JPH04226919A - 細胞含有組成物中のウイルスの光力学的不活性化 - Google Patents

細胞含有組成物中のウイルスの光力学的不活性化

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JPH04226919A
JPH04226919A JP3109327A JP10932791A JPH04226919A JP H04226919 A JPH04226919 A JP H04226919A JP 3109327 A JP3109327 A JP 3109327A JP 10932791 A JP10932791 A JP 10932791A JP H04226919 A JPH04226919 A JP H04226919A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞の実質的破壊また
は不活性化を招くことなく、例えば赤血球の構造または
機能に不利に影響を与えることなく、光暴露と一緒に光
活性化合物、例えばフタロシアニンを使用することによ
り、生物学的組成物中、例えば全血または赤血球濃縮物
中のウイルスを不活性化する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】構想の本質 改良された提供者選択および提供血液スクリーニング法
によって全血およびその成分のウイルス感染度を減少さ
せることが実質的に進歩している。この進歩にもかかわ
らず、全血および血液製品による肝炎ウイルスおよびヒ
ト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）といったウイルスの伝染
の危険が引き続き存在している。
【０００３】ある種のウイルス〔例えば、Ｂ型肝炎ウイ
ルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒト免
疫不全ウイルス（ＨＩＶ）〕の伝染の危険は、製造工程
中における殺ウイルス法の適用により、凝固因子濃縮物
においてかなり減少されそしてことによれば除去されて
いる（Ｐｒｉｎｃｅ，　Ａ．Ｍ．，　Ｈｏｒｏｗｉｔｚ
，　Ｂ．，　Ｈｏｒｏｗｉｔｚ，　Ｍ．Ｓ．，Ｚａｎｇ
，　Ｅ．，　”Ｔｈｅ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ
　Ｖｉｒｕｓ−Ｆｒｅｅ　Ｌａｂｉｌｅ　Ｂｌｏｏｄ　
Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ−　Ａ　Ｒｅｖｉｅｗ”，　Ｅ
ｕｒ．　Ｊ．　Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ．，３　：　１０３
−１１８，　１９８７　；　およびＭａｎｎｕｃｃｉ，
　Ｐ．Ｍ．，　Ｃｏｌｏｍｂｏ，　Ｍ．，　”Ｖｉｒｕ
ｃｉｄａｌ　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｌｏｔｔｉ
ｎｇ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ”，　
Ｔｈｅ　Ｌａｎｃｅｔ，　７８２−７８５，　１９８８
）。しかしながら、凝固因子濃縮物を処理する時、幾つ
かのウイルス（例えばパルボウイルス）は感染性のまま
であることがある。その上、細胞成分、即ち血液細胞分
画、例えば赤血球または血小板に適用できる殺ウイルス
法の開発は遅れている。というのは、細胞はタンパク質
よりもずっともろく、そして不活性化に対してウイルス
を潜伏させ保護する働きをするからである。それでもな
お、全血または血液成分によるウイルス伝染を取り除こ
うとする場合、有効なウイルスの除去または血液細胞に
適用できる可能な殺ウイルス法が必要であろう。赤血球
も血小板も共に非複製性であるので、核酸修飾に向けら
れるアプローチが所望の特異性を提供するかもしれない
。
【０００４】殺ウイルス法を評価する場合、ウイルスは
多数の形態、即ち、細胞から遊離しているウイルス；細
胞に関連して形成されたウイルス；機能性であるが細胞
内に封入されないウイルス核酸；および細胞ゲノム中に
組み込まれたウイルス核酸、において細胞含有溶液中に
存在するであろうことを認識することが重要である。。 どの形態も、感染性でありそして生体内でウイルス性疾
患を引き起こすことができるとみなすべきである。ある
形態、例えば細胞遊離ウイルスを不活性化する殺ウイル
ス法は、他の形態、例えば細胞関連形態のウイルスを不
活性化することができない。その上、細胞の存在がウイ
ルス不活性化への物理的および化学的アプローチの作用
を阻害することが知られている。細胞は、もしそれがな
ければ殺ウイルス性であったであろう添加された殺ウイ
ルス性試薬を目当てに競争しそして放射線を吸収する。 例えば、紫外線は塩溶液または希タンパク質溶液中では
非常に殺ウイルス性であるけれども、細胞含有溶液を処
理する時は殺ウイルス活性の程度が不完全である。更に
、このような状況においては、単にウイルスを不活性化
することだけでは十分でなく、むしろ貴重な細胞成分、
例えば赤血球に対する有害な影響なしにウイルス感染性
が削除されるような十分な力でそれを行うことが必要で
ある。
【０００５】開発されたほとんどの殺ウイルス法、例え
ば殺菌または溶剤／洗浄剤処理は、細胞を損傷したりそ
れらを輸液に不適当にしたりすることなしに血液細胞製
剤に適用することはできない。これまで、細胞に影響を
与えることなくそして／または高毒性試薬を使用するこ
となく、少なくとも１０４　感染単位（ＩＤ５０）、好
ましくは≧１０６　ＩＤ５０の細胞内および細胞外ウイ
ルスが不活性化されたウイルス滅菌形態の全血または赤
血球濃縮物または血小板濃縮物を調製することは不可能
であった。
【０００６】フタロシアニン 癌細胞の処理のためのフタロシアニンの使用はますます
関心か高まっている（Ｒｏｓｅｎｔｈａｌ，　Ｉ．およ
びＢｅｎ−Ｈｕｒ，　Ｅ．，　”Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａ
ｎｉｎｅｓ　ｉｎ　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ”，　Ｌ
ｅｚｈｏｆｆ　Ｃ．Ｃ．およびＬｅｖｅｒ　Ａ．Ｂ．Ｐ
．編、Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ　，　ＶＣＨ　
Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，　Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ
，　３９３−４２５，１９８９）　けれども、フタロシ
アニンは一般に溶血性であると考えられており、本出願
人の結果は全く驚くべきことである。例えば、Ｂｅｎ−
Ｈｕｒ　およびＲｏｓｅｎｔｈａｌ　（”Ｐｈｏｔｏｈ
ｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ｅｒｙｔｈｒｏ
ｃｙｔｅｓ　Ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　Ａｌｕｍｉｎｕｍ
　Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ　Ｔｅｔｒａｓｕｌｆ
ｏｎａｔｅ”，Ｃａｎｃｅｒ　Ｌｅｔｔ．，　３０：　
３２１−３２７，　１９８６）は、アルミニウムフタロ
シアニンテトラスルホネートにより誘導されるヒト赤血
球の光溶血を研究した。２．５　〜１０μＭ　ＡｌＰｃ
Ｓ４での処理により≧４０　ＫＪ／ｍ２　（≧４０　Ｊ
／ｃｍ２）　の光フルエンスにおいて実質的な（２０−
１００　％）　溶血が誘導された。 Ｂｅｎ−Ｈｕｒ　およびＲｏｓｅｎｔｈａｌ　は、ウイ
ルス致死の課題を取り扱わなかった。同様に、Ｓｏｎｏ
ｄａ，　Ｋｒｉｓｈｎａ　およびＲｉｅｓｚ　（”Ｔｈ
ｅ　Ｒｏｌｅ　ｏｆ　Ｓｉｇｌｅｔ　Ｏｘｙｇｅｎ　ｉ
ｎ　ｔｈｅ　Ｐｈｏｔｏｈｅｍｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｒ
ｅｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅｌｌｓ　Ｓｅｎｓｉｔｉｚｅｄ
　ｂｙ　Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎ”，　Ｐｈｏｔｏ
ｃｈｅｍ．　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌ．，　４６：　６２５
−６３１，１９８７）　は、幾つかのフタロシアニン誘
導体の各々により誘導される光溶血を研究した。アルミ
ニウムおよび亜鉛フタロシアニンはそれぞれ溶血性であ
るが、遊離の（金属なしの）フタロシアニンまたは中心
金属カチオンとして鉄、銅もしくはコバルトを有するフ
タロシアニンは溶血性でなかった。ウイルス致死は研究
しなかった。
【０００７】Ｓｉｎｇｅｒら（Ｃ．Ｒ．Ｊ．　Ｓｉｎｇ
ｅｒ，　Ｔ．　Ａｚｉｍ　およびＱ．　Ｓａｔｔｅｎｔ
ａｕ，　”Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ　Ｅｖａｌｕｔｉｏ
ｎ　ｏｆ　Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅ　Ｐｈｏｔｏ
ｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｉｎａｃｔｉｖ
ａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｉｒａｌ　Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　
ｉｎ　Ｂｌｏｏｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ”，　ａｂｓｔｒ
ａｃｔ　　　Ｂｒｉｔｉｓｈ　Ｊ．　Ｈｅｍａｔｏｌｏ
ｇｙ，　３月２３　−２５，　１９８８：　Ａｂｓ．　
３１）は、フタロシアニンを用いて行われたウイルス致
死に関する唯一の研究であると思われるもののなかで、
血漿に添加された不定量のエプスタイン−バーウイルス
およびＨＩＶが両者とも、５および２５μｇ／ｍｌのス
ルホン化されたアルミニウムフタロシアニンと２　ｍＷ
／ｃｍ２での３０分間（３．６　Ｊ／ｃｍ２）　の処理
により不活性化されることを証明した。第ＶＩＩＩ因子
の回復はたった５０％であった。Ｓｉｎｇｅｒらは赤血
球への適用を評価していると述べているが、細胞または
細胞関連ウイルスにおける実際の研究を全く報告してい
ない。 Ｓｉｎｇｅｒらにより報告された第ＶＩＩＩ因子の比較
的乏しい回復（５０％）、タンパク質より大きい細胞の
脆弱性、およびフタロシアニンでの処理に対する赤血球
の光溶血に関する前の実験を考えれば、本発明の結果は
全く驚くべきことである。
【０００８】全血または赤血球濃縮物の処理における他
の親油性色素 Ｃｏｌｅら（Ｃｏｌｅ，　Ｍ．，　Ｓｔｒｏｍｂｅｒｇ
，　Ｒ．，　Ｆｒｉｅｄｍａｎ，　Ｌ．，　Ｂｅｎａｄ
ｅ，　Ｌ．，　Ｓｈｕｍａｋｅｒ，　Ｊ．，　”Ｐｈｏ
ｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　Ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　Ｒｅｄ　Ｃｅｌｌｓ”，　Ｔｒ
ａｎｓｆｕｓｉｏｎ　，　２９，　Ｓｕｐｐ：４２ｓ　
Ａｂｓ．，　１９８９）は、１５％のヘマトクリットに
希釈されたパック赤血球の処理におけるメロシアニン５
４０　の使用を探究した。血漿の濃度が２．６　％にな
るように血漿を除去した時、水疱性口内炎ウイルスの６
　ｌｏｇ　の減少が達成された。しかしながら、１５％
血漿を含む試料においては、ＶＳＶ　の１　ｌｏｇ　の
減少のみが達成された。前記著者らは、「血漿は損傷か
ら赤血球を保護するために必要であるけれども、ウイル
ス致死も有意に減少する」と結論づけている。この結論
は、洗浄された血小板の懸濁液において５％アルブミン
の存在がウイルス致死を阻害したという観察（Ｐｒｏｄ
ｏｕｚ，　Ｋ．Ｎ．，　”Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｍｅｒ
ｏｃｙａｎｉｎｅ　５４０　ｏｎ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　
Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ
　ｉｔｓ　Ａｎｔｉｖｉｒａｌ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｂ
ｙ　Ａｌｂｕｍｉｎ”，　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，　
２９，　Ｓｕｐｐ：４２ｓ　Ａｂｓ．，　１９８９）、
および緩衝液中の６　ｌｏｇ　のモデルウイルスがメロ
シアニン５４０　により不活性化できたが、１２−２５
　％の血漿の存在下では１−３　ｌｏｇ　のウイルスし
か不活性化できなかったという観察（Ｍｏｒｏｆｆ，　
Ｇ．，　Ｂｅｎａｄｅ，　Ｌ．Ｅ．，　Ｄａｂａｙ，　
Ｍ．，　Ｇｅｏｒｇｅ，　Ｖ．Ｍ．，　Ｓｈｕｍａｋｅ
ｒ，　Ｊ．およびＤｏｄｄ，　Ｒ．Ｙ．，　”Ｕｓｅ　
ｏｆ　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅｓｔｏ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ　Ｖｉｒｕｓｅｓ　ｉ
ｎ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ”，　
Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ，　２９，　Ｓｕｐｐ：Ｓ１５
　Ａｂｓ．，　１９８９）により支持される。さらに、
前記著者らは、その方法が「血小板の性質に不利に影響
を及ぼした」と述べている。
【０００９】Ｍａｔｔｈｅｗｓ，　Ｊ．Ｔ．，　Ｎｅｗ
ｍａｎ，　Ｊ．Ｔ．，　Ｓｏｇａｎｄａｒｅｓ−Ｂｅｒ
ｎａｌ，　Ｆ．，ら、”Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ　Ｔ
ｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｖｉｒａｌ　Ｃｏｎｔａｍｉｎａ
ｎｔｓ　ｗｉｔｈ　Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　Ｆｏｒ　Ｂａ
ｎｋｉｎｇ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”，　Ｔｒａｎ
ｓｆｕｓｉｏｎ　，　２８，　８１−８３，　１９８８
　は、ヘマトポルフィリン誘導体と光とによる全血の処
理を研究した。かれらは、２．５　μｇ／ｍｌのジヘマ
トポルフィリンエーテル（ＤＨＥ）　と光での培地の処
理では　３×１０５　ＰＦＵ　の単純ヘルペスウイルス
１型（ＨＳＶ−１）　の不活性化、ただし同条件下での
血液の処理では１０３　ＰＦＵ　のみの不活性化を報告
している。ＤＨＥ　の濃度を２０μｇ／ｍｌに増やして
もウイルス致死は改善されなかった。２．５　μｇ／ｍ
ｌのＤＨＥ　と５　Ｊ／ｃｍ２　の光において赤血球の
構造および機能はよく維持されたが、緩衝液に添加され
た細胞遊離形　ＨＩＶ　（　２×１０３　ＩＤ５０）　
はこの条件下で完全には殺されなかった。
【００１０】他の光活性化合物 Ｌｉｎ　ら（Ｌｉｎ，　Ｌ．，　Ｗｉｅｓｅｈａｈｎ，
　Ｇ．Ｐ．，　Ｍｏｒｅｌ，　Ｐ．Ａ．およびＣｏｒａ
ｓｈ，　Ｌ．，　”Ｕｓｅ　ｏｆ　８−Ｍｅｔｈｏｘｙ
ｐｓｏｒａｌｅｎ　ａｎｄ　Ｌｏｎｇ−ｗａｖｅｌｅｎ
ｇｔｈ　Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｒａｄｉａｔｉｏｎ
　ｆｏｒ　Ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐ
ｌａｔｅｌｅｔ　Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｓ”，　Ｂｌ
ｏｏｄ，　７４：　５１７−５２５，　１９８９）は、
ソラレンおよびＵＶ−Ａへの暴露が血小板濃縮物に添加
されたネコ白血病ウイルスの≧１０５．５　ＩＤを不活
性化することを証明した。しかしながら、全血または赤
血球濃縮物における実験は実施しなかった。血小板形態
学、凝集、および遊離反応は処理直後は十分に維持され
、そして９６時間までの貯蔵に関して未処理の対照と比
較して同等の値を示した。対比して、Ｍｏｒｏｆｆら（
Ｍｏｒｏｆｆ，　Ｇ．，　Ｂｅｎａｄｅ，　Ｌ．Ｅ．，
　Ｄａｂｅｙ，　Ｍ．，　Ｇｅｏｒｇｅ，　Ｖ．Ｍ．，
　Ｓｈｕｍａｋｅｒ，　Ｊ．およびＤｏｄｄ，　Ｒ．Ｙ
．，　”Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　
Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ　ｔｏ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅ　
Ｖｉｒｕｓｅｓ　ｉｎ　Ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｓｕｐｅｎ
ｓｉｏｎｓ”，　Ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎ　，　２９，
　Ｓｕｐｐ，　Ｓ１５　Ａｂｓ．，　１９８９）　は、
血小板の処理のためのソラレンの使用を探究し、そして
たった１２％の血漿の存在がウイルス致死を阻害し、血
小板の性質に悪影響を及ぼすと結論づけた。典型的に調
製される時、輸液用の赤血球および血小板濃縮物は１０
０　％血漿中に懸濁されることを指摘すべきである。
【００１１】１９８８年１２月　２日に出願された米国
特許出願第０７／２７９，１７９号および最近発表され
た摘要（Ｗｉｌｌｉａｍｓ　ら、Ｂｌｏｏｄ　，　７２
：　Ｓｕｐｐｌ．：２８７ａ，　１９８８）において、
全血に添加された水疱性口内炎ウイルスが、赤血球溶解
を引き起こすことなく加水分解性アリールジオールエポ
キシドとのインキュベーションにより不活性化されるこ
とを報告している。
【００１２】オゾンが１０９　ｐＦＵ／ｍｌの肝炎ウイ
ルスを含む全血を汚染除去することが主張されている（
Ｚｅｅ，　Ｙ．Ｃ．およびＢｏｌｔｏｎ，　Ｄ．Ｃ．，
　”Ｏｚｏｎｅ　Ｄｅｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏ
ｆ　Ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ”，　　米国特許第４，６３２，９８０　号）　。し
かしながら、この主張を裏付けるデータが全く与えられ
ていない。
【００１３】Ｐｒｏｄｏｕｚ，　Ｋ．Ｎ．，　Ｆｒａｔ
ａｎｔｏｎｉ，　Ｊ．Ｃ．，　Ｂｏｏｎｅ，　Ｊ．Ｅ．
およびＢｏｎｎｅｒ，　Ｒ．Ｆ．，　”Ｕｓｅ　ｏｆ　
Ｌａｓｅｒ−ＵＶ　ｆｏｒ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ
　ｏｆ　Ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　Ｂｌｏｏｄ　Ｐｒｏｄｕｃ
ｔｓ”，　Ｂｌｏｏｄ，　７０：　５８９−５９２，　
１９８７　は、血小板濃縮物のレーザー−ＵＶ処理が、
１０６　（ＩＤ５０）までのポリオウイルスが不活性化
される条件下で血小板の機能を大部分維持したことを報
告している。しかしながら、緩衝化媒体中でのみウイル
ス不活性化を実験しており血漿の存在下では実験してお
らず、そして細胞遊離形のウイルスのみを使用している
。
【００１４】Ｈａｒｔｍａｎ　ら（Ｈａｒｔｍａｎ，　
Ｆ．Ｗ．，　Ｍａｎｇｕｎ，　Ｇ．Ｈ．，　Ｆｅｅｌｅ
ｙ，　Ｎ．，　Ｊａｃｋｓｏｎ，　Ｅ．，”Ｏｎ　ｔｈ
ｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　
ｏｆ　Ｂｌｏｏｄ　ａｎｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｐｒｏｄｕｃ
ｔｓ”，　　Ｐｒｏｃ．　Ｓｏｃ．　Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ
．　Ｍｅｄ．　，　７０：　２４８−２５４，　１９４
９）は、ナイトロジェンマスタート、即ちメチル−ビス
（β−クロロエチル）アミン塩酸塩での全血の処理が、
赤血球溶血が対照よりも大きくない条件下で１０６．６
　ＩＤ５０の水疱性口内炎ウイルスの不活性化をもたら
すことを示した。ナイトロジェンマスタートは発癌性で
あることを指摘すべきである。
【００１５】ＬｏＧｒｉｐｐｏ（ＬｏＧｒｉｐｐｏ，　
Ｇ．Ａ．，　”Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　
ｔｈｅ　Ｕｓｅ　ｏｆ　Ｂｅｔａ−ｐｒｏｐｉｏｌａｃ
ｔｏｎｅ　ｉｎ　Ｖｉｒｕｓ　Ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏ
ｎ”，　Ａｎｎ．　ＮＹ　Ａｃａ．　Ｓｃｉ．　，　８
３，　５７８−５９４，　１９５９）は、血漿とは別々
に赤血球をβ−プロピオラクトンで処理した。この処理
は、赤血球溶血を引き起こすことなく１０８　ＩＤ５０
より多くの東部ウマ脳炎ウイルスの不活性化をもたらし
た。処理された赤血球のヒトへのその後の注入は、循環
寿命の短縮を生じた。
【００１６】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、細胞
の実質的破壊または不活性化を招くことなく細胞含有組
成物中のウイルスを不活性化することである。本発明の
別の目的は、赤血球または血小板の構造または機能に不
利に影響を与えることなく、全血、赤血球濃縮物および
血小板濃縮物中のウイルスを不活性化することである。 本発明の別の目的は、所望の可溶性生物学的物質（例え
ば凝固因子濃縮物、ヘモグロビン溶液）の実質的破壊ま
たは不活性化を招くことなく、生物学的組成物中のウイ
ルスを不活性化することである。
【００１７】本発明の更なる目的は、血液銀行における
全血、赤血球濃縮物および血小板濃縮物並びに全血、赤
血球濃縮物または血小板濃縮物から誘導される任意の生
成物のウイルス安全性を向上させることである。本発明
の更に別の目的は、他の方法では暴露されるだろう病院
管理労働者または他の健康管理労働者のウイルスへの暴
露を減少させることである。
【００１８】本発明の更に別の目的は、動物およびヒト
における循環ウイルス負荷を減少させることである。本
発明の更に別の目的は、使用前の、細胞含有組成物、例
えば赤血球濃縮物の貯蔵性を改善することである。
【００１９】
【課題を解決するための手段】上記目的並びに他の目的
、ねらいおよび利点は本発明によりかなえられる。本発
明は、細胞の実質的破壊または不活性化を招くことなく
、細胞含有組成物中の細胞外脂質包被ヒト病原性ウイル
スおよび／または細胞内ヒト病原性ウイルスを不活性化
する方法であって、≧１　×１０９　細胞／ｍｌを有し
且つ感染性ウイルスを含有する細胞含有組成物を、≧６
３０　ｎｍの最大吸収波長を有する少なくとも１種の殺
ウイルス有効量の光反応性化合物、光および酸化剤と接
触せしめ、前記ウイルスを実質的に不活性化しそして完
全な細胞機能および構造の８０％より高い保持をもたら
すことを含んで成る方法に関する。
【００２０】本発明の別の観点によれば、生物学的組成
物中の細胞外および細胞内ウイルスは、前記組成物を少
なくとも１種の殺ウイルス有効量の光反応性化合物、光
および消光剤と接触せしめ、それによって前記物質の機
能を保持しながら前記ウイルスを不活性化することを含
んで成る方法により、前記組成物の実質的破壊または不
活性化を招くことなく不活性化される。
【００２１】更に詳しくは、本発明は、全血、赤血球濃
縮物もしくは血小板濃縮物または全血、赤血球濃縮物も
しくは血小板濃縮物から誘導される任意の生成物中の細
胞外および細胞内ウイルスを不活性化する方法であって
、前記全血、赤血球濃縮物もしくは血小板濃縮物または
全血、赤血球濃縮物もしくは血小板濃縮物から誘導され
る任意の生成物を、６３０　ｎｍより大きい最大吸収波
長を有する光反応性化合物、例えばプルプリンまたはフ
タロシアニン、の殺ウイルス有効量と接触せしめ、そし
て得られた組成物を、消光剤、例えばグルタチオンの任
意の存在と共に、酸化剤の存在下において光に暴露する
ことを含んで成る方法に関する。
【００２２】本発明は、また、輸液に適するヒト赤血球
を≧　１×１０９　細胞／ｍｌ　の濃度で含んで成り、
そして非感染形態において細胞外脂質包被ヒト病原性ウ
イルスおよび細胞内ヒト病原性ウイルスを有する組成物
であって、前記赤血球が、注入時に好ましくは７０％以
上、好ましくは８５％以上の正常回復を有し、そして例
えば赤血球について≧２０日、好ましくは３０日の十分
な循環寿命を有する組成物にも関する。上記組成物は、
好ましくは、通常より大きい浸透圧ショックに対する耐
性を有する。
【００２３】
【作用】血液は、固体（細胞、即ち赤血球、白血球およ
び血小板）および液体（血漿）から構成される。細胞は
、貧血、凝固障害、感染等の処置において輸液される。 加えて、細胞は潜在的に有効な物質、例えばヘモグロビ
ンを含有し、そしてそれらを誘導して別の潜在的に有効
な物質、例えばインターフェロン、増殖因子および他の
生体応答調節剤を作ることができる。血漿は、主として
水、塩類、脂質およびタンパク質から成る。タンパク質
はフィブリノーゲン、血清グロブリンおよび血清アルブ
ミンと呼称されるグループに分けられる。ヒト血漿中に
見出される典型的な抗体（免疫グロブリン）としては、
感染性肝炎、インフルエンザＨ等に対して向けられた抗
体である。
【００２４】輸血は、病気または出血から生じる貧血、
血漿タンパク質の低下または循環容量の低下から生じる
ショック、血漿タンパク質の適切なレベルが維持されな
い病気、例えば血友病、を処置するため、および受動免
疫を与えるために用いられる。
【００２５】或る種の病気では、血液の１または複数の
成分が欠損することがある。従って、適切な画分の投与
で十分であり、そして他の成分はその患者において「消
耗」されないだろう。よって他の成分は別の患者に使用
することができる。血液の成分分離および次なる分画は
、細胞および／またはタンパク質を濃縮し、従ってそれ
らの療法用途を増大させる。
【００２６】ヒト血液中に認められる細胞タイプは、赤
血球、血小板および幾つかの種類の白血球を含む。輸液
において有用な細胞濃縮物の調製方法は、Ｋｉｒｋ　Ｏ
ｔｈｍｅｒ’ｓ　Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ　ｏｆ　Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　，　第３版，
ＩｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅＰｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，第４
巻，２５−３７　頁に見つけることができ、この全内容
が参照として本明細書中に組み込まれる。
【００２７】血液細胞分画中に見つかるタンパク質とし
ては、ヘモグロビン、フィブロネクチン、フィブリノー
ゲン、血小板由来増殖因子、スーパーオキシドジスムタ
ーゼ、炭水化物およびタンパク質代謝の酵素等が挙げら
れる。加えて、他のタンパク質、例えばインターフェロ
ンおよび増殖因子の合成を誘導することもできる。誘導
可能な白血球タンパク質の包括的リストは、Ｓｔａｎｌ
ｅｙ　Ｃｏｈｅｎ，　Ｅｄｇａｒ　Ｐｉｃｋ，Ｊ．Ｊ．
　Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ，　”Ｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｔ
ｈｅ　Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅｓ”，　Ａｃａｄｅｍｉｃ
　Ｐｒｅｓｓ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　（１９７９）中に
見つけることができる。
【００２８】本発明は、少なくとも１種の光反応性化合
物を、細胞含有組成物、例えば全血、赤血球濃縮物、血
小板濃縮物、血小板抽出物、白血球濃縮物、精液、腹水
、乳、リンパ液、ハイブリドーマ細胞系および前記のい
ずれかから誘導される生成物と接触させることに向けら
れる。本発明は、非血液性の正常もしくは癌細胞を含有
する組成物の生成物または遺伝子スプライシングの生成
物を処理するために使用することができる。
【００２９】本発明における使用に適当な光感作剤化合
物としては、フタロシアニン、プルプリン、およびポル
フィリンと構造が似ている他の化合物が挙げられるが、
ポルフィリン様基本骨格中の幾つかの原子（並びにそれ
らの配置）を変えることができる。例えば、フタロシア
ニンは、ポルフィリンのメチン炭素原子により連結され
たテトラピロール環がアザ窒素原子により連結された４
つのイソインドール単位により置き換えられていること
を除き、ポルフィリン様（アザポルフィリン）である。 それらのフタロシアニン、ポルフィリンおよびプルプリ
ン分子は、金属または半金属中心原子を含んでいてもい
なくてもよく、そして基本分子骨格上に種々の置換基を
置いて（ａ）６３０ｎｍの後ろに最長最大吸収波長を赤
色移動させ、（ｂ）　モル吸光係数を増加させて励起赤
色光の吸収能を高め、そして（ｃ）　水性環境中での光
感作剤分子の溶解性、それらの親油性またはＤＮＡ結合
能力を調節することができる。
【００３０】金属、例えばゲルマニウムまたはガリウム
を含む本発明において使用される光反応性化合物は、常
磁性よりもむしろ半磁性である。
【００３１】本発明において使用できる、置換光感作剤
を含む光感作剤は、次のような特徴を有する化合物に帰
するだろう。 （ａ）　≧５０，０００モル−１　ｃｍ　−１のモル吸
光係数；（ｂ）　≧６３０　ｎｍ、好ましくは　６６０
〜７３０　ｎｍの最大吸収；（ｃ）　水および非極性溶
媒中での≧１μＭ　の溶解度；（ｄ）　両親媒性を有す
ること； （ｅ）　約２時間内における使用濃度での水性塩緩衝液
中への可溶性。
【００３２】本発明において使用される好ましい光反応
性化合物は、フタロシアニン（ＰｃまたはＰＣ）である
。フタロシアニンは、化学的に安定なポルフィリン様化
合物であり、十分に定義されており、そして容易に合成
できる（Ｓｐｉｋｅｓ，　Ｊ．，　”Ｐｈｔｈａｌｏｃ
ｙａｎｉｎｅｓ　ａｓ　Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅ
ｒｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｙｓｔｅｍｓ　
ａｎｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｐｈｏｔｏｄｙｎａｍｉｃ　
Ｔｈｅｒａｐｙ　ｏｆ　Ｔｕｍｏｒｓ”，　Ｐｈｏｔｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇ
ｙ，　４３：　６９１−６９９，　１９８６；並びにＢ
ｅｎ−Ｈｕｒ，　Ｅ．　およびＲｏｓｅｎｔｈａｌ，　
Ｉ．，　”Ｔｈｅ　Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ　
：　Ａ　Ｎｅｗ　Ｃｌａｓｓ　ｏｆ　Ｍａｍｍａｌｉａ
ｎ　Ｃｅｌｌｓ　Ｐｈｏｔｏｓｅｎｓｉｔｉｚｅｒｓ　
ｗｉｔｈａ　Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　Ｃａｎｃｅ
ｒ　Ｐｈｏｔｏｔｈｅｒａｐｙ”，　Ｉｎｔ．　Ｊ．　
Ｒａｄｉａｔ．　Ｂｉｏｌ．，　４７：　１４５−１４
７，　１９８９）。哺乳類に対するフタロシアニンの毒
性がないことを指摘する励みになる証拠が文献にある（
Ｍｏｓｅｒ，Ｆ．Ｈ．　およびＴｈｏｍａｓ，　Ａ．Ｃ
．，　Ｔｈｅ　Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ　，　
Ｂｏｃａ　Ｒａｔｏｎ：　ＣＲＣ　Ｐｒｅｓｓ，　１９
８４）。フタロシアニンは６３０　ｎｍ以上の波長に強
力な電子吸収滞を有する。ヘモグロビンはこのスペクト
ル領域では比較的低い吸光度を有する。
【００３３】本発明において使用されるフタロシアニン
の非限定例として次のものが挙げられる：亜鉛テトラス
ルホフタロシアニン、テトラスルホフタロシアニン、ア
ルミニウムテトラニトロフタロシアニン、亜鉛テトラニ
トロフタロシアニン、テトラカルボキシフタロシアニン
、ＧａＣｌ−テトラスルホフタロシアニン、ＡｌＣｌ−
テトラスルホフタロシアニン、Ｇａ−テトラスルホフタ
ロシアニン、およびＧａＣｌ−，　ＡｌＣｌ−またはＧ
ａ−テトラニトロフタロシアニン。
【００３４】本発明の好ましい態様において、アルミニ
ウムフタロシアニンが使用される。好ましいアルミニウ
ムフタロシアニンとしては、アルミニウムフタロシアニ
ンクロリド（ＡｌＰｃ）およびアルミニウムフタロシア
ニンのスルホン化形、例えばＡｌＰｃＳ２およびＡｌＰ
ｃＳ４が挙げられる。中心原子としてのアルミニウムは
亜鉛で置き換えることができ、そして環はスルホン化の
代わりにニトロ化することができる。
【００３５】消光剤を添加する時、本発明における使用
に適当な光感作剤としては、フタロシアニン、プルプリ
ン、およびポルフィリンと構造が似ている他の化合物（
上述したようなもの）、並びに紫外光により励起される
光反応性化合物（例えば、ソラレン、８−メトキシソラ
レン、４′−アミノメチル−４，５′，８−トリメチル
ソラレン、ベルガプテンおよびアンゲリシン）、および
可視スペクトル中の光を吸収する色素（例えば、ヒペリ
シンメチレン青、エオシンフルオレセインおよびフラビ
ン）が挙げられる。
【００３６】適当な消光剤は、ラジカルまたは酸素の反
応性形態と反応し、より詳しくは光力学的に触媒される
化学反応（例えばＤＮＡ鎖の伸長）の効率を減少させる
か、または光力学的細胞致死実験において細胞毒性を減
少させることが知られている任意の物質である。しかし
ながら、本発明によれば、驚くべきことに殺ウイスル作
用の実質的減少なしに消光が行われる。
【００３７】代表的な消光剤としては、脂肪酸、還元糖
、コレステロール、インドール誘導体等、アジド、例え
ばアジ化ナトリウム、トリプトファン、多価アルコール
、例えばグリセロールおよびマンニトール、チオール、
例えばグルタチオン、スーパーオキシドジスムターゼ、
クエルセチン、ＤＡＢＣＯ等が挙げられる。消光剤の混
合物の使用も期待される。消光剤は通常の消光量におい
て使用されるが、驚くべきことに、使用すると、方法全
体がウイルスに対する優勢的な損傷をもたらすが所望の
生物学的材料には損傷を与えない。
【００３８】本発明により不活性化することができる脂
質包被ヒト病原性ウイルスの非限定例としては、水疱性
口内炎ウイルス（ＶＳＶ）　、モロニー肉腫ウイルス、
シンドビスウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ−
１；ＨＩＶ−２）　、ヒトＴ細胞リンパ栄養ウイルス（
ＨＴＬＶ−Ｉ）、Ｂ型肝炎ウイルス、非Ａ非Ｂ型肝炎ウ
イルス（ＮＡＮＢ）（Ｃ型肝炎ウイルス）、サイトメガ
ロウイルス、エプスタイン−バーウイルス、乳酸デヒド
ロゲナーゼウイルス、ヘルペス群ウイルス、ラブドウイ
ルス、白血病ウイルス、ミクソウイルス、アルファウイ
ルス、アルボウイルス（Ｂ群）、パラミクソウイルス、
アレナウイルスおよびコロナウイルスが挙げられる。本
発明により不活性化することができる非包被ウイルスの
非限定例としては、パルウイルス、ポリオウイルス、Ａ
型肝炎ウイルスおよび腸の非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスが挙
げられる。
【００３９】本発明の方法は、好ましくは０〜４５℃、
最も好ましくは４〜３７℃において４８時間まで、好ま
しくは２〜２４時間行われる。本発明の方法は、好まし
くは６．３〜７．７の中性ｐＨ域において行われる。本
発明の典型的光フルエンス範囲は、フタロシアニンでは
５〜５００　Ｊ／ｃｍ２　、好ましくは１００　〜５０
０　Ｊ／ｃｍ２　、そしてソラレンでは５〜１００　Ｊ
／ｃｍ２　である。光が明るくなればなるほど、少ない
時間が要求される。流動系では、短時間に非常に明るい
光が使用されるだろう。血液バッグには、より長い時間
と明るさの低い光を使用することができる。
【００４０】消光剤の不在下での光反応性化合物の濃度
は好ましくは１〜１００　μＭ　であり、赤血球濃縮物
については、光反応性化合物の濃度は最も好ましくは１
０〜２５μＭ　である。消光剤を使用する場合には、光
反応性化合物の濃度は典型的に使用されるものであり、
例えばＡＭＴについては２５μｇ／ｍｌである。
【００４１】本発明の方法は酸化剤の存在下で行われる
。酸素は、本発明において使用される酸化剤の非限定例
である。酸素の濃度は、内因性量であることができ、ま
たは酸素濃度を低下もしくは上昇させるように設計され
た雰囲気中への処理すべき物質の設置により変更するこ
とができる。
【００４２】本発明に従って処理できる細胞含有組成物
は、≧　１×１０９　細胞／ｍｌ　、好ましくは≧　５
×１０９　細胞／ｍｌ　、最も好ましくは≧　１×１０
１０細胞／ｍｌ　を有する。更に、本発明に従って処理
できる細胞含有組成物は、好ましくは≧４　ｍｇ／ｍｌ
　のタンパク質、より好ましくは≧２５　ｍｇ／ｍｌの
タンパク質、最も好ましくは≧５０〜６０　ｍｇ／ｍｌ
のタンパク質（未洗浄細胞）を有する。
【００４３】本発明の方法において、少なくとも１０４
　、好ましくは　１０６感染単位のウイルスが不活性化
される。 本発明の方法は、改善された貯蔵安定性、即ち液体また
は凍結形態において貯蔵することができそのため減少さ
れた細胞破壊が得られるような処理細胞をもたらす。
【００４４】本発明の細胞含有組成物は、最初は≧１０
００感染単位のウイルス／ｌを含有するが、このウイル
スを不活性化しそして本発明に従った処理を行った後、
８０％より大きい、好ましくは９０％より大きい、最も
好ましくは９８％より大きい、完全な細胞機能および構
造の保持を有する。
【００４５】本発明の不活性化方法により、その中に含
まれるウイルスの実質上全てでないにしてもほとんどが
不活性化されるだろう。チンパンジーへの接種（生体内
）により感染レベルを測定する方法がＰｒｉｎｃｅ，　
Ａ．Ｍ．，Ｓｔｅｐｈｅｎ，　Ｗ．，　Ｂｏｒｔｍａｎ
，　Ｂ．およびｖａｎ　ｄｅｎ　Ｅｎｄｅ，　Ｍ．Ｃ．
，　”Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｅｆｆｅ
ｃｔ　ｏｆ　Ｂｅｔａ−ｐｒｏｐｉｏｌａｃｔｏｎｅ／
Ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　Ｉｒｒａｄｉａｔｉｏｎ（Ｂ
ＰＬ／ＵＶ）　Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｓｏｕｒｃ
ｅ　Ｐｌａｓｍａ　ｏｎ　Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｔｒａ
ｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｂｙ　Ｆａｃｔｏｒ　ＩＸ　Ｃｏ
ｍｐｌｅｘ　ｉｎ　Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ”，Ｔｈｒ
ｏｍｂｏｓｉｓ　ａｎｄ　Ｈｅｍｏｓｔａｓｉｓ　　，
４４　：　１３８−１４２，　１９８０により記載され
ている。
【００４６】本発明によれば、ウイルスの不活性化は少
なくとも「４　ｌｏｇ」、好ましくは≧６　ｌｏｇ　の
程度で得られ、即ち１０４（または１０６）に希釈後に
さえウイルス活性が測定できるような濃度において未処
理試料中にウイルスが存在する感染度実験により測定さ
れる程度まで、試料中のウイルスが完全に不活性化され
る。本発明は、不安定な血液細胞機能および構造の特徴
を同時に保持しながらウイルスを不活性化することを記
載する。
【００４７】赤血球の機能活性は、代謝レベル、酵素活
性、電解質レベルおよび酸素運搬容量の測定により評価
される。赤血球の構造的完全性は、ヘモグロビン遊離、
浸透圧脆弱性、クロム−５１で放射能標識した後の生体
内生存、抗原性の測定および細胞表面タンパク質の変更
の評価により評価される。
【００４８】血小板の機能活性は、ある種の生物学的薬
剤の存在下で凝集する能力およびそれらの形態学により
測定される。血小板の構造的完全性は、インジウム−１
１１で放射能標識した後の生体内生存および特定の血小
板抗原の存在下での同定により評価される。本発明の方
法は、別のウイルス不活性化剤、例えばβ−プロピオラ
クトンまたはＵＶもしくは他の放射形態、例えばガンマ
線と共に用いることができる。
【００４９】本発明は次のことを証明する。 （１）　光反応性化合物、例えばフタロシアニンと光暴
露は、赤血球の構造または機能に不利に影響を及ぼすこ
となく、全血または赤血球濃縮物中のウイルスを不活性
化することができ； （２）　≧６３０　ｎｍの最大吸収波長を有する親油性
色素は、赤血球の構造および機能を維持する条件下で全
血または赤血球濃縮物中の多量（例えば≧１０５．５　
ＩＤ５０）のウイルスを不活性化することができ； （３）　細胞の構造または機能に不利に影響を及ぼすこ
となく、全血、赤血球濃縮物または血小板濃縮物中に存
在する細胞外と細胞内ウイルスの両者を不活性化するこ
とができ；そして （４）　親油性色素は、光への暴露時に浸透圧損傷に対
して赤血球を安定化することができる。
【００５０】ヘマトポルフィリン誘導体のような他の親
油性色素を上回るフタロシアニンの主な利点は、６３０
−７００　ｎｍにおけるフタロシアニンの非常に強力な
光吸収である。この波長の光は、通常のポルフィリンお
よびヘマトポルフィリン増感剤により吸収される短波長
の光に比べて、改善された組織貫通性を有する。更に、
フタロシアニンの吸収スペクトルは、血液成分、特に５
７８ｎｍに最大吸収を有するヘモグロビンのものと良好
に区別される。
【００５１】本明細書において報告されるように、疎水
性色素との光触媒反応はＶＳＶ　およびＨＩＶ　のよう
な細胞外包被ウイルスの不活性化をもたらすが、一方非
包被ウイルスである細胞外脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣ）
　は不活性化されなかった。加えて、細胞のより親水性
の領域に結合するＡｌＰｃＳ２およびＡｌＰｃＳ４は、
同濃度のＡｌＰｃよりも効果的な殺ウイルス剤であった
。検査した条件下で細胞遊離ウイルスと細胞関連ウイル
スの両方が不活性化されたこと、および処理時または貯
蔵後のヘモグロビン放出がないこと（＞２％）により判
断すると、赤血球の無傷が維持されたことに注目するこ
とが重要である。実際、ＡｌＰｃおよび光での赤血球懸
濁液の処理は、高張ショックに対して赤血球を安定化し
た。ＡｌＰｃ４　で処理された赤血球の完全性の更なる
証拠は、それらの循環半減期の測定から生じる。処理さ
れたヒヒ赤血球は１３．９日の半減期を有した。
【００５２】そのままの赤血球濃縮物ユニットに添加さ
れたＶＳＶ　が不活性化されたことは、ＡｌＰｃの添加
および光への暴露に基づく方法が血液貯蔵環境において
実施できることを示す。おそらく６〜２４時間ほどの期
間、または複数のもしくはより強い光源を使用する場合
にはもっと短期間の、光キャビネット中での収集ユニッ
トの処理が予想される。
【００５３】本発明の好ましい態様において、２５０　
〜１０００　Ｊ／ｃｍ２の光フルエンスが厚さ２　〜４
　ｃｍの試料に適用され、そして攪拌が使用される。本
発明の更に好ましい態様では、本発明の方法は血液バッ
グ中の試料に適用される。光反応性化合物での処理後、
過剰の光反応性化合物は遠心、洗浄および／または透析
により除去することができる。
【００５４】本発明の一態様では、本発明の方法からの
処理された細胞含有分画は、輸液されるかまたは最初の
細胞含有分画を得た提供者、例えばヒト提供者に戻され
る。こうして、提供者中に循環しているウイルスのレベ
ルを低下させ、従ってウイルスを浄化する提供者の能力
を向上させ、そして／または抗ウイルス剤の効力を向上
させるだろう。
【００５５】上述したように、本発明は、酸化剤を用い
てまたは用いずに、光活性化合物、光および消光剤を必
要とする不活性化方法にも及ぶ。酸素の存在下における
血小板濃縮物のＡＭＴ／ＵＶＡ　処理中への消光剤の包
含は、標準的凝集反応において測定すると正常の血小板
機能を生じ、そして１０５．５　ＴＣＩＤ５０のＶＳＶ
　の不活性化をもたらし；　一方、消光剤を添加しない
場合、血小板凝集の速度および程度が減少した。驚くべ
きことに、両方の試料においてウイルス致死は等しかっ
た。同様に、血漿のＡＭＴ／ＵＶＡ　処理中への消光剤
の包含は、凝固因子ＶＩＩＩの定量的回収をもたらし；
　消光剤を添加しない場合には、回収率がたった７７％
であった。また、驚くべきことに、ＶＳＶ　致死の差は
なかった。更に別の例において、アルミニウムフタロシ
アニンテトラスルホネートと可視光での処理後にウサギ
赤血球の循環半減期を評価した。ウイルス致死に不利に
影響を与えることなく、消光剤の包含は処理赤血球の循
環寿命の延長をもたらした。本発明を以下の非限定例に
関連して記載する。
【００５６】
【実施例】材料および方法 血液 全血は典型的には使用時に４８時間齢未満であった。使
用前、それを４℃で貯蔵した。赤血球濃縮物（ＲＢＣＣ
）は、血漿層の大部分の除去を伴う２０００　ｒ．ｐ．
ｍ．　での２０分間の遠心によって全血から調製した。 指示した場合、リン酸塩緩衝化塩溶液（ＰＢＳ；　Ｇｉ
ｂｃｏ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，　Ｇｒａｎｄ　Ｉ
ｓｌａｎｄ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ）で全血を５倍希釈し
、そして赤血球濃縮物を２倍希釈した。
【００５７】アルミニウムフタロシアニン溶液アルミニ
ウムフタロシアニンクロリド（ＡｌＰｃ）はＫｏｄａｋ
　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，　Ｒｏ
ｃｈｅｓｔｅｒ，　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　から購入した。 ＡｌＰｃの原液（０．０１Ｍ）　は、分光分析用Ｎ，Ｎ
−ジメチルホルムアミド（Ａｌｄｒｉｃｈ，　Ｍｉｌｗ
ａｕｋｅｅ，　Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）　中に調製した。 アルミニウムフタロシアニンテトラスルホネート（Ａｌ
ＰｃＳ４）およびアルミニウムフタロシアニンジスルホ
ネート（ＡｌＰｃＳ２）は、Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ　Ｐｒ
ｏｄｕｃｔｓ　Ｉｎｃ．，　Ｌｏｇａｎ，　Ｕｔａｈか
ら購入した。ＡｌＰｃＳ２およびＡｌＰｃＳ４の原液（
６．２×１０−４Ｍ）をＰＢＳ　中に調製した。全ての
フタロシアニン溶液の濃度を、２　×１０５　ｌ　モル
−１ｃｍ−１のモル吸光係数を使って、ＡｌＰｃについ
ては６７０　ｎｍ、ＡｌＰｃＳ２については６７４　ｎ
ｍ、そしてＡｌＰｃＳ４については６７５　ｎｍの最大
吸収波長において分光光度的に測定した。
【００５８】ソレラン溶液 ４′−アミノメチル−４，５′，８−トリメチルソラレ
ン（ＡＭＴ）　はＨＲＩ　Ａｓｓｏｃ．Ｉｎｃ．，　Ｃ
ｏｎｃｏｒｄ，　ＣＡから購入した。ＡＭＴ　の原液（
４　ｍｇ／ｍｌ）　を蒸留水中に調製した。
【００５９】モデルウイルス実験 次のウイルスの不活性化を実験した：脂質包被ＲＮＡウ
イルスである水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、タンパ
ク質包被ＲＮＡウイルスである脳心筋炎ウイルス（ＥＭ
Ｃ）、およびヒト病原性レトロウイルスであるヒト免疫
不全ウイルス（ＨＩＶ）。
【００６０】ＶＳＶ　をヒトＡ５４９細胞中で培養した
。ＥＭＣ　ストックをマウスＬ９２９またはヒトＡ５４
９細胞中で調製した。 培養およびアッセイ手順はＨｏｒｏｗｉｔｚ，　Ｂ．，
　Ｗｉｅｂｅ，　Ｍ．Ｅ．，　Ｌｉｐｐｉｎ，　Ａ．　
およびＳｔｒｙｋｅｒ，　Ｍ．Ｈ．，　”Ｉｎａｃｔｉ
ｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｖｉｒｕｓｅｓ　ｉｎ　Ｌａｂｉ
ｌｅ　Ｂｌｏｏｄ　Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”，　Ｔｒ
ａｎｓｆｕｓｉｏｎ　，　２５：　５１６−５２２，　
１９８５　に記載されたものと同様であった。ＶＳＶ　
およびＥＭＣ　の感染度は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣ
Ｓ；　ＭＡ　Ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔｓ，　Ｗａｌｋｅｒ
ｓｖｉｌｌｅ，　Ｍａｒｙｌａｎｄ）　を含むＤＭＥＭ
培地（Ｇｉｂｃｏ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，　Ｇｒ
ａｎｄ　Ｉｓｌａｎｄ，　ＮｅｗＹｏｒｋ）中の終点１
０倍逐次希釈により評価した。各希釈液を用いて９６ウ
エルのミクロタイタープレート中のヒトＡ５４９細胞の
８　複製ウエルに接種した。５％　ＣＯ２　中３７℃に
て７２時間インキュベートした後、ウイルスにより誘導
される細胞変性を記録した。記録したウイルス価をＳｐ
ｅａｒｍａｎ−Ｋａｒｂｅｒ　法　Ｓｐｅａｒｍａｎ，
　Ｃ．，　”ＴｈｅＭｅｔｈｏｄ　ｏｆ　Ｒｉｇｈｔ　
ａｎｄ　Ｗｒｏｎｇ　Ｃａｓｅｓ（‘Ｃｏｎｓｔａｎｔ
　Ｓｔｉｍｕｌｉ’）　Ｗｉｔｈｏｕｔ　Ｇａｕｓｓ’
ｓ　Ｆｏｒｍｕｌａ”，Ｂｒ．　Ｊ．　Ｐｓｙｃｈｏｌ
．，　　２　：　２２７−２４２，　１９０８　を使っ
て算出し、そして組織培養ウエルの５０％を感染するウ
イルスの量（ＴＣＩＤ５０）を表示する。
【００６１】細胞関連ＶＳＶ　は、１５０　ｃｍ２　の
組織培養フラスコ中で５％　ＣＯ２下で３７℃にて１時
間、ヒトＡ５４９細胞の集密的単層を１０７　ＩＤ５０
／ｍｌ　の　ＶＳＶ　５ｍｌと共にインキュベートする
ことにより調製した。それらの条件下の感染多重度は、
約２．１　ＴＣＩＤ５０／細胞であった。液体をデカン
テーションし、付着した細胞を１回あたり５０　ｍｌ　
のＰＢＳ　で３回洗浄して遊離のウイルスを除去した。 その後、５％　ＦＣＳを含む４０　ｍｌ　のＤＭＥＭを
添加し、そして細胞を更に４　時間４５分インキュベー
トした。付着した細胞をＰＢＳ　で３　回洗浄し、そし
て０．０１％　のトリプシン（Ｃｏｏｐｅｒ　Ｂｉｏｍ
ｅｄｉｃａｌ，　Ｆｒｅｅｈｏｌｄ，　Ｎｅｗ　Ｊｅｒ
ｓｅｙ；　２回再結晶したもの）および５　ｍｇ／ｍｌ
　のＥＤＴＡを含む規定塩溶液での１０分間の処理によ
って遊離させた。遊離した細胞を遠心によって収集し、
ＰＢＳ　で３　回洗浄し、そしてＰＢＳ　中に懸濁した
。
【００６２】不活性化を評価するために、１：１０希釈
で実験する血液成分に細胞遊離形ウイルスを添加し、そ
してこの混合物の３　ｍｌアリコートをポリスチレン試
験管（Ｆｉｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，　Ｓｐｒ
ｉｎｇｆｉｅｌｄ，　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ；カタログ
＃２０２７；　７ｍｌ容量）　中に分配し、次いでフタ
ロシアニン誘導体を添加した。血液学用ミキサー（Ｆｉ
ｓｈｅｒ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，　；　カタログ＃１
４−０６０−１）を使って連続的に試料を混合し、そし
て琥珀の５７０　ｎｍ長波長通過フィルター（Ｏｒｉｅ
ｌ　Ｃｏｒｐ．）　が取り付けられたＺｅｎｉｔｈ　３
００ワットＸｅショートアークランプを装備したＳｏｌ
ａｒ　Ｓｉｍｕｌａｔｏｒ（Ｏｒｉｅｌ　Ｃｏｒｐ．，
　Ｓｔｒａｔｆｏｒｄ，　Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ）か
らの光で照射した。広域帯通過フィルター（Ｆ＃８１７
４）および拡散体（Ｗ＃４４２５）を取り付けた検出器
（　モデルＮｏ．ＳＥＤ０３８）を有する光度計（　モ
デルＮｏ．ＩＬ１３５０，　Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａ
ｌ　Ｌｉｇｈｔ，　Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ，　Ｍａｓ
ｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）　で測定すると、試料の所の光
度は約２５〜２６ミリワット／ｃｍ２であった。下記に
与えるデータと比較すると、検出器上に置かれた６７６
　ｎｍ　　干渉フィルター（ｔｈｅ　Ｏｐｔｏｍｅｔｒ
ｉｃｓ　Ｃｏｒｐ．，　カタログＮｏ．０２−６７６５
，　Ａｙｅｒ，　ＭＡ）　を通した濾過は、光度の１．
３％の透過を許した。照射時間は典型的には３０，　６
０および１２０　分であり、それぞれ４４，　８８およ
び１７６　Ｊ／ｃｍ２　のフルエンスに相当した。ファ
ンにより一定の空気流を供給し、そして試料の温度は照
射中２８℃以上に上昇しなかった。
【００６３】赤血球濃縮物（ＲＢＣＣ）ユニット全体の
ウイルス不活性化は、６００　ｍｌ容量の＃５Ｊ３５９
バッグ（Ｆｅｎｗａｌｌ　Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，　Ｄｅｅ
ｒｆｉｅｌｄ，　Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）　中で実施した。 Ｔｈｅｒｍｏｌｙｎｅ　Ｓｐｅｃｉ−ｍｉｘミキサーＭ
２６１２５型（Ｓｙｂｒｏｎ　Ｃｏｒｐ．，　Ｉｏｗａ
）を使って、光照射の最中バッグ内の試料を混合した。
【００６４】ウイルス不活性化の評価のために、５％ウ
シ胎児血清を含むＤＭＥＭ中への１０倍希釈によって反
応を止め、そして１５００　ｒｐｍでの１０分間の遠心
により赤血球を除去した。この希釈度および光の欠損下
でウイルスの不活性化がないことを、実験した不活性化
条件の各々について確認した。試料を滅菌濾過し（Ｓｗ
ｉｎｎｅｘフィルター，　Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ　Ｃｏｒ
ｐ．，　Ｂｅｄｆｏｒｄ，　Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔ
ｓ）、そしてアッセイまで−７０℃以下で凍結させた。
【００６５】細胞関連ＶＳＶ　の不活性化の評価方法は
、細胞遊離ＶＳＶ　のものと同様であるが、ただし細胞
関連ＶＳＶ　を用いる全ての実験は、全体的に制御され
た無菌状態で行った。実験の終わりに、感染したＡ５４
９細胞をＦｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉ
ａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，　Ｐｉｓｃａｔａ
ｗａｙ，　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ）の添加によって単離
し、そしてスイングバッケットローター中で周囲温度に
て１８００×ｇ　で３０分間遠心した。 Ａ５４９細胞を含む層を収得し、ＰＢＳ　で３回遠心洗
浄し、１ｍｌのＰＢＳ　中に再懸濁し、そして細胞遊離
ウイルスと同様にして終点１０倍逐次希釈によりＶＳＶ
感染度について即座にアッセイした。
【００６６】ＨＩＶ　不活性化の評価 この実験では、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）　のＨ
ＴＬＶ　ＩＩＩｂ　株を使用した。感染度の測定は以前
に報告されたもの（Ｐｒｉｎｃｅ，　Ａ．Ｍ．，　Ｐａ
ｓｃｕａｌ，　Ｄ．，　Ｋｏｓｏｌａｐｏｖ，　Ｌ．Ｂ
．，ら、”Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ，　Ｃｌｉｎｉｃａｌ
　Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ，　ａｎｄ　Ｓｔｒａｉｎ
　Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｏｆＮｅｕｔｒａｌｉｚｉ
ｎｇ　Ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｈｕｍａｎ　
Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　Ｖｉｒｕｓ”，　
Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ
　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，　１５６：２６８−２７２，　１
９８７）　と同様であった。連続流ショ糖バンド沈降法
によって調製された細胞遊離形ＨＩＶ　の　１０，００
０　倍濃縮物をＢｉｏｎｅｔｉｃｓ，　Ｉｎｃ．（Ｒｏ
ｃｋｖｉｌｌｅ，　Ｍ．Ｄ．）から購入した。８　×１
０５　／ｍｌ　の濃度のＣＥＭ　またはＨ９細胞のいず
れかを用いて、１０％　ＦＣＳ　を含むＲＰＭＩ　１６
４０　を使ってミクロタイタープレート中で逐次１０倍
希釈による滴定を行った。使用前に、２　μｇ／ｍｌの
ポリブレンを含む上記培地中で３７℃にて１　時間イン
キュベートすることにより、細胞を順化せしめた。処理
した試料中のウイルスを遮光下で３７℃にて２　時間細
胞に吸着させた。次いでプレートを２０００　ｒｐｍに
おいて１０分間遠心し、そして処理用化合物を除去して
毒性を減らすために上清を吸引することにより、細胞を
培地中で２回洗浄した。１５０　μｌ　の培養物に第４
，７および１０日に２５μｌ　の培地を補給した。第１
４日に、培養物をＰＢＳ　（リン酸塩緩衝化塩溶液）で
２回洗浄して接種材料から持ち越されたウイルス抗原を
除去し、そして０．５％　Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００　
を含むＰＢＳ　中で細胞を溶解させた。組換えｐ５５　
（Ｓｙｎｔｅｘ　Ｃｏｒｐ．，　Ｐａｌｏ　Ａｌｔｏ，
　ＣＡ）　に対するウサギ抗血清およびペルオキシダー
ゼ標識ウサギ抗−ｐ５５　でコーティングされたプレー
トを使ったＥＬＩＳＡ　により、溶解物をＨＩＶ　ｐ５
５抗原についてアッセイした。このアッセイは、Ｄｕｐ
ｏｎｔのｐ２４　抗原アッセイと本質的に同じｐ２４　
測定感度を有した。
【００６７】少量の残余ウイルスの測定の感度を増加さ
せるために、ＡｌＰｃで処理した未希釈のウイルス含有
液０．５　〜１．０　ｍｌを５　ｍｌの大量培養物中に
接種し、そして４週間の間、１週間に２回、半分の量を
除去して新鮮な培地で置き換えることにより補給した。
【００６８】細胞関連ＨＩＶ　については、８　×１０
５／ｍｌ　ＣＥＭまたはＨ９細胞の２５　ｍｌ　培養物
に１０４ＴＣＩＤ５０のＨＩＶ　を接種した。１週間に
２回、半分の量を除去して新鮮な培地で置き換えること
により培地を補給した。各補給時に、上清をＥＬＩＳＡ
　によりｐ５５　抗原についてアッセイした。力価が１
：６４またはそれより大きくなったとき、通常は１０〜
１２日目に、感染細胞を使って次の実験を行った。実験
に使用する前に、１０６　感染細胞のアリコートをペレ
ット化し、そして１００　μｌ　のＨＩＶ　免疫グロブ
リン（Ｐｒｉｎｃｅ，　Ａ．Ｍ．，　Ｈｏｒｏｗｉｔｚ
，　Ｂ．，　Ｂａｋｅｒ，　Ｌ．ら、”Ｆａｉｌｕｒｅ
　ｏｆ　ａｎ　ＨＩＶ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｇｌｏｂｕｌｉ
ｎ　Ｔｏ　Ｐｒｏｔｅｃｔ　Ｃｈｉｍｐａｎｚｅｅｓ　
Ａｇａｉｎｓｔ　Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｃｈａｌ
ｌｅｎｇｅ　Ｗｉｔｈ　ＨＩＶ”，　ＰＮＡＳ，　８５
：　６９４４−６９４８，　１９８８）中に再懸濁し、
３７℃で１時間インキュベートし、そして非−細胞関連
ウイルスの量を減らすために培地中で３回洗浄した。次
いで感染細胞を培地中、またはＣＰＤ　（　シトレート
ホスフェートデキストロース）　によって抗凝血された
全血中に１０６／ｍｌの濃度に懸濁した。それらの混合
物を光への暴露を伴ってまたは伴わないで様々な濃度の
ＡｌＰｃに暴露した。処理後、試料をＲＰＭＩ−１６４
０　で１：２　希釈し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ
を通して遠心して赤血球と白血球とを分離した。回収さ
れた白血球を３回洗浄し、計数し、そして１００　μｌ
　の培地中に逐次希釈した。次に未感染のＣＥＭ　細胞
を添加し、上述の感染度滴定と同様に培養物を処理した
。
【００６９】赤血球測定 Ｄｒａｂｋｉｎ　試薬（Ｓｉｇｍａ　Ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅ　Ｎｏ．５２５，　Ｓｉｇｍａ　Ｄｉａｇｎｏｓｔｉ
ｃｓ，　Ｓｔ．　Ｌｏｕｉｓ，　Ｍｉｓｓｏｕｒｉ）を
使って全ヘモグロビンを定量した。遠心により細胞を除
去した後、Ａ５４０での血漿の光学濃度を測定しそして
　１　ｍｇ／ｍｌ溶液について０．８６の吸光度と仮定
することにより、血漿ヘモグロビンを評価した　Ａｎｔ
ｏｎｉｎｉ，　Ｅ．　およびＢｒｕｎｏｒｉ，　Ｍ．，
”Ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎ　ａｎｄ　Ｍｙｏｇｌｏｂｉｎ
　ｉｎ　Ｔｈｅｉｒ　Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　
Ｌｉｇａｎｄｓ”，　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ：　Ｎｏｒｔ
ｈ−Ｈｏｌｌａｎｄ　Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ　Ｃｏ．，
　１９７１　（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ　Ａ．，　Ｔａｔｕ
ｍ，　Ｅ．Ｌ．　編、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ　ｏｆ　Ｂｉ
ｏｌｏｇｙ；　第２１巻）　。遠心前に、赤血球濃縮物
をＰＢＳ　で１：１　希釈した。 存在する全ヘモグロビンの百分率として結果を表示した
。処理した赤血球の浸透圧脆弱性は、Ｄａｃｉｅ，　Ｊ
．Ｖ．，　Ｌｏｒｄ，　Ｍ．Ｂ．，　Ｖａｕｇｈａｎ，
　Ｊ．Ｍ．およびＯｘｏｎ，　Ｄ．Ｍ．，　”Ｔｈｅ　
Ｆｒａｇｉｌｉｔｙ　ｏｆ　Ｒｅｄ　Ｂｌｏｏｄ　Ｃｅ
ｌｌｓ，　Ｉｔｓ　Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ　ａｎｄ
　Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ”，　Ｊ．　Ｐａｔｈ．　
Ｂａｃｔ．，４６：　３４１−３５６，１９３８におい
て以前に記載された方法と同様にして測定した。ＰＨＭ
　８２　ｐＨ　メーター（Ｒａｄｉｏｍｅｔｅｒ　Ａｍ
ｅｒｉｃａ　Ｉｎｃ．，　Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ，　Ｏｈ
ｉｏ）を使ってｐＨ測定を行った。自己由来のウサギ赤
血球の循環半減期は、処理された赤血球を洗浄して血漿
タンパク質を除去し、そして細胞を５１Ｃｒで標識する
ことによって測定した。
【００７０】実施例１：ＡｌＰｃによるＶＳＶおよびＥ
ＭＣの不活性化 ＡｌＰｃの存在下において全血（　５　×１０９　赤血
球／ｍｌ）または赤血球濃縮物（　１　×１０１０赤血
球／ｍｌ）に添加された細胞遊離形ＶＳＶ　の不活性化
は、それの濃度および光のフルエンス（線量）に依存し
た（図１）。指示された濃度における細胞遊離形ＶＳＶ
　およびＡｌＰｃを、全血（図１ａ）、赤血球濃縮物（
図１ｂ）、ＰＢＳ　で５倍希釈された全血（図１ｃ）、
およびＰＢＳ　で２倍希釈された赤血球濃縮物（図１ｄ
）に添加した。全血および赤血球濃縮物中の血漿タンパ
ク質濃度は、希釈前は６０　ｍｇ／ｍｌであった。合計
光フルエンスが４４　Ｊ／ｃｍ２（閉鎖円）　、８８　
Ｊ／ｃｍ２（開放円）　または１７６Ｊ／ｃｍ２（開放
三角形）　であるように様々な期間の間一定強度の光（
２５　〜２６ミリワット／ｃｍ２）　に試料（３　ｍｌ
）を暴露した。光への暴露後、本明細書に記載のように
してウイルス感染度を評価した。
【００７１】全血に添加されたＶＳＶ　（　≧１０４．
０　〜　１０４．５　ＴＣＩＤ５０）の完全不活性化は
、１０μＭ　のＡｌＰｃ濃度並びに、それぞれ６０およ
び１２０　分間の暴露時間と２５ミリワット／ｃｍ２の
光強度に相当する８８および１７６　Ｊ／ｃｍ２　の光
フルエンスにおいて観察された。４４　Ｊ／ｃｍ２のフ
ルエンスでは、添加されたＶＳＶ　の完全不活性化に２
５μＭ　のＡｌＰｃ濃度を必要とした（図１ａ）。赤血
球濃縮物（　ＲＢＣ　濃度＝１　×１０１０／ｍｌ；　
　図１ｂ）に添加されたＶＳＶ　の不活性化は、全血（
図１ａ）において観察されたのと同様であった。ＰＢＳ
　で最初に５倍希釈された全血（図１ｃ）または最初に
２倍希釈された赤血球濃縮物（図１ｄ）に添加されたＶ
ＳＶ　の完全不活性化は、与えられた光フルエンスにつ
いて未希釈の同等物で観察されたものよりも低いＡｌＰ
ｃ濃度で起こった。ＶＳＶ　の不活性化は、ＡｌＰｃの
不在下または遮光下では起こらなかった（データは示し
てない）。
【００７２】処理期間中に放出されるヘモグロビンによ
って決定される赤血球の完全性は、図１に与えられた各
条件下において良好に維持された（溶解＜２％）。非包
被ウイルスである細胞遊離形ＥＭＣ　は、上記と同じ条
件下で評価した時、ＡｌＰｃでの処理によって不活性化
されなかった（データは示していない）。
【００７３】実施例２：上記と同様にして細胞内ＶＳＶ
　を調製した。ウイルス感染単位（１×１０６　ＴＣＩ
Ｄ５０／５０　μｌ；　２．０×１０６　ＴＣＩＤ５０
／ｍｌ）に対する、トリプシン処理後に収得した細胞（
２．０７　×１０７／ｍｌ）　の濃度の比較は、事実上
どの細胞も感染性ウイルスを含有したことを示唆する。 赤血球濃縮物に添加されたこの細胞内ＶＳＶ　は、この
赤血球濃縮物を１０μＭ　ＡｌＰｃおよび８８　Ｊ／ｃ
ｍ２で処理した時に完全に不活性化された（≧１０５．
６　ＴＣＩＤ５０）（表１）。細胞遊離形ウイルスに関
して記録された結果（図１ｂ）との比較は、細胞関連形
の不活性化がより困難であることを示す。赤血球の構造
と機能は影響を受けなかった。
【００７４】
【表１】
【００７５】実施例３：ＡｌＰｃのジ−およびテトラ−
スルホン化誘導体の存在下での細胞遊離形ＶＳＶ　の不
活性化も調べた。細胞遊離形ＶＳＶ　とＡｌＰｃＳ２（
図２ａおよび図２ｂ）またはＡｌＰｃＳ４（図２ｃおよ
び図２ｄ）とを指定の濃度において、全血（図２ａおよ
び図２ｃ）または赤血球濃縮物（図２ｂおよび図２ｄ）
に添加した。その他の詳細は実施例１に記載のものと同
じである。スルホン化誘導体によるＶＳＶ　の完全な不
活性化は、非スルホン化形で観察されたものよりも与え
られた光フルエンスについて低いＡｌＰｃ濃度で起こっ
た（図１対図２）。ＰＢＳ　で５倍希釈された全血また
は２倍希釈された赤血球濃縮物のいずれかに添加された
ＶＳＶ　の完全不活性化は、２μＭ　のいずれかのスル
ホン化誘導体および４４　Ｊ／ｃｍ２の光フルエンスを
用いた時に観察された（データは示してない）。処理期
間中のヘモグロビン放出に関しては、２５μＭまでの　
ＡｌＰｃＳｘ　濃度および１７６Ｊ／ｃｍ２までの光フ
ルエンスにおいてほとんど観察されなかった（≦２％）
（表２）。
【００７６】
【表２】
【００７７】実施例４：ＡｌＰｃによるＨＩＶの不活性
化 細胞遊離形または細胞内形のいずれかのＨＩＶ　を、試
験管中の全血または赤血球濃縮物のいずれかに添加した
。細胞遊離形ＨＩＶ　の処理は１０μＭ　ＡｌＰｃおよ
び１７６　Ｊ／ｃｍ２　を使用し；細胞内ＨＩＶ　の処
理は　５μＭ　ＡｌＰｃおよび４４　Ｊ／ｃｍ２を使用
した。処理の終わりに、上記と同様に試料を処理し、そ
してＨＩＶ　抗原の測定を行った。
【００７８】ＡｌＰｃでの全血または赤血球濃縮物の処
理は、≧１０４．２　ＴＣＩＤ５０の細胞遊離形ＨＩＶ
　および≧１０３．６　ＴＣＩＤ５０の細胞内ＨＩＶ　
を不活性化することを示した（表３）。赤血球の構造お
よび機能は影響を受けなかった。
【００７９】
【表３】
【００８０】実施例５：赤血球の完全性ＡｌＰｃ誘導体
での処理期間中に赤血球から放出されるヘモグロビン％
の典型的結果は表２に与えられる。放出％は、存在する
全ヘモグロビンの０．２　〜１．５　％であった。
【００８１】全血の処理後の赤血球浸透圧脆弱性は、Ａ
ｌＰｃの事前除去なしで測定した（図３）。全血を１０
μＭ　ＡｌＰｃＣｌと４４　Ｊ／ｃｍ２（開放円）、８
８　Ｊ／ｃｍ２（開放三角形）および１７６　Ｊ／ｃｍ
２　（開放四角形）の光フルエンスとで処理した。処理
後そしてその後の処理なしで、指示濃度にまで塩溶液中
に希釈することにより、それらの試料および未処理の対
照（閉鎖円）において赤血球の浸透圧脆弱性を測定した
。３０分間のインキュベーションおよび遠心後、放出さ
れたヘモグロビンをＤｒａｂｋｉｎ　溶液により測定し
、そして蒸留水中への希釈で放出されたものと比較した
。未処理の対照と比較すると、４４，　８８および１７
６　Ｊ／ｃｍ２　の光フルエンスにおける１０μＭ　Ａ
ｌＰｃでの処理は、浸透圧ショックに対する赤血球の耐
性を増加させた。
【００８２】実施例６：処理された赤血球の貯蔵安定性
を評価するために、実施例１に記載のようにして、３　
ｍｌの全血を１０μＭ　のＡｌＰｃと１７６　Ｊ／ｃｍ
２　の光フルエンスとで処理した。１７日間の貯蔵後、
放出されたヘモグロビンは全体の１．８　％であり、そ
して試料のｐＨは６．９　であり、優れた貯蔵適合性を
示した。
【００８３】実施例７：そのままの赤血球濃縮物ユニッ
トにおけるＶＳＶ不活性化の実験を行った。Ｆｅｎｗａ
ｌ　５Ｊ３５９血液バッグ中に含まれる赤血球濃縮物を
片側からのみ照射した。１０．５μＭ　ＡｌＰｃおよび
３時間の処理期間に相当する２６４　Ｊ／ｃｍ２　の光
フルエンスによって、全ての検出可能な細胞遊離形ＶＳ
Ｖ（≧１０４．５　ＴＣＩＤ５０）　の不活性化が達成
された（表４）。１０倍感度の高い大量培養アッセイは
、３５２　および３９６　Ｊ／ｃｍ２　においてＶＳＶ
　の存在を示さなかった（≧１０５．５　ＴＣＩＤ５０
が致死）。３９６　Ｊ／ｃｍ２　でさえも２％未満の溶
解しか観察されなかった。
【００８４】
【表４】
【００８５】実施例８：血小板機能におけるフタロシア
ニン処理の影響の評価を行った。ジメチルホルムアミド
中の亜鉛フタロシアニン（ＺｎＰｃ）を、５．３６×１
０９　血小板／ｍｌ　および６０　ｍｇ／ｍｌの血漿タ
ンパク質濃度を有する血小板濃縮物に添加した。ＺｎＰ
ｃの最終濃度は２０μＭ　であった。 指示した時間において、血小板計数を測定し、平均体積
の測定によって血小板形態学を評価し、そしてアデノシ
ン二リン酸（ＡＤＰ）　の添加によって凝集する血小板
の能力を評価した（表５）。全処理期間に渡って、血小
板計数は８６〜９１％の範囲に維持された。血小板の平
均体積は影響を受けなかった。凝集の初期速度または凝
集度のいずれかによって表示されるＡＤＰ　に応答する
凝集は、１０分間の光暴露についてはＤＭＦ　のみの対
照と比較して変化がなかったが、１５および３０分間の
光暴露についてはいくらか減少した。
【００８６】
【表５】
【００８７】実施例９：ＡｌＰｃＳ４−誘導性溶解にお
ける赤血球の効果 ヒト赤血球をリン酸塩緩衝化塩溶液で２回洗浄して血漿
を除去し、そして指示濃度に希釈した。アルミニウムフ
タロシアニンテトラスルホネート（１０μＭ）を各々に
添加し、上記のようにして試料を８８　Ｊ／ｃｍ２で照
射した。照射後、放出されたヘモグロビンの量によって
溶解の程度を決定した。表６に示されるように、４．５
　×１０８　細胞／ｍｌ　の赤血球濃度では１００　％
溶解が観察されたが、細胞濃度を２．２５×１０９　細
胞／ｍｌ　以上に高めると突然に改善された。
【００８８】
【表６】
【００８９】実施例１０：ヘマトポルフィリン誘導体と
アルミニウムフタロシアニンとのウイルス致死の比較水
疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）を全血に添加した後、６
３０　ｎｍより低波長に最大吸収を有する色素であるヘ
マトポルフィリン誘導体（ＨＰＤ）、またはアルミニウ
ムフタロシアニンスルホネートのいずれかを添加した。 各々を上記のようにして光に暴露した。結果（下の表７
）は、ＨＰＤ　よりもＡｌＰｃＳ４を用いたときにウイ
ルス致死がより迅速で且つより完全であることを示す。
【００９０】
【表７】
【００９１】実施例１１：消光剤の存在下でアルミニウ
ムフタロシアニン誘導体で処理された自己由来のウサギ
赤血球の循環半減期 血漿中に懸濁された１　×１０１０　ＲＢＣ／ｍｌ　を
含むウサギ赤血球濃縮物（ＲＢＣＣ）をアルミニウムフ
タロシアニンテトラスルホネート（ＡｌＰｃＳ４）と混
合し、そして指示された場合には消光剤を添加した。こ
の混合物を２５　ｍＷ／ｃｍ２　の可視光に３０分間暴
露し、その後処理されたＰＢＣＣを遠心により洗浄し、
５１Ｃｒで標識し、そして元のウサギに静内投与した。 結果は、添加された消光剤の存在下で処理されたＲＢＣ
　が正常に近い生体内循環寿命を有し、一方消光剤の不
在下では短縮された生体内循環生存を有したことを指摘
する（表８）。水疱性口内炎ウイルスを含む別のＲＢＣ
Ｃ試料にアルミニウムフタロシアニン誘導体および消光
剤を添加し、そして同様な照射条件に暴露した。ウイル
スの不活性化は消光剤の添加によって影響を受けなかっ
た（表８）。
【００９２】
【表８】
【００９３】実施例１２：添加された消光剤の存在下で
ソラレン誘導体で処理された血小板の凝集応答消光剤と
しての還元型グルタチオン（ＧＳＨ）　の存在下および
不在下における２５μｌ／ｍｌの４′−アミノメチル−
４，５′，８−トリメチルソラレン（ＡＭＴ）　の添加
後、血小板濃縮物への殺ウイルス作用および機能作用を
評価した。 試料を酸素の存在下で６．５　ｍＷ／ｃｍ２のＵＶＡ　
により２０〜３０分間照射した。処理の２４時間後に測
定したコラーゲンに応答する血小板凝集の程度および速
度は、ＧＳＨ　の存在下で改善された（表９）。これは
、完全なウイルス致死に必要とされる３０分間のＵＶＡ
　暴露条件で特に明らかである。
【００９４】
【表９】
【００９５】実施例１３：消光剤の添加を伴うＡＭＴお
よびＵＶＡでの処理により改善された凝固因子の工程回
収率 ヒト血漿を２５μｌ／ｍｌのＡＭＴ　で処理し、そして
６．５　ｍＷ／ｃｍ２のＵＶＡ　光に２０分間暴露した
。グルタチオンの添加を伴った処理と伴わない処理の後
のウイルス致死量および凝固因子の工程回収率を比較し
た。還元型グルタチオン（ＧＳＨ）　の不在下または１
　ｍＭおよび４　ｍＭ　ＧＳＨの存在下では、ウイルス
致死の程度がそれぞれ５．１，　５．３および５．３　
ｌｏｇ１０　であった。ＧＳＨ　の不在下でのＡＨＦ　
回収率はわずか７７％であったが、４　ｍＭ　ＧＳＨの
存在下では回収率が実質的に１００　％に増加した。
【００９６】
【表１０】
【００９７】実施例１４：ウイルスを不活性化するため
にＡＭＴで処理された血漿凝固因子の回収率の増加；酸
素含量の減少対消光剤の使用 消光剤として添加される１　ｍＭ　ＧＳＨの存在下およ
び不在下において、窒素ガスでの置換により減少された
酸素濃度下での処理に対して、通常の大気条件下でヒト
血漿を２５μｌ／ｍｌのＡＭＴ　で処理した。正常に通
気された試料をＵＶＡ　光で２０分間照射し、一方脱酸
素化された試料はほぼ同じウイルス致死を与えるのに１
２０　分間照射しなければならなかった。データは、消
光剤の不在下での正常に通気された血漿の処理に比較し
て、（１）　１　ｍＭのグルタチオンの添加がウイルス
致死を悪くすることなくＡＨＦ　回収率を増加させ、（
２）　酸素含量を減らすことにより高レベルのウイルス
致死および凝固因子の高回収率を獲得することができ、
そして（３）　消光剤の使用が、ガス交換をおこなう必
要性を除去しそして高レベルのウイルス致死に必要とさ
れる処理期間を短縮する。
【００９８】
【表１１】
【００９９】実施例１５：ソラレン誘導体で処理された
血小板における改善されたウイルス致死：消光剤添加対
脱酸素化の効果 標準的血液貯蔵用血小板濃縮物を２５μｌ／ｍｌのＡＭ
Ｔ　で処理し、そしてＵＶＡ（６．５　ｍＷ／ｃｍ２）
　に暴露した。処理前に、指示した場合には、窒素を使
って溶液の上のガスを置換し、１分間平衡化し、そして
この手順を３回繰り返すことにより、普通に通気された
血小板中の酸素を窒素に交換した。その他の場合は、処
理前に１　ｍＭの消光剤グルタチオンを添加した。血小
板の凝集応答を処理後２４時間目にコラーゲンの存在下
で評価した。その結果は、脱気された試料よりも通常に
通気された消光剤含有試料においてより迅速にウイルス
致死が起こった（表１２）。２４時間目に測定するとど
ちらの場合においても優れた血小板機能の回復が得られ
た。このように、消光剤の使用は、ウイルス致死または
血小板機能の犠牲を伴わずに、厄介でおそらく時間がか
かるガス交換の段階を回避する。
【０１００】
【表１２】
【０１０１】本発明を限定ではなく例示によって記載し
てきたが、本発明の精神および範囲を逸脱することなく
様々な改良および変更を行うことができることは明白で
あろう。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、アルミニウムフタロシアニンクロリド
（ＡｌＰｃ）　による細胞遊離形水疱性口内炎ウイルス
（ＶＳＶ）　の不活性化を表す４つのグラフを含んでな
る。図１ａは全血を使った結果を示す。図１ｂは赤血球
濃縮物を使った結果を示す。図１ｃはＰＢＳ　で５倍希
釈された全血を使った結果を示す。図１ｄはＰＢＳ　で
２倍希釈された赤血球濃縮物を使った結果を示す。
【図２】図２は、スルホン化されたアルミニウムフタロ
シアニンによる細胞遊離形水疱性口内炎ウイルス（ＶＳ
Ｖ）　の不活性化を表す４つのグラフを含んでなる。図
２ａは全血にＡｌＰｃＳ２を使った結果を示す。図２ｂ
は赤血球濃縮物にＡｌＰｃＳ２を使った結果を示す。図
２ｃは全血にＡｌＰｃＳ４を使った結果を示す。図１ｄ
は赤血球濃縮物にＡｌＰｃＳ４を使った結果を示す。
【図３】図３は、ＡｌＰｃでの処理の前後の赤血球浸透
圧脆弱性を表すグラフである。

Claims (15)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】　　細胞の実質的破壊または不活性化を受
    けることなく、組成物中の細胞外脂質包被ヒト病原性ウ
    イルスおよび／または細胞内ヒト病原性ウイルスを不活
    性化する方法であって、≧１　×１０９　細胞／ｍｌを
    有し且つ感染ウイルスを含有する前記組成物を、≧６３
    ０ｎｍ　の最大吸収波長を有する少なくとも１種の殺ウ
    イルス有効量の光反応性化合物、光および酸化剤と接触
    せしめ、それによって細胞機能を保持したまま前記ウイ
    ルスを実質的に不活性化することを含んで成る方法。
  2. 【請求項２】　　前記細胞含有組成物が≧４　ｍｇ／ｍ
    ｌ　のタンパク質を含み、前記光反応性化合物がフタロ
    シアニンであり、そして前記細胞含有組成物が赤血球濃
    縮物、血小板濃縮物、白血球濃縮物、精液、腹水、リン
    パ液、乳、ハイブリドーマ細胞系、全血およびそれらか
    ら誘導される生成物、非血液性正常またはガン細胞並び
    に遺伝子スプライシングの生成物から成る群から選択さ
    れた少なくとも１種の成分を含んで成る、請求項１に記
    載の方法。
  3. 【請求項３】　　得られた処理された細胞含有組成物を
    液体または凍結形において貯蔵する更なる段階を含んで
    成り、それによって細胞安定性が増加される、請求項１
    に記載の方法。
  4. 【請求項４】　　細胞含有組成物を提供者に輸液する方
    法であって、提供者から細胞含有分画を取り出し、前記
    細胞含有分画を請求項１の方法に従って処理し、そして
    前記処理された細胞含有分画を提供者に戻すことを含ん
    で成る方法。
  5. 【請求項５】　　生物学的組成物の実質的破壊または不
    活性化を受けることなく、該組成物中の細胞外および細
    胞内ウイルスを不活性化する方法であって、前記組成物
    を少なくとも１種の殺ウイルス有効量の光反応性化合物
    、光および消光剤と接触せしめ、それによって前記物質
    の機能を保持したまま前記ウイルスを不活性化すること
    を含んで成る方法。
  6. 【請求項６】　　前記光反応性化合物がソラレンであり
    、そして前記光がＵＶ−Ａである、請求項５に記載の方
    法
  7. 【請求項７】　　前記方法中に酸素が存在する、請求
    項６に記載の方法。
  8. 【請求項８】　　前記化学物質がフタロシアニンであり
    、そして前記光が６３０−７００　ｎｍの波長の可視光
    である、請求項５に記載の方法。
  9. 【請求項９】　　前記生物学的物質が凝固因子である、
    請求項５に記載の方法。
  10. 【請求項１０】　　前記生物学的物質が赤血球または血
    小板である、請求項５に記載の方法。
  11. 【請求項１１】　　細胞含有分画を提供者に輸液する方
    法であって、提供者から細胞含有分画を取り出し、前記
    細胞含有分画を請求項５の方法に従って処理し、そして
    前記処理された細胞含有分画を提供者に戻すことを含ん
    で成る方法。
  12. 【請求項１２】　　請求項１の方法により製造された製
    品。
  13. 【請求項１３】　　請求項５の方法により製造された製
    品。
  14. 【請求項１４】　　輸液に適するヒト赤血球を≧１　×
    １０９細胞／ｍｌの濃度において含んで成り、そして非
    感染形態において細胞外脂質包被ヒト病原性ウイルスお
    よび／または細胞内ヒト病原性ウイルスを有する組成物
    。
  15. 【請求項１５】　　輸液に適するヒト赤血球を≧１　×
    １０９細胞／ｍｌの濃度において含んで成り、そして非
    感染形態において細胞外および／または細胞内ヒト病原
    性ウイルスを有する組成物。
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