JPH04342533A - ＩｇＡ産生促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、病原性微生物の消化管
の粘膜への結合の阻害及びアレルゲン物質の消化管壁へ
の通過を阻止する作用を有する分泌型ＩｇＡの産生促進
活性を有するＩｇＡ産生促進剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】幼児・幼動物の成長発育に対して完全食
である乳汁には、免疫グロブリン、補体、リゾチームお
よびラクトフェリンなどの感染防御物質が含まれている
ことが知られている。

【０００３】ところで、乳汁中に分泌される免疫グロブ
リンである分泌型ＩｇＡは、強力な病原性を持つ微生物
の腸管粘膜への結合阻害および細菌毒素と特異的に結合
してその作用を不活化すること、アレルゲンとして作用
する食餌性の抗原と結合し、消化管壁を通過することを
防止してアレルギー反応を抑制すること等が知られてい
る。

【０００４】また、分泌型ＩｇＡのない育児粉乳で育て
られた人工栄養児およびＩｇＡ欠損症の患者では、食餌
性抗原に対するＩｇＧ抗体が高頻度に出現し、アレルギ
ー性の疾患や自己免疫疾患の発現頻度が高いことが知ら
れている。

【０００５】以上のように、ＩｇＡの優れた感染防御作
用が判明するにしたがい、感染防御やアレルギー反応の
抑制効果を有するＩｇＡを添加した飲食品の開発が望ま
れていた。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、ＩｇＡ
は供給が困難であり、高価であるばかりでなく、物性的
に不安定で、産業上で利用することはほとんど不可能で
ある。そのため、感染防御やアレルギー反応の阻止成分
としてＩｇＡを付与した食品は現在のところ未だ提供さ
れていない。

【０００７】ところで、ＩｇＡの産生部位は、消化管粘
膜固有層等の粘膜板プラズマ細胞や、唾液線、乳腺中に
存在しており、これらの産生細胞を非特異的に刺激する
ＩｇＡ産生促進活性（ＩｇＡ誘導能）を有する物質が確
認されている。

【０００８】本発明者らは、特開平２−２８００５９号
において、操作が容易で、大量に、短時間の間にＩｇＡ
誘導能を有する物質を検索する方法として、ＩｇＡ産生
細胞を多量に含むバイエル板細胞を無菌的に培養し、被
験物質無添加群のＩｇＡ量に対する被験物質添加群のＩ
ｇＡ量の割合によりＩｇＡ誘導能を有する物質を選別す
る方法を既に提案しており、更に、本法を用いて特定の
ビフィドバクテリウム属菌体が、強いＩｇＡ誘導能を有
することを既に見出している。

【０００９】本発明は、さらに有用なＩｇＡ誘導物質を
見い出し、病原性微生物に対する感染防御および抗アレ
ルギー作用を有するＩｇＡを食品などに添加することな
く、宿主の消化管内のバイエル板細胞等のＩｇＡの産生
部位を刺激し、ＩｇＡ産生活性を促進させてＩｇＡ産生
量を増加させ、優れた感染防御およびアレルギー反応を
阻止するＩｇＡ産生促進剤及びＩｇＡ産生促進能を有す
る飲食品を提供することを目的とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明に係るＩｇＡ産生
促進剤では、ビフィドバクテリウム属菌（以下、Ｂ菌と
記す）のプロトプラスト又はビフィドバクテリウム属菌
の細胞質膜を有効成分としたものである。

【００１１】

【作用】本発明では、先述の特開平２−２８００５９号
で開示した方法を用いて、Ｂ菌の菌体成分分画について
ＩｇＡの産生誘導能の有無を種々検討した。その結果、
本発明者らは、今回、Ｂ菌のプロトプラスト又はＢ菌の
細胞質膜分画に強いＩｇＡ誘導能を示すことを見い出し
本発明に至ったものである。本発明にかかる本プロトプ
ラスト又はＢ菌の細胞質膜分画を飲食品中に添加するこ
とにより、腸管内でＩｇＡ産生活性を促進する感染防御
等に有用な飲食品を提供することができる。

【００１２】Ｂ菌の菌体成分分画としては、■Ｂ菌を細
胞壁溶解酵素（Ｍ１酵素）で処理して細胞壁部分を取り
去ったプロトプラスト分画、■Ｍ１酵素可溶分画、■該
プロトプラストを有機溶媒で処理して得られる細胞質膜
分画、■リポタイコ酸分画、■Ｂ菌菌体を破砕し、核酸
分解酵素・たん白分解酵素処理して得られる細胞壁分画
、について検討を行ない、■プロトプラスト画分と、■
細胞質膜画分とに由来の菌体そのものより強いＩｇＡ誘
導能を示すことが確認された。この■プロトプラスト画
分と、■細胞質膜画分とに由来の菌体そのものより強い
ＩｇＡ誘導能を示すことは、特定のＢ菌に対するもので
はなく、一般のＢ菌に対して確認されたものである。

【００１３】即ち、後述する実施例では、本発明で用い
たＢ菌としては、先の特開平２−２８００５９号で開示
した高いＩｇＡ誘導能を示したビフィドバクテリウム・
ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｂｒｅａ
ｖｅ）ＹＩＴ４０６３，Ｂ．ブレーベ　　ＹＩＴ４０６
４　　及び、新生児、乳児、幼児、成人及び老人らの便
から分離し、Ｂ菌と同定された、Ｂ．ブレーベ　　Ｋａ
−６、Ｂ．ブレーベ　　９−７、Ｂ．ブレーベ　　ＫＮ
−６、Ｂ．ロンガム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
　ｌｏｎｇｕｍ）０４−６を用いたが、その何れも■プ
ロトプラスト画分と、■細胞質膜画分とに由来の菌体そ
のものより強いＩｇＡ誘導能を示すことが確認された。

【００１４】尚、後述する実施例でのＩｇＡ産生促進活
性の測定は、前述の特開平２−２８００５９号の方法に
よった。即ち、ＩｇＡ産生細胞を多量に含む腸管免疫組
織の一つであるバイエル板細胞を無菌的に培養し、培養
液に先の核成分を添加して所定期間培養し、該所定期間
培養後の培養液中のＩｇＡ産生細胞より分泌されたＩｇ
Ａ産生細胞より分泌されたＩｇＡ量を測定し、前記各種
乳成分無添加群のＩｇＡ量に対する前記各種乳成分無添
加群のＩｇＡ量の割合によりＩｇＡ誘導能（ＩｇＡ産生
促進活性）を測定したものである。

【００１５】

【実施例】本発明は、Ｂ菌株のプロトプラストもしくは
細胞質膜が、それら分画する以前の菌体に比べて、Ｉｇ
Ａ産生をより強く誘導することを提供するものである。

【００１６】今回用いたＢ菌株は、すでにＩｇＡ誘導能
の高い菌株として寄託されているＹＩＴ４０６３（微工
研菌寄第１０６７１号）及び、ＹＩＴ４０６４（微工研
菌寄第１０６７２号）と、新生児、乳児、幼児、成人及
び老人らの便から分離し、ビフィドバクテリウム属と同
定した数菌株とした。

【００１７】次に本発明のＢ菌株より分画したプロトプ
ラストもしくは、細胞質膜のＩｇＡ誘導能について、実
験例を示して説明する。なお実験に用いた菌体の分画方
法及び、ＩｇＡ誘導能の測定方法は次の通りである。

【００１８】（１）　菌体の分画 各Ｂ菌株はＧＡＭ培地（日水製薬）に接種し、嫌気条件
下、３７℃、４８時間培養した。これらの菌をリン酸緩
衝液で２回洗浄し、１００℃、３０分間熱処理したもの
を全菌体とし、分画の出発材料とした。

【００１９】全菌体を５ｍＭトリス−マレート緩衝液（
Ｔｒｉｓ−ｍａｌａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒ）（ｐＨ６．４
，２×１０−３Ｍ　　ＭｇＣｌ２　，０．１５Ｍ　　Ｎ
ａＣｌ）に懸濁し、Ｎ−アセチルムラミダーゼ（Ｎ−ａ
ｃｅｔｈｙｌｍｕｒａｍｉｄａｓｅ）　（Ｍ１酵素、生
化学工業）を添加した。３７℃で一晩処理した後、遠心
分離して上清と沈渣に分離した。沈渣を蒸溜水で洗浄し
、凍結乾燥を行なったものをＭ１酵素に不溶性の分画、
いわゆるプロトプラストとして実験に用いた。

【００２０】上記プロトプラストにクロロホルムとメタ
ノールと水を２：１：１の割合で加えて、５０℃、１時
間攪拌した。遠心した水層、クロロホルム：メタノール
層及び、両者の中間に存在するｆｌｕｆｆ層に分けた。 Ｆｌｕｆｆ層は蒸溜水で洗浄後、凍結乾燥を行ない、細
胞質膜分画として実験に用いた。

【００２１】（２）　ＩｇＡ誘導能の測定方法パイエル
板をマウスの小腸から無菌的に取り出し、ディスパーゼ
（Ｄｉｓｐａｓｅ　）溶液（１．５　ｍｇ　Ｄｉｓｐａ
ｓｅ／ｍｌ　Ｊｏｋｌｉｋ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ　ＭＥＭ
）に入れ、３０〜４０分間、３７℃で攪拌し、溶液中に
出てきた単個細胞（ｓｉｎｇｌｅ　ｃｅｌｌ　）を回収
した。この操作を４〜５回繰り返し、遠心洗浄すること
により、パイエル板細胞を得た。ただし、パイエル板細
胞培養系には、上記の全菌体、並びに菌体分画成分を１
００μｇ／ｍｌとなるように添加した。

【００２２】（実験例１：Ｂ菌のプロトプラスト分画に
よるＩｇＡ誘導能の増強） 数菌株のＢ菌について、プロトプラスト分画と分画前の
全菌体とのＩｇＡ誘導能を調べた。その結果、表１に示
すように調べたＢ菌株は、個々のＩｇＡ誘導能に差はあ
るものの、すべてプロトプラスト分画にすることで、分
画前の全菌体よりもＩｇＡ誘導能がおよそ２倍から３倍
に増強することが確認された。

【００２３】

【表１】

【００２４】（実験例２：細胞質膜分画のＩｇＡ誘導能
） プロトプラストは、全菌体を細胞壁溶解酵素にて処理し
て細胞壁部分を取り去った分画であり、細胞質膜と細胞
質内成分より構成される。ここではプロトプラストを有
機溶媒にて処理し、分賀した細胞質膜のＩｇＡ誘導能に
ついて検討した。その結果、表２に示すように調べたＢ
．ブレーベ　　４０６４と、Ｂ．ブレーベＫａ−６との
細胞質膜分画には、分画前の全菌体より強いＩｇＡ誘導
能が認められた。またプロトプラストと比較しても同等
、もしくはそれ以上のＩｇＡ誘導を示した。

【００２５】

【表２】

【００２６】

【発明の効果】以上説明した通り、本発明により、Ｂ菌
株は菌体をプロトプラスト又は細胞質膜とすることで、
ＩｇＡ誘導能がさらに増強することが示された。従って
、Ｂ菌株の有するＩｇＡ誘導能の作用本体が、細胞壁と
は異なる菌体成分に存在することを強く示すものである
。この点は、Ｂ菌株のプロトプラスト、あるいは細胞質
膜から新規な免疫賦活作用を有する物質がみつかる可能
性が高いといえる。今後、機能を重視した食品（所謂、
機能性食品）等の素材開発を進める場合に、活性本体の
解明が不可欠となる。特に細菌菌体成分には、種々の生
理活性作用が知られており、菌体をその構成成分に分画
して、各分画に存在する該活性を比較検討していく方法
は、前述の活性本体の解明において有効である。

【００２７】以上より、プロトプラストもしくは、細胞
質膜を主成分とするＢ菌株のＩｇＡ誘導能は、分画前の
全菌体のそれよりも明らかに強い活性が認められた。従
って、プロトプラストもしくは、細胞質膜を主成分とす
るＢ菌株は、ＩｇＡを増強するためのより効果的な素材
となり得るものであり、ＩｇＡ産生促進能を有する飲食
品となり得るものである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏ
   ｂａｃｔｅｒｉｕｍ）　属菌のプロトプラスト又はビフ
   ィドバクテリウム属菌の細胞質膜を有効成分としたＩｇ
   Ａ産生促進剤。