JPH04193834A

JPH04193834A - 梅等のバラ科さくら属を用いた変異原性抑制剤の製法及び食品

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Publication number: JPH04193834A
Application number: JP2327277A
Authority: JP
Inventors: Hajime Murakami; 一村上; Tomotada Dougasaki; 堂ケ崎　知格; Motohiro Nishijima; 西島　基弘; Toshio Miyazaki; 宮崎　利夫
Original assignee: MEITAN HONPO KK
Current assignee: MEITAN HONPO KK
Priority date: 1990-11-27
Filing date: 1990-11-27
Publication date: 1992-07-13
Anticipated expiration: 2014-11-02
Also published as: JP2968992B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、梅の梅肉及び仁を原料とする変異原性抑制剤
の製法及び食品に関するものである。

（解決しようとする問題点）梅の実やその加工品は、古来より民間伝承薬あるいは食
欲増進効果のある保存食品として用いられてきた。

しかし、その効果についての科学的な解明は殆んどなさ
れていない。

発明者等は、梅の医学的機能と成分を鋭意研究し、梅肉
エキス及び梅仁よりヘキサン抽出した抽出物には突然変
異原性を抑制する機能があることを見出し、本発明をな
した。

（構　成）本発明は、梅等のバラ科さくら属果実の仁及び／又は果
肉エキスに対し、石油ベンジン系溶媒或いは非極性溶媒
を用いて抽出し、溶液を脱水及び濾過した後、溶媒を留
去することにより、変異原性抑制剤を製造する方法であ
る。

更に本発明は、梅等のバラ科さくら属果実の仁及び／又
は果肉エキスに対し、石油ベンジン系溶媒を用いて抽出
し、溶液を脱水及び濾過した後、溶媒を留去して形成し
た変異原性抑制作用を有する機能食品である。

（作用効果）」１記方法によって得た抽出物は、既知の変異原性物質
に対して、顕著な抑制作用を有することが確認できた。

又、抽出物をその侭、或いは精製して、液状の侭で、或
いはカプセル状として、又は賦形剤を混合して固形錠剤
として食用に供することが出来る。

（実施例）以下の説明においては、梅を原料として本発明を説明し
ているが、本発明は梅に限らず、生物学的に近い、桃、
あんず、さくらんは等のバラ科さくら属の果実について
実施出来ることは勿論であり、それ等の果実を含めるも
のである。

梅エキスは、梅肉を約１日間弱火で煮ることによって形
成され、水分を無くして濃縮した黒色ゾル状の粘稠性半
固体である。機能性食品として市販されており、株式会
社梅丹本舗製を用いた。

梅仁は、梅の種子の核質内部に存在している白色粒状体
である。梅の品種は南高、平成元年６月１５〜２１日頃
に収穫された三重県産の完熟青梅を用い、これの果肉を
取り除き、核質及び薄皮の部分を、除去した仁だけを用
いた。

後述するとおり、梅仁及び梅肉エキスを夫々ヘキサン等
の石油ベンジン系溶媒エーテル、酢酸エチル等の非極性
溶媒によって抽出した。

抽出画分は脱水処理によって、透明な液状を呈す脂質で
ある。

抽出画分をケイ酸及びクロロホルムによって、中性脂質
画分と極性脂質画分とに分離した。

中性脂質画分を少量の石油エーテルに溶解し、ケイ酸カ
ラムクロマトグラフィによって分画した。

その結果、第１図に示す如く、対照用のオレイン酸やコ
レステロールには見られない物質が含まれていることを
知った。

次に梅肉エキス及び梅仁の石油ベンジン系溶媒抽出物に
ついて変異原性抑制作用をエームス　アッセイ法によっ
て調べた。

既知の変異原性物質であるＡＦ−２、Ｂ［α］Ｐ及びＡ
Ｉ”−Ｂ、が変異サルモネラ菌ＴΔ−１００に対して示
す変異原性の抑制率は第１表に示すとおりである。

梅肉エキスのへキサン抽出物（中性脂質画分）では、最
高濃度１　、６６　ｍｇ／　ｐｌａｔｅにおいては、９
５３〜９８２、変性サルモネラ菌ＴＡ−９８に対しては
７７９〜９８９であった。

梅仁のへキサン抽出物（中性脂質画分）の場合は、第２
表に示すとおり、最高２２　、５　ｍｇ／　ｐｌａｔｅ
においては、Ｔ’Ａ−１００に対しては９２．４〜９９
７％、ＴＡ−９８に対しては９７６〜９９５の抑制率で
あった。

対照として用いた市販の植物油、オリーブ油、大豆油お
よび菜種油について行なった変異原性抑制テストの抑制
率は、第３表のとおり、いづれも０．１７９−０．２％
であった。

」１記テストによって明らかな如く、ヘキサン抽出物に
は、突然変異原性の抑制機能を有する物質が含有されて
いることは明瞭である。

」−記梅仁及び／又は梅肉エキスのヘキサン抽出物は、
その侭或いは精製して抗変異原性抑制剤として経口投与
して用い得る。ヘキサン抽出物は梅のみを原料にしてお
り、これは古来からの食物として無害であるから、上記
のヘキサン抽出物の副作用は無い。

又、上記のへキサン抽出物に、澱粉、穀粉を混合して固
形粒状とし、打錠し、又はヘキサン抽出物をカプセル化
することにより、食用に供し得、通常食品に微量に含ま
れている変異原性物質の身体べの影響を抑制し、身体の
健康を維持できる。

（実施例１）梅仁を原料とする抗変異原性物質のヘキサン抽出は次の
方法で行なった。

梅仁１５００ｇｒを肉挽機で予め破砕した。

２培容のヘキサンを加えて、８００　ｒｐｍで５分間、
振とうしてホモジナイズし、ヘキサン層の黄色がなくな
るまで抽出を繰り返した。

全ヘキサン層を合わせて、無水Ｎａ２５ｏ４を加えて脱
水処理した後、Ｉ　Ｐ　Ｓ　（Ｗｈａｔｍａｎ）で濾過
した。

その後、ヘキサンを留去し、ヘキサン抽出画分２１９．
２ｇ、収率１４６％を得た。

（実施例２）梅肉エキスを原料とする抗変異原性物質のヘキサン抽出
は次の方法で行なった。

市販の梅肉エキス４０ｇを原料とする。

なお、この量の梅肉エキスの製造には、青梅２Ｋｇが使
われる。

蒸留水２００ｍ１を加えて梅肉エキスを溶解した。

ヘキサン６００ｍ１２を加えて振とうして抽出した後、
遠心分離を３０　Ｏｒｐｍ、　５分間行ない、ヘキサン
層の黄色がなくなるまで抽出を繰り返した。

全ヘキサン層を合わせて、無水Ｎ　ａ　２　Ｓ　ｏ、４
を加え、脱水処理した後、Ｉ　Ｐ　Ｓ　、（Ｗｈａｔｍ
ａｎ、）で濾過した。

ヘキサンを留去し、５８．５ｍｇのヘキサン抽出画分を
得た。収率０．１５％。

（実施例３）実験１及び２によって得た各ヘキサン抽出画分に対し、
夫々次のケイ酸を用いた吸着法による分画方法を実施し
、中性脂質画分と極性脂質画分とに分画した。

ヘキサン抽出画分に対し、ケイ酸２５ｇとクロロホルム
５０ｍ１を加え、１０分間攪拌した後、５分間静置した
。

濾紙（Ｎｏ、２）を２枚重ねたガラスフィルター　（３
Ｇ−４）で吸引濾過し、この操作を５〜６回繰り返した
。

濾液のクロロホルム層には中性脂質画分が溶出している
。

一方、濾紙上のケイ酸濾過をメタノールで４〜５回洗い
、極性脂質画分を溶出させた。

（実験４）梅肉エキスの中性脂質画分及び対照用としてオレイン酸
とコレステロールに対して、次のとおりケイ酸クロマト
グラフィーによる分画を行なった。

先ず、中性脂質画分を少量の石油エーテルに溶解した。

直径２０ｍｍ、長さ２５０ｍｍのクロマト管にケイ酸３
０ｇを充填して負荷を加えた。

エーテル１％、４％、１０％、５０％、１００％の５段
階の濃度のエーテル・石油エーテル溶剤を用いて順次溶
出した。溶剤量は上記濃度の順番に７００，７００．５
００．５００．５００ｍ＋２を用いた。

対照用としてオレイン酸及びコレステロールについても
、同様な分画処理を行なった。

各クロマトの分離画分は第１図のとおりであった。

Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　６０、石油エーテル・エーテル・
酢酸、（９０：　１０　：　１）、発色剤は燐モリブデ
ン酸エタノール液である。

第１図において、試料番号１．４．５に現われた成分に
は、対照用として用いた試料番号７及び′８に示すオレ
イン酸及びコレステロールの成分とは異なる位置Ａに、
成る物質成分が現われている。

（実験５）梅仁から得たヘキサン抽出物の中性脂質画分についても
、同様にケイ酸クロマトグラフィーによる分画を行なっ
た。その結果、第２図に示すとおり対照用として用いた
試料６のオレイン酸の成分とは異なる位置Ｂに、オレイ
ン酸とはＲｆ値の異なる成る物質成分が現われている。

（実験６）梅仁及び梅肉エキスのヘキサン抽出物或いはその精製画
分の濃度を変えて、これ等が突然変異原性を持つ既知物
質に対してどの様な抑制効果を有するかを、エームス　
アッセイ法によって調べた。

エームス　アッセイ法は、食品の発がん性に密接につな
がっているものを調べる際に一般的に行なわれている試
験方法であって、強い発がん性のあることが完全に証明
されている既知物質及び試験すべき物質を変性サルモネ
ラ菌に加えて、変性サルモネラ菌の増殖の有無と強さを
調べるものである。

変性サルモネラ菌は、アミノ酸の一種であるヒスチジン
が存在する場合にのみ増殖する様に変性されているが、
発がん性の強い物質を加えると、突然変異してヒスチジ
ンが無くても増殖し、コロニーを形成する。コロニーを
計数することによって、物質の発がん性の強さを知るこ
とが出来る。

この試験では、既知の発がん性物質として、ＡＦ−２、
Ｅ［α］　Ｐ、ＡＰ−Ｂｌの３種類を用いた。

変性サルモネラ菌として、ＴＡｌｏｏ及びＴＡ９８の２
種類を用いた。

既知の発がん性物質に対して梅仁のヘキサン抽出物或い
は、それの精製物を添加し、発がん性物質単独の場合の
サルモネラ菌の増殖の強さと、梅仁、梅エキスのヘキサ
ン抽出物を加えた場合のサルモネラ菌の増殖の強さを比
較することにより、ヘキサン抽出物の抗変異原性を判定
した。

先ず、梅仁のへキサン抽出物或いはその精製画分につい
て１、濃度が段階的に異なる様に、濃度を調整した５種
類の試料を夫々５０μｌ形成した。

予め設定した一定濃度の既知変異原物質５０μｌを、上
述の５種類の試料に夫々加えて、各試料は全量を１００
μｌとした。

次に０．１Ｍの燐酸緩衝液或いは既知変異原物質が代謝
活性化系の場合はＳ−９ｍｉｘを５００μｌ加えた。

次にＮｕｔｒｉｅｎｔ　　ｂｒｏｔｈ　（Ｏｘｏｉｄｅ
　Ｎｏ、２）培養液中で、３７℃、１６時間培養した、
菌懸濁液（Ｓａｌｍ。

ｎｅｌｌａ　　ｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ　　Ｔ　Ａ　
１００またはＴＡ９８）を１００μρ加えて、３７℃、
２０分間ブレインキュベーションした。

次に上記混合液を０．５Ｍヒスチジン−ビオチンを含む
軟寒天溶液２ｍｌに加え、３７°Ｃの下で４８時間培養
した。

その後、培養皿に生じたコロニーを計数し、変性サルモ
ネラ菌の借地中での増殖を比較し、第１表に表示した。

第１表に於て、既知の変異原物質として、ＡＦ２、Ｂ［
α］Ｐ、ＡＦＢｔの３種類を用い、試料は培養皿毎に８
８μｌ、３５１μＮ、１４０３μｆｆ、５６２５μｌ、
２２５００μｌの５段階及び比較用として、試料は変え
ず変異原物質単独の場合の合計６種類を用意した。

変性サルモネラ菌はＴＡｌｏｏとＴＡ９８の２種類を使
用し、ＴＡｌｏｏに対する変異原物質の濃度は、ＡＦ−
２及びＡＦＢ、の場合は、皿当り０．０２μｇ、　Ｂ　
［α］Ｐの場合は、皿当り５０μｇとした。ＴＡ９８に
対する変異原物質の濃度は、ＡＦ−２及びＡＦＢ、の場
合は、皿当り００４μｇＳＢ　［αコＰの場合は、皿当
り１０．０μｇとした。

その結果、試料は３種類の何れの変異原物質についても
、又、２種類の変性サルモネラ菌の何れに対しても、顕
著に突然変異性抑制効果を有していることが判った。又
、試料の濃度は高い程、抑制効果も高いことが判明した
。

（実験７）実験５と同じ方法で、梅肉エキスより得たヘキサン抽出
物（中性脂質画分）について、変異原性抑制効果を試験
した。その結果は第２表のとおりである。実験５と同じ
傾向であって、顕著な変異原性抑制効果を有することが
判明した。

（実験８）市販のオリーブ油、大豆油、菜種油について、実験５と
同じ方法によって、変異原性抑制効果の対照試験を行な
った。

その結果は第３表に示しているとおり、これ等市販の植
物油には抗変異原性は殆んど無いことが判った。

発明者等は更に研究を深め、上記の他、各種の実験を行
なった結果、梅仁のへキサン抽出物（極性脂質画分）は
、変異原性質ＡＰ−２に対しては、ＴＡｌｏｏおよびＴ
Ａ９８のいずれにおいても変異原性を抑制したが、梅肉
ヘキサンのヘキサン抽出物（極性脂質画分）においては
顕著な抑制効果は認められないことを見出した。

又、梅仁及び梅肉エキスのヘキサン抽出物の各々の中性
脂質画分について、ケイ酸カラムクロマトグラフィーに
より細かく分画した場合、梅肉エキスにおいては５０％
、梅仁においては１０％のエーテル・石油エーテル画分
が変異原性抑制作用を最も強く示すことを見出した。

以上の実験５．６．７を通じて、次の事柄が明かとなっ
た。

（１）梅肉エキス及び梅仁のへキサン抽出物は、既知の
変異原物質が、ＴＡｌｏｏおよびＴＡ９８に対して示す
変異原性を抑制することが出来る。

（２）梅仁のヘキサン抽出物（中性脂質画分）が、既知
の変異原物質であるＡＦ−２、Ｂ［α］ＰおよびＡＦ−
Ｂ、がＴＡｌｏｏに対して示す変異原性の抑制率は、最
高濃度２２゜５　ｍｇ／皿においては９２．４〜９９．
７％、ＴＡ９８では９７６〜９９．５％である（第１表
）。

（３）梅肉エキスのへキサン抽出物（中性脂質画分）の
場合、それぞれの変異原物質に対して、最高濃度１．６
６ｍｇ／皿においてＴＡＩｏｏでは９５．３〜９８．２
％、ＴＡ９８では７７９〜９８．９％である（第２表）
。

（４）市販の植物油例えばオリーブ、大豆油および菜種
油の変異原性抑制率は、いずれも０２〜１７．９％の範
囲である（第３表）。

更に発明者等の研究によって、梅仁のアルカリ抽出画分
は、マイトジェン活性を有することが確認された。これ
によって、非特異的活性であるが、βリンパ細胞の分裂
を促進する効果があることが判明した。

（以下余白）

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図は夫々梅仁及び梅肉エキスのヘキサン抽
出物のケイ酸カラムクロマトグラフィーである。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）梅等のバラ科さくら属果実の仁及び／又は果肉エ
キスに対し、石油ベンジン系溶媒、エーテル、酢酸エチ
ル等の非極性溶媒を用いて抽出し、溶液を脱水及び濾過
した後、溶媒を留去することを特徴とする変異原性抑制
剤を製造する方法。
（２）梅等のバラ科さくら属果実の仁及び／又は果肉エ
キスに対し、石油ベンジン系溶媒、エーテル、酢酸エチ
ル等の非極性溶媒を用いて抽出し、溶媒を留去して形成
したことを特徴とする変異原性抑制作用を有す機能性食
品。