JPH04264089A - β−ラクタマーゼに対するプロドラッグ及びその使用 - Google Patents

β−ラクタマーゼに対するプロドラッグ及びその使用

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JPH04264089A
JPH04264089A JP3288962A JP28896291A JPH04264089A JP H04264089 A JPH04264089 A JP H04264089A JP 3288962 A JP3288962 A JP 3288962A JP 28896291 A JP28896291 A JP 28896291A JP H04264089 A JPH04264089 A JP H04264089A
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cytotoxic
prodrug
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drug
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JP3288962A
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John Kadow
ジョン　カドー
Takushi Kaneko
卓史 金子
Peter D Senter
ピーター　ディー　センター
Vivekanada M Vrudhula
ヴィヴェカナンダ　エム　ヴルドゥーラ
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Bristol Myers Squibb Co
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【技術分野】本発明は一般に新規プロドラッグ及びこれ
らのプロドラッグを、それらが活性細胞毒物質に転化さ
れる腫瘍細胞部位へ送達する方法に関する。より詳しく
は、本発明は腫瘍特異性抗体−β−ラクタマーゼ接合体
とともに投与されると腫瘍部位で活性細胞毒薬物に転化
されるセファロスポリンプロドラッグに関する。 【０００２】 【背景】標的化薬物送達システムはと細胞毒物質を直接
癌性細胞に送達する機構を提供する。これらの物質の全
身性投与がしばしば体内の正常細胞並びに排除しようと
する腫瘍細胞を殺すので腫瘍細胞に対する細胞毒物質の
選択的送達が望ましい。現在使用されている抗腫瘍薬物
送達システムは典型的には免疫接合体の形成に腫瘍特異
性抗体に接合した細胞毒物質を用いる。この免疫接合体
は腫瘍細胞に結合し、それにより細胞毒物質を腫瘍の部
位に「送達」する。これらの標的化システムに利用され
た免疫接合体には抗体−薬物接合体〔例えばボルドウィ
ン（Ｂｏｌｄｗｉｎ）ほか、ランセット（Ｌａｎｃｅｔ
）　、ｐｐ．６０３〜６０５、１９８６年３月１５日参
照〕及び抗体−毒素接合体〔例えばソープ（Ｔｈｏｒｐ
ｅ）　、「モノクローナル抗体１９８４：生物学及び臨
床応用（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
　’８４　：　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃｌｏ
ｎｉｃａｌ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）　」、オイン
シェラ（Ａ．　Ｏｉｎｃｈｅｒａ）ほか編、ｐｐ．　４
７５〜５０６、１９８５参照〕が含まれる。 【０００３】ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗
体の両方がこれらの免疫接合体中に利用された〔例えば
オーカワ（Ｏｈｋａｗａ）　ほか、カンサー・イムノロ
ジー・イムノセラピー（Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ
．　Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．）、２３：８１、１９８６
；ローランド（Ｒｏｗｌａｎｄ）ほか、カンサー・イム
ノロジー・イムノセラピー、２１：１８３、１９８６参
照〕。これらの免疫接合体中に使用された薬物にはダウ
ノマイシン〔例えばガレゴ（Ｇａｌｌｅｇｏ）ほか、イ
ンタナショナル・ジャーナル・オブ・カンサー（Ｉｎｔ
．　Ｊ．　Ｃａｎｃｅｒ）　、３３：７３７、１９８４
；アーノン（Ａｒｎｏｎ）ほか、イムノロジカル・レビ
ューズ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖ．）　、
６２：５、１９８２参照〕；メトトレキサート〔エンド
ー（Ｅｎｄｏ）　ほか、カンサー・リサーチ（Ｃａｎｃ
ｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ）、４７：１０７６、１９８７〕
、マイトマイシンＣ〔オーカワ（Ｏｈｋａｗａ）　ほか
、前掲〕、及びビンデシン〔ローランド（Ｒｏｗｌａｎ
ｄ）ほか、前掲〕が含まれる。 抗体−毒素接合体中に使用された毒素には細菌毒素例え
ばリシンが含まれる〔例えばムールテン（Ｍｏｏｌｔｅ
ｎ）ほか、イムノロジカル・レピューズ、６２：４７、
１９８２参照〕。 【０００４】多くの研究が治療目的に対する免疫接合体
の使用に向けられたけれども、これらの送達研究に含ま
れる若干の限界が明らかになった。〔例えばエンブレト
ン（Ｅｍｂｌｅｔｏｎ）　、バイオケミカル・ソサイエ
ティー・トランスアクションズ（Ｂｉｏｃｈｅｍ．　Ｓ
ｏｃｉｅｔｙ　Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ）、１４：３
４３、第６１５回会議ベルファスト、１９８６参照〕。 例えば、細胞の殺害を行なうために標的腫瘍細胞に送達
されることが必要な多量の薬物は、細胞の表面上の腫瘍
関連抗原の数及び所与抗体分子に結合できる薬物の数に
より課せられる限界のためにしばしば達成できない。こ
の限界がこれらの接合体中の一層強力な細胞毒物質例え
ば植物毒素の使用及び非常に高い薬物多重比を有するポ
リマー結合抗体−薬物接合体の開発をもたらした〔例え
ばソープ（Ｔｈｏｒｐｅ）　、前掲、ｐｐ．　４７５〜
５０６、及びボルドウィン（Ｂａｌｄｗｉｎ）ほか、モ
ノクローナル抗体及び癌療法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　
Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ　ａｎｄ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｔｈｅ
ｒａｐｙ）　、ｐｐ．　２１５〜２３１、アラン・Ｒ・
リス（Ａｌａｎ　Ｒ．　Ｌｉｓｓ，　Ｉｎｃ．）　、１
９８５参照〕。しかし、大薬物荷重比又は強力な毒素の
使用でも、多くの免疫接合体はなお最適でない細胞毒活
性を示し、すべての利用可能な抗原部位が飽和される用
量で完全な殺害を行なうことができない。 【０００５】免疫接合体の細胞毒活性がしばしば接合体
の抗体成分により仲介される腫瘍細胞中への取込みに依
存することもまた認められた〔例えばランバート（Ｊ．
　Ｍ．　Ｌａｍｂｅｒｔ）ほか、ジャーナル・オブ・バ
イオロジカル・ケミストリー（Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈ
ｅｍ．）　、２６０：１２０３５、１９８５参照〕。こ
の細胞内取込みは、薬物が細胞内作用部位を有する抗体
−薬物接合体を使用するとき又は抗体−毒素接合体を使
用するときに極めて重要である。しかし、非常に多くの
腫瘍関連抗原、従ってそれらの抗原に結合した抗体−薬
物又は抗体−毒素は細胞内に取込まれない。細胞内に取
込まれる接合体は、しばしば薬物又は毒素が分解される
細胞のリソソームへ運ばれる〔ビテッタ（Ｖｉｔｅｔｔ
ａ）ほか、サイエンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）、２３８：１
０９８、１９８７参照〕。従って、抗体−薬物又は抗体
−毒素接合体が優れた腫瘍結合特性を有していたとして
も、それにもかゝわらず接合体は細胞内のその作用部位
に達する能力がないために細胞毒利用性が限定される場
合が起り得る。 【０００６】さらに、腫瘍細胞集団がしばしば抗原発現
に関して不均一であることが十分立証されている〔例え
ばアルビノ（Ａｌｂｉｎｏ）　ほか、ジャーナル・オブ
・エクスペリメンタル・メデシン（Ｊ．　Ｅｘｐ．　Ｍ
ｅｄ．）　、１５４：１７６４、１９８１参照〕。さら
に、抗原陽性腫瘍細胞が抗原陰性後代を生じうることが
示された〔例えばイエー（Ｙｅｈ）ほか、ジャーナル・
オブ・イムノロジー（Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．）、１２
６：１３１２、１９８１参照〕。従って、腫瘍細胞の任
意の集団中に特定の免疫接合体が特異的である抗原をも
たない一定数の細胞が存在するであろう。 従って免疫接合体がこれらの細胞に結合してそれらの殺
作用を仲介することができないであろう。 【０００７】これらの欠点のために、現在使用されてい
る抗腫瘍薬物又は毒素伝達システムは、殊に生体内治療
に使用されたときその成功は限られていた。前記免疫接
合体のほかに、抗体仲介細胞毒性を増幅するために抗体
−酵素接合体が、ヨウ化物又はアルスフェナミンをそれ
らの毒性形態に転化する第２の非標的化酵素と組合せて
試験管内で研究された〔例えばパーカー（Ｐａｒｋｅｒ
）　ほか、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル
・アカデミー・オブ・サイエンシス・オブ・ジ・ユナイ
ナッド・ステート・オブ・アメリカ（Ｐｒｏｃ．　Ｎａ
ｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．ＵＳＡ）、７２：３３８
、１９７５；フィルポット（Ｐｈｉｌｐｏｔｔ）　ほか
、カンサー・リサーチ、３４：２１５９、１９７４参照
〕。 【０００８】これらの試験管内研究によれば、酵素、グ
ルコースオキシダーゼ、が抗体に結合され、ヨウ化物又
はアルスフェナミンをそれぞれ細胞毒性ヨウ素又はヒ素
化合物に転化するため非標的化ペルオキシダーゼ酵素と
組合せて使用された。従ってこの研究は、抗体によりグ
ルコースオキシダーゼを腫瘍細胞に対し標的化するだけ
でなく２つの他の非標的化事象の腫瘍部位における存在
を必要とする。これらの３物質がすべて生体内に同時に
腫瘍部位に存在する可能性は小さいと考えられる。 【０００９】カナダ特許第１，２１６，７９１　号には
基質からアンモニウムイオンを遊離できる酵素の抗体に
対する接合が開示されている。従ってアンモニウムイオ
ンが腫瘍部位に対して標的化された一定の免疫毒素の細
胞毒作用を増強するといわれる。欧州特許出願第８４３
０２２１８．７号には抗体を用いて非代謝性抗原を腫瘍
細胞に対して標的化する、疾患細胞集団例えば腫瘍を治
療する方法が開示されている。該抗原が腫瘍細胞の少く
とも１パーセント内で蓄積し、次いでそれが溶解され、
腫瘍部位に形成された偏在フィブロネクチン捕捉マトリ
ックス中へ抗原を遊離する。マトリックスに固定された
抗原に特異的であり、それに結合するヨウ素含有配位子
が投与される。細胞毒性ヨウ素がその部位で腫瘍細胞を
殺害する作用をする。 酵素を腫瘍部位に対して標的化する抗体−接合体の使用
及び酵素が細胞毒物質に転化できる非致死性基質の添加
もまた示唆されている（欧州出願第８４３０２２１８．
７号、ｐｐ．３４〜３５参照）。しかし、その出願中の
どこにもこの態様を実施する方法の開示がない。同様に
、ヘルストロム（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ）ほかは「制御薬
物送達（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖ
ｅｒｙ）　」（２版）、ロビンソンほか（Ｒｏｂｉｎｓ
ｏｎ　ａｎｄ　Ｌｅｅ）　編、ｐ．６３９、１９８７中
に「腫瘍に局在化された物質（例えば酵素）により活性
化されるまで非毒性である薬物は他の研究であることが
できる−−−　」ことを示唆している。 【００１０】そっくりそのまゝ参照される米国特許第４
，９７５，２７８　号は抗体−酵素接合体及びプロドラ
ッグの組合せ使用により細胞毒物質を腫瘍細胞に送達す
る方法を提供している。この発明によれば、わずか又は
非細胞毒性プロドラッグを活性細胞毒薬物に転化できる
酵素が腫瘍特異性抗体に接合される。この抗体−酵素接
合体が腫瘍をもつ哺乳動物宿主に投与され、抗体特異性
により抗体が特異性である腫瘍抗原をもつ腫瘍細胞の表
面に結合する。次いでプロドラッグが宿主に投与され、
腫瘍部位で抗体結合酵素の作用により一層活性な細胞毒
薬物に転化される。 【００１１】ナイトロジェンマスタードは長い間細胞毒
物質として認められてきた〔例えばストック（Ｓｔｏｅ
ｋ）、「薬剤設計（Ｄｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ）」、アリ
ーンズ（Ｅ．　Ｊ．　Ａｒｉｅｎｓ）　編、Ｖｏｌ　Ｉ
Ｉ、ｐｐ．　５３２〜５７１、アカデミック・プレス（
ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）　
、１９７１参照〕、ベン（Ｂｅｎｎ）　ほか、ジャーナ
ル・オブ・ザ・ケミカル・ソサイエティー（Ｊ．　Ｃｈ
ｅｍ．　Ｓｏｃ．）、２３６５（１９６１）は種々の他
の単位に対するナイトロジェンマスタードの結合に潜在
的に重要である種々の官能基との反応に有用であるＮ，
Ｎ−ジ−２′−クロロエチル−ｐ−フェニレンジアミン
からウレタン類及び尿素類を含む種々のアミドを製造し
た。電子吸引性ウレタン基を結合させると高毒性ナイト
ロジェンマスタードが失活する。腫瘍部位におけるナイ
トロジェンマスタードの再活性化は、ウレタンがエステ
ル又はペプチド結合の分裂により分解されると生ずるこ
とができる。 【００１２】モバシェリー（Ｍｏｂａｓｈｅｒｙ）ほか
〔ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサ
イエティー（Ｊ．　Ａｍｅｒ．　Ｃｈｅｍ．　Ｓｏｃ．
）、１０８：１６８５（１９８６）〕はセファロスポリ
ン−トキソフォア誘導体を加水分解して細菌内にトキソ
フォアを遊離するβ−ラクタム抗生物質耐性細菌中に存
在するβ−ラクタマーゼの使用を教示している。 【００１３】モバシェリー（Ｍｏｂａｓｈｅｒｙ）ほか
（ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、
２６１：７８７９；１９８６）はセファロスポリンのセ
フェム核にＣ１０エステルにより連結した抗生物質ペプ
チドβＣｌ−ＬＡ１ａ−βＣｌ−ＬＡ１ａからなる抗癌
性物質を合成した。細菌中に存在するβ−ラクタマーゼ
によるβ−ラクタム環の加水分解開裂がヘテロ原子結合
Ｃ１０置換基を遊離する。 【００１４】セファロスポリンの化学の一般的論議はア
ブラハム（Ａｂｒａｈａｍ）、クォータリー・レビュー
ズ、ケミカル・ソサイエティー（Ｑｕａｒｔｅｒｌｙ　
ｒｅｖｉｅｗｓ　−　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｏｃｉｅｔ
ｙ）　、２１：２３１、１９６７及びエブラハム（Ａｂ
ｒａｈａｍ）ほか、「セファロスポリン類及びペニシリ
ン類：化学及び生物学（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｎｓ
　ａｎｄ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎｓ：Ｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、フライン（Ｅ．　Ｈ
．　Ｆｌｙｎｎ）編、アカデミック・プレス（Ａｃａｄ
ｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎ．　Ｙ．）、１９７２、ｐ
ｐ１〜２６中に記載されている。 【００１５】米国特許第３，４８４，４３７　号は脱ア
シル化セファロスポリン塩とイソシアナートとのカルバ
メートを形成する反応により形成されたセファロスポリ
ン酸の誘導体を教示している。米国特許第３，３５５，
４５２号には７−Ｎ−アシル基がカルボン酸基であり、
ＣＯ基が炭素原子に結合する７−アミノセファロスポリ
ン酸のＯ−デスアセチル−Ｏ−カルバモイル−７−アシ
ルアミノ−セファロスポリン酸誘導体が教示されている
。 【００１６】 【発明の開示】本発明はβ−ラクタマーゼー抗体接合体
を用いて腫瘍部位で抗腫瘍物質に転化できる新規セファ
ロスポリン関連プロドラッグを見いだしたことに基づく
。抗体は標的された特定腫瘍型の表面上に存在する腫瘍
抗原に向かわされる。本発明は一般式（Ｉ）【００１７
】 【化９】 【００１８】〔式中、Ｑは水素、セファロスポリン合成
において普通に使用されるアミン保護基、又は既知７−
アシルアミノセファロスポリン抗生物質のアシル基であ
り；Ｌは直接結合又は−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ　−　であり
；Ｒはセファロスポリンプロドラッグから遊離されたと
きに腫瘍細胞に細胞毒効果を及ぼすことができる物質で
あり；ｎは２、３又は４であり；ｍは０又は１であり、
しかしＬが直接結合であるときにはｍは１である）のセ
ファロスポリンプロドラッグ、又はその薬学的に許容で
きる塩を提供する。 【００１９】本発明の目的に対し、置換基Ｑの性質はセ
ファロスポリン部分が細胞毒薬物の担体として働き、細
胞毒薬物の治療効果に寄与しないので臨界的ではない。 従って、Ｑは例えば水素、セファロスポリン化学におい
て普通に使用される保護基、又は既知セファロスポリン
抗生物質の置換基であることができる。後者の例にはフ
ェニルアセチル、２−チエニルアセチル、α−ヒドロキ
シフェニルアセチル、フェニルグリシル、ｐ−ヒドロキ
シフェニルグリシル及び（２−アミノ−４−チアゾリル
）−（メトキシイミノ）アセチルが含まれ、しかしそれ
らに限定されない。 【００２０】細胞毒化合物はセファロスポリンプロドラ
ッグを提供するために化学修飾可能な少くとも１つの官
能基をもつものである。一般にそのような官能基はアミ
ノ、カルボキシル及びヒドロキシル基から選ばれ、従っ
て細胞毒物質とセファロスポリン成分との間の結合はカ
ルバメート、アミド、エステル及びカーボネート型であ
る。 【００２１】１観点において、本発明は、式（Ｉ）の化
合物の１つのサブクラスとして細胞毒物質がカルバメー
ト又はアミド基によりセファロスポリン核に連結する一
般式ＩＩ 【００２２】 【化１０】 【００２３】（式中、Ｑ、Ｌ及びｍは式（Ｉ）において
規定したとおりであり、ＮＲａ　は窒素含有細胞毒薬物
である）のセファロスポリンプロドラッグ又はその薬学
的に許容できる塩を提供する。他の観点において、本発
明は式（ＩＩａ） 【００２４】 【化１１】 【００２５】〔式中、Ｑは式（Ｉ）において規定したと
おりであり、Ｒｄは水素又は（Ｃ１　〜Ｃ３　）アルキ
ルである〕を有するセファロスポリン−マイトマイシン
プロドラッグを提供する。主題発明の他の態様は、腫瘍
細胞の表面上の抗原と反応性の抗体を含む少くとも１種
の抗体−β−ラクタマーゼ接合体の薬学的に有効な量を
投与することにより細胞毒物質を腫瘍細胞に送達する方
法を指向する。セファロスポリンプロドラッグが細胞毒
に結合したセファロスポリンを含むセファロスポリンプ
ロドラッグの薬学的に有効な量もまた投与される。 【００２６】他の態様において、本発明は腫瘍関連抗原
と反応性の抗体の抗原結合領域を少くともβ−ラクタマ
ーゼの官能的に活性な部位に結合させ、セファロスポリ
ンプロドラッグの薬学的に有効な量を投与される細胞毒
物質を腫瘍細胞に送達する方法を指向する。他の態様に
おいて、主題発明は少くとも１種の抗体−β−ラクタマ
ーゼ接合体の薬学的に有効な量及び少くとも１種のセフ
ァロスポリンプロドラッグの薬学的に有効な量を哺乳動
物に投与する段階を含む哺乳動物の腫瘍を治療する方法
を指向する。 【００２７】本発明のこれら及び他の態様はこの開示を
考慮すると当業者に容易に思い浮かぶであろう。 【００２８】 【詳細な説明】 本発明の実施は、特記しなければ合成有機化学、タンパ
ク質化学、分子生物学、微生物学及び組換えＤＮＡ技術
を用い、それらは該部門の技術内にある。そのような技
術は文献中に十分に説明されている。 例えば、スコープス（Ｓｃｏｐｅｓ，　Ｒ．Ｋ．）、「
タンパク質精製の原理及び実施（Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｐｕ
ｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ
　Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ）」、２版、〔スプリンガー・フ
ェルラーグ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ）、１９
８７〕、「酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｉｎ
　Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）」、〔コロビックほか（Ｓ．
　Ｃｏｌｏｗｉｃｋ　ａｎｄ　Ｎ．　Ｋａｐｌａｎ）編
、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓ
ｓ，　Ｉｎｃ．）　、サムブロック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ
）　ほか、「分子クローニング：実験室マニュアル（Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　：　Ａ　Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ）」、２版、コールド・ス
プリング・ハーバー・プレス（Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ
　Ｈａｒｂｏｒ　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎ．　Ｙ）　、１９８
９、「実験免疫学ハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏ
ｆ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ
）」、Ｖｏｌ．　Ｉ〜ＩＶ〔ウェアほか（Ｄ．　Ｍ．　
Ｗｅｉｒ　ａｎｄ　Ｃ．　Ｃ．　Ｂｌｃｋｗｅｌｌ）編
、１９８６、ブラックウエル・サイエンティフィック・
パブリケーションズ（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ　Ｓｃｉｅｎ
ｔｉｆｉｃ　Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）〕；ハウス（
Ｈｏｕｓｅ）、「近代の合成反応（Ｍｏｄｅｒｎ　Ｓｙ
ｎｔｈｅｔｉｃＲｅａｃｔｉｏｎｓ）　」、２版、ベン
ジャミン／クミングス（Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉ
ｎｇｓ，　Ｍｅｎｌｏ　Ｐａｒｋ，　Ｃａｌ．）　、１
９７２参照。 【００２９】前記又は後記の特許、特許出願及び刊行物
はすべてそっくりそのまゝ参照される。 Ａ．定義 本発明の定義中に次の用語が使用され、下記のように定
義されるものとする。この出願中に使用される「プロド
ラッグ」という語は親薬物に比べて細胞に対する細胞毒
性が少なく、より活性な親形態に酵素的に活性化又は転
化できる薬学的に活性な物質の前駆物質又は誘導体形態
を示す。例えばウィルマン（Ｗｉｌｍａｎ）　、バイオ
ケミカル・ソサイエティー・トランスアクションズ、１
４：３７５（第６１５回会議、ドルヘァスト、１９８６
）；ステラ（Ｓｔｅｌｌａ）ほか、「標的化薬物送達（
Ｄｉｒｅｃｔｅｄ　Ｄｒｕｇ　Ｄｅｌｉｖｅｒｇ）　」
、ボルカート（Ｂｏｒｃｈａｒｄｔ）ほか編、２４７〜
２６７〔ヒューマナ・プレス（Ｈｕｍａｎａ　Ｐｒｅｓ
ｓ）　、１９８５〕参照。「親薬物」及び「細胞毒物質
」という語は同義に使用される。 【００３０】用いた「セファロスポリンプロドラッグ」
という語は前記親化合物の後記セファロスポリンに対す
る結合により生じたプロドラッグを示す。用いた「β−
ラクタマーゼ」という語はβ−ラクタム環のＣＯ−Ｎ結
合を加水分解できる酵素を示す。β−ラクタマーゼはブ
ッシュ（Ｂｕｓｈ）　、アンチミクロバイアル・エージ
ェンツ・アンド・ケロセラピー（Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ
ｉａｌ　Ａｇｅｎｔｓ　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．）、３３
：２５９、１９８９中に総説されている。 【００３１】用いた「ナイトロジェンマスタード」とい
う語は一般構造　ＲＮ（ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２（式中、
Ｒはさらに化学修飾可能な官能基例えばアミノ又はカル
ボキシル基で置換されたアルキル、アリール又はアラル
キル基であることができる）の化合物を示す。１個以上
の窒素原子をもつナイトロジェンマスタードもまた含ま
れ、両クロロエチル基は同一窒素原子に結合される必要
がない。若干のナイトロジェンマスタード中で塩素原子
は他のハロゲン原子、殊に臭素、で置換されることがで
きる。例えばストック（Ｓｔｏｃｋ）、「薬物設計（Ｄ
ｒｕｇ　Ｄｅｓｉｇｎ）」、アリーンズ（Ｅ．　Ｊ．　
Ａｒｉｅｎｓ）　編、Ｖｏｌ．ＩＩ、　ｐｐ．５３２〜
５７１、アカデミック・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ
ｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）　、１９７１参照。 【００３２】用いた「セファロスポリン」という語は天
然又は合成的に生ずるセファロスポリンＣの特有β−ラ
クタムジヒドロチアジン環をもつ７−アミノセファロス
ポリン酸の誘導体を示す。これらの誘導体の例及びセフ
ァロスポリンの化学の総説はアブラハム（Ａｂｒａｈａ
ｍ）、クオータリー・レビューズ・ケミカル・ソサイエ
ティー、２１：２３１、１９６７中に与えられている。 「セフェム」という語がセファロスポリンを示すために
ときどき使用される。セファロスポリンＣの構造は次に
示される： 【００３３】 【化１２】 【００３４】用いた「セファロスポリンマスタード」と
いう語はセファロスポリンが前記ナイトロジェンマスタ
ードで誘導体化された前記セファロスポリンを示す。用
いた「細胞毒」という語は、殊にコロニー形成阻止検定
又は　３Ｈ−チミジン取込み検定により測定して細胞増
殖遅延又は細胞死を生ずる性質を示す〔例えばヘルスト
ロム（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ）ほか、「細胞仲介免疫にお
ける試験管内法（Ｉｎ　ＶｉｔｒｏＭｅｔｈｏｄｓ　ｉ
ｎ　Ｃｅｌｌ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ　Ｉｍｍｕｎｉｔｙ）
　」、ブルームほか（Ｂｌｏｏｍａｎｄ　Ｇｌａｄｅ）
編、１９７１及びこの中の実施例参照〕。 Ｂ．一般的方法 本発明は腫瘍細胞に細胞毒物質を送達する新規方法に関
し、癌例えば癌腫及び黒色腫並びに他の腫瘍の治療にお
いて腫瘍細胞の高い選択的殺害を与える。 【００３５】本発明の方法によれば、抗体−酵素接合体
が腫瘍をもつ哺乳動物宿主に投与される。この抗体−酵
素接合体は、親薬物より細胞に対する細胞毒性の低いプ
ロドラッグをより活性な親薬物に転化できるβ−ラクタ
マーゼに結合された腫瘍選択性抗体からなる。宿主中へ
導入されると、腫瘍細胞上に見いだされる抗原と反応性
である接合体の抗体成分が接合体を腫瘍の部位に向かわ
せ、腫瘍細胞に結合する。従って、抗体は酵素を腫瘍の
部位へ送達する。β−ラクタマーゼに対して基質である
プロドラッグもまた宿主中へ導入され、腫瘍部位で酵素
により活性細胞毒薬物に転化される。従って薬物が細胞
外で活性化され、その部位における腫瘍細胞、すなわち
接合体の抗体が特異性であり抗体が結合した特定腫瘍抗
原をもつ細胞、並びにその抗原に対し陰性であるがしか
し、それにもかゝわらず腫瘍の部位に存在する細胞のす
べての中へ拡散することができる。従って本発明の方法
は、腫瘍抗原の異質性及び普通の免疫接合体薬物送達技
術に関連する抗原／接合体の細胞内取込みが必要な現在
の問題を克服する。 【００３６】さらに本方法が薬物を直接抗体に結合させ
る必要がなく、それにより送達できる薬物の量が限定さ
れないので、腫瘍部位における薬物効力のありふれた問
題が生じない。事実本方法は、接合体の抗体に結合した
酵素が多くの基質代謝回転を行なうことができ、繰返し
てプロドラッグを活性薬物に転化するので、腫瘍部位に
存在する活性薬物分子の数を増幅する。さらにこの方法
は他の組織に対する遊離と対照して腫瘍部位に対し特異
的に活性薬物を遊離できる。これは腫瘍細胞の抗体−酵
素接合体によるコーティングのために腫瘍部位における
酵素の濃度が他の組織におけるその濃度より高いためで
ある。 【００３７】本発明の免疫接合体の抗体には腫瘍関連抗
原に特異的に結合する抗体が含まれる。そのような抗体
の例には癌腫、黒色腫、リンパ腫並びに骨及び軟組織肉
腫、並びに他の腫瘍上に見いだされる抗原に特異的に結
合するものが含まれ、しかしそれらに限定されない。長
時間細胞表面に結合して留まるか又は非常に徐々に細胞
内に取込まれる抗体が好ましい。これらの抗体はポリク
ローナル又は、好ましくはモノクローナルであることが
でき、完全抗体分子あるいは抗体の活性結合領域を含む
フラグメント例えば　Ｆａｂ又はＦ（ａｂ′）２である
ことができ、該部門においてよく確立された技術を用い
て生成させることができる。例えば、デベガ（ＤｅＷｅ
ｇｅｒ）ほか、イムノロジカル・レビューズ、６２：２
９〜４５、１９８２（生成され、接合体に使用された腫
瘍特異性ポリクローナル抗体）；イエー（Ｙｅｈ）ほか
、プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデ
ミー・オブ・サンエンシス・オブ・ジ・ユナィテッド・
ステーツ・オブ・アメリカ、７６：２９２７、１９７９
；ブラウン（Ｂｔｏｗｎ）ほか、ジャーナル・オブ・イ
ムノロジー、１２７：５３９、１９８１（生成された腫
瘍特異性モノクローナル抗体）；及びマーク（Ｍａｃｈ
）ほか、「癌の検出及び治療のためのモノクローナル抗
体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　
ｆｏｒ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　
Ｔｈｅｒａｐｙ）」、ボルドウィン（Ｒ．　Ｗ．　Ｂａ
ｌｄｗｉｎ）ほか編、ｐｐ．　５３〜６４、アカデミッ
ク・プレス（Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ）　、１９
８５（生成された腫瘍細胞の位置決定に使用された抗体
フラグメント）参照。さらに、モノクローナル抗体が使
用されるならば、抗体はマウス又はヒト起源あるいはキ
メラ抗体であることができる〔例えばオイ（Ｏｉ）　、
バイオテクニクス（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）、４
：２１４、１９８６参照〕。 【００３８】腫瘍部位に対するβ−ラクタマーゼの送達
に使用できる抗体の例には、Ｌ６、ヒト肺癌細胞上の糖
タンパク質抗原に結合する　ＩｇＧ２ａモノクローナル
抗体（ハイブリドーマ寄託Ｎｏ．　ＡＴＣＣ　ＨＢ　８
６７７）〔ヘルストロム（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ）ほか、
プロシーディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミ
ー・オブ・サンエンシス・オブ・ジ・ユナィテッド・ス
テーツ・オブ・アメリカ、８３：７０５９、１９８６〕
；９６．５、ｐ９７（黒色腫関連抗原）に特異的である
　ＩｇＧ２ａモノクローナル抗体〔ブラウン（Ｂｒｏｗ
ｎ）ほか、ジャーナル・オブ・イムノロジー、１２７：
５３９、１９８１〕；１Ｆ５、正常及び新生物Ｂ細胞上
のＣＤ−２０抗原に特異的である　ＩｇＧ２ａモノクロ
ーナル抗体（ハイブリドーマ寄託Ｎｏ．ＡＴＣＣ　ＨＢ
　９６４５）〔クラーク（Ｃｌａｒｋ）ほか、プロシー
ディングズ・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ
・サイエンシス・オブ・ジ・ユナィテッド・ステーツ・
オブ・アメリカ、８２：１７６６、１９８５〕が含まれ
、しかしそれらに限定されない。 【００３９】他の方策はプロドラッグもまた細胞内に取
込まれることができ、又は十分な量の抗体がまた細胞の
表面上に残るならば、細胞内に取込まれる抗体を使用す
ることである。そのような抗体の例はカンサー・リサー
チ、５６：２１８３（１９９０）中に見いだすことがで
きる。本発明の免疫接合体の酵素成分にはβ−ラクタム
のＣＯ−Ｎ結合を加水分解できる酵素が含まれる。これ
らの酵素の若干は市販され、例えばＥ．コリ（Ｅ．　ｃ
ｏｌｉ）又はＢ．セレウス（Ｂ．　ｃｅｒｅｕｓ）β−
ラクタマーゼである。これら及び他のβ−ラクタマーゼ
は該部門においてよく知られた組換えＤＮＡ技術を用い
てクローン化し、発現させることができる。 【００４０】本発明のβ−ラクタマーゼは該部門におい
てよく知られた技術、例えばヘテロ二官能架橋剤ＳＰＤ
Ｐ〔Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ
）プロピオナート〕又はＳＭＣＣ〔スクシンイミジル４
−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カル
ボキシラート〕の使用により抗体に共有的に結合させる
ことができる〔例えばソープ（Ｔｈｏｒｐｅ）　ほか、
イムノロジカル・レビューズ、６２：１１９、１９８２
；ランバート（Ｌａｎｂｅｒｔ）ほか、前掲、ｐ．１２
０３８；ローランド（Ｒｏｗｌａｎｄ）、前掲、ｐｐ．
　１８３〜１８４；ガレゴ（Ｇａｌｌｅｇｏ）ほか、前
掲、ｐｐ．　７３７〜７３８参照〕。あるいは少くとも
β−ラクタマーゼの官能的に活性な部分に結合した抗体
の少くとも抗原結合領域を含む融合タンパク質を該部門
においてよく知られた組換えＤＮＡ技術を用いて構築す
ることができる〔例えばノイバーガー（Ｎｅｕｂｅｒｇ
ｅｒ）ほか、ネーチャー（Ｎａｔｕｒｅ）　、３１２：
６０４、１９８４参照〕。これらの融合タンパク質は前
記抗体−酵素接合体と実質的に同様に作用する。 【００４１】本発明のプロドラッグはセファロスポリン
又はセファロスポリン誘導体に結合した抗腫瘍物質を含
む。抗腫瘍物質はβ−ラクタマーゼで活性化されるか又
はプロドラッグの開裂で一層活性な形態に転化される。 好ましい態様において抗腫瘍物質は前記のナイトロジエ
ェンマスタードある。代表的なナイトロジェンマスター
ドが次に示される： 【００４２】 【化１３】 【００４３】他の好ましい抗腫瘍物質には、一般式【０
０４４】 【化１４】 【００４５】を有するアドリアマイシン、及び一般式【
００４６】 【化１５】 【００４７】を有するマイトマイシンＣが含まれる。本
発明のプロドラッグはこれらの化合物に限定されず、セ
ファロスポリン接合体中に使用するためのプロドラッグ
形態に誘導体化できる他の抗腫瘍物質を含むことができ
る。そのような抗腫瘍物質にはエトポシド、テニポシド
、ダウノマイシン、カルミノマイシン、アミノプテリン
、ダクチノマイシン、シス−プラチナム及びシス、−プ
ラチナム類似体、プレオマイシン、エスペラマンシン（
米国特許第４，６７５，１８７　号参照）、並びに５−
フルオロウラシルが含まれる。 【００４８】本発明の１つの好ましい態様において、ア
ンスラサイクリン−セファロスポリンプロドラッグがア
ンスラサイクリンと、カルボキシル保護した３−〔（カ
ルボニルオキシ）メチル〕セフェム例えば３−〔〔（ｐ
−ニトロフェノキシ）カルボニルオキシ〕メチル〕セフ
ェム及び３−〔〔（１，２，２，２−テトラクロロエト
キシ）カルボニルオキシ〕メチル〕セフェムのジフェニ
ルメチルエステルとの反応により合成される。生ずるプ
ロドラッグは前者のアミノ基によりカルバメート結合を
通してセファロスポリンに結合したアンスラサイクリン
を含む。 【００４９】本発明の他の好ましい態様において、セフ
ァロスポリンマスタードが３−ヒドロキシメチルセファ
ロスポリン塩とイソシアナートとの反応により、米国特
許第３，３５５，４５２　号及び第３，４８４，４３７
　号、並びにベルギー特許第７４１，３８１　号中に記
載されたように合成され、それらの特許がそっくり参照
される。そのような反応はまた実施例中に詳細に記載さ
れる。 【００５０】より一般的には、本発明は一般式（Ｉ）【
００５１】 【化１６】 【００５２】（式中、Ｑは水素、セファロスポリン合成
において普通に使用されるアミン保護基、又は既知７−
アシルアミノセファロスポリン抗生物質のアシル基であ
り；Ｌは直接結合又は−Ｓ−（ＣＨ２）ｎ　−　であり
；Ｒはセファロスポリン−プロドラッグから遊離される
と腫瘍細胞に細胞毒効果を及ぼすことができる物質であ
り；ｎは２、３又は４であり；ｍは０又は１であるが、
しかしＬが直接結合であるときにはｍは１である）のセ
ファロスポリンプロドラッグ、又はその薬学的に許容で
きる塩を提供する。 【００５３】本発明の目的に対して置換基Ｑの性質はセ
ファロスポリン部分が細胞毒薬物の担体として作用し、
細胞毒薬物の治療効果に寄与しないので臨界的ではない
。従って、Ｑは例えば水素、セファロスポリン化学にお
いて普通に使用される保護基、又は既知セファロスポリ
ン抗生物質の置換基であることができる。後者の例には
フェニルアセチル、２−チエニルアセチル、α−ヒドロ
キシフェニルアセチル、フェニルグリシル、ｐ−ヒドロ
キシフェニルグリシル及び（２−アミノ−４−チアゾリ
ル）−（メトキシイミノ）アセチルが含まれ、しかしそ
れらに限定されない。 【００５４】セファロスポリン合成において普通に使用
される種類の「アミノ保護基」には低級アルカノイル又
は置換低級アルカノイル例えばホルミル、アセチル、ク
ロロアセチル及びトリフルオロアセチル；アロイル又は
置換アロイル例えばベンゾイル、４−メトキシベンゾイ
ル及び４−ニトロベンゾイル；アラルキル、置換アラル
キル、アラルキリデン又は置換アラルキリデン例えばベ
ンジル、ジフェニルメチル、トリチル、ニトロベンジル
、メトキシベンジル及びベンジリデン；ハロゲン化アル
キル例えばトリクロロメチル、トリクロロエチル及びト
リフルオロメチル；アルコキシカルボニル又は置換アル
コキシカルボニル例えばメトキシカルボニル、エトキシ
カルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、シクロヘキシル
オキシカルボニル及びトリクロロエトキシカルボニル；
アラルコキシカルボニル又は置換アラルコキシカルボニ
ル例えばベンジルオキシカルボニル、メトキシベンジル
オキシカルボニル及びニトロベンジルオキシカルボニル
；不置換又は置換トリアルキルシリルオキシカルボニル
又はトリアリルシリルオキシカルボニル；及びトリアル
キルシリル又はトリアリールシリル例えばトリメチルシ
リル及びｔ−ブチルジメチルシリルの基が含まれ、しか
しそれらに限定されない。 【００５５】「既知７−アシルアミノセファロスポリン
抗生物質のアルル基」は既知セファロスポリン抗生物質
の７−アミノ基上の置換基を示し、式　Ｒ−Ｃ（Ｏ）−
により表わすことができる。Ｒの例には、 （ａ）基 【００５６】 【化１７】 【００５７】（式中、Ｇは置換又は不置換アリール、複
素環式又はシクロヘキサジエニル基、例えばフェニル、
チエニル、チアゾリル、チアジアゾリル、イミダゾリル
、ピリジル、テトラゾリル、１，４−シクロヘキサジエ
ニル及びフリル、であることができ、基に対する置換基
はハロゲン、ヒドロキシ、アミノ、アルコキシ、アルキ
ルアミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルオキシ、カ
ルボキシ、ニトロ、シアノ及びアルコキシカルボニルか
ら選ばれる１〜３個の同一か又は異なる基であることが
でき；Ｇ′は水素、ヒドロキシ、アミノ、モノアルキル
アミノ、ジアルキルアミノ、アルカノイルアミノ、アル
カノイルオキシ、カルボキシ及びスルホであることかで
きる）； （ｂ）基 【００５８】 【化１８】 【００５９】〔式中、Ｇは前記と同様の意味を有し、Ｙ
は水素、（Ｃ１　〜Ｃ６　）アルキル又は（Ｃ１　〜Ｃ
６　）アルカノイルである〕； （ｃ）基　　Ｇ−Ｂ−ＣＨ２　−（式中Ｇは前記と同様
の意味を有し、Ｂは酸素又は硫黄である）；及び（ｄ）
基 【００６０】 【化１９】 【００６１】（式中、Ｇ及びＢは前記と同様の意味を有
し、ｍは０又は１である）が含まれ、しかしそれらに限
定されない。 「既知７−アシルアミノセファロスポリン抗生物質のア
シル基」の若干の特定例には２−アミノ−２−フェニル
アセチル、２−アミノ−２−（４−ヒドロキシ）フェニ
ルアセチル、２−チエニルアセチル、フェニルアセチル
、２−ヒドロキシ−２−フェニルアセチル、２−アセト
キシ−２−フェニルアセチル、１−テトラゾリルアセチ
ル、〔（２−アミノ−４−チアゾリル）（メトキシイミ
ノ）〕アセチル、グルタロイルフェノキシアセチル及び
〔（２−フラニル）（メトキシイミノ）〕アセチルが含
まれる。細胞毒化合物は、セファロスポリンプロドラッ
グを生ずるような化学修飾可能な、少くとも１個の官能
基を有する化合物である。普通、そのような官能基は細
胞毒薬物間に存在する結合基のようなものでアミノ基、
カルボキシル基及びヒドロキシ基から選ばれ、かつセフ
ァロスポリン成分はカルバメート、アミド、エステル及
びカーボネート型である。 【００６２】本発明のセファロスポリン−細胞毒プロド
ラッグを製造する一般的方法は、初めに必要であればセ
ファロスポリンあるいは細胞毒薬物又はその前駆物質の
反応させない反応性基を保護すること；セファロスポリ
ンあるいは細胞毒薬物又はその前駆物質上の脱離基を細
胞毒薬物又はセファロスポリン上の求核基で置換するこ
と；又は細胞毒薬物のイソシアナート前駆物質に対する
３−ヒドロキシメチルセファロスポリンの付加；最後に
保護基を除去することを含む。反応させない反応性基は
例えばセファロスポリンのカルボン酸部分又はメルファ
ランのアミノ基である。保護基化学は該部門においてよ
く知られ、テキストブック例えば「有機合成における保
護基（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎＯｒ
ｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）　」、２版、グリー
ンほか（Ｇｒｅｅｎｅ　ａｎｄ　Ｗｕｔｓ）〔ジョン・
ワィリー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ　Ｗｉｋｅｙ　＆
　Ｓｏｎｓ，　Ｉｎｃ．）、１９９１〕中に示されてい
る。細胞毒物質の前駆物質は例えばマイトマイシンＡ又
はＮ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−４−イソシアナ
トベンゼンアミンであり、それらは適当なセファロスポ
リンと反応すると、β−ラクタマーゼによる加水分解で
それぞれマイトマイシンＣ又はＮ，Ｎ−ビス（２−クロ
ロエチル）フェニレンジアミンを遊離するセファロスポ
リン−細胞毒プロドラッグを与える。脱離基は例えばハ
ロゲン原子、求核基で置換できるエステル活性化基例え
ば４−ニトロフェニル又は１，２，２，２−テトラクロ
ロエチルである。 【００６３】１観点において、本発明は式（Ｉ）の化合
物の１つのサブクラスとして、細胞毒物質がカルバメー
ト又はアミド基によりセファロスポリン核に連結された
一般式（ＩＩ） 【００６４】 【化２０】 【００６５】（式中、Ｑ、Ｌ及びｍは式（Ｉ）において
規定したとおりであり；ＮＲａ　は窒素含有細胞毒薬物
である）のセファロスポリンプロドラッグ、又はその薬
学的に許容できる塩を提供する。Ｌが直接結合である式
（ＩＩ）の化合物は図式Ｉ中に示される反応列により製
造できる。従って、３−ヒドロキシメチルセファロスポ
リン（ＩＩＩ　）を、好ましくはアルカリ金属塩形態例
えばナトリウム又はカリウム塩で、非プロトン性溶媒中
、第三級アミン塩基の存在下に細胞毒物質のイソシアナ
ート誘導体と反応させると式（Ｖ）の化合物が得られる
。あるいは式（ＩＶ）のカルボキシル保護セファロスポ
リンカーボネートを窒素含有細胞毒物質で処理し、次い
でカルボキシル基を立つ保護すると所望のセファロスポ
リンプロドラッグ（Ｖ）が得られる。セファロスポリン
カーボネート（ＩＶ）はカルボキシル保護３−ヒドロキ
シメチルセファロスポリンからクロロギ酸エステル例え
ばクロロギ酸−４−ニトロフェニル及びクロロギ酸１，
２，２，２−テトラクロロエチルとの反応で製造するこ
とができる。図式中Ｉ中、Ｑ及びＮＲａ　は式（Ｉ）及
び（ＩＩ）において規定したと同様の意味を有し、Ｒ１
　はエステル活性化基、好ましくは４−ニトロフェニル
又は１，２，２，２−テトラクロロエチルであり；Ｒ２
　はカルボキシル保護基例えばベンジル、ｔ−ブチル、
ジフェニルメチル、アリルなどである。カルボキシル保
護基は普通の方法、例えば酸触媒加水分解及び還元パラ
ジウム触媒作用、を用いて除去することができる。 【００６６】 【化２１】 【００６７】Ｌが−Ｓ−（ＣＨ２）　−であり、ｍが１
である式（ＩＩ）の化合物は図式Ｉの経路（ｂ）に類似
する方法により製造できる。セファロスポリン反応物（
ＶＩ）の調製及びその後の式（ＶＩＩ）のセファロスポ
リンプロドラッグを生成させる合成は図式ＩＩ中に示さ
れる。図式ＩＩ中、Ｑ、ＮＲ、ｎ、Ｒ１　及びＲ２　は
すべて前記と同様の意味を有し；Ｘはハロゲン原子例え
ばクロロ、ブロモ又はヨードである。式（ＶＩ）　の出
発セファロスポリンは式　（ＶＩＩＩ）　のカルボキシ
ル保護３−ハロメチルセファロスポリンをメルカプトア
ルカノールと反応させ、生じた３−ヒドロキシアルキル
チオメチルセファロスポリンを第三級アミン塩基の存在
下にクロロギ酸エステル　ＣｌＣＯ２Ｒ１例えばクロロ
ギ酸４−ニトロフェニルで処理して式（ＶＩ）の化合物
を得ることにより製造できる。 【００６８】 【化２２】 【００６９】Ｌが−Ｓ−（ＣＨ２）　ｎ　−であり、ｍ
が０である式（ＩＩ）の化合物は図式（ＩＩＩ　）中に
示される方法により製造できる。 【００７０】 【化２３】 【００７１】図式ＩＩＩ　中、Ｑ、ＮＲａ　、ｎ、Ｘ、
Ｒ１　及びＲ２　は前記と同様の意味を有する。従って
、窒素含有細胞毒物質を３−チオアルキルカルボキシラ
ート置換セファロスポリン誘導体（ＩＸ）　と反応させ
ると式（ＸＩ）　の生ずるカルバメートプロドラッグが
形成される。式（ＩＸ）　のセファロスポリン誘導体は
チオアルキルカルボキシラート　ＨＳ（ＣＨ２）ｎ　Ｃ
Ｏ２Ｒ１　と３−ハロメチルセファロスポリンとの反応
により、又はカルボキシル保護３−ハロメチルセファロ
スポリンとチオアルカン酸とを反応させ次いで酸部分を
活性化することにより得ることができる。例えば化合物
（ＩＸ）　のＲ１　はスクシンイミドであることができ
、又は基　−ＣＯ２Ｒ１　が混成無水物を表わすことが
できる。 【００７２】あるいは細胞毒物質を初めに誘導体化し、
ＮＲａ　をチオアルキルカルボキシラート、ＨＳ（ＣＨ
２）　ｎ　ＣＯ２Ｒ１　、と反応させることにより式（
Ｘ）のＮ−チオアルキルカルボニル化合物を形成するこ
とができる。次いで化合物（Ｘ）をカルボキシル保護３
−ハロメチルセファロスポリン（ＶＩＩＩ）　と反応さ
せると所望の生成物が得られる。式　（ＸＩ）　の化合
物の製造のためにＲ１　は例えばスクシンイミドである
ことができ、又は　−ＣＯ２Ｒ１　が混成無水物を表わ
すことができる。 【００７３】細胞毒薬物成分ＮＲａ　は前記のナイトロ
ジェンマスタード群の一員であることができる。殊に好
ましいマスタードはメルファラン及びＮ，Ｎ−ビス（２
−クロロエチル）−１，４−ベンゼンジアミン（フェニ
レンジアミンマスタード）である。さらに、細胞毒薬物
成分ＮＲａ　はアンスラサイクリン群の一員であること
ができる。アンスラサイクリンの例には、セファロスポ
リンに対する結合が糖アミノ基によるアドリアマイシン
、ダウノマイシン、カルミノマイシンなどが含まれ、し
かしそれらに限定されない。好ましくはアンスラサイク
リンはアドリアマイシンである。 【００７４】細胞毒薬物成分ＮＲａ　はまたはマイトマ
ンシン群の一員であることができる。マイトマンシンは
次の一般構造を特徴とする： 【００７５】 【化２４】 【００７６】７−位上に種々の置換基をもつ多くのマイ
トマンシン類似体が報告された。本発明の目的に対し、
セファロスポリンに対するマイトマンシンの結合がアジ
リジン窒素原子によるので、７−置換基は臨界的ではな
い。プロドラッグとして好ましいマイトマンシンはマイ
トマンシンＣ、すなわちＹ＝ＮＨ２　である。このプロ
ドラッグに適するマイトマンシン類似体の他の例は米国
特許第４，６９１，０２３　号、第４，８０３，２１２
　号、第４，４８７，７６９　号、第４，８８８，３４
１　号及び欧州公表出願第２９４，８２８　号中に開示
されたものであることができ、それらが参照される。 【００７７】他の観点において本発明は式（Ｉ）の化合
物のサブクラスとして、細胞毒物質がカーボネート又は
エステル基によりセファロスポリン核に連結する一般式
（ＸＩＩ） 【００７８】 【化２５】 【００７９】（式中、Ｑ、Ｌ及びｍは前記のとおりであ
り；ＯＲ６　はヒドロキシ含有細胞毒薬物である）のセ
ファロスポリンプロドラッグ又はその薬学的に許容でき
る塩を提供する。式（ＸＩＩ）の化合物は図式Ｉ〜ＩＩ
Ｉ　（図式Ｉ中の経路（ａ）を除き）に記載した一般法
により、それに用いたＮＲａ　の代わりにＯＲ６　を用
いて製造することができる。 【００８０】本発明の１例として、細胞毒成分ＯＲ６　
は式 【００８１】 【化２６】 【００８２】（式中、Ｚは既知エピボドフィロトキシン
グルコシドの置換基、例えばアルキル、チエニル、フリ
ル及びフェニルである）を有するエピボドフィロトキシ
ン抗腫瘍物質の群から選ばれる。Ｚがメチル（エトポシ
ド）及び２−チエニル（テニポシド）である化合物が殊
に好ましい。これらの化合物は４′−フェノール基によ
りセファロスポリン核に連結することができる。 【００８３】他の観点において、本発明はサブクラスと
して式（ＸＩＩＩ）　 【００８４】 【化２７】 【００８５】（式中、Ｑは前記のとおりであり、　Ｒｃ
　ＣＯＯ　はカルボキシ含有細胞毒化合物である）のセ
ファロスポリンプロドラッグ又はその薬学的に許容でき
る塩を提供する。この例として、細胞毒成分メルファラ
ンをカルボキシル基によりセファロスポリン核に連結さ
せることができる。メルファラン−セファロスポリンプ
ロドラッグ（ＸＩＶ）は図式ＩＶ 【００８６】 【化２８】 【００８７】中に示される操作により製造できる。図式
ＩＶ中、Ｑ及びＲ２　は前記のとおりである。好ましく
はＲ２　は酸置換活性基例えばベンジル又はｔ−ブチル
である。ｔ−ＢＯＣ　はｔ−ブトシキカルボニル基であ
る。従って、カルボキシ保護３−ヨードセファロスポリ
ンを塩基例えば炭素水素ナトリウムの存在下にＮ−ｔ−
ＢＯＣ　保護メルファランと反応させ、生じた二保護中
間体を酸で処理すると式（ＸＩＶ）の所望の生成物が得
られる。 【００８８】図式Ｉ中の経路（ａ）の一般的操作により
作られる代表的なセファロスポリンプロドラッグは反応
式（ｉ）中に示される。とりわけ、３−ヒドロキシメチ
ルセファロスポリン（１）をイソシアナート（２）と反
応させるとセファロスポリンマスタード（３）が得られ
る（反応式ｉ）。図５中に示されるように、β−ラクタ
マーゼにより開裂するとセファロスポリンマスタードが
加水分解されてフェニレンジアミンマスタード、ＰＤＭ
、を生ずる。 【００８９】 【化２９】 【００９０】本発明において使用される他の代表的なプ
ロドラッグは図１〜４中に示される。図１〜４中に示さ
れるこれらのプロドラッグは図式Ｉ〜ＩＶ中に記載され
た一般的操作により合成できる。これらの技術は当業者
によりよく知られている。本発明の他の関点は式（ＩＩ
ａ）【００９１】 【化３０】 【００９２】（式中、Ｑ及びＲｄは前記のとおりである
）を有するセファロスポリン−マイトマイシンプロドラ
ッグに関する。式（ＩＩａ）の化合物は３−アミノメチ
ルセファロスポリンをマイトマイシンＡ又はそのＮ１ａ
−アルキル誘導体（Ｎ１ａはマイトマイシンのアジリジ
ン窒素を示す）と反応させることにより製造される。反
応は有機溶媒例えばエタノール又はメタノール中で、生
成物の形成を生ずる温度例えば室温で行なわれる。反応
は一般に２４時間内に終る。好ましくは反応は不活性雰
囲気下に行なわれる。出発物質３−アミノメチルセファ
ロスポリンは相当する３−アジドメチルセファロスポリ
ンから得られ；３−アミノメチル−及び３−アシドメチ
ル−セファロスポリンの両方及びそれらの製法はコッカ
ー（Ｃｏｃｋｅｒ，　Ｊ．　Ｄ．）ほか、ジャーナル・
オブ・ザ・ケミカル・ソサィエティー、１９６５、５０
１５、５０２７〜５０２９中に開示され、その関連部分
が参照される。 【００９３】本発明により包含されるセファロスポリン
プロドラッグの合成は前に特定的に記載した操作及び試
薬に限定されず、有機合成当業者によく知られた他の普
通の技術を用いて行なうことができることが理解されよ
う。保護基、エステル活性化基（及び適用できるならば
それらの導入及び除去）、溶媒並びに反応条件の選択は
合成化学者の知識内であり、過度の実験なく行なうこと
ができる。 【００９４】本発明はまた、薬学的組成物並びに癌及び
他の腫瘍を治療する方法を包含する。より詳しくは、本
発明は抗体−β−ラクタマーゼ接合体により開裂できる
セファロスポリンプロドラッグを含む組成物を包含する
。プロドラッグ及び酵素接合体は腫瘍を治療する方法に
使用され、哺乳動物宿主は抗体−酵素接合体又は接合体
類の薬学的に有効な量及びプロドラッグ又はプロドラッ
グ類の薬学的に有効な量を与えられる。本発明の組成物
及び方法は、ヒト、犬、猫及び馬を含む任意の哺乳動物
の治療に有用である。 【００９５】好ましい態様によれば、抗体−酵素接合体
が、宿主中へのプロドラッグの導入の前に投与される。 接合体及びプロドラッグの投与の間に、接合体の抗体が
腫瘍部位を標的してそれに酵素を局在化することを可能
にする十分な時間を与えられよう。その時間は用いる接
合体により１２時間〜１時間であることができる。本発
明の接合体及びプロドラッグは静脈内、腹腔内、経口、
リンパ内、又は直接腫瘍内への投与を含み、しかしそれ
らに限定されない普通の投与法を用いて投与することが
できる。静脈内投与が好ましい。 【００９６】本発明の組成物は液体溶液又は懸濁液、錠
剤、丸剤、粉末、坐剤、高分子マイクロカプセル又はマ
イクロベシクル、リポソーム、及び注射又は注入できる
溶液を含み、しかしそれらに限定されない種々の剤形で
あることができる。好ましい形態は投与及び治療適用の
方法による。例えば抗体−β−ラクタマーゼ接合体の経
口投与は、接合体タンパク質が経口的に例えば錠剤形態
で摂取されると胃中で分解される傾向があるので好まし
くないであろう。 【００９７】接合体はプロドラッグ組成物はまた、好ま
しくは該部門において知られた普通の薬学的に許容でき
る担体又はアジュバント例えばヒト血清アルブミン、イ
オン交換体、アルミナ、レシチン、緩衝物質例えばリン
酸塩、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム及び
塩又は電解質例えば硫酸プロタミンを含む。本発明の組
成物に対する投与及び用法の最も有効な方法は疾患の重
さ及び経過、患者の健康及び治療に対する応答並びに処
置医師の判断による。従って、免疫接合体及びプロドラ
ッグの投薬量は個々の患者に対して決定されよう。用量
を決定する方法は該部門においてよく知られているしか
し、本発明の抗体−酵素接合体の有効量は約１．０〜約
１０００ｍｇ／Ｍ２であり、プロドラッグの用量は使用
される個々のプロドラッグ及びそれが誘導される親薬物
による。プロドラッグが親薬物より低い細胞毒性である
ので、親薬物に対して該部門において認められた投薬量
を越える投薬量を用いることができる。 【００９８】記載した発明がより完全に理解されること
ができるために、以下の実施例が示される。これらの実
施例は単に例示のためであり、決して発明の範囲を限定
すると解すべきでない。 Ｃ．実験 １．　　化合物の製造 １．１　　　中間体の製造 １．１．１　　　Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−
４−イソシアナート−ベンゼンアミン エベレット（Ｅｖｅｒｅｔｔ）ほか、ジャーナル・オブ
・ザ・ケミカル・ソサイエティー（Ｊ．　Ｃｈｅｕｒ．
　Ｓｏｃ．）、１９４９（１９７２）の方法に従って製
造されたＮ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−４−イソ
シアナート−ベンゼンアミン（４ｇ、１６．２ミリモル
）を濃ＨＣｌ　８０ｍｌ中に溶解し、水浴中で冷却した
。塩化スズ三水和物（６ｇ）を一度に加え、混合物を１
０分間攪拌した。反応混合物を冷浴から取出し、さらに
３５分間攪拌した。黄褐色固体生成物をガラス半融漏斗
上の吸引濾過により捕捉し、濃ＨＣｌ　２０ｍｌで洗浄
した。黄褐色固体を水１００ｍｌ中に溶解し、氷浴中で
冷却した。冷１Ｎ−ＮａＯＨを溶液のｐＨが８になるま
で加えた。濁った白色溶液をジエチルエーテル１５０ｍ
ｌで抽出し、飽和ＮａＣｌ水溶液８０ｍｌで洗浄し、無
水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥した。乾燥剤を含む溶液にピリ
ジン（２．７ｍｌ）を加えた。溶液を混合し、直ちにガ
ラスウールを通して濾過しながらホスゲン〔トルエン中
１．９３Ｍ、フルカ・ケミカル（Ｆｌｕｋａ　Ｃｈｅｍ
．　Ｃｏ．）製、８．４ｍｌ〕のジエチルエーテル５０
ｍｌ溶液中に２℃で攪拌しながら加えた。反応混合物を
２℃で６０分、次いで室温で１５分間攪拌した。反応混
合物を吸引により濾過し、減圧で濃縮すると粗イソシア
ナート（２．８１ｇ）が暗緑色粘性油状物質として得ら
れた。この方法で製造されたイソシアナートはＩＲで固
有伸縮振動吸収を示した。 【００９９】１．１．２　　　３−（ヒドロキシメチル
）−８−オキソ−７−（フェニルアセトアミド）−５−
チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エ
ン−２−カルボン酸カリウム３−（アセトキシメチル）
−８−オキソ−７−（フェニルアセトアミド）−５−チ
ア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン
−２−カルボン酸ナトリウム（またはセファロラムとし
て知られる）の溶液を、この塩８．５ｇ（２０．６ミリ
モル）を水５５ｍｌ及びメタノール２７ｍｌ中に溶解す
ることにより調製し、−１０℃に冷却した。２０％　Ｎ
ａＯＨ　２．０ｍｌ、次いで２：１水／メタノール５ｍ
ｌを加えることによりｐＨを１１．５〜１２．０に調整
した。なお−５℃の間に濃　Ｈ３ＰＯ４を激しく攪拌し
ながらもはや沈殿を形成しなくなるまで滴加した。生じ
た溶液を酢酸エチル９００ｍｌ及び水１００ｍｌ中へ注
加した。混合物を抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウム
上で乾燥した。溶液を、２−エチルヘキサン酸カリウム
５ｇのアセトン５０ｍｌ中の溶液を加えた　ＥｔＯＡｃ
　　２リットルの激しく攪拌した溶液中へ濾過した。生
じた沈殿を吸引により濾過し、　ＥｔＯＡｃで洗浄する
とクリーム色固体が得られた。固体を　Ｐ２Ｏ５　上６
０℃で真空下に１２時間乾燥すると濃黄色の硬い固体５
．６３ｇが得られた。 【０１００】１．１．３　　　３−ヨードメチル−８−
オキソ−７−フェニルアセトアミド−５−チア−１−ア
ザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−２−カル
ボン酸３−プロペニルＡ．セファロラム３−プロペニル
エステルの製造ナトリウムセファロラム（８．０ｇ）の
水１５０ｍｌ中の溶液を０℃に冷却し、次いで１Ｎ−Ｈ
Ｃｌ　で約２のｐＨにした。沈殿した固体を濾過し、高
真空で乾燥するとセファロスポリン酸５．９ｇ（７８％
）が得られた。この生成物（５．８６ｇ、１５．０ミリ
モル）を次いで、５：３のＤＭＦ／ジオキサン溶液３２
ｍｌ中に炭酸水素ナトリウム（１．３９ｇ、１６．５ミ
リモル）及びヨウ化アリル（２．０５ｍｌ、２２．５ミ
リモル）とともに懸濁させた。反応混合物を４２時間攪
拌し、次いで酢酸エチル４００ｍｌ及びブライン７５ｍ
ｌの混合物中へ注加した。有機層をブライン３×７５ｍ
ｌ、水７５ｍｌ、飽和　ＮａＨＣＯ３　３×７５ｍｌ、
及び水７５ｍｌで抽出し、次いで　Ｎａ２ＳＯ４　上で
乾燥した。高真空下のロータリーエバポレーションによ
り溶媒を除去すると粗生成物４．２ｇが得られ、それを
４．８×１０ｃｍシリカゲルカラム上のフラッシュクロ
マトグラフィーにより、次のヘキサン／酢酸エチル溶離
勾配：（１）３：１、１リットル、（２）１：１、１リ
ットル、及び（３）１：３、１リットルで精製した。生
成物を含む適当な画分を一緒にしてロータリーエバーポ
レーションにより濃縮乾固し、高真空下に乾燥すると所
望の生成物（１．７０２ｇ、２６．４％）が得られた。 【０１０１】 Ｂ．３−ヨードメチル−８−オキソ−７−フェニルアセ
トアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕
オクト−２−エン−２−カルボン酸３−プロペニルヨウ
化トリメチルシリル（０．８００ｍｌ、５．６ミリモル
）及び段階（Ａ）で得られた３−プロペニルセファロラ
ム（１．２０ｇ、２．８ミリモル）の溶液を塩化メチレ
ン３０ｍｌ中で窒素下に室温で１時間攪拌した。さらに
塩化メチレン２０ｍｌを加え、次いで反応混合物を水３
０ｍｌ、メタ重亜硫酸ナトリウム２×５０ｍｌ及び水３
０ｍｌで抽出した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し
、溶媒をロータリーエバポレーションにより除去し、高
真空下に乾燥すると表題の化合物（１．１０ｇ、７９％
）が得られた。 【０１０２】　　１Ｈ　ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３）　　δ
　：　７．４−７．１（ｍ，　５Ｈ）　、６．１（ｄ，
　１Ｈ）、６．１−５．８（ｍ，　１Ｈ）、５．８（ｄ
ｄ，　１Ｈ）　、５．４−５．２（ｍ，　２Ｈ）、４．
９（ｄ，　１Ｈ）、４．７２（ｄ，　２Ｈ）　、４．３
２（ｑ，　２Ｈ）　、３．７　及び３．４（ｑ）、３．
６（ｄ）。１．１．４　　　３−〔〔（２−ヒドロキシ
）エチル〕チオメチル−８−オキソ−７−フェニルアセ
トアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕
オクト−２−エン−２−カルボン酸３−プロペニル前記
の製造１からの３−ヨードメチルセファロスポリンアリ
ルエステル（１．１０ｇ、２．２１ミリモル）、２−メ
ルカプトエタノール（０．３０９ｍｌ、４．４２ミリモ
ル）及び２，６−ルチジン（０．３８６ｍｌ、３．３２
ミリモル）の溶液を塩化メチル３０ｍｌ中で窒素下に室
温で１時間攪拌した。０．１Ｎ酢酸４×５０ｍｌで抽出
した後、有機層をロータリーエバポレーションにより乾
燥し、濃縮した。ＮＭＲ分析がすべての出発物質の消費
を示さず、従って、残留物を再び塩化メチレン３０ｍｌ
中に溶解し、Ｎ２　下に３日間メルカプトエタノール（
０．１５０ｍｌ、２．２０ミリモル）及び２，６−ルチ
ジン（０．１９０ｍｌ、３．３０ミリモル）で再処理し
た。反応混合物を前記のように処理した。フラッシュク
ロマトグラフィーを１″×３″シリカゲルカラム上、ヘ
キサン中の酢酸エチルの上昇勾配（２５〜７５％酢酸エ
チル）を用いて行なった。３５〜４５％の酢酸エチル濃
度で溶離した生成物をロータリーエバポレーションによ
り分離し、高真空下に乾燥した。生成物は１７５ｍｇ（
１８％）であった。 【０１０３】 ＦＡＢ　　ＭＳ：ＭＨ＋　４４９；ＭＷ測定値４４８。 　　１Ｈ　ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３）　　δ　：　７．３
（ｍ，　５Ｈ）　、６．１（ｄ，　１Ｈ）、５．８５（
ｍ，　１Ｈ）　、５．７３（ｄｄ，　１Ｈ）、５．４−
５．２（ｍ，　２Ｈ）、４．９（ｄ，　１Ｈ）、４．６
４（ｄ，　２Ｈ）　、３．８５及び３．２（ｑ）、３．
６（ｄ）、２．７５−２．５（ｍ，　２Ｈ）　。 【０１０４】１３Ｃ　ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ３）　：　１
７１．０　、１６４．０　、１３４．０　、１３１．０
　、１２９．９　、１２９．３　、１２９．１　、１２
７．６　、１１９．５　、６６．７、６１．２、５９．
０、５７．９、４３．２、３３．９、３２．９、２７．
４。１．１．５　　３−〔〔（２一ヒドロキシ）エチル
〕チオメチル〕−８−オキソ−７−フェニルアセトアミ
ド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト
−２−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチル非希釈２
−メルカプトエタノール（０．６９ｍｌ，１０．１ミリ
モル）を３−ヨードメチル−８−オキソ−７−フェニル
アセトアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．
０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチ
ル（６．０ｇ，９．８ミリモル）及び２，６−ルチジン
（１．１４ｍｌ，９．９ミリモル）の乾燥ジメチルホル
ムアミド５０ｍｌ中のＮ２下に２５℃でかくはんした溶
液に加えた。反応混合物を５２時間かくはんし、次いで
８：１のＥｔＯＡｃ　／Ｅｔ２Ｏ４５０ｍｌ及び水４５
０ｍｌを入れた分液漏斗中へ注加した。 反応混合物をふりまぜ、水層を廃棄した。有機抽出物を
無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、減圧で濃縮した。２０〜
４０％のＥｔＯＡｃ　／ヘキサンを溶離剤として用いて
ＳｉＯ２上でフラッシュクロマトグラフィーを行なうと
所望生成物１．８５ｇ（３２％）が灰白色固体として得
られた。 【０１０５】１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）　δ：７．４
４−７．２２（ｍ，　１５Ｈ）　、６．８７（ｓ，　１
Ｈ）　、６．０７（ｄ，　Ｊ＝９．２Ｈｚ，　１Ｈ）、
５．８０（ｄｄ，　Ｊ＝９．０，　４．９Ｈｚ，　１Ｈ
）、４．９６（ｄ，　Ｊ＝４．８Ｈｚ，　１Ｈ）、３．
７４（ｄ，　Ｊ＝４．８Ｈｚ，　１Ｈ）、３．６２（ｍ
，　２Ｈ）　、３．５６（ｍ，　２Ｈ）　、３．５０（
ｄ，　Ｊ＝４．９Ｈｚ，　１Ｈ　）　、３．７−３．４
（ｍ，　２Ｈ，部分的に不鮮明）　、２．５０（ｍ，　
２Ｈ）．１．１．６　　３−〔〔（２−ヒドロキシ）エ
チル〕チオメチル〕−８−オキソ−７−フェニルアセト
アミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オ
クト−２−エン−２−カルボン酸固体の３−〔〔（２−
ヒドロキシ）エチル〕チオメチル〕−８−オキソ−７−
フェニルアセトアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔
４．２．０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸ジフェ
ニルメチル（１．２１ｇ，２．１０ミリモル）をアニソ
ール４ｍｌ中に懸濁させた。固体のすべてが溶媒で湿ら
されることを保証するように注意した。フラスコを氷−
水浴中で冷却し、次いで予め冷却したトリフルオロ酢酸
（２℃）をシリンジにより加えた。反応混合物を５分間
かくはんし、次いで冷浴を除いた。反応混合物を３０分
間（室温，２５℃）かくはんし、次いで揮発性物質を高
真空で除去した。シリカゲル上の薄層クロマトグラフィ
ーによる分析は、８：１：０．５のクロロホルム：イソ
プロピルアルコール：酢酸による溶離後ＵＶ下に可視化
したときに３つの主要生成物を示した。同じ溶媒の８：
０．５：０．５、次に８：１：０．５、次いで８：２：
１混合物を溶離剤として用いてフラッシュクロマトグラ
フィーにかけると３生成物が得られた。最も極性の生成
物をジエチルエーテルで摩砕すると所望の生成物１５４
ｍｇ（１８％）で白色固体として得られ、エーテル洗液
を捕集し、濃縮後フリーザー中に貯蔵すると油状物質が
得られた。 【０１０６】１Ｈ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）　δ：９
．０７（ｄ，　Ｊ＝８．４Ｈｚ，　１Ｈ）、７．２９−
７．１９（ｍ，　５Ｈ）、５．５７（ｍ，　１Ｈ）　、
３．７１−３．２（ｍ，　８Ｈ）　、２．５−２．４６
（ｍ，　２Ｈ）．１．１．７　　３−〔（２−カルボキ
シエチル）チオメチル〕−７−８−オキソ−フェニルア
セトアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０
〕オクト−２−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチル
非希釈３−メルカプトプロピオン酸（０．９３ｍｌ，１
０．６ミリモル）を、３−ミードメチル−８−オキソ−
７−フェニルアセトアミド−５−チア−１−アザビシク
ロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸ジ
フェニルメチル（３．２４４ｇ，５．３１ミリモル）及
び２，６−ルチジン（１．８６ｍｌ，１５．９３ミリモ
ル）のジクロロメタン５０ｍｌ中の窒素雰囲気下に２５
℃でかくはんした溶液に加えた。２４時間かくはんした
後反応混合物を０．５Ｎ−ＨＣｌ　中へ注加し、ＣＨ２
Ｃｌ２３部で抽出した。 有機抽出物を一緒にしてＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、濃縮
し、ＳｉＯ２上で４０〜１００％のＥｔＯＡｃ　／ヘキ
サンの勾配を溶離剤として用いるフラッシュクロマトグ
ラフィーにより精製すると所望の生成物が灰白色固体（
１．２８ｇ，４１％）として得られた。 【０１０７】１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）　δ：７．４
−７．２（ｍ，　１５Ｈ）　、６．９２（ｓ，　１Ｈ）
　、６．２２（ｄ，　Ｊ＝１０Ｈｚ，　１Ｈ）　、５．
８０（ｄｄ，　Ｊ＝９．３，　４．８Ｈｚ，　１Ｈ）、
５．００（ｄ，　Ｊ＝５．９Ｈｚ，　１Ｈ）、３．６５
（ｍ，　２Ｈ）　、３．５６（ＡＢＱ，　Ｊ＝９４．３
，　１４．０　Ｈｚ，　２Ｈ）、３．５２（ｍ，　２Ｈ
）　、２．８−２．４（ｍ，　４Ｈ）。１．１．８　　
３−〔（２−カルボキシエチル）チオメチル〕−７−８
−オキソ−フェニルアセトアミド−５−チア−１−アザ
ビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−２−カルボ
ン酸３−〔（２−カルボキシエチル）チオメチル〕−８
−オキソ−７−フェニルアセトアミド−５−チア−１−
アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−２−カ
ルボン酸ジフェニルメチル（１．０１ｇ，１．７１ミリ
モル）を５０ｍｌの丸底フラスコ中でアニソール３ｍｌ
で湿らせた。反応フラスコを氷−水浴中で冷却し、トリ
フルオロ酢酸（２℃に予冷）１０ｍｌ（０．１３ミリモ
ル）を加えた。５分後に冷浴を除いた。 反応混合物を室温で３５分間かくはんし、次いで揮発性
物質を高真空で除去した。残留黄色固体を直ちにジクロ
ロメタン２５ｍｌ中に溶解すると白色固体が沈殿した。 吸引により濾過し、真空下に乾燥すると所望のこ酸４０
２ｍｇ（５６％）が得られた。 【０１０８】ＦＡＢ　ＭＳ（ＮＯＢＡ）：４３６．１３
Ｃ　ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１７２．８　、１７
０．９　、１６４．５　、１６３．０　、１３５．８　
、１２８．９　、１２８．２　、１２８．１　、１２６
．４　、１２４．６　、５８．８、５７．９、４１．５
、３４．３、３２．３、２６．７、２５．６．　１．１
．９　　３−〔〔（４−ニトロフェノキシ）カルボニル
オキシ〕メチル〕−８−オキソ−７−フェニルアセトア
ミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オク
ト−２−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチルピリジ
ン（０．２００ｍｌ，２．５ミリモル）を、３−ヒドロ
キシメチル−８−オキソ−７−フェニルアセトアミド−
５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２
−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチル（１．０３０
ｇ，２．０ミリモル）及びクロロギ酸ｐ−ニトロフェニ
ル（４４４ｍｇ，２．２ミリモル）の塩化メチレン２０
ｍｌ中のＮ２下に室温でかくはんした懸濁液に加えた。 ７５分間かくはんした後溶媒をロータリーエバポレーシ
ョンにより除去した。フラッシュクロマトグラフィーを
１×５ｃｍシリカゲルカラム上でヘキサン中の酢酸エチ
ルの上昇勾配（２５〜５０％酢酸エチル）で行なった。 放置するとカーボネート生成物を含む画分が結晶を生じ
、それを濾過し、一緒にし、酢酸エチル／ヘキサン（１
：１）で洗浄した。生成物を高真空下に乾燥した。生成
物の収量は５１７ｍｇ（３８％）であった。 【０１０９】Ｍ．Ｐ．：　１６１°−１６２．５℃．　
元素分析：計算値（Ｃ３６Ｈ２９Ｎ３Ｏ９Ｓ）　：Ｃ　
、６３．６２　；Ｈ　、４．３０；Ｎ　、６．１８．　 測定値：Ｃ　、６３．３５　；Ｈ　、４．１０、Ｎ　、
６．１０．　ＦＡＢ　ＭＳ：ＭＨ＋　６８０． １Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）　δ：８．２５（ｄ，　２
Ｈ）　、７．２−７．４（ｍ，　１７Ｈ）　、６．９（
ｓ，　１Ｈ）、６．０（ｄ，　１Ｈ）、５．８７（ｄｄ
，　１Ｈ）、５．２　及び４．９５（ｑ，　２Ｈ）　、
４．９５（ｄ，　１Ｈ）　、３．６（ｄ，　２Ｈ）、３
．５（ｑ，２Ｈ）．　１．１．１０　　８−オキソ−７
−フェニルアセトアミド−３−〔〔（１，２，２，２−
テトラクロロエトキシ）カルボニルオキシ〕メチル〕−
５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２
−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチル ３−ヒドロキシメチル−８−オキソ−７−フェニルアセ
トアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕
オクト−２−エン−２−カルボン酸ジフェニルメチル（
５．１５ｇ，０．０１０モル）及びクロロギ酸１，２，
２，２−テトラクロロエチル（１．５３ｍｌ，０．０１
０モル）をＣＨ２Ｃｌ２１２５ｍｌ中でＮ２下に０℃で
かくはんして部分溶解させた。次いでピリジン（０．９
７ｍｌ，０．０１２モル）を、温度を０℃に維持しなが
ら徐々に加えた。添加が終った後、全物質が溶解し、反
応混合物を３０分間かくはんしながら室温に温まらせた
。反応容器の内容物を分液漏斗に移し、有機層を冷０．
５Ｎ−ＨＣｌ　７５ｍｌで２回及びＨ２Ｏ　７５ｍｌで
１回抽出した。有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥
した。これをロータリーエバポレーションすると発泡体
になり、次いで高真空下に３５℃で乾燥すると生成物７
．１５ｇ（７９％）が得られた。 【０１１０】１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）　：７．４−
７２（ｍ，　１５Ｈ）、６．９０（ｓ，　１Ｈ）　、６
．６０（３，　１Ｈ）、５．９７（ｄ，　１Ｈ）　、５
．８７（ｄｄ，　１Ｈ）、５．１（ｍ，　２Ｈ）、４．
９３（ｄ，　１Ｈ）　、３．６２（ｄｄ，　２Ｈ）、３
．４５（ｄｄ，　２Ｈ）．　 １３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１７１．５　、１６５
．３　、１６０．７　、１５１．８　、１３９．２　、
１３９．１　、１３３．９　、１２９．７−１２７−６
（多重ピーク）　、１２４．８　、１２４．７　、９１
．３、８０．３、６８．４３　、６８．３７　、５９．
４、５７．７、４３．４、２６．４．　 ＦＡＢ　ＭＳ：（ＮＯＢＡ＋ＫＩ）　〔Ｍ＋Ｋ　〕＋　
ａｔ　ｍ／ｅ　７６３．　微量分析：計算値（Ｃ３２Ｈ
２６Ｎ２Ｏ７Ｃｌ４Ｓ）：Ｃ　、５３．０５　；Ｈ　、
３．６２；Ｎ　、３．８７．　 測定値：Ｃ　、５２．９７　；Ｈ　、３．４７；Ｎ　、
３．８０．　１．２　　セファロスポリン細胞毒物質プ
ロドラッグの製造 １．２．１　　３−〔〔〔４−〔ビス（２−クロロエチ
ル）アミノ〕フェニル〕アミノカルボニルオキシ〕メチ
ル〕−８−オキソ−７−（フェニルアセトアミド）−５
−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−
エン−２−カルボン酸（以下ＣＭとして示す）【０１１
１】 【化３１】 【０１１２】前に製造した粗イソシアナート（３．９２
ｇ，０．０１５１モル）の乾燥ＤＭＦ、ジメチルホルム
アミド、１０ｍｌ中の溶液を、前に製造したセファロス
ポリンカリウム塩（２．６５ｇ，０．００６８８モル）
の窒素雰囲気下に２５℃でかくはんした溶液に加えた。 直ちにトリエチルアミン（２．７ｍｌ，０．０２０モル
）を加えた。反応混合物を２６時間かくはんし、次いで
１：１のＥｔＯＡｃ　／水の混合物５００ｍｌ中へ注加
した。ふりまぜた後、乳濁液にジエチルエーテル１００
ｍｌを加えた。有機層を分離した。水層を１Ｎ−ＨＣｌ
　を用いてｐＨ５になし、ジエチルエーテル２００ｍｌ
で抽出した。有機抽出物を分離し、残留水層をさらにｐ
Ｈ３にした。形成された有機層を分離した。３有機層の
すべてを個々に無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥し、個々に減
圧で濃縮した。各画分を個々にベーカー（Ｂａｋｅｒ）
オクタデシルＣ１８上で、２０％、次に３０％、次いで
４０％ＣＨ３ＣＮ　／水を溶離剤として用いてフラッシ
ュクロマトグラフにかけたそれぞれの純画分を個々にロ
ータリーエバポレータで真空下に３０℃で、ほとんどす
べてのアセトニトリルが除去されるまで濃縮した。水溶
液をガラスウールを通して濾過し、沈殿した暗赤色油状
固体を除去した。水を凍結乾燥器で除き、残留したわず
かに黄色を帯びた白色フラフ状固体を一緒にしてＰ２Ｏ
５上で２５℃で真空で１２時間乾燥した。クロマトグラ
フィーからのわずかに不純な重複画分及び先に除去した
赤色固体を一緒にして、上記のように再びクロマトグラ
フィーにかけ、真空で乾燥後に追加の生成物が得られた
。生成物の合計収量は淡帯黄、白色フラフ状固体２８０
ｍｇ（９％）であった。（ＩＲ〔ＫＢｒ〕３４０４ｂ　
、３０６０、２９５８、１７８０、１７２４、１６６６
、１６６６、１５２２、１３９２、６５８　ｃｍ−１；
ＦＡＢ／ＮＯＢＡ　ＭＨ　＋　計算値（Ｃ２７Ｈ２９Ｎ
４Ｏ６Ｃｌ２Ｓ）＝６０７．１１８５　、測定値＝６０
７．１１７１　；１Ｈ　ＮＭＲ〔ＤＭＳＯ−ｄ６　〕δ
１３．８５−１３．５５　〔ｂｓ，　１Ｈ〕、９．４１
〔ｂｓ，　１Ｈ〕、９．０９〔ｄ，　Ｊ＝８．２Ｈｚ，
　１Ｈ〕、７．３０−７．１８（ｍ，　７Ｈ）、５．６
５〔ｍ，　１Ｈ　〕、５．０７〔ｄ，　Ｊ＝４．８Ｈｚ
，　１Ｈ〕、５．０１、４．７２〔２ｄ，　Ｊ＝１２．
６Ｈｚ，　２Ｈ〕、３．６６〔ｂｓ，　８Ｈ〕、３．７
０−３．４４　〔ｍ，　４Ｈ　〕；１３Ｃ　ＮＭＲ　〔
ＤＭＳＯ−ｄ６　〕１７１．５　、１６５．２　、１６
３．５　、１５３．９　、１４２．７　、１３６．３　
、１２９．４　、１２８．６　、１２６．９　、１２０
．６　、１１２．７　、６３．１、５９．２、５７．６
、５２．５、４１．６、４１．３、２５．７）．１．２
．２　　３−〔〔（Ｎ−アドリアマイシン）　カルボニ
ルオキシ〕メチル〕−８−オキソ−７−フェニルアセト
アミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オ
クト−２−エン−２−カルボン酸（以下にＡＤＲ−ｃｅ
ｐｈとして示す）【０１１３】 【化３２】 【０１１４】（Ａ）ＡＤＲ−ｃｅｐｈのジフェニルメチ
ルエステル アドリアマイシン塩酸塩（１１６ｍｇ，０．２ミリモル
）、実施例１．１．９のセファロスポリンｐ−ニトロフ
ェニルカーボネート（１２２ｍｇ，０．１８ミリモル）
及びトリエチルアミン（３２μｌ，０．２４ミリモル）
をＤＭＦ２５ｍｌ中で４５時間かくはんした。溶媒をロ
ータリーエバポレーションにより除去した。残留物を再
び酢酸エチル１００ｍｌ中に溶解し、０．１％酢酸１５
０ｍｌで抽出した。 水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を一緒にしてロータ
リーエバポレーションにより濃縮乾固した。フラッシュ
クロマトグラフィーを０．５″×６″シリカゲルカラム
上でＣＨ２Ｃｌ２次にＣＨ２Ｃｌ２／ＣＨ３ＯＨ（９７
：３）で行なった。赤色画分を一緒にして濃縮し、前記
のように再びクロマトグラフィーにかけた（０．５″×
３″カラム）。赤色成分を含む適当な画分を一緒にして
ロータリーエバポレーションにより濃縮し、高真空下に
乾燥すると生成物８０ｍｇ（４１％）が得られた。 【０１１５】ＦＡＢ　ＭＳ：ＭＨ＋　１０８５；Ｍ　＋
　１０８４．　１Ｈ　ＮＭＲ（　選択したピーク）　δ
：７．９（ｍ）、７．７（ｍ）、７．１−７．４（ｍ）
、５．７（ｄｄ）　、６．８（ｓ）、４．０（ｄ）、１
．２（ｄ）．　（Ｂ）ＡＤＲ−ｃｅｐｈのジフェニルメ
チルエステルの他の製法 実施例１．１．１０のセファロスポリン中間体（７２ｍ
ｇ，０．１０ミリモル）をＴＨＦ２ｍｌ中に溶解し、次
いでこの溶液をアドリアマイシン塩酸塩（４４ｍｇ，０
．０７６ミリモル）及びＮａＨＣＯ３（１３ｍｇ，０．
１５ミリモル）の２ｍｌ　Ｈ２Ｏ／１ｍｌＴＨＦ中の部
分溶解し室温でかくはんした溶液に滴加した。１時間後
にＴＬＣ及びＨＰＬＣは反応が終ったことを示した。フ
ラスコの内容物を酢酸エチル２５ｍｌで希釈し、０．１
Ｎ−ＨＯＡｃ２５ｍｌで１回抽出した。 有機層をロータリーエバポレーションにより濃縮し、残
留物をメルク（Ｍｅｒｃｋ）シリカゲル６０上で次の一
連の溶離剤：ＣＨ２Ｃｌ２，２００ｍｌ、（２）ＣＨ２
Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ　９：１，１００ｍｌ、（３）ＣＨ
２Ｃｌ２／ＥｔＯＡｃ　８：２，１００ｍｌ、（４）Ｃ
Ｈ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９８：２，１００ｍｌ、（５）Ｃ
Ｈ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９６：４，１００ｍｌ、及び（６
）ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ９２：８，１００ｍｌ、を用
いてフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。純
生成物画分が２〜４％ＭｅＯＨ溶離の間に捕集された。 それをロータリーエバポレーションにより濃縮乾固し、
さらに高真空下に３５℃で乾燥するとアドリアマイシン
カルバメート生成物６６ｍｇ（８０％）が得られた。 【０１１６】１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）　：１３．９
５（ｓ，　１Ｈ）、１３．１８（ｓ，　１Ｈ）、７．９
９（ｄ，　１Ｈ）　、７．７５（ｔ，　１Ｈ）　、７．
３６（ｄ，　１Ｈ）　、７．３（ｍ，　１５Ｈ）　、６
．８１（ｓ，　１Ｈ）　、６６７（ｄ，　１Ｈ）、５．
７６（ｄｄ，　１Ｈ）、５．４８（ｓ，　１Ｈ）　、５
．２２（ｍ，　２Ｈ）　、４．８６（ｄ，　１Ｈ）　、
４．７（ｍ，　２Ｈ）、４．５５（ｓ，　１Ｈ）　、４
．０８（ｍ，　１Ｈ）　、４．０４（ｓ，　３Ｈ）　、
３．７５（ｑ，　１Ｈ）　、３．５（ブロード、３Ｈ）
　、３．３−２．８５（ｍ，　４Ｈ）　、２．５８（ｄ
，　１Ｈ）　、２．３４−２．１２（ｄｄ，　２Ｈ）　
、１．２６（ｄ，　３Ｈ）． １３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１８６．９　、１８６
．５　、１７１．３　、１６５．２　、１６０．９　、
１６０．６　、１５６．１　、１５５．５　、１５４．
９　、１３９．０　、１３８．９　、１３５．７　、１
３５．２　、１３３．７　、１３３．５　、１３０．４
　、１２９．３−１２６．８（多重ピーク）　、１２４
．８　、１２０．６　、１１９．７　、１１８．４　、
１１１．４　、１１１．２　、１００．６　、７９．６
、６９．５、６９．０、６７．２、６５．４、６２．８
、５９．１、５７．６、５６．５、４７．１、４３．１
、３５．５、３３．８、２９．８、２９．６、２６．０
、１６．７．　ＦＡＢ　ＭＳ：〔Ｍ＋Ｋ　〕＋　ａｔ　
ｍ／ｅ　１１２３　微量分析：計算値　（Ｃ５７Ｈ５３
Ｎ３Ｏ１７Ｓ・５．３Ｈ２Ｏ）　：Ｃ　、５８．０４　
；Ｈ　、５．４３；Ｎ　、３．５６．　 測定値：Ｃ　、５７．９９　；Ｈ　、４．６６；Ｎ　、
３．６０．　（Ｃ）ＡＤＲ−ｃｅｐｈの製造 ジフェニルメチルＡＤＲ−ｃｅｐｈ（１．０ｇ，０．９
２２ミリモル）及びアニソール（２．５ｍｌ）の塩化メ
チレン（１０ｍｌ）中のかくはんした冷（氷／Ｈ２Ｏ　
浴）溶液にトリフルオロ酢酸（２．５ｍｌ）を速やかに
加えた。かくはんを１．０分間続け、次いで溶液を、氷
を含む水のかくはん混合物中へ注加した。ｐＨを速やか
に希ＮａＯＨ水溶液１当量以下の添加、次いで希ＮａＨ
ＣＯ３水溶液の添加で７．４に上げた。混合物を酢酸エ
チルで洗浄した。水層をけいそう土に通して濾過した。 濾液をマイケル−ミラー（Ｍｉｃｈｅｌ−Ｍｉｌｌｅｒ
）ＨＰＬＰＬＣカラム（２２×３００ｍｍ）〔エース・
グラス（ＡＣＥ　Ｇｌａｓｓ）から購入〕上へポンプ送
りした。カラムはマイケルほか（Ｋ．Ｈ．Ｍｉｃｈｅｌ
　ａｎｄ　Ｒ．Ｆ．Ｍｉｌｌｅｒ）により設計され（米
国特許第４，１３１，５４７　号）　、予め１０％アセ
トニトリルを含む０．０２Ｍリン酸アンモニウム（ｐＨ
６．５）緩衝液で平衡させたパーチシル（Ｐａｒｔｉｓ
ｉｌ）　Ｐｒｅｐ４０　　ＯＤＳ−３〔ワットマン・ケ
ミカル・セパレーション（Ｗｈａｔｍａｎ　Ｓｅｐａｒ
ａｔｉｏｎ，　Ｉｎｃ．，　Ｃｌｉｆｔｏｎ，　Ｎ．Ｊ
．）〕を含む。カラムをこの緩衝液１５０ｍｌで溶離し
、次いで４０％アセトニトリルを含む緩衝液の溶液で溶
離すると表題の化合物が不連続赤色バンドとして溶離し
た。生成物を含む画分を一緒にし、Ｈ２Ｏ　で希釈した
。水溶液を酢酸エチルで層化させ、ｐＨを希ＨＣｌ　の
添加で３．４に低下させた。酢酸エチル層をＨ２Ｏ　、
飽和ＮａＣｌで順次洗浄し、次いでＮａ２ＳＯ４上で乾
燥した。酢酸エチルを除去すると表題の化合物（１０２
ｍｇ）が明橙色固体として残った。水性洗液を一緒にし
てｐＨを希ＨＣｌ　で２．５に低下させた。前記のよう
に酢酸エチルで再び抽出すると表題の化合物の追加収量
（２５ｍｇ）が得られた。分析ＨＰＬＣは各画分が同じ
面積パーセント純度（＞９９）を有することを示した。 【０１１７】ＨＰＬＣ：（保持時間＝８．１４分）。ウ
オーターズ（Ｗａｔｅｒｓ）　Ｃ１８ラジアルパックカ
ートリッジ。６０％ポンプＡ（０．０５Ｍ，ｐＨ６．５
リン酸アンモニウムプラス５％　ＣＨ２ＣＮ）　及び４
０％ポンプＢ（８０％　ＣＨ２ＣＮ−２０％Ｈ２Ｏ）２
．０ｍｌ／分。検出２５４ｎｍ。１ＨＮＭＲ　：（ＤＭ
ＳＯ−ｄ６，　３００ＭＨｚ）　δ１３．９９（１Ｈ，
　ｓ）、１３．２３（１Ｈ，　ｓ）、９．０５（１Ｈ，
　ｄ）　、７．９０−７．８６（２Ｈ，　ｍ）、７．６
０（１Ｈ，　ｄｄ）、７．２７−７．１９（５Ｈ，　ｍ
）、６．９１（１Ｈ，　ｄ）　、５．６０（１Ｈ，ｄｄ
）、５．４２（１Ｈ，　ｓ）　、５．２０（１Ｈ，　ｓ
）　、５．０１（１Ｈ，　ｄ）　、４．８８（３Ｈ，　
ｍ）　、４．７３（１Ｈ，　ｍ）　、４．５７（３Ｈ，
　ｍ）　、４．１４（１Ｈ，　ｍ）　、３．９５（３Ｈ
，　ｓ）　、３．６７（１Ｈ，　ｍ）　、３．５６−３
．３３（６Ｈ，　ｍ）、２．９６（１Ｈ，　ｄ）　、２
．８７（１Ｈ，　ｄ）　、２．１８（１Ｈ，　ｄ）　、
２．０７（１Ｈ，　ｄｄ）、１．８２（１Ｈ，　ｍ）　
、１．４５（１Ｈ，　ｍ）　、１．１１（３Ｈ，　ｄ）
．１３Ｃ　ＮＭＲ　：（ＤＭＳＯ−ｄ６、３６０ＭＨｚ
）　δ２１３．８　、１８６．６　、１８６．４　、１
７０．９　、１６４．７　、１６２．８　、１６０．８
　、１５６．１　、１５５．１　、１５４．５　、１３
６．２　、１３５．８　、１３５．６　、１３４．７　
、１３４．１　、１２９．０　、１２８．２　、１２６
．４　、１２６．０　、１２４．５　、１２０．１　、
１１９．８　、１１９．０　、１１０．８　、１１０．
７　、１００．３　、７５．０、６９．９、６８．０、
６６．７、６３．７、６２．５、５９．１、５７．４、
５６．６、４７．２、４１．６、３６．７、３２．１、
２９．８、２５．４、１７．０．　質量スペクトル：（
正イオンＦＡＢ、ＮＯＢＡ＋ＫＩ）ｍ／ｚ　２５６（Ｍ
＋Ｋ）＋　。 【０１１８】１．２．３　　８−オキソ−７−フェニル
アセトアミド−３−〔（Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−メルファラニ
ル）メチル〕−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．
０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸４−メトキシベ
ンジル 【０１１９】 【化３３】 【０１２０】３−クロロメチル−８−オキソ−７−フェ
ニルアセトアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．
２．０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸４−メトキ
シベンジル（０．９４６ｇ，２．０ミリモル）及びヨウ
化ナトリウム（１．２０ｇ，８．０ミリモル）のアセト
ン９０ｍｌ中の懸濁液を室温で２時間かくはんした。溶
媒をロータリーエバポレーションにより除去した。残留
物を塩化メチレン７５ｍｌ中に溶解し、メタ重亜硫酸ナ
トリウム（５％）３×５０ｍｌ及び水５０ｍｌで抽出し
た。生成物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、ロータリーエバ
ポレーションにより濃縮乾固すると相当する３−ヨード
メチルセファロスポリンエステル（７５８ｍｇ，６７％
）が得られた。このセファロスポリンヨージド（６７８
ｍｇ，１．２ミリモル）を次いでＤＭＦ２５ｍｌ中でＮ
ａＨＣＯ３（１０１ｍｇ，１．２ミリモル）及びＮ−ｔ
−ＢＯＣ−メルファラン（４８６ｍｇ，１．２ミリモル
）とともに室温で３時間かくはんした。溶媒をロータリ
ーエバポレーションにより除去した後、残留物を酢酸エ
チル７５ｍｌ中に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３３×５０ｍ
ｌ及び水５０ｍｌで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上
で乾燥し、ロータリーエバポレーションにより濃縮し、
フラッシュクロマトグラフィー操作により精製した。初
めの操作において溶離を２″×８″シリカゲルカラム上
でＣＨＣｌ３　／ＣＨ３ＯＨ（９７：３）で行なった。 第２操作において部分精製された生成物を同サイズのシ
リカゲルカラム上でＣＨＣｌ３（５００ｍｌ）、次にＣ
ＨＣｌ３　／ＣＨ３ＯＨ（９７：３，４００ｍｌ）で溶
離した。適当な画分を一緒にして溶媒をロータリーエバ
ポレータにより部分濃縮した。エーテル／ヘキサン溶液
の添加により固体を沈殿させた。固体を濾過し、高真空
下に乾燥した。生成物の収量は２００ｍｇ（１９．５％
）であった。 【０１２１】ＦＡＢ　ＭＳ：ＭＨ＋　８５５；観察され
たＭＷ８５４。１Ｈ　ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）　δ：７．
５−７．２（ｍ）、７．０（ｄ）、６．９（ｄ）、６．
６（ｄ）、６．０（ｔ）、５．８（ｄｄ）　、５．２（
ｓ）、４．９（ｄ）、４．３２（ｑ）　、３．８（ｓ）
、３．８−３．４（ｍ）、１．４（ｓ）．　１．２．４
　　８−オキソ−７−フェニルアセトアミド−３−〔（
Ｎ−ｔ−ＢＯＣ−メルファラニル）メチル〕−５−チア
−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−
２−カルボン酸ジフェニルメチル 【０１２２】 【化３４】 【０１２３】３−クロロメチル−８−オキソ−７−フェ
ニルアセトアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．
２．０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸ジフェニル
メチル（１．０３８ｇ，２．０ミリモル）及びヨウ化ナ
トリウム（１．２０ｇ，８．０ミリモル）のアセトン２
５ｍｌ中の懸濁液を室温で２時間かくはんした。溶媒を
ロータリーエバポレーションにより除去した。残留物を
酢酸エチル７５ｍｌ中に溶解し、ブライン３×７５ｍｌ
で抽出した。生成物をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、ロータ
リーエバポレーションにより濃縮乾固すると相当する３
−ヨードメチルセファロスポリンエステルが得られた。 このセファロスポリンヨージド（６１０ｍｇ，１．０ミ
リモル）を次いでＤＭＦ１０ｍｌ中でＮａＨＣＯ３（８
４ｍｇ，１．０ミリモル）及びＮ−ｔ−ＢＯＣ−メルフ
ァラン（４０５ｍｇ，１．０ミリモル）とともに室温で
２日間かくはんした。溶媒をロータリーエバポレーショ
ンにより除去した後、残留物を酢酸エチル１００ｍｌ中
に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ３３×７５ｍｌ及び水５０ｍ
ｌで抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４上で乾燥し、ロー
タリーエバポレーションにより濃縮し、２″×９″シリ
カゲルカラム上のフラッシュクロマトグラフィーにより
、次の溶離勾配：（１）ＣＨＣｌ３　／ＣＨ３ＯＨ（９
５：５，６００ｍｌ）、（２）ＣＨＣｌ３　／ＣＨ３Ｏ
Ｈ（９０：１０，４００ｍｌ）、及び（３）ＣＨＣｌ３
　／ＣＨ３ＯＨ（８０：２０，６００ｍｌ）、で精製し
た。適当な画分を一緒にして溶媒をロータリーエバポレ
ーションにより濃縮した。固体をヘキサンで摩砕するこ
とに分離させた。それを濾過し、高真空下に乾燥した。 生成物の収量は１１７ｍｇ（１３％）であった。 【０１２４】ＦＡＢ　ＭＳ：観察されたＭＷ９００。１
Ｈ　ＮＭＲ：７．５−７．２（ｍ）、６．９（ｄ）、６
．６（ｄ）、５．６（ｄｄ）　、５．２（ｄ）、３．７
−３．５（ｍ）、３．１５（ｑ）　、１．４（ｓ）．　
１．２．５　　８−オキソ−７−フェニルアセトアミド
−３−（Ｎ７　−マイトマイシンＣ）−５−チア−１−
アザビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−２−カ
ルボン酸 【０１２５】 【化３５】 【０１２６】３−アジドメチル−８−オキソ−７−フェ
ニルアセトアミド−５−チア−１−アザビシクロ〔４．
２．０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸〔１００ｍ
ｇ，コッカー（Ｃｏｃｋｅｒ，　Ｊ．Ｄ．）　ほか、ジ
ャーナル・オブ・ザ・ケミカル・ソサイエティー，１９
６５，５０１５，５０２７〜７０２８に従って製造〕の
７０％ＨＣｌＯ４（１００μｌ）を含むエタノール（１
０ｍｌ）中の溶液をＰｔ（２０ｍｇ）上で３５ｐｓｉ　
で還元した。１８時間後、ｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ
２Ｏ（４：１：１）を溶離剤としたシリカゲルＴＬＣは
第一級アミンに対するニンヒドリン試験により陽性であ
った単一のより極性の生成物の形成を示した。ジイソプ
ロピルエチルアミン（１７５μｌ）を加え、揮発性物質
を真空で除去した。残留物をＭｅＯＨ（１０ｍｌ）中に
懸濁させ、ジイソプロピルエチルアミン（１００μｌ）
及びマイトマイシンＡ（７０ｍｇ）を加えた。暗色混合
物を窒素下に１８時間かくはんした。前と同様の溶媒系
によるシリカゲルＴＬＣは反応が終り、マイトマイシン
Ａよりも極性の化合物の形成を示した。暗色反応混合物
をＣ−１８シリカゲル（２ｇ）上に吸着させ、乾燥粉末
を、水で平衡させたＣ−１８カラム（１５ｃｍ×２．５
ｃｍ）上にのせ、水（１５０ｍｌ）及びＭｅＯＨ：Ｈ２
Ｏ（３：７）で溶離した。マイトマイシンのセファロス
ポリン誘導体を含む画分を一緒にして真空で蒸発させる
と表題の化合物が青色固体（６０ｍｇ）として得られた
。 【０１２７】表題の化合物（０．３ｍｇ）のＰＢＳ（１
ｍｌ）中の帯灰青色溶液にＢＣＰＩＩ〔バシラス・セレ
ウス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃｅｒｅｕｓ）ペニシリナー
ゼ、１０μｌ、タンパク質濃度＝４．１ｍｇ／ｍｌ〕を
加えた。直ちに色が青色に変った。ＭｅＯＨ：ＣＨＣｌ
３（１：９）及びｎ−ＢｕＯＨ：ＡｃＯＨ：Ｈ２Ｏ（前
記参照）によるＳｉＯ２ＴＬＣはマイトマイシンＣへの
完全な転化を示した。 【０１２８】１．２．６　　３−〔〔〔〔４−ビス（２
−クロロエチル）アミノ〕フェニル〕アミノカルボキシ
ルオキシ〕メチル〕−７−グルタロイルアミノ−８−オ
キソ−５−チア−１−アザビシクロ〔４．２．０〕オク
ト−２−エン−２−カルボン酸。 【０１２９】 【化３６】 【０１３０】７−グルタロイルアミノ−３−ヒドロキシ
メチル−８−オキソ−５−チア−１−アザビシクロ〔４
．２．０〕オクト−２−エン−２−カルボン酸（米国特
許第３，９１２，５８９　号中に開示）が、該酸を０．
１Ｍ−Ｅｔ３ＮＨＯＡｃ（４ｍｌ）中に溶解し、溶液を
、同様の緩衝液と平衡させたＣ−１８（１００ｇ，２４
ｃｍ×３ｃｍ）のカラムにのせることにより相当するビ
ストリエチルアンモニウム塩に転化させる。カラムを窒
素圧下に０．１Ｍ−Ｅｔ３ＮＨＯＡｃで溶離し、所望の
塩を含む画分を一緒にして真空で蒸発させ、Ｐ２　Ｏ５
　上で真空下に乾燥した後７−グルタロイルアミノ−３
−ヒドロキシメチル−８−オキソ−５−チア−１−アザ
ビシクロ〔４．２．０〕オクト−２−エン−２−カルボ
ン酸のビストリエチルアンモニウム塩が淡黄色ガム状物
質として得られる。この物質をそのまゝ次のフェニレン
ジアミンマスタードからのイソシアナートとのカップリ
ングに用いた。 【０１３１】フェニレンジアミンマスタード塩酸塩（９
６９ｍｇ，３．６ミリモル）の無水ＴＨＦ（４０ｍｌ）
中のＮ２　下に０℃で磁気かくはんした緑色懸濁液にジ
イソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ，６３０μｌ，３
．６ミリモル）を加えた。１０分後にホスゲンのトルエ
ン中の溶液（１．９Ｍ，１．９５ｍｌ）を滴加した。０
℃で１時間後、ＥｔＯＡｃ　：ヘキサン（１：４）によ
るＳｉＯ２ＴＬＣは反応が終り、主要低極性生成物とし
てイソシアナートが形成したことを示した。 【０１３２】前記のビストリエチルアンモニウム塩（１
．６４ｇ）の無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のＮ２　下、０
℃の溶液にＤＩＥＡ（１．６ｍｌ）を加えた。５分後イ
ソシアナート（前記参照）の氷冷溶液を薄い流れでＤＭ
Ｆ溶液中へカニューレで送った。橙色溶液を０℃で３時
間かくはんした。反応混合物の見掛けｐＨは５であり、
シリカゲルＴＬＣ〔　ＣＨＣｌ３：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ
＝８９：１０：１）による多重展開〕によりそれ以上転
化が起らなかった。反応混合物をアセトニトリル（３０
ｍｌ）で希釈した。Ｃ−１８シリカゲル１０ｇを加えた
。揮発性物質を真空で除去した。残留物をＣ−１８カラ
ム（１２×２ｃｍ）にのせ、水中１％酢酸中の３０％、
４０％及び５０％アセトニトリルで溶離した。所望の化
合物を含む画分を一緒にして真空で蒸発させると淡黄色
ガム状物質（５００ｍｇ）が得られた。この物質に　Ｅ
ｔＯＡｃ（６ｍｌ）を加えると黄色溶液が形成され、そ
れから表題の化合物が白色フラフ状固体（３５０ｍｇ）
として晶出した。高分解能ＭＳ：Ｍ＋　＝６０２．１０
２２（測定値），６０２．１００５（計算値）。 【０１３３】１Ｈ　ＮＭＲ　（ＤＭＳＯ−ｄ６）：　　
９．４２　（Ｓ，１Ｈ），　８．８３　（ｄ，１Ｈ，　
ＮＨ，　Ｊ＝９　Ｈｚ），　７．２６　（ｄ，２Ｈ，　
Ａｒ−Ｈ，　Ｊ＝９　Ｈｚ），　６．６８　（ｄ，２Ｈ
，　Ａｒ−Ｈ，　Ｊ＝９　Ｈｚ），　５．６６　（ｄｄ
，　２Ｈ，　７−Ｈ，　Ｊ＝６　Ｈｚ及びＪ＝９　Ｈｚ
），　５．１０　（ｄ，１Ｈ，　６−Ｈ，　Ｊ＝６　Ｈ
ｚ），　４．８７　（ｄｄ，　２Ｈ，　３−ＣＨ２Ｏ−
，　Ｊ＝１２　Ｈｚ），　３．６７　（Ｓ，８Ｈ，（Ｎ
ＣＨ２ＣＨ２Ｃｌ）２），　３．５８　（ｄｄ，２Ｈ，
　２−Ｈ，　Ｊ＝１８　Ｈｚ），　２．２１　（ｍ，　
４Ｈ，　２　’　及び４’−Ｈ），　１．７１　（ｍ，
　２Ｈ，　３’　−Ｈ）　。 ２．生物学的評価 ２．１　　物質の調製 ２．１．１　　Ｂ．セレウスβ−ラクタマーゼの精製及
び性質 市販Ｅ．コリ及びＢ．セレウスβ−ラクタマーゼは他の
タンパク質で汚染され、従って特異的活性は低いもので
あった。ＳＤＳ−ＰＡＧＥによるＢ．セレウスβ−ラク
タマーゼ〔シグマ・ケミカル（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉ
ｃａｌ　Ｃｏ．）製〕の分析は３０ＫＤにおける主バン
ド及び２５ＫＤにおける少バンドの存在を示した。２タ
ンパク質の部分的分離をカチオン交換カラムクロマトグ
ラフィーにより行なった。 【０１３４】セファロスポリン−マスタードを基質とし
て用いたそれらの活性の分析は２５ＫＤにおける少成分
が加水分解反応によるものであったことを示した。該タ
ンパク質を、初めに熱変性次いでモノ（Ｍｏｍｏ）　Ｓ
カチオン交換カラム〔ファルマシア（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ）製〕上のクロマトグラフィーを含むディビス（Ｄａ
ｖｉｅｓ）　ほか、バイオケミカル・ジャーナル（Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｉ．）　，１４３：１１５〜１２７，１９
７４の記載に類似する方法で分離した。 【０１３５】２５ＫＤ酵素をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより、
示したように高度に精製した。ＥＤＴＡ（２．５ｍＭ）
がＣＭを基質として用いる酵素活性を完全に阻害した。 これらの結果はＢ．セレウスβ−ラクタマーゼ（ＩＩ）
としてのこの酵素の分類を支持した。ブッシュ（Ｂｕｓ
ｈ）　、アンチミクロバイアル・エージェンツ・アンド
・ケモセラピー，３３：２５９，１９８９参照。Ｂ．セ
レウスβ−ラクタマーゼはＣＭを２５μＭのＫｍ及び２
５０μｍｏｌ　・ｍｉｍ　−１　ｍｇ　−１のＶｍａｘ
　で加水分解した。１．４μｇ／ｍｌの濃度で、精製Ｂ
．セレウスβ−ラクタマーゼ（ＩＩ）がＣＭの細胞毒活
性をＰＤＭに対して観察されたレベルに高めた（図８）
。２．１．２　　β−ラタクマーゼの抗体に対する接合
リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ，ｐＨ７．４）中のモノク
ローナル抗体Ｌ６（１〜１０ｍｇ／ｍｌ）の溶液をＳＭ
ＣＣ〔ピアス・ケミカル（Ｐｉｅｒｃｅ　Ｃｈｅｍｉｃ
ａｌ　Ｃｏ．）製、ＤＭＦ中３ｍＭ〕中に０．０１５ｍ
Ｍに調製した。３０分後に溶液をＧ−２５セファデック
ス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）　カラムにのせ、４ＸＰＢＳで
溶離する。 【０１３６】１０ｍＭリン酸塩／２００ｍＭ−ＮａＣｌ
：ｐＨ７．５（１〜１０ｍｇ／ｍｌ）中の４℃における
Ｂ．セレウスβ−ラクタマーゼ（シグマ・ケミカル製）
をイミノチオラン（ピアス・ケミカル製，０．５Ｍホウ
酸ナトリウム中１６．５ｍＭ，ｐＨ８．５）を、最終イ
ミノチオラン濃度が１．５ｍＭになるように加えた。反
応を４℃で９０分間進行させ、タンパク質を上記のよう
に精製した。 【０１３７】２つの化学修飾したタンパク質を１：１モ
ル比で２３℃で１時間反応させた。反応性基は２−アミ
ノエタンチオール（０．０１〜１ｍＭ最終濃度）、次い
で１０分後にＮ−エチルマレイミド又はヨードアセトア
ミド（０．０１〜１．１ｍＭ最終濃度）を添加すること
によりブロックした。接合体をＳ−３００セファクリル
（Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ）カラム（ファルマシア製；溶離
剤としてＰＢＳ）上のサイズ排除クロマトグラフィー及
び次のモノＳカチオン交換カラム（ファルマシア製、Ｐ
ＢＳ中で適用，高塩で溶離）上のイオン交換クロマトグ
ラフィーを含む２段階操作で精製した。この操作におけ
る接合体（Ｍａｂ　／β−ラクタマーゼ比１：１）の収
率は１５〜３０％であった。 ２．２　　セファロスポリン−細胞毒プロドラッグの酵
素の加水分解 ２．２．１　　β−ラクタマーゼによるＣＭの加水分解
若干の市販β−ラクタマーゼを、セファロスポリンマス
タード誘導体、ＣＭ、を用いて活性について選抜した。 ＣＭを加水分解するこれらの誘導体の能力はＨＰＬＣ又
はＵＶ／ｖｉｓ　分光測光的分析によりモニターした。 Ｂ．セレウスβ−ラクタマーゼ（シグマ・ケミカル製）
及びＥ．コリβ−ラクタマーゼ〔ベーリンガー・マンハ
イム・バイオケミカルズ（Ｂｏｅｒｉｎｇｅｒ　ｍａｎ
ｎｈｅｉｍ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ　）製〕の部分
精製試料はＣＭを加水分解してナイトロジェンマスター
ド、ＰＤＭ、を遊離することができた（図６）。 【０１３８】３７℃におけるＰＢＳ中のＣＭ（５０μＭ
）の溶液にＢ．セレウス又はＥ．コリβ−ラクタマーゼ
の市販試料（３μｇ全タンパク質／ｍｌ）を加えた。分
割量（１００μｌ）を４℃のメタノール（１００μｌ）
に加えることによりクエンチし、沈殿したタンパク質を
遠心分離により除去した。試料（１００μｌ）をＩＢＭ
逆相Ｃ−１８カラム（４．６×２５０ｍｍ）及び次の勾
配条件：５０〜１００％緩衝液Ａ対緩衝液Ｂ（緩衝液Ａ
はリン酸でｐＨ２．３に緩衝した０．０８％水性ジエチ
ルアミンであり；緩衝液Ｂは９０％アセトニトリル、１
０％緩衝液Ａである）を１ｍｌ／分で１５分にわたり用
いてＨＰＬＣにより分析した。画分を２６６ｎｍでモニ
ターした。２．２．２β−ラクタマーゼ及びＬ６−β−
ラクタマーゼ接合体によるＡＤＲ−ｃｅｐｈの加水分解
Ｂ．セレウスからの精製β−ラクタマーゼ及びラクタマ
ーゼ−Ｌ６接合体の、ＡＤＲ−ｃｅｐｈからのアドリア
マイシンの遊離を触媒する能力をヒト血漿中で３７℃で
評価した。 【０１３９】β−ラクタマーゼ及びラクタマーゼ−Ｌ６
接合体の貯蔵溶液を０．０５Ｍヘペス（Ｈｅｐｅｓ）緩
衝液（ｐＨ７）中に調製した。これらの貯蔵溶液の分割
量を３７℃恒温槽中のヒト血漿中のＡＤＲ−ｃｅｐｈの
溶液に加えた。 ＡＤＲ−ｃｅｐｈの最終濃度はβ−ラクタマーゼ実験に
おいて５７２μｇ／ｍｌ、Ｌ６−ラクタマーゼ実験にお
いて８９６μｇ／ｍｌであり；β−ラクタマーゼ及びＬ
６−ラクタマーゼ接合体の最終濃度はそれぞれ０．４５
μｇ／ｍｌ及び５．４μｇ／ｍｌであった。一部を定期
的に抜きとり、２部の冷メタノール（４℃）に加えた。 沈殿したタンパク質を遠心分離により除去した。上澄み
をウオターズ・アソシエイツ（Ｗａｔｅｒｓ　Ａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｓ）Ｃ１８ラジアルパックカートリッジ（８
×１００ｍｍ）を用いてＨＰＬＣにより分析した。カラ
ムを、５％アセトニトリルを含む０．０５Ｍリン酸アン
モニウム（ｐＨ６．５）６０％及びアセトニトリル−水
（８０：２０）の混合物４０％の移動相で２．０ｍｌ／
分で溶離した。ピークをＵＶにより２５４ｎｍで検出し
た。これらの検定においてアドリアマイシン及びＡＤＲ
−ｃｅｐｈに対するそれぞれの保持時間は３．８分及び
７．５分であった。 【０１４０】図１０はＡＤＲ−ｃｅｐｈをβ−ラクタマ
ーゼにさらした時間に対してプロットしたＡＤＲ−ｃｅ
ｐｈ及びアドリアマイシンのＨＰＬＣピーク面積を示し
、それはＡＤＲ−ｃｅｐｈのＢ．セレウスβ−ラクタマ
ーゼで有効に加水分解され、アドリアマイシンの速やか
な遊離を生ずることを示す。同様に、図１１はラクタマ
ーゼ−Ｌ６接合体もまた、用いたプロドラッグ及び酵素
の濃度で１５分の半減期でＡＤＲ−ｃｅｐｈからアドリ
アマイシンを有効に遊離することを示す。 【０１４１】選んだβ−ラクタマーゼのＡＤＲ−ｃｅｐ
ｈに対する比活性を試験した。これらの酵素はＢ．セレ
ウスβ−ラクタマーゼ、ラクタマーゼ−Ｌ６接合体、Ｅ
．クロアカエ（Ｅ．ｃｌｏａｃａｅ）からのシグマペニ
シリナーゼ（シグマ・ケミカル製）及びＥ．クロアカエ
からのＰ９９セファロスポリナーゼであった。酵素はす
べて希釈して０．２０±０．０１ｍｇ／ｍｌのタンパク
質濃度（β−ラクタマーゼに関し）を与えた。検定は２
５℃で０．０５Ｍリン酸塩緩衝液、ｐＨ７．０、に対し
て分光測光的に行なった。セファロリジンを酵素に対す
る参照基質として用いた。 【０１４２】これらの実験の結果は表１中に示される。 Ｐ９９セファロスポリナーゼはセファロリジン及びＡＤ
Ｒ−ｃｅｐｈの両方に対して最高の比活性を有した。Ｌ
６−ラクタマーゼ接合体はＢ．セレウスβ−ラクタマー
ゼ単独よりわずかに活性であり、おそらく後者の酵素が
検定のために希釈されねばならず、それにより希溶液中
の活性の低下の可能性を考慮しなければならなかったた
めであろう。シグマ「ペニシリナーゼ」は全調製物の最
低の活性を有した。この酵素はＰ９９酵素と同様の等電
点を有し、この２酵素が同一であることを示唆する。活
性の差異はおそらく２調製物間の純度の差異のためであ
ろう。 【０１４３】速度論パラメーターがＬ６−ラクタマーゼ
接合体及びＰ９９セファロスポリナーゼに対して測定さ
れ、表２中に示される。Ｖｍａｘ　　はＰ９９酵素が３
．５倍高かった。しかしＰ９９酵素は高Ｋｍ値を有し、
２酵素の加水分解効率（Ｖｍａｘ　／Ｋｍ）は単に２倍
異なったにすぎない。従って２酵素はそれらの加水分解
性において非常に類似する。 【０１４４】表１．β−ラクタマーゼによるセファロス
ポリン基質の加水分解 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　基　　質　　　　酵　　素　　　　　　　　
　　　　　　（１００μｇ／ｍｌ）　　μｍｏｌ　／分
／μｇタンパク質Ｂ．セレウス　　　　　　　　　　　
　　　セファロリジン　　　　　　　　　　　　０．０
３８β−ラクタマーゼ　　　　　　　　　　ＡＤＲ−ｃ
ｅｐｈ　　　　　　　　　　　　　　０．０１６Ｌ６−
ラクタマーゼ　　　　　　　　セファロリジン　　　　
　　　　　　　　０．０４５（Ｂ．セレウス）接合体　
　　　ＡＤＲ−ｃｅｐｈ　　　　　　　　　　　　　　
０．０２１シグマペニシリナーゼ　　　　　　セファロ
リジン　　　　　　　　　　　　０．０２６Ｅ．クロア
カエから　　　　　　　　ＡＤＲ−ｃｅｐｈ　　　　　
　　　　　　　　　０．００３０Ｐ９９セファロスポリ
ナーゼ　　セファロリジン　　　　　　　　　　　　０
．３０Ｅ．クロアカエから　　　　　　　　ＡＤＲ−ｃ
ｅｐｈ　　　　　　　　　　　　　　０．０６０　　表
２．ＡＤＲ−ｃｅｐｈに対する加水分解パラメーター　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
Ｋｍ　　　　　　　　　　Ｖｍａｘ　　　　　　　　　
　　Ｖｍａｘ　／Ｋｍ　　　　酵　　素　　　　　　　
　　　　　　　（μＭ）　　μｍｏｌ　／分／μｇ　　
μｍｏｌ　／分／μｇ　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　タンパク質　
　　　　　　　タンパク質／ｍＭＳ　Ｌ６−ラクタマー
ゼ　　　　　　１２０　　　　　　　　０．０４７　　
　　　　　　　　０．４０（Ｂ．セレウス）接合体 Ｐ９９　　　　　　　　　　　　　　　　　　２００　
　　　　　　　０．１６４　　　　　　　　　　０．８
２２．３　　追加生物学的評価 ２．３．１　　ＣＭのβ−ラクタマーゼによる試験管内
細胞毒性 ＣＭ及びＰＤＭの細胞毒性効果をヒト肺腺癌細胞系Ｈ２
９８１を用いてモニターした。細胞を〔１５％ウシ胎児
血清をもつイスコフ（Ｉｓｃｏｖｅ）　の変性ダルベッ
コ培地（ＩＭＤＭ）中に〕９６ウエルマイクロタイター
プレート中へ１００μｌＩＭＤＭ中、８０００細胞／ウ
エルに塗布し、３７℃で一夜付着させた。５０μｌＩＭ
ＤＭ中の酵素、次に５０μｌＩＭＤＭ中の薬物ＰＤＭ又
はＣＭを最終酵素濃度が３μｇ粗酵素／ｍｌ又は１．４
μｇ純酵素／ｍｌであるようにウエルに加えた。１時間
後、細胞をＩＭＤＭで３回洗浄し、ＩＭＤＭ２００μｌ
を各ウエルに加え、インキュベーションを３７℃で１７
時間続けた。 培地を除き、〔　３Ｈ〕チミジン（１μＣｉ／ウエル）
を含むＩＭＤＭ２００μｌを加え、６時間後に細胞を−
７０℃に凍結し、融解し、ガラス繊維ディスク上に収集
した。細胞毒性効果はＤＮＡ中に取込まれた　３Ｈ−チ
ミジンの量を不処理対照に対して測定することにより決
定した。 【０１４５】ＣＭ（ＩＣ５０約１００μＭ）はＰＤＭ（
ＩＣ５０約１μＭ）よりはるかに低い細胞毒性であった
（図７）。Ｂ．セレウス及びＥ．コリからのβ−ラクタ
マーゼはＣＭの活性を５０〜１００倍高めた。これはお
そらく酵素によるＣＭの加水分解、及び次のＰＤＭの遊
離のためであろう。２．３．２　　ＣＭのＬ６−β−ラ
クタマーゼ接合体による試験管内細胞毒性抗体−β−ラ
クタマーゼ接合体とともに投与したＣＭの細胞毒性効果
を実施例２．３．１中にＣＭ及びＰＤＭに対して記載し
たようにモニターした。Ｈ２９８１肺細胞を前記のよう
に調製し、次いで１５％ウシ胎児血清を含むＩＭＤＭ中
で３７℃で１時間Ｌ６−β−ラクタマーゼ接合体にさら
し、２回洗浄し、次いで実施例２．３．１中に記載した
ようにＣＭで処理した。実施例２．３．１中に記載した
ようにＣＭ又はＰＤＭで処理した細胞を対照として用い
た。図９に示されるデータはＣＭと抗体−β−ラクタマ
ーゼ接合体との投与の高い細胞毒性効果を示す。２．３
．３　　ＣＭ生体内安定性及び毒性マウス血漿中の３７
℃におけるＣＭ及びＰＤＭの安定性を、それらの消費の
ＨＰＬＣ定量化により測定した。マウス血漿又はＩＭＤ
Ｍ細胞増殖培地中のＰＤＭ又はＣＭ（０．５ｍＭ）を３
７℃でインキュベートし、クエンチし、前記のようにＨ
ＰＬＣにより分析した。ＰＤＭ（ｔ１／２　＝２０分）
はマウス血漿中でＣＭ（１５０分後１２％反応）より著
しく反応性であった。安定性における１０倍の差が組織
培養に用いた培地中で観察された（ＰＤＭ及びＣＭに対
するｔ１／２　はそれぞれ３分及び３０分）。 【０１４６】ＰＤＭ及びＣＭの毒性効果をＢａｌｂ　Ｃ
ｎｕ／ｎｕマウス中で測定した。薬物を２４時間間隔を
置いた投薬でｉ．ｖ．投与し、処置を１週間後に繰返し
た。これらの条件のもとで、ＰＤＭは５０μｇ／注射で
毒性であり、許容される最大値は約３８μｇ／注射であ
った。９００μｇ／注射の高い用量に対しＣＭに対して
毒性が観察されなかった。モル基準でこれは毒性に１１
倍以上の差に相当した。２．３．４　　ＡＤＲ−ｃｅｐ
ｈの安定性実施例２．２．２中に記載したと同様のＨＰ
ＬＣ検定を用い、ラット血漿、ｐＨ７．４の緩衝液、及
びヒト血漿中のＡＤＲ−ｃｅｐｈの３７℃におけるそれ
ぞれの半減期は８、２０及び≧１２時間である（図１２
）。 【０１４７】従って、新規セファロスポリンプロドラッ
グ及びそれを用いる方法が開示された。主題発明の好ま
しい態様がかなり詳細に記載されたけれども、自明の変
更を特許請求の範囲に記載された発明の精神及び範囲か
ら逸脱することなく行なうことができると思われる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明による新規プロドラッグ構造を示す化学
式であり、Ｑはフェニルアセチル又はチエニルアセチル
であり、ｎは１又は２である。
【図２】本発明による新規プロドラッグ構造を示す図１
の続きである。
【図３】本発明による新規プロドラッグ構造を示す図１
の続きである。
【図４】本発明による新規プロドラッグ構造を示す図１
の続きである。
【図５】代表的セファロスポリンマスタードプロドラッ
グ（ＣＭ）及びこのプロドラッグの活性細胞毒物質、フ
ェニレンジアミンマスタード（ＰＤＭ）への転化を示す
図である。
【図６】Ｅ．コリ及びＢ．セレウスβ−ラクタマーゼの
粗試料により触媒されたＣＭの加水分解の速度論を示す
グラフである。
【図７】単独で投与されたＣＭ及びＰＤＭの細胞毒性を
、（Ａ）未精製Ｂ．セレウスβ−ラクタマーゼとともに
、（Ｂ）未精製Ｅ．コリβ−ラクタマーゼとともに投与
されたＣＭと比較して示すグラフである。
【図８】単独で投与されたＣＭ及びＰＤＭの細胞毒性を
、精製Ｂ．セレウスβ−ラクタマーゼとともに投与され
たＣＭと比較して示すグラフである。
【図９】ＣＭとともに供給されたＬ６−β−ラクタマー
ゼ接合体を用いた試験管内細胞毒性検定の結果を示すグ
ラフである。
【図１０】ＡＤＲ−ｃｅｐｈをヒト血漿中３７℃でＢ．
セレウスβ−ラクタマーゼで処理したときのアドレアマ
イシンの遊離を示すグラフである。
【図１１】ＡＤＲ−ｃｅｐｈをヒト血漿中３７℃でＬ６
−ラクタマーゼ（Ｂ．セレウス）接合体で処理したとき
のアドリアマイシンの遊離を示すグラフである。
【図１２】３７℃における選択培地中のＡＤＲ−ｃｅｐ
ｈの比較安定性を示すグラフである。

Claims (19)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】　　式 【化１】 （式中、Ｑは水素、セファロスポリン合成において普通
    に使用されるアミン保護基、又は既知７−アシルアミノ
    セファロスポリン抗生物質のアシル基であり；Ｌは直接
    結合であり；ｍは１であり；Ｒはアドリアマイシン、マ
    イトマイシン、メルファラン又は４−〔ビス（２−クロ
    ロエチル）アミノ〕フェニルアミノであるが、しかしＲ
    が４−〔ビス（２−クロロエチル）アミノ〕フェニルア
    ミノであるときにＱはグルタロイルである）を有するセ
    ファロスポリン−細胞毒プロドラッグ、又はその薬学的
    に許容できる塩。
  2. 【請求項２】　　式 【化２】 （式中、Ｑは請求項１に記載のとおりである）を有する
    、請求項１に記載のセファロスポリン−細胞毒プロドラ
    ッグ、又はその薬学的に許容できる塩。
  3. 【請求項３】　　Ｑがフェニルアセチル又はチエニルア
    セチルである、請求項２に記載のセファロスポリン−細
    胞毒プロドラッグ。
  4. 【請求項４】　　Ｑがフェニルアセチルである、請求項
    ３に記載のセファロスポリン−細胞毒プロドラッグ。
  5. 【請求項５】　　式 【化３】 （式中、Ｑは請求項１に記載のとおりである）を有する
    、請求項１に記載のセファロスポリン−細胞毒プロドラ
    ッグ、又はその薬学的に許容できる塩。
  6. 【請求項６】　　Ｑがフェニルアセチル又はチエニルア
    セチルである、請求項５に記載のセファロスポリン−細
    胞毒プロドラッグ。
  7. 【請求項７】　　式 【化４】 を有する、請求項１に記載のセファロスポリン−細胞毒
    プロドラッグ、又はその薬学的に許容できる塩。
  8. 【請求項８】　　式 【化５】 〔式中、Ｑは請求項１に記載のとおりであり、Ｒｄ　は
    水素又は（Ｃ１　〜Ｃ３　）アルキルである〕を有する
    セファロスポリン−細胞毒プロドラッグ、又はその薬学
    的に許容できる塩。
  9. 【請求項９】　　請求項１〜８のいずれか一項に記載の
    セファロスポリン−細胞毒プロドラッグを温血哺乳動物
    に投与することを含む癌を治療する方法。
  10. 【請求項１０】　　抗癌剤として用いる請求項１〜８の
    いずれか一項に記載のセファロスポリン−細胞毒プロド
    ラッグ。
  11. 【請求項１１】　　活性成分としての請求項１〜８のい
    ずれか一項に記載のセファロスポリン−細胞毒プロドラ
    ッグを、その１種以上の薬学的に許容できる担体、賦形
    剤又は希釈剤に関連して含む薬学的組成物。
  12. 【請求項１２】　　請求項１〜８のいずれか一項に記載
    のセファロスポリン−細胞毒プロドラッグを製造する方
    法であって、（ａ）必要であれば、セファロスポリンあ
    るいは細胞毒物質又はその前駆物質上の反応させない反
    応性基を保護すること；（ｂ）セファロスポリンあるい
    は細胞毒薬物又はその前駆物質上の脱離基を細胞毒薬物
    又はセファロスポリン上の求核基で置換すること；ある
    いはイソシアナート前駆物質又は細胞毒薬物に対する３
    −ヒドロキシメチルセファロスポリンの付加；及び（ｃ
    ）保護基を除去すること（たゞし前駆細胞毒薬物がアド
    リアマイシン、マイトマイシン、メルファラン、又は４
    −〔ビス（２−クロロエチル）アミノ〕フェニルアミノ
    である）、を含む方法。
  13. 【請求項１３】　　（ａ）式 【化６】 （式中、Ｑは請求項１に記載のとおりであり、Ｒ１　は
    エステル活性化基であり、Ｒ２　はカルボキシ保護基で
    ある）のカルボキシ保護したセファロスポリン中間体を
    アドリアマイシンと反応させること、及び（ｂ）保護基
    を除去することを含む、請求項２に記載のセファロスポ
    リン−細胞毒プロドラッグを製造する請求項１２に記載
    の方法。
  14. 【請求項１４】　　式 【化７】 （式中、Ｑは請求項１に記載のとおりであり、Ｒ２　は
    請求項１３に記載のとおりであり、Ｘはハロゲンである
    ）のカルボキシ保護したセファロスポリン中間体をアミ
    ノ保護したメルファランと反応させること、及び（ｂ）
    保護基を除去することを含む、請求項５に記載のセファ
    ロスポリン−細胞毒プロドラッグを製造する、請求項１
    ２に記載の方法。
  15. 【請求項１５】　　３−ヒドロキシメチル−７−グルタ
    ロイルアミノ−８−オキソ−５−チア−１−アゼビシク
    ロ［４．２．０］オクト−２−エン−２−カルボン酸を
    Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）−４−イソシアナト
    ベンゼンアミンと反応させることを含む、請求項７に記
    載の化合物を製造する請求項１２に記載の方法。
  16. 【請求項１６】　　式 【化８】 （式中、Ｑは請求項１に記載のとおりである）のセファ
    ロスポリンをマイトマイシンＡ又はそのＮ１ａ（Ｃ１　
    〜Ｃ３　）アルキル誘導体と反応させることを含む、請
    求項８に記載の化合物を製造する請求項１２に記載の方
    法。
  17. 【請求項１７】　　請求項１２に記載の方法により製造
    されたセファロスポリン−細胞毒プロドラッグ。
  18. 【請求項１８】　　少くとも１種の抗体−β−ラクタマ
    ーゼ接合体（たゞし前記抗体は腫瘍細胞の表面上の抗原
    と反応性である）の薬学的に有効な量を投与すること、
    及び請求項１〜８のいずれか一項に記載のセファロスポ
    リン−細胞毒プロドラッグの薬学的に有効な量を投与す
    ることを含み、それにより前記細胞毒物質が腫瘍細胞に
    送達される、細胞毒物質を腫瘍細胞に送達する方法。
  19. 【請求項１９】　　抗体がポリクローナル、モノクロー
    ナル又はキメラ抗体からなる群から選ばれる、請求項１
    ８に記載の方法。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008501313A (ja) * 2004-04-15 2008-01-24 ジェネンコー・インターナショナル・インク Ｃａｂ分子、ｃｅａを対象とするａｄｅｐｔ構築

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU4663493A (en) * 1992-07-06 1994-01-31 Hybritech Incorporated Method for delivery of cytotoxic agents and components thereof
GB9216759D0 (en) * 1992-08-07 1992-09-23 Finpael Spa Process for the production of 7-amino thiazolyl cephalosporins
DE4236237A1 (de) * 1992-10-27 1994-04-28 Behringwerke Ag Prodrugs, ihre Herstellung und Verwendung als Arzneimittel
GB9314562D0 (en) * 1993-07-14 1993-08-25 Erba Carlo Spa Use of cephem derivatives as anti-metastatic agents
AU705226B2 (en) * 1994-01-28 1999-05-20 University Of Kentucky Research Foundation, The Codrugs as a method of controlled drug delivery
JPH08325270A (ja) * 1995-05-31 1996-12-10 Bristol Myers Squibb Co β−ラクタマーゼに対するポリマープロドラッグおよびその使用
US6132722A (en) * 1997-05-07 2000-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Recombinant antibody-enzyme fusion proteins
US6159706A (en) * 1997-12-23 2000-12-12 Newbiotics, Inc. Application of enzyme prodrugs as anti-infective agents
AU6387499A (en) * 1998-10-02 2000-04-26 Genotherapeutics, Inc. Method of treating prostate cancer with an adenovirus expression vector encodinga prodrug enzyme
US20020004202A1 (en) * 2000-01-24 2002-01-10 Cornish Virginia W. In vivo screen using chemical inducers of dimerization
WO2001083492A1 (en) * 2000-05-02 2001-11-08 Newbiotics, Inc. Improved beta-lactam antibiotics
ATE336487T1 (de) * 2000-09-21 2006-09-15 Novation Pharmaceuticals Inc Benzoesaüre derivate und deren verwendung
US7083918B2 (en) 2002-04-24 2006-08-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Bacterial small-molecule three-hybrid system
US7767792B2 (en) 2004-02-20 2010-08-03 Ludwig Institute For Cancer Research Ltd. Antibodies to EGF receptor epitope peptides
CN108338982A (zh) * 2017-12-27 2018-07-31 天津国际生物医药联合研究院 头孢噻吩钠在抗白血病的药物中的应用

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1509707A (en) * 1974-09-20 1978-05-04 Searle & Co Immunological compounds
NZ225599A (en) * 1987-08-04 1991-09-25 Bristol Myers Co Antibody-enzyme conjugates and combinations with prodrugs for the treatment of tumour cells
AU633867B2 (en) * 1989-02-02 1993-02-11 Eli Lilly And Company Delivery of cytotoxic agents
GB8907617D0 (en) * 1989-04-05 1989-05-17 Celltech Ltd Drug delivery system

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008501313A (ja) * 2004-04-15 2008-01-24 ジェネンコー・インターナショナル・インク Ｃａｂ分子、ｃｅａを対象とするａｄｅｐｔ構築
JP4699450B2 (ja) * 2004-04-15 2011-06-08 ジェネンコー・インターナショナル・インク Ｃａｂ分子、ｃｅａを対象とするａｄｅｐｔ構築

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