混合物をＣＤＦ −１マウスに投与して測定した。Ｌ−１２１０細胞（マウス１匹あたり１×１０６個の細胞）を、０日目に、ＣＤＦ−１マウス（１グループあたり１０匹）の腹腔内に移植し、この化合物による腹腔内治療を１日目に開始し、１２日間続けた。結果を、第■表にまとめた。

開始時　最終時０　開始時　最終時　（可動コントロール　１６　０　１７．０　１９．７　１５．＋±１．９５０■／ｋｇ　ＩＱ　１　１６．９　１７．８　１６．９±６．１１００■／ｋｇ　１０　ｊ　１６．７　１７，４　２２．９± １５ｓＢＣ−４は、約１＝１の比で混合したα−ボスウェル酸アセテートとβ− ボスウェル酸アセテートから成る。

本本案験の終了（３００日目まで生存していた動物の数言うまでもないことであるが、本発明については、たくさんの改良法、変法が、上記の例示に照らして可能である。したがって、ここに特に挙げていないやり方で本発明を裏打したとしても、それが添付の請求の範囲内にあることも可能であることを銘記しなければならない。

＋Ａｌ　ｔ８１ＦＩＣ！、７，４　ＦＩＣ：、ｆＢＦＩＣ：、３Ａ　ＦＩＣ：、３８ＦＩＣ！、３０　ＦＩＣ：、３１）ＦＩＧ、５Ａト２イゾメラーｃ’　Ｉ　級オＱア・７’ｔＬイＡＢＣＤＥＦＧＨＩＪＫＬＭＦＩＧ、　６Ａト汀ぐイソズウーτ゛ユ　ｇｔ粍ｊＴ１７・ルイＡＢＣＤＥＦＧＨＩＪＫＬＭ国際調査報告ＰＣＴ／ＵＳ８９１０３５１１１工　ＣＬＡ５ＳＸＦＩＣｋＴ工ＯＮ　ＯＦ’　５ｔ）Ｂ、：ＴＥＣＴ　ＫＡＴＴＥＲｆｃＯＮＴＩＮＵＥＤｌ

Claims

【特許請求の範囲】

１．トポイソメラーゼＩを阻害するための方法であって、該方法が、下記の式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ▲数式、化学式、表等があります▼Ｄ▲数式、化学式、表等があります▼Ｅ▲数式、化学式、表等があります▼Ｆ［式中、Ｒ１は、−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−Ｈ；Ｃ１−４アルキル；Ｃ２−４アルケニル；、Ｃ３−４アルキニル；置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であるか、あるいは、Ｒ１は−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ５または−ＣＯＮＲ５２（ここでＲ５は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−ＣＨ３；−ＣＨ２ＣＯＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ；Ｃ２−８アルキル；Ｃ２−８アルケニル；Ｃ２−８アルキニル；または置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であり、およびＲ２とＲ３は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ２とＲ３は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよく、および、Ｒ６とＲ７は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は、上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ６とＲ７は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよい。］を有する化合物から成る群から選択される化合物または該化合物の医薬上許容可能な塩の有効阻害量をｉｎ　ｖｉｔｒｏもしくはｉｎｖｉｖｏでトポイソメラーゼＩに接触させることを含む、ことを特徴とする方法。
２．Ｒ１が−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は−Ｈ，Ｃ１−４アルキルまたはＮＨ２である。）である、請求項１に記載の方法。
３．Ｒ３が−Ｈであり、およびＲ２が−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＡｃ，−ＯＣＯＣ２Ｈ５または−ＮＨＡｃである、請求項１に記載の方法。
４．Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨおよびＲ１＝ＣＯＯＨである、請求項１に記載の方法。
５．Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＣＯＣＨ３およびＲ１＝ＣＯＯＨである、請求項１に記載の方法。
６．Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨおよびＲ１＝ＣＯＯＨである、請求項１に記載の方法。
７．トポイソメラーゼＩＩを阻害するための方法であって、該方法が、下記の式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ▲数式、化学式、表等があります▼Ｄ▲数式、化学式、表等があります▼Ｅ▲数式、化学式、表等があります▼Ｆ［式中、Ｒ１は−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−Ｈ；Ｃ１−４アルキル；Ｃ２−４アルケニル；Ｃ３−４アルキニル；置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６− ８アリールである。）であるか、あるいは、Ｒ１は−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ５または−ＣＯＮＲ５２（ここで、Ｒ５は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−ＣＨ３；−ＣＨ２ＣＯＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ；Ｃ２−８アルキル；Ｃ２−８アルケニル；Ｃ２−８アルキニル；置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ −アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であり、およびＲ２とＲ３は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ２とＲ３は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよく、およびＲ６とＲ７は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ６とＲ７は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよい。］を有する化合物から成る群から選択される化合物または該化合物の医薬上許容可能な塩の有効阻害量をｉｎ　ｖｉｔｒｏもしくはｉｎｖｉｖｏでトポイソメラーゼＩＩに接触させることを含む、ことを特徴とする方法。
８．Ｒ１が−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４が−Ｈ，Ｃ１−４アルキルまたはＮＨ２である。）である、請求項７に記載の方法。
９．Ｒ３が−Ｈであり、およびＲ２が−Ｈ，−ＯＨ，−ＯＡｃ，−ＯＣＯＣ２Ｈ５または−ＮＨＡｃである、請求項７に記載の方法。
１０．Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＨおよびＲ１＝ＣＯＯＨである、請求項７に記載の方法。
１１．Ｒ６＝Ｒ７＝Ｒ３＝Ｈ、Ｒ２＝ＯＣＯＣＨ３およびＲ１＝ＣＯＯＨである、請求項７に記載の方法。
１２．肺小細胞癌、睾丸癌、リンパ腫、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、中枢神経系癌、肝臓癌および前立腺癌から成る群から選択される癌にかかった哺乳動物を治療するための組成物であって、該組成物が、下記の式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ▲数式、化学式、表等があります▼Ｄ▲数式、化学式、表等があります▼Ｅ▲数式、化学式、表等があります▼Ｆ［式中、Ｒ１は、−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−Ｈ；　Ｃ１−４アルキル；Ｃ２−４アルケニル；Ｃ３−４アルキニル；置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキルまたはＣ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であるか、あるいは、Ｒ１は−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ５または−ＣＯＮＲ５２で（ここで、Ｒ５は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−ＣＨ３；−ＣＨ２ＣＯＯＨ；− ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ；Ｃ２−８アルキル；Ｃ２−８アルケニル；Ｃ２−８アルキニル；または置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であり、およびＲ２とＲ３は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ２とＲ３は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよい、およびＲ６とＲ７は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５，または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ６とＲ７は、一緒になって、＝０またはＮ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよい。］を有する化合物から成る群から選択される化合物または該化合物の医薬上許容可能な塩を、該哺乳動物内の該癌の局在部位に該化合物を標的誘導するための薬剤と組み合わせたものを含む、ことを特徴とする組成物。
１３．細胞分化を誘導するための方法であって、該方法が、下記の式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ▲数式、化学式、表等があります▼Ｄ▲数式、化学式、表等があります▼Ｅ▲数式、化学式、表等があります▼Ｆ［式中、Ｒ１は−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−Ｈ；Ｃ１−４アルキル；Ｃ２−４アルケニル；Ｃ３−４アルキニル；置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６− ８アリールである。）であるか、あるいは、Ｒ１は−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ５または−ＣＯＮＲ５２（ここで、Ｒ５は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−ＣＨ３，−ＣＨ２ＣＯＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ；Ｃ２−８アルキル；Ｃ２−８アルケニル；Ｃ２−８アルキニル；または置換されていないか、またはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であり、およびＲ２とＲ３は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここでＲ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ２とＲ３は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよく、およびＲ６とＲ７は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ，−ＮＨＲ５−ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ６とＲ７は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよい。］を有する化合物から成る群から選択される化合物または該化合物の医薬上許容可能な塩の有効量を癌細胞に接触させることを含む、ことを特徴とする方法。
１４．肺小細胞癌、睾丸癌、リンパ腫、白血病、食道癌、胃癌、結腸癌、乳癌、中枢神経系癌、肝臓癌および前立腺癌から成る群から選択された癌を治療するための方法であって、該方法が、下記の式： ▲数式、化学式、表等があります▼Ｃ▲数式、化学式、表等があります▼Ｄ▲数式、化学式、表等があります▼Ｅ▲数式、化学式、表等があります▼Ｆ［式中、Ｒ１は−ＣＯＯＲ４（ここで、Ｒ４は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−Ｈ；Ｃ１−４アルキル；Ｃ２−４アルケニル；Ｃ３−４アルキニル；置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−もしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６− ８アリールである。）であるか、あるいは、Ｒ１は−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ５または−ＣＯＮＲ５２（ここで、Ｒ５は、モノ−、ジ−もしくはトリ−サッカライド；−ＣＨ３；−ＣＨ２ＣＯＯＨ；−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ；Ｃ２−８アルキル；Ｃ２−８アルケニル；Ｃ２−８アルキニル；または置換されていないかまたはハロゲン、メトキシ、エトキシ、スルホンアミド、アミノ、モノ−もしくはジ−Ｃ１−４アルキル−アミノ、モノ−モもしくはジ−アセチルアミノ、Ｃ１−４アルキル、Ｃ２−４アルケニルによって置換されているＣ６−８アリールである。）であり、およびＲ２とＲ３は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５２，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ２とＲ３は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りでる。）であってもよく、およびＲ６とＲ７は、水素またはＲ５と、−Ｈ，−ＯＲ４，−ＮＨ２，−ＮＨＲ５，− ＮＨＲ５，−ＯＣＯＲ５または−ＮＨＣＯＲ５（ここで、Ｒ４とＲ５は上に定義した通りである。）との組み合わせであってもよいか、あるいは、Ｒ６、Ｒ７は、一緒になって、＝０または＝Ｎ−ＯＲ４（ここで、Ｒ４は上に定義した通りである。）であってもよい。］を有する化合物から成る群から選択される化合物または該化合物の医薬上許容可能な塩を活性成分として含有する組成物の有効量を、治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む、ことを特徴とする方法。