JPH04281089A - 熱安定性エンドキシラナーゼ - Google Patents
熱安定性エンドキシラナーゼInfo
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- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
- C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】本発明は、木材パルプ特性を改良するため
、特にリグニン含量を低下させるための、サーモモノス
ポラフスカ（Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｆｕｓｃ
ａ） 株より得られる熱安定酵素系の使用及び名称ＫＷ
３を有する新規菌株、サーモモノスポラフスカ、並びに
広いｐＨ範囲及び高温において活性であるその熱安定酵
素に関する。
、特にリグニン含量を低下させるための、サーモモノス
ポラフスカ（Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａｆｕｓｃ
ａ） 株より得られる熱安定酵素系の使用及び名称ＫＷ
３を有する新規菌株、サーモモノスポラフスカ、並びに
広いｐＨ範囲及び高温において活性であるその熱安定酵
素に関する。
【０００２】木材はセルロース、ヘミセルロース及びリ
グニン並びに他の少量の成分からなる複雑な材料である
。リグニンは会合しており、そしてたぶんセルロース及
びヘミセルロース（種々のヘキソース及びペントース、
例えばキシランのポリマー）に共有結合している。
グニン並びに他の少量の成分からなる複雑な材料である
。リグニンは会合しており、そしてたぶんセルロース及
びヘミセルロース（種々のヘキソース及びペントース、
例えばキシランのポリマー）に共有結合している。
【０００３】製紙工程において、リグニンは褐変させ、
強度を弱めそして最終製品に他の望ましくない特性を与
えるので通常木材パルプより除去される。リグニンの除
去は多くの方法により達成される。
強度を弱めそして最終製品に他の望ましくない特性を与
えるので通常木材パルプより除去される。リグニンの除
去は多くの方法により達成される。
【０００４】化学的パルプ化において、リグニンの大部
分は木材パルプより除去される（例えばクラフト法）。 漂白工程において、化学パルプは塩素及び他の脱リグニ
ン剤と反応されさらにリグニンが除去され、次いで漂白
剤と反応されリグニンが改質され、これにより安定な増
白されたパルプが得られる。しかし、塩素による処理は
生ずる排水が多くの毒性化合物（例えば塩素化フェノー
ル類）を含むため環境上の点より望ましくない。従って
かなりの資本投資又は多量の化学物質（例えば二酸化塩
素）を必要とする産業により他の漂白方法が求められて
いる。
分は木材パルプより除去される（例えばクラフト法）。 漂白工程において、化学パルプは塩素及び他の脱リグニ
ン剤と反応されさらにリグニンが除去され、次いで漂白
剤と反応されリグニンが改質され、これにより安定な増
白されたパルプが得られる。しかし、塩素による処理は
生ずる排水が多くの毒性化合物（例えば塩素化フェノー
ル類）を含むため環境上の点より望ましくない。従って
かなりの資本投資又は多量の化学物質（例えば二酸化塩
素）を必要とする産業により他の漂白方法が求められて
いる。
【０００５】木材パルプ中のリグニンを改良し又は低下
させ所望の増白又は同様の効果を得るため、菌（例えば
白腐れ菌）及び菌からの酵素系並びに細菌を用いる試み
が文献に開示されている。しかし、パルプのセルロース
含量に悪影響を与えないでパルプに選択的に作用する酵
素系はほとんど発見されなかった。木材パルプを脱リグ
ニン化するため、セルラーゼ活性が低いキシラナーゼが
用いられた。キシラナーゼはキシランを選択的に加水分
解する酵素である。この低いセルラーゼ活性を達成する
ため、キシラナーゼは例えば超遠心もしくはクロマトグ
ラフ法によりセルラーゼより分離するか又は最適化条件
において培養した特に選ばれた微生物より調製しなけれ
ばならない。これらの酵素はすべて酸性領域のｐＨにお
いてのみ活性でありそして５０℃以下の至適温度を有す
る。
させ所望の増白又は同様の効果を得るため、菌（例えば
白腐れ菌）及び菌からの酵素系並びに細菌を用いる試み
が文献に開示されている。しかし、パルプのセルロース
含量に悪影響を与えないでパルプに選択的に作用する酵
素系はほとんど発見されなかった。木材パルプを脱リグ
ニン化するため、セルラーゼ活性が低いキシラナーゼが
用いられた。キシラナーゼはキシランを選択的に加水分
解する酵素である。この低いセルラーゼ活性を達成する
ため、キシラナーゼは例えば超遠心もしくはクロマトグ
ラフ法によりセルラーゼより分離するか又は最適化条件
において培養した特に選ばれた微生物より調製しなけれ
ばならない。これらの酵素はすべて酸性領域のｐＨにお
いてのみ活性でありそして５０℃以下の至適温度を有す
る。
【０００６】しかし、産業上に用いるため、広いｐＨ範
囲、特にｐＨ７〜９及び高温において活性である酵素を
入手することが有利である。
囲、特にｐＨ７〜９及び高温において活性である酵素を
入手することが有利である。
【０００７】名称ＭＴ８１６を有するサーモモノスポラ
フスカ株からのキシラナーゼが最近開示された （Ａｐ
ｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（
１９８５） ２１： ２３８〜２４４）。しかしパルプ
脱リグニン化におけるその可能な用途は示されなかった
。
フスカ株からのキシラナーゼが最近開示された （Ａｐ
ｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（
１９８５） ２１： ２３８〜２４４）。しかしパルプ
脱リグニン化におけるその可能な用途は示されなかった
。
【０００８】高温及びアルカリ条件において種々のパル
プを選択的に処理するため、少なくとも１種のヘミセル
ロース作用酵素を含むサーモモノスポラ株の酵素系を用
い得ることが本発明により発見され、これによりリグニ
ン含量は低下するがパルプのセルロース含量は実質的に
影響されない。好ましい酵素系はキシラナーゼを含む。 さらに好ましい酵素系は、特に軟木パルプを処理する場
合、マンナナーゼ及びＴ． ｆｕｓｃａ ＫＷ３の他
の酵素成分も含む。
プを選択的に処理するため、少なくとも１種のヘミセル
ロース作用酵素を含むサーモモノスポラ株の酵素系を用
い得ることが本発明により発見され、これによりリグニ
ン含量は低下するがパルプのセルロース含量は実質的に
影響されない。好ましい酵素系はキシラナーゼを含む。 さらに好ましい酵素系は、特に軟木パルプを処理する場
合、マンナナーゼ及びＴ． ｆｕｓｃａ ＫＷ３の他
の酵素成分も含む。
【０００９】キシラナーゼは硬木及び軟木ヘミセルロー
スの両者の主要成分であるキシランの加水分解を触媒す
る酵素であり、一方マンナナーゼは、軟木ヘミセルロー
スの主要な成分であるマンナン含有炭水化物の加水分解
を触媒する。
スの両者の主要成分であるキシランの加水分解を触媒す
る酵素であり、一方マンナナーゼは、軟木ヘミセルロー
スの主要な成分であるマンナン含有炭水化物の加水分解
を触媒する。
【００１０】Ｔ． ｆｕｓｃａ 、特に新規株ＫＷ３
の１つの酵素はリグニンが会合もしくは結合しているヘ
ミセルロース／セルロースマトリックスに作用し、この
酵素によるパルプの処理後、リグニンは解離し及び／又
は解離可能になり、適当な抽出剤により分離され、そし
てパルプより除去される。
の１つの酵素はリグニンが会合もしくは結合しているヘ
ミセルロース／セルロースマトリックスに作用し、この
酵素によるパルプの処理後、リグニンは解離し及び／又
は解離可能になり、適当な抽出剤により分離され、そし
てパルプより除去される。
【００１１】Ｔ． ｆｕｓｃａ ＫＷ３により形成さ
れる総酵素系はセルラーゼも含む。しかし、Ｔ．ｆｕｓ
ｃａ ＫＷ３の上澄は適当な条件下で調製した際セルロ
ース及びそれより製造される紙の品質に悪影響を与えな
い少量のセルラーゼ活性を含む。
れる総酵素系はセルラーゼも含む。しかし、Ｔ．ｆｕｓ
ｃａ ＫＷ３の上澄は適当な条件下で調製した際セルロ
ース及びそれより製造される紙の品質に悪影響を与えな
い少量のセルラーゼ活性を含む。
【００１２】本発明においてあらゆるＴ． ｆｕｓｃ
ａ を用いてよいが、好ましい株は高温及びアルカリ条
件下で活性である脱リグニン化酵素を多量に形成するも
のを含む。 そのような株の例は Ｎｏ．ＤＳＭ６０１３としてＤｅ
ｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏ
ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒ
ｅｎ ＧｍｂＨ に寄託されたＴ． ｆｕｓｃａ Ｋ
Ｗ３である。
ａ を用いてよいが、好ましい株は高温及びアルカリ条
件下で活性である脱リグニン化酵素を多量に形成するも
のを含む。 そのような株の例は Ｎｏ．ＤＳＭ６０１３としてＤｅ
ｕｔｓｃｈｅ Ｓａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏ
ｏｒｇａｎｉｓｍｅｎ ｕｎｄ Ｚｅｌｌｋｕｌｔｕｒ
ｅｎ ＧｍｂＨ に寄託されたＴ． ｆｕｓｃａ Ｋ
Ｗ３である。
【００１３】サーモモノスポラフスカとしての新規株の
分類は光学及び電子顕微鏡を用いその形態学的特徴を多
くの対照株と比較することにより行った。さらに、この
新規株はサーモモノスポラフスカに典型的な以下の生化
学特徴を有していた：細胞壁内にメソジアミノピメリン
酸、高い塩濃度に感受性、ｐＨ１１及び５０℃で増殖。
分類は光学及び電子顕微鏡を用いその形態学的特徴を多
くの対照株と比較することにより行った。さらに、この
新規株はサーモモノスポラフスカに典型的な以下の生化
学特徴を有していた：細胞壁内にメソジアミノピメリン
酸、高い塩濃度に感受性、ｐＨ１１及び５０℃で増殖。
【００１４】新規株ＫＷ３は、６０℃までの温度で増殖
するその能力及びそのキシラナーゼの高い熱安定性の点
で他の公知の株、例えばＤＳＭ４３７９２＝ＡＴＣＣ２
７７３０と異っている。ＫＷ３はそのキシラナーゼの高
い熱安定性、同じ培養条件下での高いキシラナーゼ産生
能、及びキシラナーゼ活性の広いｐＨ範囲の点でＴ．
ｆｕｓｃａ ＭＴ８１６ （Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９８５） ２１
： ２３８〜２４４）と異っている。さらに、新規株Ｋ
Ｗ３はサーモモノスポラフスカに典型的でないと考えら
れるクリスタルバイオレットに対する耐性を示す。
するその能力及びそのキシラナーゼの高い熱安定性の点
で他の公知の株、例えばＤＳＭ４３７９２＝ＡＴＣＣ２
７７３０と異っている。ＫＷ３はそのキシラナーゼの高
い熱安定性、同じ培養条件下での高いキシラナーゼ産生
能、及びキシラナーゼ活性の広いｐＨ範囲の点でＴ．
ｆｕｓｃａ ＭＴ８１６ （Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（１９８５） ２１
： ２３８〜２４４）と異っている。さらに、新規株Ｋ
Ｗ３はサーモモノスポラフスカに典型的でないと考えら
れるクリスタルバイオレットに対する耐性を示す。
【００１５】上澄は炭素源の存在下増殖させたＴ．
ｆｕｓｃａ 培養物より得られる。好ましい炭素源は小
麦ふすま、キシラン、マンナン（ガラクトマンナン、グ
ルコマンナンもしくはガラクトグルコマンナン）、マン
ノース、砕木パルプ、化学パルプ、のこ屑、小麦わら、
又はヘミセルロースを含むもしくはヘミセルロース由来
の他の物質を含む。微生物は所望の炭素源上で培養され
、最適の酵素形成は１〜５日後に達成される。炭素源は
キシラナーゼイソ酵素パターン、すなわち分子量、比活
性及び個々の蛋白質の至適ｐＨに影響を及ぼすことがわ
かった。
ｆｕｓｃａ 培養物より得られる。好ましい炭素源は小
麦ふすま、キシラン、マンナン（ガラクトマンナン、グ
ルコマンナンもしくはガラクトグルコマンナン）、マン
ノース、砕木パルプ、化学パルプ、のこ屑、小麦わら、
又はヘミセルロースを含むもしくはヘミセルロース由来
の他の物質を含む。微生物は所望の炭素源上で培養され
、最適の酵素形成は１〜５日後に達成される。炭素源は
キシラナーゼイソ酵素パターン、すなわち分子量、比活
性及び個々の蛋白質の至適ｐＨに影響を及ぼすことがわ
かった。
【００１６】本発明の方法は、パルプのリグニン含量を
低下させるに十分な時間インビトロで行なわれる。この
方法はパルプをリグニン解離有効量のリグニン解離酵素
、好ましくはエンドキシラナーゼを含む酵素系（これは
Ｔ．ｆｕｓｃａ培養物の上澄に含まれている）と接触さ
せることを含む。上澄はそのまま用いてもよいが、好ま
しくは使用前に濃縮される。都合のよい濃縮方法の１つ
は、上澄を５〜２５倍に濃縮し、基本的木材成分に影響
を及ぼす酵素、例えばセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、及
びリグニンに影響を及ぼす酵素（リグニン分解酵素）を
本質的にすべて含む濃厚物を回収するための簡単な超遠
心を含む。この目的のため、約１０，０００未満の分子
量を有するすべての物質を除去する。得られる濃厚物は
Ｔ． ｆｕｓｃａ のキシラナーゼだけでなくセルラ
ーゼ及び他の酵素活性を含み、選択的方法で、すなわち
製紙に望ましい繊維にダメージを与えることなくパルプ
のリグニン含量の低下に有効である。
低下させるに十分な時間インビトロで行なわれる。この
方法はパルプをリグニン解離有効量のリグニン解離酵素
、好ましくはエンドキシラナーゼを含む酵素系（これは
Ｔ．ｆｕｓｃａ培養物の上澄に含まれている）と接触さ
せることを含む。上澄はそのまま用いてもよいが、好ま
しくは使用前に濃縮される。都合のよい濃縮方法の１つ
は、上澄を５〜２５倍に濃縮し、基本的木材成分に影響
を及ぼす酵素、例えばセルラーゼ、ヘミセルラーゼ、及
びリグニンに影響を及ぼす酵素（リグニン分解酵素）を
本質的にすべて含む濃厚物を回収するための簡単な超遠
心を含む。この目的のため、約１０，０００未満の分子
量を有するすべての物質を除去する。得られる濃厚物は
Ｔ． ｆｕｓｃａ のキシラナーゼだけでなくセルラ
ーゼ及び他の酵素活性を含み、選択的方法で、すなわち
製紙に望ましい繊維にダメージを与えることなくパルプ
のリグニン含量の低下に有効である。
【００１７】インビトロで酵素活性を高める温度におい
てこの方法を行なうことが好ましい。温度は約１０〜９
０℃であり、５０〜８０℃が好ましい。さらにより好ま
しい範囲は６０〜７０℃である。この方法の好ましいｐ
Ｈは５〜１０であり、より好ましい範囲は６．５〜９．
５である。広いｐＨ範囲で活性であり、そしてパルプ粉
砕に用いられる貯蔵塔におけるパルプのｐＨであるｐＨ
７〜９において高い活性を有することが本発明の酵素の
特徴である。
てこの方法を行なうことが好ましい。温度は約１０〜９
０℃であり、５０〜８０℃が好ましい。さらにより好ま
しい範囲は６０〜７０℃である。この方法の好ましいｐ
Ｈは５〜１０であり、より好ましい範囲は６．５〜９．
５である。広いｐＨ範囲で活性であり、そしてパルプ粉
砕に用いられる貯蔵塔におけるパルプのｐＨであるｐＨ
７〜９において高い活性を有することが本発明の酵素の
特徴である。
【００１８】処理時間は、所望の結果、用いられる基質
の量、用いられる上澄酵素の量、上澄の比活性、用いら
れるパルプのタイプ、温度等のファクターにより異なる
。
の量、用いられる上澄酵素の量、上澄の比活性、用いら
れるパルプのタイプ、温度等のファクターにより異なる
。
【００１９】好適な酵素量は乾燥パルプ１ｇあたり約０
．０１〜２００ユニット、好ましくは０．１〜５０ユニ
ット／ｇである。酵素のキシラナーゼ活性は以下のよう
にして求められる。０．５ｍｌのキシラン溶液（１％，
ＳｉｇｍａＮｏ．Ｘ−０６２７，５０ｍＭリン酸バッフ
ァー、ｐＨ７中で調製）に同じバッファー内の好適に希
釈した酵素を０．５ｍｌ加える。この溶液を７０℃で正
確に１０分間インキュベートする。次いで１ｍｌのＤＮ
Ｓ試薬（３，５−ジニトロサリシレート１０ｇ／ｌ；Ｎ
ａ，Ｋタルトレート３００ｇ／ｌ；ＮａＯＨ１６ｇ／ｌ
）を加えることにより反応を止め、サンプルを５分間沸
騰させることにより色があらわれる。５４０ｎｍの波長
で吸光度を測定する。１酵素ユニットは、アッセイ条件
下１分あたりのキシロースとして計算される還元糖を１
ミクロモル遊離する。活性はアッセイ条件下４ミクロモ
ルの還元糖を遊離する酵素より計算される。
．０１〜２００ユニット、好ましくは０．１〜５０ユニ
ット／ｇである。酵素のキシラナーゼ活性は以下のよう
にして求められる。０．５ｍｌのキシラン溶液（１％，
ＳｉｇｍａＮｏ．Ｘ−０６２７，５０ｍＭリン酸バッフ
ァー、ｐＨ７中で調製）に同じバッファー内の好適に希
釈した酵素を０．５ｍｌ加える。この溶液を７０℃で正
確に１０分間インキュベートする。次いで１ｍｌのＤＮ
Ｓ試薬（３，５−ジニトロサリシレート１０ｇ／ｌ；Ｎ
ａ，Ｋタルトレート３００ｇ／ｌ；ＮａＯＨ１６ｇ／ｌ
）を加えることにより反応を止め、サンプルを５分間沸
騰させることにより色があらわれる。５４０ｎｍの波長
で吸光度を測定する。１酵素ユニットは、アッセイ条件
下１分あたりのキシロースとして計算される還元糖を１
ミクロモル遊離する。活性はアッセイ条件下４ミクロモ
ルの還元糖を遊離する酵素より計算される。
【００２０】種々の加工パルプ、すなわちそのリグニン
含量を低下させるため種々の方法によりすでに処理され
た、及びリグニン含量をさらに低下させるためもしくは
化学方法によりリグニン除去を高めるためもしくはパル
プの排水能を高めるため本発明の方法により処理される
パルプの品質向上を助けるため本発明は用いられる。本
発明はさらにリグニンを除去することにより白色度を高
めるため機械パルプの処理に用いられる。本発明は化学
パルプ、すなわちスルフィット、ソーダ及びスルフェー
ト（クラフト）法のような種々の化学処理によりリグニ
ン成分が化学的に改質されたパルプに適用可能であり、
好ましくはクラフトパルプに用いられる。
含量を低下させるため種々の方法によりすでに処理され
た、及びリグニン含量をさらに低下させるためもしくは
化学方法によりリグニン除去を高めるためもしくはパル
プの排水能を高めるため本発明の方法により処理される
パルプの品質向上を助けるため本発明は用いられる。本
発明はさらにリグニンを除去することにより白色度を高
めるため機械パルプの処理に用いられる。本発明は化学
パルプ、すなわちスルフィット、ソーダ及びスルフェー
ト（クラフト）法のような種々の化学処理によりリグニ
ン成分が化学的に改質されたパルプに適用可能であり、
好ましくはクラフトパルプに用いられる。
【００２１】特に適用可能なパルプは通常そのリグニン
の８０〜９９％が除去されており、化学的に改質された
リグニンを含むリグニンをさらに除去するよう処理され
る。そのような化学パルプの処理は通常漂白と呼ばれ、
パルプの増白により示される。
の８０〜９９％が除去されており、化学的に改質された
リグニンを含むリグニンをさらに除去するよう処理され
る。そのような化学パルプの処理は通常漂白と呼ばれ、
パルプの増白により示される。
【００２２】得られるパルプは適当な抽出剤を用いて解
離可能なリグニン成分を除去するため処理される。その
ような抽出剤は影響をうけたリグニン成分を可溶化し、
好適な抽出剤は限定されるものではないが塩基、例えば
アルカリ金属水酸化物（Ｅ）、ＤＭＦ、ジオキサン、ア
セトン、及びアルコールを含む。水酸化物抽出剤は過酸
化水素（Ｅｐ ）又は酸素（Ｅｏ ）と混合してもよい
。得られるパルプを化学漂白剤により所望の白色度まで
さらに漂白し、それにより同じ漂白剤を用いるが酵素処
理を用いないで同じ白色度に漂白されたパルプと比較し
化学物質をかなり省くことができる。そのような方法で
は元素塩素を含まない漂白が達成できる。
離可能なリグニン成分を除去するため処理される。その
ような抽出剤は影響をうけたリグニン成分を可溶化し、
好適な抽出剤は限定されるものではないが塩基、例えば
アルカリ金属水酸化物（Ｅ）、ＤＭＦ、ジオキサン、ア
セトン、及びアルコールを含む。水酸化物抽出剤は過酸
化水素（Ｅｐ ）又は酸素（Ｅｏ ）と混合してもよい
。得られるパルプを化学漂白剤により所望の白色度まで
さらに漂白し、それにより同じ漂白剤を用いるが酵素処
理を用いないで同じ白色度に漂白されたパルプと比較し
化学物質をかなり省くことができる。そのような方法で
は元素塩素を含まない漂白が達成できる。
【００２３】上記酵素によって処理した場合、パルプの
リグニン含量の低下に加え、少量のヘミセルロース及び
非晶質セルロースの除去によりパルプの低下した排水能
及び低下した保水性のような利点が得られる。
リグニン含量の低下に加え、少量のヘミセルロース及び
非晶質セルロースの除去によりパルプの低下した排水能
及び低下した保水性のような利点が得られる。
【００２４】本発明をさらに以下の実施例を参考にし説
明する。
明する。
【００２５】実施例
例１
サーモモノスポラフスカＫＷ３の培養
Ａ．フラスコ培養用の培地
Ｔ． ｆｕｓｃａ 株ＫＷ３をＬＢ培地を含むプレー
ト上又は液体ＬＢ培地内で増殖させ保存する。 ＬＢ培地 ペプトン
１５ｇ イースト抽出物
５ｇ 塩化ナトリウム
５ｇ グ
ルコースＨ２ Ｏ
１．１ｇ アガー
２０ｇ（プレート用のみ）
蒸留水
１０００ｍｌにする オートクレー
ブ前にｐＨ７．５に調整
ト上又は液体ＬＢ培地内で増殖させ保存する。 ＬＢ培地 ペプトン
１５ｇ イースト抽出物
５ｇ 塩化ナトリウム
５ｇ グ
ルコースＨ２ Ｏ
１．１ｇ アガー
２０ｇ（プレート用のみ）
蒸留水
１０００ｍｌにする オートクレー
ブ前にｐＨ７．５に調整
【００２６】以下の培地内で酵
素産生用培養を行なう。 フラスコ用培地 Ｍ６
１００ｍｌイースト抽出物
１ｇ微量元素溶液
１ｍｌ基質
２〜２０ｇ蒸留水
１０００ｍｌにするオ
ートクレーブ前にｐＨ７．２に調整 培養の間ｐＨを安定化するためこの培地２５０ｍｌに１
２．５ｍｌのリン酸バッファー（０．１Ｍ，ｐＨ８．０
）を加える。
素産生用培養を行なう。 フラスコ用培地 Ｍ６
１００ｍｌイースト抽出物
１ｇ微量元素溶液
１ｍｌ基質
２〜２０ｇ蒸留水
１０００ｍｌにするオ
ートクレーブ前にｐＨ７．２に調整 培養の間ｐＨを安定化するためこの培地２５０ｍｌに１
２．５ｍｌのリン酸バッファー（０．１Ｍ，ｐＨ８．０
）を加える。
【００２７】無機塩培地Ｍ６
（ＮＨ４）２ ＳＯ４
３ｇＮａＣｌ
３ｇＭｇＳＯ４
１ｇＣａＣＯ３
０．２ｇ蒸留水
１０００ｍｌにする
３ｇＮａＣｌ
３ｇＭｇＳＯ４
１ｇＣａＣＯ３
０．２ｇ蒸留水
１０００ｍｌにする
【００２８】
微量元素溶液 ＺｎＣｌ２
４０ｍｇＦｅＣｌ３
２００ｍｇＣｕＣｌ２
・２Ｈ２ Ｏ １０ｍｇＭ
ｕＣｌ２ ・４Ｈ２ Ｏ
１０ｍｇＮａ２ Ｂ４ Ｏ７ ・１０Ｈ２ Ｏ
１０ｍｇ（ＮＨ４）２ Ｍｏ７ Ｏ２４・４Ｈ
２Ｏ １０ｍｇ蒸留水
１０００ｍｌにする
微量元素溶液 ＺｎＣｌ２
４０ｍｇＦｅＣｌ３
２００ｍｇＣｕＣｌ２
・２Ｈ２ Ｏ １０ｍｇＭ
ｕＣｌ２ ・４Ｈ２ Ｏ
１０ｍｇＮａ２ Ｂ４ Ｏ７ ・１０Ｈ２ Ｏ
１０ｍｇ（ＮＨ４）２ Ｍｏ７ Ｏ２４・４Ｈ
２Ｏ １０ｍｇ蒸留水
１０００ｍｌにする
【００２９】基質
オート麦スペルトからの１％キシラン（Ｓｉｇｍａ）、
１％ガラクトマンナン（Ｓｉｇｍａ）又は０．５％小麦
ふすまをオートクレーブ前に加えた。
１％ガラクトマンナン（Ｓｉｇｍａ）又は０．５％小麦
ふすまをオートクレーブ前に加えた。
【００３０】接種物
アガートラント又は凍結試験管カルチャーからの胞子又
は菌糸体を１００ｍｌのＬＢ培地に加えた。このシェー
カーフラスコを４８℃，１５０ｒｐｍ のシェーカー上
に４８時間置いた。このカルチャーより１０％の最終培
養体積を接種物として用いた。
は菌糸体を１００ｍｌのＬＢ培地に加えた。このシェー
カーフラスコを４８℃，１５０ｒｐｍ のシェーカー上
に４８時間置いた。このカルチャーより１０％の最終培
養体積を接種物として用いた。
【００３１】培養
４８℃，１５０ｒｐｍ で２５０ｍｌの培地を含む１リ
ットルのシェーカーフラスコ内で培養を行った。最大キ
シラナーゼ又はマンナナーゼ活性は２〜３日後に検出さ
れた。 遠心（３０００ｒｐｍ ，１０分）及びセルロース繊維
を通す濾過により培養上澄を採収した。５Ｕｌ−１のキ
シラナーゼ活性及び１Ｕｌ−１のマンナナーゼ活性はオ
ート麦キシランでの培養より得られ、３Ｕｌ−１及び０
．５Ｕｌ−１のそれぞれの活性は小麦ふすまでの培養で
得られた。
ットルのシェーカーフラスコ内で培養を行った。最大キ
シラナーゼ又はマンナナーゼ活性は２〜３日後に検出さ
れた。 遠心（３０００ｒｐｍ ，１０分）及びセルロース繊維
を通す濾過により培養上澄を採収した。５Ｕｌ−１のキ
シラナーゼ活性及び１Ｕｌ−１のマンナナーゼ活性はオ
ート麦キシランでの培養より得られ、３Ｕｌ−１及び０
．５Ｕｌ−１のそれぞれの活性は小麦ふすまでの培養で
得られた。
【００３２】Ｂ．１５リットルのバイオリアクターでの
酵素製造 バイオリアクター装置 １０リットルの作業体積を有する１５リットルのバイオ
リアクター（ＭＢＲ，Ｓｕｌｚｅｒ；スイス）を用いた
。
酵素製造 バイオリアクター装置 １０リットルの作業体積を有する１５リットルのバイオ
リアクター（ＭＢＲ，Ｓｕｌｚｅｒ；スイス）を用いた
。
【００３３】接種物
２５０ｍｌのＬＢ培地を含む１０００ｍｌのシェーカー
フラスコに凍結試験管カルチャーを接種することにより
培養を開始した。フラスコを４８℃，１５０ｒｐｍ の
シェーカー上に４８〜５５時間置いた。バイオリアクタ
ーに接種するため５００ｍｌを用いた。
フラスコに凍結試験管カルチャーを接種することにより
培養を開始した。フラスコを４８℃，１５０ｒｐｍ の
シェーカー上に４８〜５５時間置いた。バイオリアクタ
ーに接種するため５００ｍｌを用いた。
【００３４】バイオリアクター培地ＭｏｒＭ３の組成キ
シラン
３ｇｌ−１イースト抽出物
１ＮａＣｌ
１．５（ＮＨ４）
２ ＳＯ４ ３
．１ＫＨ２ ＰＯ４
０．２塩溶液
１０ｍｌｌ−１ビタ
ミン溶液
１ｍｌｌ−１ＮａＯＨにより７．２にｐＨを調整
シラン
３ｇｌ−１イースト抽出物
１ＮａＣｌ
１．５（ＮＨ４）
２ ＳＯ４ ３
．１ＫＨ２ ＰＯ４
０．２塩溶液
１０ｍｌｌ−１ビタ
ミン溶液
１ｍｌｌ−１ＮａＯＨにより７．２にｐＨを調整
【００３５】ビタミン溶液
チアミンＨＣｌ
１ｍｇｌ−１ビオチン
１ｍｇｌ−１
１ｍｇｌ−１ビオチン
１ｍｇｌ−１
【００３６】
塩溶液 Ｎａ３ ＥＤＴＡ
５ｇｌ−１ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２ Ｏ
２０ＺｎＳＯ４ ・７Ｈ２ Ｏ
０．８ＭｎＳＯ４ ・Ｈ２
Ｏ １．５ＦｅＳＯ４
・７Ｈ２ Ｏ ２ＣａＣ
ｌ２
２
塩溶液 Ｎａ３ ＥＤＴＡ
５ｇｌ−１ＭｇＳＯ４ ・７Ｈ２ Ｏ
２０ＺｎＳＯ４ ・７Ｈ２ Ｏ
０．８ＭｎＳＯ４ ・Ｈ２
Ｏ １．５ＦｅＳＯ４
・７Ｈ２ Ｏ ２ＣａＣ
ｌ２
２
【００３７】培養
４８℃，５００ｒｐｍ で培養を行った。発酵ブロスは
０．５（ｖ／ｖ／ｍｉｎ ）で曝気し、ｐＨは７．２に
保った（ＮａＯＨ，２Ｎ）。最大キシラナーゼ活性は１
〜２日後検出された。遠心（５０００ｒｐｍ ，１０〜
６０分）により培養上澄を採収した。キシラナーゼ活性
はほぼ４０，０００Ｕｌ−１であり、ＣＭＣアーゼ活性
は１％未満であった。
０．５（ｖ／ｖ／ｍｉｎ ）で曝気し、ｐＨは７．２に
保った（ＮａＯＨ，２Ｎ）。最大キシラナーゼ活性は１
〜２日後検出された。遠心（５０００ｒｐｍ ，１０〜
６０分）により培養上澄を採収した。キシラナーゼ活性
はほぼ４０，０００Ｕｌ−１であり、ＣＭＣアーゼ活性
は１％未満であった。
【００３８】キシランのかわりにガラクトマンナンを用
いることを除き同じ方法によってマンナナーゼの製造を
行った。
いることを除き同じ方法によってマンナナーゼの製造を
行った。
【００３９】例２
酵素上澄の分析
例１のようにして得たフラスコ培養からの培養上澄は以
下の酵素活性を示した（μＭｏｌ の還元糖／ｍｉｎ
／ｍｌ）。 酵素活性（μＭｏｌ ／ｍｉｎ ／ｍｌ）──────
─────────────────────────
──── Ｃ源 キシラナー
ゼ マンナナーゼ セルラーゼ（ＣＭＣ）
─────────────────────────
────────── 小麦ふすま
２．１ ０．０６
０．０８ キシラン ５
．３ ０．２
０．０２ ガラクトマンナン ２．６
１．６ ０．０８──
─────────────────────────
────────酵素活性の測定は以下のようにして行
った。
下の酵素活性を示した（μＭｏｌ の還元糖／ｍｉｎ
／ｍｌ）。 酵素活性（μＭｏｌ ／ｍｉｎ ／ｍｌ）──────
─────────────────────────
──── Ｃ源 キシラナー
ゼ マンナナーゼ セルラーゼ（ＣＭＣ）
─────────────────────────
────────── 小麦ふすま
２．１ ０．０６
０．０８ キシラン ５
．３ ０．２
０．０２ ガラクトマンナン ２．６
１．６ ０．０８──
─────────────────────────
────────酵素活性の測定は以下のようにして行
った。
【００４０】キシラナーゼ活性
０．５ｍｌのキシラン懸濁液（１％，Ｓｉｇｍａ Ｎｏ
．Ｘ−０６２７，５０ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ７中
で調製）に同じバッファー中の適当に希釈した酵素（０
．１〜０．９のＯＤ５４０ を与える）を０．５ｍｌ加
えた。この溶液を７０℃で正確に１０分間インキュベー
トした。次いで１ｍｌのＤＮＳ試薬（３，５−ジニトロ
サリシレート１０ｇ／ｌ；Ｎａ−Ｋ−タートレート３０
０ｇ／ｌ；ＮａＯＨ１６ｇ／ｌ）を加えることにより反
応を止め、このサンプルを５分間沸騰させることにより
色があわられた。５ｍｌのＨ２ Ｏを加えた後、５４０
ｎｍの吸光度を測定した。１酵素ユニットはアッセイ条
件下１分あたりのキシロースとして計算される還元糖を
１ミクロモル遊離する。
．Ｘ−０６２７，５０ｍＭリン酸バッファー、ｐＨ７中
で調製）に同じバッファー中の適当に希釈した酵素（０
．１〜０．９のＯＤ５４０ を与える）を０．５ｍｌ加
えた。この溶液を７０℃で正確に１０分間インキュベー
トした。次いで１ｍｌのＤＮＳ試薬（３，５−ジニトロ
サリシレート１０ｇ／ｌ；Ｎａ−Ｋ−タートレート３０
０ｇ／ｌ；ＮａＯＨ１６ｇ／ｌ）を加えることにより反
応を止め、このサンプルを５分間沸騰させることにより
色があわられた。５ｍｌのＨ２ Ｏを加えた後、５４０
ｎｍの吸光度を測定した。１酵素ユニットはアッセイ条
件下１分あたりのキシロースとして計算される還元糖を
１ミクロモル遊離する。
【００４１】マンナナーゼ活性
キシランのかわりにガラクトマンナン（Ｓｉｇｍａ Ｎ
ｏ．Ｇ−０７５３）を用いることを除き、エンドキシラ
ナーゼに用いた方法と同じ方法を用いた。
ｏ．Ｇ−０７５３）を用いることを除き、エンドキシラ
ナーゼに用いた方法と同じ方法を用いた。
【００４２】セルラーゼ活性
リン酸バッファーｐＨ７，７０℃を用いることを除き基
質としてカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ，Ｆｌｕ
ｋａ Ｎｏ．２１９０１）を用いてＩｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌＵｎｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （ＩＵＰＡＣ） によ
り推められた方法に従い測定を行った （Ｐｕｒｅ ＆
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ５９巻２号
、２５７〜２６８頁（１９８７））。
質としてカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ，Ｆｌｕ
ｋａ Ｎｏ．２１９０１）を用いてＩｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌＵｎｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐ
ｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ （ＩＵＰＡＣ） によ
り推められた方法に従い測定を行った （Ｐｕｒｅ ＆
Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ５９巻２号
、２５７〜２６８頁（１９８７））。
【００４３】ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動に
よる培養上澄の分析により、キシラナーゼ活性を有する
少なくとも６種のイソ酵素が明らかになった。主要なバ
ンドは約２０，０００の相対分子量を示した。等電点電
気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動及び活性染色
によりキシラナーゼ活性を有する６つのバンドが明らか
になり、その主要な成分は４．５の等電点及び２０キロ
ダルトンのＭｒを有していた。同じ方法は４種のマンナ
ナーゼイソ酵素を示した。
よる培養上澄の分析により、キシラナーゼ活性を有する
少なくとも６種のイソ酵素が明らかになった。主要なバ
ンドは約２０，０００の相対分子量を示した。等電点電
気泳動、ポリアクリルアミドゲル電気泳動及び活性染色
によりキシラナーゼ活性を有する６つのバンドが明らか
になり、その主要な成分は４．５の等電点及び２０キロ
ダルトンのＭｒを有していた。同じ方法は４種のマンナ
ナーゼイソ酵素を示した。
【００４４】それぞれの粗上澄の分析は、５．５〜９の
ｐＨ範囲でその最大活性の５０％以上を示し、７０℃で
ｐＨ６〜７において最大活性を示していた。ｐＨ７での
至適温度は６０〜７０℃であるが、８０℃でも最大活性
の３０％以上を保っている。
ｐＨ範囲でその最大活性の５０％以上を示し、７０℃で
ｐＨ６〜７において最大活性を示していた。ｐＨ７での
至適温度は６０〜７０℃であるが、８０℃でも最大活性
の３０％以上を保っている。
【００４５】
【表１】
【００４６】
【表２】
【００４７】粗上澄中のキシラナーゼ活性の安定性はｐ
Ｈ７及び９で調べた。結果を以下に示す。
Ｈ７及び９で調べた。結果を以下に示す。
【００４８】
【表３】
【００４９】
【表４】
【００５０】例３
クラフトパルプの脱リグニン化
酵素
限外濾過膜（分子量カットオフ１０，０００）を用いる
ことにより２５００キシラナーゼユニット／ｍｌの濃度
まで例１のようにして得た粗酵素を濃縮した。
ことにより２５００キシラナーゼユニット／ｍｌの濃度
まで例１のようにして得た粗酵素を濃縮した。
【００５１】又は、粗酵素を凍結乾燥した。次いで乾燥
粉末を最初の体積の１／１０の体積に溶解し、１００倍
体積のリン酸バッファーｐＨ７に対し透析した（分子量
カットオフ１０，０００）。
粉末を最初の体積の１／１０の体積に溶解し、１００倍
体積のリン酸バッファーｐＨ７に対し透析した（分子量
カットオフ１０，０００）。
【００５２】パルプ処理
硬木及び軟木クラフトパルプ（２．５％コンシステンシ
ー）を７０℃で２時間キシラナーゼユニット数として示
された酵素を示された量と共にインキュベートした。酵
素を加える前にｐＨを塩酸の添加により７にそして水酸
化ナトリウムの添加により９に調整した。示された酵素
量は標準条件（例２）で測定された活性である。２時間
後、パルプ懸濁液をＷｈａｔｍａｎ Ｎｏ．１濾紙を通
し濾過した。さらにアルカリ条件下パルプを抽出し（パ
ルプあたり２．５％ＮａＯＨ，５０℃で１時間）、風乾
した。脱リグニン化はカッパナンバーの変化で測定した
。 パルプの脱リグニン化及び標白の程度はカッパナンバー
により示される。カッパナンバーが低いほど存在するリ
グニンが少量であることを示すので望ましい。
ー）を７０℃で２時間キシラナーゼユニット数として示
された酵素を示された量と共にインキュベートした。酵
素を加える前にｐＨを塩酸の添加により７にそして水酸
化ナトリウムの添加により９に調整した。示された酵素
量は標準条件（例２）で測定された活性である。２時間
後、パルプ懸濁液をＷｈａｔｍａｎ Ｎｏ．１濾紙を通
し濾過した。さらにアルカリ条件下パルプを抽出し（パ
ルプあたり２．５％ＮａＯＨ，５０℃で１時間）、風乾
した。脱リグニン化はカッパナンバーの変化で測定した
。 パルプの脱リグニン化及び標白の程度はカッパナンバー
により示される。カッパナンバーが低いほど存在するリ
グニンが少量であることを示すので望ましい。
【００５３】カッパナンバーはこの方法において示され
た条件下で水分を含まないパルプの１ｇにより消費され
る０．１Ｎ過マンガン酸カリウム溶液の体積（ｍｌ）で
ある。結果は加えた過マンガン酸塩の５０％消費に修正
される。以下の標準法を用いた。ＴＡＰＰＩテスト法（
Ｔａｐｐｉ， Ａｔｌａｎｔａ， ＧＡ）， １巻、
１９８８「Ｋａｐｐａ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆｐｕｌｐ−
Ｔ ２３６ｃｍ ８５」。
た条件下で水分を含まないパルプの１ｇにより消費され
る０．１Ｎ過マンガン酸カリウム溶液の体積（ｍｌ）で
ある。結果は加えた過マンガン酸塩の５０％消費に修正
される。以下の標準法を用いた。ＴＡＰＰＩテスト法（
Ｔａｐｐｉ， Ａｔｌａｎｔａ， ＧＡ）， １巻、
１９８８「Ｋａｐｐａ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆｐｕｌｐ−
Ｔ ２３６ｃｍ ８５」。
【００５４】
【表５】
【００５５】
【表６】
【００５６】例４
硬木クラフトパルプの元素塩素を用いない漂白１８．５
のカッパナンバーを有するユーカリクラフトパルプを８
０℃，ｐＨ９，１５％のパルプコンシステンシーで３時
間２０Ｕ／ｇパルプのキシラナーゼ活性で処理した。得
られるパルプを標準条件下Ｅｐ ，Ｄ１ ，Ｅｐ ，Ｄ
２ を用いてさらに化学的に漂白した。酵素を用いるこ
とにより得られる利点を説明するため、２つの一般的漂
白法も用いた。
のカッパナンバーを有するユーカリクラフトパルプを８
０℃，ｐＨ９，１５％のパルプコンシステンシーで３時
間２０Ｕ／ｇパルプのキシラナーゼ活性で処理した。得
られるパルプを標準条件下Ｅｐ ，Ｄ１ ，Ｅｐ ，Ｄ
２ を用いてさらに化学的に漂白した。酵素を用いるこ
とにより得られる利点を説明するため、２つの一般的漂
白法も用いた。
【００５７】
【表７】
【００５８】このデータは、酵素を用いることにより、
同じ白色度レベルを得るために通常の漂白剤よりも必要
な活性塩素が少ないことを示している。
同じ白色度レベルを得るために通常の漂白剤よりも必要
な活性塩素が少ないことを示している。
【００５９】ｐＨ７において同様の結果が得られた。２
０，４０、及び６０の゜ＳＲでの紙特性テストにより酵
素と塩素含有剤の間に差がないことが明らかになった。
０，４０、及び６０の゜ＳＲでの紙特性テストにより酵
素と塩素含有剤の間に差がないことが明らかになった。
【００６０】例５
硬木クラフトパルプの元素塩素を用いない漂白１７．９
のカッパナンバーを有する酵素漂白したトウヒクラフト
パルプを７０℃，ｐＨ７，１５％のコンシステンシーで
５時間３Ｕ／ｇパルプのキシラナーゼ活性で処理した。 得られるパルプを標準条件下Ｄ１ ＥｏｐＤ２ Ｅｐ
Ｄ３ を用いてさらに漂白した。
のカッパナンバーを有する酵素漂白したトウヒクラフト
パルプを７０℃，ｐＨ７，１５％のコンシステンシーで
５時間３Ｕ／ｇパルプのキシラナーゼ活性で処理した。 得られるパルプを標準条件下Ｄ１ ＥｏｐＤ２ Ｅｐ
Ｄ３ を用いてさらに漂白した。
【００６１】
【表８】
【００６２】このデータも、酵素を用いることにより、
同じ白色度レベルを得るため塩素を含まない漂白剤より
も必要な活性塩素が少ないことを示している。同じ゜Ｓ
Ｒで比較した紙特性は未変化であった。
同じ白色度レベルを得るため塩素を含まない漂白剤より
も必要な活性塩素が少ないことを示している。同じ゜Ｓ
Ｒで比較した紙特性は未変化であった。
Claims (11)
- 【請求項１】 ５０℃以上の温度においてサーモモノ
スポラフスカ（Ｔｈｅｒｍｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｆｕ
ｓｃａ） の株より得られる酵素系をパルプと接触させ
ることを含む、化学及び物理特性を改良するためのパル
プの処理方法。 - 【請求項２】 寄託番号ＤＳＭ６０１３及び名称ＫＷ
３のサーモモノスポラフスカの酵素系を用いる、請求項
１記載の方法。 - 【請求項３】 サーモモノスポラフスカの増殖より得
られる培養物の遠心により得られる上澄でパルプを処理
することを含む、請求項１又は２記載の方法。 - 【請求項４】 酵素系がサーモモノスポラフスカより
得られるキシラナーゼを少なくとも含む、請求項１〜３
のいずれか記載の方法。 - 【請求項５】 処理されるパルプがクラフトパルプで
ある、前記請求項のいずれか記載の方法。 - 【請求項６】 パルプが硬木パルプである、前記請求
項のいずれか記載の方法。 - 【請求項７】 パルプが軟木パルプである、前記請求
項のいずれか記載の方法。 - 【請求項８】 約１０，０００未満の分子量の材料を
除去するためパルプと接触させる前に上澄を濃縮する、
前記請求項のいずれか記載の方法。 - 【請求項９】 寄託番号ＤＳＭ６０１３及び名称ＫＷ
３を有するサーモモノスポラフスカの新規株。 - 【請求項１０】 好適な炭素源の存在下請求項９記載
の株を増殖させ、そして得られた酵素系を単離すること
を含む、リグニン分解酵素の調製方法。 - 【請求項１１】 小麦ふすま、わら、大麦ふすま、木
材パルプ、キシラン、キシロース、ガラクトマンナン、
グルコマンナン、マンノース及びこれらの混合物からな
る群より選ばれる炭素源の存在下培養を行なう、請求項
１０記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB90184268 | 1990-08-22 | ||
| GB909018426A GB9018426D0 (en) | 1990-08-22 | 1990-08-22 | Improvements in or relating to novel compounds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04281089A true JPH04281089A (ja) | 1992-10-06 |
Family
ID=10681054
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3207955A Pending JPH04281089A (ja) | 1990-08-22 | 1991-08-20 | 熱安定性エンドキシラナーゼ |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5407827A (ja) |
| EP (1) | EP0473545B1 (ja) |
| JP (1) | JPH04281089A (ja) |
| AT (1) | ATE113094T1 (ja) |
| AU (1) | AU649703B2 (ja) |
| CA (1) | CA2049540A1 (ja) |
| DE (1) | DE69104675T2 (ja) |
| DK (1) | DK0473545T3 (ja) |
| ES (1) | ES2063482T3 (ja) |
| FI (1) | FI913930A (ja) |
| GB (1) | GB9018426D0 (ja) |
| NO (1) | NO913251L (ja) |
| ZA (1) | ZA916657B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2018204158A (ja) * | 2017-06-09 | 2018-12-27 | 王子ホールディングス株式会社 | リグノセルロース系原料からの溶解パルプの製造方法 |
Families Citing this family (40)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9018426D0 (en) * | 1990-08-22 | 1990-10-03 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to novel compounds |
| DK34892D0 (da) * | 1992-03-16 | 1992-03-16 | Novo Nordisk As | Nyt enzym |
| JP2807612B2 (ja) * | 1993-03-12 | 1998-10-08 | ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ | 新規キシラナーゼ、その製造法、該キシラナーゼによるパルプ処理方法及びキシロオリゴ糖の製造法 |
| EP0728197A1 (en) * | 1993-11-05 | 1996-08-28 | Cornell Research Foundation, Inc. | THERMOSTABLE XYLANASE FROM A $i(THERMOMONOSPORA FUSCA) GENE |
| BR9408182A (pt) * | 1993-12-28 | 1997-05-27 | Little Rapids Corp | Camada de filtro filtro máquina de produçao de papel por conformaçao processos para a fabricaçao de uma camada de filtro para a remoçao de contaminantes de um fluido de halogênios de contaminantes orgânicos de halogênios e cátions de metal dissolvidos da água contaminada e para destruiçao de bactérias em água contaminada |
| US5437992A (en) * | 1994-04-28 | 1995-08-01 | Genencor International, Inc. | Five thermostable xylanases from microtetraspora flexuosa for use in delignification and/or bleaching of pulp |
| US5935836A (en) * | 1994-07-29 | 1999-08-10 | Rohm Enzyme Finland Oy | Actinomadura xylanase sequences and methods of use |
| US6300114B1 (en) | 1994-07-29 | 2001-10-09 | Rohm Enzyme Finland Oy | Sequences of xylanase and xylanase expression vectors |
| US7816129B2 (en) | 1994-07-29 | 2010-10-19 | Ab Enzymes Gmbh | Production and secretion of proteins of bacterial origin in filamentous fungi |
| US5871730A (en) * | 1994-07-29 | 1999-02-16 | Universite De Sherbrooke | Thermostable xylanase DNA, protein and methods of use |
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