JPH04316592A - 抗ウイルス性抗生物質ｂｕ−４２２４ｖ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は抗ウイルス性および／ま
たは抗菌性活性をもつ新規な抗生物質複合体、その製造
、回収、および４種の生物学的活性成分への分離、なら
びにその医薬組成物に関するものである。

【０００２】

【発明が解決しようとする課題および課題を解決するた
めの手段】本発明によってＢＵ−４２２４Ｖと呼ぶ新規
な抗生物質複合体が提供される。この複合体はキブデロ
スポランギウム・アルバタム（Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒ
ａｎｇｉｕｍ　　ａｌｂａｔｕｍ）のＢＵ−４２２４Ｖ
生産菌株、好ましくはキブデロスポランギウム・アルバ
タム種の新菌株Ｒ７６１−７またはその変種もしくは突
然変異体、を資化源の窒素と炭素を含む水性醗酵培養栄
養媒質中で深部好気性条件下に実質量の抗ウイルス性抗
生物質ＢＵ−４２２４Ｖが醗酵培養栄養媒質中で上記の
微生物によって生産されるまで培養し、次いで該培養媒
質からＢＵ−４２２４Ｖ複合体を回収することによって
製造される。ＢＵ−４２２４Ｖ複合体はＢＵ−４２２４
ＶＡ、ＢＵ−４２２４Ｖ　　Ｂ１、ＢＵ−４２２４Ｖ　
　Ｂ２、およびＢＵ−４２２４Ｖ　　Ｃと呼ばれる４種
の生物学的活性成分を含むが、これらの成分は通常のク
ロマトグラフ法によって分離することができる。

【０００３】これらのＢＵ−４２２４ＶのＡ、Ｂ１、Ｂ
２およびＣの成分は色素取り込み分析およびブラーク減
少法分析によってヘルペス・シンプレックス・ウイルス
型１に対して抗ウイルス活性を示し、および／またはカ
ンテン希釈法において抗菌活性を示す。

【０００４】

【発明の態様】本発明はここにＢＵ−４２２４ＶのＡ、
Ｂ１、Ｂ２、およびＣと呼ぶ新規な抗ウイルス性および
／または抗菌性の抗生物質、およびキブデロスポランギ
ウム・アルバタムのある種の菌株、最も具体的にはキブ
デロスポランギウム・アルバタム種の新菌株Ｒ７６１−
７の醗酵によるそれらの製造に関する。

【０００５】菌株Ｒ７６１−７はフィリッピン・ミンダ
ナオ島で収集された土壌試料から単離された。この菌株
の生物学的に純粋な培養物はアメリカン・タイプ・カル
チャー・コレクション（米国メリーランド州ロックビル
）にＡＴＣＣ　　５５０６１なる寄託番号で寄託された
。

【０００６】この菌株の培養および生理学的特性はシア
ーリングおよびゴットリーブの方法（文献１：Ｓｈｉｒ
ｌｉｎｇ，Ｅ．Ｂ＆Ｄ．Ｇｏｔｔ１ｉｅｂ：Ｍｅｔｈｏ
ｄｓｆｏｒ　　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　　
ｏｆ　　ｓｔｒｏｐｔｏｍｙｃｅｓ　　ｓｅｐｅｃｉｅ
ｓ．　　Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ　　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
１６：３１３−３４０，１９６６）およびシアーラらの
方法（文献２：Ｓｈｅａｒｅｒ，Ｍ．Ｃ．　　ｅｔ　　
ａｌ：Ｎｅｗ　　ｇｅｎｕｓ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ａ
ｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ：Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏ
ｒａｎｇｉｕｍ　　ａｒｉｄｕｍｇｅｎ．ｎｏｖ．，ｓ
ｐ．ｎｏｖ．Ｉｎｓｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌ．３６：４７−５４，１９８６）によって検査され
た。全細胞加水分解物中のアミノ酸と糖はルシエバリエ
らの方法（文献３：Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｍ．Ｐ．
：Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ａｅｒｏ
ｂｉｃ　　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　　ｏｆ　　ｃ
ｌｉｎｉｃａｌ　　ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ．Ｊ．Ｌａｂ
．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．７１：　　９３４−９４４，１９
６８）によって分析された。リン脂質はルシエバリエら
の記述（文献４：Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｍ．Ｐ．；
Ｃ．Ｄ．Ｂｉｅｖｒｅ　　ａｎｄ　　Ｈ．Ｌｅｃｈｅｖ
ａｌｉｅｒ：Ｃｈｅｍｏｔａｘｏｎｏｍｙ　　ｏｆ　　
ａｅｒｏｂｉｃ　　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ：ｐｈ
ｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄ　　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ．Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ．Ｓｙｓｔ．Ｅｃｏ１．５：　　２４９−
２６０，１９７７）　　によって確認された。メナキノ
ン試料はコリンズらの方法（文献５：Ｃｏｌｌｉｎｓ，
Ｍ．Ｄ．；Ｔ．Ｐｉｒｏｕｚ，Ｍ．Ｇｏｏｄｆｅｌｌｏ
ｗ　　ａｎｄ　　Ｄ．Ｅ．Ｍｉｎｎｉｋｉｎ：Ｄｉｓｔ
ｒｉｂｕｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ｍｅｎａｑｕｉｎｏｎｅ
ｓ　　ｉｎ　　ｔｈｅ　　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ
　　ａｎｄ　　ｃｏｒｙｍｅｂａｃｔｅｒｉａ．Ｊ．Ｇ
ｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｌ．１００：２２１−２３
０，１９７７）によって製造され、質量分析計で分析さ
れた。ミコレートの分析およびグリコレート試験はそれ
ぞれミニキンらの方法（文献６：Ｍｉｎｉｋｉｎ，Ｄ．
Ｅ；Ｌ．Ａｌｓｈａｍａｏｎｙａｎｄ　　Ｍ．Ｇｏｏｄ
ｆｅｌｌｏｗ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　　ｏ
ｆＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ，Ｎｏｃａｒｄｉａ，ａ
ｎｄ　　ｒｅｌａｔｅｄｔａｘａ　　ｂｙ　　ｔｈｉｎ
−ｌａｙｅｒ　　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　　
ａｎａｌｙｓｉｓ　　ｏｆ　　ｗｈｏｌｅ−ｏｒｇａｎ
ｉｓｍ　　ｍｅｔｈａｎｏｌｙｓａｔｅｓ．　　Ｊ．Ｇ
ｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８８：２００−２０４，１
９７５）およびウチダ及びアイダ（文献７：Ｕｃｈｉｄ
ａ，Ｋ　　ａｎｄ　　Ｋ．Ａｉｄａ：Ｔａｘｏｎｏｍｉ
ｃ　　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ　　ｏｆ　　ｃｅｌｌ
−ｗａｌｌａｃｙ１　　ｔｙｐｅ　　ｉｎ　　Ｃｏｒｙ
ｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ−Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ
−Ｎｏｃａｒｄｉａ　　ｇｒｏｕｐ　　ｂｙ　　ａ　　
ｇｌｙｃｏｌａｔｅｔｅｓｔ．　　Ｊ．Ｇｅｎ．Ａｐｐ
ｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ．２５：１６９−１８３，１９
７９）によって実施された。

【０００７】微生物：抗ウイルス性および／または抗菌
性抗生物質ＢＵ−４２２４ＶのＡ、Ｂ１、Ｂ２、および
Ｃを生産する放線菌株Ｒ７６１−７はフィリッピンで収
集した土壌試料から単離された。菌株Ｒ７６１−７の形
態、その培養および生理学的特性およびケモタキソノミ
ーはこの菌株がキブデロスポランギウム属に分類される
ことを示した。この属の周知の種とこの菌株の直接また
は記述比較にもとづいて、この菌株はキブデロスポラン
ギウム・アルバタム新種と命名された。

【０００８】形態：菌株Ｒ７６１−７は良く枝分かれし
た基生菌糸および気菌糸を形成する。好気性グラム陽性
、酸摂食性のフィラメント状微生物である。基生菌糸は
種々の程度に分枝している。気菌糸は長い直鎖状の胞子
および多くのスポランジウム状球体（直径８〜２０μｍ
）を有する。胞子は円筒状（０．４×０．８〜２μｍ）
であり、明瞭な鞘のない平滑面をもつ。膜をもつスポラ
ンジウム状球体は不規則に変曲した枝分かれハイファを
含むが胞子を含まず、そしてルゴース面をもつ。発芽は
これらの球から直接に起る。運動性細胞は観察されない
。

【０００９】培養特性：気菌糸は殆どのカンテン培地上
に生成し、白色または黄白色である。基生菌糸は無色か
ら黄褐色または橙黄色である。メラニンまたは他の明瞭
な着色物質は生産されない。培養特性を後記の表１に示
す。

【００１０】生理学的特性：ゼラチンおよびポテトでん
ぷんは加水分解される。牛乳は凝固してペプトン化され
る。ＮａＣｌ耐性は約４％でみられるが５℃以上ではみ
られない。成長は１７〜４５℃で起る。１４℃および４
８℃では成長は観察されない。生理学的特性を後記の表
２に示す。

【００１１】ケモタキソノミー：全細胞加水分解物はメ
ソージアミノピメリン酸を診断用アミノ酸として含む。 全細胞−糖はラムノース、リボース、アラビノース、グ
ルコースおよびガラクトースから成っていた。マジュロ
ースは検出されない。リン脂質は２種のホスファチジル
エタノールアミン類、ホスファチジルグリセロール、お
よびホスファチジルイノシトールを含む。従って菌株Ｒ
７６１−７は糖パターンＡ付きの型ＩＶの細胞壁、およ
び型Ｐ−ＩＩのリン脂質をもつ。主要メナキノンはＭＫ
−９（Ｈ４）である。ミコレートは存在しない。グリコ
レート試験は陰性（ペプチドグリカンのＮ−アシル型：
アセチル）である。

【００１２】タキソノミー位置：顕微鏡写真および走査
電子顕微鏡によるミクロ形態研究にもとづき、菌株Ｒ７
６１−７のスポランジウム状構造はストレプトスポラン
ギウムおよびスピリロスポラのスポランギウムから、ア
クチノスポランギウムおよびアクチノマジュラのシュー
ドスポランギウムからも区別されさらにスクレロチウム
・オブ・チャイナからも区別される。

【００１３】菌株Ｒ７６１−７のケモタキソノミーは、
菌株Ｒ７６１−７の細胞化学がアミコラトプシス属（文
献８：Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ，Ｍ．Ｐ．，Ｈ・Ｐｒａ
ｕｓｅｒ，Ｄ．Ｐ．Ｌｅｂｅｄａ　　ａｎｄ　　Ｊ．ｓ
．Ｒｕａｎ：Ｔｗｏ　　ｎｅｗ　　ｇｅｎｅｒａ　　ｏ
ｆ　　ｎｏｃａｒｄｉｏｆｏｒｍ　　ａｃｔｉｎｏｍｙ
ｃｅｔｅｓ：Ａｍｙｃｏｌａｔａ　　ｇｅｎ．ｎｏｖ．
ａｎｄ　　Ａｍｙｃｏｌａｔｏｐｓｉｓｇｅｎ．ｎｏｖ
．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．３６：
２９−３７，１９８６）およびＫｉｂｄｅｌｓｐｏｒａ
ｎｇｉｕｍ属（前記の文献２参照）に密接に関連するが
、アクチノミセスの他の従来述べられている胞子形成属
とは区別される、ということを示した。菌種Ｒ７６１−
７の形態学およびケモタキソノミーはキブデロスポラン
ギウム属のものと一致する。すなわちキブデロスポラン
ギウムはハイフィ食皮スポランギウム状構造ならびに好
気性菌糸上の胞子鎖に特徴があり、そして型ＩＶ−Ａ細
胞壁、型Ｐ−ＩＩリン脂質、ＭＫ−９（Ｈ４）主要メナ
キノン、およびミコレート欠落、に特徴がある。菌株Ｒ
７６１−７はまた培養特性、たとえば白色好気性菌糸の
形成、および天然有機培地および化学合成培地上での温
和な又は良好な成長、の点でも上記の属に類似している
。

【００１４】従って、菌株Ｒ７６１−７はキブデロスポ
ランギウム属に分類された。この属は従来僅か２つの種
および１つの亜種のみを含んでいた。すなわちＫ．アリ
ダム（前記の文献２；および文献９、Ｓｈｅａｒｅｒ，
Ｍ．Ｃ．ｅｔ．ａｌ：Ａｒｉｄｉｃｉｎｓ，ｎｏｖｅｌ
　　ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ　　ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃ．Ｉ．Ｔａｘｏｎｏｍｙ，ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　　
ａｎｄ　　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　ａｃｔｉｖｉｔｙ
．　　Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　３８：５５５−
５６０，１９８５参照）、Ｋ．フィリッピンズ（文献１
０、Ｍｅｒｔｚ，Ｆ．Ｐ．ａｎｄ　　Ｒ．Ｃ．Ｙａｏ：
Ｋｉｂｄｅｌｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ　　ｐｈｉｌｉｐ
ｉｎｅｎｓｅ　　ｓｐ．ｎｏｖ．ｉｓｏｌａｔｅｄ　　
ｆｒｏｍ　　ｓｏｉｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓｔ．Ｂａｃ
ｔｅｒｉｏｌ．３８：２８２−２８６，１９８８参照）
およびＫ．アリダム亜種ラルガム（文献１１、Ｓｈｅａ
ｒｅｒ，Ｍ．Ｃ．ｅｔ．ａｌ．：Ｋｉｂｄｅｌｉｎｓ，
ｎｏｖｅｌ　　ｇｌｙｃｏｐｅｐｔｉｄｅ　　ａｎｔｉ
ｂｉｏｔｉｃｓ．Ｉ．Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，ｐｒｏｄｕ
ｃｔｉｏｎ，ａｎｄ　　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　　ｅｖ
ａｌｕａｔｉｏｎ．Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　３
９：１３８６−１３９４，１９８６参照）である。菌株
Ｒ７６１−７の特性とキブデロスポランギウムの既知の
２種の特性との比較を後記の表２に示す。菌株Ｒ７６１
−７はＩＳＰ培地Ｎｏ．１、６および７のいづれかの培
地中でのメラニン生成の欠如、デンプンの加水分解、ア
ドニトールからの酸生成、ならびにＤ−メレジトース、
メリビオースおよびα−メチル−Ｄ−グリコシドからの
酸生成の欠如、の諸点でキブデロスポランギウムの既知
種のすべてと異なっている。

【００１５】菌株Ｒ７６１−７とキブデロスポランギウ
ム属の２つの既知の種との間の比較考察は我々にこの菌
株を上記の属の新規な種であると分類させる。従って、
キブデロスポランギウム・アルバタム新種なる命名はこ
の菌株について提案される。この種の菌株はＲ７６１−
７であり、このものは単一の単離物である。

【００１６】

【表１】

【００１７】

【表２】

【００１８】醗酵：本発明のＢＵ−４２２４Ｖ抗生物質
はキブデロスポランギウム・アルバタムのＢＵ−４２２
４Ｖ生産菌株、好ましくはキブデロスポランギウム・ア
ルバタムＡＴＣＣ　　５５０６１またはその突然変異体
または変種を、水性栄養媒質中で深部好気性条件下に培
養することによって生産される。生産性微生物は資化性
炭素源たとえば資化性炭化水素を含む栄養媒質中で成長
する。好適な炭素源の例としてラクトース、グリセロー
ル、サクロース、コーンスターチ、グルコース、マンノ
ース、フラクトース、セロビオース、トレハロース、マ
ニトール、およびキシロースがあげられる。栄養培地は
また資化性窒素源たとえばフィッシュミール、ペプトン
、大豆ミール、ピーナツミール、綿実ミール、およびコ
ーンステチープ液も含むべきである。栄養無機塩も培地
中に配合することができ、このような塩としてナトリウ
ム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、ホスフェー
ト、サルフェート、クロライド、プロマイド、ナイトレ
ート、カーボネートまたは類似のイオンを提供しうる通
常の塩類のいづれかをあげることができる。

【００１９】ＢＵ−４２２４Ｖの製造は微生物の満足な
成長を行ないうる温度すなわち約１７〜４５℃の温度で
行なうことができ、約２８℃の温度で行なうのが好都合
である。通常は最適の製造は約４〜６日の保温後にえら
れる。醗酵はフラスコ中でまたは種々の容量の実験室的
または工業的醗酵槽中で行なうことができる。タンク醗
酵を行なおうとする場合、微生物の傾斜もしくは土壌培
養物または凍結乾燥培養物を培養液培養物に接種するこ
とによって栄養培養液中に成長性接種物を作るのが望ま
しい。成長性接種物を作る培地は、微生物の良好な成長
がえられる限り、同種または異質の形体のものが本発明
の新規化合物の製造のタンク中に使用することができる
。

【００２０】ＢＵ−４２２４Ｖの製造は、醗酵の過程中
に、培養液または菌糸固体のエキスの試料を試験して本
発明の化合物に対して敏感であることの知られている微
生物に対する活性を検査することによってまたは試験管
内細胞毒性分析によって、確認することができる。醗酵
が完了すると、醗酵培養液から諸成分が回収され、好適
な有機溶媒による抽出およびその後の一連のカラム・ク
ロマトグラフ処理によって分離される。後記の実施例２
は成分Ａ、Ｂ１、Ｂ２、およびＣを得るための具体的操
作法を示すものである。図１は成分Ａ、Ｂ１、Ｂ２、お
よびＣのＨＰＬＣクロマトグラムを示す。

【００２１】他の微生物の場合と同様に、本発明の新規
なＢＵ−４２２４Ｖ生産性菌株Ｒ−７６１−７（ＡＴＣ
Ｃ　　５５０６１）は変化を受ける。菌株Ｒ７６１−７
（ＡＴＣＣ　　５５０６１）の組換え体、変異体および
突然変異体は、紫外線、Ｘ線、高周波線、放射能線およ
び放射能化学物質のような種々の周知の突然変異原によ
る処理によって得ることができる。ＢＵ−４２２４Ｖ生
産性を保持する菌株Ｒ７６１−７（ＡＴＣＣ　　５５０
６１）の天然および誘発の変異体、突然変異体および組
換え体も本発明の範囲に含まれるものと解すべきである
。

【００２２】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２の物理
化学的性質：ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２は白色
無定形粉末として単離された。それらはメタノール、ピ
リジンおよびジメチルスルホキシドに可溶であり、エチ
ルアセテートおよびアセトンに僅かに可溶であるが、ｎ
−ヘキサン、クロロホルムおよび水に実際上不溶である
。それらはヨードおよびアンスラキノン試剤に対して陽
の反応を示したが、ニンヒドリンおよびサカグチ試験に
対しては陰性であった。ＢＵ−４２２４ＶのＢ１および
Ｂ２の物理化学的性質を表３に要約する。ＢＵ−４２２
４ＶのＢ１およびＢ２は２１０ｎｍを越える最大吸収を
示さなかった。ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２のＩ
Ｒスペクトルをそれぞれ図２および図３に示し、それら
の　　１Ｈ−および１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを図４〜
図７に示す。

【００２３】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２の構造
の説明：ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２の分子式は
、それらの元素分析および負電荷欠落原子攻撃マス・ス
ペクトルデータにもとづいて、それぞれＣ８３Ｈ１５２
Ｏ３３およびＣ８３Ｈ１５０Ｏ３３であると決定された
。Ｂ１の　　１Ｈ−ＮＭＲスペクトルは５個のアノメリ
ック・プロトン（δ５．２３（２Ｈ）、４．８９、４．
８５および４．８２）、３個のＯ−メチル基（δ３．８
２（６Ｈ）および３．７７）、２個のＣ−メチル基（δ
１．３４および１．２２）、および大きな数のＣ−メチ
レンプロトン（δ１．１〜１．９）の存在を示した。後
記の表４参照。この情報はＩＲおよび１３Ｃ−ＮＭＲス
ペクトルの情報と一緒になって、ＢＵ−４２２４ＶのＢ
１が糖類と長鎖脂肪酸類とから構成されることを示唆し
た。ＢＵ−４２２４ＶのＢ２の　　１Ｈ−ＮＭＲスペク
トルは、ＢＵ−４２２４ＶのＢ１と全く類似していた。 ただし後者のダブレットのメチル信号（δ１．３４）は
存在せず、シングレットのメチル（δ＝２．０３）およ
びトリプレットのメチレン（δ２．３６）の信号が前者
に観察された。Ｂ１とＢ２の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル
の比較は上記　　１Ｈ−ＮＭＲによって推論されるよう
に炭素信号の相違を支持した（表５参照）。ＢＵ−４２
２４ＶのＢ１およびＢ２の完全構造（図８）は生成物の
化学減成実験とスペクトル分析との組合せによって説明
された。ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２はＤ−グル
コース、２−メトキシグルコースおよびヒドロキシル化
長鎖脂肪酸を含む。

【００２４】

【表３】

【００２５】

【表４】

【００２６】

【表５】

【００２７】ＢＵ−４２２４ＶのＡおよびＣの物理化学
的性質：ＢＵ−４２２４ＶのＡおよびＣは少量成分生成
物であり、ＨＰＬＣによって２〜４種類の下位成分類か
ら成ることが見出された。それらの分離は行なわなかっ
た。またそれらの構造決定も行なわなかった。ＢＵ−４
２２４ＶのＡおよびＣの物理化学的性質を表６に示す。 ＢＵ−４２２４ＶのＡおよびＣのＩＲスペクトルをそれ
ぞれ図９および図１０に示す。それらは主要成分である
ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２に類似の性質をもつ
。

【００２８】

【表６】

【００２９】抗ウイルス活性：ＢＵ−４２２４Ｖの各成
分の抗ウイルス活性を、ベロ細胞のヘルペス・シンプレ
ックス・ウイルス型１（ＫＯＳ菌株）感染を使用して色
素取り込みおよびプラーク減少法分析によって検査した
。色素取り込み分析において、１．６×１０４個の細胞
を含むベロ細胞懸濁液２００μｌを９６個のウエルのマ
イクロプレートの各ウエルに入れ、次いで種々の濃度の
試験化合物を含む媒質５０μｌを各ウエルに加えた。 約３０×ＴＣＩＤ５０を含むウイルス懸濁液（５０μｌ
）を各ウエルに接種した。細胞毒性試験について、ウイ
ルスを含まない同じセットのウエルを用意した。湿潤５
％ＣＯ２−９５％空気の雰囲気下に３７℃で７２時間保
温した後、ウイルス誘発細胞病原効果および薬剤誘発細
胞毒性の阻止度を中性赤血球の吸収によって決定した。 ＩＤ５０を対照標準の細胞病原効果の５０％阻止を示す
濃度として表示し、ＴＤ５０をウイルス感染めないベロ
細胞に対する５０％細胞毒性を示す濃度として表示した
。抗ＨＳＶ活性の基準化合物としてアシクロビル（Ａｃ
ｙｃｌｏｖｉｒ）を使用した。ＢＵ−４２２４Ｖの抗ウ
イルス活性はまた２４個のウエルのマイクロプレートを
使用する通常のプラーク減少法分析によっても検査した
。

【００３０】ＢＵ−４２２４Ｖの各成分は、成分Ａを除
いて、ＨＳＶ−１に対して有効な抗ウイルス活性を示し
、染料吸収分析によって２〜５μｇ／ｍｌのＩＤ５０を
もっていた。この抗ウイルス活性はアシクロビルよりも
効力が少なかった。プラーク減少法分析において、ＢＵ
−４２２４Ｖは染料吸収分析と殆ど同じ抗ウイルス活性
を示した。

【００３１】ＢＵ−４２２４Ｖの諸成分のなかで、成分
Ｃは色素取り込み分析およびプラーク減少法分析におい
てヘルペス・シンプレックス・ウイルス型１（ＨＳＶ−
１）に対して最も有効な抗ウイルス活性を示した。ＢＵ
−４２２４ＶのＢ１およびＢ２は上記の分析において殆
ど同じ水準にあり、ＨＳＶ−１に対するＢＵ−４２２４
ＶのＣよりも２〜３倍活性が小さかった。成分Ｃは色素
取り込み分析により２．３μｇ／ｍｌのＩＤ５０値およ
びプラーク減少法分析により２．８μｇ／ｍｌのＩＤ５
０をもつ抗ＨＳＶ活性を示した。これら諸成分のすべて
はＨＳＶ−ベロ細胞に対して細胞毒性を示さなかった（
ＴＤ５０：＞４００ｍｃｇ／ｍｌ、ＭＤＴ：＞２００ｍ
ｃｇ／ｍｌ）。ＢＵ−４２２４Ｖの各成分の抗ＨＳＶ活
性の要約を後記の表７に示す。

【００３２】抗菌活性：種々のバクテリアおよび菌類（
ファンジ）に対するＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２
の抗菌スペクトルを表８に示す。ＭＩＣは好気性バクテ
リアについては栄養かんてん媒質（Ｅｉｋｅｎ）を使用
して、そして菌類についてはサブラウド（Ｓａｂｏｕｒ
ａｕｄ）デキストロースかんてんを使用して、かんてん
希釈法によって決定した。接種の大きさは好気性バクテ
リアについては１０３〜１０４ｃｆｕ／ｍｌに調節し、
菌類については１０６ｃｆｕ／ｍｌに調節した。

【００３３】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２は好気
性グラム陽性バクテリアに対しては弱い抗菌活性を示し
、そして好気性グラム陰性バクテリアおよび菌類（ファ
ンジ）に対しては活性を示さなかった。

【００３４】表９はＢＵ−４２２４ＶのＡおよびＣの抗
菌活性を示す。ＢＵ−４２２４ＶのＡはスタフィロコッ
カス　　アウレウス　　ＦＤＡ　　２０９、スミス、Ｓ
．エピデルミデイス　　Ｄ　　１５３およびバシリウス
　　サプチリス　　ＰＣｌ　　２１９に対してのみ弱い
阻止活性を示した。ＢＵ−４２２４ＶのＣは抗菌活性を
示したが、１００μｇ／ｍｌでは示さなかった。

【００３５】

【表７】

【００３６】

【表８】

【００３７】

【表９】

【００３８】それ故、本発明の一面によれば、キブデロ
スポランギウム・アルバタムのＢＵ−４２２４Ｖ生産性
菌株の醗酵による抗生物質の製造方法が提供される。

【００３９】本発明の別の面によれば、ＢＵ−４２２４
ＶのＢ１、Ｂ２、またはＣあるいはそれらの組合せの有
効量を感染宿主に投与することによって動物およびヒト
のウイルス感染を治療処理する方法が提供される。

【００４０】本発明の別の面によれば、ＢＵ−４２２４
ＶのＡ、Ｂ１またはＢ２あるいはそれらの組合せの有効
量を感染宿主に投与することによる動物およびヒトの微
生物感染を治療処理する方法が提供される。

【００４１】本発明の更に別の面によれば、ＢＵ−４２
２４ＶのＡ、Ｂ１、Ｂ２またはＣあるいはそれらの組合
せの有効量を不活性の製薬上許容しうる担体または希釈
剤と組合せて含む医薬組成物が提供される。これらの組
成物は所望の投与経路に適切な製薬形体に作ることがで
きる。

【００４２】本発明はまた菌株Ｎｏ．Ｒ７６１−７（Ａ
ＴＣＣ　　５５０６１）の確認特性をもつ微生物キブデ
ロスポランギウム・アルバタムを提供する。

【００４３】本発明によって提供される医薬組成物は他
の活性成分たとえば他の抗生物質を含んでいてもよく、
所望の投与経路に適切な形体に作ることができる。この
ような組成物の例として経口投与用の固体組成物たとえ
ばカプセル、錠剤、丸薬、粉末および顆粒；経口投与用
の液体組成物たとえば溶液、懸濁液、シロップまたはチ
ンキ；および非経口投与用の処方物たとえば滅菌溶液、
懸濁液または乳液；があげられる。これらの組成物はま
た、使用直前に滅菌水、生理学的食塩水、またはその他
の滅菌注射媒質に溶解させることのできる滅菌固体の形
体で製造することもできる。

【００４４】本発明の化合物の実際の調剤量は、使用す
る特定の化合物、処方する特定の組成物、投与形態、な
らびに処理する特定の状態、宿主および疾患、に応じて
変わることが理解されるであろう。薬剤の作用を変える
多くの因子、たとえば年令、体重、性別、療法、投与時
間、投与経路、排泄速度、宿主の状態、薬剤の組合せ、
反応感度、および疾患の程度；は当業者によって十分に
考察されることである。ある組合せについての最適調剤
量は通常の調剤量試験を使用して当業者によって確かめ
ることができる。

【００４５】

【実施例】次の実施例は本発明を例示により具体的に説
明するためのものであって、本発明の範囲を限定するも
のと解すべきではない。 実施例１ 醗酵：キブデロスポランギウム・アルバタム菌株Ｒ７６
１−７の傾斜培養の少量のカンテン培養片を、マッシュ
・ポテト４％、コーンステイープ液２％、ＣａＣＯ３０
．３％およびＮａＣｌ　　０．２％から成る種媒質１０
０ｍｌを含む５００ｍｌのエルレンマイヤー・フラスコ
に接種した（オートクレープ処理前にｐＨを８．０に調
整した。この種培養物を回転振とう器（２００ｒｐｍ）
上で４日間２８℃に保温し、５ｍｌの培養物を種培養媒
質と同じ組成の生産媒質１００ｍｌを含む５００ｍｌの
エルレンマイヤー・フラスコに移した。醗酵を回転フラ
スコ上で６日間２８℃で行なった。醗酵培養液中での抗
生物質生産はヘルペス・シンプレックス・ウイルス型１
（ＫＯＳ菌株）を使用する通常の細胞病原効果（ＣＰＥ
）分析によってモニタした。複合体の生産は４〜５日後
に最大に達し、抗ウイルス活性はＩＣ５０値の点で×４
８培養液希釈で観察された。

【００４６】実施例２ 単離および精製：醗酵培養液（２０１、５０〜１００μ
ｇ／ｍｌ）をｎ−ブタノール（８１）と共に３０分間激
しく攪拌した。ｎ−ブタノール抽出物を真空濃縮して乾
燥させ、残渣（９．０ｇ）をシリカゲル（２５ｇ）と混
合し、シリカゲル・カラム（ｗａｋｏｇｅｌ　　Ｃ−２
００、１．１１）に充てんした。カラムをエチルアセテ
ート／メタノール／水（１００：１５：１）混合物で展
開した。溶離液を少留分（２０ｍｌ）毎に集め、これら
を抗ウイルス分析およびＴＬＣ（ＳｉＯ２；ＥｔＯＡｃ
−ＭｅＯＨ−Ｈ２Ｏ、１０：３：１、Ｈ２ＳＯ４検出）
によって検査した。適当な留分（複数）を集め、真空濃
縮してＢＵ−４２２４Ｖ（１．０ｇ）の粗混合物固体を
得た。

【００４７】この固体（１．０ｇ）をメタノール（５ｍ
ｌ）にとかし、反転相Ｃ１８カラムクロマトグラフ（Ｙ
ＭＣ−ＯＤＳ、ＡＭ型、ヤマムラ科学研究所株式会社、
８００ｍｌ）の処理にかけた。カラムを、４５％ＣＨ３
ＣＮを含む０．０２２Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７．０）
で洗浄し、次いで５０％ＣＨ３ＣＮ（留分１〜６９）お
よび５５％ＣＨ３ＣＮ（留分６６〜９８）を含む溶液で
展開した。抗生物質の存在はＴＬＣ（ＲＰ−１８、メル
ク：ＣＨ３ＣＮ−０．０２２Ｍリン酸塩緩衝液、ｐＨ７
．０、７０：３０）によって検出した。留分Ｎｏ．９〜
１５（Ｒｆ０．４２）をプールし、濃縮してｎ−ブタノ
ールで抽出した。ｎ−ブタノール抽出物を真空蒸発して
ＢＵ−４２２４ＶのＡ（８３ｍｇ）の白色固体を得た。 留分Ｎｏ．３５〜５２（Ｒｆ０．３２）およびＮｏ．６
２〜８０（Ｒｆ０．１９）を同様に処理してＢＵ−４２
２４ＶのＢ（３３０ｍｇ）およびＢＵ−４２２４ＶのＣ
（１４０ｍｇ）のそれぞれの白色固体を得た。少量成分
であるＢＵ−４２２４ＶのＡおよびＣはＨＰＬＣによっ
て２〜４個の下位成分（亜成分）から成ることが見出さ
れた（図１）。主要成分であるＢＵ−４２２４ＶのＢも
２つの成分すなわちＢＵ−４２２４ＶのＢ１およびＢ２
を含むことがわかった（図１）。ＢＵ−４２２４ＶのＢ
混合物（１４０ｍｇ）の分離を予備ＨＰＬＣ（カラム：
ＹＭＣ−Ｐａｃｋ　　Ｄ−ＯＤＳ−５、ヤマムラ科学研
究所株式会社、２０×２５０ｍｍ、流動性の相：ＣＨ３
ＣＮ−０．０１Ｍリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．０、５４：
４６、検出：ＵＶ２１０ｎｍ）によって行なった。 ＢＵ−４２２４ＶのＢ１を含む第１ピークのカットを集
めて濃縮した。この溶液をｎ−ブタノールで抽出し、抽
出物を蒸発させてＢＵ−４２２４ＶのＢ１（５４ｍｇ）
の白色粉末をえた。この固体をセファデックスＬＨ−２
０（２００ｍｌ）のカラム上でクロマトグラフ処理し、
９０％水性メタノールで溶離してＢＵ−４２２４ＶのＢ
１（４８ｇ）の純試料を得た。成分Ｂ２を含む第２ピー
クのカットを同様に処理してＢＵ−４２２４ＶのＢ２（
４９ｍｇ）の純固体を得た。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＢＵ−４２２４Ｖの諸成分のＨＰＬＣクロマト
グラムを示した説明図である。

【図２】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１成分のＩＲスペクトル
を示す図である。

【図３】ＢＵ−４２２４ＶのＢ２成分のＩＲスペクトル
を示す図である。

【図４】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１成分の　　１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す図である。

【図５】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１成分の１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを示す図である。

【図６】ＢＵ−４２２４ＶのＢ２成分の　　１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示す図である。

【図７】ＢＵ−４２２４ＶのＢ２成分の１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルを示す図である。

【図８】ＢＵ−４２２４ＶのＢ１成分とＢ２成分の構造
式を示す図である。

【図９】ＢＵ−４２２４ＶのＡ成分のＩＲスペクトルを
示す図である。

【図１０】ＢＵ−４２２４ＶのＣ成分のＩＲスぺクトル
を示す図である。

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　醗酵法により得たものを抽出しそして
   精製したときに成分ＢＵ−４２２４ＶのＡ、Ｂ１、Ｂ２
   およびＣを生ずるところのＢＵ−４２２４Ｖと命名され
   た抗ウイルスで且つ抗菌性の抗生物質複合体。
2. 【請求項２】　　次式の構造をもつ抗生物質ＢＵ−４２
   ２４Ｖ　　Ｂ１。 【化１】
3. 【請求項３】　　次式の構造をもつ抗生物質ＢＵ−４２
   ２４Ｖ　　Ｂ２。 【化２】
4. 【請求項４】　　精製したときに（ａ）７７〜７８℃の
   融点および（ｂ）Ｃ４６．０２％およびＨ　　７．３０
   ％を示す元素分析値、をもつ白色無定形粉末の形態にあ
   る抗生物質ＢＵ−４２２４Ｖ　　Ａ。
5. 【請求項５】　　精製したときに（ａ）７５〜７７℃の
   融点および（ｂ）Ｃ５７．６６％およびＨ　　８．９２
   ％を示す元素分析値、をもつ白色無定形粉末の形態にあ
   る抗生物質ＢＵ−４２２４Ｖ　　Ｃ。
6. 【請求項６】　　ウイルスの成長を阻止するに有効な量
   の、請求項１の抗ウイルス抗菌性抗生物質複合体ＢＵ−
   ４２２４Ｖと製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
7. 【請求項７】　　ウイルスの成長を阻止するに有効な量
   の、請求項２、３および５の抗ウイルス性抗生物質成分
   と製薬上許容しうる担体を含む医薬組成物。
8. 【請求項８】　　微生物の成長を阻止するに有効な量の
   、請求項２、３および４の抗菌性抗生物質と製薬上許容
   しうる担体を含む医薬組成物。
9. 【請求項９】　　請求項１の化合物またはそれらの形態
   の化合物類の有効量を動物投与することによって動物の
   ウイルスおよび微生物感染を治療処置する方法。
10. 【請求項１０】　　請求項２、３および５の化合物また
    はそれらの形態の化合物類の有効量を動物に投与するこ
    とによって動物のウイルス感染を治療処置する方法。
11. 【請求項１１】　　請求項２、３および４の化合物また
    はそれらの形態の化合物類の有効量を動物に投与するこ
    とによって動物の微生物感染を治療処置する方法。
12. 【請求項１２】　　ウイルスがヘルペス・シンプレック
    ス・ウイルスである請求項９または１０の方法。
13. 【請求項１３】　　キブデロスポランギウム・アルバタ
    ムのＢＵ−４２２４Ｖ生産菌株を資化源の炭素と窒素を
    含む水性栄養培地中で深部好気性条件下に実質量の抗生
    物質複合体ＢＵ−４２２４Ｖが該媒質中の該微生物によ
    って生産されるまで培養し、次いで副生産物質を実質的
    に含まない該抗生物質複合体を該培養媒質から回収する
    ことを特徴とする請求項１の抗生物質の製造方法。
14. 【請求項１４】　　キブデロスポランギウム・アルバタ
    ムのＢＵ−４２２４Ｖ生産菌株を資化源の炭素と窒素を
    含む水性栄養培地中で深部好気性条件下に実質量の抗生
    物質複合体ＢＵ−４２２４Ｖが該媒質中の該微生物によ
    って生産されるまで培養し、次いで副生産物質を実質的
    に含まない該抗生物質複合体を該培養媒質から回収し、
    そして次いで精製して請求項２の抗生物質を得ることを
    特徴とする請求項２の抗生物質の製造方法。
15. 【請求項１５】　　キブデロスポランギウム・アルバタ
    ムのＢＵ−４２２４Ｖ生産菌株を資化源の炭素と窒素を
    含む水性栄養媒質中で深部好気性条件下に実質量の抗生
    物質複合体ＢＵ−４２２４Ｖが該媒質中の該微生物によ
    って生産されるまで培養し、次いで副生産物質を実質的
    に含まない該抗生物質複合体を該培養媒質から回収し、
    そして次いで精製して請求項３の抗生物質を得ることを
    特徴とする請求項３の抗生物質の製造方法。
16. 【請求項１６】　　キブデロスポランギウム・アルバタ
    ムのＢＵ−４２２４Ｖ生産菌株を資化源の炭素と窒素を
    含む水性栄養媒質中で深部好気性条件下に実質量の抗生
    物質複合体ＢＵ−４２２４Ｖが該媒質中の該微生物によ
    って生産されるまで培養し、次いで副生産物質を実質的
    に含まない該抗生物質複合体を該培養媒質から回収し、
    そして次いで精製して請求項４の抗生物質を得ることを
    特徴とする請求項４の抗生物質の製造方法。
17. 【請求項１７】　　キブデロスポランギウム・アルバタ
    ムのＢＵ−４２２４Ｖ生産菌株を資化源の炭素と窒素を
    含む水性栄養媒質中で深部好気性条件下に実質量の抗生
    物質複合体ＢＵ−４２２４Ｖが該媒質中の該微生物によ
    って生産されるまで培養し、次いで副生産物質を実質的
    に含まない該抗生物質複合体を該培養媒質から回収し、
    そして次いで精製して請求項５の抗生物質を得ることを
    特徴とする請求項５の抗生物質の製造方法。
18. 【請求項１８】　　ＢＵ−４２２４Ｖ生産菌株がキブデ
    ロスポランギウム・アルバタム菌株Ｒ７６１−７（ＡＴ
    ＣＣ　　５５０６１）と同等の特性をもつ請求項１３、
    １４、１５、１６または１７の製造方法。