JPH04208857A - アネキシンの回収を改善する試薬 - Google Patents
アネキシンの回収を改善する試薬Info
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- G01N33/6872—Intracellular protein regulatory factors and their receptors, e.g. including ion channels
-
- G—PHYSICS
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
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- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
［０００１１本発明は、アネキシンの機能的活性を安定
化するための試薬およびその定量用の体液を捕集するた
めに適当な成分に関する。 ［０００２］とくに蛋白質ＰＰ４、ＰＰ４−Ｘ、ＰＡＰ
ＩＩＩ、ｐ６８、アンコリンならびにリポコルチンＩお
よびＩＩはアネキシン、あるいはりボコルチンまたカル
バクチンと呼ばれる。それらの生理学的役割はまだ完全
には解明されていない。 ［０００３］アネキシンは、多くの種、ヒト臓器および
各種の細胞型に見出されている。現在知られている限り
では、これらは抗炎症または抗凝固作用をもつ可能性が
大きいが、これらの蛋白質は体液中とくに血中にはきわ
めて低濃度しか存在しない（１〜５ｎｇ／ｍｌ）。しか
しながら、たとえばＰＰ４については明らかにされてい
るように、これらの蛋白質は、ある種の疾患に際して、
体液中たとえば血中に著しく上昇した濃度で検出できる
ことが多く、したがって疾患の早期発見またはその経過
の追跡のマーカーとして重要な臨床的検索能力を有する
（Ｇｏｃｚｅ、 Ｐ、 Ｍ、 ら 二 Ｍｅｄ、
Ｓｃ ｉ、 Ｒｅｓ。 １６：４０７〜４０８．１９８８）。これは蛋白質ＰＰ
４−Ｘ、ＰＡＰＩ Ｉ Ｉ、ｐ６８、アンコリンならび
にリポコルチン■およびＩＩについては真実と考えられ
る。 これらの蛋白質は感度の高い検出方法たとえばＲＩＡま
たはＥＬＩＳＡによって定量的に測定することができる
。 ［０００４］健常被験者からなる対照群の体液中におけ
る特定の被験物質の濃度を、病的範囲と比較して示す正
常範囲が、試験の重要性に決定的である。これは正常範
囲の上限を定義し、またカットオフとも呼ばれる。きわ
めて感度の高いＲＩＡまたはＥＬＩＳＡのような試験方
法では、また体液を得る方法が著しく重要である。たと
えば血液の細胞成分がその捕集時に損傷を受け、これに
よって試験結果が歪曲される可能性があるからである。 望ましくない副作用、たとえばその後の測定時における
高すぎるバックグランド等は、多くの場合、注意深い静
脈穿刺、ついで捕集される体液を測定すべき物質の保護
用添加物と急速に混合することによって回避できる。採
血に際して用いられる既知の試薬としては、複合体中の
カルシウムイオンを結合して凝血を防止するクエン酸塩
がある。 ［０００５］Ｌかしながら、サンプルの安定化試薬とし
てクエン酸塩は、この試薬を混合して得られたサンプル
がアネキシンの定量には適当でないという欠点がある（
表１）。ＰＰ４について行われた試験例では、抗凝固剤
としてクエン酸塩を添加した１０例の健常ドナーの全血
に由来する血漿中の、ＥＬＩＳＡで測定したＰＰ４濃度
は２〜８ｎｇ／ｍｌであって、このような変動はこの種
類の試験として容認できるものではなかった。ＥＤＴＡ
血漿でも満足できる結果は得られなかった。このキレー
ト形成剤でも容認できる上限を決定することは不可能で
、健常ドナーでも広範囲の変動を生じたからである。 ［０００６］本発明の目的はしたがって、体液中のアネ
キシンの信頼できる定量の実施を可能にする、アネキシ
ンの機能的活性の安定化試薬を見出すことであった。 ［０００７１本発明によれば、サンプル採取に際して、
抗凝固剤、キレート形成剤、ならびに凝集阻害剤群たと
えばクロロキン、ヒドロキシクロロキン、キナクリン、
カモキン、ジブカイン、リドカイン、プロカイン、テト
ラカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、レ
セルピン、アセチルサリチル酸、インドメサシン、ポカ
ゾン、乳酸プレニルアミン、マレイン酸ペルヘキシリン
、ニフェジピン、ベラパミールおよび／またはペントキ
シフィリンからの１本技術分野においてそれ自体公知の
物質１種または２種もしくは３種以上の配合物を含有す
るアネキシンの機能的活性の安定化試薬が使用される。 ［０００８］これによって、アネキシンの定量値の標準
範囲および十分に低いカットオフの定義が可能になる。
化するための試薬およびその定量用の体液を捕集するた
めに適当な成分に関する。 ［０００２］とくに蛋白質ＰＰ４、ＰＰ４−Ｘ、ＰＡＰ
ＩＩＩ、ｐ６８、アンコリンならびにリポコルチンＩお
よびＩＩはアネキシン、あるいはりボコルチンまたカル
バクチンと呼ばれる。それらの生理学的役割はまだ完全
には解明されていない。 ［０００３］アネキシンは、多くの種、ヒト臓器および
各種の細胞型に見出されている。現在知られている限り
では、これらは抗炎症または抗凝固作用をもつ可能性が
大きいが、これらの蛋白質は体液中とくに血中にはきわ
めて低濃度しか存在しない（１〜５ｎｇ／ｍｌ）。しか
しながら、たとえばＰＰ４については明らかにされてい
るように、これらの蛋白質は、ある種の疾患に際して、
体液中たとえば血中に著しく上昇した濃度で検出できる
ことが多く、したがって疾患の早期発見またはその経過
の追跡のマーカーとして重要な臨床的検索能力を有する
（Ｇｏｃｚｅ、 Ｐ、 Ｍ、 ら 二 Ｍｅｄ、
Ｓｃ ｉ、 Ｒｅｓ。 １６：４０７〜４０８．１９８８）。これは蛋白質ＰＰ
４−Ｘ、ＰＡＰＩ Ｉ Ｉ、ｐ６８、アンコリンならび
にリポコルチン■およびＩＩについては真実と考えられ
る。 これらの蛋白質は感度の高い検出方法たとえばＲＩＡま
たはＥＬＩＳＡによって定量的に測定することができる
。 ［０００４］健常被験者からなる対照群の体液中におけ
る特定の被験物質の濃度を、病的範囲と比較して示す正
常範囲が、試験の重要性に決定的である。これは正常範
囲の上限を定義し、またカットオフとも呼ばれる。きわ
めて感度の高いＲＩＡまたはＥＬＩＳＡのような試験方
法では、また体液を得る方法が著しく重要である。たと
えば血液の細胞成分がその捕集時に損傷を受け、これに
よって試験結果が歪曲される可能性があるからである。 望ましくない副作用、たとえばその後の測定時における
高すぎるバックグランド等は、多くの場合、注意深い静
脈穿刺、ついで捕集される体液を測定すべき物質の保護
用添加物と急速に混合することによって回避できる。採
血に際して用いられる既知の試薬としては、複合体中の
カルシウムイオンを結合して凝血を防止するクエン酸塩
がある。 ［０００５］Ｌかしながら、サンプルの安定化試薬とし
てクエン酸塩は、この試薬を混合して得られたサンプル
がアネキシンの定量には適当でないという欠点がある（
表１）。ＰＰ４について行われた試験例では、抗凝固剤
としてクエン酸塩を添加した１０例の健常ドナーの全血
に由来する血漿中の、ＥＬＩＳＡで測定したＰＰ４濃度
は２〜８ｎｇ／ｍｌであって、このような変動はこの種
類の試験として容認できるものではなかった。ＥＤＴＡ
血漿でも満足できる結果は得られなかった。このキレー
ト形成剤でも容認できる上限を決定することは不可能で
、健常ドナーでも広範囲の変動を生じたからである。 ［０００６］本発明の目的はしたがって、体液中のアネ
キシンの信頼できる定量の実施を可能にする、アネキシ
ンの機能的活性の安定化試薬を見出すことであった。 ［０００７１本発明によれば、サンプル採取に際して、
抗凝固剤、キレート形成剤、ならびに凝集阻害剤群たと
えばクロロキン、ヒドロキシクロロキン、キナクリン、
カモキン、ジブカイン、リドカイン、プロカイン、テト
ラカイン、クロルプロマジン、トリフルオペラジン、レ
セルピン、アセチルサリチル酸、インドメサシン、ポカ
ゾン、乳酸プレニルアミン、マレイン酸ペルヘキシリン
、ニフェジピン、ベラパミールおよび／またはペントキ
シフィリンからの１本技術分野においてそれ自体公知の
物質１種または２種もしくは３種以上の配合物を含有す
るアネキシンの機能的活性の安定化試薬が使用される。 ［０００８］これによって、アネキシンの定量値の標準
範囲および十分に低いカットオフの定義が可能になる。
【０００９】試験混合物中、凝集阻害剤は０４２〜２０
０ｍｍｏ ｌ ／ １、好ましくは２〜２００ｍｍｏ
Ｉ／ １、とくに好ましくは５〜５０ｍｍｏ１／ｌの濃
度で使用される。 ［００１０１血小板の凝集と、たとえば血小板因子（Ｐ
Ｐ４）を含有するα−顆粒の放出とをある程度効果的に
抑制する凝集阻害剤が公知である（Ｐ ｒ ｏｗｓ ｅ
、 Ｃ。 ら：Ｔｈｒｏｍｂ、Ｒｃｓ、２５：２１９〜２２７．１
９８２）。しかしながら、上述の本発明は、作用方式を
特定するものではないが、ＰＰ４値が著しく変動しても
測定されたＰＰ４値とには相関がみられない（表１）こ
とから、α−顆粒の放出の抑制に基づくものではないと
いうことができる。至適な［正常Ｊ ＰＰ４値は本発明
の試薬によってのみ得られる。 ［００１１１−操作においては、体液たとえば血液は、
採取時または採取直後に、試薬とサンプルの混合物が１
１あたり、０． ２〜５００ｍｍｏ ｌ、好ましくは２
〜２００ｍｍｏ！、とくに好ましくは５〜５０ｍｍｏｌ
のキレート形成剤たとえばＥＤＴＡ、ＥＧＴＡまたはク
エン酸もしくはシュウ酸の塩、および１００〜１００，
０００単位、好ましくは５０〜５０，０００単位の抗凝
固剤たとえばヘパリン、ヒルジン、コンドロイチン硫酸
、デルマタン硫酸またはペントサンポリ硫酸、ならびに
上述の凝集阻害剤１種または２種以上２〜２００ｍｍｏ
１を含むようになるような濃度の試薬と混合し、つい
で細胞成分が存在する場合にはそれを体液から分離する
。キレート形成剤、抗凝固剤およびこれらの添加物の３
種はすべて、各場合において、別個にまたは上述の配合
で混合してもしくは一緒に使用することができる。この
操作は、ＰＰ４ならびに他のアネキシンＰＰ４−Ｘ、Ｐ
ＡＰＩＩＩ、ｐ６８、アンコリン、リボコルチンＩおよ
びＩ■のいずれの定量的測定にも適している。 ［００１２］好ましい操作においては、体液９部を２〜
２００ｍｍｏ ｌ ／ １のＥＤＴＡ、５．０００〜５
０．０００単位／ｌのヘパリンならびにクロロキン、ヒ
ドロキシクロロキンおよびキナクリンからの物質少なく
とも１種５〜５０ｍｏ１／ｌを含有する溶液１部と混合
し、ついで細胞成分が存在する場合にはそれを体液から
分離する。 ［００１３］抗凝固剤は本技術分野においてはそれ自体
公知の化合物で、たとえばヒルジン、ヘパリン、デルマ
タン硫酸またはベントサン硫酸であり、ヘパリンおよび
ヒルジンがとくに好ましい。本明細書においてキレート
形成剤と呼ばれる物質は本技術分野においてはそれ自体
公知であり、たとえばクエン酸塩、シュウ酸塩、ＥＤＴ
ＡまたはＥＧＴＡであり、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡが好
ましく、同時に抗凝固作用も有する。 ［００１４］至適濃度は本技術分野の熟練者にはそれ自
体よく知られている。 ［００１５］実施例１において培体Ｃとして記載したよ
うな試薬がきわめて好ましい。 ［００１６１以下の実施例は本発明の例示を意図するも
のである。 ［００１７］
０ｍｍｏ ｌ ／ １、好ましくは２〜２００ｍｍｏ
Ｉ／ １、とくに好ましくは５〜５０ｍｍｏ１／ｌの濃
度で使用される。 ［００１０１血小板の凝集と、たとえば血小板因子（Ｐ
Ｐ４）を含有するα−顆粒の放出とをある程度効果的に
抑制する凝集阻害剤が公知である（Ｐ ｒ ｏｗｓ ｅ
、 Ｃ。 ら：Ｔｈｒｏｍｂ、Ｒｃｓ、２５：２１９〜２２７．１
９８２）。しかしながら、上述の本発明は、作用方式を
特定するものではないが、ＰＰ４値が著しく変動しても
測定されたＰＰ４値とには相関がみられない（表１）こ
とから、α−顆粒の放出の抑制に基づくものではないと
いうことができる。至適な［正常Ｊ ＰＰ４値は本発明
の試薬によってのみ得られる。 ［００１１１−操作においては、体液たとえば血液は、
採取時または採取直後に、試薬とサンプルの混合物が１
１あたり、０． ２〜５００ｍｍｏ ｌ、好ましくは２
〜２００ｍｍｏ！、とくに好ましくは５〜５０ｍｍｏｌ
のキレート形成剤たとえばＥＤＴＡ、ＥＧＴＡまたはク
エン酸もしくはシュウ酸の塩、および１００〜１００，
０００単位、好ましくは５０〜５０，０００単位の抗凝
固剤たとえばヘパリン、ヒルジン、コンドロイチン硫酸
、デルマタン硫酸またはペントサンポリ硫酸、ならびに
上述の凝集阻害剤１種または２種以上２〜２００ｍｍｏ
１を含むようになるような濃度の試薬と混合し、つい
で細胞成分が存在する場合にはそれを体液から分離する
。キレート形成剤、抗凝固剤およびこれらの添加物の３
種はすべて、各場合において、別個にまたは上述の配合
で混合してもしくは一緒に使用することができる。この
操作は、ＰＰ４ならびに他のアネキシンＰＰ４−Ｘ、Ｐ
ＡＰＩＩＩ、ｐ６８、アンコリン、リボコルチンＩおよ
びＩ■のいずれの定量的測定にも適している。 ［００１２］好ましい操作においては、体液９部を２〜
２００ｍｍｏ ｌ ／ １のＥＤＴＡ、５．０００〜５
０．０００単位／ｌのヘパリンならびにクロロキン、ヒ
ドロキシクロロキンおよびキナクリンからの物質少なく
とも１種５〜５０ｍｏ１／ｌを含有する溶液１部と混合
し、ついで細胞成分が存在する場合にはそれを体液から
分離する。 ［００１３］抗凝固剤は本技術分野においてはそれ自体
公知の化合物で、たとえばヒルジン、ヘパリン、デルマ
タン硫酸またはベントサン硫酸であり、ヘパリンおよび
ヒルジンがとくに好ましい。本明細書においてキレート
形成剤と呼ばれる物質は本技術分野においてはそれ自体
公知であり、たとえばクエン酸塩、シュウ酸塩、ＥＤＴ
ＡまたはＥＧＴＡであり、ＥＤＴＡまたはＥＧＴＡが好
ましく、同時に抗凝固作用も有する。 ［００１４］至適濃度は本技術分野の熟練者にはそれ自
体よく知られている。 ［００１５］実施例１において培体Ｃとして記載したよ
うな試薬がきわめて好ましい。 ［００１６１以下の実施例は本発明の例示を意図するも
のである。 ［００１７］
【実施例１】サンプリング
健常血液ドナーの上腕上に約４０ｍｍＨｇの背圧を発生
させ、 「蝶型」カニユーレを用いて正確に静脈穿刺を
行ったのち、予め採取用媒体０．５ｍｌを添加した使い
捨てシリンジ中に全血４．５ｍｌを吸引した。採取用媒
体としては以下の溶液を使用した。 媒体Ａ： １１０ｍｍｏ Ｉ／ｌクエン酸三ナトリウム
溶液媒体Ｂ：０．９％ＮａＣ１添加２７ｍｍｏｌ／］、
ＥＤＴＡ溶液、ｐＨ７，４ 媒体Ｃ：２０．ｏｏｏ単位／ｌヘパリンおよび１６ｍｍ
ｏ１／ｌ硫酸ヒドロキシクロロキン添加１３４ｍｍｏｌ
／Ｉ ＥＤＴＡ、ｐＨ７，４ ［００１８１ついでサンプリングを直ちにポリスチレン
管に移し、次の処理まで、少なくとも３０分ただし最高
２時間まで＋２〜＋８℃に保存した。 ［００１９］冷却したサンプルを２０００Ｘｇで１５分
間遠心分離し、ついで血漿上清をさらに１５分間８００
０Ｘｇで遠心分離した。血漿上清をＰＰ４の酵素イムノ
アッセイによる測定に使用した。採取用媒体Ｃを用いて
得られたサンプルについてはさらにＰＰ４イムノアツセ
イによる試験も行った。 ［００２０１ＰＰ４およびＰＰ４イムノアッセイ採取用
媒体Ｃを用いて得られたサンプルのＰＰ４濃度は、Ｅｎ
ｚｙｇｎｏｓ を血小板因子４酵素イムノアツセイ（Ｏ
ＵＬＶ、Ｂｅｈｒ ｉｎｇｗｅｒｋｅ）により、そのテ
ストの指示書に従って測定した。ＰＰ４濃度を測定する
ためには、以下にさらに述べるような試験特異的成分と
Ｂｅｈｒ ｉｎｇｗｅｒｋｅの市販試験キットからの試
薬を使用した。すなわち、標準（０，３〜１０μｇ／ｌ
；バッチ番号２６８９０７．ＢＷ）１００μｍ、または
ＴＡＴサンプル緩衝液（ＯＵＲＧ、ＢＷ）で１：２もし
くは１：１１に希釈した血漿サンプル１００μｍを、そ
れぞれ、ポリクローナル抗−ＰＰ４抗体（ウサギから、
バッチ番号２７８９０５．ＢＷ）でコーティングしたマ
イクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）のウェル中にピペ
ットで取り、３７℃で２時間インキュベートした。 希釈ＥｎＪ、’ｇｎＯ３ｔ洗浄緩衡液（Ｏ３ＥＷ、ＢＷ
）で３回洗浄したのち、抗−ＰＰ４抗体／ペルオキシダ
ーゼ接合体溶液（バッチ番号３０８８０８．ＢＷ）１０
０μｌを各ウェルにそれぞれ加えた。次に３７℃で２時
間のインキュベーション工程後に、洗浄サイクルを３回
反復した。第三のインキュベーション工程（室温）は、
緩衝液／クロモゲン溶液（ＴＭＢ：○ＵＶＧ１０ＵＶＦ
。 ＢＷ）１００μｍをそれぞれウェルにピペットで添加し
て行い、３０分後にＥｎｚｙｇｎｏｓ を停止溶液（Ｏ
８＊＊ＦＡ、 ＢＷ）で酵素反応を停止させた。標準お
よびサンプルの吸光を４５０ｎｍで測定し、プロットし
た標準曲線を用い、希釈係数を考慮してＰＰ４濃度を計
算した。 ［００２１１
させ、 「蝶型」カニユーレを用いて正確に静脈穿刺を
行ったのち、予め採取用媒体０．５ｍｌを添加した使い
捨てシリンジ中に全血４．５ｍｌを吸引した。採取用媒
体としては以下の溶液を使用した。 媒体Ａ： １１０ｍｍｏ Ｉ／ｌクエン酸三ナトリウム
溶液媒体Ｂ：０．９％ＮａＣ１添加２７ｍｍｏｌ／］、
ＥＤＴＡ溶液、ｐＨ７，４ 媒体Ｃ：２０．ｏｏｏ単位／ｌヘパリンおよび１６ｍｍ
ｏ１／ｌ硫酸ヒドロキシクロロキン添加１３４ｍｍｏｌ
／Ｉ ＥＤＴＡ、ｐＨ７，４ ［００１８１ついでサンプリングを直ちにポリスチレン
管に移し、次の処理まで、少なくとも３０分ただし最高
２時間まで＋２〜＋８℃に保存した。 ［００１９］冷却したサンプルを２０００Ｘｇで１５分
間遠心分離し、ついで血漿上清をさらに１５分間８００
０Ｘｇで遠心分離した。血漿上清をＰＰ４の酵素イムノ
アッセイによる測定に使用した。採取用媒体Ｃを用いて
得られたサンプルについてはさらにＰＰ４イムノアツセ
イによる試験も行った。 ［００２０１ＰＰ４およびＰＰ４イムノアッセイ採取用
媒体Ｃを用いて得られたサンプルのＰＰ４濃度は、Ｅｎ
ｚｙｇｎｏｓ を血小板因子４酵素イムノアツセイ（Ｏ
ＵＬＶ、Ｂｅｈｒ ｉｎｇｗｅｒｋｅ）により、そのテ
ストの指示書に従って測定した。ＰＰ４濃度を測定する
ためには、以下にさらに述べるような試験特異的成分と
Ｂｅｈｒ ｉｎｇｗｅｒｋｅの市販試験キットからの試
薬を使用した。すなわち、標準（０，３〜１０μｇ／ｌ
；バッチ番号２６８９０７．ＢＷ）１００μｍ、または
ＴＡＴサンプル緩衝液（ＯＵＲＧ、ＢＷ）で１：２もし
くは１：１１に希釈した血漿サンプル１００μｍを、そ
れぞれ、ポリクローナル抗−ＰＰ４抗体（ウサギから、
バッチ番号２７８９０５．ＢＷ）でコーティングしたマ
イクロタイタープレート（Ｎｕｎｃ）のウェル中にピペ
ットで取り、３７℃で２時間インキュベートした。 希釈ＥｎＪ、’ｇｎＯ３ｔ洗浄緩衡液（Ｏ３ＥＷ、ＢＷ
）で３回洗浄したのち、抗−ＰＰ４抗体／ペルオキシダ
ーゼ接合体溶液（バッチ番号３０８８０８．ＢＷ）１０
０μｌを各ウェルにそれぞれ加えた。次に３７℃で２時
間のインキュベーション工程後に、洗浄サイクルを３回
反復した。第三のインキュベーション工程（室温）は、
緩衝液／クロモゲン溶液（ＴＭＢ：○ＵＶＧ１０ＵＶＦ
。 ＢＷ）１００μｍをそれぞれウェルにピペットで添加し
て行い、３０分後にＥｎｚｙｇｎｏｓ を停止溶液（Ｏ
８＊＊ＦＡ、 ＢＷ）で酵素反応を停止させた。標準お
よびサンプルの吸光を４５０ｎｍで測定し、プロットし
た標準曲線を用い、希釈係数を考慮してＰＰ４濃度を計
算した。 ［００２１１
【結果］採取用媒体Ｃを用いた血漿サンプルで、最も低
いＰＰ４濃度が測定された。媒体Ｂおよびとくに媒体Ａ
では明らかに高いＰＰ４値が得られ、被験者間での変動
も大きかった（表１）。 ［００２２］ 【表１】 様々な血漿サンプル（１０例の健常血液ドナーから）に
ついて測定したＰＰ４およびＰＰ４値ＰＦ４ （ｇｇ／
ｌ） ＰＰ４ （ｊｇ／Ｉ）ＣＡＢＣ 血液ドナー １３．７ ５．１ １０ １９２
３．５ ４．５ １５
０．７３ ８．７ ７−６ ５
−３ １２４ ２．４ ４．
４ ０．８ １０５ ３．２
２．０ １９ ０．７６ ６．４
２−８ １．８ ０．７７
３．９ ８．０ １．７ ０．９
８ ２．５ ３．３ １．０
０．７９ ４．２ ２．４
１．４ １．０１０ ４．４
２．０ ０．９ １．１［００２３］
いＰＰ４濃度が測定された。媒体Ｂおよびとくに媒体Ａ
では明らかに高いＰＰ４値が得られ、被験者間での変動
も大きかった（表１）。 ［００２２］ 【表１】 様々な血漿サンプル（１０例の健常血液ドナーから）に
ついて測定したＰＰ４およびＰＰ４値ＰＦ４ （ｇｇ／
ｌ） ＰＰ４ （ｊｇ／Ｉ）ＣＡＢＣ 血液ドナー １３．７ ５．１ １０ １９２
３．５ ４．５ １５
０．７３ ８．７ ７−６ ５
−３ １２４ ２．４ ４．
４ ０．８ １０５ ３．２
２．０ １９ ０．７６ ６．４
２−８ １．８ ０．７７
３．９ ８．０ １．７ ０．９
８ ２．５ ３．３ １．０
０．７９ ４．２ ２．４
１．４ １．０１０ ４．４
２．０ ０．９ １．１［００２３］
【実施例２】採取用媒体が酵素イムノアッセイにおける
ＰＰ４の回収を妨害しないことを確認するため、５．５
ｎｇの標準ＰＰ４を、血漿サンプルの１：１１希釈時に
添加するサンプル緩衝液と同時に加えた。 ［００２４１ＰＰ４の回収率はすべての採取用媒体につ
いてほぼ同じであった（表２）。したがって正常健康人
のＰＰ４レベルの上昇の理由はもっばら採血時の方法お
よび適当な採取用媒体の選択にある。
※※［００２５］
ＰＰ４の回収を妨害しないことを確認するため、５．５
ｎｇの標準ＰＰ４を、血漿サンプルの１：１１希釈時に
添加するサンプル緩衝液と同時に加えた。 ［００２４１ＰＰ４の回収率はすべての採取用媒体につ
いてほぼ同じであった（表２）。したがって正常健康人
のＰＰ４レベルの上昇の理由はもっばら採血時の方法お
よび適当な採取用媒体の選択にある。
※※［００２５］
【表２】
様々な血漿（ｎ＝１０）におけるＰＰ４の回収率媒体
−昌一憇一亨− Ａ ８７．０±９．２％ Ｂ ８”１５±７．５％ Ｃ８７，８±６．７％
−昌一憇一亨− Ａ ８７．０±９．２％ Ｂ ８”１５±７．５％ Ｃ８７，８±６．７％
Claims (8)
- 【請求項１】抗凝固剤、キレート形成剤、ならびに凝集
阻害剤群たとえばクロロキン、ヒドロキシクロロキン、
キナクリン、カモキン、ジブカイン、リドカイン、プロ
カイン、テトラカイン、クロルプロマジン、トリフルオ
ペラジン、レセルピン、アセチルサリチル酸、インドメ
サシン、ポカゾン、乳酸プレニルアミン、マレイン酸ペ
ルヘキシリン、ニフェジピン、ベラパミールおよび／ま
たはペントキシフィリンからの、本技術分野においてそ
れ自体公知の物質１種または２種もしくは３種以上の配
合物を含有するアネキシンの機能的活性を安定化する試
薬。 - 【請求項２】１種または２種以上の凝集阻害剤を総濃度
２〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、好ましくは５〜５０ｍｍｏ１
／ｌを予め調製された溶液中に含有する請求項１記載の
試薬。 - 【請求項３】クロロキン、ヒドロキシクロロキン、キナ
クリンまたはこれらの物質の少なくとも２種をの混合物
を凝集阻害剤として使用する請求項１記載の試薬。 - 【請求項４】予め調製された溶液中、ヒルジン、ヘパリ
ン、デルマタン硫酸、コンドロイチン硫酸もしくはペン
トサンポリ硫酸１００〜１００，０００単位／ｌの濃度
、またはその配合物、好ましくはヘパリン５００〜５０
，０００単位／ｌを抗凝固剤として使用する請求項１記
載の試薬。 - 【請求項５】クエン酸もしくはシュウ酸の塩、ＥＤＴＡ
、ＥＧＴＡまたはこれらの物質の配合物０．２〜５００
ｍｍｏｌ／ｌの濃度、好ましくはＥＤＴＡ２〜２００ｍ
ｍｏｌ／ｌをキレート形成剤として使用する請求項１記
載の試薬。 - 【請求項６】特異的結合パートナーを用いる蛋白質ＰＰ
４、ＰＰ４−Ｘ、ＰＡＰIII、ｐ６８、アンコリンなら
びにリポコルチン I およびIIの機能的検出方法におい
て、請求項１記載の試薬を使用する方法。 - 【請求項７】好ましくは特異的結合パートナーとして抗
体を使用し、蛋白質の濃度はたとえばＥＩＡ、ＲＩＡ、
ＣＩＡまたはＦＩＡによって測定する請求項６記載の方
法。 - 【請求項８】請求項１記載の試薬の数倍高濃度の溶液の
、採取血液が加わると試薬の活性物質の所望濃度が達成
される容量を予め添加した容器中に血液を捕集する血液
の採取方法。
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| DE3942081.7 | 1989-12-20 |
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|---|---|
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| CA (1) | CA2032751A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1067667A (ja) * | 1996-08-24 | 1998-03-10 | Boehringer Diagnostics Gmbh | 血小板の安定化方法 |
| US20100318040A1 (en) * | 2009-06-11 | 2010-12-16 | Becton, Dickinson And Company | Catheter Locking Solution Having Antimicrobial and Anticoagulation Properties |
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| US20030220233A1 (en) | 1994-01-24 | 2003-11-27 | Neorx Corporation | Radiolabeled annexins |
| US6255295B1 (en) | 1996-12-23 | 2001-07-03 | Nutramax Laboratories, Inc. | Aminosugar, glycosaminoglycan or glycosaminoglycan-like compounds, and s-adenosylmethionine composition for the protection, treatment, repair, and reduction of inflammation of connective tissue |
| US7645739B2 (en) * | 2001-02-21 | 2010-01-12 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Modified annexin compositions and methods of using same |
| US20090291086A1 (en) * | 2001-02-21 | 2009-11-26 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Compositions and Methods for Treating Cerebral Thrombosis and Global Cerebral Ischemia |
| US20050222030A1 (en) * | 2001-02-21 | 2005-10-06 | Anthony Allison | Modified annexin proteins and methods for preventing thrombosis |
| US7635680B2 (en) * | 2001-02-21 | 2009-12-22 | Alavita Pharmaceuticals, Inc. | Attenuation of reperfusion injury |
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| US7635676B2 (en) * | 2001-02-21 | 2009-12-22 | Alavita Pharmaccuticals, Inc. | Modified annexin proteins and methods for their use in organ transplantation |
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|---|---|---|---|---|
| DE3019612A1 (de) * | 1980-05-22 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes thrombinpraeparat |
| CA1216518A (en) * | 1982-11-01 | 1987-01-13 | Gail A. Rock | Plasma-free medium for platelet storage |
| DE3448151C2 (ja) * | 1983-08-11 | 1989-11-02 | Kureha Kagaku Kogyo K.K., Nihonbashi, Tokio/Tokyo, Jp | |
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| US4994367A (en) * | 1988-10-07 | 1991-02-19 | East Carolina University | Extended shelf life platelet preparations and process for preparing the same |
| US5217954A (en) * | 1990-04-04 | 1993-06-08 | Scios Nova Inc. | Formulations for stabilizing fibroblast growth factor |
-
1989
- 1989-12-20 DE DE3942081A patent/DE3942081A1/de not_active Withdrawn
-
1990
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- 1990-12-15 ES ES90124304T patent/ES2078289T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-12-15 AT AT90124304T patent/ATE128239T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-12-15 DE DE59009684T patent/DE59009684D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-19 AU AU68233/90A patent/AU647431B2/en not_active Ceased
- 1990-12-19 JP JP2417897A patent/JP2972353B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1990-12-19 CA CA002032751A patent/CA2032751A1/en not_active Abandoned
-
1993
- 1993-04-15 US US08/046,908 patent/US5589395A/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH1067667A (ja) * | 1996-08-24 | 1998-03-10 | Boehringer Diagnostics Gmbh | 血小板の安定化方法 |
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| US9248093B2 (en) * | 2009-06-11 | 2016-02-02 | Becton, Dickinson And Company | Catheter locking solution having antimicrobial and anticoagulation properties |
| US9744273B2 (en) | 2009-06-11 | 2017-08-29 | Becton, Dickson And Company | Catheter locking solution having antimicrobial and anticoagulation properties |
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| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |