JPH04297413A - プロスタグランジン類含有脂肪小体組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、プロスタグランジン類
（以下ＰＧ類という）の脂肪小体への取り込み率の向上
、組成物中における安定性の改善、放出速度の抑制等を
目的としたＰＧ類を含有してなる脂肪小体組成物に関す
る。

【０００２】

【従来技術】ＰＧ類は、血管拡張、末梢循環改善、降圧
、抗脂肪分解、ナトリウム利尿など種々多彩な生理作用
を有することから、医薬品への適用がなされている。 この有用なＰＧ類を医薬品として適用する際には、生体
内で容易に不活性物質へ代謝されることと、病巣選択性
が問題となる。そのため、一般にＰＧ類製剤は瀕回投与
が必要となり、患者の苦痛を増すばかりでなく、瀕回投
与に基づく副作用の恐れがある。これらの問題点の解決
の手段としてＰＧ類を脂肪小体に含有させた製剤が提供
されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】しかし、ＰＧ類含有脂
肪小体製剤においても、脂肪小体へのＰＧ類の取り込み
（以下、封入ともいう）率、製剤自体の安定性、脂肪小
体に含有させたＰＧ類の遊離等の改善すべき問題点があ
り、様々な検討が行われている。特表昭６３−５０３５
２６号公報、特表平２−５０４０２７号公報には脂肪小
体にイオン勾配、ｐＨ勾配等の膜透過濃度勾配を持たせ
ることにより、これらの問題点を解消する試みがなされ
ている。しかしながら、上記公報に記載された脂肪小体
においても、これら問題点は十分改善されているとはい
えない。

【０００４】本発明の目的は、前記の問題点が一挙に解
決されたＰＧ類を脂肪小体に含有させた組成物を提供す
ることである。即ち、ＰＧ類の脂肪小体への取り込みが
改善され、ＰＧ類が取り込まれた脂肪小体組成物におけ
るＰＧ類の安定性が改善され、しかも脂肪小体からのＰ
Ｇ類の放出速度の抑制された、ＰＧ類を脂肪小体に含有
させた組成物を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、種々研究
を重ねてきたところ、膜透過濃度勾配を持たせる際の条
件等が、ＰＧ類含有脂肪小体組成物の特性に多大な影響
を及ぼすことをはじめて知見した。即ち、本発明者らは
、脂肪小体外液のｐＨを２〜６、脂肪小体内封溶液を弱
酸と強塩基にてｐＨ７〜１１に調整することにより、前
記問題点の解決されたＰＧ類を脂肪小体に含有させた組
成物が得られることを見出した。即ち、本発明は、脂肪
小体外液のｐＨが２〜６、脂肪小体内封溶液が弱酸と強
塩基にてｐＨ７〜１１に調整されてなることを特徴とす
るＰＧ類含有脂肪小体組成物に関する。

【０００６】本発明において、脂肪小体（リポソーム）
は、多重同心二重層、単一層あるいは多重層の構造をな
し、各種蛋白質その他の生理活性物質をその間隙に取り
込む能力を有するものである。

【０００７】当該脂肪小体を形成するための脂質として
は、リン脂質、糖脂質、誘導脂質等が挙げられる。脂質
としては、生理的に許容され、そして代謝されうる脂質
であればいずれも本発明に用いられる。リン脂質として
は、例えばホスファチジルコリン、ホスファチジルセリ
ン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセリン、ホ
スファチジルエタノールアミン、ホスファチジルイノシ
トール、スフィンゴミエリン、ジセチルホスフェート、
リゾホスファチジルコリン（リゾレシチン）、あるいは
これらの混合物である大豆リン脂質、卵黄リン脂質等が
例示される。

【０００８】糖脂質としては、セレブロシド、硫脂質（
Ｓｕｌｆａｔｉｄｅ）、ガングリオシド等が例示される
。誘導脂質としては、コール酸、デオキシコール酸等が
例示される。特に、好ましい脂質としては、ホスファチ
ジルコリンが挙げられる。脂質はＰＧ類１重量部当たり
、通常１０〜３０００重量部、好ましくは１５０〜２０
０重量部配合される。

【０００９】本発明で用いられるＰＧ類は、アラキドン
酸代謝物またはそれらの構造類似化合物である。アラキ
ドン酸代謝物としては、例えばプロスタグランジン、プ
ロスタサイクリン、トロンボキサン、ロイコトリエン等
が挙げられる。また、アラキドン酸代謝産物構造類似化
合物としては、例えばアラキドン酸代謝産物を基本骨格
とし構造修飾された６−ケト−ＰＧＥ１　誘導体、カル
バサイクリン誘導体、ＰＧＤ２　誘導体等が挙げられる
。

【００１０】本発明の脂肪小体は、その外液がｐＨを２
〜６、好ましくはｐＨ３〜５である。かかるｐＨとする
ためには、通常緩衝液が使用される。緩衝液は本発明の
目的を達成しうる限り特に制限はなく、具体的には、例
えばクエン酸緩衝液、酢酸緩衝液、乳酸緩衝液等が例示
され、特に好ましい外液としてはクエン酸緩衝液が挙げ
られる。当該緩衝液の濃度は５〜５００ｍＭ、好ましく
は２０〜２００ｍＭである。また、浸透圧を調整するた
めに、蔗糖などを配合してもよい。

【００１１】本発明の脂肪小体内封溶液は、弱酸と強塩
基にてｐＨ７〜１１、好ましくはｐＨ９〜１０に調整さ
れている。弱酸と強塩基の組み合わせとしては、炭酸と
炭酸ナトリウム、リン酸とリン酸ナトリウム、ホウ酸と
ホウ酸ナトリウム、ピロリン酸とピロリン酸ナトリウム
との組み合わせ等が挙げられ、特に好ましくは炭酸と炭
酸ナトリウムとの組み合わせが挙げられる。脂肪小体内
封溶液濃度は、通常１００〜１０００ｍＭ、好ましくは
５００〜６００ｍＭである。

【００１２】本発明の脂肪小体の製造の概略は、次の通
りである。即ち、適当な脂質を含有する溶液（当該溶液
は脂質を変成しない溶媒であればよく、例えばクロロホ
ルム等の溶液が例示される）から溶媒を留去して脂質の
薄膜を作り、この薄膜に脂肪小体内封溶液と同組成の溶
液を加え、凍結融解を行い、脂肪小体を調製する。凍結
融解の際の凍結はドライアイス上に静置する方法等によ
って行われ、融解は３０〜４０℃の温浴に浸漬する方法
等によって行われる。

【００１３】均一なサイズ分布（２００ｎｍ程度）にま
でサイズをフィルター等を用いて減少させた後、脂肪小
体外液と同組成の溶液を加え、膜透過ｐＨ勾配を形成さ
せる。これは３００００〜７００００ｒｐｍ程度での超
遠心操作等により行う。脂肪小体外液の交換は、その他
、ゲル濾過、限外濾過等の既知の手段が使用できる。 次いでこの水性懸濁液にＰＧ類を添加し、ＰＧ類含有脂
肪小体を得る。ＰＧ類の添加は膜透過ｐＨ勾配を形成さ
せる前に添加することもできる。

【００１４】なお、脂質薄膜の調製に際し、トコフェロ
ール（ビタミンＥ）、コレステロール、ホスファチジン
酸、ジセチルホスフェート、脂肪酸（パルミチン酸等）
等を安定化剤として配合してもよい。特にコレステロー
ルは脂肪小体の安定性に寄与するのみでなく、膜透過ｐ
Ｈ勾配を形成するうえでも有利である。コレステロール
は脂質１モル当たり０．５〜１．０モル添加、更に好ま
しくは０．８モル程度配合される。

【００１５】上記に例示した製造法は凍結融解法（Ｐｉ
ｃｋ　Ｕ．：　Ａｒｃｈ．　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ．，　２１２，　１８６（１９８６））による
製造法であるが、これに限らず超音波処理法（Ｈｕａｎ
ｇ，　Ｃ．：　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，　８，　３
４４　（１９６９））、界面活性剤処理法（Ｂｒｕｎｎ
ｅｒ，　Ｊ．　ｅｔ　ａｌ．　：　Ｂｉｏｃｈｅｍ．　
Ｂｉｏｐｈｙｓ．　Ａｃｔａ，　４５５，　３２２　（
１９７６））　、逆相蒸発法（Ｓｚｏｋａ，　Ｆ．　ｅ
ｔ　ａｌ．　：Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　
Ｓｃｉ．：　ＵＳＡ，　７５，　４１９４　（１９７８
））、乳化機による方法（Ｔａｌｓｍａ，　Ｈ．　ｅｔ
　ａｌ．：　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｖ．　ａｎｄ　Ｉｎｄ．　
Ｐｈａｒｍａｃｙ，　１５，　１９７　（１９８９））
　等によっても製造することができる。

【００１６】また、本発明の脂肪小体はアルブミン、デ
キストラン、ビニル重合体、非イオン性界面活性剤、ゼ
ラチン、ヒドロキシエチル澱粉から選ばれた高分子物質
等を安定化剤として配合してもよい。当該高分子物質安
定化剤は、ＰＧ類と共に脂肪小体内の空隙に取りこまれ
ていてもよいし、またＰＧ類を取りこんだ脂肪小体に配
合（即ち、脂肪小体外に配合）してもよい。もちろん脂
肪小体の内外ともに配合してもよいことはいうまでもな
い。当該安定化剤の添加量は脂質１重量部に対して０．
５〜１０重量部、好ましくは１〜５重量部である。

【００１７】また、糖類の添加は、浸透圧の調整および
、後述する凍結乾燥製剤を調製する際に有利である。 かかる糖類としては、単糖類（グルコース、マンノース
、ガラクトース、果糖等）、二糖類（ショ糖、麦芽糖、
乳糖等）、糖アルコール（マンニット、ソルビット、キ
シリット等）が好適なものとして例示されるが、これら
に限定されるものではない。その添加量は脂質１重量部
に対して０．５〜１０重量部、好ましくは１〜５重量部
である。

【００１８】本発明の脂肪小体の直径は、通常２０〜５
００ｎｍ、好ましくは１００〜２５０ｎｍであり、かか
る粒径のものは肺での不活化を受けにくいものである。 本発明の脂肪小体へのＰＧ類の取り込み率は１００％に
近いため、さらに精製処理する必要はなく、そのまま医
薬品として使用可能であるが、要すれば、さらに分子ふ
るい処理、夾雑物、遊離物を除去するためのゲル濾過処
理等の任意の少なくとも一つの処理を行うこともできる
。

【００１９】ＰＧ類を取り込んだ脂肪小体は沈澱物とし
て回収することができる。例えば、脂肪小体を含有する
媒体を超遠心処理し、脂肪小体を沈澱として回収するこ
とができる。このものは次いで要すれば生理的に許容さ
れる水溶液で洗浄し、ペレット状、懸濁状の製剤として
調製する。製剤化は医薬品の製法において広く公知の方
法に準ずる。

【００２０】かくして得られたＰＧ類含有脂肪小体組成
物は脂質へのＰＧ類の取込み率が非常に高く、しかもそ
の粒子径は均一であり、極めて微少であることから医療
用製剤として好ましい。また本発明の脂肪小体は、その
液状製剤を凍結させた後、減圧下で乾燥させ、凍結乾燥
製剤としても提供されるが、その調製法は公知の方法に
従えばよい。

【００２１】本発明の脂肪小体組成物の製剤は、一般的
に経口薬または注射薬として使用され、その投与量は成
人の場合、ＰＧ類として１〜５０μｇ／ｋｇ／１回、好
適には０．０２〜１ｎｇ／ｋｇ／１回の量において投与
される。凍結乾燥製剤は、その使用時に、生理的に許容
される水性溶媒（例えば、注射用蒸留水）によって溶解
または希釈して用いられるのが一般的である。また、当
該凍結乾燥製剤は、製剤上の工夫によって錠剤化、カプ
セル化、腸液性カプセル化してもよい。

【００２２】

【実施例・実験例】以下の実施例および実験例は、特に
言及しない限り各々次の要領で行った。１．ＰＧ類含有
脂肪小体の製造：卵黄由来フォスファチジルコリン（以
下、ＥＰＣと略す）７０ｍｇとコレステロール３０ｍｇ
（モル比５５：４５）を混合する。この混合物をクロロ
ホルム１ｍｌに溶解した後、２５ｍｌ容の梨型フラスコ
に入れ、ロータリーエバポレータでクロロホルムを留去
し、脂質薄膜を調製した。内壁に脂質薄膜を形成したフ
ラスコをデシケーターに入れ真空ポンプで１時間吸引し
た。次に、フラスコに第１の緩衝液（脂肪小体内封溶液
と同組成）を１ｍｌ加え、ボルテクス・ミキサーで攪拌
して脂質懸濁液（ＭＬＶ）を調製した。

【００２３】次に、ドライアイス上で凍結後、３７℃温
浴中で融解するという操作を５回繰り返し、脂肪小体（
ＬＵＶ）を調製した。次に、０．２μｍのＮｕｃｌｅｐ
ｏｒｅ　フィルター（Ｃｏｓｔａｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔ
ｉｏｎ）を用いて１０回濾過を行い、粒子径を均一にし
た。次に前記調製に用いたのと同じ緩衝液３ｍｌに脂肪
小体１００μｌを加えたサンプルに、第２の緩衝液〔脂
肪小体外液と同組成、８００ｍＭ蔗糖含有２０ｍＭクエ
ン酸（ｐＨ３．０）を使用〕を５ｍｌ加え、超遠心（５
００００ｒｐｍ、３０分間）を２回行い、膜透過ｐＨ勾
配を有した脂肪小体を調製した。次に、風乾したＰＧ類
に上記脂肪小体を加え２５℃、１時間インキュベーショ
ンした。以上の工程によりＰＧ類含有脂肪小体を調製し
た。尚、ＭＬＶは多重ラメラ小胞を、ＬＵＶは粒子径の
大きな多重ラメラ小胞を示す。

【００２４】２．ＰＧ類の封入効率の測定：トリチウム
標識ＰＧ類を利用して、限外濾過法にて測定した。即ち
、限外濾過膜（Ａｍｉｃｏｎ製ＡＰ−１）上に補足され
たＰＧ類を脂肪小体に取り込まれたＰＧ類とし、限外濾
過膜を通過したＰＧ類をフリーのＰＧ類とした。そして
、全体のＰＧ類に対する補足されたＰＧ類の割合を以て
ＰＧ類の封入効率とした。即ち、ＰＧ類の封入効率は、
図１に示した如き手法を経て、限外濾過膜の放射活性お
よび濾液の放射活性を各々測定し、下式によって求めた
ものである。 （限外濾過膜の放射活性）÷（限外濾過膜の放射活性＋
濾液の放射活性）×１００ （放射活性の測定） サンプリングした液１００μｌに液体シンチレーター１
０ｍｌを加え、良く攪拌した後、放射活性を測定した。

【００２５】３．リン脂質（ＰＣ）の定量：リン脂質測
定用試薬（酵素剤）（デンカ生研社製）を用いて測定し
た。

【００２６】実施例１・実験例１ 内封緩衝液のｐＨを７．０〜１０．０とした時のＰＧＥ
１　封入効率：ＰＧ類として、ＰＧＥ１　を使用し、前
記脂肪小体の製造法の項目に記載した方法に準じて製造
した脂肪小体であって、内封緩衝液ｐＨを７．０、８．
０、９．０および１０．０と１刻みで変化させたものの
ＰＧＥ１　封入効率を調べ、その結果を図２に示した。 なお、本実施例ではＰＧＥ１　５μｇに対しＰＣ量を変
化させた。内封緩衝液としては、各々次のものを使用し
た。即ち、本発明の脂肪小体としては、ｐＨ７．０は５
００ｍＭリン酸、ｐＨ８．０および９．０は５００ｍＭ
トリス、ｐＨ１０．０は５００ｍＭ炭酸である。また、
対照脂肪小体としては、ｐＨ３．０は２０ｍＭクエン酸
を使用した。これに対して、脂肪小体のＰＣ量として、
０．００７５ｍｇ、０．０７５ｍｇおよび０．７５ｍｇ
の３段階を用いた（以下の実施例においても同じ）。Ｐ
ＧＥ１　封入効率は脂肪小体量と比例しているが、ｐＨ
１０．０の炭酸が最も高く、次いでｐＨ７．０のリン酸
であった。

【００２７】実施例２・実験例２ 内封炭酸緩衝液のｐＨ、濃度のＰＧＥ１　封入効率への
影響：ａ）ＰＧ類として、ＰＧＥ１　を使用し、前記脂
肪小体の製造に準じて製造した脂肪小体であって、炭酸
緩衝液（５００ｍＭ）のｐＨを変えたもののＰＧＥ１　
封入効率を調べ、その結果を図３に示した。対照脂肪小
体（コントロール）としては、２０ｍＭクエン酸にてｐ
Ｈ３．０に調製された脂肪小体を用いた（以下の実施例
においても同じ）。図３の結果から明らかなように、ｐ
Ｈ１０．０においては、ｐＨ９．０より多少封入効率が
低下した。しかし、炭酸におけるｐＨ９．０の場合は、
トリスにおけるｐＨ９．０より遙に高いＰＧＥ１　封入
効率を示した。ｂ）ＰＧ類として、ＰＧＥ１　を使用し
、前記脂肪小体の製造法の項目に記載した方法に準じて
製造した脂肪小体であって、炭酸緩衝液（ｐＨ１０．０
）の濃度を２５０ｍＭ、５００ｍＭ、１０００ｍＭに変
化させた時のＰＧＥ１　封入効率を測定し、その結果を
図４に示した。図４に示した結果から明らかなように炭
酸濃度が高い程、ＰＧＥ１　封入効率も高くなることが
わかる。なお、上記ａ）およびｂ）の実験においては、
ＰＧＥ１　５μｇに対しＰＣ量を変化させた。

【００２８】実施例３・実験例３ 内封リン酸緩衝液のｐＨ変化によるＰＧＥ１　封入効率
への影響：ＰＧ類として、ＰＧＥ１　を使用し、前記脂
肪小体の製造に準じて製造した脂肪小体であって、リン
酸緩衝液（５００ｍＭ）のｐＨを、ｐＨ７．０、ｐＨ８
．０、ｐＨ９．０、ｐＨ１０．０に変化させてＰＧＥ１
　封入効率を調べた（濃度は全て５００ｍＭ）。その結
果を図５に示す。図５の結果から明らかなようにリン酸
のｐＨが高くなる程、封入効率も高くなる。

【００２９】実施例４・実験例４ 内封緩衝液ｐＨ９．０とした時の緩衝液種のＰＧＥ１　
封入効率への影響：ＰＧ類として、ＰＧＥ１　を使用し
、前記脂肪小体の製造に準じて製造した脂肪小体であっ
て、５種類の緩衝液、即ちトリス緩衝液、グリシン緩衝
液、リン酸緩衝液、ホウ酸緩衝液および炭酸緩衝液を使
用したものについて、そのｐＨ９．０におけるＰＧＥ１
　封入効率を調べ、その結果を図６に示した。これらの
緩衝液の特性は表１に示した通りである。

【００３０】

【表１】

【００３１】図６に示した結果から明らかなように、こ
れら緩衝液中、炭酸緩衝液が最も高いＰＧＥ１　封入効
率を示した。

【００３２】実施例５・実験例５ 脂肪小体からのＰＧＥ１　の遊離率：ＰＧ類として、Ｐ
ＧＥ１　を使用し、前記脂肪小体の製造に準じて製造し
た脂肪小体を、冷蔵庫で１０℃以下にて保存し、経時的
に脂肪小体からのＰＧＥ１　の遊離を、限外濾過法によ
って調べた。その結果は表２に示した通りであり、９０
時間保存によってもその遊離は僅かであった。このこと
から本発明の脂肪小体においては、ＰＧ類の放出性が抑
制されていること、即ち持続性のあることがわかる。な
お、内部緩衝液としては、５００ｍＭ炭酸緩衝液を使用
した。

【００３３】

【表２】

【００３４】実施例６・実験例６ 脂肪小体に封入されたＰＧＥ１　の安定性：ＰＧ類とし
て、ＰＧＥ１　（５μｇ）を使用し、ＰＣ量は０．７５
ｍｇとし、内封液として、５００ｍＭ炭酸緩衝液を使用
して前記脂肪小体の製造に準じて製造した脂肪小体を、
冷蔵庫で１０℃以下にて保存し、経時的に末変化のＰＧ
Ｅ１　と分解したＰＧＥ１　（即ち、ＰＧＢ１　）との
割合をオクタデシルシリル化充填カラムを用いたポスト
カラム法によって調べた。その結果は図７に示した通り
である。 この結果から本発明の脂肪小体中におけるＰＧＥ１　は
、非常に安定であることがわかった。

【００３５】〔ＨＰＬＣによる分析法〕ＨＰＬＣのポス
トカラム法によって、ＰＧＥ１　およびＰＧＢ１　を定
量した。すなわちＰＧをカラムによって分離し、分離後
の溶出液に１Ｎ水酸化カリウム液を反応させた。次にＰ
ＧＥ１　をＰＧＢ１　に定量的に変換させた後、これを
紫外吸光光度計で検出し定量した。測定条件は以下の通
りである。分離条件 移動相：１／１５０Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．３）／液
体クロマトグラフ用 内部標準：アセトニトリル混液（３／１）βナフトール カラム：オクタデシルシリル化シリカゲル充填カラムカ
ラム温度：６０℃ 流速：１．３ｍｌ／ｍｉｎ． ポストカラム反応条件 反応液：１Ｎ　　ＫＯＨ 反応コイル：テフロンチューブ（内径０．５ｍｍ、長さ
１０ｍ） コイル温度：６０℃ 流速：０．５ｍｌ／ｍｉｎ． 分析条件 測定波長：２７８ｎｍ

【００３６】実施例７・実験例７ 脂肪小体に封入されたＰＧＥ１　の放出性：ａ）５００
ｍＭ炭酸緩衝液（ｐＨ１０．０）を封入した本発明の脂
肪小体と２０ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ３．０）を封入
した脂肪小体（コントロール）を用いて脂肪小体外液と
同じｐＨの、または中性の緩衝液による希釈効果につい
て限外濾過法にて調べた。ＰＧＥ１　５μｇ、ホスファ
チジルコリン７．５ｍｇよりなる脂肪小体５００μｌを
１０倍希釈した。その結果を図８に示した。その結果か
ら明らかなように、コントロール脂肪小体はｐＨ３．０
クエン酸緩衝液で希釈するだけでＰＧＥ１　を遊離し、
さらにｐＨ７．４のヘペス緩衝液中ではその殆どのＰＧ
Ｅ１　を遊離した。一方、本発明脂肪小体ではＰＧＥ１
　の遊離抑制がみられた。

【００３７】ｂ）本発明脂肪小体について５％ヒト血清
アルブミン（ｐＨ７．４のヘペス緩衝液）中における脂
肪小体からのＰＧＥ１　の遊離を限外濾過法にて調べた
。 その結果を図９に示した。その結果から明らかなように
、５％ヒト血清アルブミン（ｐＨ７．４のヘペス緩衝液
）中ではＰＧＥ１　の遊離はあるが、その６０％が保持
されていた。なお、ｂ）の実験においてＰＧＥ１　は５
μｇであり、ホスファチジルコリンは５％ヒト血清アル
ブミン中０．７５ｍｇである。

【００３８】〔蔗糖密度勾配遠心法〕蔗糖で密度勾配を
設けた中にリポソームを加え、リポソームに封入された
ＰＧ類とフリーのＰＧ類を分離するものである。本法を
適用することにより、限外濾過法では分析が不可能なリ
ポソームのＰＧＥ１　保持能に及ぼす蛋白質（例えばヒ
ト血清アルブミン（ＨＳＡ））の影響も調べることがで
きる。本方法は具体的に以下の通りである。超遠心用チ
ューブ中で０．８Ｍ蔗糖を含むバッファー８００μｌに
分析すべきリポソームサンプル５０μｌを加える。ｐＨ
を変えたり、ＨＳＡを加えたりした分析すべきバッファ
ー８００μｌにリポソームサンプル５０μｌを加え、最
終蔗糖濃度を８００ｍＭに調整する。この液を超遠心用
チューブに入れ、この上から５００ｍＭ蔗糖含有２０ｍ
Ｍクエン酸バッファーを４．１５ｍｌ、静かに重層する
。次に２３０，０００ｇで１６時間、４℃下で超遠心処
理する。超遠心終了後、底部から１ｍｌ／フラクション
で分取する。そして全体のＰＧ類に対する上層３ｍｌの
ＰＧ類の割合をもってＰＧ類の封入効率とした。

【００３９】実施例８・実験例８ ラット血漿からの排泄： ラット血漿中濃度を遊離のＰＧＥ１　と本発明ＰＧＥ１
　含有脂肪小体（脂肪小体内封緩衝液は５００ｍＭ炭酸
ナトリウム、ｐＨ１０．０）で比較した。トレーサーと
して、　１ＨラベルのＰＧＥ１　を用い、その放射活性
の変化で調べた。投与量はＰＧＥ１　２０μｇ／ＰＣ３
０ｍｇ／ｋｇとし、尾静脈より投与、採血は頸動脈に設
けたカニューレから行った。採血したサンプルは乾燥後
、放射活性を測定し、ｐｅｒｃｅｎｔ　ｏｆ　ｄｏｓｅ
　を計算した。その結果を図１０に示した。遊離のＰＧ
Ｅ１の血中濃度は投与後急速に低下し、投与後２分目で
ほぼ０となった。これに対して、脂肪小体に封入したＰ
ＧＥ１　は低下は緩慢であり、投与後、５分目でも１０
％以上を維持していた。

【００４０】

【発明の効果】本発明ＰＧ含有脂肪小体組成物は以下の
特徴を有することがわかった。■ＰＧ類の封入量が多い
：脂質一定量当たりの封入量が対照リポソームの約１０
０倍。■脂肪小体中のＰＧ類は安定であった：４℃で２
０時間液状保存しても、漏出率は４％以下、ＰＧＡ１　
またはＰＧＢ１　への分解は７％以下であった。■ＰＧ
類の放出は大きく抑制されていた：アルブミン存在下で
も放出抑制効果が認められた。■ラット血中のＰＧ類濃
度が高かった：投与初期における血中濃度は有意にフリ
ーより高かった。

【図面の簡単な説明】

【図１】分析に用いた限外濾過の原理図である。

【図２】脂肪小体内封緩衝液のｐＨ変化によるＰＧ類封
入効率への影響を示すグラフである。

【図３】内封炭酸緩衝液のｐＨを変化させた時のＰＧ類
封入効率を示すグラフである。

【図４】内封炭酸緩衝液の濃度を変化させた時のＰＧ類
封入効率を示すグラフである。

【図５】内封リン酸緩衝液のｐＨを変化させた時のＰＧ
類封入効率を示すグラフである。

【図６】内封緩衝液のｐＨを９．０とした時のＰＧ類封
入効率を示すグラフである。

【図７】脂肪小体に封入されたＰＧ類の安定性を示すグ
ラフである。

【図８】脂肪小体からのＰＧ類の放出性を示すグラフで
ある。

【図９】脂肪小体からのＰＧ類の放出性を示すグラフで
ある。

【図１０】ラット血漿からのＰＧ類の排泄を示すグラフ
である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】脂肪小体外液のｐＨが２〜６、脂肪小体内
   封溶液のｐＨが弱酸と強塩基の組み合わせにて７〜１１
   に調整されてなることを特徴とするプロスタグランジン
   類含有脂肪小体組成物。