JPH04264029A - テポキサリンの眼科用水性微細乳濁液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明はテポキサリンの眼科用水性微細乳
濁液に関するものである。

【０００２】

【発明の背景】正式な化学名が３−［５−（４−クロロ
フェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−３−ピラ
ゾリル］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルプロパンアミド
であるテポキサリンは非ステロイド性抗炎症薬である。 それは局所的または非経口的に投与された時にアラキド
ン酸代謝のシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナー
ゼ経路の有効な抑制剤である。該薬品は眼科用の局所投
与性抗炎症剤組成物として現在開発中である。テポキサ
リンは水中にほとんど不溶性である。懸濁液でなく均質
溶液を得るためにそれの水溶性を高める種々の表面活性
剤であるシクロデキストリン類などを用いる多くの試み
がなされてきている。これらの試みの多くは成功してい
ない。しかしながら、テポキサリンは水中により油中に
多く溶解し、そして表面活性剤を使用して水相に油を分
散させる工程が発見され、それが本発明の基礎を形成し
ている。

【０００３】油の水中（ｏ／ｗ）分散液は巨大乳濁液ま
たは微細乳濁液として定義することができる。巨大乳濁
液は０．５−１００μｍの油−小滴寸法を有する曇って
いる懸濁組成物である。巨大乳濁液は一般的に不安定で
ある。微細乳濁液は０．００５−０．５μｍの小滴寸法
を有する半透明ないし透明な組成物である。微細乳濁液
は一般的に安定である（スティッグ・Ｅ・フライベルグ
（Ｓｔｉｇ　Ｅ．　Ｆｒｉｂｅｒｇ）およびピエール・
ボトレル（Ｐｉｅｒｒｅ　Ｂｏｔｈｏｒｅｌ）、マイク
ロエマルションズ：１ストラクチャー・アンド・ダイナ
ミックス（Ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎｓ；１　Ｓｔｒ
ｕｃｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｄｙｎａｍｉｃｓ）、ＣＲＣプ
レス・インコーポレーテッド、ボカ・レートン、フロリ
ダ、１９８７、１５４頁）。乳濁液を生成するための成
分類は、水、有機溶媒、表面活性剤、およびおそらくは
共−表面活性剤を含んでいる。ｏ／ｗ系を表面活性剤（
類）を用いて親水性−親油性均衡（ＨＬＢ）にまで滴定
して「一相の透明ｏ／ｗ分散液」を得る（Ｈ．Ｌ．ロサ
ノ（Ｒｏｓａｎｏ）、Ｊ．Ｌ．カヴァロ（Ｃａｖａｌｌ
ｏ）およびＧ．Ｂ．リオンス（Ｌｙｏｎｓ）、１６章、
マイクロエマルジョン・システムス（Ｍｉｃｒｏｅｍｕ
ｌｓｉｏｎＳｙｓｔｅｍｓ）、２４巻、ロサノおよびク
ローズ（Ｃｌａｕｓｅ）編集、２４巻、マーセル・デッ
カー・インコーポレーテッド、ニューヨークおよびバー
セル、１９８７、２７１頁）。熱力学的に安定な微細乳
濁液は、水、油、および表面活性剤からなる適当な組成
物との混合時に、形成することができる。他の乳濁液は
音波処理、均質化または剪断による高いエネルギー入力
を必要とする（Ｄ．Ｍ．リドゲート（Ｌｉｄｇａｔｅ）
、Ｒ．Ｃ．フー（Ｆｕ）およびＪ．Ｓ．フライトマン（
Ｆｌｅｉｔｍａｎ）、バイオファーマシー（ＢｉｏＰｈ
ａｒｍ）、１９８９年１０月、２８頁）。

【０００４】水性調合物に対する乳濁液調合物の有効な
利点は、疎水性薬品に関する溶解度の増加（Ａ．エル−
セイド（Ｅｌ−Ｓａｙｅｄ）およびＡ．レプタ（Ｒｅｐ
ｔａ）、インターナショナル・ジャーナル・オブ・ファ
ーマシー（Ｉｎｔ．　Ｊ．　Ｐｈａｒｍ．）、１３（１
９０３）、３０３）、加水分解性薬品に対する安定性の
増加［Ｐ．グローバー（Ｇｒｏｖｅｒ）、Ｐｈ．Ｄ．テ
ーシス（Ｔｈｅｓｉｓ）、ザ・ユニバーシティ・オブ・
コネチカット（Ｔｈｅ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　
Ｃｏｎｎｅｔｉｃｕｔ）、（１９８４）］、および薬品
の油相からの持続放出特性［Ｓ．デーヴィス（Ｄａｖｉ
ｓ）、ファーマシー・アンド・テクノロジー（Ｐｈａｒ
ｍ．　Ｔｅｃｈｎｏｌ．）、７１（１９８１年５月）；
Ｐ．マダン（Ｍａｄａｎ）、ファーマシー・アンド・マ
ニュファクチュアリング（Ｐｈａｒｍ．　Ｍａｎｕｆ．
）、５１（１９８５年６月）］である。上記の理由のた
めに、多くの研究者が下記引用文献により説明されてい
る如くして乳濁液の薬学的使用を試験してきている。

【０００５】（ａ）眼科用フルルビプロフェン調剤、ミ
ズシマ（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ）・Ｙ、オカモト（Ｏｋａ
ｍｏｔｏ）・Ｈ、スギオ（Ｓｕｇｉｏ）・Ｓ、ヨコヤマ
（Ｙｏｋｏｙａｍａ）・Ｋ、スヤマ（Ｓｕｙａｍａ）・
Ｔ、トーモ（Ｔｏｈｍｏ）・Ｍ、オフムラ（Ｏｈｕｍｕ
ｒａ）・Ｍ、コニシ（Ｋｏｎｉｓｈｉ）・Ｙ、イチカワ
（Ｉｃｈｉｋａｗａ）・Ｋ、（カヘン・ファーマシュー
ティカル・カンパニー・リミテッド）、ヨーロッパ特許
出願＃８７３０４３３４．３、（ｂ）酢酸デキサメタソ
ン、Ｏ．ヨイチ（Ｙｏｉｃｈｉ）、Ｓ．タカシ（Ｔａｋ
ａｓｈｉ）、Ｙ．エイイチロー（Ｅｉｉｃｈｉｒｏ）（
シセイドー・カンパニー・リミテッド）、日本公開特許
公報ＪＰ６３　１０，７１７（８８　１０，７１７）（
ＣＬ　Ａ６１ｋ９／１０）、１９８８年１月１８日、Ｊ
Ｐ出願８６／５０，２１９、１９８６年３月７日、１７
頁、（ｃ）インドメタシン、Ｍ．ユー（Ｙｕ）、Ｍ．カ
ワチ（Ｋａｗａｃｈｉ）、Ｈ．ナカジマ（Ｎａｋａｊｉ
ｍａ）（シセイドー・カンパニー・リミテッド）、日本
公開特許公報ＪＰ６３，１２６，５４２（８８，１２６
，５４２）（ＣＬ．Ｂ０１ｊ１３／００）、１９８８年
５月３０日、出願８６／２７３，６７２、１９８６年１
１月１７日、８頁、および（ｄ）トルナフテート（経皮
性）、Ｙ．オータ（Ｏｔａ）、Ｅ．ヤギ（Ｙａｇｉ）、
Ｍ．フクダ（Ｆｕｋｕｄａ）、Ｔ．スズキ（Ｓｕｚｕｋ
ｉ）（シセイドー・カンパニー・リミテッド）、日本公
開特許公報ＪＰ８６，２９１，５１８Ａ２、ＪＰ６１，
２９１，５１８、８６年１２月２２日。

【０００６】テポキサリンの溶解度は例えばゴマ油、ヒ
マワリ種油、およびヒマシ油の如き数種の代表的な油の
中で試験された。生のヒマシ油を用いる初期毒性研究は
眼に対する刺激を示した（ＮＺＷ兎）。これはテポキサ
リンを含有している安定な水性乳濁液の開発に対して、
それらが刺激性でないということを期待して、はずみを
与えた。本発明に従い製造された微細乳濁液を用いる急
性動物毒性試験は、眼の刺激を示さなかった。

【０００７】

【発明の簡単な要旨】本発明は、微細乳濁液がテポキサ
リンを抗−炎症剤有効濃度で含有している油の水中微細
乳濁液を含んでいる眼に対する局所的適用に適している
眼科用組成物を提供するものである。テポキサリンは、
油相、油／表面活性剤／水界面、および水相中に含有さ
れている。

【０００８】

【発明の詳細な記載】本発明の眼科用組成物の薬学的活
性成分は、テポキサリンすなわち３−［５−（４−クロ
ロフェニル）−１−（４−メトキシフェニル）−３−ピ
ラゾリル］−Ｎ−ヒドロキシ−Ｎ−メチルプロパンアミ
ドである。テポキサリンおよびそれの製造はワヒター（
Ｗａｃｈｔｅｒ）他、米国特許番号４，８２６，８６８
中に記載されており、それの開示はここでは参考として
記しておく。

【０００９】本発明の微細乳濁液中で使用できる油類に
は、ヒマシ油（ＵＳＰ等級）、ゴマ油、ヒマワリ種油、
鉱油、および他の非揮発性油類が包含される。本発明で
使用される好適な種類の油類は、不揮発油類（すなわち
植物源の不揮発性油類）である。ヒマシ油中でのテポキ
サリンの比較的大きい溶解度のためおよびヒマシ油のこ
れまでの薬学的使用がそれの安全性および有効性を示し
ているために、ヒマシ油が好適である。使用する油類の
選択においては、油自身がテポキサリンを溶解する必要
はなく、その理由はテポキサリンがたくさん可溶性では
ないある種の油類でも表面活性剤を用いて水性微細乳濁
液を形成して水性乳濁液が微細乳濁液を使用可能にする
のに充分なテポキサリンを溶解するであろうからである
。鉱油がそのような油の説明例である。

【００１０】微細乳濁液中で使用される油および水の割
合は狭く厳密なものではない。油はテポキサリンを充分
溶解させて微細乳濁液中のテポキサリンの最終的濃度が
単位投与量（例えば１−３滴の微細乳濁液）に対して抗
炎症剤性質を与えるのに充分な量で使用される。このテ
ポキサリンの濃度は一般的には本発明の水性乳濁液の合
計重量の約０．０５重量％−約１．０重量％の範囲内で
ある。油濃度の上限は、患者の眼に刺激性を与え始める
濃度または高すぎて微細乳濁液を形成できない濃度であ
る。一般的には、約１／９９−約４９／５１（容量／容
量）の油／水割合が有用であることが証明されている。 特別な場合には、油および水の最適割合を常用実験によ
り決めることができる。

【００１１】本発明の微細乳濁液は、表面活性剤、微細
乳濁液に適当な等張性を与える添加物、緩衝剤、防腐剤
、並びに当技術で公知の他の添加物および佐薬を含有す
ることもできる。使用できる表面活性剤の例には、ソル
ビタン脂肪酸エステル類であるモノオレイン酸ソルビタ
ン，ＮＦ（スパン８０）およびモノステアリン酸ソルビ
タン（スパン６０）、ポリオキシエチレンソルビタンエ
ステル類であるモノステアリン酸ポリオキシエチレン２
０ソルビタン（ツイーン６０）およびモノオレイン酸ポ
リオキシエチレンソルビタン（ツイーン８０）、ポリオ
キシエチレン−ポリオキシプロピレン塊状共重合体であ
るプルロニックＦ１２７、砂糖／脂肪酸エステルである
ステアリン酸スクロース（クロデスタＦ−１６０）など
が包含される。下記の実験部分は本発明の微細乳濁液中
で使用できる表面活性剤および他の添加物の型および割
合を説明するものである。

【００１２】本発明で使用される微細乳濁液は、最初に
テポキサリンを油中に溶解させ、油／テポキサリン溶液
を表面活性剤と混合して均質溶液を製造し、それを次に
水と混合して油／水混合物を製造し、次にそれに例えば
音波処理の如き適当なエネルギーをかけて微細乳濁液を
生成することにより、製造することができる。希望によ
り、微細乳濁液製造段階後に追加テポキサリンを油／水
混合物を加えることもできる。下記のものは、微細乳濁
液を製造するために適用されるエネルギーが音波エネル
ギーであるような本発明の微細乳濁液の代表的な製造工
程である。

【００１３】テポキサリン微細乳濁液を製造するための
一般的工程 混合物を５０℃においておいて全ての物質が溶解するま
で（約１６時間）撹拌することにより、例えばヒマシ油
の如き油にテポキサリンを予備飽和させる（６４．０６
：１重量／重量、油対薬品）。

【００１４】油および表面活性剤（例えばツイーン８０
の如きポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル）
を例えばプラスチック（例えばポリメチルペンテン）ビ
ーカーの如き適当な容器中で周囲温度において均質溶液
が得られるまで磁気撹拌棒を用いて一緒に混合する。次
に油相を水と混合しそして均質（曇った乳濁液）となる
まで撹拌する。

【００１５】混合物を例えば４９ｍｌ透明プラスチック
ビーカーの如き適当な容器中で３０分間にわたり例えば
３０％負荷サイクル（パルス速度）を有する最大出力に
設定された「ヴィブラセル」音波処理器の如き音波処理
器を用いて音波処理し、ここでパルサースイッチは「オ
ン」位置に設定される（負荷サイクルをオンに回し、す
なわち音波処理の不連続的速度を開始する）。ビーカー
を例えば約５℃の如き冷温に調節されている水ジャケッ
トを介して一定温度に保つ。ジャケット中の低温はビー
カーの内容物が微細乳濁液の生成用に必要な最適温度を
越えるのを防ぐために必要である（ビーカー中のそれよ
り高いまたは低い温度は微細乳濁液を製造する時間を長
くするであろう）。混合物を約３０分間にわたり、また
は微細乳濁液が生成したことを示す混合物が半透明にな
るまで、音波処理する。乳濁液の温度は約４５℃−約５
５℃の範囲内のある温度より高くは上昇させてはならな
い。（微細乳濁液中のテポキサリンの濃度を約０．１重
量％までにするのに充分な）追加テポキサリンを乳濁液
に加え、そして混合物を全ての薬品粒子が溶解するまで
撹拌する。次に乳濁液を０．２μ膜フィルターを通して
濾過して、残留粒子を除去する。

【００１６】二ナトリウムエデテート（すなわち、エチ
レンジアミン四酢酸の二ナトリウム塩）を全部が溶解す
るまで撹拌しながらゆっくり乳濁液に加える。二ナトリ
ウムエデテートは調合物中のテポキサリンの減成を防止
するために使用される金属−キレート化剤である。水性
ＢＡＫ（塩化ベンズアルコニウム−５０重量／容量％）
、ＮａＣｌ、および緩衝剤塩類を次に下記の順序で微細
乳濁液に加える。

【００１７】ＢＡＫ後にＮａＣｌを等張性を２００−３
３０ｍＯｓｍの範囲に調節するために加える。緩衝剤は
その場で、クエン酸を最初に添加および溶解させそして
最終的ｐＨをＮａ２ＨＰＯ４を用いて４．５−７．０に
調節することにより、製造される。最終的調合物を次に
０．２ミクロン膜フィルターを通して殺菌性容器中に濾
過する。微細乳濁液の透明度を５２０ｎｍにおける透過
率により測定する（Ｈ．Ｌ．ロサノ、Ｊ．Ｌ．カヴァロ
およびＧ．Ｂ．リオンズ、１６章、微細乳濁液系（Ｍｉ
ｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）、Ｈ．Ｌ．
ロサノおよびＭ．クラウッセ（Ｃｌａｕｓｓｅ）編集、
マーセル・デッカー・インコーポレーテッド、ニューヨ
ークおよびバーセル、版権１９８７年）。透過率は好適
には７０％以上である。

【００１８】下記の実施例は本発明をさらに説明するも
のである。実施例において、下記の物質および装置を使
用した。

【００１９】物質および装置 テポキサリンの微細乳濁液調合物の製造用に使用される
薬品、化学品、および試薬をそれらの出所と共に下記に
挙げる。

【００２０】 １．蒸留水 ２．テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　オル
ト３．ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　カスケム・インコーポレーテ
ッド　　　（ゴールド・ボンド・オイル、ＵＳＰＸＩＸ
に適合）４．ツイーン６０　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　シグマ・ケミカル５．ツイーン８０（ポリソルベー
ト８０ＵＳＰ）　　　　　　　　　　　　フィッシャー
６．塩化ナトリウム結晶ＡＲ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　マリンクロッド
７．二ナトリウムエデテートＵＳＰ　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　チバ・ガイギー８．塩
化ベンズアルコニウム９７％ＵＳＰ（ＢＡＫ）　　　　
　　　　ヘンケル９．クエン酸ＵＳＰ、粉末無水　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
フィザー１０．二塩基性燐酸ナトリウムＵＳＰ（無水）
　　　　　　　　　　　　　　マリンクロッド微細乳濁
液を製造するために実施例で使用された音波処理器は、
ソニックス・アンド・マテリアルス「ビブラセル」モデ
ルＶＣ３００である。音波処理器プローブは、チタン先
端を有する０．５インチの高強度ねじ付き末端型である
。音波処理中は微細乳濁液を一定温度に保たねばならな
い。使用される循環系は５℃に設定されたＭＧＷ／ＬＡ
ＵＤＡ型ＲＳＣ６（範囲−３０°〜１５０℃）冷却器／
加熱器である。

【００２１】２．５ｍｌの供与体および２．５ｍｌの受
容体細胞（２個の密封環の間に設置されている角膜によ
り分離されている）を有するように設計された改変ウッ
シング型室（Ｈ．Ｆ．エデルハウサー（Ｅｄｅｌｈａｕ
ｓｅｒ）、Ｊ．Ｒ．ホッファート（Ｈｏｆｆｅｒｔ）、
Ｐ．Ｏ．フロンム（Ｆｒｏｍｍ）、Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏ
ｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．　Ｓｃｉ．、４：２９
０−２９６（１９６５））を、本発明の微細乳濁液によ
る角膜の浸透を測定するための研究用に使用する。該系
は２−室（試験管内細胞）（図１参照）からなっており
そして生物学的膜を越える薬品本体の浸透を監視するよ
うに設計されている。一般的には細胞は外部の水ジャケ
ットにより温度調節されており、細胞中の投与溶液およ
び受容溶液の撹拌は細胞中での気体の泡立ちにより得ら
れる。角膜の場合には、気体は生理学的ｐＨを保つため
に酸素で均衡がとられている５％ＣＯ２の混合物である
。

【００２２】使用前に冷蔵庫中で１週間までなら貯蔵可
能な等容量の２種の原料溶液を混合することにより、改
変炭酸水素グルタチオンリンゲル溶液（ＧＢＲ）（Ｒ．
Ｄ．シェーンワルド（Ｓｃｈｏｅｎｗａｌｄ）およびＨ
．Ｓ．フアング（Ｈｕａｎｇ）、Ｊ．　Ｐｈａｒｍ．　
Ｓｃｉ．、７２（１１）、（１９８３）、１２６６−１
２７１）を研究用に新たに製造する。再構成後は、溶液
は約６時間しか使用すべきでない。使用中に、混合物の
中に５％ＣＯ２／Ｏ２混合物を泡立たせることにより混
合物のｐＨを７．４に保たなければならない。ＧＢＲの
製造用に使用される化学品を以下に挙げる。

【００２３】貯蔵溶液Ｉ ＮａＣｌ（１４．２ｇ）　　　　　　　　　　　　フィ
ッシャーＫＣｌ（０．７１６ｇ）　　　　　　　　　　
　　フィッシャーＮａＨ２ＰＯ４（０．５０ｇ）　　　
　　　　　フィッシャーＮａＨＣＯ３（４．９０８ｇ）
　　　　　　　フィッシャー水で１リットルに希釈 貯蔵溶液ＩＩ ＣａＣｌ２．２Ｈ２Ｏ（０．３０ｇ）　　　フィッシャ
ーＭｇＣｌ２．６Ｈ２Ｏ（０．３１８ｇ）　フィッシャ
ーＤ（＋）−グルコース（１．８０ｇ）　　シグマ還元
グルタチオン（０．１８４ｇ）　　シグマ水で１リット
ルに希釈 体重が約３ｋｇの両性の成体アルビノ兎から角膜を得る
。

【００２４】試験管内角膜浸透研究用のテポキサリンの
分析は下記の装置を使用する：１．ポンプ　　−　　ウ
ォータース・アソシエーツからのモデル６００Ｅシステ
ムコントローラー、２．自動試料採取器　　−　　ウォ
ータース・アソシエーツからの７１２ＷＩＳＰ、３．イ
ンテグレーター　　−　　スペクトラ・フィジックスか
らのＳＰ４２７０、４．検出器　　−　　パーキン・エ
ルマーＬＳ−５Ｂ発光分光光度計またはウォータース９
９０フォトジオード・アレイ検出器、および ５．カラム　　−　　ウォータース・アソシエーツから
のμＢＯＮＤＰＡＫ　Ｃ１８（３０ｃｍ長さ×３．９ｍ
ｍ内径）。

【００２５】ＧＢＲ中のテポキサリンを定量化するため
の方法論は逆転相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）および蛍光検出を使用して開発された。内部標準
である４，５−ジフェニルイミダゾールを試料に加え、
混合し、そして部分標本をＨＰＬＣ中に注入することに
より、テポキサリンを含有しているＧＢＲ試料を定量化
する。テポキサリンのピーク高さ対内部標準の比をテポ
キサリンの標準濃度に対してプロットして目盛り付き曲
線を得る。

【００２６】使用される化学品は、可動相用の２−プロ
パノールおよび内部標準用の９８％４，５−ジフェニル
イミダゾールである。内部標準は、試料毎のテポキサリ
ンの測定で生じるかもしれない変動を補うために検定で
使用されるテポキサリンに対する対照用化合物である。 可動相が分析物を静止相の内外に分配させる（分析カラ
ム中）。

【００２７】音波処理によるテポキサリン微細乳濁液の
製造 混合物を５０℃においておいて全ての物質が溶解するま
で（約１６時間）撹拌することにより、ヒマシ油にテポ
キサリンを予備飽和させた（６４．０６：１重量／重量
、油対薬品）。

【００２８】油および表面活性剤（例えばツイーン８０
）をプラスチック（例えばポリメチルペンテン）ビーカ
ーの如き適当な容器中で周囲温度において均質溶液が得
られるまで磁気撹拌棒を用いて一緒に混合した。次に油
相を水と混合しそして均質（曇った乳濁液）となるまで
撹拌した。

【００２９】混合物を４０ｍｌ透明プラスチックビーカ
ー中で３０分間にわたり３０％負荷サイクルを有する最
大出力に設定された「ヴィブラセル」音波処理器を用い
て音波処理し、ここでパルサースイッチは「オン」位置
に設定された。ビーカーを５℃に調節されている水ジャ
ケットを介して一定温度に保った。混合物を約３０分間
にわたりまたは混合物が半透明（微細乳濁液）になるま
で音波処理した。乳濁液の温度は５２℃を越えてはなら
なかった。テポキサリンを乳濁液に加え、そして混合物
を全ての薬品粒子が溶解するまで撹拌した。次に乳濁液
を０．２μテフリン膜フィルターを通して濾過して、残
留粒子を除去した。

【００３０】二ナトリウムエデテートを（全部が溶解す
るまで）撹拌しながらゆっくり乳濁液に加えた。ＢＡＫ
（５０重量／重量％）、ＮａＣｌおよび緩衝剤塩類を次
にこの順序で微細乳濁液に加えた。ＢＡＫ後にＮａＣｌ
を等張性を２００−３３０ｍＯｓｍの範囲に調節するた
めに加えた。緩衝剤はその場で、クエン酸を最初に添加
および溶解させそして最終的ｐＨをＮａ２ＨＰＯ４を用
いて４．４−７．０に調節することにより、製造された
。最終的調合物を次に０．２ミクロンテフリン膜を通し
て殺菌性容器中に濾過した。微細乳濁液の透明度を５２
０ｎｍにおける透過率により測定した（Ｈ．Ｌ．ロサノ
、Ｊ．Ｌ．カヴァロおよびＧ．Ｂ．リオンズ、１６章、
微細乳濁液系（Ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔ
ｅｍｓ）、Ｈ．Ｌ．ロサノおよびＭ．クラウッセにより
編集、マーセル・デッカー・インコーポレーテッド、ニ
ューヨークおよびバーセル、版権１９８７年）。透過率
は７０％以上でなければならなかった。

【００３１】表面活性剤としてツイーン６０を用いる微
細乳濁液の製造 工程Ａ−−（ｐＨ、等張性などの変動を可能にする融通
性のある工程）−−１００ｍｌのヒマシ油を１．５ｇの
テポキサリンと５０℃において１６時間にわたり混合す
ることにより、ヒマシ油にテポキサリンを予備飽和させ
た。０．３ｍｌの油および０．６ｍｌのツイーン６０の
部分試料を一緒に混合して均質溶液（上記の如き）とし
、そして次に２８．８２ｍｌの水と混合して曇った乳濁
液を与えた。

【００３２】次に乳濁液を前記の如く音波処理して半透
明溶液とした。微細乳濁液を０．０３ｇのテポキサリン
と共に１時間にわたり、粒子が残存しなくなるまで、撹
拌した。溶液を濾過し、そして０．００９ｇの二ナトリ
ウムエデテート、３−６μｌのＢＡＫ（５０％）、０．
２０ｇのＮａＣｌ、０．００１ｇのクエン酸および０．
００５ｇのＮａ２ＨＰＯ４を微細乳濁液中に添加／滴定
して、前記の等張性およびｐＨを与えた。

【００３３】工程Ｂ−−（調節するための融通性は少な
いが微細乳濁液の製造用には使用し易い）−−０．３ｍ
ｌのヒマシ油を０．６ｍｌのツイーン６０と混合し、そ
して周囲温度において均質となるまで撹拌した。油混合
物の温度を５０℃に上昇させ、そして撹拌しながら０．
０３ｇのテポキサリンを加えた。全てのテポキサリンが
完全に溶解するまで（約１時間）、油を５０℃において
撹拌し続けた。

【００３４】乳濁液を製造するために油混合物と混合さ
れる水相は、０．２ｇのＮａＣｌ、０．００９ｇの二ナ
トリウムエデテート、０．００１ｇのクエン酸、０．０
０５ｇの二塩基性燐酸ナトリウム、および１２μｌのＢ
ＡＫ（５０％）を２５ｍｌの水中に溶解させることによ
り、製造された。全ての賦形薬が溶解するまで、溶液を
撹拌した。次に油混合物を水相に加え、そして曇った乳
濁液が生じるまで良く混合した。溶液を撹拌しながらさ
らに５ｍｌの水で希釈して３０ｍｌとした。

【００３５】工程Ａ中に記載されている如くして粗製乳
濁液を音波処理して微細乳濁液とした。

【００３６】下表は、種々の賦形薬中でテポキサリンに
対して行われた溶解度研究のまとめを示している。

【００３７】

【表１】表１：種々の油類、表面活性剤類、ＨＰ−β−
シクロデキストリン、およびそれらの組み合わせ中のテ
ポキサリンの溶解度 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　水性濃度　
　　　テポキサリン　　　　　　マトリックス　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　（百
分率）　　　　溶解度（百分率）水　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　生　　　　　　　　　　　　　０．
０００４４油類　　　　　　　　　　　　　　　　　ゴ
マ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　生　　　　
　　　　　　　　　０．４　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　
　　　生　　　　　　　　　　　　　１．６　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　鉱油　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　生　　　　　　　　　　　
　　０．０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　ヒマワリ種油　　　　　　　　　　　　生　　　　　
　　　　　　　　０．４　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　綿実油　　　　　　　　　　　　　　　
　　　生　　　　　　　　　　　　　０．０６　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ペルフルオロ−デ
カリン　　生　　　　　　　　　　　　　０．０表面活
性剤　　　　　　　　　　　プルロニックＰ−１０５　
　６％重量／重量　　　０．０９９　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　プルロニックＦ−１２７　　
６％　　　　　　　　　　　　０．０３５　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　ツイーン８０　　　　
　　　　　　　　６％　　　　　　　　　　　　０．１
２０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ツイ
ーン８０　　　　　　　　　　　　３％　　　　　　　
　　　　　０．０９９　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　ツイーン８０　　　　　　　　　　　　２
％　　　　　　　　　　　　０．０８９　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　ツイーン８０　　　　　
　　　　　　　１％　　　　　　　　　　　　０．０３
０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ツイー
ン４０　　　　　　　　　　　　２％　　　　　　　　
　　　　０．０６６　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　ツイーン２０　　　　　　　　　　　　２％
　　　　　　　　　　　　０．０５３　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　ツイーン６０　　　　　　
　　　　　　２％　　　　　　　　　　　　０．０７９
表面活性剤および　　　　　ＨＰ−β−ＣＤ　　　　　
　　　　　５％　　　　　　　　　　　　０．０９７Ｈ
Ｐ−β−ＣＤ溶液　　　ツイーン８０　　　　　　　　
　　　　２％　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　ＨＰ−β−ＣＤ　　　　　　　　　　１０％　　　
　　　　　　　　０．１１３　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ツイーン８０　　　　　　　　　　
　　１％油、表面活性剤　　　　　　　ヒマシ油　　　
　　　　　　　　　　　　　３％　　　　　　　　　　
　　０．１０８微細乳濁液　　　　　　　　　　　プル
ロニックＰ−１０５　　７％　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ヒマシ油　　　　　　　　　　　　
　　　　１％　　　　　　　　　　　　０．０８５　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ツイーン８０
　　　　　　　　　　　　２％　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　（テポキサリンは微細乳濁液後に
加えられた）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　　　２％　
　　　　　　　　　　　０．１０６　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　ツイーン８０　　　　　　　
　　　　　２％　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　　　１％
　　　　　　　　　　　　０．１４７　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　ツイーン８０　　　　　　
　　　　　　２％　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　（テポキサリンは乳濁液が製造される前に加え
られた）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
ヒマシ油　　　　　　　　　　　　　　　　１％　　　
　　　　　　　　　０．１５　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　ツイーン６０　　　　　　　　　　
　　２％表面活性剤としてツイーン８０をそして共表面
活性剤としてスパン８０を用いるテポキサリン微細乳濁
液の製造ツイーン８０／スパン８０を用いて微細乳濁液
を製造する工程は、ツイーン８０を用いる半透明溶液の
製造直後にスパン８０を加えたこと以外は、ツイーン６
０乳濁液と同一であった。油／水（ｏ／ｗ）系を表面活
性剤および共表面活性剤を用いて親水性／親油性均衡（
ＨＬＢ）まで滴定して、「一相半透明ｏ／ｗ分散液」を
得た（Ｈ．Ｌ．ロサノ、Ｊ．Ｌ．カヴァロおよびＧ．Ｂ
．リオンズ、１６章、微細乳濁液系（Ｍｉｃｒｏｅｍｕ
ｌｓｉｏｎ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）、２４巻、Ｈ．Ｌ．ロサ
ノおよびＭ．クラウッセ編集者、マーセル・デッカー・
インコーポレーテッド、ニューヨークおよびバーセル、
１９８７、２７１頁）。

【００３８】０．３ｍｌのヒマシ油（テポキサリンを含
有）の部分試料および０．５５ｍｌのツイーン８０を予
備混合して均質溶液とした。溶液を前記の如くテポキサ
リンを含有している微細乳濁液に製造した。次に０．０
５ｍｌのスパン８０の部分試料を微細乳濁液に加え、そ
して混合物をさらに１０分間にわたり音波処理した。微
細乳濁液を二ナトリウムエデテート、ＢＡＫ、ＮａＣｌ
、および緩衝剤塩類を用いて前記の如く処理した。

【００３９】０．１％懸濁液または０．１％微細乳濁液
によるテポキサリンの試験管内角膜移送 眼を結膜嚢および付随している蓋と共に摘出した。角膜
を切除しそしてディクステインおよびマウライス技術を
用いて封入した（Ｓ．ディクステイン（Ｄｉｋｓｔｅｉ
ｎ）およびＤ．Ｍ．マウライス（Ｍａｕｒｉｃｅ）、Ｊ
．　Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２２１：２９−４１（１９７２
））。

【００４０】室を３５℃において水ジャケットにより平
衡化することにより、室を製造した。室の受容体および
供与体の両者に通気しそして酸素：二酸化炭素（９５：
５）混合物と混合し、これにより改変炭酸水素グルタチ
オンリンゲル溶液（ＧＢＲ）のｐＨがｐＨ７．４に調節
されそして大量混合された。封入された角膜が室中で組
み合わされ、受容体側に３５℃の通気されたＧＢＲが充
填されそして供与体側にＧＢＲ中の試験化合物が充填さ
れた。

【００４１】１００μｌの部分試料を受容体側から４時
間にわたり（０、１５、３０、４５、６０、９０、１２
０、１８０および２４０分）試料採取した。室の容量は
、各試料後にＧＢＲ（研究中は３５℃に保たれていた）
の補充により、保たれていた。試料を直ちにドライアイ
ス中で冷凍させて、それ以上の代謝発生を防止した。研
究の終了時に、塊状の供与体および受容体容量を集めそ
してこれも冷凍した。封入された角膜を細胞から除去し
そして乾燥の前後に単離された組織を重量測定すること
により水和率を計算した（角膜は炉の中に４５℃におい
て一夜置かれていた）。この水和率値は組織の状態を示
すものであった（好適範囲７５−８３％）。未処置の角
膜は対照用として評価された。

【００４２】ＨＰＬＣによる分析まで、試料は−７０℃
に保たれていた。

【００４３】ＧＢＲ中のテポキサリンに関する生分析検
定 検定は、蛍光検出を用いる逆転相高性能液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）を含んでいた。ポンプは１．０ｍ
ｌ／分の流速に設定され、自動試料採取器は１０μｌの
注入容量に設定され、インテグレーターは８ミリボルト
（全目盛り）の減衰に設定され、そして蛍光計は３０の
固定目盛り、２８２ｎｍの励起波長および４１８ｎｍの
発光波長に設定された。Ｃ１８カラムは、分析中は周囲
温度に保たれていた。可動相は、４００ｍｌのイソプロ
パノールおよび２ｍｌのＨ３ＰＯ４を水と混合して９０
０ｍｌにすることにより、製造された。次に１Ｍ　Ｎａ
ＯＨを用いてｐＨを３．０に調節し、そして最終的容量
を水で希釈して１リットルとした。可動相を、真空下で
の０．４５μｍのナイロン−６６フィルター（ライニン
・インスツルメンツ・カンパニー・インコーポレーテッ
ド製）を通す濾過により、脱気した。

【００４４】目盛り付け曲線用の標準は、０．０３０、
０．０６０、０．１５０、０．３０および０．６０μｇ
／ｍｌに均衡がとられている塩溶液（ＢＳＳ）中で製造
された。自動試料採取器瓶（限定された量の挿入部）に
１００μｌの試料および１００μｌの内部標準である４
，５−ジフェニルイミダゾールを移すことにより（９μ
ｇ／ｍｌにおいて）、ＨＰＬＣ分析用の標準および試料
を製造した。瓶にふたをしそして渦ミキサー（アメリカ
ン・サイエンティフィック・プロダクツ）により混合し
た。 ミキサーは瓶の内容物を急速に回転させ、すなわち渦（
循環運動）を引き起こした。

【００４５】クロマトグラフィーは１０μｍの粒子を有
するμＢＯＮＤＰＡＫＣ１８カラムを含んでおり、そし
て可動相は４０％のイソプロパノール（ＩＰＡ）および
ｐＨ３．０に調節された燐酸塩緩衝液からなっていた。 比較的大きい炭素−負荷を有するＣ１８カラムまたは比
較的大きい極性の有機溶媒（例えばメタノール）を含有
している可動相はＣ１８カラムから薬品を溶離しないで
あろう。薬品は紫外線吸収（２５４ｎｍ）によりまたは
蛍光（２８２ｎｍにおける励起波長および５１８ｎｍに
おける発光）により検出することができる。蛍光検出は
紫外線より約１０倍敏感であった。

【００４６】部分試料を自動採取器の瓶に移し、内部標
準である４，５−ジフェニルイミダゾールを加え、ふた
をしそして瓶を混合することにより、ＧＢＲ試料をＨＰ
ＬＣ分析用に製造した。１．０ｍｌ／分の流速は約４．
０分において内部標準をそして薬品を約１１．６分にお
いて溶離するであろう。０．０３０−０．６０μｇ／ｍ
ｌの間の標準を有する目盛り付き曲線は、ｒ＝０．９９
９８（ｒ２＝０．９９９７）の関連係数、Ｙ−切片＝−
０．００５９および勾配＝１．２４０を用いる蛍光検出
を使用する線状曲線を与えるであろう。最小感度は約０
．０２５μｇ／ｍｌであった。

【００４７】テポキサリンを用いる溶解度実験テポキサ
リンの低い水溶性が、油類、表面活性剤、ヒドロキシプ
ロピル−ベータ−シクロデキストリン、およびそれらの
組み合わせを用いる溶解度実験を促進させた。 これらの実験は上記の表１にまとめられている。０．１
％より大きいテポキサリン含有量は１％のヒマシ油およ
び２％のツイーン（ポリソルベート）を使用する微細乳
濁液を用いて得られた。１：１の油：表面活性剤比は半
透明乳濁液（曇り）を形成しなかった。薬品および賦形
薬の添加、混合、および音波処理の順序は、０．１％よ
り大きい濃度を得るには重要であった。

【００４８】０．１％のテポキサリンを含有する代表的
な微細乳濁液を製造し、そして物理的安定性、薬品安定
性、急性毒性、および／または効果に関して試験した。 ２種の乳濁液の組成を下記に挙げる。

【００４９】

【表２】 ツイーン６０を用いて テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．０３０ｇ　　　　　　　　　　　　０．１％ヒマ
シ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．３００ｍｌ　　　　　　　　　　１．０％ツイー
ン６０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．
６００ｍｌ　　　　　　　　　　２．０％ＮａＣｌ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．２
００ｇ　　　　　　　　　　　　０．６７％二ナトリウ
ムエデテート　　　　　　　　　　０．００９ｇ　　　
　　　　　　　　　０．０３％ＢＡＫ（５０重量／容量
％）　　　　　　０．００３ｍｌ　　　　　　　　　　
０．０１％クエン酸　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　０．００１ｇ　　　　　　　　　　　
　０．００３％Ｎａ２ＨＰＯ４　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　０．００５ｇ　　　　　　　　　　
　　０．０１６７％上記のものを精製水を用いて３０ｍ
ｌに希釈した。

【００５０】 ツイーン８０／スパン８０を用いて テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　０．０３ｇ　　　　　　　　　　　　　　０．１％ヒ
マシ油　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　０．３００ｍｌ　　　　　　　　　　１．０％ツイ
ーン８０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０
．５５ｍｌ　　　　　　　　　　　　１．８３３％スパ
ン８０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
０．０５ｍｌ　　　　　　　　　　　　０．１６６％残
存している賦形薬および希釈剤は上記で挙げられている
如くであった。

【００５１】兎中の急性重複投与毒性研究（眼の刺激試
験） 兎に重複投与量（６時間／日にわたり１滴／２０分間）
の２種の調合物および他の適当な対照を与えることによ
り、ツイーン８０／スパン８０並びにツイーン６０の急
性刺激を評価した。調合物の刺激を、１日、２日、また
は３日にわたり等級系（例えば赤み、膨潤、破壊など）
を合格した兎の数（３匹の兎／調合物）により測定した
。刺激度は１−１０の間で得点され、ここで１の得点は
最小刺激でありそして１０の得点は最大刺激であった。

【００５２】生のヒマシ油は１０の得点を与えた。全て
の他の調合物および対照用の１０％プルロニックＦ１２
７（ポロキサマー４０７、ヴァソシジンＲ中賦形薬、０
．１％）は１の得点を与えた（下表２参照）。

【００５３】

【表３】表２：兎中の重複投与刺激性研究。１日目、２
日目、および３日目に関して等級系を合格できた３匹の
兎／調合物がいた。

【００５４】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　日（１）　　日（２）
　　日（３）　　得点ヒマシ油、ＵＳＰ　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０　　　　　
　０　　　　　　０　　　　１０１０％ツイーン８０　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３　
　　　　　３　　　　　　３　　　　　　１１０％プル
ロニックＦ１２７　　　　　　　　　　　　　　　　３
　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　１０．１％
テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　３　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　
１（ツイーン８０微細乳濁液） ０．１％テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　２　　　　　　２　　　　　　２　　
　（？）＊１（ツイーン８０微細乳濁液） 微細乳濁液ｗ／ｏ薬品　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　３　　　
　　　１（ツイーン８０）（ＢＡＫなし） （＊　動物は試験から除去され、保定器中でそれの背中
を破壊した）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　日（１）　　日（２）　　日（３）　　得
点０．１％微細乳濁液　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　３
　　　　　　１（ツイーン８０／スパン８０） ツイーン８０／スパン８０微細乳濁液　　　　　　　　
３　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　１（ｗ／
ｏ薬品） ０．１％微細乳濁液（ツイーン８０）　　　　　　　　
　３　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　１プル
ロニックＦ１２７の１０％溶液　　　　　　　　　　３
　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　１（調合物
中にＢＡＫなし）　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　日（１）　　
日（２）　　日（３）　　得点１０％プルロニックＦ１
２７　　　　　　　　　　　　　　　　３　　　　　　
３　　　　　　３　　　　　　１０．１％テポキサリン
μ乳濁液　　　　　　　　　　　　　　　３　　　　　
　３　　　　　　３　　　　　　１（ツイーン６０、Ｂ
ＡＫ＆ＥＤＴＡ） 偽薬μ乳濁液　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　
３　　　　　　１（ツイーン６０、ＢＡＫ＆ＥＤＴＡ） ０．１％テポキサリンμ乳濁液　　　　　　　　　　　
　　　　３　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　
１（ツイーン８０、スパン８０、 　　ＢＡＫ＆ＥＤＴＡ） ０．１％テポキサリンμ乳濁液　　　　　　　　　　　
　　　　３　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　
１（ツイーン８０、スパン８０、 　　ＢＡＫ＆ＥＤＴＡ） ０．１％テポキサリンμ乳濁液　　　　　　　　　　　
　　　　３　　　　　　３　　　　　　３　　　　　　
１（ツイーン６０） テポキサリン微細乳濁液の試験管内細胞毒性試験テポキ
サリンを含有している４種の微細乳濁液調合物および３
種の対照用を、３Ｔ３−Ｌ１細胞（胚、ハツカネズミ）
に対する細胞毒性に関して試験した。投与量−応答曲線
を作成して、「対照ウエルのものと比較して最終的な合
計細胞状蛋白質を２０、５０および８０％だけ減少させ
た」各調合物のＩＤ２０、ＩＤ５０およびＩＤ８０を測
定した（ジェーン・グリーブス（Ｊａｎｅ　Ｇｒｅｅｖ
ｅｓ）、サンドラ・リーディング（Ｓａｎｄｒａ　Ｒｅ
ａｄｉｎｇ）およびクリーブ・ウィルソン（Ｃｌｉｖｅ
　Ｗｉｌｓｏｎ）からＤ．Ｇ．ムッソン（Ｍｕｓｓｏｎ
）に対して１９９０年３月２３日に発行された報告から
、ノッチンガム、ＮＧ７　２ＵＨのクイーンズ・メディ
カル・センターの医学学校の生理学および薬学部門）。 データは（ａ）ＢＡＫを含有している調合物を用いる等
張性の増加を示しており、（ｂ）全ての調合物は対照用
プルロニックＦ１２７より毒性が大きく、（ｃ）ツイー
ン８０／スパン８０を用いる微細乳濁液はツイーン６０
よりわずかに毒性が少ないようであり、そして（ｄ）テ
ポキサリンを用いる乳濁液はそれなしのものより毒性が
大きかった。

【００５５】テポキサリンおよび微細乳濁液の安定性研
究 ２種の安定性研究は第二の静止進行法を用いて実施され
た。第一の研究は３種の調合物を含んでいた。

【００５６】（１）０．１％のテポキサリン／ツイーン
６０／ヒマシ油／ＢＡＫ／ＮａＣｌ （２）０．１％のテポキサリン／ツイーン６０／スパン
６０／ヒマシ油／ＢＡＫ／ＮａＣｌ （３）０．１％のテポキサリン／ツイーン８０／スパン
８０／ヒマシ油／ＢＡＫ／ＮａＣｌ 研究は調合物および調合物の間の差に関して数種の問題
を示していた。乳濁液安定性および薬品安定性は共−表
面活性剤を用いないツイーン６０表面活性剤の方が好ま
しいようである。４５℃におけるテポキサリンの減成速
度は室温および３５℃よりはるかに大きいようである。 同様に、乳濁液の分解は４５℃においては室温および３
５℃よりはるかに速く生じるように思えた。

【００５７】第一の安定性研究の結果は再調合方法に関
する検討を促進させた。テポキサリンはアミド基のとこ
ろにおいて加水分解してカルボン酸を生成するようであ
る。この減成を１６時間内に観察するための促進工程が
開発された。試料を検出用二極真空管列を使用する逆転
相ＨＰＬＣにより分析した。一連の実験（次章）は調合
物中の０．０３％二ナトリウムエデテートの使用を示唆
している。微細乳濁液中で二ナトリウムエデテートを用
いると、薬品はｐＨ７．０以上において減成し、減成は
ｐＨ５．０、５．５および６．０において最少であった
。 従って、第二の安定性研究は調合物中の０．０３％二ナ
トリウムエデテートを用いて開始され、そしてｐＨをク
エン酸／燐酸ナトリウム二塩基性緩衝液を用いて５．９
−６．１に調節した。

【００５８】第二の安定性研究は２種の調合物を使用し
た。

【００５９】（４）０．１％のテポキサリン／ツイーン
６０／ヒマシ油／ＢＡＫ／ＮａＣｌ／二ナトリウムエデ
テート／クエン酸／Ｎａ２ＨＰＯ４／水（５）０．１％
のテポキサリン／ツイーン８０／スパン８０／ヒマシ油
／ＢＡＫ／ＮａＣｌ／二ナトリウムエデテート／クエン
酸／Ｎａ２ＨＰＯ４／水。

【００６０】３ヶ月のデータがある。調合物（４）に関
しては室温および３５℃における薬品安定性データは許
容可能であった。ツイーン８０／スパン８０を用いる後
者の調合物（５）は３５℃においては１２週間で許容可
能な９０％水準より低いテポキサリン濃度を生じ、室温
においては１２週間でテポキサリン濃度は９４．４％で
あった。両方の調合物に関するｐＨは温度によるが６．
０から４．８５−５．７６に低下した。透過率は両方の
調合物に関して室温および３５℃においてはわずかに低
下したようであり、４５℃においては低下はかなりであ
った。

【００６１】テポキサリン微細乳濁液の安定性を促進さ
せる実験 水中および微細乳濁液中でのテポキサリンの減成に関す
る機構を解明しそしてテポキサリン微細乳濁液に関する
最適条件を決めるために、多数の実験を連続して実施し
た。薬品はカルボン酸を生成するためのそれのＮ，Ｎ−
ヒドロキシメチルアミド基の酸および塩基触媒作用に弱
点があるようである。実験および結果：（ａ）０．１％
のテポキサリンを５０：５０の水：エタノール中に溶解
させ、そして部分試料を１Ｍ　ＮａＯＨを用いてｐＨを
５．０、６．０、７．０、８．０および１２．６に調節
した。部分試料をふた付き反応瓶中で１６時間にわたり
１００℃に加熱した。

【００６２】ＨＰＬＣクロマトグラムはｐＨ６、７、８
、１２．６においては試料中でテポキサリン後に溶離す
る減成ピークを示したが、ｐＨ５．０では示さなかった
。

【００６３】（ｂ）０．１％テポキサリンをヒマシ油、
ツイーン６０およびクエン酸／燐酸塩緩衝液（１Ｍ）を
用いて微細乳濁液の形状に製造した。２滴の１Ｍクエン
酸溶液を部分試料（１ｍｌ）に加え、そしてｐＨを１．
０Ｍ二塩基性燐酸ナトリウムを用いてｐＨを５．０、６
．０、７．０、および７．６に調節した。試料を前記の
如く加熱した。

【００６４】クロマトグラムは２種の主要減成生成物を
示し、１種はテポキサリンの前にそして他は後に溶離し
た。減成はｐＨ５．０および７．６において最大に生じ
た。

【００６５】（ｃ）前記の実験（ｂ）をｐＨ範囲を６．
０−７．０の間（６．０、６．２、６．４、６．６、６
．８、および７．０）に狭くして繰り返した。

【００６６】最適ｐＨはｐＨ６．２−６．４の間である
ようだが、依然として相当な減成があった。

【００６７】（ｄ）前記の実験（ｃ）を各試料中で０．
０３％の二ナトリウムエデテートおよび同一ｐＨ範囲を
用いて繰り返した。

【００６８】減成はｐＨ６．０において最少でありそし
てｐＨを７．０にすると増加した。テポキサリンの前に
溶離する第二減成物の存在も最少であった。

【００６９】（ｅ）実験（ｄ）をそれより広いｐＨ範囲
：５．０、５．５、６．０および７．０を用いて繰り返
した。

【００７０】減成はｐＨ５．０、５．５、および６．０
において最少であった。これらのｐＨにおけるテポキサ
リンに関するピーク面積および高さは下記の如くであり
そして５．５−６．０の間の最適安定性を示している。

【００７１】

【表４】ｐＨ　　　　　　　　ピーク面積　　　　　　
　　　　ピーク高さ５．０　　　　　　　０．５０１４
４　　　　　　　０．７８０７５．５　　　　　　　０
．５５１５８　　　　　　　０．８３１２６．０　　　
　　　　０．５６７９６　　　　　　　０．８３９０７
．０　　　　　　　０．３１２１７　　　　　　　０．
５５５６減成生成物はｐＨ７．０以外では明らかに証明
されなかった。

【００７２】試験管内角膜浸透研究０．１％における懸
濁液状および０．１％における微細乳濁液状でのテポキ
サリンの兎角膜を越える浸透および代謝を改変ウッシン
グ室を用いる試験管内工程により比較した（Ｈ．Ｆ．エ
デルハウサー、Ｊ．Ｒ．ホファート、Ｐ．Ｏ．フロンム
、Ｉｎｖｅｓｔ．　Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．　Ｖｉｓ．
　Ｓｃｉ．、４（１９６５）、２９０−２９６）。試料
を０〜２４０分までの適当な時間間隔で取り出し、そし
てＨＰＬＣ−蛍光による分析まで−７０℃で冷凍した。

【００７３】時間に対する角膜を越えたテポキサリンの
量のプロットは、薬品が両方の調合物から角膜に浸透し
たことを示していた。受容体細胞から採取された試料の
クロマトグラムも両方の調合物による他の代謝物質／減
成物質の存在を示していた。代謝物質／減成物質はＮ，
Ｎ−ヒドロキシメチルアミド基からカルボン酸への化学
的および酵素的加水分解であることができる。両方の調
合物に関するテポキサリン流速を下記に挙げる。

【００７４】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　流速　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　（μｇ／ｃｍ２−分）懸濁液　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０．００３８４微細
乳濁液　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．００
９５９　　流速は下記式を用いて計算された（Ｃ．フリ
ーカー（Ｆｌｅｅｋｅｒ）、Ｏ．オン（Ｗｏｎｇ）、お
よびＪ．Ａ．リッチング（Ｒｉｔｔｉｎｇ）、Ｐｈａｒ
ｍ．　Ｒｅｓ．、６（６）（１９８９）、４４３−４４
８）： 　　　　　　流速＝（△ｑ／△ｔ）（１／Ａ）、　　　
　　　ここで（△ｑ／△ｔ）＝勾配であり、そして　　
　　　　Ａ＝薬品に露呈された角膜表面、１．０３９ｃ
ｍ２。

【００７５】懸濁液に関すると、勾配は４５−１８０分
の間で測定され、微細乳濁液に関しては６０−２４０分
の間で測定された。

【００７６】猫における効果研究 たくさん顔料着色した虹彩を、右眼は表面活性剤ツイー
ン８０／スパン８０を含有している０．１％テポキサリ
ン微細乳濁液でそして左眼は対照用食塩水で予備処置し
た。猫に投与規定食餌法の完了より１５分前に麻酔をか
けそして両方の虹彩にアルゴンレーザーをかけた。虹彩
上の薬品および対照溶液の効果をスリット−ランプによ
り観察した。動物モデルは４−８時間の間の薬品効果に
関して最も役立った。

【００７７】虹彩充血に関しては、４、６、および８時
間では処置された眼においては対照用より意義ある統計
学的効果があり、２４時間では処置された眼および対照
用の眼においては差異はなかった。

【００７８】虹彩浮腫に関しては、６時間では処置され
た眼において意義ある統計学的効果があった。

【００７９】テポキサリンを有する眼科用微細乳濁液調
合物は、（１）０．１−２％の水不混和性の油、（２）
０．１−４％の非−イオン性表面活性剤、（３）０．０
−４％の非−イオン性の共−表面活性剤、（４）０．０
５−１％のテポキサリン、（５）０．２５−２％の等張
剤、（６）ｐＨを４．０−７．０の間に調節するための
緩衝系（ｐＨ７．０以上、薬品等級）、濃度は０−３．
０ミリモルに変化するはずである、（７）０．０２−０
．７％の１種以上の防腐剤、および （８）０．０−１．０％の微細乳濁液および／または薬
品用の安定剤を含有するであろう（濃度は重量／重量で
ある）。

【００８０】上記の物質を、音波処理により、均質化に
より、または微細流動器を用いる技術により、半透明な
いし透明な微細乳濁液（５２０ｎｍにおける透過率＞＝
７０％）を得るような方法で混合した。

【００８１】２種の説明用調合物は下記のものである：
調合物Ａ １．テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　０．１％２．ヒマシ油　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０３．ツイ
ーン６０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２．０４．ＮａＣｌ　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．６７５．二ナトリウム
エデテート　　　　　　　　　　　　　０．０３６．Ｂ
ＡＫ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　０．０３７．クエン酸　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．００３８．
Ｎａ２ＨＰＯ４、１．１８ミリモル　　　　　　０．０
１６７９．水で希釈して１リットルとする。

【００８２】 調合物Ｂ １．テポキサリン　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　０．１％２．ヒマシ油　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　１．０３．ツイ
ーン８０　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　１．８３４．スパン８０　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　０．１６６残りの賦形薬お
よび希釈剤は調合物Ａに関して上記で挙げられている如
くである。

【００８３】１種または２種の調合物を薬品安定性、乳
濁液安定性、毒性（刺激）、試験管内角膜浸透、および
効果に関して試験した。

【００８４】上記の２種の例示乳濁液に関して使用され
た物質は下記の代用物質で置換することができ、それら
は例示目的用に挙げられている。

【００８５】油類 ゴマ油 ヒマシ油 鉱油 ヒマワリ種油 ペルフルオロ−デカリン アーモンド油ＮＦ アプリコットカーネル油 アボガド油 ヤシ油 クロス−精油ＥＰＯ ニシン油 ミンク油 オリーブ油 オレンジ粗油 サフラワー油ＵＳＰ 小麦芽油 表面活性剤および共−表面活性剤 ポリソルベート類（ポリオキシエチレンソルビタン脂肪
酸エステル類：ツイーン２０、２１、４０、６０、６１
、６５、８０、８１、８５）、ソルビタンエステル類（
ソルビタン脂肪酸エステル類：スパン２０、４０、６０
、６５、８０、８５）、プルロニク類（Ｐ８４、Ｐ１０
５、Ｆ１２７）、テトロニク類、クロデストラ類（ステ
アリン酸スクロースおよびジステアリン酸スクロースの
組み合わせ、ステアリン酸スクロース）、レシチン等張
剤 塩化ナトリウム、塩化カリウム、デキストロース、グリ
セリン、マンニトール 緩衝剤 酢酸、ホウ酸、塩酸、クエン酸、燐酸、炭酸カリウム、
クエン酸カリウム、燐酸カリウム、酢酸ナトリウム、炭
酸水素ナトリウム、燐酸水素ナトリウム、ホウ酸ナトリ
ウム、炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、水酸化ナ
トリウム、燐酸ナトリウム 防腐剤 塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム、クロ
ロブタノール、酢酸フェニル水銀、硝酸フェニル水銀、
チメロサル、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息
香酸ナトリウム、ソルビン酸、フェニルエチルアルコー
ル、ホウ酸、硫酸ゲンタマイシン、バシトラシン、硫酸
ポリミキシンＢ、ネオマイシン、テトラシクリン塩酸塩
、エリスロマイシン、スルファセトアミドナトリウム、
トブラマイシン、酢酸プレドニソロン、プレドニソロン
、燐酸プレドニソロン、デキサメタソン、および上記の
ものの組み合わせ 安定剤 二ナトリウムエデテート（金属−キレート化剤）、クエ
ン酸（還元剤）、メタ重亜硫酸ナトリウム（還元剤）、
アスコルビン酸（還元剤）、アセチルシステイン（還元
剤）、ブチル化されたヒドロキシアニソール（ラジカル
スカベンジャー）、２，６−ジ−ターシャリー−ブチル
−ｐ−クレゾール（ラジカルスカベンジャー）、ビタミ
ンＥ（ラジカルスカベンジャー）。

【００８６】調合物ＡおよびＢを用いる溶解度実験は、
多くの薬品が油小滴、表面活性剤（類）、および水の間
の界面中に置かれていることを示唆していた。ヒマシ油
に関する最大テポキサリン溶解度は１．６％であり、そ
して油の１％が乳濁液中に分散されていた。従って、乳
濁液中の０．１５％の薬品の０．１３４％が界面中に残
っていた。

【００８７】第一の安定性研究は、異なる表面活性剤を
含有しており、緩衝されておらず、そして安定剤を含有
していない３種の調合物を含んでいた。４５℃において
は室温および３５℃に対して、テポキサリンの濃度およ
び乳濁液の透過率の両者は劇的に減少した。促進テポキ
サリン安定性に関して試験された調合物の全てが４５℃
では２週間以内に失われ（初期濃度の９０％以下）、そ
して全てが３５℃では８週間以内に失われた。従って、
安定な生成物を再調合するためにテポキサリンの減成を
研究する方法が開発された。

【００８８】初期安定性実験は、乳濁液系がテポキサリ
ンの減成を促進させ、５−７．６のｐＨ範囲を越えると
２種の主要副生物を生成し、６．２−６．４において最
少減成が生じることを示しているようである。水／アル
コール中でのテポキサリンの減成はｐＨ６．０以上にお
いては１種の主要生成物を与えた。乳濁液中のエデテー
トが５．０−６．０のｐＨ範囲においてテポキサリンを
安定化させ、そして１種だけの主要副生物が観察された
。

【００８９】両者ともエデテートおよび緩衝剤を含有し
ているｐＨ５．９−６．１の２種の調合物を用いて、第
二の安定性研究を行った。前記の如く、テポキサリンは
４５℃においては室温および３５℃におけるより相当速
く減成した。３ヶ月のデータ収集後に、テポキサリンの
残存率はこれまでの研究と比べてかなり高かった。３５
℃におけるテポキサリンに関する濃度変化はツイーン６
０を用いると９０．３％において許容可能でありそして
室温では９８．３％で許容可能であり、４５℃における
残存率は７０．７％であった。２種の調合物に関する貯
蔵寿命は４５℃以下の温度において測定された。

【００９０】テポキサリンの安定性および乳濁液の物理
的安定性は関連しているようであり且つ温度に依存して
いるようである。安定性研究および実験的検討の両者か
らのデータは、比較的高い温度においては乳濁液は比較
的速く分解しそして薬品が減成することを示していた。 両者の研究においてツイーン８０を用いる調合物と比較
してツイーン６０を用いる調合物の方が両方の面で安定
性が大きかった。さらに、エデテートおよび緩衝剤を有
する再調合物は薬品および乳濁液の両方を安定化させた
。

【００９１】急性複合投与毒性試験は基本的には、ツイ
ーン６０またはツイーン８０／スパン８０を含有してい
る調合物は非−刺激性であることを示していた。試験管
内細胞毒性試験はより識別性が大きく、テポキサリンお
よび／またはＢＡＫを有する微細乳濁液の方が含まない
ものより大きい細胞毒性であること（細胞死亡）を示し
た。ツイーン６０またはツイーン８０／スパン８０を含
有している調合物の間の差異は標準偏差を考えると意味
のない程度である。

【００９２】効果の研究は基本的には、０．１％テポキ
サリン乳濁液が６時間において虹彩膨潤の減少に対して
有効でありそして４、６、および８時間においてアルゴ
ンレーザーにより外傷を受けた眼において充血の減少に
対して有効であったことを示している。

【００９３】本発明の主なる特徴および態様は以下のと
おりである。

【００９４】１．テポキサリンを抗−炎症剤有効濃度で
含有している油の水中微細乳濁液（ｏｉｌｉｎ　ｗａｔ
ｅｒ　ｍｉｃｒｏｅｍｕｌｓｉｏｎ）からなる、眼に局
所的に適用するのに適している眼科用（ｏｐｈｔｈａｌ
ｍｉｃ）組成物。

【００９５】２．油が不揮発油（ｆｉｘｅｄ　ｏｉｌ）
である、上記１の眼科用組成物。

【００９６】３．微細乳濁液がさらにノニオン性表面活
性剤を微細乳濁液を安定化させるのに有効な量で含有し
ている、上記１の眼科用組成物。

【００９７】４．微細乳濁液がさらに等張剤、緩衝剤、
および安定剤を含有している、上記１の眼科用組成物。

【００９８】５．油がヒマシ油である、上記２の眼科用
組成物。

【００９９】６．ノニオン性表面活性剤がポリソルベー
トである、上記３の眼科用組成物。

【０１００】７．微細乳濁液が塩化ナトリウムを等張性
を２００−３３ｍＯｓｍの間に調節するのに充分な量で
含有している、上記４の眼科用組成物。

【０１０１】８．微細乳濁液が二ナトリウムエデテート
を該組成物中に含有されているテポキサリンの安定性を
強化するのに充分な量で含有している、上記４の眼科用
組成物。

【０１０２】９．微細乳濁液がｐＨを約４．０−７．０
の間に調節するための燐酸塩緩衝剤を含有している、上
記５の眼科用組成物。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は本発明の微細乳濁液による角膜の浸透を
測定するための研究で使用される改変ウッシング型室の
図である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　テポキサリンを抗−炎症剤有効濃度で
   含有している油の水中微細乳濁液を含有してなる、眼に
   局所的に適用するのに適している眼科用組成物。