JPH0418098A - ブタのソマトトロピンの活性の増強 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、抗ｐＳＴ抗体の発生に使用することができる
、ブタのソマトトロピン（ｐＳＴ）の３ペプチドの断片
に関する。これらの抗体をｐＳＴと一緒に投与するとき
、動物の成長はｐＳＴ単独を投与するとき達成される成
長を越えて改良される。

本発明は、要約すれば、次の通りである二本発明はエピ
トープ特異的抗ｐＳＴ抗体を発生するために使用する、
ブタのソマトトロピン（ｐＳＴ）のペプチド断片に関す
る。このような抗体をｐＳＴと一緒に投与するとき、ｐ
ｓＴの成長増強活性は増強される。

成長ホルモンのｐＳＴはブタに対して自然であり、そし
て成長速度および赤身対脂肪比の増加を包含する、動物
の成熟を引き起こす。ｐＳＴの内因性量は小さく、した
がって、大規模農業における使用に対して外因性ｐＳＴ
の調製に努力が集中された。

それらの努力の１つの面は、ｐＳＴの完全なアミノ酸配
列の決定であった。ｐＳＴは、それぞれ、残基５３−１
６４および１８１−１８９を連鎖する２つのシスティン
架橋をもつ、１９１アミノ酸の一本鎖ポリペブチドであ
ることが発見された［アブデル−メグイド（Ａｂｄｅ　
ｌ−Ｍｅｇｕ　ｉｄ）、Ｓ、Ｓ、ら、ブロシーデインダ
ス・オブ・ナショナル・アカデミ−・オブ・サイエンシ
ズ（Ｐｒ。

ｃ、Ｎａｔ　１．Ａｃａｄ、Ｓｃ　ｉ、）、８４．６４
３４−６４３７　（１９７８）］。

また、これらの成長ホルモンの活性を増強することをか
んがみて、種々の種のソマトトロピンのアミノ酸配列の
小さい部分から成るペプチドの同定に、努力が向けられ
た。公開された欧州特許出願第１３７，２３４号は、ヒ
ト成長ホルモン（ｈＧ　Ｈ）のＣ末端からの７ｋｄの断
片の切断を記載している。マウスにその断片を注射し、
次いでマウスをその断片に対する抗体を発生した。これ
らの抗体をｈＧｆ（と組み合わせてマウスに投与した。

ｈＧＨ十抗体を投与されたマウスは、ｈＧＨ単独を投与
されたマウスより大きい成長を示すことが発見された。

公開された欧州特許出願第２８４，４０６号は、ｐＳＴ
のアミノ酸残基３５−５３に相当する断片の調製を記載
している。ｐＳＴ断片をブタに投与し、そして抗ｐＳＴ
抗体を発生させた。同様な実験は、ウシのソマトトロピ
ン（ｂＳＴ）の断片を使用して実施された。後者の場合
において、そのように発生した抗ｐＳＴ抗体を次いで完
全なりｓＴと一緒に投与し、そしてｂＳＴの活性を増強
することが発見された。

前述の他のものの研究は、このようなホルモンの成長促
進活性を増強する、ブタを包含する、種々の種のソマト
トロピンのある種の領域についての情報を提供したが、
これらの研究はエピトープ部位を含有することができる
ホルモンの他の可能な断片についてのデータを提供しな
かったか、あるいは抗体の成長増強作用をこのような断
片と比較する比較データは示されなかった。

したがって、本発明の目的は、温血動物に投与したとき
、ｐＳＴに対する抗体を発生する、ｐｓＴの追加の断片
を同定することである。このような断片は、ｐＳＴの次
の部分に対して相同性のアミノ酸配列を有するペプチド
を包含する：９８〜１１０．１１０−１１８および１５
５−１６３゜本発明の他の目的は、ｐｓ’ｒと比較して
このような断片により発生する抗体で温血動物を処置す
るこきによって、成長を改良することである。このよう
な抗体は、ポリクローナルまたはモノクローナルである
ことができる。

本発明のなお他の目的は、このようなｐＳＴ断片により
発生した抗体を温血動物に投与し、そしてそれらの動物
をその後ｐＳＴで処置したときの成長を測定することで
ある。このようなｐＳＴは、その成長弾機能が存在する
かぎり、自然のアミノ酸配列または修飾したアミノ酸配
列を有する。

本発明のしかも他の目的は、異なるｐＳＴ断片と一緒に
ｐＳＴを投与することから生ずる動物の成長の増強を比
較することである。本発明は、また、これらのｐＳＴ断
片の抗原的に同等のものであるアミノ酸配列、ならびに
それらからの抗体に関する。

本発明は、エピトープ特異的抗ｐＳＴ抗体の発生により
、温血動物において免疫原性応答を誘発することができ
る、ペプチド断片の形態の、ｐＳＴの抗原性エピトープ
の同定に関する。次いで、このような抗体をｐＳＴと一
緒に投与して、それらの成長の性能を増強する。あるい
は、これらの抗体は動物に投与し、次いで動物をｐＳＴ
で処置する。

本発明の３つのｐＳＴペプチドは番号により表示され、
そしてそれらのアミノ酸配列（ａ　ａ）は次の通りであ
る： ＃８　　（ａａ　　９８−１１０）：Ｔｈｒ−Ａｓｎ−
３ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　Ｉ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−
５ｅｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ。

＃９　　（ａａ　　１１０−１１８）：Ｔｙｒ−Ｇｌｕ
−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇ　ｌ　
ｕ　　Ｇ　Ｉ　ｕ　ｓ ＃ｌＩ　　　（ａａ　　１５５−１６３）：Ｌｅｕ−Ｌ
ｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｌｅ
ｕ−５ｅｒ０ これらの３つのペプチドは、ｐｓＴの対応する部分に対
して相同性であるアミノ酸配列を有する。

本発明は、また、ペプチド＃８．９および１１について
ちょうど記載したものに対して抗原的に同等であるアミ
ノ酸配列を有するペプチドに関する。それらのアミノ酸
配列がｐＳＴ配列からの小さい欠失またはｐＳＴ配列へ
の連続的置換によってのみ異なり、こうしてペプチドの
第３立体配置がｐＳＴの部分のそれらから実質的に変化
せず、そしてそれらのペプチドに対する抗体を発生させ
ることができる場合、このようなペプチドはｐｓＴの対
応する部分に対して相同性のアミノ酸配列を有するペプ
チドと抗原的に同等であるということができる。

比較の目的で、４つの他のｐＳＴペプチドは欧州特許出
願第２８４．４０６号に開示されているものに基づくア
ミノ酸配列をもって構成される：＃２　（ａａ　　３５
−５２）：ＡＩａ−Ｔｙｒ−＝１１ｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ
−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−３ｅｒ−１１ｅ−
Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ　−
Ｐｈｅ ＃３　（ａａ　　３６−４４）：Ｔｙｒ−Ｉ　ｌｅ−Ｐ
ｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｉｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−３ｅ
ｒ ＃４　（ａａ　　４６−５３）：ＧＩｎ−Ａｓｎ−Ａｌ
ａ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−ｙｓ ＃６　（ａａ　　３５−４３）：ＡＩａ−Ｔｙｒ−１１
ｅ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ これらの７つのペプチドは、この分野において知られて
いる技術により構成することができ、これらの技術は、
次のものを包含するが、これらに限定されない：化学的
合成、同相ペプチド合成装置の使用および適当な宿主中
のＤＮＡヌクレオチド配列による発現。次いで、ペプチ
ドを適当な手段、例えば、ゲル濾過クロマトグラフィー
および調製用逆相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）により精製する。ペプチドの純度はアミノ酸組成
の分析により実証される。

生体内の抗体の形成を増強するために、本発明のペプチ
ドは好ましくはペプチドの担体として働く高分子に結合
する。例えば、ペプチドはタンパク質、例えば、キーホ
ールリンベットヘモシアニン（Ｋ　Ｌ　Ｈ）に接合する
ことができる。本発明の範囲内の他の担体は、この分野
において知られているもの、例えば、ヒトおよびウシの
血清アルブミン、ミオグロビン、β−ガラクトシダーゼ
、ペニシラナーゼおよびバクテリアのトキソイドを包含
する。担体は、また、合成分子、例えば、マルチ−ポリ
ーＤＬ−アラニルーポリーＬ−リジンおよびポリーＬ−
リジンであることができる。

本発明の１つの実施態様において、これらのペプチドに
対するポリクローナル抗体を、免疫化した温血動物、例
えば、ブタまたはウサギから発生および精製することが
できる。本発明の他の実施態様において、これらのペプ
チドに対するモノクローナル抗体を普通の方法により調
製することができる。

ポリクローナル抗体は、動物を本発明のペプチドで免疫
化することによって、単独でまたは接合した形態で、発
生させる。ペプチドは普通のルートにより、例えは、皮
下注射、筋肉内注射および静脈内の流れ、ならびに経皮
的および経口的投与により投与することができる。ペプ
チド（またはそれらの接合体）をアジュバント、例えば
、７０インド完全アジユバントを含有する担体と一緒に
投与することは好ましい。ペプチドの最初の投与に引き
続いて、規則的時間間隔で同一ペプチドの１または２以
上の促進投与を行うことはとくに好ましい。

ポリクローナル抗体は、免疫化したペプチドがらの血液
試料を、ペプチドの投与から抗体が形成するために十分
な時間後、まず採取することによって回収する。血清（
抗体を含有する）を、普通の手段、例えば、遠心により
分離する。血清を、手段、例えば、急速タンパク質液体
クロマトグラフィー（ＦＰＬＣ）により、免疫グロブリ
ン（Ｉｇ）を含有する分画および免疫グロブリンを欠く
分画（非１ｇ）に分割する。Ｉｇ分画のみは、ペプチド
に対する抗体を含有する。次いで、抗体をＩｇ分画から
５ＤＳ−ＰＡＧＥにより分離する。そのように分離され
た抗体の純度は、５ＤＳ−ＰＡＧＥにより決定して９８
％より大きい。抗体の力価のレベルは、普通の手順に従
う酵素結合免疫収着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を使用して
アッセイする。

モノクローナル抗体は、マウスを３つの新規なｐＳＴペ
プチドの１つで免疫化し、マウスの胛臓を除去し、リン
パ球の懸濁液を調製し、これらのリンパ球をマウス骨髄
腫細胞に融合し、細胞を培養し、そして固相ＥＬＩＳＡ
による抗体のスクリーニングのために生き残るハイブリ
ドーマの上澄み液を集めることによって調製する。所望
の産生物を産生ずるハイブリドーマをさらにサブクロー
冬ングし、そしてマウスに注射する。次いで、腹水をマ
ウスから集め、そしてＩｇを硫酸アンモニウムの沈澱ま
たはＦＰＣＬのプロティンＡ親和カラムにより精製する
。そのように精製したＩｇの試料を、ＥＬＩＳＡを使用
して抗原に対してアッセイして形成した抗体を同定する
。

これらの抗体（ポリクローナルおよびモノクローナル）
を２つの方法で使用して、ｐＳＴの成長促進活性を増加
および増強することができる。第１、抗体をｐＳＴと一
緒に温血動物に投与する。

あるいは、動物を抗ｐＳＴ抗体の１または２以上の投与
量で処置し、引き続いてｐＳＴで処置する。

いずれの手順において、Ｊより多い抗体を使用すること
ができる。こうして、本発明は、また、抗ｐＳＴ抗体＃
８．９および１１またはそれらの同等のものの組み合わ
せの投与を包含する。

これらの抗体の生物学的活性を、下垂体切除した（ｈ　
ｙ　ｐ　ｏ　ｘ）ラットにおいて試験する。下垂体切除
したラットは、それらの下垂体の外科的除去により、成
長欠乏である。下垂体切除したラットは、成長へのソマ
トトロピンの作用を研究するための有用なモデルとして
働く　［ブレスペック（Ｇｒｅｓｂｅｃｋ）、Ｍ、Ｄ、
およびパーロウ（Ｐａｒｌｏｗ）、Ａ、Ｆ、、内分泌学
（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ）、１２０．２５ｇ２−
２５９０（１９８７）］。

これらの下垂体切除したラットを、ｐＳＴおよび本発明
のペプチドに対する抗体で処置すると、ｐＳＴの成長促
進作用が増強される。使用するｐＳＴは、自然源から分
離するか、あるいは組み換え技術、例えば、公開された
欧州特許出願第１０４．９２０号および欧州特許出願第
１１１，３８９号に記載されている技術を使用して調製
することができる。ｐＳＴそれ自体の源および分離／調
製の方法は、本発明の一部分を形成しない。抗体は、ま
た、組み換えｐＳＴと一緒に使用することができ、この
組み換えｐＳＴにおいて自然ｐｓＴのアミノ酸配列は、
ｐＳＴの成長増強機能が存在するかぎり、技術、例えば
、部位特異的突然変異を使用して修飾されている。参照
、例えば、公開された欧州特許出願第３０３，９７２号
。　　　−ｐＳＴに対する抗体の免疫反応性をブタおよ
びウサギにおいて検査する。下表２８よび３に示すよう
に、これらのペプチドにより発生したほとんどの抗体は
それらのそれぞれの抗原に対してむしろ特異的である子
とが発見される。しかしながら、ブタにおいてペプチド
＃２　（ａａ−３５−５２）および＃８　（ａａ＝９８
−１１０）に対する抗体およびウサギにおいてペプチド
＃３　（ａａ−３６−４４）は、免疫反応性の広いスペ
クトルを有するように思われる。ペプチド＃２および＃
３に関するこの作用は、ペプチド＃（ａａ−３５５２）
および＃３（ａａ＝３６　４４’）のアミノ酸配列のオ
ーバーラツプにより説明することができる。

両者種における抗ペプチド＃６　（ａａ＝３５〜４３）
抗体とペプチド＃２　（ａａ−３５−５２）の交差反応
性は、同一の可能性のためであるであろう。なぜペプチ
ド＃８　（ａａ＝９８−１１０）がブタにおいて多数の
特異性をもつ抗体誘発するが、ウサギにおいて試験した
すべてのペプチドを認識する抗体を発生することができ
ないかは、明らかではない。ペプチドにより誘発される
すべての抗体がｐＳＴを認識し、これに対して抗ｐＳＴ
抗体は、ウサギにおけるペプチド＃２を除外して、ペプ
チドと反応性でないことは注目に値する。期待するよう
に、正常の動物はｐＳＴに対する抗体およびその断片を
産生じない。

ｐＳＴで毎日処置したマウスは、成長する能力を顕著に
回復する。体発達の作用は、ｐＳＴを前述のｐＳＴに対
する抗体と一緒に投与したとき、増強される（参照、第
４図および第５図）。このような抗体はｐＳＴエピトー
プ特異的を有する。

これらの抗体はその作用を高めるばかりでなく、かつま
たｐＳＴの作用を促進する（参照、第７Ａ図、第７Ｂ図
および第７Ｃ図）。

■系列の実験（第４図および第５図に示されている）か
らの発見は、ペプチド＃２　（ａａ＝３５−５２）　、
＃８　（ａａ＝９８−１１０）　、＃９　（ａａ−１１
０１１８）および＃ｌ１（ａａ〜１５５−１６３）に対
するブタの抗体はｐＳＴの成長増強活性を実証する。し
かしながら、これらの抗体は、ｐＳＴの不存在に投与す
るとき、有効ではない。さらに、正常のブタＩ　ｇ　（
ＮＦＳ）　、抗ｐＳＴ抗体およびペプチド＃３（ａａ＝
３６　４４）、＃４　（ａａ＝４６　５３）および＃６
　（ａａ＝３５−４３）に対する抗体は統計的に有意な
作用をもたない。第６Ａ図、第６Ｂ図および第６Ｃ図が
示すように、ペプチド＃８．９および１１に対する抗体
は急速でありかつ２相の投与応答曲線を示す。

成長促進性ブタ抗体は、３５−５２．９８−１１０１１
１０−１１８および１５５−１６３のｐＳＴアミノ酸配
列配列当するものを包含する。これらの抗体の各々は、
ｐＳＴの不存在下に使用するとき、活性ではない；それ
らは活性の増強にｐＳＴを必要とする。それらの作用は
むしろ急速であり、そしてまた２相の投与量応答曲線を
示す。

ウサギの抗体は同様な方法で試験する（第９図８よび第
１０図）。１１０−．１１８（ペプチド＃９）のｐＳＴ
アミノ酸配列配列して応答する抗体のみは、ｐＳＴの作
用を有意に増強する。−緒にすると、本発明の発見は、
ある種のｐｓＴエピトープ特異性をもつ抗体がｐＳＴの
体発達性を増強することができることを示す。しかしな
がら、ウサギからの抗ペプチド＃２　（ａａ＝３５−５
２）、＃８　（ａａ＝９８　１１０）および＃１１（ａ
ａ−１５５−１６３）の抗体は、ブタの抗体を使用して
みられた作用を複製することができない。

これらの抗体の機構は明瞭ではないが、出願人はいくつ
かの可能な機構を示唆する。理論により拘束されないが
、機構は次の通りであることができる：ｌ）循環におけ
るソマトトロピンの半減期の延長、２）肝臓細胞へのソ
マトトロピンの供給の改良、３）標的細胞の表面への重
合によるソマトトロピンの吸収の増加、４）内在化プロ
セスの遅延によるレセプターとのソマトトロピンの相互
作用（エンドサイト−シス）、５）体発達に向かうソマ
トトロピンの作用の制限、および６）成長に関係するレ
セプターとの相互作用によりよく適するソマトトロピン
の立体配置の変更。

本発明の結果が示唆するように、可能性１〜４はそうで
あり得ることが少ない。なぜなら、すべての試験した抗
体がｐＳＴと免疫学的に反応するという事実にかかわら
ず、はんのわずかのものがｐＳＴの成長促進作用を増強
するからである。前述のためのそれ以上の支持は、完全
なｐＳＴ分子に対してレイズ（ｒａｉｓｅ）された抗体
はｐｓＴと高度に反応性であり、しかも成長増強作用を
示さないという事実により提供される。他方において、
ｐＳＴ分子のある種の領域に対する抗体の取り付けはコ
ンフォメーションを変更することができ、そしてこのよ
うな再編成は適当なレセプターへの提示をよりよくする
ことができる。

本発明は動物の生産産業における成長の性能を改良する
アプローチを提供する。抗原性エビトープを含有するあ
る種のｐＳＴペプチド、例えは、ａａ＝９８−１１０、
ａａ＝ｌＩＯ−１１８およびａａ＝１５５−１６３を使
用する家畜の活性な免疫化は、宿主の動物において抗体
の発生に導（。

これらの抗体は、内因性または外因性のソマトトロピン
の体発達活性を増幅する。あるいは、これらの新規なペ
プチドおよび抗体を、また、使用して、普通の技術によ
り抗イデイオタイプの抗体を誘発することができる。こ
のような抗イデイオタイプの抗体は、効力のあるワクチ
ンとして有用であることを証明することができる。

本発明をよりよく理解できるようにするために、次の実
施例を記載する。実施例は例示のみを目的とし、そして
本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。

実施例１ １、ｐｓ’ｒペプチドの調製 ペプチドは手動的に合成するか、あるいはバイオサーチ
（Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ）９６００　（Ｍｉｌｉｇｅｎ　
　Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、マサチュセッツ州バーリントン
）固相ペプチド合成装置により合成する。アミノ酸はＮ
−ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）保護基、すな
わち、Ｂｏｃ−Ａｌａ、Ｂｏｃ−ｃｌｙ％　Ｂｏｃ−Ｖ
ａ　１％　Ｂｏｃ−ＬｅｕＳＢｏｃ−Ｐｒｏ、Ｂｏｃ−
５ｅｒ（ＯＢｚ　Ｉ）　、Ｂｏｃ−Ｔｈ　ｒ　（ＯＢｚ
　Ｉ）　、Ｂｏｃ−Ａｓｐ　（ＯＢｚ　Ｉ）に結合する
。Ｂ　ｏ　ｃ　−Ｔ　ｙｒ　（２−ＢｒＺ）、Ｂｏｃ−
Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（２−Ｃ１ｚ）
、Ｂｏｃ−Ａｓｎ（Ｘａｎ）、Ｂｏｃ−Ｇｉｎ　（Ｘａ
ｎ）、およびＢｏｃ−Ｃｙｓ　（４−ＭｅＢｚｌ）は、
アドバンスト・ケムテク（Ａｄｖａｎｃｅｄ　　Ｃｈｅ
ｍｔｅｃｈ、ケンタラキー州ルイスビレ）から購入し、
そして合成に使用した。メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆ
ｉｌｄ）樹脂（１％の架橋したジビニルベンゼン−スチ
レン、Ｂｉｏｃｈｅｍ　　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　　Ｉ
ｎｃ、、ペンシルベニア州フィラデルフィア）を固体の
支持体として使用する。アセンブリングしたペプチドを
、樹脂から、９５％の塩酸および５％のアニソールを０
℃において１時間使用して切断する。すべてのペプチド
をＧ−２５ゲルの濾過カラム（Ｐｈａ　ｒｍａｃ　ｉ　
ａ、　ニュージャーシイ州ピンツバーグ）および調製用
逆相ＨＰＬＣ（Ｃ，ａカラム、アセトニトリル１０．１
％のＴＦＡを含有する水、４５時間にわたって０％〜９
０％のアセトニトリルの勾配を使用する）により精製す
る。

これらのペプチドの純度は、分析用ＨＰＬＣおよびアミ
ノ酸分析装置により決定する。ＨＰＬＣノ分析の例はペ
プチド＃８　（ａａ＝９８−１１０）について第２図に
表されている。第２図において主要なピークが明瞭に示
唆するように、ペプチド＃８の純度は９５％より大きい
。本発明のペプチドの品質は、表１に示すようにアミノ
酸組成の分析により支持される： 表１ ｐＳＴペプチドのアミノ酸分析 Ａｒｇ　　　　　ｌ’　　　　１．００　　　ＮＡ’　
　　　　　　　　ＮＡＡｓｐ　　　　　２°　　　１．
８６’　　　１　　　　１．００　　１　　　　１．０
１Ｇｌｕ　　　　　ＮＡ　　　　　　　　３　　　　３
．１０　　　ＮＡＧｌｙ　　　　　ｌ　　　　１．０８
　　　ＮＡ　　　　　　　　　ｌ　　　　　１．０４Ｌ
ｅｕ　　　　　ｌ　　　　１．０３　　２　　　　１．
９２　　４　　　　３．８６Ｌｙｓ　　　　　ＮＡ　　
　　　　　　２　　　　２．００　　１　　　　１．０
０Ｐｈｅ　　　　　ｌ　　　　Ｏ，８８ＮＡ　　　　　
　　　　ＮＡＳｅｒ　　　　　２　　　２．００　　　
ＮＡ　　　　　　　　　Ｉ　　　　　０．９２Ｔｈｒ　
　　　　２　　　１．９９　　　ＮＡ　　　　　　　　
　ＮＡＴｙｒ　　　　　１　　　０．８５　　１　　　
　０．９２　　１　　　　０．９８Ｖａｌ　　　　　２
　　　１．７３　　　ＮＡ　　　　　　　　　ＮＡａ　
理論値 ｂ　実験値 Ｃモル１モルのペプチド ｄ　適用できず ｅ　アスパラギン酸についての値は、ペプチド中に存在
するアスパラギン酸、ならびにアミノ酸分析の過程にお
いてアミノ酸に加水分解するアスパラギンを包含する。

次いで、ペプチドを凍結乾燥し、そして使用するまでデ
シケータ−内に一２０℃において貯蔵する。

ペプチドをリン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）（ＧＩＢＣＯ１ニ
ューヨーク州グランドアイランド）中に溶解し、そして
ＫＬＨ（Ｓｉｇｍａ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　Ｃｏ、　
ミゾリー州セントルイス）とほぼ２５対１のモル比で混
合する。グルタルアルデヒド（０，５％）をカップリン
グ剤として使用し、そしてこの混合物を室温において１
５〜６０分間インキュベーションする。Ｎ　ａ　Ｂ　Ｈ
４を引き続いて添加し、そして接合混合物をＰＢＳに対
して広範に透析する。凝集物を高速遠心（１０，０００
ｇ）により除去し、そして濃度をＵＶ分光光度計により
２８０ｎｍの波長で決定する。

３、ｐＳＴペプチドによる動物の免疫化ｐｓ’ｒペプチ
ド−ＫＬＨの接合体（１ｍｇ）を等しい体重のフロイン
ド完全アジュバント（ＣＦＡ％ＧｒＢＣ○）で乳化した
後、ブタおよびウサギに投与する。雌の交配種のブタ（
デユーロック−ヨークシャイヤー−ハンプシャイヤー）
、３〜５月齢、体重３０〜５０　ｋ　ｇ、を、アメリカ
ン・サイアナミド舎カンパニー（ＡｍｅｒｉｃａｎＣｙ
ａｎａｍｉｄ　　Ｃｏｍｐａｎｙ）（＝ニージャーシイ
州プリン七トン）の飼育場から入手した。

０．５ｍｇのペプチド−ＫＬＨ接合体を、ブタの耳の後
ろの首の区域の２つの異なる部位に皮下注射する。雌お
よび雄のヌージイランド白ウサギ、退動ｌＯ〜１５、体
重２〜３ｋｇ、を、スキパック・ファーム（Ｓｋｉｐｐ
ａｃｋ　　Ｆａｒｍ、ペンシルベニア州スキバック）か
ら入手した。ウサギの両方の後ろ足に接合体を注射する
ことによって、ウサギを免疫化する。すべての動物に、
同一抗原を含有する促進注射を４週毎に反復して与える
。　′ ４、ボリクａ−ナル抗体の調製 各抗原促進剤の注射後７〜１４日に動物から血を取る。

血液をブタの頚部の静脈からおよびウサギの耳の静脈か
ら集める。凝血後、血清を遠心により分離する。血清の
試料を結合緩衝液（３モルのＮａＣｌ、１．５モルのグ
リシン、ｐＨ８，９）で５０％に希釈し、そしてＦＰＬ
Ｃ系の調製用プロティンＡスペロース（Ｓｕｐｅｒｏｓ
ｅ）ＨＲ１６１５カラム（Ｐｈ　ａ　ｒｍａ　ｃ　ｉ　
ａ、　＝ニージャーシイ州ビッカタウエイ）上に適用し
て、血清からのＩｇを精製する。カラムを結合緩衝液で
洗浄することによって、非１ｇの分画を溶離する（第３
図）。引き続いて、カラムをＯ，１モルのクエン酸、ｐ
Ｈ３ですすぐことによって、結合したＩｇ分画を集める
。それを直ちに２モルのトリス緩衝液、ｐＨ８，２で中
和し、そして限外旙過（Ａｍｉｃｏｎ、マサチュセッツ
州デンバー）により濃縮する。Ｉｇの分画は一般に合計
の血清タンパク質のほぼ３０％を構成する。Ｉｇの分画
の純度は、次のようにして５ＤＳ−ＰＡＧＥ　（第３図
）により決定して９８％より大きい。

１ｇの試料を１０％の５ＤＳ−ＰＡＧＥスラブゲル上に
適用し、そして電気泳動を８ｍＡで一夜実施する。ゲル
をクーマツ７−ブルーで染色し、そしてタンパク質のバ
ンドをゲルスキャナーにより分析して脱色を追跡する。

分子量のマーカーは、ホスホリラーゼＢ　（９７，４ｋ
ｄ）　、ウシ血清アルブミン（６８ｋｄ）、オバルブミ
ン（４３ｋｄ）およびａ−キモトリプシノゲン（２５，
７ｋｄ）を包含する。ＰＢＳに対する広範な透析後、抗
体のアリコートを取り、そして使用するまで一２０°Ｃ
で貯蔵する。

５、固相酵素結合免疫収着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）抗原
をＰＢＳ中で調製し、そして１００μα中のｌｐｇを９
６ウエル（ｗｅｌｌ）の平底のポリスチレンの平板の各
ウェルに添加する。１時間インキュベーション後、平板
を０．０５％のツイーン２０を含有するＰＢＳで自動化
平板洗浄装置（Ｄｙｎａｔｅｃｈ　　Ｗａｓｈ　　１１
％１％パージニアャンチリイ）により３回洗浄し、そし
て各ウェルを２００　ｐＱの２％のＢＳＡ　（Ｓ　ｉ　
ｇｍａ）で分散する。平板を再びさらに１時間インキュ
ベーションする。血清の試料を添加し、そしてウェル中
で５％の最終濃度で試験する。平板を３０分間インキュ
ベーションし、ＰＢＳで６回洗浄し、そして１００μａ
のアルカリ性ホスファターゼ接合つサギ抗ブタＩｇＧま
たはヤギ抗ウサギＩｇＧＦ（ａｂ’）ｚ（Ｚｙｍｅｄ　
　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、カリフォルニア州すウス
サンフランシスコ）とともに１／１０００の希釈で添加
する。

平板を３０分間のインキュベーション後再び洗浄し、そ
して１００ｍＱのＯ，１モルのジェタノールアミン中の
ｐ−ニトロフェニルホスフェート（１ｍｇ／ｍＱ　、Ｓ
　ｉ　ｇｍａ）％　　ｐＨ１０，３、を発色のための基
質として添加する。最後に、比色の応答を４０５ｎｍの
波長においてＥＬＩＳＡ平板のリーダーにより光学密度
（ＯＤ）として記録する。インキュベーション手順は、
常に３７℃において実施する。

６、ｐＳＴに対する抗体およびそのペプチドの免疫反応
性 ｐＳＴペプチドに対する抗体をブタおよびウサギ中で発
生させ、そしてこれらの抗体の免疫反応性をｐＳＴおよ
びすべての７つのペプチドを標的抗体として使用して検
査する。免疫反応性についてのバイオアッセイを下垂体
切除したラット（雌のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラ
ット、２１の日齢、体重釜々５０−６４　ｇ　％　Ｔ　
ａ　ｃ　ｏ　ｎ　ｉ　ｃＦ２１ｒｍ、ニューヨーク州ジ
ャーマンタウンから入手した）を使用して実施する。供
給後、これらのラットを７〜１０日間観察のために飼育
して、完全な下垂体切除を確実にする。コンピューター
のプログラムを使用して、動物を８匹のラット／群に不
規則に割り当てる。２つの群の対照を常にすべての実験
に含める。、第１群は陰性の対照として働く未処置の下
垂体切除したラットから成る。

他の対照群は、毎日の注射により最小有効投与量のｐＳ
Ｔ（５μｇ）を与え、こうして陽性の対照として働く下
垂体切除したラットから成る。室温において１時間５μ
ｇのｐＳＴと混合した抗体（０，５〜１ｍｇ）を、各実
験ラットに投与する。

すべてのラットの首の領域に０．２ｍＱの試験物質を皮
下注射する。これらの動物の成長を監視し、そして実験
過程の間の重量増加として記録する。

統計学的評価を、統計分析システムのゼネラル・リニア
ー・モデルス（Ｇｅｎｅｒａｌ　　Ｌｉｎｅａｒ　　Ｍ
ｏｄｅｌｓ）を使用するランダム化デザ□　インについ
ての変動の最小２乗方法により実施する。ブタ中で発生
した抗体を使用する免疫反応性の試験の結果を、表２に
示す。

表２ ブタの抗体の免疫反応性 （抗原）′ ｐＳ７　　　　　　　　＋＋＋’　　＋　　＋　　＋　
　＋＋　　＋　　４４　　＋　　　−１２（ａａ３５−
５２）：　　−＋　　−−＋　　＋　　−−−＃３（ａ
ａ３６−４４）：　　　　−＋　　　　＋　　　　−−
＋　　　　−−−＃４（ａａ４６−５３）　　　−−−
−−十　〜　−−＃６（ａａ３５−４３）：　　−＋　
　−−＋　　＋　　−−−＃８（ａａ９ｇ−１１０）：
　　−−−−−＋　　−−−＃９（ａａｌｌＯ−１１８
）ニー　　　　　　＋　　　　−−−＋　　　　＋　　
　　−−ａ　５μｇのＩｇの投与量で試験する ｂ　未処置正常ブタから ｃ　　ｌ＋ｕｇ／ウェル ｄ　光学密度の読み、”＋＋＋″＞１．（１；″十÷”
＞０．５；＋″＞０．２；“−”＜０．２ 表２の結果が示すように、種々のペプチドに対してレイ
ズしたブタの抗体は、抗ペプチド＃４（ａａ−４６５３
）抗体を除外して、それらのそれぞれの抗原と反応する
。ペプチド＃２３（ａａ＝３５−５２）および＃８（ａ
ａ＝９８−１１０）に対する抗体は検査するほとんどす
べての抗原と交差反応するが、残りの抗体は特異的であ
る。ペプチドに対してレイズしたすべての抗体は完全な
ｐＳＴを認識するが、ｐＳＴに対する抗体はそのペプチ
ドのいずれとも反応しない。正常のブタのｒｇはまった
く反応性ではない。

ウサギからの抗体をそれらの免疫反応性について同様に
試験し、そして結果を表３に示す。

表３ ウサギの抗体の免疫反応性 （抗原）。

ｐＳＴ　　　　　　　　　　　　　　　ｕ＋’　　　＋
＋　　子　　　＋＋　　＋＋＋＋＋＋＋−＃２（ａａ３
５−５２）：　　　　＋　　　　　　＋＋　　　＋＋　
　　−＋　　　　−−−−＃３（ａａ３（３−４４）：
　　−−＋＋　　−−−−−−＃４（ａａ４６−５３）
　　　−−−−−−−−−＃６　　（ａａ　　３５−４
３）：　　　　−−÷十　　−十＋＋−−−−＃８（ａ
ａ９８−１１０）：　　−−＋＋　−−−−−−＃９（
ａａｌｌＯ（１８）ニー　　　−−−−−＋＋＋−−ａ
　００５％の最終濃度において試験したｂ　未処置正常
ウサギから ｃｌμｇ／ウェル ｄ　光学密度の読み：”＋＋＋”＞３．Ｑ；”＋＋”＞
１．０；“＋”＞０．５；“−”＜０．５ ペプチド＃２　（ａａ−３５５２）、＃６　（ａａ＝３
５−４３）、＃９（ａａ＝１１０　　１１８）および＃
ｌ　１　（ａａ−５−１６３）はそれらのそれぞれの抗
原を認識する抗体を誘発する。ペプチド＃６で免疫化し
たウサギからの抗体は、毎週ペプチド＃２と交差反応す
る。ペプチド＃３（ａａ＝３６−４４）により発生した
抗体は、ペプチド＃３、＃６および＃８との交差反応性
の広いスペクトルを表す。ペプチド＃　（ａａ＝４６−
５３）および＃８　（ａａ＝９８−１１０）は、それら
自体に対する検出可能な抗体の力価を誘発することがで
きない。すべての抗体は完全な９８１分子を認識するが
、ｐＳＴ誘発した抗体はｐＳＴと、毎週ペプチド＃２と
のみ反応するが、他のペプチドと反応しない。

７、ブタの抗体Ｉこよる成長の性能の増強ｐＳＴと関連
して抗体の成長促進作用は、下垂体切除したラットにお
いて評価する。すべての動物は、５μｇのｐＳＴまたは
５μｇのｐＳＴと１ｍｇのブタの抗体との組み合わせで
連続的に１０日間で処置する。体重を測定し、そしてｐ
ｓＴの活性への抗体の作用をｐＳＴ単独を与えた対照を
越える重量増加％として計算する。第４図における結果
が実証するように、ペプチド＃２（ａａ＝３５−５２）
、＃８　（ａａ＝９８−１１０）、＃９　（ａａ−１１
Ｏ−１１８）および＃１１（ａａ−５−１６３）に対す
る抗体はｐＳＴの作用を有意に増強する。正常のブタの
Ｉｇ、抗ｐＳＴ抗体および他のペプチドに対する抗体を
包含する、残りの抗体は無意味に効果的である。

これらのペプチドのあるものに対する抗体の作用を別の
実験において再試験し、そして結果を第５図に表す。下
垂体切除したラットを、５μｇのｐｓ”ｒとペプチド＃
８　（０，５ｍｇ）　、＃９　（１ｍｇ）および＃ｌｌ
（１ｍｇ）に対する抗体との組み合わせで連続的に４日
間処置する。これらのラットの成長を測定しそして、再
び、すべての３つの抗体はｐＳＴ活性の作用を有意に増
強する。

正常のブタのＩｇは１ｍｇ／日の投与量でそれをなすこ
とができない。

投与量の応答の研究は、下垂体切除したラットを種々の
投与量の抗ペプチド＃８抗体と５μｇのｐＳＴとの組み
合わせで４日間で処置することによって実施する。第６
Ａ図におけるデータが実証するように、ｐＳＴ活性を増
強する抗ペプチド＃８抗体のピークの作用は０．２５ｍ
ｇ／Ｆ３である。

それは０．５〜２ｍｇ／日の投与量で減少するが、最大
の作用は４ｍｇ／日において再び現れる。２相の投与量
の応答曲線は、また、抗ペプチド＃９および＃ｌｌに対
する抗体を使用して観測される。

最適な投与量は抗ペプチド＃９について０．５および２
ｍｇ１日であり、そして抗ペプチド＃ｌｌについて０．
２５および１ｍｇ／日である（それぞれ、第６Ｂ図およ
び第６Ｃ図）。

ペプチドに対する抗体を使用する受動免疫化についての
経時的研究を、また、実施する。この研究において、下
垂体切除したラットは成長の正常のプロセスにおいて欠
陥を有することが示される（参照、第７Ａ図、第７Ｂ図
および第７Ｃ図−直線は「処置なし」を示す）。しかし
ながら、１０日間の５μどのｐＳＴを使用する毎日の注
射は、体重を増加するそれらの能力を顕著に回復する。

ｐ　Ｓ　Ｔと抗ペプチド＃８抗体（０，５ｍｇ／日）と
の組み合わせは、さらに成長の性能を改良する（第７Ａ
図）。抗体による有意な性能は処置後２日程度に速く検
出可能となり、急速な作用を示唆する。同様な観測は、
また、ペプチド＃９および＃ｌｌに対する抗体を使用し
て得られる（参照、それぞれ、第７Ｂ図および第７Ｃ図
）。

前述のブタの抗体のこの増強作用はｐＳＴとの組み合わ
せにおいてのみ生ずる。なぜなら、これらの抗体は、ｐ
ＳＴを使用しないでそれら自体により与えるとき、下垂
体切除したラットを成長するように刺激しないからであ
る（第８図）。予測されるように、ｐＳＴ単独は下垂体
切除したラットの成長を促進する。

８、ウサギの抗体による成長の性能の増強ｐＳＴペプチ
ドに対するウサギの抗体を同様に調製し、そして下垂体
切除したラットにおいて試験する。試験した各抗体を別
々にｐＳＴ（５μｇ）と室温において１時間混合し、そ
して連続的に４日間ラットに注射する。２つの別々の実
験からのデータを要約して第９図および第１０図に示す
。

ペプチド＃９　（ａａ＝ｌ１０　１１８）に対するウサ
ギの抗体は、成長を促進するｐＳＴの作用を有意に増強
することは明らかである。正常のウサギのＩｇ、ｐＳＴ
に対する抗体お・よび他のペプチドの配列に対する抗体
を包含する、残りのものはそれほど有効ではない。さら
に、ペプチド＃９に対する抗体は、ｐＳＴの不存在下に
投与したとき、下垂体切除したラットの成長に影響を与
えない（第１１図）。再び、ｐＳＴ単独はこれらの動物
において成長の有意な増強を刺激する。

の発生 Ｂａ１ｂ／Ｃマウス、退動６〜１０、を、チャールス・
リバー・プリディング・ラボラトリーズ（Ｃｈａｒｌｅ
ｓ　　Ｒ４ｖｅｒ　　Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ、マサチュセッツ州つィルミントン）か
ら購入する。これらのマウスは、フロイント完全アジュ
バントの存在下に、実施例Ｉの手順ｆこ従い調製した、
ペプチド＃８．９または１１の１つと接合した１００μ
ｇのＫＬＩ］で免疫化する。動物を５０μｇの同一のペ
プチドでその後３週毎に促進する。最後の促進後３Ｂに
、それらの屏風を除去し、そしてリンパ球の単細胞の懸
濁液を調製する。これらのリンパ球を、ハイポキサンチ
ンホスホリボシルトランスフェラーゼを欠き（ＨＰＲＴ
陰性）５０％のポリエチレングリコールとともにＰ　Ｓ
　２１０マウス骨髄腫細胞と融合し、２０％の胎児仔ウ
シ血清、０．１７５　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｑのアミノベト
リン、１３．６ｍｇ／ｍＱのハイポキサンチン、３−８
８ｍｇ／ｍＱのチミジンおよび５０ｍｇ／ｍｆｆのゲン
タマイシンを含有するダルベツコ最小必須培地中に懸濁
し、そして最後に９６ウエルの培養平板中に分散させる
。ｌＯ〜１４日間培養した後、リンパ球のＨＰＲＴ陽性
表現型のために生き残るハイブリドーマの上澄み液を固
相ＥＬＩＳＡにおける抗体のスクリーニングのために集
める。抗体を含有する腹水の産生のためにブリスタンで
ブライミングしたＢａ１ｂ／Ｃマウス中に、そのように
選択したクローンを腹腔内に注射する。

２、モノクローナル抗体の調製 腹水をマウスの腹腔から集めそしてＩｇを５０％の硫酸
アンモニウム沈澱技術により精製する。あるいは、試料
を結合緩衝液（３モルのＮａＣｌ、１．５モルのグリシ
ン、ｐＨ８，９）で５０％に希釈し、そしてＦＰＬＣ系
の調製用プロティンＡスペロース（Ｓｕｐｅｒｏｓｅ）
ＨＲ１６１５カラム（Ｐｈ　ａ　ｒｍａ　ｃ　ｉ　ａ、
　ニュージャーシイ州ビス力タウェイ）上に適用する。

非１ｇをカラムから結合緩衝液で溶離する。結合したＩ
ｇを引き続いてカラムをＯ，１モルのクエン酸、ｐＨ３
、ですすぐすることによって集める。結合した１ｇを２
モルのトリス緩衝液、ｐＨ８，２、でｐＨ７〜８に直ち
に中和する。両者の手順により調製された抗体をリン酸
塩緩衝液（Ｐ　Ｂ　Ｓ）に対して広範に透析し、限外濾
過（Ａｍｉｃｏｎ、マサチュセッツ州デンハー）により
濃縮し、そして最後に使用するまで一２０°Ｃにおいて
貯蔵する。

モノクローナル抗体の力価のレベルを、実施例１に記載
するＥＬ　Ｉ　ＳＡ手順によりアッセイする。

この実施例のモノクローナル抗体による免疫反応性およ
び成長の性能を、実施例１に記載する手順により決定す
る。

本発明は、要約すれば、次の通りである１１１次の配列
： （ａ）ｐＳＴ　　９８−１１０、 （ｂ）ｐＳＴ　　Ｉ　１０−１１８、 （ｃ）ｐＳＴ　　１５５−１６３、またはそれらの抗原
的に同等の配列から選択されるブタのソマトトロピン（
ｐＳＴ）の一部分に対して相同性であるアミノ酸配列を
有するペプチド。

２、前記ペプチドは、アミノ酸配列Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３
ｅｒ７Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−３ｅ
ｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｔ　−Ｔｙｒ、Ｔｙｒ−Ｇｌ
ｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ
−Ｇｌｕ、またはＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｔ
ｙｒ−Ｇｌｙ　−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒまたはそれら
の抗原的に同等の配列を有する、上記第１項記載のペプ
チド。

３、前記ペプチドは担体に結合されている、上記第１項
記載のペプチド。

４、次の配列： （ａ）ｐＳＴ　　９８　１１０、 （ｂ）ｐＳＴ　　ｌ　１０−１１８、 （ｃ）ｐＳＴ　　ｌ　５５−１６３、またはそれらの抗
原的に同等の配列から選択されるブタのソマトトロピン
（ｐＳＴ）の一部分に対して相同性であるアミノ酸配列
を有するペプチドに対する抗体。

５、前記抗体がポリクローナル抗体である、上記第４項
記載の抗体。

６、前記抗体はモノクローナル抗体である、上記第４項
記載の抗体。

７、前記ペプチドは、アミノ酸配列Ｔｈｒ−Ａｓｎ−３
ｅ　ｒ−Ｌｅｕ−Ｖａ　ｌ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−
３ｅｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｖａｌ　−Ｔｙｒｓ　　Ｔｙ
ｒ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｌｅｕ
−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ、またはＬｅｕ−Ｌｅｕ、−Ｌｙｓ−
Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ　−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−３ｅｒま
たはそれらの抗原的に同等の配列を有する、上記第６項
記載のペプチドに対する抗体。

８、温血動物に、有効量のｐＳＴおよび有効量のペプチ
ドに対するｌまたは２以上の抗体を投与することからな
り、前記ペプチドは次の配列：（ａ）ｐＳＴ　　９８−
１１Ｏ１ （ｂ）ｐＳＴ　　１ｊｏ−１１８、 （ｃ）ｐＳＴ　　１５５−１６３、またはそれらの抗原
的に同等の配列から選択されるブタのソマトトロピン（
ｐＳＴ）の一部分に対して相同性であるアミノ酸配列を
有する、ｐＳＴの活性を増強する方法。

９、（ａ）Ｉまたは２以上の抗体をｐＳＴと一緒に投与
するか、あるいは（ｂ）ｌまたは２以上の抗体をｐＳＴ
の投与の前に投与する、上記第８項記載の方法。

ＩＯ１使用するｐＳＴは自然の配列と異なるアミノ酸配
列を有する、上記第８項記載の方法。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の目的であるｐＳＴのアミノ酸配列お
よび８．９および１１と表示するペプチドを包含する、
ｐＳＴの７つのペプチド断片を描写する。 第２図は、分析用高性能液体クロマトグラフィーにより
示されるペプチド＃８の純度を描写する。 第３図は、プロティンＡ親和カラム上の血清の分画によ
る、血清からの免疫グロブリンの分画の精製を描写する
。 第３Ａ図は、ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルア
ミドゲルの電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）により示す免
疫グロブリンの分画の精製を描写する。 第４図は、ｐｓＴ単独またはｐＳＴとｐｓＴに対するブ
タの抗体との組み合わせで処置した、下垂体切除したラ
ットの成長への作用を描写する。 少量の内因性ｐＳＴを含有する、正常のブタの血ｔ＊（
ＮＦＳ）を、陰性の対照として使用する。 第５図は、第４図に描写する実験の別の実験において、
ｐＳＴとｐＳＴに対するブタの抗体と組み合わせで処置
した、下垂体切除したラットの成長への作用を描写する
。第４図と同一の陰性の対照を使用する。 第６Ａ図は、下垂体切除したラットの成長へのｐｓＴペ
プチド＃８　（９ｇ−＋　１０）に対するブタの抗体＋
ｐｓＴの投与の投与量の応答を描写する。 第６Ｂ図は、下垂体切除したラットの成長へのｐｓ”ｒ
ペプチド断片　（１１０−１１８）に対するブタの抗体
子ｐＳＴの投与の投与量の応答を描写する。 第６Ｃ図は、下垂体切除したラットの成長へのｐＳＴペ
プチド＃１１　（１５５−１６３）に対するブタの抗体
＋ｐＳＴの投与の投与量の応答を描写する。 第７Ａ図は、ｐｓＴ単独またｌ：ｔｐｓＴと＃８（９８
−１１０）に対するブタの抗体と組み合わせで処置した
か、あるいは処置しない下垂体切除したラットの成長へ
の作用を比較する、経時的研究を描写する。 第７Ｂ図は、ｐＳＴ単独またはｐＳＴと＃９（Ｊｌｏ−
１１８）に対するブタの抗体と組み合わせで処置したか
、あるいは処置しない下垂体切除したラットの成長への
作用を比較する、経時的研究を描写する。 第７Ｃ図は、ｐｓ’ｒ単独またはｐｓ’ｒと＃１１（１
５５−１６３）に対するブタの抗体と組み合わせで処置
したか、あるいは処置しない下垂体切除したラットの成
長への作用を比較する、経時的研究を描写する。 第８図は、ｐＳＴ単独またはｐＳＴペプチドに対するブ
タの抗体単独（ｐＳＴと組み合わせない）で処置した下
垂体切除したラットの成長への作用を描写する。 第９図は、ｐＳＴ単独またはｐｓ”ｒとｐｓ”ｒペプチ
ドＩこ対するウサギの抗体との組み合わせで処置した下
垂体切除したラットの成長への作用を描写する。 第１Ｏ図は、第９図に描写する実験と別の実験において
、ｐＳＴ単独またはｐＳＴとｐＳＴに対するウサギの抗
体との組み合わせで処置した、下垂体切除したラットの
成長への作用を描写する。 少量の内因性ウサギソマトトロピンを含有する、正常の
ウサギの血清（ＮＦＳ）を、陰性の対照として使用する
。 第１１図は、ｐｓＴ単独またはｐｓＴとｐｓＴに対する
ウサギの抗体と組み合わせで処置した、下垂体切除した
ラットの成長への作用を描写する。 第４図と同一の陰性の対照を使用する。 ＦＩＧ、　３ （帥″′：堵　　杆ｉ（’ｋＤ） ３　２　１　　　　ｍ、ｗ−（ｋＤ） −９７，４ 書　　　久 −４３，０ −２５，７ ＦｆＧ、３Ａ ＦＩＧ、　４ ＮＰＳ　　　　　　　８　　　　　　９　　　　　　１
１ＰＳ丁ｔＵフーテト　１ニフづ侵　ブハ７′古５イネ
ＦＩＧ、　５ ＦＩＧ、　６Ｃ ＦＩＧ、　７Ａ 装置の日数 ＦＩＧ、　８ ＦＩＧ、　９

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の配列： （ａ）ｐＳＴ９８−１１０、 （ｂ）ｐＳＴ１１０−１１８、 （ｃ）ｐＳＴ１５５−１６３、または それらの抗原的に同等の配列から選択されるブタのソマ
   トトロピン（ｐＳＴ）の一部分に対して相同性であるア
   ミノ酸配列を有するペプチド。 ２、次の配列： （ａ）ｐＳＴ９８−１１０、 （ｂ）ｐＳＴ１１０−１１８、 （ｃ）ｐＳＴ１５５−１６３、または それらの抗原的に同等の配列から選択されるブタのソマ
   トトロピン（ｐＳＴ）の一部分に対して相同性であるア
   ミノ酸配列を有するペプチドに対する抗体。 ３、温血動物に、有効量のｐＳＴおよび有効量のペプチ
   ドに対する１または２以上の抗体を投与することからな
   り、前記ペプチドは次の配列：（ａ）ｐＳＴ９８−１１
   ０、 （ｂ）ｐＳＴ１１０−１１８、 （ｃ）ｐＳＴ１５５−１６３、または それらの抗原的に同等の配列から選択されるブタのソマ
   トトロピン（ｐＳＴ）の一部分に対して相同性であるア
   ミノ酸配列を有する、ｐＳＴの活性を増強する方法。