JPH0440890A - 神経細胞の培養に用いる基質 - Google Patents
神経細胞の培養に用いる基質Info
- Publication number
- JPH0440890A JPH0440890A JP2148614A JP14861490A JPH0440890A JP H0440890 A JPH0440890 A JP H0440890A JP 2148614 A JP2148614 A JP 2148614A JP 14861490 A JP14861490 A JP 14861490A JP H0440890 A JPH0440890 A JP H0440890A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substrate
- photoresist
- resulting
- plastic substrate
- pattern
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 43
- 229920002120 photoresistant polymer Polymers 0.000 claims abstract description 16
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims abstract description 15
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 claims abstract description 6
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 claims abstract description 5
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 claims abstract description 5
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 11
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 9
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 9
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 9
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 claims description 7
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 claims description 4
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 4
- 229920000306 polymethylpentene Polymers 0.000 claims description 4
- 239000011116 polymethylpentene Substances 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 abstract description 6
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004956 cell adhesive effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000004506 ultrasonic cleaning Methods 0.000 abstract description 3
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 abstract description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 abstract description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 8
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 8
- 210000002241 neurite Anatomy 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- VUDQSRFCCHQIIU-UHFFFAOYSA-N 1-(3,5-dichloro-2,6-dihydroxy-4-methoxyphenyl)hexan-1-one Chemical compound CCCCCC(=O)C1=C(O)C(Cl)=C(OC)C(Cl)=C1O VUDQSRFCCHQIIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101000942967 Homo sapiens Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 description 1
- 102100032352 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012993 chemical processing Methods 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000003955 neuronal function Effects 0.000 description 1
- 239000003348 petrochemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000000206 photolithography Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920002714 polyornithine Polymers 0.000 description 1
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000005389 semiconductor device fabrication Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000002889 sympathetic effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、神経細胞の分化形態の制御効果に優れた培養
基質に関するものである。
基質に関するものである。
〔従来の技術］
神経細胞の培養は、神経生物学、神経薬初学等の分野か
ら脳神経化学、老年学、精神病理学等の分野に至るまで
重要な基本的技術として近年ますますその重要性が高ま
っている。神経細胞は、基質への接着依存性の大きい細
胞であり、培養を行う場合には細胞接着性蛋白質である
ラミニン、コラーゲンなどを、またはポリアミノ酸であ
るボリソジン、ポリオルニチンなどをコートした培養基
質が用いられる。このような基質を用いることにより神
経細胞は良好な神経突起を伸ばした分化形態をとる。こ
の分化を誘導するためには培地に例えばＮＧＦのような
分化誘導因子を加えるのが通例である。分化した神経細
胞は、さらに生体内における場合と同様に情報を受けと
る樹状突起、情報を伝える軸索とに分かれた突起を持つ
細胞へと変わってゆく。
ら脳神経化学、老年学、精神病理学等の分野に至るまで
重要な基本的技術として近年ますますその重要性が高ま
っている。神経細胞は、基質への接着依存性の大きい細
胞であり、培養を行う場合には細胞接着性蛋白質である
ラミニン、コラーゲンなどを、またはポリアミノ酸であ
るボリソジン、ポリオルニチンなどをコートした培養基
質が用いられる。このような基質を用いることにより神
経細胞は良好な神経突起を伸ばした分化形態をとる。こ
の分化を誘導するためには培地に例えばＮＧＦのような
分化誘導因子を加えるのが通例である。分化した神経細
胞は、さらに生体内における場合と同様に情報を受けと
る樹状突起、情報を伝える軸索とに分かれた突起を持つ
細胞へと変わってゆく。
しかし、これまでに知られている培養基質を用いて神経
細胞の培養を行うと基質表面に一様に細胞接着性蛋白質
があるため神経突起がランダムな方向に広がってしまい
前述したような分化形態を識別するのが難しく、神経の
情報伝達や神経細胞への薬物の効果等を正確に調べるこ
とが困難であった。
細胞の培養を行うと基質表面に一様に細胞接着性蛋白質
があるため神経突起がランダムな方向に広がってしまい
前述したような分化形態を識別するのが難しく、神経の
情報伝達や神経細胞への薬物の効果等を正確に調べるこ
とが困難であった。
また、単にプラスチック基質の表面を化学的に処理して
パターンを形成する方法（特開平２−８４１２４号公報
、特開平２−７６５７０号公報）では、神経細胞に対し
て強い接着特異性を示すことが困難であり必ずしも効果
的な方法とは言えず、また、長期培養を行う場合にもプ
ラスチック表面の化学加工だけでは充分な効果を示しえ
ない等の問題点があった。
パターンを形成する方法（特開平２−８４１２４号公報
、特開平２−７６５７０号公報）では、神経細胞に対し
て強い接着特異性を示すことが困難であり必ずしも効果
的な方法とは言えず、また、長期培養を行う場合にもプ
ラスチック表面の化学加工だけでは充分な効果を示しえ
ない等の問題点があった。
そこで、本発明者は、従来困難であった神経細胞の分化
形態制御を行うためには培養基質の神経細胞に対する親
和性が強く異なる部分をパターン化し形成することが必
要と考え種々検討を積重ねた結果、フォトリソグラフィ
ーの手法を応用すること及び細胞接着性蛋白質を用いる
ことにより所期の目的を達成することが可能であるとの
知見を得て、更に鋭意研究を重ねて本発明を完成するに
至ったものである。すなわち、本発明の目的とするとこ
ろは、神経細胞の分化形態の制御に優れた培養基質を提
供することにある。
形態制御を行うためには培養基質の神経細胞に対する親
和性が強く異なる部分をパターン化し形成することが必
要と考え種々検討を積重ねた結果、フォトリソグラフィ
ーの手法を応用すること及び細胞接着性蛋白質を用いる
ことにより所期の目的を達成することが可能であるとの
知見を得て、更に鋭意研究を重ねて本発明を完成するに
至ったものである。すなわち、本発明の目的とするとこ
ろは、神経細胞の分化形態の制御に優れた培養基質を提
供することにある。
このような目的を達成するための本発明の構成は、以下
の（１）〜（３）の技術的手段からなるものである。
の（１）〜（３）の技術的手段からなるものである。
（１）プラスチック基質にフォトレジストのパターンを
形成し、アンモニアプラズマ処理を行った後、グルタル
アルデヒド溶液と反応させ、次いで細胞接着性蛋白質を
コートし、最後にフォトレジストを除去することを特徴
とする神経細胞の培養基質。
形成し、アンモニアプラズマ処理を行った後、グルタル
アルデヒド溶液と反応させ、次いで細胞接着性蛋白質を
コートし、最後にフォトレジストを除去することを特徴
とする神経細胞の培養基質。
（２）プラスチック基質が、ポリエーテルスルホン、ポ
リスルホン、ポリメチルペンテンまたはポリエステルで
あることを特徴とする（１）記載の神経細胞の培養基質
。
リスルホン、ポリメチルペンテンまたはポリエステルで
あることを特徴とする（１）記載の神経細胞の培養基質
。
（３）細胞接着性蛋白質が、ラミニン、またはコラーゲ
ンであることを特徴とする（１）記載の神経細胞の培養
基質。
ンであることを特徴とする（１）記載の神経細胞の培養
基質。
本発明において使用されるプラスチック基質は、フォト
レジストをコートしてパターンを形成することができる
材質であればいずれのものを用いてもよいが、フォトレ
ジスト液に含まれる溶剤に対する耐溶剤性、レジストを
乾燥する際に必要とされる熱に対する耐熱性等が必要で
ある。また細胞を培養した状態で顕微鏡観察することが
できるという観点から透明性の高いものが好ましい。こ
のようなことから、ポリエーテルスルホン、ポリスルホ
ン、ポリメチルペンテン、ポリエステル等が好ましい。
レジストをコートしてパターンを形成することができる
材質であればいずれのものを用いてもよいが、フォトレ
ジスト液に含まれる溶剤に対する耐溶剤性、レジストを
乾燥する際に必要とされる熱に対する耐熱性等が必要で
ある。また細胞を培養した状態で顕微鏡観察することが
できるという観点から透明性の高いものが好ましい。こ
のようなことから、ポリエーテルスルホン、ポリスルホ
ン、ポリメチルペンテン、ポリエステル等が好ましい。
形状は、フォトレジストをコートする点、細胞を培養す
る点から、シート状、フィルム状態が好ましい。厚さは
特に限定されるものではないが、取り扱い易さから５０
〜１０００μｍ程が好適である。
る点から、シート状、フィルム状態が好ましい。厚さは
特に限定されるものではないが、取り扱い易さから５０
〜１０００μｍ程が好適である。
フォトレジストは、半導体素子作製用に使われている高
解像度のものがすべて使用できるが、ポジ型フォトレジ
ストであるノボラック−ジアゾキノン型が使い易く、か
つ各社から多数の品種が上布されている点で好適である
が、プラスチック基質の耐溶剤性を考慮してより適切な
ものを使用すればよい。パターンの線幅は、１〜５０μ
ｍの間が好適である。細胞が接着し安定な伸展形態をと
るには５０μｍの幅があれば充分である。神経突起の伸
展を見るためには最低１〜２μｍの幅が必要である。こ
の線幅をもったパターンの長さは神経突起を充分伸展さ
せた形態をとらせるために１００μｍ以上は必要である
。短かすぎては分化形態の観察が充分行えないことから
不適当である。
解像度のものがすべて使用できるが、ポジ型フォトレジ
ストであるノボラック−ジアゾキノン型が使い易く、か
つ各社から多数の品種が上布されている点で好適である
が、プラスチック基質の耐溶剤性を考慮してより適切な
ものを使用すればよい。パターンの線幅は、１〜５０μ
ｍの間が好適である。細胞が接着し安定な伸展形態をと
るには５０μｍの幅があれば充分である。神経突起の伸
展を見るためには最低１〜２μｍの幅が必要である。こ
の線幅をもったパターンの長さは神経突起を充分伸展さ
せた形態をとらせるために１００μｍ以上は必要である
。短かすぎては分化形態の観察が充分行えないことから
不適当である。
パターンの形状は、神経突起の伸展形態から考えて放射
状が好ましい。最適な形状パターンは、この放射状単位
を多数持つものが良好であるが、用途により考慮される
べきものであって特に限定されるものではない。フォト
レジストは、スピンナー法によりコートして、市販の露
光装置を用いて所定のパターンを形成する。非パターン
部を除去、ベーキングを行い、フォトレジストのパター
ンを形成する。各条件はレジスト種により異るためそれ
ぞれの至適条件で行う。フォトレジストのパターンを形
成したプラスチック基質にアンモニアの低温プラズマ処
理を行いプラスチック基質表面にアミノ基を導入する。
状が好ましい。最適な形状パターンは、この放射状単位
を多数持つものが良好であるが、用途により考慮される
べきものであって特に限定されるものではない。フォト
レジストは、スピンナー法によりコートして、市販の露
光装置を用いて所定のパターンを形成する。非パターン
部を除去、ベーキングを行い、フォトレジストのパター
ンを形成する。各条件はレジスト種により異るためそれ
ぞれの至適条件で行う。フォトレジストのパターンを形
成したプラスチック基質にアンモニアの低温プラズマ処
理を行いプラスチック基質表面にアミノ基を導入する。
プラズマ処理の条件は、０、０１ Ｔｏｒｒ程度に減圧
したチェンバー内にアンモニアガスを導入し、０．０５
〜０．５ Ｔｏｒｒの圧力にして、５〜１００Ｗの電力
となるよう電圧を印加し、０．１〜５分処理する。１３
．５６ＭＨｚの高周波を用いることが望ましい。なおプ
ラズマ処理装置の機種、電極間距離、チェンバーの大き
さ等により特性が異なるため適切な条件を選んで行えば
よい。
したチェンバー内にアンモニアガスを導入し、０．０５
〜０．５ Ｔｏｒｒの圧力にして、５〜１００Ｗの電力
となるよう電圧を印加し、０．１〜５分処理する。１３
．５６ＭＨｚの高周波を用いることが望ましい。なおプ
ラズマ処理装置の機種、電極間距離、チェンバーの大き
さ等により特性が異なるため適切な条件を選んで行えば
よい。
次に、この処理基質をグルタルアルデヒド水溶液と反応
させる。濃度は、１〜１０％、反応は、１０〜６０分、
室温で行う。この反応を終了した基質は、純水中でリン
スを数回行う。余分な水分を除いた後、細胞接着性蛋白
質溶液を基質表面に滴下し、４°Ｃで１〜５時間静置す
る。細胞接着性蛋白質としては神経細胞の接着性が高い
ラミニン。
させる。濃度は、１〜１０％、反応は、１０〜６０分、
室温で行う。この反応を終了した基質は、純水中でリン
スを数回行う。余分な水分を除いた後、細胞接着性蛋白
質溶液を基質表面に滴下し、４°Ｃで１〜５時間静置す
る。細胞接着性蛋白質としては神経細胞の接着性が高い
ラミニン。
コラーゲンが適当である。
ラミニンを生理的緩衝液に溶かした水溶液またはコラー
ゲンの酸性溶液を濃度１〜０．５％で使用する。この他
にも神経細胞の接着性の高い蛋白質として、Ｎ−ＣＡＭ
、Ｎ−力ドヘリン、セルタック（コラボレイテイブ・リ
サーチ社）等を用いることもできる。蛋白質は、天然物
であり由来により活性が異るが、高活性のものを低濃度
で用いることが好ましい。最後にフォトレジストの除去
を行うために、エタノールまたはメタノール中に上記基
質を浸漬し、超音波洗浄を行う。１〜５回洗浄した後純
水でリンスする。このようにして調製した基質は４°Ｃ
のリン酸塩緩衝液中で安定に保存することができる。
ゲンの酸性溶液を濃度１〜０．５％で使用する。この他
にも神経細胞の接着性の高い蛋白質として、Ｎ−ＣＡＭ
、Ｎ−力ドヘリン、セルタック（コラボレイテイブ・リ
サーチ社）等を用いることもできる。蛋白質は、天然物
であり由来により活性が異るが、高活性のものを低濃度
で用いることが好ましい。最後にフォトレジストの除去
を行うために、エタノールまたはメタノール中に上記基
質を浸漬し、超音波洗浄を行う。１〜５回洗浄した後純
水でリンスする。このようにして調製した基質は４°Ｃ
のリン酸塩緩衝液中で安定に保存することができる。
本発明の基質を用いて神経細胞の培養を行うとその分化
が明瞭に制御された形態となり、容易に分化形態を識別
することができる長所がある。このことにより神経の情
報伝達や神経細胞への薬物の効果等を正確に調べること
が可能になる等神経細胞の機能の研究及び応用の面で本
発明の培養基質は非常に有用なものであり、その産業上
の利用性はきわめて大きいものである。
が明瞭に制御された形態となり、容易に分化形態を識別
することができる長所がある。このことにより神経の情
報伝達や神経細胞への薬物の効果等を正確に調べること
が可能になる等神経細胞の機能の研究及び応用の面で本
発明の培養基質は非常に有用なものであり、その産業上
の利用性はきわめて大きいものである。
以下実施例により本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１
プラスチック基質として、１００μｍ厚の１０ｃｍＸ
１０ ｃｍのフィルムを用いた。材質は、ポリエーテル
スルホン、ポリスルホン（いずれも住友ベークラフト社
製）の２種を用いた。
１０ ｃｍのフィルムを用いた。材質は、ポリエーテル
スルホン、ポリスルホン（いずれも住友ベークラフト社
製）の２種を用いた。
このプラスチック基質に、ポジ型フォトレジスト０ＦＰ
Ｒ−５０００（東京応化工業社製）をスピンナー法によ
り膜厚１．５μｍにコートした。露光装置Ｎ５Ｒ−１５
０５Ｃ；３Ａ にコン社製）を用いて、２０μｍ幅長さ
１０００μｍの放射状パターンをフォトマスクで露光し
形成した。露光時間は、１５０ｍｓ、現像液ＮＷＤ−Ｗ
（東京応化工業社製）で現像後洗浄、８０°Ｃで２０
分乾燥した。この基質をプラズマ装置（サムコ社製ＰＤ
１０Ｓ）を用いてアンモニアプラズマ処理した。
Ｒ−５０００（東京応化工業社製）をスピンナー法によ
り膜厚１．５μｍにコートした。露光装置Ｎ５Ｒ−１５
０５Ｃ；３Ａ にコン社製）を用いて、２０μｍ幅長さ
１０００μｍの放射状パターンをフォトマスクで露光し
形成した。露光時間は、１５０ｍｓ、現像液ＮＷＤ−Ｗ
（東京応化工業社製）で現像後洗浄、８０°Ｃで２０
分乾燥した。この基質をプラズマ装置（サムコ社製ＰＤ
１０Ｓ）を用いてアンモニアプラズマ処理した。
０、 ＯＩ Ｔｏｒｒに減圧後、アンモニアガスを導入
し、０、２ Ｔｏｒｒで５０Ｗ、２分処理した。次に２
％グルタルアルデヒド水溶液（和光純薬社製）に、３０
分浸漬した。純水で３回リンスした後、余分の水を除き
、１ ｍ ｇ ／ ｍ ｌのラミニン液（生理食塩水で
調製、シグマ社製）を滴下し、４°Ｃで３時間静置した
。また０、３％の酸性コラーゲン液を用いた場合の試料
も調製した。反応後、エタノール中に浸漬し、超音波洗
浄を３分／回で２回行った。純水で洗浄後、リン酸塩緩
衝液中に保存した。
し、０、２ Ｔｏｒｒで５０Ｗ、２分処理した。次に２
％グルタルアルデヒド水溶液（和光純薬社製）に、３０
分浸漬した。純水で３回リンスした後、余分の水を除き
、１ ｍ ｇ ／ ｍ ｌのラミニン液（生理食塩水で
調製、シグマ社製）を滴下し、４°Ｃで３時間静置した
。また０、３％の酸性コラーゲン液を用いた場合の試料
も調製した。反応後、エタノール中に浸漬し、超音波洗
浄を３分／回で２回行った。純水で洗浄後、リン酸塩緩
衝液中に保存した。
Ｉｃｍ角に上記フィルムを切ったサンプル片を１２ウエ
ルプレートに入れて神経細胞の培養を行った。
ルプレートに入れて神経細胞の培養を行った。
細胞の培養試験には交感神経細胞のモデルとして使われ
るＰＣＩ２細胞（ラット由来細胞株）を用いた。培地は
ＤＭＥＭ （田水製薬社製）に１０％の牛胎児血清と５
％の馬血清を添加したものを用いた。２Ｘ１０’個／
ｍ Ｅの細胞濃度の液を１ｍ！／ウェル加え、１日培養
後、血清を除きＮ０Ｆ（シグマ社製）５０ｎｇ／ｍ４２
１度のＤＭＥＭに培地交換し、５日間培養した。いずれ
の試料の場合もＰＣ１２細胞の神経突起はラミニン、コ
ラーゲンの各パターンと同じ分化形態をとっていた。
るＰＣＩ２細胞（ラット由来細胞株）を用いた。培地は
ＤＭＥＭ （田水製薬社製）に１０％の牛胎児血清と５
％の馬血清を添加したものを用いた。２Ｘ１０’個／
ｍ Ｅの細胞濃度の液を１ｍ！／ウェル加え、１日培養
後、血清を除きＮ０Ｆ（シグマ社製）５０ｎｇ／ｍ４２
１度のＤＭＥＭに培地交換し、５日間培養した。いずれ
の試料の場合もＰＣ１２細胞の神経突起はラミニン、コ
ラーゲンの各パターンと同じ分化形態をとっていた。
これに対して、ラミニン、コラーゲンを用いないで同手
法により調整した基質では全く制御効果か認められなか
った。
法により調整した基質では全く制御効果か認められなか
った。
実施例２
プラスチック基質にコロナ放電処理したポリメチルペン
テン（三井石油化学社）、ポリエステル（東し社）を用
いて、実施例１と同じくラミニン。
テン（三井石油化学社）、ポリエステル（東し社）を用
いて、実施例１と同じくラミニン。
コラーゲンのパターンを形成した基質を調製した。
ＰＣ１２細胞を用いて培養試験を行ったところ実施例１
と同様、神経突起の分化形態が制御されている事が認め
られた。
と同様、神経突起の分化形態が制御されている事が認め
られた。
Claims (3)
- （１）プラスチック基質にフォトレジストのパターンを
形成し、アンモニアプラズマ処理を行つた後、グルタル
アルデヒド溶液と反応させ、次いで細胞接着性蛋白質を
コートし、最後にフォトレジストを除去することを特徴
とする神経細胞の培養基質。 - （２）プラスチック基質が、ポリエーテルスルホン、ポ
リスルホン、ポリメチルペンテンまたはポリエステルで
あることを特徴とする請求項第１項記載の神経細胞の培
養基質。 - （３）細胞接着性蛋白質が、ラミニン、またはコラーゲ
ンであることを特徴とする請求項第１項記載の神経細胞
の培養基質。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2148614A JP2609556B2 (ja) | 1990-06-08 | 1990-06-08 | 神経細胞の培養に用いる基質 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2148614A JP2609556B2 (ja) | 1990-06-08 | 1990-06-08 | 神経細胞の培養に用いる基質 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0440890A true JPH0440890A (ja) | 1992-02-12 |
| JP2609556B2 JP2609556B2 (ja) | 1997-05-14 |
Family
ID=15456724
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2148614A Expired - Fee Related JP2609556B2 (ja) | 1990-06-08 | 1990-06-08 | 神経細胞の培養に用いる基質 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2609556B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05176753A (ja) * | 1991-12-26 | 1993-07-20 | Nec Corp | 細胞培養用基板とその作製方法 |
| WO1999061653A3 (en) * | 1998-05-27 | 2000-04-20 | Syntrix Biochip | Light-mediated regional analysis of biologic material |
| US6159681A (en) * | 1997-05-28 | 2000-12-12 | Syntrix Biochip, Inc. | Light-mediated method and apparatus for the regional analysis of biologic material |
| JP2002542883A (ja) * | 1999-04-30 | 2002-12-17 | マサチューセッツ ジェネラル ホスピタル | 微細加工した２次元鋳型を用いる血管新生組織の加工 |
-
1990
- 1990-06-08 JP JP2148614A patent/JP2609556B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05176753A (ja) * | 1991-12-26 | 1993-07-20 | Nec Corp | 細胞培養用基板とその作製方法 |
| US6159681A (en) * | 1997-05-28 | 2000-12-12 | Syntrix Biochip, Inc. | Light-mediated method and apparatus for the regional analysis of biologic material |
| WO1999061653A3 (en) * | 1998-05-27 | 2000-04-20 | Syntrix Biochip | Light-mediated regional analysis of biologic material |
| JP2002542883A (ja) * | 1999-04-30 | 2002-12-17 | マサチューセッツ ジェネラル ホスピタル | 微細加工した２次元鋳型を用いる血管新生組織の加工 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2609556B2 (ja) | 1997-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wyart et al. | Constrained synaptic connectivity in functional mammalian neuronal networks grown on patterned surfaces | |
| US5470739A (en) | Cell culture support having patterned substance that influences cell adhesion | |
| Akers et al. | Promotion of retinal neurite outgrowth by substratum-bound fibronectin | |
| Spargo et al. | Spatially controlled adhesion, spreading, and differentiation of endothelial cells on self-assembled molecular monolayers. | |
| Scholl et al. | Ordered networks of rat hippocampal neurons attached to silicon oxide surfaces | |
| JP4567936B2 (ja) | 細胞培養用支持体材料、細胞の共培養方法およびそれより得られる共培養細胞シート | |
| JPH089960A (ja) | 細胞培養用基板とその作製方法および細胞配列形成方法 | |
| Kang et al. | Agarose microwell based neuronal micro-circuit arrays on microelectrode arrays for high throughput drug testing | |
| Gaur et al. | RPE conditioned medium stimulates photoreceptor cell survival, neurite outgrowth and differentiation in vitro | |
| EP2977447B1 (en) | Cell sheet laminate containing myoblasts and method for producing same | |
| Wong et al. | Nerve growth-promoting factor produced in culture media conditioned by specific CNS tissues of the snailHelisoma | |
| Song et al. | Engineering of brain-like tissue constructs via 3D Cell-printing technology | |
| JPH0440890A (ja) | 神経細胞の培養に用いる基質 | |
| Ndyabawe et al. | Brain-on-a-chip device for modeling multiregional networks | |
| Pixley et al. | Preferential adhesion of brain astrocytes to laminin and central neurites to astrocytes | |
| JP2609559B2 (ja) | 組織系細胞の培養に用いる基質 | |
| JP3126269B2 (ja) | 培養基質 | |
| Nicolau et al. | Control of the neuronal cell attachment by functionality manipulation of diazo-naphthoquinone/novolak photoresist surface | |
| US7041343B1 (en) | Method for providing a substrate structure for oriented neurite outgrowth, substrate structure, and device for monitoring neuron | |
| Matsuzawa et al. | Effects of organosilane monolayer films on the geometrical guidance of CNS neurons | |
| US20150276707A1 (en) | Cell assays | |
| JPH0491780A (ja) | 神経線維の成長方向制御用基材およびその製法、神経線維の成長方向制御法ならびに神経線維の回路網 | |
| JPH04330277A (ja) | 培養基質 | |
| JPH0284174A (ja) | 細胞培養基板およびその製法 | |
| JPH08173144A (ja) | ラミニンコート細胞培養器及びその製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090213 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090213 Year of fee payment: 12 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100213 Year of fee payment: 13 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |