JPH04230844A - 毛細管ゲル電気泳動用ゲル充填毛細管の製造法 - Google Patents
毛細管ゲル電気泳動用ゲル充填毛細管の製造法Info
- Publication number
- JPH04230844A JPH04230844A JP3100984A JP10098491A JPH04230844A JP H04230844 A JPH04230844 A JP H04230844A JP 3100984 A JP3100984 A JP 3100984A JP 10098491 A JP10098491 A JP 10098491A JP H04230844 A JPH04230844 A JP H04230844A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- capillary
- gel
- polymerization
- capillary tube
- bisacrylamide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 6
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 title claims description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 claims abstract description 22
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 13
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 239000005350 fused silica glass Substances 0.000 claims description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 6
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001818 capillary gel electrophoresis Methods 0.000 claims description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 4
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical group OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- -1 N,N'-methylene ethylene bisacrylamide Chemical compound 0.000 claims description 3
- 239000004642 Polyimide Substances 0.000 claims description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 3
- 238000002485 combustion reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 3
- 229920001721 polyimide Polymers 0.000 claims description 3
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 3
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003431 cross linking reagent Substances 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 2
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 claims description 2
- MVBJSQCJPSRKSW-UHFFFAOYSA-N n-[1,3-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)propan-2-yl]prop-2-enamide Chemical compound OCC(CO)(CO)NC(=O)C=C MVBJSQCJPSRKSW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- DJVKJGIZQFBFGS-UHFFFAOYSA-N n-[2-[2-(prop-2-enoylamino)ethyldisulfanyl]ethyl]prop-2-enamide Chemical compound C=CC(=O)NCCSSCCNC(=O)C=C DJVKJGIZQFBFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims 2
- ZMLXKXHICXTSDM-UHFFFAOYSA-N n-[1,2-dihydroxy-2-(prop-2-enoylamino)ethyl]prop-2-enamide Chemical compound C=CC(=O)NC(O)C(O)NC(=O)C=C ZMLXKXHICXTSDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 claims 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 abstract description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 abstract description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 abstract description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 abstract 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 abstract 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 abstract 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 15
- KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N N,N,N',N'-tetramethylethylenediamine Chemical compound CN(C)CCN(C)C KWYHDKDOAIKMQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- LTPBRCUWZOMYOC-UHFFFAOYSA-N Beryllium oxide Chemical compound O=[Be] LTPBRCUWZOMYOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XDLMVUHYZWKMMD-UHFFFAOYSA-N 3-trimethoxysilylpropyl 2-methylprop-2-enoate Chemical compound CO[Si](OC)(OC)CCCOC(=O)C(C)=C XDLMVUHYZWKMMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M Acrylate Chemical compound [O-]C(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- NOZAQBYNLKNDRT-UHFFFAOYSA-N [diacetyloxy(ethenyl)silyl] acetate Chemical compound CC(=O)O[Si](OC(C)=O)(OC(C)=O)C=C NOZAQBYNLKNDRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- AJTFTYHGFWNENF-UHFFFAOYSA-N azanium;hydroxy sulfate Chemical compound [NH4+].OOS([O-])(=O)=O AJTFTYHGFWNENF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- DMZWVCJEOLBQCZ-UHFFFAOYSA-N chloro(ethenyl)silane Chemical compound Cl[SiH2]C=C DMZWVCJEOLBQCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- YLJJAVFOBDSYAN-UHFFFAOYSA-N dichloro-ethenyl-methylsilane Chemical compound C[Si](Cl)(Cl)C=C YLJJAVFOBDSYAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- WOXXJEVNDJOOLV-UHFFFAOYSA-N ethenyl-tris(2-methoxyethoxy)silane Chemical compound COCCO[Si](OCCOC)(OCCOC)C=C WOXXJEVNDJOOLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007769 metal material Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 1
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D57/00—Separation, other than separation of solids, not fully covered by a single other group or subclass, e.g. B03C
- B01D57/02—Separation, other than separation of solids, not fully covered by a single other group or subclass, e.g. B03C by electrophoresis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
- G01N27/44704—Details; Accessories
- G01N27/44747—Composition of gel or of carrier mixture
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental & Geological Engineering (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明はゲル電気泳動用毛細管(
CGE)の製造に関する。さらに詳しくは狭い口径の融
解石英毛細管に緩衝液中のアクリルアミド/ビスアクリ
ルアミドの共通(common)混合物の溶液を充填す
る。アクリルアミド混合物を毛細管内で、好ましくは6
0Co源から起こるγ−放射により産生するラジカルに
より重合する。
CGE)の製造に関する。さらに詳しくは狭い口径の融
解石英毛細管に緩衝液中のアクリルアミド/ビスアクリ
ルアミドの共通(common)混合物の溶液を充填す
る。アクリルアミド混合物を毛細管内で、好ましくは6
0Co源から起こるγ−放射により産生するラジカルに
より重合する。
【0002】
【従来の技術】慣用のゲル充填毛細管は、ラジカルイニ
シエーター、例えばペルオキソ硫酸アンモニウム及び安
定化剤としてTEMED(N,N,N’,N’−テトラ
メチレンエチレンジアミド)を用いる方法により製造さ
れる。 このような毛細管は、使用又は保存の前に除去しなけれ
ばならない高荷電副生成物及び残存アミンを含む可能性
がある。強力な分離技術としての、特にオリゴヌクレオ
チドの速やかな分離用の毛細管ゲル電気泳動は、カーギ
ャー等、エイ・エス・コーエン、ディ・アール・ナジャ
リアン、エイ・ポウルス、エイ・ガットマン、ジェイ・
エイ・スミス、ビー・エル・カーギャー、プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミィ・オブ・ユーエ
スエイ(Proc.Natl.Acad.Sci.US
A)、85(1988)9660、EP−A03245
39及びUS4,865,706により導入されてきた
。
シエーター、例えばペルオキソ硫酸アンモニウム及び安
定化剤としてTEMED(N,N,N’,N’−テトラ
メチレンエチレンジアミド)を用いる方法により製造さ
れる。 このような毛細管は、使用又は保存の前に除去しなけれ
ばならない高荷電副生成物及び残存アミンを含む可能性
がある。強力な分離技術としての、特にオリゴヌクレオ
チドの速やかな分離用の毛細管ゲル電気泳動は、カーギ
ャー等、エイ・エス・コーエン、ディ・アール・ナジャ
リアン、エイ・ポウルス、エイ・ガットマン、ジェイ・
エイ・スミス、ビー・エル・カーギャー、プロシーディ
ングス・オブ・ナショナル・アカデミィ・オブ・ユーエ
スエイ(Proc.Natl.Acad.Sci.US
A)、85(1988)9660、EP−A03245
39及びUS4,865,706により導入されてきた
。
【0003】
【発明が解決しようとする課題、課題を解決するための
手段及び発明の効果】ポリマーの均一分布に関する従来
技術の欠点を避けるため、又、ラジカルイニシエーター
の取込みによる不純物を避けるため、本発明は、毛細管
に脱ガスモノマー溶液を充填して毛細管の口径内で反応
させて線状重合又は重合による親水性ポリマー含有ゲル
マトリックスを形成させ、そして、充填毛細管のγ−放
射による重合可能な及び/又は官能反応性の化合物(類
)を架橋することを特徴とする充填毛細管の製造法に関
する。
手段及び発明の効果】ポリマーの均一分布に関する従来
技術の欠点を避けるため、又、ラジカルイニシエーター
の取込みによる不純物を避けるため、本発明は、毛細管
に脱ガスモノマー溶液を充填して毛細管の口径内で反応
させて線状重合又は重合による親水性ポリマー含有ゲル
マトリックスを形成させ、そして、充填毛細管のγ−放
射による重合可能な及び/又は官能反応性の化合物(類
)を架橋することを特徴とする充填毛細管の製造法に関
する。
【0004】好ましい態様において、本発明はa)融解
石英毛細管への、既知溶液又は緩衝液中のアクリルアミ
ド及び/又はビスアクリルアミド混合物の脱ガスモノマ
ー溶液の充填、b)ガスクロマトグラフィーにおける毛
細管カラムの製造に用いられる標準充填方法による溶液
の導入、c)毛細管両末端の閉鎖及びd)線状重合又は
重合並びに充填毛細管のγ−放射によるアクリルアミド
及び/又はビスアクリルアミド混合物の架橋を特徴とす
る。
石英毛細管への、既知溶液又は緩衝液中のアクリルアミ
ド及び/又はビスアクリルアミド混合物の脱ガスモノマ
ー溶液の充填、b)ガスクロマトグラフィーにおける毛
細管カラムの製造に用いられる標準充填方法による溶液
の導入、c)毛細管両末端の閉鎖及びd)線状重合又は
重合並びに充填毛細管のγ−放射によるアクリルアミド
及び/又はビスアクリルアミド混合物の架橋を特徴とす
る。
【0005】化学薬品、例えばラジカルイニシエーター
や安定剤は、重合の最善の実施のために添加しなければ
ならないというようなことは全くない。かかるゲル充填
毛細管は、例えば高分解性で良好なピーク対称でオリゴ
ヌクレオチドのCGE分離を可能にする。本経験によれ
ば、製造されたカラムは安定で、測定及び保存の系列の
間、分離の実施を維持する。毛細管の表面とゲルの間の
連結物質として使用する特異的官能反応性の化合物は、
特に二価性試薬がEP−A0324539に開示される
が、3−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン
、−エトキシシラン、ビニルトリアセトキシシラン、ビ
ニルトリ(β−メトキシ−エトキシ)シラン、ビニルク
ロロシラン及びメチルビニルジクロロシランに限定され
る。架橋剤はN,N’−メチレンビスアクリルアミン、
N,N’−(1,2−ジヒドロキシエチレン)−ビスア
クリルアミン、N,N’−ジアルキル酒石酸ジアミド、
N,N’−シスタミンビスアクリルアミド及びN−アク
リロイルトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンから
なる群から選ばれる。使用されるゲルは本質的にEP−
A0324539により既知である。
や安定剤は、重合の最善の実施のために添加しなければ
ならないというようなことは全くない。かかるゲル充填
毛細管は、例えば高分解性で良好なピーク対称でオリゴ
ヌクレオチドのCGE分離を可能にする。本経験によれ
ば、製造されたカラムは安定で、測定及び保存の系列の
間、分離の実施を維持する。毛細管の表面とゲルの間の
連結物質として使用する特異的官能反応性の化合物は、
特に二価性試薬がEP−A0324539に開示される
が、3−メタクリルオキシプロピルトリメトキシシラン
、−エトキシシラン、ビニルトリアセトキシシラン、ビ
ニルトリ(β−メトキシ−エトキシ)シラン、ビニルク
ロロシラン及びメチルビニルジクロロシランに限定され
る。架橋剤はN,N’−メチレンビスアクリルアミン、
N,N’−(1,2−ジヒドロキシエチレン)−ビスア
クリルアミン、N,N’−ジアルキル酒石酸ジアミド、
N,N’−シスタミンビスアクリルアミド及びN−アク
リロイルトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンから
なる群から選ばれる。使用されるゲルは本質的にEP−
A0324539により既知である。
【0006】本発明は、特に毛細管の系列を容易に且つ
速やかに造ることができる方法に関する。アクリルアミ
ドの時を誤った外部又は内部重合は本方法では避ける。 さらに、緩衝液中に溶解させたアクリルアミド及び/又
はビスアクリルアミド混合物以外の化学物質は、CGE
分離用によく適した架橋ポリアミドゲルを得るのに必要
でない。重合は好ましくは室温で行い、圧力は融解石英
毛細管に適用する必要はない。放射源の前の毛細管の延
伸配列との組合せの重合反応のこれらの緩和な条件(放
射の線量勾配による重合の開始)によって、毛細管内の
ゲルに泡が形成するのが避けられる。
速やかに造ることができる方法に関する。アクリルアミ
ドの時を誤った外部又は内部重合は本方法では避ける。 さらに、緩衝液中に溶解させたアクリルアミド及び/又
はビスアクリルアミド混合物以外の化学物質は、CGE
分離用によく適した架橋ポリアミドゲルを得るのに必要
でない。重合は好ましくは室温で行い、圧力は融解石英
毛細管に適用する必要はない。放射源の前の毛細管の延
伸配列との組合せの重合反応のこれらの緩和な条件(放
射の線量勾配による重合の開始)によって、毛細管内の
ゲルに泡が形成するのが避けられる。
【0007】好ましい態様では、本発明の方法は、ポリ
イミドコーチングの狭部分の部分完全燃焼によるカラム
内UV測定に適した融解石英毛細管の出口に近い検知窓
の生成を特徴とする。その次の態様では、本発明は、例
えば毛細管の両端を覆う隔膜がシリコンゴムで造られ、
その後の重合段階において溶媒が蒸発するのを防ぐのを
特徴とする。
イミドコーチングの狭部分の部分完全燃焼によるカラム
内UV測定に適した融解石英毛細管の出口に近い検知窓
の生成を特徴とする。その次の態様では、本発明は、例
えば毛細管の両端を覆う隔膜がシリコンゴムで造られ、
その後の重合段階において溶媒が蒸発するのを防ぐのを
特徴とする。
【0008】本発明による好ましい緩衝剤は、トリス塩
基、ホウ酸及び尿素又は他の類似の緩衝剤を含む。
基、ホウ酸及び尿素又は他の類似の緩衝剤を含む。
【0009】γ−放射によるアクリルアミド及び/又は
ビスアクリルアミドの重合及び架橋は、特異的線量に関
する危険なものではないが、γ−放射は60Co源から
産生する20kラドから400kラドで、容易に変更で
きるものが好ましい。特異的線量は、もちろん、望まし
い結果のゲルが得られることを証明した。このようにし
て得られたゲルは毛細管を満たし、次いで既知の又は自
製の装置に取り付けることができる。
ビスアクリルアミドの重合及び架橋は、特異的線量に関
する危険なものではないが、γ−放射は60Co源から
産生する20kラドから400kラドで、容易に変更で
きるものが好ましい。特異的線量は、もちろん、望まし
い結果のゲルが得られることを証明した。このようにし
て得られたゲルは毛細管を満たし、次いで既知の又は自
製の装置に取り付けることができる。
【0010】特に、例えば本発明方法によって得られた
シリカをベースとした材料、アルミナ、ベリリア又はテ
フロン(商標)から造ることができるゲル充填毛細管は
、オリゴヌクレオチドの分離に用いることができる。
シリカをベースとした材料、アルミナ、ベリリア又はテ
フロン(商標)から造ることができるゲル充填毛細管は
、オリゴヌクレオチドの分離に用いることができる。
【0011】
【実施例】最初の例では、アクリルアミドとビスアクリ
ルアミドの混合物を用いて実施した。同様の結果が、出
願人により成分比を変えて構成したアクリルアミド混合
物で得られた。例えば、19gのアクリルアミド、1.
0gのビスアクリルアミドを含むアクリルアミド保存溶
液を3回蒸留水で50mlに希釈する。緩衝剤の成分は
1.211gトリス塩基(シグマ)、1.546gホウ
酸(オウドリッチ)及び42.04g尿素(フルカ)で
、3回蒸留し脱ガスした水に溶解し100mlに希釈し
た。オリゴデオキシシチジン(24−36merシグマ
)をこの緩衝液に溶解した。
ルアミドの混合物を用いて実施した。同様の結果が、出
願人により成分比を変えて構成したアクリルアミド混合
物で得られた。例えば、19gのアクリルアミド、1.
0gのビスアクリルアミドを含むアクリルアミド保存溶
液を3回蒸留水で50mlに希釈する。緩衝剤の成分は
1.211gトリス塩基(シグマ)、1.546gホウ
酸(オウドリッチ)及び42.04g尿素(フルカ)で
、3回蒸留し脱ガスした水に溶解し100mlに希釈し
た。オリゴデオキシシチジン(24−36merシグマ
)をこの緩衝液に溶解した。
【0012】装置化
毛細管ゲル電気泳動分離を、出願人により特別に設計し
た最近の型の装置で実施した。組立式装置は、球レンズ
及び電極を有する通常の接地並びにサンプリング機器を
備えた毛細管ホールダーを有するスペクトル物理UV検
出器からなった。電極には高電圧白金電極を組込んだ。 安全の理由から、全ての機器は非金属材料、特にアクリ
ル酸ガラス、PTEE又はポリエチレンから有利に仕上
げられ、オペレーターはインターロックシステムにより
高電圧から保護される。Vax3100ワークステーシ
ョンにより、所望により毛細管非相互作用化FuGプロ
ーブスIIIインターフェイスによりHCN35−35
000高電圧力供給CFuG、ローゼンハイム、FRG
)を行い、電気泳動試料導入に適した電圧コントロール
及び実際の分離電圧の調節を可能にする。分離は、45
cm実効及び60cmトータルの長さの融解石英毛細管
(100μmi.d.、375μm o.d.、ポリ
マイクロ・テクノロジィズ)で行った。カラム内検定用
に、1mm部分のポリイミドコーチングを毛細管の注入
端から45cmの距離で燃焼により窓から取り除いた。 試料 : 0.1mg/ml pd(C)24−3
6毛細管: 45cm実効、60cmトータルの長さ、
100μmi.d.、ポリアクリルアミドゲル充填(6
%T、3%C)緩衝液: 0.1Mトリス、0.25M
ホウ酸塩緩衝液、7M尿素、pH7.5 注入 : 界面動電、5000V6s分離 電圧 : 300V/cm 検出 : UV/260nm
た最近の型の装置で実施した。組立式装置は、球レンズ
及び電極を有する通常の接地並びにサンプリング機器を
備えた毛細管ホールダーを有するスペクトル物理UV検
出器からなった。電極には高電圧白金電極を組込んだ。 安全の理由から、全ての機器は非金属材料、特にアクリ
ル酸ガラス、PTEE又はポリエチレンから有利に仕上
げられ、オペレーターはインターロックシステムにより
高電圧から保護される。Vax3100ワークステーシ
ョンにより、所望により毛細管非相互作用化FuGプロ
ーブスIIIインターフェイスによりHCN35−35
000高電圧力供給CFuG、ローゼンハイム、FRG
)を行い、電気泳動試料導入に適した電圧コントロール
及び実際の分離電圧の調節を可能にする。分離は、45
cm実効及び60cmトータルの長さの融解石英毛細管
(100μmi.d.、375μm o.d.、ポリ
マイクロ・テクノロジィズ)で行った。カラム内検定用
に、1mm部分のポリイミドコーチングを毛細管の注入
端から45cmの距離で燃焼により窓から取り除いた。 試料 : 0.1mg/ml pd(C)24−3
6毛細管: 45cm実効、60cmトータルの長さ、
100μmi.d.、ポリアクリルアミドゲル充填(6
%T、3%C)緩衝液: 0.1Mトリス、0.25M
ホウ酸塩緩衝液、7M尿素、pH7.5 注入 : 界面動電、5000V6s分離 電圧 : 300V/cm 検出 : UV/260nm
【0013】第1図の通電クロマトグラムは24−36
merオリゴヌクレオチドの混合物の分離を示す。ピー
クの分割及び対称は優れており、エイ・エス・コーン、
ディ・アール・ナジャリアン、エイ・ポウラス、エイ・
ガットマン、ジェイ・エイ・スミス、ビー・エル・カー
ガー、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデ
ミィ・オブ・ユーエスエイ(Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA)85(1988)9660及び
エイ・ガットマン、エイ・ポウラス、エイ・エス・コー
ン、エヌ・グリンバーグ、ビー・エル、ガーガー、ジャ
ーナル・オブ・クロマトグラフィ(J,Chromat
ography)、448(1988)41により既に
発表されているものと同様に良好であることが明らかに
されたことに注目すべきである。
merオリゴヌクレオチドの混合物の分離を示す。ピー
クの分割及び対称は優れており、エイ・エス・コーン、
ディ・アール・ナジャリアン、エイ・ポウラス、エイ・
ガットマン、ジェイ・エイ・スミス、ビー・エル・カー
ガー、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデ
ミィ・オブ・ユーエスエイ(Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA)85(1988)9660及び
エイ・ガットマン、エイ・ポウラス、エイ・エス・コー
ン、エヌ・グリンバーグ、ビー・エル、ガーガー、ジャ
ーナル・オブ・クロマトグラフィ(J,Chromat
ography)、448(1988)41により既に
発表されているものと同様に良好であることが明らかに
されたことに注目すべきである。
【0014】ペルオキソ硫酸とTEMED(N,N,N
’,N’−テトラメチレンエチレンジアミン)を用いる
共通手順によって製造したゲル毛細管で得た分割及びピ
ーク対称は、これまでの経験によれば、保存の間にしば
しば悪化する。ゲル毛細管の実施で融解石英毛細管の壁
コーチングのそれまでの段階を含むなどのゲル形成のパ
ラメーターの影響は現在、研究されている。
’,N’−テトラメチレンエチレンジアミン)を用いる
共通手順によって製造したゲル毛細管で得た分割及びピ
ーク対称は、これまでの経験によれば、保存の間にしば
しば悪化する。ゲル毛細管の実施で融解石英毛細管の壁
コーチングのそれまでの段階を含むなどのゲル形成のパ
ラメーターの影響は現在、研究されている。
【0015】
【図1】 本発明のゲル充填毛細管を用いたオリゴヌ
クレオチドの混合物の電気泳動クロマトグラムを示す。
クレオチドの混合物の電気泳動クロマトグラムを示す。
Claims (9)
- 【請求項1】 ミクロ毛細管に脱ガスモノマー溶液を
充填して毛細管の口径内で反応させて線状重合又は重合
による親水性ポリマー含有ゲルマトリックスを形成させ
ること、及び充填毛細管のγ−放射により重合可能な及
び/又は官能反応性の化合物(類)を架橋することを特
徴とする毛細管ゲル電気泳動用ゲル充填毛細管の製造法
。 - 【請求項2】 a)融解石英毛細管への、既知溶液又
は緩衝液中のアクリルアミド及び/又はビスアクリルア
ミド混合物の脱ガスモノマー溶液の充填、b)ガスクロ
マトグラフィーにおける毛細管カラムの製造に用いられ
る標準充填方法による溶液の導入、c)毛細管両末端の
閉鎖及びd)線状重合又は重合並びに充填毛細管のγ−
放射によるアクリルアミド及び/又はビスアクリルアミ
ド混合物の架橋を特徴とする請求項1の方法。 - 【請求項3】 ポリイミドコーチングの狭部分の部分
完全燃焼によるカラム内UV測定に適した融解石英毛細
管の出口に近い検知窓の生成を特徴する請求項1の方法
。 - 【請求項4】 緩衝剤がトリス塩基、ホウ塩及び尿素
又は他の類似の緩衝剤である請求項2又は3の方法。 - 【請求項5】 60Co源から産生する線量が20k
ラドから40kラドまで変化する請求項1ないし4の一
つの方法。 - 【請求項6】 脱ガスモノマー溶液中に存在する架橋
剤がN,N’−メチレンエチレンビスアクリルアミド、
N,N’−(1,2−ジヒドロキシエチレン)−ビスア
クリルアミド、N,N’−ジアルキル酒石酸ジアミド、
N,N’−シスタミンビスアクリルアミド及びN−アク
リロイルトリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンから
なる群から選ばれる請求項1ないし5の方法。 - 【請求項7】 請求項1ないし6で請求された方法に
より得られる毛細管ゲル電気泳動用のゲル充填毛細管の
用途。 - 【請求項8】 毛細管ゲル電気泳動、特にミクロ毛細
管ゲル電気泳動用のゲル充填毛細管の用途。 - 【請求項9】 オリゴヌクレオチドの分離用の請求項
8の毛細管の用途。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE90108487.1 | 1990-05-05 | ||
EP90108487A EP0455841A1 (en) | 1990-05-05 | 1990-05-05 | Method for the production of gel filled capillaries for capillary gel electrophoresis |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04230844A true JPH04230844A (ja) | 1992-08-19 |
Family
ID=8203952
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP3100984A Pending JPH04230844A (ja) | 1990-05-05 | 1991-05-02 | 毛細管ゲル電気泳動用ゲル充填毛細管の製造法 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5114550A (ja) |
EP (1) | EP0455841A1 (ja) |
JP (1) | JPH04230844A (ja) |
CA (1) | CA2041786A1 (ja) |
IE (1) | IE911513A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010060510A (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-18 | Japan Atomic Energy Agency | 電気泳動用低濃度ゲル及びその製造方法 |
JP2014097463A (ja) * | 2012-11-15 | 2014-05-29 | Tadashi Kishimoto | 電気泳動装置、電気泳動法および電気泳動法を用いた濃縮・分離・分析方法 |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0490406A3 (en) * | 1990-12-14 | 1992-08-05 | Hewlett-Packard Company | Capillary gel electrophoresis columns and methods of preparing the same |
US5230832A (en) * | 1991-01-24 | 1993-07-27 | Brandeis University | Galactomannan-agarose binary gel for nucleic acid electrophoresis |
EP3684941A4 (en) * | 2017-09-22 | 2021-06-23 | Prozyme, Inc. | USE OF POLYAMINES AS A SOLVENT FOR CAPILLARY ELECTROPHORESIS OF LABELED GLYCANS USING GELS |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4189370A (en) * | 1978-06-21 | 1980-02-19 | Societe Sebia | Process for obtaining gels of N-methylol-acrylamide copolymers and application of said gels for the stepped gradient separation of seric lipoproteins |
US4840756A (en) * | 1984-04-27 | 1989-06-20 | E. I. Du Pont Nemours And Company | Radiation process for preparation of electrophoresis gel material |
US4704198A (en) * | 1984-04-27 | 1987-11-03 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Porosity gradient electrophoresis gel |
US4863647A (en) * | 1984-06-28 | 1989-09-05 | Baylor Jr Charles | Process for preparation of electrophoresis gel material |
US4865707A (en) * | 1986-10-21 | 1989-09-12 | Northeastern University | Capillary gel electrophoresis columns |
US4898658A (en) * | 1987-11-25 | 1990-02-06 | Northeastern University | Integrated temperature control/alignment system for high performance capillary electrophoretic apparatus |
-
1990
- 1990-05-05 EP EP90108487A patent/EP0455841A1/en not_active Withdrawn
-
1991
- 1991-05-02 JP JP3100984A patent/JPH04230844A/ja active Pending
- 1991-05-02 US US07/694,742 patent/US5114550A/en not_active Expired - Fee Related
- 1991-05-03 IE IE151391A patent/IE911513A1/en unknown
- 1991-05-03 CA CA002041786A patent/CA2041786A1/en not_active Abandoned
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2010060510A (ja) * | 2008-09-05 | 2010-03-18 | Japan Atomic Energy Agency | 電気泳動用低濃度ゲル及びその製造方法 |
JP2014097463A (ja) * | 2012-11-15 | 2014-05-29 | Tadashi Kishimoto | 電気泳動装置、電気泳動法および電気泳動法を用いた濃縮・分離・分析方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
IE911513A1 (en) | 1991-11-06 |
EP0455841A1 (en) | 1991-11-13 |
CA2041786A1 (en) | 1991-11-06 |
US5114550A (en) | 1992-05-19 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US5074982A (en) | Suppression of electroosmosis with hydrolytically stable coatings | |
Cobb et al. | Electrophoretic separations of proteins in capillaries with hydrolytically-stable surface structures | |
US6074542A (en) | Compounds for molecular separations | |
Albarghouthi et al. | Poly‐N‐hydroxyethylacrylamide (polyDuramide™): A novel, hydrophilic, self‐coating polymer matrix for DNA sequencing by capillary electrophoresis | |
Schmalzing et al. | Characterization and performance of a neutral hydrophilic coating for the capillary electrophoretic separation of biopolymers | |
Schwer et al. | Computer simulation and experimental evaluation of on-column sample preconcentration in capillary zone electrophoresis by discontinuous buffer systems | |
US5085756A (en) | Column separation system for electrophoresis with sample pretreatment | |
JP3607923B2 (ja) | 被覆毛細管カラム及びその用途としての電気泳動分離方法 | |
US6926815B2 (en) | Copolymers for capillary gel electrophoresis | |
US5112460A (en) | High performance microcapillary gel electrophoresis | |
Kohr et al. | Characterization of quartz capillaries for capillary electrophoresis | |
WO2000042423A9 (en) | Copolymers for capillary gel electrophoresis | |
US5143753A (en) | Suppression of electroosmosis with hydrolytically stable coatings | |
US3948743A (en) | Method for gel electrophoresis | |
US5089103A (en) | Electrophoresis capillary with agarose | |
US5114768A (en) | Surfaces with reduced protein interactions | |
Kamande et al. | Open‐tubular capillary electrochromatography using a polymeric surfactant coating | |
JPH04230844A (ja) | 毛細管ゲル電気泳動用ゲル充填毛細管の製造法 | |
US5502169A (en) | Deactivation of the inner surfaces of capillaries | |
EP0490406A2 (en) | Capillary gel electrophoresis columns and methods of preparing the same | |
CA2025052A1 (en) | High performance microcapillary gel electrophoresis | |
JP3811188B2 (ja) | 電気泳動及びクロマトグラフィー技術でのポリアクリルアミドマトリックスのための、新規アクリルアミド誘導体及び新規な配合物 | |
AU2008247532A1 (en) | System and method for proteomics | |
NL194562C (nl) | Capillaire gels gevormd door ruimtelijke progressieve polymerisatie waarbij gebruik wordt gemaakt van een bewegende initiator. | |
JPH09236580A (ja) | キャピラリー電気泳動用媒体 |