JPH0438729B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明はテトロカルシン類の少なくとも１種を
含有するピロプラズマ病もしくはマラリアの予防
および治療に有効な抗ピロプラズマ剤もしくは抗
マラリア剤に関する。 ピロプラズマ病は、バベシア科とタイレリア科
の原虫を合わせた広義のピロプラズマに起因した
原虫病で、ダニ類が媒介し発熱、貧血、黄疸、血
色尿素を主徴とした急性または慢性の疾病であ
る。古来より各種治療法が試みられているが、防
御することが非常に困難で、世界各地で頻発し経
済的損失も莫大なものがある。一方、国内に於い
ても放牧牛に多発し、また近年舎飼牛にも増加の
傾向にあり問題化している。 薬剤としては、８−アミノキノリン誘導体など
があるが、昨今とみに耐性株の出現が多く効果の
点、毒性等からみて実用的価値が殆ど認められな
いのが現状である。 そこで本発明者らは、小動物寄生のバペシア・
ロドハイニ（Babesia rodhaini）（以下BRとい
う）を用い有効な抗ピロプラズマ剤について広く
研究を重ねているうちに、テトロカルシン類が強
い抗ピロプラズマ作用を有することを見い出し本
発明を完成するに至つた。更にタイレリア・サー
ジエンテイ（Theileria sergenti）（以下TSとい
う）（薬剤耐性株を含む）を摘脾牛に感染させ、
その抗ピロプラズマ作用を確認したところ非常に
強い抗ピロプラズマ作用が認められ実用的価値に
ついても明らかとなつた。 テトロカルシン類は本出願人によつて出願され
た１群の抗生物質であり、次の構造を有する。 テトロカルシンＡ：上記化合物 テトロカルシンＢ：シユガーＤにかえてＨ テトロカルシンＦ：シユガーＣ及びＤにかえてＨ テトロカルシンE₁：シユガーＢ〜ＤにかえてＨ テトロカルシンE₂：シユガーＢ〜Ｄにかえてア
セチル、Ａ環中の

【式】にかえてHO − テトロカルシンＦ−１：シユガーＡ〜Ｄにかえて
Ｈ テトロカルシンＦ−２：シユガーＡ〜Ｄにかえて
Ｈ、シユガーＥにかえてＨ テトロカルシンＧ：23位 CHOにかえてCH₂OH テトロカルシンＨ：23位 CHOにかえてCO₂H 又、上記以外にも類似構造を有するものとして
テトロカルシンＣ、Ｄ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、Ｍなど
がある。 又、これらの化合物の９、21位がアシル基とな
つたもの（ジアシレート）、９、17、21位がアシ
ル基となつたもの（トリアシレート）も含まれ
る。これらのテトロカルシン類の出願は次の通り
であるが、テトロカルシンの名称は用いずDC−
11−Ａ、DC−11−Ｂ等DC−11の名称を付してい
る場合がある：特開昭54−138501（特公昭56−
38159）、特開昭55−79322、56−139500、米国特
許第4346075（以上テトロカルシンＡ）、特開昭56
−1159794、56−122392（以上テトロカルシンＢ）、
特開昭56−75500、56−122392（以上テトロカルシ
ンＣ）、特開昭56−122392（テトロカルシンＤ）、
特開昭57−38796（テトロカルシンE₁、E₂）、特開
昭57−53498（テトロカルシンＦ、Ｇ、Ｈ）、特開
昭57−171997（テトロカルシンＩ、Ｊ、Ｋ、Ｌ、
Ｍ）、特開昭57−7455（テトロカルシンＦ−１、Ｆ
−２）、特開昭57−7479（ジアシレート、トリアシ
レート）。 テトロカルシン類は上記のごとく動物、特に牛
に対する抗ピロプラズマ剤として有用であるが、
さらに研究の結果ヒト又は動物（例えば家きん）
の抗マラリア剤としても有用なことが判明した。 テトロカルシン類は、ヒトまたは他の動物に経
口的に、または非経口的に投与しうる。すなわ
ち、注射剤の場合は水又は生理食塩水に直接溶解
してもよく又、抗酸化剤（ピロ亜硫酸ナトリウム
等）、無痛化剤（塩酸プロカイン等）、保存剤（パ
ラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸プ
ロピル等）、PH調整剤（水酸化ナトリウム等）等
をさらに加えてもよい。 又、テトロカルシン類は希釈剤（例えば、デン
プン、シヨ糖、乳糖、炭酸カルシウム、カオリン
など）、増量剤（例えば、乳糖、デンプン、炭酸
カルシウム、リン酸カルシウム、カオリン、ベン
トナント、タルクなど）、滑沢剤（例えば、ステ
アリン酸、パラフイン、ホウ酸、シリカ、安息香
酸ナトリウム、ポリエチレングリコールなど）な
どの製薬成分を添加して、粉末、錠剤、顆粒剤、
カプセル、坐剤、懸濁剤、乳剤などに成型して投
与することもできる。 テトロカルシン類を抗ピロプラズマ剤として使
用する場合には、投与量0.1〜20.0mg／Kg（特に
0.32〜9.6mg／Kg）（テトロカルシン類として）、
投与回数は１日１回投与で１〜７回を１クールと
し、連続又は間歇的に投与する。投与方法として
は静脈内注射が一般的であるが、皮下、筋注、腹
腔内投与、経口投与も可能である。 テトロカルシン類を抗マラリア剤として使用す
る場合には、投与量0.5〜10mg／Kg（テトロカル
シン類として）とし、投与回数、投与方法は上記
と同様でよい。 以下に本発明の態様を実施例によつて示す。 実施例 １ BR感染マウスより採血し、生理食塩水で原虫
数が8.6×10⁵コ／0.2mlとなるように感染血球を調
製し、１群５匹ずつのマウスにi.p.接種し感染マ
ウスとした。 テトロカルシンＡ及びＢは、全群感染と同時か
ら１匹当り１日１回連続７日間皮下注射した。テ
トロカルシンＡの投薬量は、第１表に示すものを
0.1mlずつとし、テトロカルシンＢは0.1ml／0.1ml
液を0.1mlずつとした。 マウスの生存率は第１表に示される。 無投薬対照群５匹は７日目に１匹、８日目に４
匹と全例が死亡し剖検で著名な貧血、肝の腫大、
貧血、脾の腫大、腸間膜リンパ節の腫大が明瞭で
時に黄疸も著名に認められた。赤血球内にはBR
の寄生が高度に認められる。 一方テトロカルシンＡを0.025mg／日／マウス
以上及びテトロカルシンB0.1mg／日／マウスを
BR感染当日から連続７日間投薬すると全例が１
ケ月以上生き残り有効である。

【表】 実施例 ２ 実施例１と同様の方法で作り出した感染マウス
を用いて試験をした。テトロカルシンＡを第２表
に示す投薬量で投与し、皮下投薬回数は１〜５回
と短縮した。その結果を第２表に示す。 無投薬対照群５匹は９日目までに全例が死亡
し、剖検所見、原虫検索成績は実施例１の対照群
と同様であつた。

【表】

【表】 実施例 ３ 実施例１と同様の方法で試験を実施した。投薬
は0.1mlで、投薬スケジユールは第３表に示され
る。

【表】

【表】 ＊ 感染当日を０日目とする。
血液塗抹検査：経過の途中で一部の例につき血液
塗抹を作成し、BR感染の有無を検査した チヤレンジ：感染後１カ月以上生き残つた群で
は、一部のマウス（例えば全例生き残つた群で
は５匹中３匹）について、接種時と同数のBR
の腹腔内接種によりチヤレンジを行つた。 血清反応：チヤレンジ後生き残つたマウスはチヤ
レンジしなかつた生き残りのマウスとともに、
チヤレンジ後１カ月以上経過してから殺処分し
血漿を採取した。この血漿とパラシテミア
（Parasitemia）（赤血球中に原虫がでてくる状
態をいう）最盛期に採取した血漿抗原との間に
寒天ゲル内沈降反応を実施した。結果を第４表
に示す。

【表】 0.4mg、１回投薬群では０、２及び４日目投薬、
0.2mg、２回群では０〜１、２〜３、４〜５及び
６〜７日目に投薬、0.1mg、３回群では４〜６日
目投薬、0.05mg、７回投薬により、初感染後全例
生き残り有効であつた。 感染通過中に調べたパラシテミア発現の有無、
生き残り例に対するチヤレンジの成績及び最終殺
処分時の血清の寒天ゲル内沈降反応の成績などを
加えて総合的に見ると、途中のパラシテミアが陰
性でチヤレンジ後にマウスが全滅したのは、及
び群だけで感染初期に0.4mg、１回または0.2
mg、２回投与するときわめて有効なことが明らか
となつた。 実施例 ４ 小動物寄生のBRを用いた試験の結果、テトロ
カルシンＡ及びテトロカルシンＢが非常に有効で
あることが明らかとなつたので、前者テトロカル
シンＡについて牛を用いて、TSに対し有効且つ
実用性の有無を調べた。 脾臓を摘出した200Kg前後の牛にTS福島株を皮
下に１回１×10⁹個宛接種感染させTS感染牛とし
た。 投薬方法はすべて静脈内注射とし、投薬量は１
頭当り0.32mg／Kg及び3.2mg／Kgで、投薬回数は
２〜３回連日又は隔日とした。その結果は第１〜
３図に示される。 0.32mg／Kg／日／牛の場合、TSの寄生率が25
％を越えた時点で１日１回連続３日間投薬した。 3.2mg／Kg／日／牛２回投薬の場合は、TSの寄
生率が23％を越えた時点で１回投薬した。寄生率
が投薬７日目3.5％となつたので更に同量を１回
投薬したところ２日目に0.1％と可成りの減少が
認められた。 3.2mg／Kg／日／牛隔日３回投薬の場合は、TS
の寄生率が22.5％を越えた時点から投薬を開始し
た。寄生率は急速に低下し投薬終了後４日目には
0.1％、６日目には０％と減少し有効であること
が明らかとなつた。 実施例 ５ 実施例４と同様の方法でTS感染牛を作り出し、
テトロカルシンＡの効力を調べた。 テトロカルシンＡの投薬量は１頭当たり6.4
mg／Kgで隔日２〜３回静脈内投薬した。結果は第
４，５図に示される。 6.4mg／Kg／日／牛隔日２回投薬の場合TSの寄
生率が14％を越えた時点から投薬を開始した。寄
生率は急速い低下減少し、投薬終了後３日目には
1.0％、６日目には０％となり有効であることが
明らかとなつた。 6.4mg／Kg／日／牛隔日３回投薬の場合TSの寄
生率が20％を越えた時点から投薬を開始した。寄
生率は投薬終了日に既に0.6％となり、２日目
0.05％、３日目には０％となり、きわめて強い抗
ピロプラズマ作用が認められた。その後も寄生率
０％の状態が７週間以上続き抗ピロプラズマ作用
の持続性も認められた。 実施例 ６ 実施例４と同様の方法でTS感染牛を作り出し
テトロカルシンＡと、市販の抗ピロプラズマ剤で
ある、ジミナジンアセチユレート製剤（ガナゼツ
ク）及び８−アミノキノリン製剤（パマキン）と
の効力比較試験を実施した。 テトロカルシンＡの投薬量は１頭当り6.4mg／
Kg隔日２回静脈内投薬とし、ガナゼツクは１頭当
り10.0mg／Kg連続２日間筋肉内投薬、パマキンは
１頭当り1.6mg／Kg連続２日間皮下注射した。 投薬は、それぞれ牛のTS寄生率が20％を越え
た時点で実施した。その結果テトロカルシンＡを
投薬した牛は寄生率が急速に低下減少し、４日目
には1.5％、７日目には０％となり有効であるこ
とが明らかとなつた。 一方、ガナゼツク投薬牛は、６日目に５％まで
寄生率が低下減少したが、それ以後は殆ど減少せ
ず、14日後には逆に15％まで増加し、効果が認め
られなかつた。 パマキン投薬牛は、６日目に10％まで寄生率が
低下減少したが、それ以後は殆ど減少せず14日後
には、増加傾向が認められ、効果はなかつた。 実施例 ７ 実施例４と同様の方法でTS感染牛を作り出し、
皮下注射時のテトロカルシンＡの効力を調べた。 テトロカルシンＡの投薬量は3.2mg／Kg及び6.4
mg／Kg隔日２回とし、TSの寄生率が25％を越え
た時点から投薬を開始した。 3.2mg／Kg隔日２回投薬の場合、投薬終了７日
目には0.2％となり有効であることが明らかとな
つた。 6.2mg／Kg隔日２回投薬の場合、投薬終了３日
目には1.2％、６日目には０％となり、静脈内投
投薬の場合と同様、有効であることが明らかとな
つた。なお、投薬時における硬結、浮腫、発熱等
の副作用は全く認められなかつた。 実施例 ８ テトロカルシンＡ投薬による牛の安全性 牛１頭当たり、0.32mg／Kg〜20.0mg／Kgを日１
回連続２〜７日間静脈内、皮下、筋肉内、腹腔
内、経口投薬しても発熱、食欲不振、嘔吐、疼
痛、硬結、浮腫等、臨床所見、及び血液検査所見
からの副作用は全く認められなかつた。 実施例 ９ プラスモデイウム・ベルガイ（Plasmodium
berghei）（以下PBという）感染マウスより採血
し生理食塩水で原虫数が約２×10⁶個／10.2mlと
なるように感染血球を調製し、１群５匹ずつのマ
ウスにi.p.接種し感染マウスとした。テトロカル
シンＡは全群感染と同時から１匹あたり１日１回
連続７日間皮下注射し、経過を観察した。テトロ
カルシンＡの投薬量は0.025、0.05および0.1mg／
マウス／日とした。 その結果、無投薬対照群５匹は７日目に２匹、
８日目に２匹、９日目に匹と全例が死亡し、剖検
時、全例に感染血球を認めた。 一方、テトロカルシンＡ群は0.025mg／マウ
ス／日の場合、連続７日間投与しても８日目に１
匹、10日目に２匹、11日目に２匹と全例が死亡
し、無投薬対照区とあまり差が認められなかつ
た。 0.05mg／マウス／日連続７日間投薬群16日目、
19日目、20日目、25日目に各１匹ずつ死亡した
が、１匹は40日目以上生残し若干効果が認められ
た。 0.1mg／マウス／日連続７日間投薬群では全例
全く発症がみられず40日以上生残し有効であるこ
とが明らかとなつた。この群のマウスは15日目に
尾静脈から採血して、マラリア原虫の検査を行つ
たが全例陰性であつた。また44日目に殺処分した
が全例感染血球を認めず剖検でも著変を認めず、
肝、脾、肺、腎、心、胸腺、脳の塗抹標本中にも
マラリア原虫を認めなかつた。 そこで５匹分の上記７臓器をプールして生理食
塩水懸濁液とし、２匹を２代目マウスにi.p.接種
した。２代目マウスは２匹とも全く発症せず経過
したので接種後36日目に殺処分した。剖検で著変
を認めず、肝、脾、肺、腎、心、胸腺の臓器塗抹
標本中にマラリア原虫を認めず、薬の効果が明ら
かとなつた。 実施例 10 実施例９と同様の方法で作り出したPB感染マ
ウスを用いて試験を行つた。 テトロカルシンＡの投薬量は１匹あたり0.1、
0.2及び0.4mg／マウス／日とし、皮下投薬回数は
１日１回７日間連続とした。 その結果、無投薬対照群は８日目までに全例死
亡したがテトロカルシンＡを0.1mg／マウス／日
以上投薬した群は全例が発症することなく経過し
生残つたので40日目に殺処分した。この間15日目
および殺処分時の原虫検査成績は陰性であり殺処
分時に初代マウスの臓器乳剤をi.p.接種した２代
目マウスも発病することなく経過し、40日目に殺
処分したが、原虫検査成績は陰性であり薬の効果
が認められた。 実施例 11 実施例９と同様の方法で作り出したPB感染マ
ウス１群５匹を用いて試験を行つた。 テトロカルシンＢの投薬量は１匹あたり0.1、
0.2及び0.4mg／マウス／日とし皮下投与回数は１
日１回７日間連続とした。その結果、無投薬対照
群５匹は８日目までに全例死亡し、剖検時、全例
に感染血球が認められた。 一方、テトロカルシンＢ投与群は0.1mg／マウ
ス／日の場合、生存日数の延長が若干みられたが
10日目、13日目、17日目、20日目、23日目に各１
匹ずつ計５匹全部死亡した。 0.2mg及び0.4mg／マウス／日の場合は全例が発
症することなく経過し生残つたので40日目に殺処
分した。この間15日目および殺処分時に原虫検査
成績は陰性であり殺処分時初代マウスの臓器乳剤
をi.p.接種した２代目マウスも発病することなく
経過し、40日目に殺処分したが、原虫検査成績は
陰性であり、薬の効果が認められた。

【図面の簡単な説明】

第１〜５図はTS感染摘脾牛に対するテトロカ
ルシンＡの投薬効果を示す。第１〜５図において
縦軸は赤血球1000個あたりの原虫寄生赤血球数を
示し、横軸は日数を示す。矢印は投与時点を示
し、各１つの矢印は第１図では0.32mg／Kg投与
を、第２，３図では3.2mg／Kg投与を、第４，５
図では6.4mg／Kg投与を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ テトロカルシン類の少なくとも１種を含有す
   る抗マラリア剤。