JPH04288099A

JPH04288099A - エンドセリン拮抗物質

Info

Publication number: JPH04288099A
Application number: JP4003258A
Authority: JP
Inventors: Yoshihiro Urade; 良博裏出; Michihiro Takai; 高井　道博; Tadashi Watakabe; 渡壁　忠; Toshiichi Okada; 岡田　敏一; Hideaki Karaki; 英明唐木
Original assignee: NIPPON CHIBAGAIGII KK; Ciba Geigy Japan Ltd
Current assignee: NIPPON CHIBAGAIGII KK; Ciba Geigy Japan Ltd
Priority date: 1991-01-12
Filing date: 1992-01-10
Publication date: 1992-10-13
Also published as: GB9100721D0

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はエンドセリン類似体及び
その使用に関する。

【０００２】

【従来の技術】エンドセリン（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ；
ＥＴ）は平滑筋の弛緩及び収縮を含む種々の生物学的活
性を示す一連のペプチドである。Ｎａｔｕｒｅ　　３３
２，３１，１９８８はエンドセリン−１（ＥＴ−１）の
存在及びその種々の生物学的活性を初めて報告した。Ｐ
ｒｏ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）８６，２８６３，
１９８９はエンドセリン−３（ＥＴ−３）を初めて記載
した。Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃａｌ．１７６，１，
１９９０は気管支に存在するＥＴ受容体タイプＩＩを報
告している。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１４０
４４，１９９０は少なくとも２種類のＥＴ受容体の存在
、及び腎脈管膜細胞中のＥＴ受容体タイプＩＩの存在を
示唆している。Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，１７
４３２，１９９０は肝臓中のＥＴ受容体タイプＩＩの存
在を記載している。

【０００３】２１個のアミノ酸残基を有する生来のＥＴ
に対して種々のＥＴ誘導体が報告されている。例えば、
Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃａｌ．１７４，２１−３１
，１９８９は生来のＥＴのＣ−末端に相当するヘキサペ
プチドである短縮されたＥＴ誘導体をアゴニスト（ａｇ
ｏｎｉｓｔ）として記載している。Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１６３，４２４−４
２９，１９８９はＥＴ−１（１−３９）及びアゴニスト
としてのその活性を記載している。しかしながら、本発
明者らはＥＴに対する拮抗活性を示すＥＴ誘導体を記載
した報告を知らない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明はＥＴに
対して拮抗作用を有するペプチドを提供しようとするも
のである。

【０００５】

【課題を解決するための手段】ＥＴ及びＥＴ受容体に関
する現在の知見によれば、ＥＴ受容体は少なくとも３種
類の異なるサブタイプに分類される。サブタイプの１つ
はＥＴ−１及びＥＴ−３の両者に対する高い親和性を有
し、そして本明細書において便宜上タイプＩＩ受容体と
称する。本発明はタイプＩＩ受容体に対して高い親和性
を示し、そしてＥＴ−１及びＥＴ−３に対して非常に拮
抗的である短縮されたＥＴ誘導体に関する。本発明は次
の一般式（Ｉ）（配列番号：１）：

【０００６】

【化７】

【０００７】（式中、Ｘａａ１　はＴｙｒ，Ｐｈｅ又は
Ａｌａを表わし、Ｘａａ２　はＡｓｐ又はＧｌｙを表わ
し、そしてＸａａ３　はＴｒｐ又はＰｈｅを表わす）に
より表わされるＥＴ誘導体を提供する。本発明はまた、
上記ＥＴ誘導体を含んで成る、ＥＴ拮抗剤として有用な
医薬製剤を提供する。

【０００８】

【具体的な説明】ペプチド本発明は前記の一般式により表わされそして前記の定義
内においてＸａａ１，Ｘａａ２　及びＸａａ３　の任意
の組合わせを有するあらゆるペプチドを包含する。Ｘａ
ａ１　がＴｙｒであり、Ｘａａ２がＡｓｐでありそして
Ｘａａ３　がＴｒｐであるペプチドは１１位のＣｙｓか
ら２１位のＴｒｐまでの部分に相当するＥＴ−１のＣ−
末端側であり、そして非常に拮抗的である。このペプチ
ドは次の式（ＩＩ）（配列番号：２）〔　ＥＴ−１（１
１−２１）〕：

【０００９】

【化８】

【００１０】により表わされる。

【００１１】本発明の他の好ましいペプチドには次のも
のが含まれる。

【化９】

【００１２】本発明の他のペプチドは、Ｘａａ１　がＴ
ｙｒであり、Ｘａａ２　がＧｌｙであり、そしてＸａａ
３　がＰｈｅであるＧｌｙ１８，　Ｐｈｅ２１−ＥＴ−
１（１１−２１）；Ｘａａ１　がＰｈｅであり、Ｘａａ
２　がＡｓｐであり、そしてＸａａ３　がＰｈｅである
Ｐｈｅ１３，　Ｐｈｅ２１−ＥＴ−１（１１−２１）；
Ｘａａ１　がＰｈｅであり、Ｘａａ２　がＧｌｙであり
、そしてＸａａ３　がＴｒｐであるＰｈｅ１３，　Ｇｌ
ｙ１８−ＥＴ−１（１１−２１）；Ｘａａ１　がＰｈｅ
であり、Ｘａａ２　がＧｌｙであり、そしてＸａａ３　
がＰｈｅであるＰｈｅ１３，　Ｇｌｙ１８，　Ｐｈｅ２
１−ＥＴ−１（１１−２１）　；Ｘａａ１　がＡｌａで
あり、Ｘａａ２　がＡｓｐであり、そしてＸａａ３　が
ＰｈｅであるＡｌａ１３，　Ｐｈｅ２１−ＥＴ−１（１
１−２１）；Ｘａａ１　がＡｌａであり、Ｘａａ２　が
Ｇｌｙであり、そしてＸａａ３　がＴｒｐであるＡｌａ
１３，　Ｇｌｙ１８−ＥＴ−１（１１−２１）；及びＸ
ａａ１　がＡｌａであり、Ｘａａ２　がＧｌｙであり、
そしてＸａａ３　がＰｈｅであるＡｌａ１３，Ｇｌｙ１
８，　Ｐｈｅ２１−ＥＴ−１（１１−２１）である。

【００１３】ペプチドの製造本発明のペプチドは、遺伝子組換法及び化合合成を含め
て、ペプチド合成のための任意の常法を用いて製造する
ことができる。ペプチドはアミノ酸残基１１個を有する
短いものであり、そしてそれ故に固相合成のごとき化学
合成により便利に製造することができる。

【００１４】例えば、一般式（Ｉ）で表わされる本発明
のペプチドは市販の試薬及び市販のアミノ酸合成機（例
えばＡＢＩモデル４３１）を用いて常法により製造する
ことができる。例えば、すべてのアミノ酸のα−アミノ
基は９−フルオレニルメタルオキシ−カルボニル（Ｆｍ
ｏｃ）により保護され、そして側鎖の官能基は次の様に
保護される。すなわち、システインのチオール基はトリ
チル（Ｔｒｉ）により保護され、リジンのε−アミノ基
はｔｅｒｔ−ブトキシ基（ｔ−Ｂｏｃ）により保護され
、アスパラギン酸のβ−カルボキシル基はｔｅｒｔ−ブ
チルエステル（ＯｔＢｕ）により保護され、セリンのヒ
ドロキシル基はｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｔＢｕ）に
より保護され、チロシンのフェノール性ヒドロキシル基
はｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ｔＢｕ）により保護され
、そしてヒスチジンのイミダゾール基はトリチル（Ｔｒ
ｉ）基により保護される。

【００１５】保護されたペプチドの合成は固体キャリヤ
ーとして不溶性ポリスチレン樹脂誘導体（ｐ−ベンジル
オキシベンジルアルコール樹脂）を用いて固相合成によ
り行われる。Ｆｍｏｃ基は各段階の縮合段階の前にＮ−
メチルピロリドン（ＮＭＰ）中２０％ピペリジンによる
処理により除去される。合成されたペプチドのキャリヤ
ーからの遊離及び脱保護は１，２−エタンジオールの存
在下でのトリフルオロ酢酸水（９５／Ｖ＝Ｖ／Ｖ）によ
り行うことができる。

【００１６】生物学的活性本発明のペプチドはＥＴに対する顕著な拮抗活性を示す
。活性は、テンジクネズミの回腸ＥＴ受容体へのＥＴ−
１及びＥＴ−３の結合の阻害、並びにテンジクネズミ回
腸の収縮の阻害により証明された。（１）テンジクネズミ回腸ＥＴ受容体への〔　１２５Ｉ
〕ＥＴ−１及び〔　１２５Ｉ〕ＥＴ−３の結合の阻害

【
００１７】結合アッセイテンジクネズミの回腸を、２０ｍＭ　　Ｔｒｉｓ−ＨＣ
ｌ（ｐＨ７．４）、０．２ｍＭフェニルメチルスルホニ
ルフルオリド、１μＭロイペプチン、１μｍペプスタチ
ン、０．１ｍＭ　　ＥＤＴＡ及び０．５ｍＭ　　ＥＧＴ
Ａを含有する氷凍した０．２５Ｍシュークロース溶液９
容量中で、キネマチカ・ポリトロン（Ｋｉｎｅｍａｔｉ
ｃａ　　Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）ホモジナイザー（Ｌｕｃｅ
ｒｎ，スイス）を用いて、最高速度で３０秒間ずつホモ
ジナイズした。ホモジネートを１，０００×ｇにて１０分間４℃で遠心
分離した後、上清を再び２０，０００×ｇにて２０分間
遠心分離した。得られるペレットを３回上記の様にして
洗浄し、そして膜源として使用した。この膜を小分けし
て−８０℃にて使用まで貯蔵した。

【００１８】テンジクネズミの回腸の原形質膜（蛋白質
〜２μｍ）を３７℃にて１時間、１０ｐＭ〔　１２５Ｉ
〕ＥＴ−１又はＥＴ−３と共に、種々の量の非ラベルリ
ガンドの存在下又は非存在下で、全容量１ｍｌの２０ｍ
Ｍ　　ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）、１４５ｍＭ　　ＮａＣｌ
，５ｍＭ　　ＫＣｌ，３ｍＭ　　ＭｇＣｌ２　，１ｍＭ
　　ＥＧＴＡ，１ｍｇ／ｍｌウシ血清アルブミン及び０
．２ｍｇ／ｍｌのバシトラシン中でインキュベートした
。インキュベーションの後、未結合の〔　１２５Ｉ〕Ｅ
Ｔを２０，０００×ｇにて２０分間４℃での遠心分離に
より分離し、次に上清を吸引除去した。膜ペレット中の
放射能をγカンンター中で測定した。非特異的結合を飽
和濃度（１００ｍＭ）のＥＴの存在下での膜結合放射能
として定義した。非特異的結合を全結合から差引き、そ
してその差を特異的結合と定義した。全結合は常に添加
した全放射能の１５％未満であった。

【００１９】テンジクネズミ回腸の膜中のＥＴ結合活性
の特徴付けテンジクネズミの回腸の原形質膜中の、ＥＴに対する特
異的結合部位が検出された。〔　１２５Ｉ〕ＥＴ−１及
び〔　１２５Ｉ〕ＥＴ−３を用いるリガンド結合アッセ
イにおいて、試験したすべてのリガンド濃度において特
異的結合は全結合の８０％より多く、飽和過程であった
。データーのサッチャード（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ）分析
は各ＥＴについて１種類の高親和性結合部位を示し、Ｋ
ｄは〜４ｐＭ、Ｂｍａｘは１．２ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白質
であった（表１）。非ラベルのＥＴは、膜への〔　１２
５Ｉ〕ＥＴの結合を、ＥＴアインペプチドのタイプとは
無関係に約１０ｐＭのＫｉをもってほとんど同じ効力で
競争的にそして完全に阻害した。

【００２０】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　表１　　　　　　　　　　　　テン
ジクネズミ回腸の膜におけるＥＴ結合活性の特徴───
─────────────────────────
──────　　　　　　　　　　　　　　　　　１２
５Ｉ−ＥＴ−１　　　　　　　　　　　１２５Ｉ−ＥＴ
−３───────────────────────
───────────　　Ｋｄ　　　　　　　　　　
　　　　３．９ｐＭ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２．６ｐＭ　　Ｂｍａｘ　　　　　　　　　　１．
２ｐｍｏｌ／ｍｇ蛋白質　　　　　　１．２ｐｍｏｌ／
ｍｇ蛋白質　　ＥＴ−１（Ｋｉ）　　８．２ｐＭ　　　
　　　　　　　　　　　　　　　４．５ｐＭ　　ＥＴ−
３（Ｋｉ）　　１２．０ｐＭ　　　　　　　　　　　　
　　　　６．２ｐＭ────────────────
──────────────────

【００２１】こ
れらの結果が示すところによれば、テンジクネズミの回
腸には、ＥＴの３種類の異なるアインペプチド間の共通
構造を認識する、ＥＴに対する受容体が豊富に存在する
。

【００２２】ＥＴ−１（１１−２１）　及びＡｌａ１１
，　Ａｌａ１５−ＥＴ−１（１１−２１）による、テン
ジクネズミ回腸の膜への〔　１２５Ｉ〕ＥＴの結合の競
争的阻害２種類の短いペプチドＥＴ−１（１１−２１）　及びＡ
ｌａ１１，Ａｌａ１５−ＥＴ−１（１１−２１）を使用
した。前者のペプチドは、３種類のアインペプチド間で
高度に保存されているＥＴ配列のＣ−末端半分を有し、
そしてＥＴ中の２セットの分子内ジスルフィド結合とは
異なりＣｙｓ１１とＣｙｓ１５との間に１個のジスルフ
ィド結合を有する。このジスルフィド結合は後者のペプ
チドにおいては２ケ所におけるＣｙｓからＡｌａへのア
ミノ酸置換により失われている（図１）。

【００２３】これら２種類の短いペプチドはいずれも膜
への〔　１２５Ｉ〕ＥＴの結合を量依存的に阻害した。ＥＴ−１（１１−２１）　及びＡｌａ１１，　Ａｌａ１
５−ＥＴ−１（１１−２１）のＫｉ値は、〔　１２５Ｉ
〕ＥＴ−１結合においてはそれぞれ約１４ｎＭ及び１μ
Ｍであり、そして〔　１２５Ｉ〕ＥＴ−３結合において
はそれぞれ９．４ｎＭ及び０．７６μＭであった。他の
ペプチドＰｈｅ１３−ＥＴ−１（１１−２１）　、Ａｌ
ａ１３−ＥＴ−１（１１−２１）　、Ｇｌｙ１８−ＥＴ
−１（１１−２１）及びＰｈｅ２１−ＥＴ−１（１１−
２１）　について、同じ競争阻害試験を行った。結果を
表２に示す。

【００２４】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　表２　　　　　　　　　　テンジク
ネズミ回腸の膜中の〔　１２５Ｉ〕ＥＴ−１結合に　　
　　　　　　　　対するＥＴ−１（１１−２１）　類似
体のＫｉ値　　　　　　──────────────
───────────────　　　　　　　　　　
　　　　ＥＴ−１（１１−２１）　類似体　　　　　　
　　　　　　Ｋｉ（ｎＭ）　　　　　　───────
──────────────────────　　　
　　　　　　　　　　　　　ＥＴ−１（１１−２１）　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１４　　　　　
　　　　　Ｐｈｅ１３−ＥＴ−１（１１−２１）　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２６　　　　　　　
　　　Ａｌａ１３−ＥＴ−１（１１−２１）　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　３７　　　　　　　　　
　Ｇｌｙ１８−ＥＴ−１（１１−２１）　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　３０　　　　　　　　　　Ｐ
ｈｅ２１−ＥＴ−１（１１−２１）　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　３２　　　　　　───────
──────────────────────

【００
２５】（２）テンジクネズミ回腸の収縮の阻害回腸（回
腸の縦方向の平滑筋）の収縮をＢｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａ
ｃｏｌ．９８，４８３，１９８９に従って、次の方法に
より測定した。体重２５０〜３００ｇの雄性アルビノ・
テンジクネズミを気絶させ、そして脱血した。回腸の縦平滑筋を摘出し、そして３７℃の酸素添加生理
食塩水に入れた。幅１ｍｍ、長さ５ｍｍの回腸の断片を
酸素添加された（９５％Ｏ２　，５％ＣＯ２　）生理食
塩水を収容した２０ｍｌの器官浴に入れ、それらの長軸
にそっての機械的活性を記録した。

【００２６】回腸の活性は張力計トランスデューサー（
ｓｔｒａｉｎ　　ｇａｕｇｅ　　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ
）（Ｎｉｈｏｕ−Ｋｏｄｅｒ）を介して、調製物を１０
ｍＮの残留張力下に維持しながら、等長的に（ｉｓｏｍ
ｅｔｒｉｃａｌｌｙ）記録した。生理的食塩水は、１３
６．９ｍＭ　　ＮａＣｌ，５．４ｍＭ　　ＫＣｌ，１．
５ｍＭ　　ＣａＣｌ２　，１．０ｍＭ　　ＭｇＣｌ２　
，２３．８ｍＭ　　ＮａＨＣＯ３　，０．０１ｍＭエチ
レンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）及び５．５ｍＭグルコ
ースを含有した。収縮の対照値を得るために高Ｋ＋　収
縮を測定する場合、ＮａＣｌの代りに同モル濃度のＫＣ
ｌを用いた。

【００２７】図２に示すように、ＥＴ−１は回腸の収縮
を濃度依在的に生じさせた。収縮は、ＥＴ−１の添加の
５分間前に添加された１０μＭ　　ＥＴ−１（１１−２
１）　により有意に阻害された。ＥＴ−３を使用するこ
とにより非常に類似した結果が得られた。本発明のペプ
チドはＥＴ−１及びＥＴ−３に対して拮抗的であるため
、ＴＥ受容体、特にＥＴ−１及びＥＴ−３の両者が高い
親和性を示すＥＴ受容体サブタイプにより介在されるあ
らゆる症状又は疾患の治療又は予防のために期待される
。例えば、本発明のペプチドは抗−喘息剤及び腎不全の
ための薬剤として有望である。

【００２８】従って、本発明は式（Ｉ）により表わされ
るペプチド及び医薬として許容されるキャリヤーを含ん
で成る医薬製剤を提供する。すなわち、本発明のペプチ
ドは、例えば、非経口的、例えば、筋肉内、静脈内、鼻
内、皮下又は腹腔内投与のために適当な無機又は有機の
、固体又は液体の、医薬として許容されるキャリヤーと
共に又はこれらと混合して、療法的有効量の誘導体を含
有する医薬製剤の製造のために使用することができる。

【００２９】非経口投与のためには適当な注射又は注入
溶液、好ましくは等張水溶液又は懸濁液が利用でき、こ
れらを使用前に、例えば、活性成分を単独で又はマンニ
トールのごとき医薬として許容されるキャリヤーと共に
含有する凍結乾燥調製物から調製することが可能である
。これらの調製物は無菌化することができ、そして／又
は助剤、例えば防腐剤、安定剤、湿潤剤及び／又は乳化
剤、溶解剤、浸透圧調整塩、及び／又は緩衝剤を含有す
ることができる。

【００３０】本発明の医薬製剤は所望により他の薬理学
的に価値のある物質を含有することができ、そしてそれ
自体既知の態様で、例えば常用の場合、溶解又は凍結乾
燥法により製造される。これらは約０．１％〜１００％
、特に約１％〜約５０％、又は凍結乾燥物の場合には１
００％までの活性成分を含有する。疾患及び生物の条件
に依存して、約１μｇ〜約１０ｍｇの非経口投与量が約
７０ｋｇの温血動物（ヒト及び動物）の治療のために与
えられる。

【００３１】

【実施例】次に、本発明を下記の実施例によりさらに説
明するが、これにより本発明の範囲を限定するものでは
ない。実施例１．　　ＥＴ−１（１１−２１）　の合成４６３
ｍｇ（０．２５ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｔｒｐ−ＯＣＨ
２　−フェニルオキシベンジル樹脂（Ｎｏｖａ　　Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．の製品）をＮＭＰ中２０％ピペリジン４．
５ｍｌにより２１分間処理する。ピペリジン処理の後、
ペプチド樹脂をＮＭＰで洗浄する。３５３ｍｇ（１ｍｍ
ｏｌ）のＦｍｏｃ−Ｉｌｅを２．１ｍｌのＮＭＰに溶解
し、この混合物に１．６ｍｌの１Ｍ１−ヒドロキシベン
ゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）及び１．３ｍｌの１Ｍジシ
クロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）を加える。

【００３２】この混合物を２４分間攪拌し、そして次に
アミノ酸（ペプチド）樹脂に加える。反応（７１分間）
の後、ペプチド樹脂をＮＭＰで洗浄して次の段階を待つ
。１段階は約１１０分間で完了する。上記の段階を、１
ｍｍｏｌずつの次の保護アミノ酸：Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ，
Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯｔＢｕ），Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ，Ｆ
ｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｉ），Ｆｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｉ
），Ｆｍｏｃ−Ｐｈｅ，Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔＢｕ），
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、及びＦｍｏｃ−Ｃｙｓ（Ｔｒｉ）を
この順序で用いて反復する。

【００３３】保護されたペプチド樹脂をＮＭＰ中２０％
ピペリジンにより２１分間処理してＦｍｏｃ基を除去す
る。保護されたペプチド樹脂を濾過により集め、そして
塩化メチレンにより洗浄する。１ｍｌの１，２−エタン
ジチオール及び４ｍｌの９５％ＴＦＡを保護されたペプ
チド樹脂に加え、そして混合物を室温にて５分間攪拌す
る。次に、樹脂及び溶液を濾過により分離し、そして樹脂を
トリフルオロエタノール及び塩化メチレンで洗浄する。濾液を減圧下で蒸発せしめ、そして次にイソプロピルエ
ーテル−ｎ−ヘキサン（１／１，Ｖ／Ｖ）を加える。

【００３４】生じた粉末を集め、そして同じ溶剤で洗浄
し、そして次に乾燥する。粉末を１ｍｌの１，２−エタ
ンジチオール及び４ｍｌの９５％ＴＦＡにより室温にて
９０分間再処理し、そして次に蒸発せしめる。次に、こ
うして得られた残渣をイソプロピルエーテル−ｎ−ヘキ
サン（１／１，Ｖ／Ｖ）により沈澱せしめる。沈澱を２
５０ｍｌの０．１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ８．５）に
入れ、そして次に空気中で室温にて２．５時間酸化する
。反応混合物を減圧下で濃縮し、そして目的生成物を高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製して
、次の式（ＩＩ）〔配列番号：２〕：

【００３５】

【化１０】

【００３６】で表わされるペプチド３３ｍｇを得る。こ
うして得られたペプチドはＴｏｓｏ　　ＴＳＫ−Ｇｅｌ
　　ＯＤＳ１２０−Ｔでの分析ＨＰＬＣにおいて２３．
６分間の保持時間で単一ピークを示す。酸加水分解によ
るアミノ酸分析の結果を表３に示す。

【００３７】実施例２．　　Ｐｈｅ１３−ＥＴ−１（１
１−２１），　Ａｌａ１３−ＥＴ−１（１１−２１），
　Ｇｌｕ１８−ＥＴ−１（１１−２１）　及びＰｈｅ２
１−ＥＴ−１（１１−２１）　の合成標記のペプチドを
合成するために実施例１に記載した方法を反復する。酸
加水分解によるアミノ酸分解の結果を表３に示す。

【００３８】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　表３──────────────
─────────────────────　　　　
　　ＥＴ−１（１１−２１）　　　Ｐｈｅ１３−ＥＴ−
１　　　Ａｌａ１３−ＥＴ−１　　　Ｇｌｙ１８−ＥＴ
−１　　　Ｐｈｅ２１−ＥＴ−１　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　（１１−２１）　　　　　
　（１１−２１）　　　　　　（１１−２１）　　　　
　　（１１−２１）────────────────
───────────────────Ａｓｐ　　１
．００　　　　１．００　　　　　　１．００　　　　
　　　　　　　　　　　　　　１．００Ｇｌｕ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　０．９８Ｃｙｓ　　Ｎ．Ｄ．　
　　　Ｎ．Ｄ．　　　　　　Ｎ．Ｄ．　　　　Ｎ．Ｄ．
　　　　　　Ｎ．Ｄ．Ｖａｌ　　０．８８　　　　０．
９５　　　　　　０．９２　　　　０．９３　　　　　
　０．９０Ｉｌｅ　　１．６５　　　　１．６７　　　
　　　１．６５　　　　１．６６　　　　　　１．６４
Ａｌａ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　０．９６Ｌｅｕ　　０．９６　　　　０．
９８　　　　　　０．９６　　　　１．００　　　　　
　０．９５Ｔｙｒ　　０．９４　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．９５　　
　　　　０．９４Ｐｈｅ　　０．９５　　　　１．９０
　　　　　　０．９２　　　　０．９４　　　　　　１
．９２Ｈｉｓ　　０．９３　　　　０．９５　　　　　
　０．９５　　　　０．９４　　　　　　０．９４Ｔｒ
ｐ　　０．７０　　　　０．７２　　　　　　０．７０
　　　　０．７３─────────────────
──────────────────Ｎ．Ｄ．検出さ
れず。

【００３９】

【配列表】配列番号：１配列の種類：ペプチド配列の長さ：１１トポロジー：直鎖状配列の型：合成ペプチド特徴：３位のＸａａ１　＝Ｔｙｒ，Ｐｈｅ又はＡｌａ８位のＸ
ａａ２　＝Ａｓｐ又はＧｌｙ１１位のＸａａ３　＝Ｔｙｒ又はＰｈｅ配列：

【００４０】配列番号：２配列の種類：ペプチド配列の長さ：１１トポロジー：直鎖状配列の型：合成ペプチド配列：

【００４１】配列番号：３配列の種類：ペプチド配列の長さ：１１トポロジー：直鎖状配列の型：合成ペプチド配列：

【００４２】配列番号：４配列の種類：ペプチド配列の長さ：１１トポロジー：直鎖状配列の型：合成ペプチド配列：

【００４３】配列番号：５配列の種類：ペプチド配列の長さ：１１トポロジー：直鎖状配列の型：合成ペプチド配列：

【００４４】配列番号：６配列の種類：ペプチド配列の長さ：１１トポロジー：直鎖状配列の型：合成ペプチド配列：

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、テンジクネズミの回腸の膜への〔　１
２５Ｉ〕−ＥＴ−１（白円）及び〔　１２５Ｉ〕−ＥＴ
−３（黒円）の結合に対する非放射性ＥＰ−１、ＥＰ−
１（１１−２１）　、又はＡｌａ１１，　Ａｌａ１５−
ＥＴ−１（１１−２１）による競争阻害を示すグラフで
ある。

【図２】図２は、ＥＴ−１により誘導される平滑筋の収
縮（テンジクネズミ回腸）のＥＴ−１（１１−２１）　
による阻害を示すグラフである。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　次の式（Ｉ）（配列番号：１）：【化
１】（式中、Ｘａａ１　はＴｙｒ，Ｐｈｅ又はＡｌａを表わ
し、Ｘａａ２　はＡｓｐ又はＧｌｙを表わし、そしてＸ
ａａ３　はＴｒｐ又はＰｈｅを表わす）により表わされ
るペプチド。
【請求項２】　　次の式（ＩＩ）（配列番号：２）：【
化２】により表わされる請求項１に記載のペプチド。
【請求項３】　　次の式（ＩＩＩ　）（配列番号：３）
：【化３】により表わされる請求項１に記載のペプチド。
【請求項４】　　次の式（ＩＶ）（配列番号：４）：【
化４】により表わされる請求項１に記載のペプチド。
【請求項５】　　次の式（Ｖ）（配列番号：５）：【化
５】により表わされる請求項１に記載のペプチド。
【請求項６】　　次の式（ＶＩ）（配列番号：６）：【
化６】により表わされる請求項１に記載のペプチド。
【請求項７】　　請求項１に記載の式（Ｉ）のペプチド
及び医薬として許容されるキャリヤーを含んで成る、エ
ンドセリン受容体により介在される状症又は疾患の予防
又は治療のための医薬。
【請求項８】　　喘息又は腎不全の治療のための請求項
７に記載の医薬。