【発明の詳細な説明】[Detailed description of the invention]
(a) 発明の技術分野
本発明はコモノマーであるグルタミン酸ベンジ
ルの一部分がアミノアルコールによりグルタミン
誘導体に変換されたロイシン−グルタミン酸ベン
ジル共重合体（以下、単にアミノアルコールで変
性されたロイシングルタミン酸ベンジル共重合体
とも言う）を表面に有することにより、細胞が付
着しやすいことを特徴とする細胞培養用床材に関
するものである。
細胞培養用床材とは、細胞を培養する際に細胞
を多量に付着させて増殖をはかるために使用する
ものである。一般に、動物細胞は浮遊状態では増
殖せず、固体表面に付着してのみ増殖する性質を
有している。したがつてそのような細胞を培養す
るためには細胞を多量に付着する固体、つまり床
材が必要となる。
(b) 従来技術の説明
従来、細胞培養用床材はポリスチレン、ポリメ
タクリレートなどの合成高分子材料を用いて作製
されているが、これらの材料を用いた細胞培養用
床材では細胞が付着しにくい。
(c) 発明の目的
本発明は上記の問題をアミノアルコールで変性
されたロイシン−グルタミン酸ベンジル共重合体
を用いることにより、細胞付着性の高い細胞培養
用床材を提供することを目的とする。
(d) 発明の構成
本発明者は細胞の付着しやすい性質を有する材
料について種々研究を重ねたところ、アミノアル
コールで変性されたロイシン−グルタミン酸ベン
ジル共重合体は細胞を多量に付着させる性質を有
しており、細胞培養用床材として好適であること
を見い出し、本発明を完成するに致つた。
即ち、本発明の細胞培養用床材は、ロイシン−
グルタミン酸ベンジル共重合体をシート状、繊維
状、ビーズ状、中空糸状などの目的とする形状に
成型した後、その成型物をアミノアルコールで変
性させて得るか、あるいはあらかじめ他の材料で
目的とする形状に成型した後、その表面に本発明
のロイシン−グルタミン酸ベンジル共重合体を塗
布し、その後アミノアルコールで変性させて得
る。
本発明の共重合体構成素材としてのロイシン及
びグルタミン酸ベンジルはＤ体、Ｌ体、ラセミ体
でもよい。アミノ酸共重合体の分子量はその皮膜
が形成される程度であればよく、また共重合体の
グルタミン酸ベンジルの含量は５モル％から50モ
ル％が好ましい。変性剤としてのアミノアルコー
ルには、エタノールアミン、プロパノールアミ
ン、ヒドロキシベンジルアミンなどの肪肪族ある
いは芳香族のアミノアルコールの外、H2N
（C2H4O）2Hなどのアミノ化ポリエチレングリコ
ールなども用いられる。アミノアルコールと共重
合体との反応時間はアミノアルコールの種類と濃
度、温度、及び共重合体組成に応じて適当に選定
するが、いずれにしても反応により、床材の表面
部分のグルタミン酸ベンジル成分の一部分をアミ
ノアルコールによりグルタミン誘導体に変換させ
る。
(e) 発明の実施例
次に本発明を実施例によりさらに詳細に説明す
る。
実施例 １
Ｌ−ロイシンとＬ−グルタミン酸ベンジルとの
共重合体（ロイシンとグルタミン酸ベンジルとの
モル比＝７：３）のベンゼン溶液をガラス板上に
流延し、風乾して皮膜（膜厚約0.05mm）を得た。
この皮膜をエタノールでソツクスレー抽出を行つ
た後、乾燥した。この皮膜を３−アミノ−１−プ
ロパノール中に浸漬し、60℃で80時間反応させ、
エタノールで十分に洗浄後乾燥して膜を得た。
３−アミノ−１−プロパノールとの反応前後の
膜の全反射赤外吸収スペクトルの変化を比べると
1730、750、700cm-1のピークが反応後減少した。
この皮膜上で、人由来の上皮性細胞を含む培養
液（約10万個／ml）を接触させたまま、炭酸ガス
濃度５％、湿度100％、37℃の部屋に静置した。
17時間後、皮膜をリン酸緩衝液でかるく洗浄し、
皮膜上に付着している細胞の量を核染色法により
定量した。比較のため、ロイシン−グルタミン酸
ベンジル共重合体皮膜及び細胞培養用床材に使用
されているポリメタクリルレートを用いて同様の
細胞付着試験を行つた。皮膜に付着した細胞の量
を、標準試料に付着した細胞の量で割ることによ
り、細胞付着率を求めた。その結果を第１表に示
す。
(a) Technical Field of the Invention The present invention relates to a leucine-benzyl glutamate copolymer in which a portion of the comonomer benzyl glutamate is converted into a glutamine derivative with an amino alcohol (hereinafter simply referred to as a leucine-benzyl glutamate copolymer modified with an amino alcohol). The present invention relates to a bed material for cell culture, which is characterized by having a cell culture material (also referred to as a cell culture material) on its surface, thereby making it easy for cells to adhere to it. A cell culture bed material is used for culturing cells in order to allow a large amount of cells to adhere thereto in order to increase their proliferation. In general, animal cells do not grow in suspension, but only grow when attached to solid surfaces. Therefore, in order to culture such cells, a solid material, ie, a bed material, to which a large amount of cells can adhere is required. (b) Description of conventional technology Conventionally, cell culture bedding materials have been made using synthetic polymer materials such as polystyrene and polymethacrylate, but cell culture bedding materials made of these materials do not allow cells to adhere to them. Hateful. (c) Object of the Invention The object of the present invention is to solve the above-mentioned problem by using a leucine-benzyl glutamate copolymer modified with an amino alcohol, thereby providing a bed material for cell culture with high cell adhesion. (d) Structure of the Invention The present inventor has repeatedly conducted various studies on materials that have properties that allow cells to easily adhere to them, and has discovered that leucine-benzyl glutamate copolymer modified with amino alcohol has the property of allowing a large amount of cells to adhere to it. The present inventors have discovered that this material is suitable as a cell culture flooring material, and have completed the present invention. That is, the cell culture bed material of the present invention contains leucine-
After molding the benzyl glutamate copolymer into a desired shape such as a sheet, fiber, bead, or hollow fiber, the molded product can be obtained by denaturing it with amino alcohol, or it can be obtained by molding it with other materials in advance. After molding into a shape, the leucine-benzyl glutamate copolymer of the present invention is coated on the surface of the molded shape, and then denatured with amino alcohol. Leucine and benzyl glutamate as constituent materials of the copolymer of the present invention may be D-form, L-form, or racemic form. The molecular weight of the amino acid copolymer is sufficient as long as it forms a film, and the content of benzyl glutamate in the copolymer is preferably from 5 mol% to 50 mol%. Amino alcohols used as denaturants include aliphatic or aromatic amino alcohols such as ethanolamine, propanolamine, and hydroxybenzylamine, as well as H 2 N
(C 2 H 4 O) 2 H and other aminated polyethylene glycols are also used. The reaction time between the amino alcohol and the copolymer is appropriately selected depending on the type and concentration of the amino alcohol, the temperature, and the composition of the copolymer. A portion of is converted into a glutamine derivative using an amino alcohol. (e) Examples of the invention Next, the present invention will be explained in more detail using examples. Example 1 A benzene solution of a copolymer of L-leucine and benzyl L-glutamate (molar ratio of leucine and benzyl glutamate = 7:3) was cast onto a glass plate and air-dried to form a film (film thickness of approx. 0.05mm) was obtained.
This film was subjected to Soxhlet extraction with ethanol and then dried. This film was immersed in 3-amino-1-propanol and reacted at 60°C for 80 hours.
The membrane was thoroughly washed with ethanol and dried to obtain a membrane. Comparing the changes in the total reflection infrared absorption spectrum of the film before and after reaction with 3-amino-1-propanol
The peaks at 1730, 750, and 700 cm -1 decreased after the reaction. A culture solution containing human-derived epithelial cells (approximately 100,000 cells/ml) was left in contact with this film in a room at 37°C with a carbon dioxide concentration of 5% and humidity of 100%.
After 17 hours, the film was lightly washed with phosphate buffer, and
The amount of cells adhering to the membrane was quantified by nuclear staining. For comparison, a similar cell adhesion test was conducted using a leucine-benzyl glutamate copolymer film and polymethacrylate used in cell culture flooring. The cell attachment rate was determined by dividing the amount of cells attached to the film by the amount of cells attached to the standard sample. The results are shown in Table 1.
【表】
この表から、３−アミノ−１−プロバノールで
変性されたロイシン−グルタミン酸ベンジル共重
合体はポリメタクリレートより多量の細胞を付着
することが明らかである。
実施例 ２
ロイシンとグルタミン酸ベンジルとのモル比＝
７：３のかわりにロイシンとグルタミン酸ベンジ
ルとのモル比＝85：15を用いた以外は実施例１と
同様にして皮膜を調製した。
この膜をエタノールアミン中に浸漬し、60℃で
96時間反応させ、エタノールで十分に洗浄後乾燥
して膜を得た。
実施例 ３
実施例１におけるロイシン−グルタミン酸ベン
ジル共重合体皮膜をH2N（C2H4O）2H中に浸漬し、
70℃で88時間反応させ、エタノールで十分に洗浄
後乾燥して膜を得た。
(f) 発明の効果
本発明は以上説明したように、細胞付着性の多
いことを必要とする細胞培養用床材において、ア
ミノアルコールで変性されたロイシン−グルタミ
ン酸ベンジル共重合体を表面に成型することによ
り細胞の付着量を増すことが可能である。[Table] From this table, it is clear that the leucine-benzyl glutamate copolymer modified with 3-amino-1-probanol attaches more cells than polymethacrylate. Example 2 Molar ratio of leucine to benzyl glutamate =
A film was prepared in the same manner as in Example 1 except that the molar ratio of leucine to benzyl glutamate = 85:15 was used instead of 7:3. This membrane was immersed in ethanolamine and heated at 60°C.
The mixture was reacted for 96 hours, thoroughly washed with ethanol, and then dried to obtain a membrane. Example 3 The leucine-benzyl glutamate copolymer film in Example 1 was immersed in H2N ( C2H4O ) 2H ,
The reaction was carried out at 70°C for 88 hours, thoroughly washed with ethanol, and then dried to obtain a membrane. (f) Effects of the Invention As explained above, the present invention is a cell culture flooring material that requires high cell adhesion, in which a leucine-benzyl glutamate copolymer modified with amino alcohol is molded on the surface. This makes it possible to increase the amount of cells attached.