JPH04287683A - 酵母変異株およびそれを利用するペプチドまたは蛋白質 等の製造方法 - Google Patents
酵母変異株およびそれを利用するペプチドまたは蛋白質 等の製造方法Info
- Publication number
- JPH04287683A JPH04287683A JP3049962A JP4996291A JPH04287683A JP H04287683 A JPH04287683 A JP H04287683A JP 3049962 A JP3049962 A JP 3049962A JP 4996291 A JP4996291 A JP 4996291A JP H04287683 A JPH04287683 A JP H04287683A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- galactose
- yeast
- peptide
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 56
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 33
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 41
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108700023157 Galactokinases Proteins 0.000 claims abstract description 9
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims abstract 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 11
- 102000048120 Galactokinases Human genes 0.000 claims description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 28
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 21
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 abstract description 20
- 108010001498 Galectin 1 Proteins 0.000 abstract description 19
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 abstract description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000002950 deficient Effects 0.000 abstract description 3
- 108010055012 Orotidine-5'-phosphate decarboxylase Proteins 0.000 abstract description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 abstract description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 11
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- CYNAPIVXKRLDER-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-benzamido-3-(4-hydroxy-3-nitrophenyl)propanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C1=CC=C(O)C([N+]([O-])=O)=C1 CYNAPIVXKRLDER-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 7
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 7
- 102100021736 Galectin-1 Human genes 0.000 description 7
- 101150090724 3 gene Proteins 0.000 description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 5
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 5
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 5
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 description 5
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 4
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 4
- 102100039555 Galectin-7 Human genes 0.000 description 3
- 101000887163 Gallus gallus Gallinacin-4 Proteins 0.000 description 3
- 101000887166 Gallus gallus Gallinacin-7 Proteins 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 3
- SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 5-fluoroorotic acid Chemical compound OC(=O)C=1NC(=O)NC(=O)C=1F SEHFUALWMUWDKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100036291 Galactose-1-phosphate uridylyltransferase Human genes 0.000 description 2
- 101710090046 Galactose-1-phosphate uridylyltransferase Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010086950 Phosphoribosylanthranilate isomerase Proteins 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- IVCOLVXXCVGZJW-CCPSMLFMSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-6-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S,3S)-2-[[(2S)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]hexanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]acetyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-4-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[2-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-amino-1-oxo-3-phenylpropan-2-yl]amino]-3-carboxy-1-oxopropan-2-yl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-2-oxoethyl]amino]-4-methylsulfanyl-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxo-3-(4-sulfooxyphenyl)propan-2-yl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(OS(O)(=O)=O)cc1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(N)=O IVCOLVXXCVGZJW-CCPSMLFMSA-N 0.000 description 1
- 108010039636 3-isopropylmalate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- RNQHMTFBUSSBJQ-UHFFFAOYSA-N 3-isopropylmalic acid Chemical compound CC(C)C(C(O)=O)C(O)C(O)=O RNQHMTFBUSSBJQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000776564 Acetobacter cerevisiae Species 0.000 description 1
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- 102400000113 Calcitonin Human genes 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 1
- 101800001099 Cholecystokinin-39 Proteins 0.000 description 1
- 102100021809 Chorionic somatomammotropin hormone 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000746 Chymosin Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 1
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108010049140 Endorphins Proteins 0.000 description 1
- 102000009025 Endorphins Human genes 0.000 description 1
- 108010092674 Enkephalins Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102400000921 Gastrin Human genes 0.000 description 1
- 108010052343 Gastrins Proteins 0.000 description 1
- PABVKUJVLNMOJP-WHFBIAKZSA-N Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O PABVKUJVLNMOJP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 102400000321 Glucagon Human genes 0.000 description 1
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 1
- 108010036164 Glutathione synthase Proteins 0.000 description 1
- 102100034294 Glutathione synthetase Human genes 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108010086677 Gonadotropins Proteins 0.000 description 1
- 102000006771 Gonadotropins Human genes 0.000 description 1
- 102100021628 Histatin-3 Human genes 0.000 description 1
- 108010003774 Histidinol-phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 101000898505 Homo sapiens Histatin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 108090000769 Isomerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004195 Isomerases Human genes 0.000 description 1
- 108010059881 Lactase Proteins 0.000 description 1
- 101710163560 Lamina-associated polypeptide 2, isoform alpha Proteins 0.000 description 1
- 101710189385 Lamina-associated polypeptide 2, isoforms beta/gamma Proteins 0.000 description 1
- URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N Leu-enkephalin Chemical class C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=CC=C1 URLZCHNOLZSCCA-VABKMULXSA-N 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 101100335880 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) gal-7 gene Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010003044 Placental Lactogen Proteins 0.000 description 1
- 239000000381 Placental Lactogen Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100024819 Prolactin Human genes 0.000 description 1
- 108010057464 Prolactin Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108090001066 Racemases and epimerases Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- 241001123227 Saccharomyces pastorianus Species 0.000 description 1
- 108010086019 Secretin Proteins 0.000 description 1
- 102100037505 Secretin Human genes 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101150094640 Siae gene Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 101150006914 TRP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102400000159 Thymopoietin Human genes 0.000 description 1
- 239000000898 Thymopoietin Substances 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100021436 UDP-glucose 4-epimerase Human genes 0.000 description 1
- 108010075202 UDP-glucose 4-epimerase Proteins 0.000 description 1
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N calcitonin Chemical compound N([C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(N)=O)C(C)C)C(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1 BBBFJLBPOGFECG-VJVYQDLKSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 1
- AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N chembl413654 Chemical compound C([C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@H](CCSC)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC=CC=1)C(N)=O)NC(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 AOXOCDRNSPFDPE-UKEONUMOSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 229960005188 collagen Drugs 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J diphosphate(4-) Chemical compound [O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 235000011180 diphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 1
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000002622 gonadotropin Substances 0.000 description 1
- 229940094892 gonadotropins Drugs 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 229940116108 lactase Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 229940040461 lipase Drugs 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- -1 motin Chemical compound 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000012259 partial gene deletion Methods 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 229940097325 prolactin Drugs 0.000 description 1
- KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N propane-1-sulfonic acid Chemical compound CCCS(O)(=O)=O KCXFHTAICRTXLI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229960002101 secretin Drugs 0.000 description 1
- OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N secretin human Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(N)=O)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 OWMZNFCDEHGFEP-NFBCVYDUSA-N 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 description 1
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
- C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
- C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/67—General methods for enhancing the expression
Landscapes
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は特定酵素の遺伝子の一部
もしくは全部が欠失した酵母変異株およびそれを利用す
るペプチドまたは蛋白質の製造方法に関する。本発明に
より酵母の遺伝子の発現を効率化し、産生するペプチド
または蛋白の製造コストを低下せしめることができる。
もしくは全部が欠失した酵母変異株およびそれを利用す
るペプチドまたは蛋白質の製造方法に関する。本発明に
より酵母の遺伝子の発現を効率化し、産生するペプチド
または蛋白の製造コストを低下せしめることができる。
【０００２】
【従来の技術】従来、酵母における誘導物質存在下での
遺伝子発現システムの中では、特にガラクトース代謝系
の酵素遺伝子のものは、 （１）遺伝子発現レベルが高
いこと、 （２）非誘導状態での基礎発現レベルが低い
こと、および （３）操作上の簡便さなどの故に重要視
されている （特公平２−４９７１５、特開昭６３−２
８７４８６および Ａｇｒｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅ
ｍ． ５２， ２０３５ （１９８８））。
遺伝子発現システムの中では、特にガラクトース代謝系
の酵素遺伝子のものは、 （１）遺伝子発現レベルが高
いこと、 （２）非誘導状態での基礎発現レベルが低い
こと、および （３）操作上の簡便さなどの故に重要視
されている （特公平２−４９７１５、特開昭６３−２
８７４８６および Ａｇｒｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅ
ｍ． ５２， ２０３５ （１９８８））。
【０００３】ところでこれらガラクトース代謝系の酵素
遺伝子のプロモーターを利用して、目的の構造遺伝子を
発現させるには、誘導物質としてのガラクトースを培地
に添加する必要がある。しかし、一般に酵母はガラクト
ースの分解酵素系を有しているため、培地に投入したガ
ラクトースは速やかに代謝され、消失してしまう。従っ
て構造遺伝子の発現を継続し、維持するためには、培地
中に常にガラクトースを存在させる目的で高価なガラク
トースを逐次添加する必要があり、構造遺伝子に対応す
る目的生産物の製造コストをおしあげることになる。こ
のことが、酵母においてガラクトース系発現システムを
利用する場合の弱点となっている。
遺伝子のプロモーターを利用して、目的の構造遺伝子を
発現させるには、誘導物質としてのガラクトースを培地
に添加する必要がある。しかし、一般に酵母はガラクト
ースの分解酵素系を有しているため、培地に投入したガ
ラクトースは速やかに代謝され、消失してしまう。従っ
て構造遺伝子の発現を継続し、維持するためには、培地
中に常にガラクトースを存在させる目的で高価なガラク
トースを逐次添加する必要があり、構造遺伝子に対応す
る目的生産物の製造コストをおしあげることになる。こ
のことが、酵母においてガラクトース系発現システムを
利用する場合の弱点となっている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明者らは
酵母のもつガラクトース代謝能を失活せしめ、誘導物質
として与えたガラクトースの有効性を高めるべく鋭意研
究を行った。酵母のガラクトースの分解酵素系の失活の
手段としては、一般的な変異処理も考えられ、事実エチ
ルメタンスルホン酸によってガラクトキナーゼ失活変異
株を採取した例 （Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １０
８，１７９， （１９７１）） などがあるが、これら
は復帰変異により、その失活の不安定さは避けられない
ものである。そこで、本発明者らはより確実な失活、即
ち復帰変異の充分な防止を考慮し、遺伝子破壊の一方法
として遺伝子の部分欠失の方法をとることによりガラク
トース代謝能を確実に失活させ、これを宿主菌として、
ガラクトースによる遺伝子発現系の高率発現が達成でき
ることを見出し、本発明を完成するに至った。
酵母のもつガラクトース代謝能を失活せしめ、誘導物質
として与えたガラクトースの有効性を高めるべく鋭意研
究を行った。酵母のガラクトースの分解酵素系の失活の
手段としては、一般的な変異処理も考えられ、事実エチ
ルメタンスルホン酸によってガラクトキナーゼ失活変異
株を採取した例 （Ｊ． Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ． １０
８，１７９， （１９７１）） などがあるが、これら
は復帰変異により、その失活の不安定さは避けられない
ものである。そこで、本発明者らはより確実な失活、即
ち復帰変異の充分な防止を考慮し、遺伝子破壊の一方法
として遺伝子の部分欠失の方法をとることによりガラク
トース代謝能を確実に失活させ、これを宿主菌として、
ガラクトースによる遺伝子発現系の高率発現が達成でき
ることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、ガラクトース
を変換もしくは分解する酵素の遺伝子の一部もしくは全
部が欠失した酵母変異株である。さらに、本発明はガラ
クトースを変換もしくは分解する酵素の遺伝子の一部も
しくは全部が欠失した酵母変異株を、所望の自己または
外来遺伝子由来のペプチドまたは蛋白質の遺伝子で形質
転換して得られる形質転換体そのものである。
を変換もしくは分解する酵素の遺伝子の一部もしくは全
部が欠失した酵母変異株である。さらに、本発明はガラ
クトースを変換もしくは分解する酵素の遺伝子の一部も
しくは全部が欠失した酵母変異株を、所望の自己または
外来遺伝子由来のペプチドまたは蛋白質の遺伝子で形質
転換して得られる形質転換体そのものである。
【０００６】さらに、本発明は、上記形質転換体を、誘
導物質としてのガラクトースを含む培地中で培養し、培
養物に上記ペプチドまたは蛋白質を含んだ菌体を得るこ
と、およびそのような菌体からペプチドまたは蛋白質を
採取することを特徴とするペプチドまたは蛋白質の製造
方法である。さらに、本発明は、上記形質転換体を、誘
導物質としてのガラクトースを含む培地中で培養し
該形質転換体の酵素遺伝子を発現させ、その作用により
物質を製造する方法である。
導物質としてのガラクトースを含む培地中で培養し、培
養物に上記ペプチドまたは蛋白質を含んだ菌体を得るこ
と、およびそのような菌体からペプチドまたは蛋白質を
採取することを特徴とするペプチドまたは蛋白質の製造
方法である。さらに、本発明は、上記形質転換体を、誘
導物質としてのガラクトースを含む培地中で培養し
該形質転換体の酵素遺伝子を発現させ、その作用により
物質を製造する方法である。
【０００７】上記のガラクトースを変換もしくは分解す
る酵素の遺伝子の一部の欠失とは、前記酵素の活性が失
活するものであればいずれの範囲でもよく、その欠失部
位の大きさは特に限定されない。上記のガラクトースを
変換もしくは分解する酵素としてはガラクトキナーゼ、
ガラクトース−１− フォスフェート・ウリジリル
トランスフェラーゼおよびＵＤＰ−ガラクトース−４−
エピメラーゼのいずれでもよいが、特にガラクトキナ
ーゼが好ましい。
る酵素の遺伝子の一部の欠失とは、前記酵素の活性が失
活するものであればいずれの範囲でもよく、その欠失部
位の大きさは特に限定されない。上記のガラクトースを
変換もしくは分解する酵素としてはガラクトキナーゼ、
ガラクトース−１− フォスフェート・ウリジリル
トランスフェラーゼおよびＵＤＰ−ガラクトース−４−
エピメラーゼのいずれでもよいが、特にガラクトキナ
ーゼが好ましい。
【０００８】上記自己または外来遺伝子由来のポリペプ
チドまたは蛋白質の遺伝子としては、後述の実施例では
エシェリヒア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ） のβ− ガラク
トシダーゼの遺伝子を用いているが、例えば、インシュ
リン、血小板由来の成長因子（ＰＤＧＦ）、インターフ
ェロン（α、β、γ）、性腺刺激ホルモン、成長ホルモ
ン、エンケファリン類、エンドルフィン類、副腎皮質刺
激ホルモン、副甲状腺ホルモン、神経成長因子（ＮＧＦ
）、エリスロポエチン、血液凝固因子、ウロキナーゼ、
血清アルブミン、サイトカイン、上皮成長因子（ＥＧＦ
）、プロラクチン、レンニン、胎盤ラクトゲン、チモポ
イエチン、血液分泌抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）、コレ
チストキニン（ＣＣＫ−３９）、ガストリン（ＢＧ）、
カルシトニン、グルカゴン、セクレチン、モチン、ソマ
トスタチン、コラーゲン、リパーゼ、ラクターゼ、イン
べルターゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、
α−グルタミルシステインシンテターゼ、グルタチオン
シンテターゼ、アルコールデドロゲナーゼなどのポリペ
プチドまたは蛋白質の遺伝子が挙げられる。
チドまたは蛋白質の遺伝子としては、後述の実施例では
エシェリヒア・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ） のβ− ガラク
トシダーゼの遺伝子を用いているが、例えば、インシュ
リン、血小板由来の成長因子（ＰＤＧＦ）、インターフ
ェロン（α、β、γ）、性腺刺激ホルモン、成長ホルモ
ン、エンケファリン類、エンドルフィン類、副腎皮質刺
激ホルモン、副甲状腺ホルモン、神経成長因子（ＮＧＦ
）、エリスロポエチン、血液凝固因子、ウロキナーゼ、
血清アルブミン、サイトカイン、上皮成長因子（ＥＧＦ
）、プロラクチン、レンニン、胎盤ラクトゲン、チモポ
イエチン、血液分泌抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）、コレ
チストキニン（ＣＣＫ−３９）、ガストリン（ＢＧ）、
カルシトニン、グルカゴン、セクレチン、モチン、ソマ
トスタチン、コラーゲン、リパーゼ、ラクターゼ、イン
べルターゼ、セルラーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、
α−グルタミルシステインシンテターゼ、グルタチオン
シンテターゼ、アルコールデドロゲナーゼなどのポリペ
プチドまたは蛋白質の遺伝子が挙げられる。
【０００９】上記酵母としては、サッカロミセス・セル
ビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ） が好ましいがサッカロマイセス・カールスベ
ルゲンシス（Ｓ．ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）など
も用いることができる。上記培地の栄養源は、誘導物質
のガラクトースを添加すること以外は、特に限定される
ことはなく、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒
素源その他無機塩類が用いられる。炭素源としては、デ
キストリン、グリセリン、グルコース、シュークロース
、ガラクトース、マンニトール、乳酸、澱粉等が、また
、窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、米ぬ
か、ふすま、尿素、コーンスティープリカー、アンモニ
ウム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の窒素化合物
が用いられる。無機塩類としては、例えば、食塩、燐酸
塩類のほか、マグネシウム、カリウム、カルシウム、亜
鉛、マンガン、鉄等のイオンが必要により用いられる。 培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の生育に適し
、ペプチドまたは蛋白質の生産が最高となるような条件
が選ばれる。例えば、培地のｐＨは４〜８、温度は２０
〜３０℃程度がよい。以下に本発明を具体的に説明する
。
ビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ） が好ましいがサッカロマイセス・カールスベ
ルゲンシス（Ｓ．ｃａｒｌｓｂｅｒｇｅｎｓｉｓ）など
も用いることができる。上記培地の栄養源は、誘導物質
のガラクトースを添加すること以外は、特に限定される
ことはなく、微生物の培養に通常用いられる炭素源、窒
素源その他無機塩類が用いられる。炭素源としては、デ
キストリン、グリセリン、グルコース、シュークロース
、ガラクトース、マンニトール、乳酸、澱粉等が、また
、窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、米ぬ
か、ふすま、尿素、コーンスティープリカー、アンモニ
ウム塩、硝酸塩、その他の有機または無機の窒素化合物
が用いられる。無機塩類としては、例えば、食塩、燐酸
塩類のほか、マグネシウム、カリウム、カルシウム、亜
鉛、マンガン、鉄等のイオンが必要により用いられる。 培養温度、培養時間等の培養条件は使用菌の生育に適し
、ペプチドまたは蛋白質の生産が最高となるような条件
が選ばれる。例えば、培地のｐＨは４〜８、温度は２０
〜３０℃程度がよい。以下に本発明を具体的に説明する
。
【００１０】酵母によるガラクトースの代謝系は、以下
の化学式で示されるが、この代謝系の諸物質の中で、誘
導物質として働いているのはガラクトースと考えられる
。即ち、ガラクトキナーゼがガラクトースによって誘導
されることがわかっている。
の化学式で示されるが、この代謝系の諸物質の中で、誘
導物質として働いているのはガラクトースと考えられる
。即ち、ガラクトキナーゼがガラクトースによって誘導
されることがわかっている。
【００１１】
【化１】
【００１２】そこでガラクトースの有効性を高めるため
には上記式におけるガラクトキナーゼ（ＧＡＬ １遺伝
子） 、ガラクトース−１− フォスフェート・ウリジ
リル・トランスフェラーゼ（ＧＡＬ ７ 遺伝子） お
よびＵＤＰ−ガラクトース−４− エピメラーゼ（ＧＡ
Ｌ１０ 遺伝子） のいずれかを失活せしめれば良いが
、特にガラクトキナーゼ（ＧＡＬ １遺伝子） を失活
せしめるのが効果的と考えられる。
には上記式におけるガラクトキナーゼ（ＧＡＬ １遺伝
子） 、ガラクトース−１− フォスフェート・ウリジ
リル・トランスフェラーゼ（ＧＡＬ ７ 遺伝子） お
よびＵＤＰ−ガラクトース−４− エピメラーゼ（ＧＡ
Ｌ１０ 遺伝子） のいずれかを失活せしめれば良いが
、特にガラクトキナーゼ（ＧＡＬ １遺伝子） を失活
せしめるのが効果的と考えられる。
【００１３】次にその方法を説明すると、まず、すでに
ＧＡＬ １遺伝子がクローニングされている複合プラ
スミドから ＧＡＬ １遺伝子を取り出す。その遺伝子
の中央部を適当な制限酵素により切断し任意の大きさの
ＤＮＡ断片を切り出し、そのあとオロチジン−５’−ホ
スフェイトデカルボキシラーゼ遺伝子（ＵＲＡ ３）
断片を組み込んで置換したのち、この組み換えＤＮＡ
断片を目的の酵母細胞 （あらかじめ ｕｒａ ３、す
なわちウラシル要求性にしてある） に導入し、ＧＡＬ
１ が失活した形質転換株を得た。この酵母形質転換
株に含まれる ＧＡＬ １遺伝子はＵＲＡ ３ 遺伝子
で分断され、かつ一部欠失せしめられている。すなわち
、元の正常な ＧＡＬ １遺伝子はｔｗｏ ｐｏｉｎｔ
ｓ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏ
ｎ によってＵＲＡ ３ 遺伝子断片をもつ組み換えら
れたＧＡＬ １ 変異遺伝子によって置き換えられてい
る。従ってこの酵母形質転換株のガラクトキナーゼ活性
は失活せしめられている。なお、この酵母形質転換株は
、ウラシル非要求性復帰変異株として選抜できる。
ＧＡＬ １遺伝子がクローニングされている複合プラ
スミドから ＧＡＬ １遺伝子を取り出す。その遺伝子
の中央部を適当な制限酵素により切断し任意の大きさの
ＤＮＡ断片を切り出し、そのあとオロチジン−５’−ホ
スフェイトデカルボキシラーゼ遺伝子（ＵＲＡ ３）
断片を組み込んで置換したのち、この組み換えＤＮＡ
断片を目的の酵母細胞 （あらかじめ ｕｒａ ３、す
なわちウラシル要求性にしてある） に導入し、ＧＡＬ
１ が失活した形質転換株を得た。この酵母形質転換
株に含まれる ＧＡＬ １遺伝子はＵＲＡ ３ 遺伝子
で分断され、かつ一部欠失せしめられている。すなわち
、元の正常な ＧＡＬ １遺伝子はｔｗｏ ｐｏｉｎｔ
ｓ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏ
ｎ によってＵＲＡ ３ 遺伝子断片をもつ組み換えら
れたＧＡＬ １ 変異遺伝子によって置き換えられてい
る。従ってこの酵母形質転換株のガラクトキナーゼ活性
は失活せしめられている。なお、この酵母形質転換株は
、ウラシル非要求性復帰変異株として選抜できる。
【００１４】この酵母形質転換株すなわち酵母変異株は
、 ＧＡＬ ７プロモーターをもつベクター （特公平
２−４９７１５ および特開昭６３−２８７４８６ に
示されるごとく、 ＵＲＡ ３を選択マーカーとしても
つものが多い） などと共に用いる場合が予想されるの
で、上記のいったん挿入した ＵＲＡ ３遺伝子断片を
切除し、 ＧＡＬ １を失活させたまま、ウラシル要求
性に復帰させることとした。
、 ＧＡＬ ７プロモーターをもつベクター （特公平
２−４９７１５ および特開昭６３−２８７４８６ に
示されるごとく、 ＵＲＡ ３を選択マーカーとしても
つものが多い） などと共に用いる場合が予想されるの
で、上記のいったん挿入した ＵＲＡ ３遺伝子断片を
切除し、 ＧＡＬ １を失活させたまま、ウラシル要求
性に復帰させることとした。
【００１５】なお、上記の方法は ＧＡＬ １を失活せ
しめるひとつのやりかたを示したものであて、上記 Ｕ
ＲＡ ３に代えてＬＥＵ ２（β−ＩＰＭ デヒドロ
ゲナーゼ （２−ヒドロキシ−４− メチル−３− カ
ルボキシバレレイト ＮＡＤ オキシドレダクターゼ
） 、ＡＤＥ １ （フォスフォリボシルアミノイミダ
ール スクシノカルボキシアミド シンテターゼ）
、ＴＲＰ １ （フォスフォリボシル アンスラニ
レート イソメラーゼ（Ｎ− ５’− フォスフォリ
ボシル −アンスラニレート ケトールイソメラーゼ
） ） 、ＨＩＳ １（ＡＴＰ フォスフォリボシル−
トランスフェラーゼ（１−５’− フォスフォリボシル
−ＡＴＰ：ピロリン酸 フォスフォリボシルトラン
スフェラーゼ） ） 、ＨＩＳ ２ （ ヒスチジノー
ルフォスフェートフォスファターゼ（Ｌ− ヒスチジノ
ールフォスフェートフォスフェートヒドロラーゼ） ）
などを用いることができる。
しめるひとつのやりかたを示したものであて、上記 Ｕ
ＲＡ ３に代えてＬＥＵ ２（β−ＩＰＭ デヒドロ
ゲナーゼ （２−ヒドロキシ−４− メチル−３− カ
ルボキシバレレイト ＮＡＤ オキシドレダクターゼ
） 、ＡＤＥ １ （フォスフォリボシルアミノイミダ
ール スクシノカルボキシアミド シンテターゼ）
、ＴＲＰ １ （フォスフォリボシル アンスラニ
レート イソメラーゼ（Ｎ− ５’− フォスフォリ
ボシル −アンスラニレート ケトールイソメラーゼ
） ） 、ＨＩＳ １（ＡＴＰ フォスフォリボシル−
トランスフェラーゼ（１−５’− フォスフォリボシル
−ＡＴＰ：ピロリン酸 フォスフォリボシルトラン
スフェラーゼ） ） 、ＨＩＳ ２ （ ヒスチジノー
ルフォスフェートフォスファターゼ（Ｌ− ヒスチジノ
ールフォスフェートフォスフェートヒドロラーゼ） ）
などを用いることができる。
【００１６】次に、このようにして育種した ＧＡＬ
１遺伝子を失活させた酵母変異株を自己または外来のペ
プチドまたは蛋白質の遺伝子で形質転換し、この形質転
換体をガラクトースを添加した培地で培養し所望のペプ
チドまたは蛋白質を製造する。即ち、所望の蛋白質のモ
デル遺伝子として、 Ｅ． ｃｏｌｉのβーガラクトシ
ダーゼ遺伝子を選びそれを ＧＡＬ ７プロモーターと
ＧＡＬ ７ターミネーターの間に挿入してプラスミド
を構築する。このプラスミドで、上記酵母変異株を形質
転換し、形質転換株を得る。 この形質転換株を、誘導物質としてガラクトースを添加
した培地で培養し、得られたβ−ガラクトシダーゼの活
性を、対照の ＧＡＬ １非失活株の同一プラスミド形
質転換株と比較した。その結果、図５及び図６に示すよ
うに、βーガラクトシダーゼの活性には有意に差がでて
、 ＧＡＬ １遺伝子を失活させた酵母変異株が、ガラ
クトースの有効利用に供せられうることを示している。
１遺伝子を失活させた酵母変異株を自己または外来のペ
プチドまたは蛋白質の遺伝子で形質転換し、この形質転
換体をガラクトースを添加した培地で培養し所望のペプ
チドまたは蛋白質を製造する。即ち、所望の蛋白質のモ
デル遺伝子として、 Ｅ． ｃｏｌｉのβーガラクトシ
ダーゼ遺伝子を選びそれを ＧＡＬ ７プロモーターと
ＧＡＬ ７ターミネーターの間に挿入してプラスミド
を構築する。このプラスミドで、上記酵母変異株を形質
転換し、形質転換株を得る。 この形質転換株を、誘導物質としてガラクトースを添加
した培地で培養し、得られたβ−ガラクトシダーゼの活
性を、対照の ＧＡＬ １非失活株の同一プラスミド形
質転換株と比較した。その結果、図５及び図６に示すよ
うに、βーガラクトシダーゼの活性には有意に差がでて
、 ＧＡＬ １遺伝子を失活させた酵母変異株が、ガラ
クトースの有効利用に供せられうることを示している。
【００１７】さらに 上記形質転換体をガラクトース
を添加した培地で培養し該形質転換体を含む培養物また
はその処理物の酵素作用を利用して物質を製造する。こ
の物質としては、グタチオン、アルコール等が挙げられ
る。
を添加した培地で培養し該形質転換体を含む培養物また
はその処理物の酵素作用を利用して物質を製造する。こ
の物質としては、グタチオン、アルコール等が挙げられ
る。
【００１８】
【発明の効果】この発明によりガラクトースを変換もし
くは分解する酵素の遺伝子の一部もしくは全部が欠失し
た酵母変異株が提供され、この酵母変異株を宿主として
利用して遺伝子工学的手法によりペプチドまたは蛋白質
を製造するにあたって、ペプチドまたは蛋白質を効率よ
く発現し製造することができる。
くは分解する酵素の遺伝子の一部もしくは全部が欠失し
た酵母変異株が提供され、この酵母変異株を宿主として
利用して遺伝子工学的手法によりペプチドまたは蛋白質
を製造するにあたって、ペプチドまたは蛋白質を効率よ
く発現し製造することができる。
【００１９】
【実施例】以下、本発明を実施例により詳細に説明する
。但し、本発明はこれら実施例によりその技術的範囲が
限定されるものではない。 実施例１ ＧＡＬ １遺伝子失活Ｓ．ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ変異株の育種（１） プラスミドｐＫＯ １
の作成プラスミドｐＫＯ １ の作成方法を図１に従っ
て説明する。
。但し、本発明はこれら実施例によりその技術的範囲が
限定されるものではない。 実施例１ ＧＡＬ １遺伝子失活Ｓ．ｃｅｒｅｖｉ
ｓｉａｅ変異株の育種（１） プラスミドｐＫＯ １
の作成プラスミドｐＫＯ １ の作成方法を図１に従っ
て説明する。
【００２０】Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ の ＧＡＬ
１遺伝子がクローニングされている、Ｓ． ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ とＥ． ｃｏｌｉ のシャトルベクター
ｐＹＫ２００３ をもつ Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１／
ｐＹＫ２００３ を表１の培地組成を有するＬ培地にア
ンピシリンを２５μｇ／ｍｌ添加したもの １５０ｍｌ
で培養してｐＹＫ２００３ プラスミドＤＮＡ 約２０
０μｇ を調製した。。
１遺伝子がクローニングされている、Ｓ． ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅ とＥ． ｃｏｌｉ のシャトルベクター
ｐＹＫ２００３ をもつ Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１／
ｐＹＫ２００３ を表１の培地組成を有するＬ培地にア
ンピシリンを２５μｇ／ｍｌ添加したもの １５０ｍｌ
で培養してｐＹＫ２００３ プラスミドＤＮＡ 約２０
０μｇ を調製した。。
【００２１】
【表１】
【００２２】ここでｐＹＫ２００３ は、Ｓ．ｃｅｒｅ
ｖｉｓｉａｅのＧＡＬ １ 遺伝子をクローニングして
いるファージλｇｔ３０Ｓｃ４９１（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．，１５２ ，２８５−３１５（１９８１）） の
ＤＮＡ から約８Ｋｂ のＳａｌ Ｉ／ＢａｍＨ Ｉ断
片を取り出し、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ／Ｅ． ｃｏ
ｌｉのシャトルベクターＹＲｐ７（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７６，１０３５−１０３９（１
９７９） のＳａｌ Ｉ／ＢａｍＨ Ｉ領域を置換した
ものである。ＰＹＫ２００３ ＤＮＡ 約５０μｇ か
らＧＡＬ １ 遺伝子 ＤＮＡ断片 （１９１１ｂｐ）
を制限酵素Ｅｃｏ ＲＩ（ＴＡＫＡＲＡ製） で処理
して切り出し、アガロースゲル電気泳動で他の断片と分
離した。得られた１９１１ｂｐのＤＮＡ 断片に制限酵
素 Ｄｒａ Ｉ（ＴＡＫＡＲＡ製）を作用させて切断す
ると、このＤＮＡ 断片は１１７９ｂｐ， ３４５ｂｐ
， ３８７ｂｐの３部分に分かれた。
ｖｉｓｉａｅのＧＡＬ １ 遺伝子をクローニングして
いるファージλｇｔ３０Ｓｃ４９１（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉ
ｏｌ．，１５２ ，２８５−３１５（１９８１）） の
ＤＮＡ から約８Ｋｂ のＳａｌ Ｉ／ＢａｍＨ Ｉ断
片を取り出し、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ／Ｅ． ｃｏ
ｌｉのシャトルベクターＹＲｐ７（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７６，１０３５−１０３９（１
９７９） のＳａｌ Ｉ／ＢａｍＨ Ｉ領域を置換した
ものである。ＰＹＫ２００３ ＤＮＡ 約５０μｇ か
らＧＡＬ １ 遺伝子 ＤＮＡ断片 （１９１１ｂｐ）
を制限酵素Ｅｃｏ ＲＩ（ＴＡＫＡＲＡ製） で処理
して切り出し、アガロースゲル電気泳動で他の断片と分
離した。得られた１９１１ｂｐのＤＮＡ 断片に制限酵
素 Ｄｒａ Ｉ（ＴＡＫＡＲＡ製）を作用させて切断す
ると、このＤＮＡ 断片は１１７９ｂｐ， ３４５ｂｐ
， ３８７ｂｐの３部分に分かれた。
【００２３】これら３種のＤＮＡ 断片に、ｐｈｏｓｐ
ｈｏｒｙｌａｔｅｄ Ｂｇｌ ＩＩ リンカー （ｄ
ｐＣ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ ）（ＴＡＫＡＲＡ
製） 約０．２ μｇ をリガーゼ（ＴＡＫＡＲＡ製
）で結合させ、ついで制限酵素Ｂｇｌ ＩＩ（ＴＡＫＡ
ＲＡ 製） および ＥｃｏＲＩを作用させてＢｇｌ
ＩＩサイトおよび Ｅｃｏ ＲＩサイトを露出させた。 得られた ＤＮＡ断片をアガロースゲル電気泳動にかけ
てそれらを分子量順に分け、３つの ＤＮＡ断片のうち
遺伝子中央部に相当する３４５＋４ｂｐ のＤＮＡ 断
片を除き、両端に相当する１１７９＋４ｂｐ及び ３８
７＋４ｂｐＤＮＡ断片を抽出して、両断片をリガーゼに
て結合させ Ｅｃｏ ＲＩ で処理して１５７０ｂｐの
ＤＮＡ 断片を調製した。
ｈｏｒｙｌａｔｅｄ Ｂｇｌ ＩＩ リンカー （ｄ
ｐＣ−Ａ−Ｇ−Ａ−Ｔ−Ｃ−Ｔ−Ｇ ）（ＴＡＫＡＲＡ
製） 約０．２ μｇ をリガーゼ（ＴＡＫＡＲＡ製
）で結合させ、ついで制限酵素Ｂｇｌ ＩＩ（ＴＡＫＡ
ＲＡ 製） および ＥｃｏＲＩを作用させてＢｇｌ
ＩＩサイトおよび Ｅｃｏ ＲＩサイトを露出させた。 得られた ＤＮＡ断片をアガロースゲル電気泳動にかけ
てそれらを分子量順に分け、３つの ＤＮＡ断片のうち
遺伝子中央部に相当する３４５＋４ｂｐ のＤＮＡ 断
片を除き、両端に相当する１１７９＋４ｂｐ及び ３８
７＋４ｂｐＤＮＡ断片を抽出して、両断片をリガーゼに
て結合させ Ｅｃｏ ＲＩ で処理して１５７０ｂｐの
ＤＮＡ 断片を調製した。
【００２４】この ＤＮＡ断片をＥ． ｃｏｌｉ の多
コピーベクターｐＵＣ１１９（３１６２ｂｐ）（ＴＡＫ
ＡＲＡ 製） のＥｃｏ ＲＩサイトへリガーゼで結合
挿入し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１（ＴＡＫＡＲＡ 製
） に導入して形質転換体とし、プラスミドｐＫＯＩ（
４７３２ｂｐ）を得た。 （２） プラスミドｐＫＯ ２ の作成プラスミドｐＫ
Ｏ ２ の作成方法を図２に従って説明する。
コピーベクターｐＵＣ１１９（３１６２ｂｐ）（ＴＡＫ
ＡＲＡ 製） のＥｃｏ ＲＩサイトへリガーゼで結合
挿入し、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１（ＴＡＫＡＲＡ 製
） に導入して形質転換体とし、プラスミドｐＫＯＩ（
４７３２ｂｐ）を得た。 （２） プラスミドｐＫＯ ２ の作成プラスミドｐＫ
Ｏ ２ の作成方法を図２に従って説明する。
【００２５】Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ の ＵＲＡ
３遺伝子をもつ遺伝子破壊用プラスミドｐＮＫＹ５１
（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １１６， ５４１ （１９８７
）） 約１０μｇ を制限酵素Ｂｇｌ ＩＩ（ＴＡＫＡ
ＲＡ 製） １０ユニットとＢａｍＨＩ（ ＴＡＫＡＲ
Ａ製） １０ユニットで処理し、該プラスミドｐＮＫＹ
５１より３８４３ｂｐの ＵＲＡ ３ ＤＮＡ断片約
３μｇ を切り出した。 一方、プラスミドｐＫＯ
１ 約５０μｇ に制限酵素Ｂｇｌ ＩＩ ５０ ユニ
ットを作用させて、該プラスミドを制限酵素Ｂｇｌ Ｉ
Ｉの切断部位で切り開き、その切断部位に上記ＵＲＡ
３ ＤＮＡ 断片をリガーゼで接合挿入しＥ．ｃｏｌｉ
ＨＢ１０１を形質転換して８５７５ｂｐのプラスミド
を得た。このプラスミドを ｐＫＯ ２と命名した。
３遺伝子をもつ遺伝子破壊用プラスミドｐＮＫＹ５１
（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １１６， ５４１ （１９８７
）） 約１０μｇ を制限酵素Ｂｇｌ ＩＩ（ＴＡＫＡ
ＲＡ 製） １０ユニットとＢａｍＨＩ（ ＴＡＫＡＲ
Ａ製） １０ユニットで処理し、該プラスミドｐＮＫＹ
５１より３８４３ｂｐの ＵＲＡ ３ ＤＮＡ断片約
３μｇ を切り出した。 一方、プラスミドｐＫＯ
１ 約５０μｇ に制限酵素Ｂｇｌ ＩＩ ５０ ユニ
ットを作用させて、該プラスミドを制限酵素Ｂｇｌ Ｉ
Ｉの切断部位で切り開き、その切断部位に上記ＵＲＡ
３ ＤＮＡ 断片をリガーゼで接合挿入しＥ．ｃｏｌｉ
ＨＢ１０１を形質転換して８５７５ｂｐのプラスミド
を得た。このプラスミドを ｐＫＯ ２と命名した。
【００２６】（３） Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ
−２株の作成次にプラスミドｐＫＯ ２ 約 １００μ
ｇ に制限酵素Ｅｃｏ ＲＩを作用させて、５４１３ｂ
ｐのＵＲＡ ３ および ＧＡＬ １遺伝子の両端 Ｄ
ＮＡを含む ＤＮＡ断片約３０μｇ を取り出した。こ
の ＤＮＡ断片約１５μｇ で、表２の培地組成を有す
るＹＰＤ 培地で培養して得た、ウラシル要求性の Ｓ
． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ変異株 ＹＳ５０−１ （ガ
ラクトース分解系遺伝子群は野生型） を形質転換し表
３の培地組成を有するＳＤ−ｕｒａｃｉｌ 欠培地上で
培養し、形質転換株を得た。この形質転換株のうちウラ
シル非要求性となったことが確実な形質転換株のひとつ
を Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ− ２株と命名し
た（図３参照）。
−２株の作成次にプラスミドｐＫＯ ２ 約 １００μ
ｇ に制限酵素Ｅｃｏ ＲＩを作用させて、５４１３ｂ
ｐのＵＲＡ ３ および ＧＡＬ １遺伝子の両端 Ｄ
ＮＡを含む ＤＮＡ断片約３０μｇ を取り出した。こ
の ＤＮＡ断片約１５μｇ で、表２の培地組成を有す
るＹＰＤ 培地で培養して得た、ウラシル要求性の Ｓ
． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ変異株 ＹＳ５０−１ （ガ
ラクトース分解系遺伝子群は野生型） を形質転換し表
３の培地組成を有するＳＤ−ｕｒａｃｉｌ 欠培地上で
培養し、形質転換株を得た。この形質転換株のうちウラ
シル非要求性となったことが確実な形質転換株のひとつ
を Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ− ２株と命名し
た（図３参照）。
【００２７】
【表２】
【００２８】
【表３】
【００２９】このＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２
株を、表４の組成を有するＳＤ培地のグルコースの代わ
にガラクトースを２％入れた寒天培地で、２５℃、４８
時間生育させたところ、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳ
Ｋ−２株の生育はＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ５０−
１株の生育よりもはるかに劣ることが判った。一方、
ガラクトースではなくグルコースを等量含む表４の培地
組成を有するＳＤ培地では両者は同等に生育した。これ
らのことから、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２株
はガラクトース醗酵能に傷害をもつことが明らかである
。
株を、表４の組成を有するＳＤ培地のグルコースの代わ
にガラクトースを２％入れた寒天培地で、２５℃、４８
時間生育させたところ、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳ
Ｋ−２株の生育はＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ５０−
１株の生育よりもはるかに劣ることが判った。一方、
ガラクトースではなくグルコースを等量含む表４の培地
組成を有するＳＤ培地では両者は同等に生育した。これ
らのことから、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２株
はガラクトース醗酵能に傷害をもつことが明らかである
。
【００３０】
【表４】
【００３１】次いで、 ＳＫ−２株より ＤＮＡを抽出
し、 ＵＲＡ３ ＤＮＡ断片 （３８４３ｂｐ） およ
び ＧＡＬ １の１１７９ｂｐ断片をプローブとして、
サザンハイブリダイゼイション法で染色体上のＧＡＬ
１遺伝子への ＵＲＡ ３断片の挿入を確認した。 （４） Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１株の作
成次に、ＵＲＡ ３ 遺伝子を選択マーカーとして用い
る必要のある場合を想定して、一度挿入した ＵＲＡ
３遺伝子が相同組替えで失われた変異株をＳ． ｃｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２株から選びだした。その選択
は、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ− ２株を５−
フルオロオロチン酸の存在下に培養し、自然変異により
５−フルオロオロチン酸に耐性となった変異株として選
択した （ Ｍｏｌ． Ｇｅｎ． Ｇｅｎｅｔ． １９
７， ３４５ （１９８４））。再びウラシル要求株と
なった ＧＡＬ １失活株を Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅＳＫ−２１ と命名した（図４参照）。
し、 ＵＲＡ３ ＤＮＡ断片 （３８４３ｂｐ） およ
び ＧＡＬ １の１１７９ｂｐ断片をプローブとして、
サザンハイブリダイゼイション法で染色体上のＧＡＬ
１遺伝子への ＵＲＡ ３断片の挿入を確認した。 （４） Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１株の作
成次に、ＵＲＡ ３ 遺伝子を選択マーカーとして用い
る必要のある場合を想定して、一度挿入した ＵＲＡ
３遺伝子が相同組替えで失われた変異株をＳ． ｃｅｒ
ｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２株から選びだした。その選択
は、Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ− ２株を５−
フルオロオロチン酸の存在下に培養し、自然変異により
５−フルオロオロチン酸に耐性となった変異株として選
択した （ Ｍｏｌ． Ｇｅｎ． Ｇｅｎｅｔ． １９
７， ３４５ （１９８４））。再びウラシル要求株と
なった ＧＡＬ １失活株を Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅＳＫ−２１ と命名した（図４参照）。
【００３２】実施例２ Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅＳＫ−２１を宿主として用いる遺伝子発現 Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１株を用い、所望
の蛋白質のモデル遺伝子としてＥ． ｃｏｌｉ のβー
ガラクトシダーゼ遺伝子 （ｌａｃ Ｚ）を用いた。ま
ず ｌａｃ Ｚを持つ、Ｅ． ｃｏｌｉ と Ｓ． ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅのシャトルベクター ｐＭＴ２４−
２７１（Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６， ２
４６ （１９８６）） の ＤＮＡをＥ． ｃｏｌｉ
ＨＢ１０１／ｐＭＴ２４−２７１ より採取し、それを
用いて Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１ 株を
形質転換した。選択マーカーは ＵＲＡ ３であった。 宿主の対照区として、 Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＹ
Ｓ５０− １株を用いた。
ａｅＳＫ−２１を宿主として用いる遺伝子発現 Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１株を用い、所望
の蛋白質のモデル遺伝子としてＥ． ｃｏｌｉ のβー
ガラクトシダーゼ遺伝子 （ｌａｃ Ｚ）を用いた。ま
ず ｌａｃ Ｚを持つ、Ｅ． ｃｏｌｉ と Ｓ． ｃ
ｅｒｅｖｉｓｉａｅのシャトルベクター ｐＭＴ２４−
２７１（Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ６， ２
４６ （１９８６）） の ＤＮＡをＥ． ｃｏｌｉ
ＨＢ１０１／ｐＭＴ２４−２７１ より採取し、それを
用いて Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１ 株を
形質転換した。選択マーカーは ＵＲＡ ３であった。 宿主の対照区として、 Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＹ
Ｓ５０− １株を用いた。
【００３３】得られた形質転換株を、それぞれ Ｓ．
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１／ｐＭＴ２４−２７１
（ＡＪ １４６５９），およびＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ ＹＳ５０− １／ｐＭＴ２４− ２７１（ＡＪ
１４６５８） と命名した。それぞれ工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第１１９８２号および１１
９８１号として寄託している。上記の２菌株それぞれを
、表５の培地組成を有するＳＧｌｙＬａｃ−Ｕｒａｃｉ
ｌ欠培地にガラクトースを０．２５−２％添加した培地
３０ｍｌに植菌し、２５℃で１〜１９時間培養し、βー
ガラクトシダーゼ生産性を調べた。
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＳＫ−２１／ｐＭＴ２４−２７１
（ＡＪ １４６５９），およびＳ． ｃｅｒｅｖｉｓｉ
ａｅ ＹＳ５０− １／ｐＭＴ２４− ２７１（ＡＪ
１４６５８） と命名した。それぞれ工業技術院微生物
工業技術研究所に微工研菌寄第１１９８２号および１１
９８１号として寄託している。上記の２菌株それぞれを
、表５の培地組成を有するＳＧｌｙＬａｃ−Ｕｒａｃｉ
ｌ欠培地にガラクトースを０．２５−２％添加した培地
３０ｍｌに植菌し、２５℃で１〜１９時間培養し、βー
ガラクトシダーゼ生産性を調べた。
【００３４】
【表５】
【００３５】その結果、図５及び図６に示すようにβー
ガラクトシダーゼ活性が Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
ＳＫ−２１／ｐＭＴ２４−２７１株の場合は Ｓ．
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＹＳ５０−１／ｐＭＴ２４−２７
１株に比較して約２．５ 倍であった。このことは、Ｓ
． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２１ 株がガラクト
ースを誘導物質とする遺伝子発現系において極めて有用
であることを示している。
ガラクトシダーゼ活性が Ｓ． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ
ＳＫ−２１／ｐＭＴ２４−２７１株の場合は Ｓ．
ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅＹＳ５０−１／ｐＭＴ２４−２７
１株に比較して約２．５ 倍であった。このことは、Ｓ
． ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２１ 株がガラクト
ースを誘導物質とする遺伝子発現系において極めて有用
であることを示している。
【図１】プラスミドｐＫＯ １の構築図。
【図２】プラスミドｐＫＯ ２の構築図。
【図３】Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２ の作成
図。
図。
【図４】Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２１の作成
図。
図。
【図５】Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＫ−２１／ｐＭ
Ｔ２４−２７１株のβーガラクトシダーゼ活性発現を示
す図。
Ｔ２４−２７１株のβーガラクトシダーゼ活性発現を示
す図。
【図６】Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ＳＹ５０−１／ｐ
ＭＴ２４−２７１ 株のβーガラクトシダーゼ活性発現
を示す図。
ＭＴ２４−２７１ 株のβーガラクトシダーゼ活性発現
を示す図。
Claims (7)
- 【請求項１】 ガラクトースを変換もしくは分解する
酵素の遺伝子の一部もしくは全部が欠失した酵母変異株
。 - 【請求項２】 酵素がガラクトキナーゼである請求項
１記載の酵母変異株。 - 【請求項３】 酵母がサッカロミセス・セルビシエで
ある請求項１記載の酵母変異株。 - 【請求項４】 請求項１の酵母変異株をガラクトース
によって発現誘導されるプロモーターの支配下にある所
望の自己または外来のペプチドまたは蛋白質の遺伝子で
形質転換して得られる形質転換体。 - 【請求項５】 蛋白質が酵素である請求項４記載の形
質転換体 - 【請求項６】 請求項４記載の形質転換体を、誘導物
質としてのガラクトースを含む培地中で培養し、該形質
転換体を含む培養物から前記ペプチドまたは蛋白質を採
取することを特徴とするペプチドまたは蛋白質の製造方
法。 - 【請求項７】 請求項５記載の形質転換体を、誘導物
質としてのガラクトースを含む培地中で培養し、該形質
転換体の酵素遺伝子を発現させ、生産された酵素作用に
より物質を製造する方法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3049962A JPH04287683A (ja) | 1991-03-14 | 1991-03-14 | 酵母変異株およびそれを利用するペプチドまたは蛋白質 等の製造方法 |
| FR9202914A FR2673951A1 (fr) | 1991-03-14 | 1992-03-11 | Mutant de levure et procede de preparation d'un peptide ou d'une proteine utilisant ce mutant. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3049962A JPH04287683A (ja) | 1991-03-14 | 1991-03-14 | 酵母変異株およびそれを利用するペプチドまたは蛋白質 等の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04287683A true JPH04287683A (ja) | 1992-10-13 |
Family
ID=12845654
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3049962A Pending JPH04287683A (ja) | 1991-03-14 | 1991-03-14 | 酵母変異株およびそれを利用するペプチドまたは蛋白質 等の製造方法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04287683A (ja) |
| FR (1) | FR2673951A1 (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4661454A (en) * | 1983-02-28 | 1987-04-28 | Collaborative Research, Inc. | GAL1 yeast promoter linked to non galactokinase gene |
-
1991
- 1991-03-14 JP JP3049962A patent/JPH04287683A/ja active Pending
-
1992
- 1992-03-11 FR FR9202914A patent/FR2673951A1/fr active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2673951A1 (fr) | 1992-09-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4387162A (en) | Hybrid plasmids and microorganisms containing them | |
| USRE37767E1 (en) | Highly stable recombinant yeasts for the production of recombinant proteins | |
| Porro et al. | Recombinant protein production in yeasts | |
| CN1922326B (zh) | 2μm家族质粒及其用途 | |
| Steyn et al. | Co-expression of a Saccharomyces diastaticus glucoamylase-encoding gene and a Bacillus amyloliquefaciens α-amylase-encoding gene in Saccharomyces cerevisiae | |
| JPH05184352A (ja) | ピヒア パストリス（Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）酵母中での異種遺伝子の発現方法、発現ベクターおよび形質転換微生物 | |
| JP2022110110A (ja) | 糸状真菌宿主細胞によって発現された組換えシュウ酸デカルボキシラーゼ | |
| US20140186897A1 (en) | TRANSFORMANT OF YEAST OF GENUS SCHIZOSACCHAROMYCES, METHOD FOR PRODUCING SAME, METHOD FOR PRODUCING ß-GLUCOSIDASE, AND CELLULOSE DEGRADATION METHOD | |
| EP0306107B1 (en) | New yeast strains providing for an enhanced rate of the fermentation of sugars, a process to obtain such yeasts and the use of these yeats | |
| JP2905230B2 (ja) | ヒトリゾチームを産生する方法 | |
| de los Santos et al. | Improvement of catalytical properties of two invertases highly tolerant to sucrose after expression in Pichia pastoris. Effect of glycosylation on enzyme properties | |
| US6558920B1 (en) | High expression system of proteins | |
| CN106591351A (zh) | 一种能利用淀粉并分泌抗菌肽的重组酿酒酵母 | |
| WO2003016525A9 (fr) | Procede de production d'alcool a partir d'amidon | |
| JPH04287683A (ja) | 酵母変異株およびそれを利用するペプチドまたは蛋白質 等の製造方法 | |
| RU2355754C1 (ru) | ШТАММ ДРОЖЖЕЙ Yarrowia lipolytica - ПРОДУЦЕНТ ЛИПАЗЫ | |
| US11365419B2 (en) | Host cell and method for producing target protein using same | |
| Ibragimova et al. | A strategy for construction of industrial strains of distiller's yeast | |
| US20040241829A1 (en) | Vector for site-specific integration of heterologous dna sequences into metilotrophic yeasts | |
| CN102212546B (zh) | 一种整合型麦芽糖假丝酵母基因表达系统及其应用 | |
| WO2012060389A1 (ja) | シゾサッカロミセス属酵母の形質転換体およびその製造方法 | |
| US6841378B1 (en) | Production of heterologouus proteins from Zygosaccharomyces bailii | |
| KR102613937B1 (ko) | 갈락토스 이용에 관여하는 모든 유전자가 결손된 효모 균주 및 이를 이용한 재조합 단백질 생산방법 | |
| US7550281B2 (en) | Method for production of alpha-amylase in recombinant Bacillus | |
| Cha et al. | Enhancement of production of cloned glucoamylase under conditions of low aeration from recombinant yeast using a SUC2 promoter |