JPH04182432A - カルシウム依存性環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、カルシウム拮抗薬として有用なカルシウム依
存性環状ヌクレオチドホスホジェステラーゼ阻害剤に関
する。

発明の開示 カルシウム拮抗薬は、１９６９年、フレッケンシュタイ
ンが心筋収縮の電気生理学的研究において発見した。ベ
ラパミルを始めとするカルシウムと競合的に作用する一
群の化合物であり、以来このカルシウム拮抗薬に研究及
び臨床応用は・、目覚ましい進歩を遂げてきた。

これらカルシウム拮抗薬は、心筋及び血管を始めとする
各種平滑筋において筋細胞膜のカルシウムチャンネルに
選択的に作用し、細胞外カルシウムイオンの細胞内への
流入と、筋小胞体等における貯蔵カルシウムの細胞質内
への遊離とを阻害することにより細胞質内の自由カルシ
ウムイオンの増加を抑制すると考えられている。

こうした薬理作用に基づく筋細胞の収縮の抑制及び弛緩
作用は、臨床的には抗心筋虚血作用、抗不整脈作用及び
降圧作用の発現に関与すると考えられている。

最近ではその抗動脈硬化作用、血小板凝集阻害作用、末
梢循環改善作用、抗胃潰瘍作用等について報告が見られ
、その適応疾患は更に拡大されつつある。

本発明者らは、ルテニウムレッドにつき研究を重ねるう
ち、Ｃａ”依存性環状ヌクレオチドホスホジェステラー
ゼはカルモジュリンやカルシウムイオンの増加により活
性が増加するが、ルテニウムレッドは濃度依存的にＣａ
２”依存性環状ヌクレオチドホスホジェステラーゼの活
性上昇を抑制し、カルモジュリン及びカルシウムの両方
に拮抗することを見い出した。本発明は、斯がる知見に
基づき完成されたものである。

即ち、本発明は、ルテニウムレッドを有効成分として含
有するカルシウム依存性環状ヌクレオチドホスホジェス
テラーゼ阻害剤に係る。

本発明の環状ヌクレオチドホスホジェステラーゼ阻害剤
は、虚血性心疾患（狭心症、心筋梗塞）、不整脈、高血
圧症、心筋症、脳血管障害、レイノー症候群、肺高血圧
症、癲痴、めまい等の症状に適用され得る。

本発明のルテニウムレッドは、慣用の製剤担体と共に動
物及び人に投与することができる。投与単位形態として
は、特に限定がなく必要に応じ適宜選択して使用される
。斯かる投与単位形態としては、錠剤、顆粒剤、カプセ
ル剤、経口用溶液等の経口剤、注射剤等の非経口剤等を
例示できる。

投与されるべき有効成分の量としては、特に限定がなく
広い範囲から適宜選択されるが、所期の効果を発揮する
ためには１日当り体重１ｋｇ当り０．１〜３００ｍｇと
し、１回〜数回に分けて投与するのがよい。また投与単
位形態中に有効成分を１〜５００ｍｇ含有せしめるのが
よい。

本発明において、錠剤、カプセル剤、経口用溶液等の経
口剤は、常法に従って製造される。例えば錠剤は、ルテ
ニウムレッドをゼラチン、澱粉、乳糖、ステアリン酸マ
グネシウム、滑石、アラビアゴム等の通常の製剤学的賦
形剤と混合し、賦形される。カプセル剤は、ルテニウム
レッドを不活性の製剤充填剤もしくは希釈剤と混合し、
硬質ゼラチンカプセル、軟質カプセル等に充填される。

また注射等の非経口剤は、常法に従って製造される。即
ち、非経口投与用薬剤は、ルテニウムレッドを滅菌した
液状担体に溶解又は懸濁して製造される。

実施例 以下に薬理試験及び製剤例を掲げて本発明をより一層明
らかにする。

薬理試験１（ホスホジェステラーゼ活性）日高等の方法
［Ｈｉｄａｋａ、Ｈ，ａｎｄ　Ａｓａｎｏ、Ｔ、、Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　、　２５］、　７５０８−７
５１６　（１９７６）コに従い、環状ヌクレオチドホス
ホジェステラーゼ活性を測定した。緩衝液（トリス−塩
酸５０ｍＭ５ｐＨ８，０゜ＭｇＣＡ’２５ｍＭ、牛血清
アルブミン５０μｇ及びＥＧＴＡｌｍＭまたはＣａ　Ｃ
Ａ！２１００ｔｔＭ／カルモジュリン２００ｎｇを含む
）０．５２／、基質（［３）（、］　　ｃＡＭＰ　　０
．４μＭ又は［３１１コｃＧＭＰ　　０．４μＭ）及び
酵素希釈液の混合物中で酵素反応を、３０℃で１５分間
行なった後、５分間ボイルすることにより反応を停止さ
せた。

環状ヌクレオチドホスホジェステラーゼにより生成する
５’　　−［３Ｈ］　ＡＭＰ又は５’−［３ＨコＧＭＰ
に、ヌクレオチダーゼを作用させて［３Ｈ］アデノシン
又は［３Ｈ］グアノシンに変換させた。

生成物をカチオン交換樹脂を用いて単離し、液体シンチ
レーションカウンターでカウントした。

ｌ０５ｏ値は、酵素活性を５０％抑制するに必要な薬物
の濃度である。酵素活性は、ヌクレオチド０．４μＭを
用いて評価した。

上記結果から、ルテニウムレッドは、カルシウム依存性
環状ヌクレオチドホスホジェステラーゼに特異的に作用
すること、及びカルシウム−カルモジュリンの存在下で
カルシウム依存性環状ヌクレオチドホスホジェステラー
ゼの活性を阻害することが明らかである。

薬理試験２（血小板凝集反応阻害） 過去２週間以内にアスピリン等の投与を受けていない健
康人より、１／ＩＯＶの０．３８％クエン酸ナトリウム
を加え、採血し、直ちに混和後、７００Ｘｇ、１０分間
の遠心操作にて多血小板血漿（ＰＲＰ）を得、別のプラ
スチックチューブに移した。ＰＲＰに１／６Ｖ　　ＡＣ
Ｄ液（用時調製）を加え、１５００Ｘｇ、１０分間の遠
心を行ない、得られた血小板ペレットを一部修正された
ＨＥＰＥＳタイロード溶液（１４５ｍＭ　　ＮａＣ１，
５ｍＭ　　ＫＣＩ、０．５ｍＭ　　ＭｇＳＯ４，１ｍＭ
ＮａＨ２ＰＯ４，５ｍＭ　　グルコース、１０ｍＭ　　
ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７，４）に浮遊させた。更に１５００
Ｘｇ、５分間の遠心操作にて得られた血小板ペレットを
同様に上記一部修正されたＨＥＰＥＳタイロード溶液に
浮遊させ、洗浄血小板浮遊液として、実験に供した。

血小板凝集反応の測定は、洗浄血小板浮遊液に凝集誘導
物質を加えてかき混ぜて、凝集によって生ずる濁度の変
化を光電池で検知して経時的に自記記録した。照射され
た光の大部分は血小板で散乱されるために未凝集のＰＲ
Ｐでは光電池に入る透過光が少なく、凝集を生じて凝集
塊の間に隙間ができると透過光が増える原理に基づいて
いる。

かき混ぜるのは血小板相互を接触させるためである。

凝集針はＲ１１１：ＡＤＥＮＫＩ　４チヤンネル凝集計
を用い、２７０μｌの洗浄血小板に、食塩を溶解した各
濃度の薬物３０μｌを加え、１分間３７℃にて予備加温
した。その後、トロンビンを最終濃度０．　　ＩＵ　／
　ｘｉになるように加え、凝集反応を惹起し、吸光度の
経時的変化を記録した。

薬物の効果の判定は、対照として、その薬物の溶解して
いる溶媒を用い、トロンビンによる最大凝集を与える吸
光度を１００とし、トロンビン添加前の吸光度をＯとす
る。次いで、薬物を加え、その時のトロンビンによる最
大凝集を与える吸光度から阻害の％を測定し、５０％阻
害を与える薬物の濃度をＩＣ５０として示した。

結果を下記に示す。

薬理試験３（腸間膜動脈弛緩） 体重１．９〜２．８ｋｇのウサギを放血致死させ、素早
く上腸間膜動脈（外径２．０〜３．　　Ｏｍｍ）を摘出
した。摘出した血管から付着した他の組織を取り除き、
長軸に４５°の角度でラセン状に切開し、巾１．５〜２
．５ｍ血、長さ２０〜３０ｍｍの標本とした。ラセン状
条片標本は、３７±０．５℃に保温された内容量１０ｙ
Ｉ！タレブスーヘンセレイト（Ｋｒｅｂｓ−Ｈｅｎｓｅ
ｌｅｉｊ）液中に予め０．５〜２、Ｏｇの張力を負荷し
て懸垂した。クレブスーヘンセレイト液の組成は、Ｎａ
ＣＡ’ｌ１１．５ｍＭ、ＫＣＡ’４．９ｍＭ、ＣａＣＡ
’２２．５ｍＭ。

ＭｇＣ／２１．２ｍＭ、ＮａＨＣＯ３２５，ＯｍＭ、　
Ｋ　Ｈ２Ｐ　Ｏａ　１　、　２　ｍＭｓ　ブドウ糖１０
．０ｍＭである。クレブスーヘンセレイト液のｐＨは７
．３〜７．５である。この栄養液は、常に３７±０．５
℃に保温し、９５％酸素及び５％二酸化炭素の混合ガス
で通気した。標本の下端は固定し、上端は日本光電製の
Ｆ−Ｄ）ランスデューサーに連結し、等尺性張力変化を
記録した。それぞれのアゴニストによる収縮に対するル
テニウムレッドの弛緩反応を観察した後、ｌＸ１０’Ｍ
パパベリンを投与し、パパベリンによる最大弛緩反応を
１００％とした。ＥＤ５ｏは５０％弛緩されるルテニウ
ムレッドの濃度で表示した。

結果を下記に示す。

ＮＥ：ノルエピネフリン 製剤例１ ルテニウムレッド　　　　　　　　　　５ｍｇデンプン
　　　　　　　　　　　　　１３２■マグネシウムステ
アレート　　　　　１８■乳糖　　　　　　　　　　　
　　　　４５■計　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２００■常法により、１錠中に上記組成を含有する錠
剤を製造した。

製剤例２ ルテニウムレッド　　　　　　　　５００■ポリエチレ
ングリコール　　　　　０．３ｇ（分子量：４０００） 塩化ナトリウム　　　　　　　　　０．９ｇポリオキシ
エチレンソルビタンモ　０．４ｇノオレート メタ重亜硫酸ナトリウム　　　　　０．１ｇメチル−パ
ラベン　　　　　　　　０．１８ｇプロピル−パラベン
　　　　　　　０．０２ｇ注射用蒸留水　　　　　　　
　　　１００ｚｌ上記パラベン類、メタ重亜硫酸ナトリ
ウム及び塩化ナトリウムを攪拌しながら８０℃で上記の
蒸留水に溶解した。得られた溶液を４０℃まで冷却し、
ルテニウムレッド、ポリエチレングリコール及びポリオ
キシエチレンソルビタンモノオレートを順次溶解させ、
次のその溶液に注射用蒸留水を加えて最終の容量に調整
し、適当なフィルターペーパーを用いて滅菌濾過してＩ
　Ｉｌｌずつアンプルに分注し、注射剤を調製した。

（以　上） 代理人　弁理士　三　枝　英　二

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ルテニウムレッドを有効成分として含有するカル
   シウム依存性環状ヌクレオチドホスホジエステラーゼ阻
   害剤。