JPH03505449A - 膜翅目昆虫毒、タンパク様あるいはポリペプチド成分、あるいはタンパク様あるいはポリペプチド成分のアナログを含む薬剤を用いた、哺乳類の感染症の処置に用いる方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 膜翅目昆虫毒、タンパク様あるいはポリペプチド成分、あるいはタンパク様ある いはポリペプチド成分のアナログを含む薬剤を用いた、曙乳類の感染症の処置に 用いる方法および組成物 相互参照 本発明は、　１９８７年９月１４田こファイルされた出願番号第０７１０９６゜ ６２８号に一部継続するものである。

序文 本発明は、細菌、ウィルスの感染およびガンに対して有用な他の一次的化学的薬 剤の活性および、特に抗生剤の活性を促進するための、天然に産する特定の二次 薬剤およびその合成アナログ（類似体）の利用に関するものである。抗菌、抗ウ ィルス、抗ガン剤および、特に抗生剤の実体、ならびにこれらの物質の活性およ び治療薬としての用法は良ぐ矧られている。これらの−次的抗感染剤の活性促進 に関する発明で用いられる二次的薬剤も、本質的にはわかってＳす、いくつかの 例では医薬として用いられているが、抗菌、抗ウィルス、抗ガン剤および、特に 抗生剤の活性促進能に関してはこれまで認識されていない。発明で用いられた二 次的薬剤のあるものは、これに制限されるわけではないが、単なる例として挙げ ると、ミツバチ、マルハナバチ、スズメバチ、大りマバチ、アカアリなどを含む 、膜翅目の昆虫の毒から主に取られている。

本発明の要約 本発明は、膜翅目昆虫毒および、それらの毒から単離された活性のあるタンパク 様あるいはポリペプチド成分および、それらのタンパク様あるいはポリペプチド 成分のアナログが、抗菌、抗ウィルス、抗ガン剤Ｓよび、特に抗生剤の活性を促 進あるいは増強するとい５発見に帰するものである。

本発明は、ペンシルバニア州立大学獣医学部大学院に提出される予定の、「抗生 物質とぐツバチ毒との相乗的活性」ｉ題したローレイン・スミス・マルフィンガ ーによる獣医学の学位論文で述べられた研究から生じへこの学位論文の全内容は 、引用文献によって開示されるものの一部をなしている。全引用文献は、マルフ ィンガーの文献目録および、本明細書の本地に示されているため、以下の他者に よる初期の研究についての引用は、ここでは省略されている。

背景とこれまでの技術 抗菌、抗ウイルス性発ガン、抗ガン物質の利用は、当業者に広く知られているが 、それは、朗々と続けられている研究の課題であり、その大部分は、新たな薬剤 の発見に加え、既知の活性をもつ薬剤の活性を促進する方法の発見に向けられて いる。

実際、ハチ毒由来のある物質については研究がなされ、ある特定の薬理学的適用 例において有用であることがわかっている。例えば、１９８４年４月２４日発布 の米国特許第４，４４４，７５３号明細書は、ハチの前嚢の内容物からの抽出物 を脱タンパクする事により得られた要素を含む組成物について記述している。こ の製品は、免疫賦活活性、抗ガン活性、抗菌物質の抗菌活性を促進する効果、お よび、抗ガン物質の抗ガン活性を促進する効果を有している。この特許において 開示される発明は、上述の組成を含む抗ガン性薬剤、免疫賦活および抗菌剤に向 けられている。この発明は、その目的において１本件の発明の目的と類似するも のであるが、ハチ抽出液が脱タンパク化による修飾を受け、その結果、抽出液が ビウレット反応およびスルフオサリサイル酸反応に陰性である点において異なっ ている。

上述の特許と同一の発明者に対し、１９８３年１月２５日に発布された米国特許 第４，３７０，３１６号明細書もまた、免疫力の減少した宿主動物を、ハチの前 嚢由来の脱タンパク化１−た有効量の抽出液の投与により処置する方法を請求の 範囲に含めている。

したがって、抗菌、抗ウィルスおよび抗ガン物質は良く知られており、またハチ 前嚢由来の脱タンパク化した抽出液が、抗菌活性、抗菌活性促進活性および免疫 賦活活性を含む、ある有用な活性を有していることも知られているが、タンパク 様の膜翅目毒、およびそのタンパク様あるいはポリペプチド性抽出液ならびにそ のようなタンパク様またはポリペプチド性得成成分の類似体が、実質的に全ての 抗菌、抗ウィルス、制ガンおよび抗ガン薬剤に対し促進効果をもつことを一以前 は知られていなかった。こうした−次的感染剤の活性促進は、単独でも効果的で あるような七うした薬剤の投与による効果を高めるのみならず、もし単独で用い られた場合効果的でない少量のそうした薬剤の投与を有効とする事が可能である 。

上述のように、本発明は、一般的に用いられる抗感染治療薬の活性を促進するた めに、膜翅目昆虫毒、すなわちそのタンパク様成分あるいはポリペプチド性成分 および、そうしたタンパク様成分あるいはポリペプチド性成分の類似体を利用す る事に関連するものである。しかし、この発明に関する説明を簡単にするために 、細菌、ウィルス感染および発ガンの制御にＨける抗酸物質の活性を促進するた めの、ミツバチ毒あるいはそのタンパク様抽出液であるメリテン（ｍａｌｉｔｔ ｉｎ）の利用に関して、以下において説明を目的として議論されるだろう。ミツ バチ毒（ＨＢＶ）は、容易に入手できることから選ばれｔうしかし、他の膜翅目 毒および、そのタンパク様成分あるいはポリペプチド性成分、ならびにその類似 体も対象の変化に応じた発明においても有効である。同様に、抗生物質以外の抗 感染薬剤も、以前にも処置を受けたことがあるが、タンパク様膜翅目昆虫薬剤と の組み合わせによってさらに効果の促進を伴う、感染に対する処置について不発 明で用いられることが可能だろう。

さらに詳しい背景として、ミツバチ毒は、多数の有用な活性をもつことが示され ている。その活性のい（つカ躯ま科学的に報告がなされているが、−万、他のも のは経験的なデータや伝承に基づくものと思われる。ミツバチ毒のｉｎ　　ｖ４ ｔｒ。

における抗菌活性については詳しい報告があるが（シュミットーランゲ、　１９ ５１；オーチルとマークワード、１９５５；フェンネルら、１９６８）、しかし 、この活性を実用化する努力はほとんどなされていない。本発明では、いくつか の経験的実験から得られたデータが、ミツバチ毒の抗菌活性が、抗生物質の共存 下では。

、ムー凸でも有意な効果をもつかも仰れないことを示した。これらの観察に基づ き、ミツバチ毒と抗生物質の相乗作用を探るために、ｉｎ　ｖｉｔｒｏのアッセ イ系を用いた研究が計画され、そのアッセイでは、宿主動物の天然の免疫応答に 起因する効果を排除して２つの化合物について評価が可能である。

この研究では、３種の異なる抗生物質に対し、それぞれの抗生物質について、ミ ツバチ毒に関する独立のチェッカーボード希釈列を用いて、３株の細菌がはじめ に試験された。３つの主要な抗生物質群の代表（ペニシリン、アミノグリコシド およびポＩＪ　ミキシン）が選択され、ミツバチ毒がこの選択された抗生物質の 抗菌効果を向上させるかについて決定するためにアッセイを行った。第４の主要 な抗生物質群は、以下に述べるように後に研究されｔムひとたびチェッカーボー ドアッセイにおいて共同効果が示されれば、単純化された方法を用いて、さらに 広範な調査が試みられ島　２枚の自動最少阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイ板は、同 時に１１種の抗生物質に対する感受性を希釈することができるが、これに、非阻 害濃度のミツバチ毒（ＨＢＶ）存在、非存在下で、細菌の培養と平行して植菌す る。８種のダラム陽性および４種のダラム陰性菌が、常にＨＢＶとの共同効果を 示す抗生物質のクラスを見つげ、また、これとは異なるグループの細菌の間でこ れらの組み合わせによる共同効果のスペクトルを決定するためにこの系を用いて 試験された。

全てのミツバチ毒の検定に卯え、毒はサイズ排除クロマトグラフィーによって分 画された。４つの画分それぞれは、特異的な構成成分が抗菌活性を担っているか 、ならびに抗菌アッセイに？いて共同的に作用することができるかについて検定 され島ミツバチ毒の抗菌要素としてすでに同定されていた（フェンネルら。

１９６８）メリチンを含む両分が、その構製された形状において活性であり、全 ミツバチ前がもつ強度に匹敵する共同効果を示すであろうことが示され亀さらに 、膜翅目昆虫毒の活性成分に対する種々の類似体の活性が調べられ、メリチ／と 比較されｔも 図面の簡単な説明 第１図は、メリチンのアミノ酸配列を図解したものである；第２図は、Ｓ、アウ レウスに対するミツバチ毒（ＨＢＶ）の抗菌活性を示した、接種後の時間に対す る光学密度のグラフである；第３図は、Ｓ、アウレウスにおいて、ア／ビシリ／ とＨＢＶに対する、接種後の時間と光学密度を示したグラフである；第４図は、 Ｓ、アウレウスにおいて、カナマイシンとＲＥＶに対する、接種後の時間と光学 密度を示したグラフである；第５図は、Ｓ、アウレウスにおいて、ポリミキシ／ ＢとＨＢＶに対する、接種後の時間と光学密度を示したグラフであろ；第６図は 、大腸菌において、アンピシリンとＨＢＶに対する、接種後の時間と光学密度を 示したグラフである； 第７図は、大腸菌において、カナマイシンとＨＢＶに対する、接種後の時間と光 学密度を示したグラフであろ： 第８図は、大腸菌において、アンピシリンとＲＥＶに対する、接種後の時間と光 学密度を示したグラフである； 第９図は、大腸菌において、ポリミキシンＢとＲＥＶに対する。接種後の時間と 光学密度を示したグラフである； 第１０図は、カナマイシン耐性のΣ工１コυ／’９１こおいて、アンピシリンと ＨＥＶに対する、接種後の時間と光学密度を示したグラフである；第１１図は、 カナマイシン耐性のＳ、アウレウスにおいて、カナマイシンとＨＥＶに対する、 接種後の時間と光学密度を示したグラフである；第１２図は、カナマイシン耐性 のＳ、アウレウスにおいて、ポリミキシンＢとＨＢＶに対する、接種後の時間と 光学密度を示したグラフである；第１３図は、１００μｇのメリチンタンパク質 を電気泳動し７た結果を示している； 第４４図は、Ｓ、アウレウスに対する、メリチン／ＨＢＶの抗菌活性を示した。

接種後の時間に対する光学密度のグラフである；第１５図は、Ｓ、アウレウスζ こおいて、メリチン／ＨＢＶおよびカナマイシンに対する、接種後の時間と光学 密度を示したグラフである；第１６図は、Ｓ、アウレウスにおいて、リファンピ シンとＨＢＶに対する、接種後の時間と光学密度を示したグラフである；第１７ 図は、Ｐｇ、　　アエルギノーザにおいて、リファンピシンとＨＢＶに対する。

接種後の時間と光学密度を示したグラフである；第４８図は、大腸菌において、 ポリミキシンＢとマルハナバチ毒に対する、接種後の時間と光学密度を示したグ ラフである；第１９図は、大腸菌において、ポリミキシンＢとスズメバチ毒に対 する、接種後の時間と光字密度を示したグラフである；第２０図は、大腸菌にお いて、ポリミキシンＢとオオクマパチ毒に対する、接種後の時間と光学密度を示 したグラフである；第２１図は、敗血症の単独処置モデルにおいて、処置と血液 １威あたりの細菌数の常用対数を示したグラフである（ポリミキシンＢとメリチ ンの相乗作用）；第２２図は、敗血症の反復処置モデルにおいて、処置と血液１ ゴあたりの細菌数の常用対数を示したグラフである（ポリミキシンＢとメリチン の相乗作用）；第２３図は、大腸菌において、メリチン／類似体およびポリミキ シンＢに対する、接種後の時間と光学密度を示したグラフである；第２４図は、 メリチンと類似体の相対活性を表す、接種後の時間と光学密度を示したグラフで ある； 第２５図は、メリチンと類似体の相対活性を表す、接種後の時間と光学密度を示 したグラ−７である； 第２６図は、メリチンと類似体の相対活性を表す、接種後の時間と光学密度を示 したグラフである。

毒の組成 毒は生化学的な化合物の不均質な混合物である。大部分の毒は９０％以上がタン パク質である。毒素と酵素とがこのタンパク質の部分を占め、直接の細胞障害の 原因となっている。ホスホリパーゼＡ２．酸性ホスファターゼおよびヒアルロニ ダーゼなどの多くの酵素が大部分の毒に共通するものであるが、毒に含まれる毒 素およびその他の生物学的に活性なペプチドは、極め１種特異的である。

毒を産生ずる昆虫は全て、膜翅目昆虫に属している。蛇毒と同様に、ホスホリパ ーゼＡ２、ヒアルロニダーゼおよび酸性ホスファターゼなどの酵素活性は全ての 昆虫毒に共通である。しかし、１１累Ｒよびペプチド成分は１種間で異なってい る（トウ、１９７７ｂ）。

イタリア・ミツバチ（アピス　メリフエラ）の毒は、最も広く研究された昆虫毒 である。ミツバチ毒の主要成分はメリチンである。このペプチドは２，８４７ド ルトンの分子量をもち、毒の乾燥重量の約５０％を占めている。２番目のペプチ ドであるアパミンは、毒の約５パーセント存在しており、他にいくつかのペプチ ドが微量存在している（ハバーマン、１９７２）。

他の膜翅目昆虫毒＆ちメリチンと似た生物学的性質をもつペプチドを含んでぃる 。それらのペプチドは、例えば、マルハナバチ−ｐ−ｘｑど≦乙ロ　　ペンシル パニカス由米のボンポリチン１”Ｖ、ジガバチ、オオクマバチおよびスズメバチ 由来のマストパランならびに、ヨーロッパオオクマバチ由来のクラボリンなどが ある。

これらのペプチドの共通した性質は、千の両親媒性である。これらのペプチドは 、配列分析がなされ、その構造もよく知られている（Ａ、アルジオラスとＪ、！ 、ピサノ、１９８５）。

ミツバチ毒の抗菌活性 ミツバチ毒の殺菌活性は、１９４１年にＷ、シュミットーランゲ（１９４１）に よってはじめて報告された。彼は、大腸菌とブドウ球菌について調べ、どちらも ミツバチ毒の抗菌活性に感受性であることを見いだした。

それから１０年もたたずに、ブランギとパーパン（１９５１）はミツバチ毒素の 抗菌活性を単離する種々の抽出法を評価してき島彼らは、その活性が毒の水抽出 物にもアセトシ抽出物にも存在することを見いだした。彼らはまた、その活性が １００℃の加熱に対し１５分間まで安定であることを示した。

１９５５年に＋２オーチルとマークワード（１９５５）が、ミツバチ毒の抗菌活 性に対し、様々な細菌の間で感受性に差異があるという研究結果を発表した。

２９６種の細菌が試験された。その結果、ミツバチ毒に対する寛容性はグラム陽 性細菌よりもダラム陰性細菌出より高（なっていることが示され總殺菌濃度の範 囲は、グラム陽性細菌に対しては１２．５μσ／ａｔから２５μｇ　／ｒｎｔで 、　グラム陰性細菌に対しては、１■／１ｎｔから１０ｍ９／ｍｅと報告された 。殺菌活性は赤血球細胞「直接溶血画分」と共に精製され九「メリチン」という 名称は、まだこの画分の活性成分に対してつけられているものではなかった。

１９６３年に、ベントンらは、ミツバチ褐のバイオアッセイについて発表してい る。毒の抗菌活性は放射状拡散アッセイ法によって定置されるが、この方法は、 細菌の増殖層上に、一連の毒希釈法によって生ずる増殖阻害領域を測定するもの である。このアッセイは、ｊ３　ｖｉｖｏで使用するためにミツパテ毒の生物学 的活性を規格化する目的で提出された。（現在、アレルギーの脱感作の与力ξ米 国食品・薬品局によって承認されたｉｎ　ｖｉｖｏにおけるミツバチ毒療法であ る。）この論文では、ミツバチ毒活性の熱感受性についても試験してＳす、これ が滅菌処理にも耐えることが明らかとなった（１２１℃で１５分間）（ベントン ら。

１９６３）。

メリチンの単離と活性 ミツバチ雪は薬理的に活性な化合物を有している。毒中に最も多（含まれる化合 物はメリチンであり、これは２，８４７ドルトンの分子量をもつポリペプチドで 、赤血球の直接的溶血素として慟（。他の活性化合物には、ホスフォリパーゼＡ ２゜ヒスタミン、ドーパミン、ノルアドレナリン、アバアミンおよびヒアルロニ ダーセカ含マれている（ハーバ−マン、１９７２）。　　　　　−メリチンの抗 菌活性 フェンネル、シップマンとコール（１９６８）は、メリチンをセファデックスＧ −５０クロマトグラフイーで精製し、メリチン画分が「強力な抗菌活性」をもつ ことを示した。彼らは、任意の３０種の細菌を試験しく数種の連鎖球菌、ブドウ 球菌および腸内細菌株を含むン、全ミツバチ毒に対して、精製したメリチンの活 性を比較しｔう彼らは、Ｓ、アウレウス株のひとつである、ペニシリン耐性株が メリチンに対して全く感受性の低下を示さないことに注目した。

メリチンはミツバチ毒の抗菌因子であることが報告されていたにもかかわらず、 ｉｎ　ｖｉｖｏにおけるその利用の報告は全（見られなかった。メリチンとレシ チンの間の相乗作用が、レシチン上のホスフォリパーゼＡ２とミツバチ毒の活性 を促進することが、モレ−ととフレイル（１９７４）によって言及された。しか し、以前は、メリチンが抗生物質の活性を促進することは認識されていなかった 。

ハーバ−マンとジエンシュ（１９６７）ｉｆ、メリチンを精製し、アミノ酸配列 を報告した。彼らは、メリチンが天然には２つの形で存在し、それらはＮ−末端 のホルミル置換においてのみ異なっていることを見いだした（第１図）。

膜翅目昆虫毒のタンパク様成分およびポリペプチド性成分の類似体以下のメリチ ン類似体が調製されている。

類似体 腐　組成物 １、　　メリチン　　　（１−２０）−＃ｆｆｚ２、　　　メリチン　　　　　 （１−２０）−０ｒｓ−Ｑｒｓ−Ｏｒｓ−Ｏｒｓ−Ｇｉｎ−Ｇｌｎ−ＮＨ。

３、　　メリチン　　　（１−２０）−Ｄ−Ｌｙａ−Ｄ−Ｌｙａ−Ｄ−Ｌｙｓ− Ｄ−Ａｒｇ−Ｄ−０１％−Ｄ−Ｇｉｎ　−ＮＨ２４、メリチｙ　　　　　（１− ２０）−Ｌｙｓ−Ａｒｇ−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−ＮＨ。

５、　　メリチン　　　（１−２０）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｉ ｎ−Ｇｌｓ−ＮＨ。

６、　　メリチン　　　（１−２０）−Ｌｙｓ−Ｌｙｊ−Ｌｙｅ−Ｇｉｎ−Ｇｉ ｎ−ＮＱ７、　　メリチン　　　（１−２０）　−Ｇ１１−Ｇｌｌ−Ｇｌｙ−Ｇ ｌ　１−０１％−ａｔ％−ＮＨ。

８、メリｆ７　　　　（１−２０）　−Ａａｐ−Ａｍｐ−Ａｓｐ−Ａａｐ−Ａｓ ｐ−Ａｓｐ−ＮＨ。

９、　　メリチン　　　（１−２０）　−Ｌｖａ−Ｌｙｅ　−Ｎ烏１０、　　　 マストポラン　（１−１４）−Ｎｆｆｔ（天然型）１１、　　−ｑｙ、トポラフ 　　（１−１４）　−０ｒｓ−Ｏｒｓ−Ｏｒ％−０ｒｎ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−ＮＨ 。

１２、　　　メリｙ−ン（ｘ−２０）−（ｃｇ、ｙｇｔ）ｔｔこの類似体は、例 えばＭ、ボダンスキー：「ペプチド合成の原理」、シュプリンガー・フエアマー ク、１９８４によって述べられている従来のペプチド合成法によって調製された 。

例えば、類似体７ｇ６４、いわゆるメリチン（１−２０）　−Ｌｙｅ−Ａｒｇ− Ｌｙｅ−Ａｒｔ−ａｔｙ−ａｔｙ−ｙＢ　　のペプチド合成をここでさらに詳細 に述べる。

ＰＪ：Ｐ：ＩＹＮ　　ＫＡという商標で市販されている。ポリジメチルアクリル アミドゲルなどの修飾した樹脂を、（Ｆｍｏｅ−ＧｌνλＯと反応させるが、こ こで、Ｆｍ◎Ｃは一時的な保護基として働（９−フルオレニルメトキシカルボニ ルを示している。

触媒として４−ジメチルアミノピリジン共存下で行われるこの反応により、エス テル化されたＦｍｏｅ　−Ｇｌｙ　−０−樹脂が形成される。

この壬ステルは、ＤＭＦ中、２０％ピペリジン存在下で脱保護され、その結果Ｈ −σ１ｙ−０−樹脂ができる。

脱保護された産物を、次に Ｆ鴨ｏｃ−Ｇｌｙ−ＯＦｆＴＩ という式をもつ活性型エステルと反応させるが、ここでＰｆｐとはペンタフルオ ロフェニルを表し、この反応の結果、 Ｆｍｏｅ　−Ｇｌｙ　−Ｇｌｙ　−０−樹脂が形成される。

残りの２４７ミノ駿は、脱保護と活性型エステルとのカップリングからなる、同 様な２０回のブイタルによってできた反応産物と結合する。

このようにして作られた産物は、ＤＭＦ中、２０％ピペリジンによって脱保護さ れ、形成されたメリチン類似体はＴＦＡ（）リフルオロ酢酸）ｉ６よび、水など の捕捉剤の存在下で樹脂から切断される。

抗生物質 抗生物質は、その抗生物質の活性部位に基づいて機能的に４つのグループに分け ることができる（フオルク、１９７８ａ）。４つのグループの標的構造は細胞壁 、細胞膜、タンパク合成装置および核酸複製装置である。共同作用アッセイが複 雑なため、前述のグループよりそれぞれ１つ、しめて４つの抗生物質が試験を行 うために選択された。選択された抗生物質は、アンピシリン、カナマイシン、ポ リミキシンＢおよびリファンピシンである。それぞれは、原核細胞に対し、異な る作用様式を有している。

アンピシリン アンピシリンは細胞壁荷造に影響を与える抗生物質のグループに属している。

これらの抗生物質は全てアンピシリン誘導体であり、それぞれは機能的ベーター ラクタム環を含んでいる。全体を通じて、ベーターラクタムグループとして矧ら れるこれらの抗生物質は、ペプチドグリカンのペンタグリシン架橋を連結するト ランスペプチド酵素を阻害することにより、細胞壁の合成を妨害するため、活発 に生育している細胞のみが、その存在によって影響を受ける。

アンピシリンは、ペニシリンの半合成誘導体である。アンピシリン合成の合成段 階テ、ペニシリンＧのアルファ炭素にアミンが付加される。こｎ（こより、（細 菌の主なペニシリン耐性因子である）ベーターラクタマーゼに対する耐性が賦与 され、その結果、アンピシリンが細菌に対してペニシリンよりも広い作用スペク トルをもつこととなる（フオルク、１９７８６）。

カナマイシン カナマイシンは、アミノグリコシドである。この抗性物質グルー７Ｍ、タンパク 合成を妨害する。このグループの抗生物質は細菌の３０ｇ　’）ボンームに結合 し、アミノアシル−ｔＲＮＡの結合を立体的に阻害するか、あるいはリポソーム の活性部位で押長しているペプチド鎖の転移を阻害する（フオルク、１９７９ｃ ）。

タンパク合成は多くの細胞機能の調節に必要とされるため、アミノグリコシドは 活発な増殖相あるいは定常期においても、細菌に対して有効である。

ポリミキシンＢ ポリミキシンＢは、環状の両親媒性ペプチドである。親水性と疎水性の両方の性 質を併せもつため、ポリミキシンＢは、その作用のために細胞の増殖を必要とし ない界面活性剤様の作用をもっている。メリチンと同様に、ポリミキシンＢは。

細胞膜と相互作用をし、細胞膜の疎水性領域に小さな親水性の孔を形成する。選 択的透過性バリアとして機能する厚いリポポリサッカライド層をもつダラム陰性 細菌でを六ボリミキン７Ｂは浸透圧勾配の破壊に効果的である。したがって、ポ リミキシンＢはダラム陰性細因に対して極めて効果的であるが、−万、グラム陽 性細菌に対してはほんのわずかな効果しかもたない（セペソク、１９７９）。メ リチンは、ポリミキシンＢと同様な孔を膜に形成ざぜろが、メリチンはグラム陽 性細菌に対してより効果的であり、そのため、メリチンの作用はポＩＪ　ミキシ ンＢの作用とは完全に類似したものではない。

リファンピシンは、核酸合成の段階で作用するグループの抗生物質であり、これ までに言及した４つの主なカテゴリーからの抗生物質の最後の例である。

共同作用に関する研究 細菌の系における抗生物質と他の化合物との共同作用に関する研究論文の総論は 、全ての研究者が同一の基本的研究法を用いていることを示している。細菌の増 殖は培養液中で、それぞれの化合物を別々に加えるか、加えない条件で、つぎに それぞれを−緒に加えて観察された。相加作用ではな（、相乗作用であることを 証明するために、それぞれの場合において、少なくとも１つの化合物は、それ単 独では最少の増殖阻害しか示さないレベルで用いられｔも　したがって、比較的 不活性な１つの化合物と用いた場合、その第１の化合物の存在下で第２の化合物 がいかなる活性の上昇を示しても、それは相乗効果によるものであろう（メレル リングら、１９７１；カリゾーサとレビンン、１９８１；シナモンとバルマー。

１９８３）。本発明の実験は、このタイプの計画に基づいて行われた。

グ・ミルズ、ペンシルヴアニア州から入手しｔムＧ１８８０Ｅは、大腸菌リファ レンス・センターの体系的なコレクションから選ばれたものである。Ｓ、アウレ ウスのカナマイシン耐性株は、以下の自然選択法によって単離しな 抗生物質は、シグマ・ケミカル・カンパニー（セントルイス、ミズーリ州）カら 購入し、活性単位はシグマ社の分析に基づいたものを用いた。

トリブチカーゼ・ソイ中ベース（ＥＥＬミクロバイオロジー−システム社、コツ キースヴイル、メリーランド州）は、液体あるいは寒天での全ての細菌の培養な 補助するために用いられ總 セファデックスＧ−５０は、ファルマシア・ファイン・ケミカルズ、ワプサラ、 スウェーデンから購入し旭 ｉ″ｉＺチ毒存在・非存在下での抗生物質の最少阻害濃度（ＭＩＣ）アッセイ＆ ま、ギブコ・ラボラトリーズ、ローレンス、マサチューセッツ州によって供給さ れている５ａｎｓｉｔｓｔデｅ　　を用い、　アレジエニー・ゼネラル・ホスピ タル、ピッツバーグ、ペンシルヴアニア州の微生物学部門において行われ７’＝ −夜、はぼ１０９コロニー形成単位７ｍｌの濃度となるまで培養した。この−夜 培養液Ｑ、　ｌ　ｍｌを３９μｇ／ｍｌのカナマイシンを含むトリブチカーゼゆ ンイ・アガー（Ｔ；Ａ）プノートにまき、３７℃で４８時間インキュベーション しへ４８時間以内に出現したコロニー（諷　３９μｙ　／　ｍのカナマイシンを 含む第２のＴＥＡプンートに移植した。

共同効果に関するチェッカーボード希釈アッセイこのアッセイのために、ＴＢＳ 中で対数増殖期にあるそれぞれの株を凍結することにより、細菌の培養を調製し 瓢この目的には、５ｍｌの一夜培養液が、５００ｍ１アーレンメイヤー・フラス コに作成した２００ｍＪのＴＢＳに接種するために用いられた。培養は、３７℃ で連続的に攪拌することにより行われ、６６０　ｓｍにおげろ光学密度（ＯＤ） を毎時間測定した。培養が対数増殖期中期に達したところで（約ｏ、５ｏｏｏＤ 単位）、５Ｎを１６Ｘ１００ｍのネジロ試験管に移した。

全ての培養を凍結し、−２０℃で保存した。大腸菌は、凍結下での生存のために 。

培地に対して終濃度２０％となるようにグリセロールを添加することが必要とさ れた。これは、凍結直前に、４ｍｌの対数増殖期の培養液に１ｍｌの滅菌したグ リセロールを混合することで可能である。

アッセイを始めるために、１本の凍結培養を室温の水をいれたビーカー中で解凍 した。この解凍した培養を、５００ｍ１のアーレンメイヤー・フラスコにいれた １７５ｍ１のＴＳＢに刃口え、攪拌し、即座ｌこＱＤｓａｏ’ｌ’測定し、これ を「時間Ｏ」ｌこおける測定値として記録した。次ｌこフラスコを常に攪拌しな がら３７℃で２時間インキュベーションし、その時点でＱ　Ｄ６．。を再び測定 し、あらかじめ上述の規定量のミツバチ毒（ＨＢＶ）と抗生物質を添加しておい た１６Ｘ１００＋ｍ＋＋のネジロ試験管にこの培養液を分注した。

ＲＥＶと抗生物質の保存溶液は、蒸留水で作成し、テ過滅菌し、チェッカーボー ド希釈系で必要とされる２倍濃度で、５ｍｌに分けて一２０℃で保存した。それ ぞれの細菌種に必要とされる凍結保存液の濃度は、第１表に示されている。それ ぞれの細菌に用いられた濃度＆六それぞれの微生物に対する、それぞれの抗生物 質の最少阻害領域を決定するために抗生物質を単独で用いた、予備的な実験に基 づいている。

それぞれのアッセイに対し、１バイアルの抗生物質と１バイアルのＨＢＶが室温 で解凍され、等量の２ＸＴＳＥで希釈され、ついで通常濃度のＴＳＢで順次２倍 に希釈されて、４種類の濃度の毒と４種類の濃度の抗生物質が得られる。７５本 のネジロ試験管に番号をつけ、第２表に示したチェッカーボードのパターンに合 わせて配タ１ルｔムＴ、；Ｅ、抗生物質およびＨＢＶを次に、第３表に示したデ ザインにしたがって分注した。００とＯと印をした試験管は、　２．５ｍｌのＴ ＳＢを含み、ＯＤ対照および無菌状態の対照として用いた試験管１−７５はそれ ぞれ５００μｌの総容量を含み、上述の２時間培養液２ゴを接種した。（註：谷 々の試験管におけるＨＢＶＭよび抗生物質の終濃度は、分注された２５０μＩｌ ζこ添加した濃度の１／１０である（第３表参照）。）それぞれの試験管を直ち に密封し、反転し？＝全ての試、読管に接種した後、３７℃の保温槽中の水平型 試験管立てｌこ置いた。おのおのの試験管の増殖は、４．６．８，１２．２４時 間後に、６６０ｎｎｔにおけるそれぞれの試験管の光学密度を測定することによ り、個々に観察された。

ＨＢＶを用いた最少阻害濃度アツセイ アレジエニー・ゼネラル・ホスピタルの微生物学研究室は、自動化ＭＩＣアッセ イを行５ことが可能で、１２種の臨床的（こ単離された細Ｍ株ｆこついて試験的 な検査を行プ契約を結んだ。自動化ＭＩＣアッセイの応用には、次の制約があっ た＝（１）それぞれのアッセイは、ｌ種類の投与量のＲＥＶについてのみ試験で きる、＜２）ＨＢＶのみの効果は１完全な阻害あるいは非阻害的としか評価でき ない。この系におげろ１１種の抗生物質とＲＥＶとの共同作用＆′ｆ−，ＲＥＶ の存在・非存在下で同時に行った２つのアッセイを比較することによって評価さ れた。各種に用いられたＨＢＶの投与量は、チェッカーボード希釈アッセイに基 づき、非阻害投与量であると算定されたものである。

液（ＢＡＡＢ）、ＰＨ４，３（グラルニツクら、１９８６）中で、室温、２４時 間膨潤させ、その後−夜５℃で平衡化した。２．５Ｘ６ＣＷＬカラムにゲルを注 入し、１、Ｑｍ／／時間の流速で平衡化した。１００ηのＨＢＶを、２０％のシ ョ糖を含む５ＭのＢＡＡＢ緩衝液に再構成した。ＨＢＶをカラムに重層し、１１ １μｔ／時間の流速で溶出し１４溶出液は、２８０５ｍの吸収でモニターした。

主ピークを含む両分を分取し、一部をローリ−・タンパク・アッセイ法（ローリ −，１９５１）によりアッセイし、残りを凍結乾燥した。

メリチ／画分の同定は、相対移動度と各面分のポリアクリルアミド・ゲル電気泳 動による分離で見られるバンドの定量に基づいて行った（ベントン、１９６５） 。

メリテンの純度についてもポリアクリルアミド・ゲル電気泳動で調べた。電気泳 動は、グラルニツクら、（１９８６）によって述べられている通りに行った。凍 結乾燥した両分は、泳動試料緩衝液で２η／ｒｎｌとなるように再懸濁し、５０ μＥの試料をゲルの試料用ワエルに注入した。

メリチンに対する全車の等画性 全ミツバチ審におけるその割合に当たるメリチン両分の１ｉＧＬ全毒とメリチン 画分の電気泳動試料中の個々のバンドの定量によって決定された。全ミツバチ毒 の２０．４０．６０．８０，１００μｇの試料が電気泳動によって分離さね、こ れをクツシー８ブリリアント・ブルー−過塩素酸染色法によって染色し、デンシ トメーターでスキャンを行つｔム試料がアプライされたときの試料中のタンパク 量に対して、全車試料のメリチンバンドのピーク領域に関連した標準曲線が作成 された。６種類の精製されたメリチン試料４０μｇが同時にアッセイされ、ミツ バチ毒におけるそれらの等価量を標準曲線から決定し周この方法は、ブルフィン ガーら（１９８６）によって詳細に記述されている。

共同効果活性についてのメリチン画分に対する試験全ミツバチ毒とメリチン画分 の抗菌活性を比較するために、初期のチェッカーボード希釈実験の結果を総括し 、ＨＢＶの投与効果が単独、または抗生物質との組み合わせで容易に見ることが できる試験系を選択した。ブドウ球菌は、前出のチェッカーボード・アッセイに おいて用いられる濃度でＨＢＶのみに対しても感受性であり、カナマイシンがＨ ＢＶとの良い共同効果を示すため、この系を全ＨＢＶとメリチンの抗菌活性を比 較するために選ばれた。この分析で用いられたそれぞれの成分の投与量は、２μ ｇ　／ｍｌ　ＨＢ　Ｖと２．５μｇ　／　ｍｌカナマイシンである。これらの投 与量は、少量の投与量変化の効果が再現性を有し、容易に測定できるような細菌 の反応性の範囲にあつｔム２．０μｃｔ／咄のＨＢＶと等価なメリチン画分の投 与量は、１．６μｇ　／ｍｌであった。等価な活性を調べるために、それぞれの 実験は平行して、カナマイシン存在拳非存在下でのメリチン画分および全ミツバ チ毒について、３連の試料を比較して行った。

統計的分析 それぞれのチェッカーボード実験は、５回反復して行われた。それぞれの細菌− 抗生物質の組み合わせに対する、５回の繰り返し行った結果の平均値について。

ウオーラーーダンカ７に一比Ｔテストを用いてそれぞれの時間における有意な相 違について試験を行ない、そして一群の１線群が共同効果を調べるために選択さ れた。ひとつの曲線群は、実験対照白線（抗生物質あるいはＲＥＶの非存圧下で の細菌の増殖）、抗生物質対照曲線（ＨＢＶ非存在、抗生物質存在下での細菌の 増殖）、毒対照曲線（抗生物質非存在、ＨＢＶ存在下での細菌の増殖）、および 相関曲線（抗生物質、ＨＢＶ共存下での増殖）から構成された。抗生物質対照曲 線と毒対照曲線が実験対照曲線に比べ、少しの平均ＯＤ減少しか示さないＳ線群 および、同時に笑験対照ヨ線に比べ相関曲線において大きな０Ｄｆ）減少を示す 曲線群について、共同効果を調べた。

化合物間の共同効果＆Ｌ相加的効果が序想されるため、化合物の相加的効果から 区別することができる。相加的効果は、２つの化合物それぞれの効果を合計する ことにより予想できるため、それ以上のどのような効果も相乗的な関係を示すこ とになる。ＨＢＶと抗生物質の相加的関係を示すＯＤの読みを予測する公式が導 き出された。上述に対する引用として、ブルフィンガーの学位論文（１９７１） 、２３−２５ページを参照のこと。

」Ｌ！ ３種のバクテリア菌株を、ミツバチ毒と（みあわせた３種の抗生物質それぞれに ついて検査したこれら、バクテリア、抗生物質、ＨＢＶの９種の組み合わせを、 各々のバクテリア−抗生物質の（みあわせにつき２５種の処理（抗生物質とＨＢ Ｖの組み合わせ）を含むチェッカーボード検定を用いて分析した。各々のチェッ カーボード実験は、各処理につき３個１組のサンプルを含み、５回（り返さな高 い方から順に並べ、クオーラー−ダ７力ン（Ｗａｌｌ−デーＤ％％＆ａ％）Ｋ− 比Ｔテストを用いた有効な差異に従（ゾループ分けした。９オ一ラーーダ７力ン 分析表から、１統計分析”の中に記述されているように、４つの曲線の集合を相 乗作用の証拠を示すため比較し島相夏作用曲線と、最低の実測白線、抗生物質コ ントロール曲線と毒コントロール曲線間で最も大きいＯＤの差を示している曲線 の集合をプロットし、各時間点で１統計分析”の節より引用した等式を用いて相 乗作用について調べた。各曲線の集合である時間点について（−Ｘ十Ａ＋Ｖ−Ａ Ｖ）の値が９５％の信頼性で０よりきわだって大きい場合（すなわち、相乗作用 が示されている場合）、相互作用曲線上でその時間点をあられしている四角に上 付き文字１Ｓ”を５って、その時間点を表示している。（第２図−１１）響を及 ぼさない最大限度のミツバチ毒の量を知ることが重要であった。この濃度は約２ μｙ／Ｒ１であった。その結果、Ｓ、ａｓｒａｓｓに対するすべての抗生物質／ ＨＢＶの組み合わせにおいて、チェッカーボード力価方式の毒の投与量は０．２ ．４％８，１６μｙ／ＩＩＩにした。（表Ａ−１からＡ−３）。第２図に抗菌化 合物としてミツバチ毒単独で用いた場合の、これらのミツバチ毒投与量による影 響な示チェッカーボード方式でのチューブ中のアンピシリンの最終濃度は、ｏ、 ｏ、ｏｓ、０．１％０．２．０．４１１ｇ／Ｉｌｌであツｔム第３図ｉｃＨＢ　 Ｖ　２１μｇ　／ｙａｌとアンピシリン０．０５μｇ／ｒｎｌ使用したアンピシ リン／ＨＢＶの組み合わせの結果を示しである。

４あるいは６時間の時点では何も相乗作用は認められないが、しかし、８及びチ ェッカーボード方式でＳ、　ａｘｒａｓａをテストするのに選んだカナマイシン の最終濃度は０．１．２５．２．５０．５．０．１０．０μｇ／ｗｒｌであった （表Ａ−２）。

第４図はコントロールと相互作用曲線間で強い対照を示している曲線の集合が描 いである。この実験では、相乗作用は６時間の点の近（で最初に実証できるよう になり、培養８時間までに明らかに認められる。１２時間で、培養菌は併用投与 の影響からのがれるようであり、相乗作用効果＆気培地中の他の（栄養）ｌ！素 により増殖が制限されるよ５になるので失われる。（この増殖制限はコントロー ル曲線により明らかに示される。）１２時間での増殖制限にもかかわらず、この 検定で６．８．１２時間でのデータの統計分析は、カナマイシンとＨＢＶの相乗 的相互作用を示唆している。

Ｓ、ａｓデｕｓｓ対ポリマイキシンＢ／ＨＢＶこれらの実験でのポリマイキシン Ｂの最終濃度は、０．３１２，６２４゜１２５０．２５００［７７ばである。（ 表Ａ−３）、相乗作用はＨＢＴ／　４μｒｔ／ＩＲｔとポリマイキシンＢ６２５ Ｕ／ｍｌのところで観察された。（第５図）。培養８及び１２時間の両点で相乗 作用が相互作用曲線ではっきり示されている。

大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ　） ハチミツ毒は相乗作用を示すのに必要な程度でも、単独では大腸菌に対して阻害 的ではなかった。（表Ａ−４からａ−６）、すなわち、大腸菌とのチェッカーボ ード検定では、毒性は、ＨＢＶの限定的な要素ではなかった。しかしながら約４ ０μｇ／νよりＨＢＶを高濃度にすると、培地成分の沈殿がおこったので、実験 条件にはそれ以上のＨＢＶ濃度には制限が設けられた。したがって、大腸菌との チェッカーボード検定に用いられたＨＢＶの最終濃度は０，５．１０．２０゜４ ０μｇ　／ｍｌであった。

０．５．１．２．４μｇ　／ｍｌであった（表Ａ−４）。相乗作用は上記の実験 のいず八で求められたどの曲線の集合よりも劇的性質が乏しがり、＝相乗作用の 証拠は４０μｇ　／　ｍｅ　　ＨＢ　Ｖ　−１μｇ／ｍｌアンピシリンのくみ合 わせ、６時間の点にのみあった。（第６図） −ｙ−ｘツカーボード検定に選ばれたカナマイシンの最終濃度は、０，５．１ｏ 。

２０．４０μｇ　／ｍｌであっ丸　（表Ａ−５）　、第７図に作用をおこせる最 小限の投与量のカナマイシンと併用したハチミツ毒の作用を示しである。この条 件では、８時間の点でのみ相乗作用が観られた。ＨＢＶ量によらず、カナマイシ ン蓋を低（したＨＢＶとの他のどの組みあわせでも相乗作用は認められながっ薗 第８図はＨＢＶと併用した大腸菌へのカナマイシンの量をより多くした投与を示 している。ここでは、相乗作用性は統計的に、２時間後以降どの点でも見いださ れ℃いる。

チェッカーボード検定でのポリマイキシンＢの最終ａ属国　。、１．５．３％６ ．１２　Ｕ　／ｍｌだった。（表Ａ−６）　ポリマイキシンＨ３Ｕ／ｍｌとＨＥ Ｖ　　５μｇ／ｍｌの組みあわせで、相乗作用性の最も劇的な実例が与えられた 。相乗作用は処理のすべての時間点でめきらかであり、実測及び計算値の間の差 異が大きい。

カナマイシン耐性　Ｓ、αＵデａｓｓ 自然突然変異体を選択し℃得られたカナマイシン耐性Ｓ、αｕＴａｕ８につぃ工 、薬剤耐性バクテリアに対するＲＥＶの影響力を決めるために試検した。カナマ イシン耐性Ｓ、αｕｒａｕ８は、望ましいものであった。なぜならこの生物では すべての抗生物質について何らかの相乗作用が認められまた、相乗作用効果はカ ナマイシンの場合に最も確かに認められたからである。耐性株のＲＥＶに対する 感受性に違いは見られなかったのでチェッカーボード恢足での毒の濃度は親株に 対するものと１司様に０．２．４．８．１６３ｇ　／ｍｌであった。（表Ａ−７ からＡ−９）このチェッカーボード検定で用いられたアンピシリ／の最終濃度は Ｓ、αｕｒｇｕｍ親株に対するものと同様で、０、ｏ、０５．０．１％０．２． ０．４　Ｊｉｇ　７ｍｌ　テあツタ。

（表Ａ−７９゜遅い増殖速度もしくは耐性要素によって、この株で観察さ式た効 果は、完全に親株に類似していな力りへ相乗作用の最もよい証拠Ｌ　８株より高 いアンピシリン濃度のときに認められた。増殖速度が遅いので、増殖周期はより 長いとみなした。第１０図にＩｆＢＶ２μσ／Ｎとアンピシリン０．４μｇ／ｍ ｌの相互作用を示す。データーの統計評価では、相乗作用は８．１２．２４時間 にみられた。カナマイシン耐性Ｓ、　　Ｑ、１１１４％８対カナマイシン／ＨＥ Ｖ　　ｓ、　　αｕｒｅ％８カナマイシン耐性株の増殖速度を減少させるのに必 要なカナマイシン投与謝工親株に必要な量の約４倍高かつ丸カナマイシン耐性Ｓ 、ａｓτ−ｔ８に対するチェッカーボード検定範囲は、カナマイシ１０．５、Ｉ 　Ｏ１２０，４０μｇ／ＭＥ　”’Ｃｈッだ。（表Ａ−８）　、またここでも、 増殖速度が低いことから増殖周期の長期化を考慮に入れることが必要であった。

ミツバチ毒８μｇ／ｍｅとカナマイシン１゜３ｇ　／　ｍｌの組み合わせを第１ １図に示しである。Ｓ、α％ｆ１Ｓ８親株に必要とする投与量の２倍量のカナマ イシンの使用しても、ハチミツ毒存在下で２倍長（効果が持続する。相乗作用は １２時間以降でのみ観察さへ　２４時間の時点でのみ意味があることが判明した 。

カナマイシン耐性Ｓ−ａｓｒｇｕｓ対ポリミキシンＢ／ＲＥＶ　　　この突然変 異体はカナマイシンに対する抵抗性が増大しているという基準で選択されたのだ が、それが親株よりボＩＪ　ミキシンＢに対して感受性が上昇した点に注目する ことは興味深かった。チェッカーボード検定に用いられたポリミキシンＢ投与量 は０％１２．５　。

２５．５０及び１００Ｕ／ｍｌであった。（表Ａ−９９一方Ｒ体の検定に使用し たポリミキシンＤの投与範囲は３１２から２５００　Ｕ／ｍｌの間であった。第 １２図にカナマイシン耐性Ｓ、αｓｒεｕ８対５０Ｕ／ｍｌポリミキシンＢ及び ４μｇ／ｍ１ＨＥを示しである。相乗作用は１２時間の点で認められｔムＨＢＶ 存在及び非存在下での抗生物質のＭＩＣ検定（最／Ｊ％阻止濃度） ８つのダラム陽性菌及び４つのダラム陰性菌に対する抗生物質のＭＩＣへのＲＥ Ｖの影響の予備調査結果を第４表及び第５表にそれぞれ示しｔムこの検定法は明 らかに不適当であるにもかかわらず、明確な傾向が調査結果に表われた。同一の ＲＥＶ投与量がある抗生物質のＭＩＣには影響を及ぼし一方他の抗生物質に対し ては及ぼさない、ことが１つのＭＩＣ検足中足中察されるよ５な場合に、相乗作 用は強（示唆された。第４表及び５表中でＨＢＶ存在下で抗生物質のＭＩＣが２ 箇所以上で２倍希釈以上低下していること′ｔ！：表示するのに（＋）ヲ用いた 。

（−）はｌ１ＢＶ存在下でＭＩＣが変化しないあるいは単にただ１つの希釈段階 での第４表はいくつかのグラム陽性生物の結果を示している。結果は、テストし た種の間に傾向が存在することを指し示している。例えば、Ｓ５α５ｒｓｔａｓ は抗生物質／ＨＢＶの組みあわぜすべてにおいて相乗作用を示しているようであ るが、Ｓ、ｍｐｉｄｅｒｒｎｉｄｉｓはセファロテン／ＨＥＶｆ）組みあわせに おいてのみ首尾一貫して相乗作用性の結果を示すが、他の抗生物質／ＨＢＶの組 み合わせに対しては偶発的結果を示した。テストしたストＬ／ブトコツカス　フ ァエヵリス（ｓｔｒｇｐｔｏ−ｅｏｃｃｗｓ　ｆａｅｃａｌｉｓ）の−株は、２ 種のスタフィロコッカス（５ｔａｐｈ、ｙｌｏ　−ｃｏｃａｘｓ）種の生物が示 すのと同様の相乗作用傾向を示していない。

第５表のデータはＭＩＣ検定法での４種の大腸法の結果を表に記入したものであ る。相乗作用の明確な傾向が、ＭＩＣ検定方式Ｉｃ含まれる各々のベーターラク タム抗生物質（アンピシリン、カルベニシリン及びピペラジリン）を用いた場合 に認められる。また、→ｊをのぞいたすべての例においてアばノ糖ゲンチミシン 及びアミカシンのＭＩＣは低下しｔムセフォキテンのＭＩＣもまたすべての大腸 菌の検定で低下しｔら セファデックスＧ−５０でメリソチンを精製したところ明確な、ベースラインか ら分離したピークが得られた。無効（容）童はｘｏｏｍｘでありメリッチン画分 は無効容量後２００から２３０ｍ１ｌの間に溶出し？Ｑ最初の１００μｇの試料 から約６５μｇが２００から２３０の画分て回収した。これらの画分を集め、ポ リアクリルアミドゲル電気泳動ｌこよって精製度をチェックした。第１３図に集 められた画分２００−２３０のタンパク實１００μσの電気泳動の結果を示し℃ いる。

このバンドの相対移動度を電気泳動で分離したＲＥＶ構成成分の相対移動度と比 較した結果、メリツチンがこの分離方法で検出可能な画分２００＝２３０の唯一 の得成成分として同定された。

メリツチンの抗菌能検査 等価な投与量のメリツチンとミツバチ毒全体を、抗生物質存在、非存在下のくみ あわせで抗菌能力を比較しｔム（表Ａ−１０）　、上記の検定に用いた程度のＨ ＢＶに、Ｓ、αｕｒ＊’ｕｇは感受性でめったので、この生物をメリツテン画分 活性をテストするのに選ばれ亀カナマイシンが画分の相乗作用活性を評価するた めに選ばれたが、それは、Ｓ、　ａｘデーｔ８対ＨＥＶと併用したこの抗生物質 での上記の検査で得た相互作用曲線がすべての時間的で相乗作用を示したからで ある。

メリツチンの抗歯能 メリツチン対ＨＢＶ全体の結果を第１４図１こ示しである。ＨＢＶ全体とメリツ チン画分の抗菌能について、有意な差は観察さｎなかつ１．：ｏ第１４図に表さ れている各々の時間点において、ＲＥＶ曲線とメリツチン曲線の吸光度は統計学 的に第１５図で同投与量のカナマイシンと組み合わせた場合の同等１ｔｉこ相当 する等価なメリツチン画分とＨＢＶ雪全体の抗Ｍ能を比較している。２曲線のど の時間点の吸光度も有意な差はない。さらに、統計評ｇｆｉヲ考慮しなければ、 メリッチン画分をあられす相互作用曲線は実際のところすべての時間点でＲＥＶ 全体をあられす相互作用白線よりわずかに低い。すなわち、両開線上の時間点を 実の平均と見なせば、メリッチン画分は実際ＨＢＶ全体より活性が高いと最終結 論しつる。

チェッカーボード検定の結果は抗生物質とミツバチ毒間の相乗作用性を明らかに 表示している。第２図では抗生物質非存在下での様々な投与量のミツバチ毒のＳ 、αｇｒａｓｓに対する作用を示した。この図中で、毒を８あるいは１６μｇ　 ／ｍｌというように大量に増殖中の培養液に加えると、実際培養液の吸光度の低 下を認めることができる。この細胞溶解の徴候は、ミツバチ毒が実際殺菌的であ る証拠である。この殺菌活性及び抗生物質との併用に見られる相乗作用へのその 寄与の機構は理解されていない。チェッカーボード力価検定で様々な結果があっ たことで、い（つかの異なる相乗作用機構がこれらの実験で機能しうる可能性が 示役される。

データ表中のいくつかの時間点で標準偏差が大きいことに対して疑問が生ずると 予想される。この変動性は適音、対数増殖期にバクテリアがある場合増殖速度が 急な勾配であることによる。対数増殖中期にとられた時間点は、もつと遅く増殖 する期間にとられた時間点に（らべ、時間による吸光度の差が非常に太き（なる であろう。したがって、サンプリング間隔の制御不可能な小さな変動が、対数的 に増殖している間の時間点の吸光度示度ではより大きな変動の原因となり５る。

培養液は対数期中に様々な処理グループに分けられるので、変動は実験間におい てはむしろさらに目を引くようになっている。この種の誤差＆−シかしながら統 計評価方法で考慮に入れられている。大きなサンプル数（１５）を用いると、時 間点の平均に対する見積もり範囲はこれらの平均間の差を統計的に評価するに十 分なほど、せばまりｔラ　メリツチンは当初１種の菌株、１種の抗生物質との（ みあわせで、ＨＢＶの相乗作用的得成成分としてしかテストされなかったが、可 能性のある機構を論じる目的で、メリツチンはテストされた各々のバクテリア− 抗生物質−ＨＥＶの組み合わせで相乗作用性ミツバチ毒構成成分でろると推足し ℃いた。

見かけ上増加する投与量 大抵の場合、ミツバチ毒は抗生物質の初期有効性を増大させるよ５だが、そのこ とは、２つの化合物を付加すると直ちに菌の増殖速度を低下させる能力が増加す ることにより示される。この種類の協同性は大腸菌対ＨＢＶ及びポリミキシンＢ で最も顕著に示されｔも（第９図）。２種の化合物を付加した後の最初の時間的 で、相乗作用性は明らかであり、それは培養液が対数期にある間持続する。これ らの結果は低い、効果のない投与量の抗生物質でもＨＢＶの付加により効果的に なりうろことを示唆している。上記に示した増大した投与効果はテストしたほと んどの実験の（みあわせにおいて認められたタイプの相乗作用である。このタイ プの作用はい（つかの異なる機構を通したメリツチンの働きによって説明可能で あり、その機構とは （１）　　抗生物質分子の溶解性を変化させる。（２）菌の膜透過性を増大さぜ る。及び（３）抗生物質分子の作用点での有効性を増大さぜるなどである。

抗生物質の変化する溶解性質 メリツチン国抗生物質の有効性を、抗生物質を菌細胞へもつと容易に輸送される ようにすることで増大させる可能性がある。抗生物質分子とのメリチンの直接の 相互作用は、分子の極性を減少させ、より疎水的にさせて、菌の膜を通過する受 動輸送を可能にしていると推測し５る。メリツチンの両親媒的性質及び塩基性に よってメリツチンはこのような機能をはだすのにあり得そうな候補にあげられ、 この機構にもっともらしさが加えられている。このタイプの機構はノ（リノマイ シンによって容易となるカリウムイオンの拡散に類似し℃いるであろう。

増大する膜透過性 バクテリアの透過障壁が減少することでもまた見かけ上の抗生物質の投与量は増 大しうるであろ５゜チャンネルを型づ（るペプチドとしてこの役割は容易に支持 されるが、抗菌相乗作用に含まれるメリチンの機能がこれしかないはずはない。

膜障壁のより小さいグラム陽性生物においてメリチンが単独でより効果的でちる ことは、膜を介した輸送が増大することでは説明不可能である。

抗生物質固有活性の増大 ３番目の協同的相互作用のためのあり得る機構では、メリツチンと抗生物質の直 接の相互作用が、抗生物質がいったんその作用部位に到達すると、抗生物質をよ り効果的にしていると提案している。より特定な例はカナマイシンとの予想され うる相互作用である。

いったんカナマイシンが３ＯＳリボノームに到達すると、メリツチンー力ナマイ シン複合体が、結合していないカナマイシンに比して作用部位により大きな親和 性な持つ（やはり、核酸と同様、メリチンは塩基性分子である）、あるいはメリ チンーカナマイシン複合体は単にその複合体の大きさによってリボソームからト ランスファー−ＲＮＡを立体的にへたてるのにより有効であると予測される。

生物質の有効性の増大を検出することが困難であった。これらのケースではメリ チンは抗生物質作用の持続の増加を引き起こしているようでありもこの作用はカ ナマイシン耐性Ｓ、　ａ％デｅ％８をカナマイシン／ＨＥＷで処理したときに認 められｔう第９図に相対的に高い投与量のＨＢＶが示されているが、その理由は より低い投与量では相乗作用は認められないからである。つまり、ＨＢＶ単独で の有効性による早い時間点での相乗作用を認めないことは第９図では困難である が、これら早い時間点で、より低い投与量のＨＢＶではカナマイシンとの相乗作 用を示さな力っだ。しかしながら協同的効果が２４時間の点で認められた。この タイプの遅延した作用に対して２つの説明が示唆されている、それは（１）　　 耐性突然変異体の排除あるいは（２抗生物質の半減期の延長である。

耐性株の選択における確率の低下 ミツバチ毒と抗生物質相方が菌が生育停止するほどの投与童画培養液中に存在す ると、耐性菌が併用処理に対して生き残るであろ５１１［率はそれが相方の処理 後存在し生き残る確率の積に等しい。これが遅延する相乗作用効果としてあられ れているようであり、なぜなら上昇したＯＤ示度の検出可能なレベルに達するま で突然変異体が複製するのに多（の世代が必要なためであろ５゜突然変異体の選 択は、処理の標準偏差船足す複数回−組のサンプル中に激しく高いＯＤ示度が偶 発的にあられれることが特色とされている。例えば、カナマイシン耐性：Ｅ、ａ ｓｒａ％ａをカナマイシン存在下でＨＢＶ処理のみの効果を評価前コントロール 曲線での１２時間の点での平均ＯＤは０．６５で標準偏差は０．５１であり（表 Ａ−８）、この時点で高い示度の変動を示した。つまり、ここで２４時間の点で 認められる相乗作用効果はＨＢＶ毒耐性突然変異体による抑制の結果である可能 性は非常にある。

抗生物質の分解からの保護を可能性のある機構からはずすことはできない。抗生 物質の効能を増加させる一般的手法呆溶液中でより安定性をある（寵酵素の攻撃 に対して抵抗性を得るように抗生物質を構造的に変化させることである。これら のタイプの修飾で抗生物質のペニシリン類の多（の誘導体を説明できる。例えば 、ペニシリンＶは立体的障害を供えるフェノキシメチル置換基をもつ、酵素の攻 撃から抗生物質のベーターラクタム環を保護している（ヴオルク（Ｖｏｊ＆）。

１９７８ｃ）。このような置換によってまた分子のこの部位はベーターラクタム 環による環化が妨げられて分子は酸加水分解に対してより抵抗性を示すよ５にな る。抗生物質は初期にはそれほど効果的ということはな（、菌培養液がそのとき に栄養源による限界ＯＤに達しない場合にかぎり抗生物質の持続期間が延長した ことが明らかであるので、このタイプの修飾はまた。菌の生育を停止する投与量 のときのみにあられれる相乗作用効果を生みだすと思われる。しかしながらもし もＨＢＶがこのような修飾をひきおこせるとすれば、複数回−組のサンプル間で より首尾一貫した結果が要求される。

笠し９区摺シｌジ【 ＨＢＶ／抗生物質相乗作用試験のために開発されたチェッカー盤力価測定アッセ イは、異なる抗生物質および異なる細菌に対するＨＢＶの効果を広範囲に調査す る場合には、時間がかかり過ぎ島しかしながら、ＨＢＶとの相乗作用に対する抗 生物質のクラスの中での傾向を位置付けるため、および、抗生物質とＨＢＶの特 異的な相乗的組み合わせに対する細菌種の中での感受性のスペクトルを決定する ために、このような調査は必要であった。自動化ＭＩＣアッセイの修飾法が、こ の型の調査を容易にするために考案された。

自動化ＭＩＣアッセイの限界により、結果の評価は幾分経験的である。ＨＥＷの みの効果は阻害的または非阻害的としか記録されなかったので、結果は相加的効 果に対して、相乗的効果であるとは証明されない。（ＨＢＶのわずかに阻害的な 量は非阻害的であると記録され、したがっていくつかのＭＩＣ減少は実際には相 加的効果の結果である可能性がある。）しかしながら、はとんどのアッセイでＧ Ｌ一部の抗生物質しかＭＩＣの減少を示さなかったので、ＨＥＷ添加量は相加的 ではないことが示唆された。したがって、チェッカー盤刀価測定システム９結果 によって支持される場合、これらのＭＩＣアッセイの使用は特異的な細菌群の最 大の可能性をもつ抗生物質／ＨＢＶの組み合わせを指摘するのに信頼性があるべ きである。この観点からＭＩＣは将来の研究に向けて使用されるであろう。

活性のあるミツバチ毒液成分の同定 これらの研究の結果はミツバチ毒液の相乗的活性が完全にメリチン両分に含まれ ろことを示唆しているが、これらの結果の注意深い解釈が行わｎるべきである。

小さなペプチドや非染色（クマシーブルー）成分が、メリチン分子とイオン力ま たは疎水結合力によってクロマトグラフィーの際にメリチンと同じ挙動を示す可 能性がある。メリチンは非変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびセファデ ックスゲルクロマトグラフィー（ハーバ−マン（Ｈａｂｅデｍαｎ）、１９７２ ）において、通常の分子量の５倍の重合体として移動する。これらの小さなミセ ルは、クロマトグラフィーｌこおいてより小さな疎水性化合物を運ぶことができ る。メリチン画分におけるこのような型の混入を検出するための分析が含まれて おり、第６章で論じられている。

上述のように、ＲＥＶがリファンピシンｌこ代表される上述の第４の抗生物質群 の活性を増強するのにも効果的であることを示すためにさらなる試験が行われた 。

データを以下の表６．７．および図１６．１７に示す。

ＨＥＶ以外の膜翅目毒液の活性も、以下の表８．９および図１８−２０に示され る様に、ブルハナバチ毒液、スズメバチ毒液、およびオオクマバチ毒液に関して 決定されｔも いくつかの上述と類似の物質に関しても、天然のメリテンに関連してその相対的 活性を決定するために試験が行われ１≧相対的活性は以下のように算出した：得 られた結果は表１０に示しｔう ＮＨ，末端が主に塩基性アミノ酸から構成されている類似物質は、主にＮＨ２宋 端が中性および／または酸性アミノ酸からなる類似物質よりも活性をもっている ことか示された。

ｉｎ　ｖｉヤＯ実験 庄 ｉｎ　ｖｉｖｏ実験は、蜜蜂毒液の主要なペプチドであるメリチン←ｎｅｌｉｔ ｔｉｎ）が、証明済の抗生物質である。ポリミキシンＢ　（ｐｏＬｙｔｎｙｚｉ ｔ％Ｂ）の有効性を高めることを実証する。細菌性敗血症という疾病モデル４′ Ｌ、マウスにおいて展開された。本実験のために、大腸菌（Ｅ、ｅｏｌｉ）敗血 症に対するポリミキシンＢとメリチンの活性が、別々に或いは組み合わされた形 で、２つの基本的なセットの実験において比較される。両実験のプロトコールに 関し℃、メリチンとポリミキシンＢの間の共同的相互作用は明らかであり、各分 散分析での処理平均値の比較ζこまり、統計学的に立証されている。このことか ら、ポリミキシンＢの有効性を高めたり、ｂ−で、優れた抗菌活性を示したりす るというメリチンの能力が明白に実証される。

より特異的に言えばメリチンの抗微生物試薬としての利用法を発表している。し かしながら、こうした参照文献は、蜜蜂毒液もしくはメリチンの組口土２での有 効性しか実証していない。

他の幾つかの系はメリチンを孤立した紐口土２系での様々な免疫反応を乱す人為 的手段として用いてき九グツドマン（Ｇｏｏｄｍαｎ）ら（１９８４）はｉｎ　 ｖｉｔｒｏにおけるメリチンによるＢ細胞の活性化を報告しｔも２つの別々の報 告は、１つはコンドウ（Ｋｏｎｄｏ）とカナイ（ＫｃＬｎａｉ）によるもの（１ ９８６）１つはコンドウによるもの（１９８６）だが、マウスとモルモットの両 方の食細胞から単離された膜の殺菌活性を刺激するとい５ｉ！Ｌｖ＜エニでのメ リチンの利用法を述べている。最後になるが、蜜蜂毒液の免疫システムへの効果 に関連した出版物（ツマ−フィールド（ＳＯ働１ｆｉｅｌｄ　）ら、１９８６） は、メリチンによる好中琢の０産生の阻害を述べている。ツマ−フィールドらは 、抗炎症動因としてのメリチンに対する役割を示唆している。この活性は、ｉ！ Ｌｖｉｖｏでの抗細菌防御を弱める可能性が多分にあるのではないだろう力）メ リチンに関し１相当量の研究があるにも拘らず、メリチンが、伝染性生物薯こ対 してｉ％ｖｉｖｏで有効であることは未だ実証されないでいる。更に重要なこと に、メリチンの抗生物質との相互作用を要求したり、それで利益を得たりするよ うな場面が、提案されないでいる。ここで報告している結果は、大腸菌による細 菌性敗血症に苦しむマウスの治療にｉｎ　ｖｉｖｏで用いられた時のメリチンと ポリメスのスイスＣＤ−１マウス（５ｗ１ｓｓ　ＣＤ−１ｍ１ｃｅ）　　（チャ ールズリバー（ＣｈａｒＬｏｇ　Ｒｉｖｅｒ　）　）が１８−２０グラムの体重 で得られた。マウスは７７±１下、３３−４５％の相対湿度で毎日１２時間の明 期な与えながら収容された。

配達されるとすぐに、各積荷のマウスは実験に用いる前に、２週間の環境順応期 間、維持しておいた。

ポリミキシンＢ（シグマ化学会社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａ ｎｙ　）　）は、粉宋の形で、７９００ユニツト／■のものが調達された。保存 溶液は０，８５％　ｗＣｌ中で０．１ｍ９／ｍｅで調製され、使用まで５ａずつ 分注して一２０℃で凍らせた蜜蜂毒液（ＨＢＶ）は、ヴエスパ有眼責任研究所（ Ｖｇｓｐａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｓ８＋Ｉｎｃ、）スプリング　ミルズ　ペン シルバニア州（Ｓｐｒｉｎｇ　Ｍ４ＬＬｓ＋ＰＡ）により供給された。ｌ１ＢＶ は、組■工二実験のために以前記述されたようにゲル濾過を用いて単離されたメ リチンのソースであった。メリチンは、ローリ−のタンパク質分析法（Ｌｏｓｏ ｒｙ　ｐｒｏ　ｔ　ｅ　４９％　α５ｓａｙ　）　（ローリ−ら、１９５１）に より定量され、それから凍結乾燥にしｔも凍結乾燥したメリチンを０．８５％１ Ｊａｃｌ中で０．１　Ｎｉ／ＨＥの濃度に再講成し、次の使用まで１．５ｍ＃ず つ分注して一２０℃で凍らせｔム 大腸菌株　＋Ｇ１１０８Ｅを、ペンシルバニア州立大学大腸菌リファレンスセン ター、ユニヴアーシテイ　パーク、ペンシルバエ１州（Ｐｇｎ＊ｓｙｌνａｎｉ ａＳｔａｔｅ　Ｕｎｉｖｓｒｓｉｔｙ　Ｅ、ｃｏｌｉ　Ｅａｆａｒａｎｃａ　Ｃ ｅｎｔｅｒ、ＵｘｉｖｇｒａｉｔｙＰａｒｋ。

ＦＡ）より得た。５ｍ７！のトリプテイカーゼ　ソイ　ブロース（ｔｒｖｐ百ｃ ａｓｅ　５ｏｙｂｒｏｔり一晩培養液を、新しいトリプテイカーゼ　ソイ　ブロ ース８００ｍ）に植え付けた。培養液は穏やかに震盪して一晩、増殖させた。滅 菌済グリセロール２００ｍ／を培養液に加え、それから、攪拌しながら５．Ｏｍ ｔずつ無菌で分注する。

この分注液を凍らして一２０℃で保存した。解凍した時、各分注液は、±３×１ ０”生菌／ｍｌであつｔムそれから接種前に、培養液を２．５％胃ムチン（シグ マ化学会社）を含んだトリプテイカーゼ　ソイ　ブロースで１：４００に希釈し た。

２．５％ムチンを含んだトリプテイカーゼ　ソイ　ブロースに懸濁した細菌の１ ：４００希釈液０．２５ｍｔ（およそ５００，０００生菌）の腹膜組織内注射に よりマウス？：感染さぜ九 注射に先立ち、ポリミキシンＢとメリチンを解凍し、濾過滅菌してから、滅菌済 ０．８５％　ＮαＣ１で溶液０．２ｍＪ中に必要投与量が含まれているように適 当に希釈し丸感染後３０分してから、この量をマウスに皮下注射で首の根本の皮 膚のひだに投与した。皮膚のひだは基本的に控えめにつまむことで装指と人差し 指の間に作られる。

血中細菌レベルは、無菌的に心臓に針を刺して得た血液サンプルから決定された 。心臓に刺した後針をヘパリン（ｈｍｐａｒｉｓ　）でコートしたシリンジから 取り除き、血液０．２Ｎを０．８５％ＮａＣ１０，２ｍｌを含むチューブに移し 、よく混ぜた。

全てのサンプルは、プレートにま（まで、氷上でとっておいた全てのサンプルの 複製スプレッドプレートを、適当な希釈でトリプテイカーゼ　ソイ寒天上で調製 し、３７℃で一晩層養した。４００未溝のコロニーを含む全てのプＶ−）を計数 し、記録しｔも 結果 第１の実験構想では、各々４匹のマウスから成る４つのランダムなグループに前 述の通りに大腸菌を接種しｆ、、３０分後、各グループの４匹のマウスをそれぞ れ、１）０．２５％ＮａＣ６のみ（「無処理Ｊ　；　−ｎｏ　　ｔｒｅａｔｍｅ ｎｔ’　）２）２．ＯＮ！ポリミキシンＥ、　　３）　　５Ｃ１ｆＬｆ？メリチ ン、４）　　２．０μ？ポリばキシンＢ＋５０ｓｐメリチンのいづれかを含む０ ．８５％ＮａＣ６溶液０．２Ｍで処理した。最初の接種後２１時間してから血液 サンプルを採取し、血液１ｍｔ中の細菌の数を、適当な希釈血液の複製プレート 計数の結果を平均することで計算した（表Ａ−１１）。この実験を３通り行ない ４匹の処理マウスの各々の血液ｌａ中の細菌の平均数を比較した（図２１）。２ つの方法による分散分析（こおける処理効果に対する。００１５といプル値（− 禄でないサンプルサイズを調整して〕は、処理手段の少な（とも１つで有意な差 を示した。ツキ−の多重平均値比較法（Ｔ％Ｌｋｔｙ’ａ　ｍｕｌｔｉｐｌｙ憔 −６％　ｃｏｍｐａｒｉｓｏ♂）により、有意な差が出た唯一の平均値が２μ？ ポリミキシンＢと５０％ｆメリチンを組み合わせて受けたグループの平均値であ ることが示された。個々に用いられたメリチンとポリミキシンＢにより供される 活性の合計を組み合わせて用いられた時の活性と比較することにより、分散分析 内での対照は、相互作用が、実際共同的であることを確かなものとした（ｐ値＝ 、０４９３）。

第２の実験構想は、反復処理の効果を試験した。再び各々４匹のマウスから成る ４つのグループに大腸菌を接種し、３０分後に同じく４つの処理剤：１）ＯＪ３ ５％ＮａＣ１のみ（［無処理Ｊ　）　；　２）　　２．０ｔｔｙポリミキシンＢ ：３）５０％ｆメリチン；４）２．０μｔポリミキシンＢ＋５０％ｆメリチン： を用０て処理しｔも最初の感染後１８時間してから、各マウスを再度、同じ大腸 菌接種に挑戦させ、３０分後同じ抗生物質／メリチン養生法で治療し旭　５時間 後（最初の感染から２３時間ン各マウスからの血液サンプルをプレートにまいて 血中の細菌数を定量し島この実験を５回くり返し、結果（表Ａ−ｒ２）を分散分 析により見積もった。こうした分析で、少なくとも１つの治療において有意な差 （ｐ値＝、０００１）が見られた。ツキ−の多重平均値比較法により、ポリミキ シンの反復処理は血液１ｍ中の細菌数を有意に減少させるということが示され九 ツキ−の比較法により、ポリミキシンＢ＋ノリチンで治療した動物の血中細菌数 が、ポリミキシンＢやメリチンのみで治療した動物の血中の数より有意に低いこ とが示されたのは更に重要である（図２２参照）。分散分析内での対照を二この ２つの化合物の共同性に対して高い信頼度を与えた（ｐ値＝０．０Ｏ０７）結論 上の実験は、抗生物質ポリミキシンＢとノリチン間の共同的相互作用を明確に実 証している。メリチンが他の医薬の治療効果をその抗微生物性質と膜透過性を高 める能力とにより、高めるということは多いにありえる。

第１のセットの実験の結果（図２１）ＬＬ　メリチンだけの効果ζこ対して統計 的有意性に欠けていたが、絶対平均値の比較により、メリチン治療だけでの、ヱ ２リチンだけの治療に対する有意な差に欠けていた。絶対治療平均値の比較によ りメリチンのみのネガティブな効果が示役された。第２セツトの実験のマウスが 、２倍のメリチンを受けていたことを考えると、このことは、メリチンの高い投 与が、抗生物質なしで用いられた時、感染過程を悪化さぜる可能性があることを 示唆している。かなり高いメリチン投与を伴っていた以前の実験法（工この仮定 を立証している。メリチンがそれだけで使用された場合、有害な活性が起きるの は十分考えられる。感染治療に対するメリチンの有効な利用法が１文献検索では 見つらかに押しとどめるので、組みあわせた治療法は重要な発展となるであろう 。

合成メリチンアナログで実証される抗生物質の共同性抗生物質とメリチンの間で 見られた共同性は、メリチンを合成ペプチドアナログで置きかえても達成させる かもしれない。この目的のため、そのようなアナログが、考案され、合成された 。天然のメリチンと並行して試験すると、同等の抗生物質高揚性が与えられた。

Ｌ 下に示すような構造をもつアナログ／１６６を、旦０匹に対するポリミキシンＢ との共同性について以前に記述 Ｈ−Ｇｌｙ−１１ａ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌａｓ−Ｌｙｅ−Ｖａｌ−Ｌａ ｗ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｌｍｓ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｌａｓ−１１１−８ｓ ｒ−Ｔｒｐ−１１ｇ−Ｌｙａ−）酸（下線部）で、アルギニンが、リジンに置き かわっているところで、メリチンとは異なる。以前記述された分析法で用いると 、天然のメリチンと同等の活性が実証され丸 腟！」２１堅 メリチンを、蜜蜂毒液全体（ヴエスパ有限責任研究所（Ｖａ　ａ　ｐａ　Ｌａｂ Ｏｒａｔａｒ＝ａｍ・１％Ｃ１））から、ゲル濾過クロマトグラフィーにより単 離し、ローリ−の夕／／ｆり質分析法で定量し、凍結乾燥して保存した。分析に あたって、凍結乾燥したメリチンを、蒸留水で０．４η／ｍｌになるよ５に再構 成し、濾過滅菌して使用まで４．０Ｍずつ分注して一２０℃で保存しも アナログ滝６はトルベン　セルマーク博士（タンパク質研究所、コペン／・−ゲ ン大学、シガーズゲード３４．ＤＫ−２２００コペンノ・−ゲン　Ｎ、チンマー ク；Ｔｈｅ　　Ｐｒｏｔｅｉｎ　　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｌＣｏｐａ＊ｈａｇｇ ｎ　　Ｕｓｔｖａｒａｉｔｙ＊Ｓ旬ｓｒｄａｇａｄａ　　３４　、ＤＫ−２２０ ０Ｃｏｐｇｓｈａｇａｓ　Ｎ、Ｄｅｎｍａｒｋ）により合成された。０．１チド リフルオロ酢酸（ｔｒｉｆｌｓｏデｏ　ａｓｔａｔｍ’）中で〇−８０％アセト ニトリル（ａｅｇｔｏｎｉｔｒｉｌｇ）勾配を用いた０１８カラムからの高圧液 体クロマトグラフィー（ｈｉｇｈ　ｐｒｅｓｓｕｒｅ　　１ｉｑｓｉｄ　ｅｈｒ ｏｔｎａｔｏｇｒａｐ五ν）の溶出プロフィールに基づいて９８％以上純清なも のと評価され九凍結乾燥の形で、ペプチドを受は取り、０．８５％ＮａＣ１中に およそ０．２　ＩＩＩＩ／Ｍｔで再構成して濾過滅菌して０．５１ずつ分注して 使用まで一２０℃で保存した。

７９００ユニツト／ｑの特異活性をもつポリミキシンＢ（シグマ化学会社）を蒸 留水で、２４０ユニツト／コに再構成し、濾過滅菌して、４．０１１ｊずつ分注 して使用まで一２０℃で保存した。

Ｅ、ｅｏｌｉ　株１６Ｇ　１１０８Ｅハ、ペンシルバニア州立大学Ｅ、ｅｏｌｉ 　　’）７７ｖンスセンタ−（１０５Ｈａｎｓｉ％ｇ　Ｂｓｉｌｄｉｎｇ、Ｕｓ ｉｙｒｍｉｔｙ　Ｐａｒｋ。

Ｐ−％％ａｙｌｖａ％ｉａ、１６８０２）から得られた。接穐原を、トリプテイ カーゼ　ソイブロースで中間対数相（ｍｉｄ−Ｌｏｇ　ｐｈａｓｅ　）になって いる培養液から調製した。

滅菌済グリセロールを最終濃度２０％となるよう加え、培養液を５．０ＩＩＬｔ ずつ分注して使用まで一２０℃で保存した。

チェッカー版力価測定共同性分析法を行なって、大腸菌に対してポリミキシンＢ と並行して天然メリチンとアナログナ６とを試験した。天然メリチンとアナログ ナ６の同等の投与量は最後の濾過後ごとの分注液について同時に行なわれたロー リ−のタンパク質分析法に基づいた。両ペプチドは培地中最終濃度５μｙ／ｙｘ ｌとｌＯμｆ／Ｉｌｌで共同性分析法で試験されたポリミキシンＢは、両ペプチ ドの両方のレベルに対して、３ユニツ）／ＩＥＩＩ！と６ユニツ）　／ｍｌの最 終培地濃度で試験されたう チンとアナログ÷６の両方について、共同性が最も良（実証された（表１１）。

こ５した条件（図２３参照）のもとで、各ペプチドに関するデータを、各時点で の共同性活性に対し、統計的に分析しｔも統計的対比を用（Ｓで、各ペプチド° だけとポリミキシンＢだけの平均活性を各ペプチドとポリミキシンＢとの組みあ わせの活性と比較した。メリチンとアナログナ６共に、４．６．８時間の時点で 共同性が検出された（ｐ値＝、０００１）。

クロえて、メリチン（１０μｔメリチン＋６ユニツトポリミキシンＢ）とアナロ グナ６（ｌＯμｔアナログナ６＋６ユニツトポリミキシンＢ）に対する共同性曲 線を異なる活性レベルに対して各時点で比較しｔムこの２つの曲線の間で１末ど の時点においても有意な差異は検出できなかった。

能力に関し又はメリチンとほぼ同様の活性をもつことが結果で示されて（する。

１２時間の時点はアナログナ６が、ポリミキシンＢに関してメリチンよりもわず かに良い活性を持つことを示唆しているが、活性におけるこの差異を工、それを 反映するだろ５ペプチドでの実際の定量的差異に関しては極微なものである。ｌ Ｏ９μｔアナログ÷６に対して１０μｔメリチンにより生じる共同性の差異を、 ５μｔメリチンに対して１０μｔメリチンにより生じる共同性の差異と比較する （表１１）ことにより、アナログナ６に対して、メリチンの特異活性の差異は４ ０％より小さいと見なせる。

この研究により、メリチ／と同等あるいはそれ以上の共同性能力をもつメリチン アナログを合成することができることが示された。

メリチンとポリミキシンＢの共同的抗細菌活性：メリチンアナログの相対活性 抗生物質とメリチンとの間に見られる共同性は、メリチンを、合成アナログや、 天然ペプチドを化学的に修飾した誘導物に置きかえることでも達成されるかもし れない。合成メリチン、５つの合成ペプチドアナログ、そして天然メリチンの化 学的修飾物を、大腸菌の増殖阻害ζこ関してポリミキシンＢとの共同的相互作用 に対して試験した。その相対活性を、天然の蜜蜂毒液からのメリチンのそれと比 較した。各ペプチドはポリミキシンＢと共同的相互作用を示したものの、特異活 性が有意に異なっていた。幾つかのアナログは天然メリチンより優れた共同性活 性合成ペプチドと天然メリチンの化学的修飾物とい５メリチンアナログの２つの てがメリチンの２６アミノ酸配列とは２もしくはそれ以上の残基において異なる 。

メリチンの化学的修飾物であるＮＦＳ−メリチ７（ＮＦＳ−ｍａｌｉｔｔｔｎン （−天然メリチンの１９番目のトリプトファン残基に９−ニトロフェニルスルフ ェニル基を付けである。こうしたアナログの各々の活性を、天然及び合成メリチ ン両方の活性と比較した。こうしたアナログの各々が、ｉｎ　ｖｉｔｒｏでポリ ミキシンＢと共同的相互作用を示した一万で、ペプチドの活性とは有意な差が明 らかになった。

こうした相違は、ポリミキシンＢの活性の増強剤としての役割において、メリチ 蜜蜂毒液全体（ヴエスパ有限責任研究所）から、ゲル濾過クロマトグラフィーに より、天然メリチ／を単離し、ローリ−のタンパク質分析法により定量して凍結 乾燥して保存した。分析にあたって、凍結乾燥したメリチンを、蒸留水で０．３ ４ｍｙ／ｍｌとなるように再構成して、濾過滅菌（７て、使用まで４．Ｏｍｌず つ分注して一２０℃で保存した。

副腎皮質刺激ホルモンに対してラマテヤンドラン（Ｒａｍａｃｈａｎｄｒα−） うによって記述された様にして、ペプチドを！−ニトロフェニルスルフェニルク ロライド（ＮＦＳ−Ｃ６）と反応させることで、天然メリチンから、ＮＰｓ−メ リチンを合成した。ペプチドを溶液から、エチル酢酸で沈澱させ、０．ＩＮ酢酸 に再び懸濁し、それから、セファデックスＧ−１０（ＳｅｐｈａｄｇｚＧ−１０ ）（ＬＫＢ−ＰｈａｒｍａｃｉｃＬ、Ｐｔｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ、Ｊ、　）カラ ムに通して、残っているＮＰＳ−Ｃ１塩を除いた。３６５　ｒｙｎでの誘導物の モル吸光度を決定すると、メリチンが９５チ以上修飾されていることがわかった 。

合成メリチ／を、Ｐｅｎ１ｆＬｓｕｌａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｇｔｔ、Ｂａｌ ｍｏｎｔ、Ｃａ、から調達した。０．５ηのサンプルを、０８５％塩水に、ロー リ−のタンパク質分析法に基づいて０．３■／ｍｌになるように再構成した。サ ンプルは、使用まで一２０℃で保存した。

合成アナログは、トルベン　セルマーク博士（タンパク質研究所、コペンハーゲ ン大学、シガーズグード３４．ＤＫ−２２００コペンハーゲンＮ、チンマーク） により合成された。各アナログは、純度を分析して、０−１００％アセトニトリ ル勾配を用いたＣ−１８カラムからのクロマトグラフィー溶出プロフィールに基 づき９８％以上純粋なものと評価された。各ペプチドを、凍結乾燥した形で受け とり、０．８５％ＮｃＬＣ１ｌにおよそ１．０■／ａになるように再構成して濾 過滅菌し、１．ＯＮずつ分注して使用まで一２０℃で保存した。各ペプチド溶液 を、使用前に、ローリ−のタンパク質分析法により定量した。ローリ−法の結果 は、ペプチドの乾燥重量に基づ（濃度見積もりと、よ（一致し℃いた。

７９００ユニツト／〕ηの特異活性をもつポリミキシンＢ（シグマ化学会社。

Ｓｔ、Ｌｏｓｉｓ、Ｍｏ、）を、０．８５％塩水に２４０ユニツト／ａになるよ ５に再構成して、濾過滅菌して４．Ｏａずつ分注して使用まで一２０℃で保存し た。

大腸菌Ｇ１１０８Ａ’は、ペンシルバニア州立大学大腸菌リファレンスセンター （１０５ヘニングビル、ユニバーシティパーク、ペンシルバニＩＬ　１６８０２ ）より得られた。中間対数相のトリプテイカーゼ　ソイ　ブロースで増殖した培 養液より、接種原を調製しｔも滅菌済グリセロールを最終濃度２０チになるよう に培養液に加え、５．Ｏｍｌずつ分注して、使用まで一２０℃で保存した。

チェッカー版力価測定共同性分析法を行なって、メリチンと並行して大腸菌に対 してポリミキシンＢと共に、各ペプチドを試験しｔム天然メリチンと各アナログ の同等の投与量は、保存溶液の最終濾過後の各ペプチドの分注液に対して行なわ れたローリ−のタンパク質分析法に基づいた。全てのペプチドを、培地中最終濃 度５μり／ｍｌで共同性分析法で試験し總全分析の培地中のポリミキシンＢの濃 度は６ユニツト／１ｎ６であった。

結果 表１２に、合成メリチンアナログのアミノ酸配列が示しである。各合成アナログ に対し、初めのＮ端の２０アミノ酸は、天然メリチ／と同じである。変更は、６ Ｃ端アミノ酸にあり、太字印刷で示されている。

表１３は、ポリミキシンＢとの共同的相互作用に対して試験された化合物の各々 のための増殖曲線表示を含んでいる。各時点の値は、平均値と、６サンプルから の平均値の標準誤差を表している。「コントロール」曲線はポリミキシンＢもペ プチドも加えられていない培養液の増殖を表している。培養液への各ペプチドの みの効果はその表には含まれていないが、しかしながら、メリチンのよ５１こ、 こうしたペプチドは、それだけでｌＯμｙ／ｍｌあるいはそれ以下で用いられた 時、大腸菌の増殖には何の効果もなかった。このようにして、「コントロール」 は、各ペプチドだけで処理した時の培養液の表示でもある。

ポリミキシ／Ｂでのみ処理した（６ユニシト／酎）細菌培養液の増殖白線を、ポ リミキシンＢ＋ノリチン（５μｍ／Ｎ）で処理した培養液の白線と比較した時、 増大した抗細菌活性が、処理を克服して対数相増殖に至るのに要する時間の増加 として実証される（図２４）。５μｙ／Ｊのメリチンのみでの培養液処理が、本 質的に「コントロール」白線と重なった増殖曲線を生じるので、ポリミキシンＢ 阻害を脱し、ペプチド存在下で中間対数相に至るのに培養液が要する時間の増加 はペプチドの共同性活性の証拠である。このようにしてポリミキシンＢをペプチ ドと共に表している増殖曲線が、ポリミキシンＢのみの処理を表している曲線の 右にシフトすることは共同性の証拠である。

こ５した実験での細菌−＼のメリチンに対するポリミキシンＢの比率は、最小の 共同性？生じるよ５１こ考えらね、ペプチドアナログの増加した活性が、明白に なるよ’Ｊｆこし？、そうした増加は、合成メリチンとＮＦＳ−メリチン両方に 対して、図２４にて見られる。ローリ−法で決定したところ、全てのペプチドは 等しい濃度であった。

合成メリチンアナログのポリミキシンＢとの共同的活性を比較した同様の増殖曲 線が図２５に示されている。

ポリミキシンＢとのメリチ／／アナログ共同性における差異をより明確に視覚化 するため、ポリミキシ７Ｂのみでの処理と比較した時、メリチンまたはアナログ 添加に従って、各増殖曲線が、中間対数相に至るまでの付加的な詩間遥期を図２ ４．２５を用いて計算した。こうした値は、図２６に棒グラフで示しである。

様々な処理の間で、各時点で得られた記録を比較するため、表１３のデータに対 し、ツキ−のスチューチンタイズド　レンジ　テスト（Ｔｗｋａｙ’ｓ　ｓｔｘ ｄｇｎｔｉｚａｄｒａｎｇｅ　　ｔｅｓｔ　）を行なった。それから、増殖曲線 時刻の少な（とも１つに対し、有意な差のある増殖阻害のノベル（α＝０．０５ ）を示すことのできる能力に依存して、ペプチドをグループ分げした。このグル ープ分けは、図２６に異なる棒のマークで表しである。

結論 こうした結果は、様々なメリチン゛アナログが、アミノ酸置換と化学的修飾の両 方によって作られているということを示している。こうしたタイプの修飾＋’４ ペプチドの相対的共同性活性を高めることも低下させることもできる。図２６４ こ基づ（と、ｉｎ　ｖｔｔデＯでのメリチンとそのアナログの相対活性は以下の ように。

上昇的順番で示すことができる： １、°アナログ添加　　　　　　　　Ａ２、天然メリチン　　　　　　　Ｂ ３、ＮＦＳ−メリチン　　　　　Ｃ ４、アナログナ６Ｃ ５、合成メリチン　　　　　　　Ｃ ６、アナログナ２Ｃ ７、アナログナ４Ｄ ８、アナログΦ５Ｄ ５μｆ／ａレベルで、有意に差のある（α＝０．０５）共同性活性をもつペプチ ドを、文字のグループで記しである。注目すべきは、効能の順番を確立するのに 用いられたパラメーターである培養液の中間対数相までの延長時間が、ペプチド の量が狭いメリチン派の範囲を少し超えても、化学量論的に増加することである 。

各アナログでの線型範囲の境界は同等ではないようなので、ここで提供されたデ にしか用いることはできないし、定量的差異を評価するのには用いることができ ない。しかしながら、効能の順位は、ペプチドの共同性活性が、Ｃ端領域のアミ ノ醗での正電荷側鎖の数とそれが表にｂているかどうかに依っていることを示唆 するものなのである。

こうしたメリチンアナログの相対効能はｔｘｔＩｉｔｒｏで確ニされたものであ るが、実質的な相違は、　　ｉｎ　ｖｓｖｏでも起こりうるだろう。ホストへの 取り込みや。

ホストからの除去といったｉｎ　５ｉｌｏのパラメーターは実際の扱い方におけ る効能のこの順位を有意に変えることもあるだろう。メリチンの副腎皮質刺激活 性が、よ（文書で証明されている一方で、ＮＰｆｌ−メリチンは、副腎皮質刺激 ホルモン（ＡＣＴＨ）のＮＰＳ誘導物が、未修飾のＡＣＴＨの×。。しか脂質分 解活性を誘導しないように、天然メリチンより低い副腎活性しか有していないだ ろう。こうした理由から、この研究に含まれるアナログの各々ｋｌ　　ｉｎ　ｖ ｉ＊ｏの評価に対して考察されるべきだろう。

表　１　３つの異なる細菌に対して試験された、抗生物質と、蜜蜂毒液のストッ ク溶液の濃度 生物　　　　　　　毒液　　　　　アンピシリン　　カナマイシン　　　　ポリ ミキシンＢＥ−，ａｏＨＢｏｏμｙ／ｍｅ　　　８０μｙ／ｍ　　　８００ｔｘ ｙ／ｍｌ　　　　　　２４０ＵΔａ亙、ａｕｒｇｓｓ　　　　３２０１ｔｆ／Ｉ ｌｌ　　　　８Ａｆ／ＩＲＩ　　　２００Ａｆ／珈ｔ　　　５０１０ＯＯＵ／Ｉ ｌ１表　２　　力価測定チェッカー版力価測定分析での蜜蜂毒液と抗生物質の計 画及び配分 抗生物質の希釈率 コントロール　１：１６　　　　　　１：８　　　　　　１：４　　　　　　１ ：２コンド　Ｏａ＼０＆　　０＼１：１６　　　０＼１：８　　０＼１：４　　 　０＼１：２０−ル　ｌ−３’　　　　４−６　　　　　　　７−９　　　　　 　１０−１２　　　　１３−１５ｂ＝分母、抗生物質ストック溶液の希釈レベル ｃ＝７５試験チューブの配列編成での分析位置表　３　　　チェッカー版力価測 定分析の各構成要素の体積と配分チューブ＃　　ＴＳＢ　　　　　抗生物質　　 　　　毒液　　　　細菌００−０　　　　　２．５１＋１４−−１−３　　　　 ５００ｓＪ−−２，０１１４４−６２５０ｍＡｌ　　　　−２５０ｓＪ　１：１ ６　２．０１１ｊ７−９　　　　２５０ｓｌ　　　　−２５０ｓｌ　１：８　　 ２．０１ｄ１０−１２　　２５０ｍ４！−２５０ｓＪ　１：４　　２．０Ｉｌｌ ｔ１３−１５　　２５０％Ｊ？　　　　−２５０％Ｊ１：２　　２．０ＩＩｊ１ ６−１８　　２５０ｓＪ　　　２５０ｓｌ　１：１６　　　−　　　　　　２． ０１１ｊ１９−２１　　　−　　　　２５０ｓＡ！　１：１６　　２５０ｓＪ　 １：１６　２，０ａＪ２２−２４　　　　　　　　２５０ｓＡ’　１：１６　　 ２５０ｓ／　１：８　　２．０１１４２５−２７　　　　　　　　２５０ｓＪ　 １：１６　　２５０ｍＡｌ　ｌ：４　　２．０１１ｊ２８−−３０　　　　　　 　　２５０ｓｌ　１：１６　　２５０ｓｊ！　１：２　　２．０１＋１Ｊ３１　 ３３　　２５０ｓｌ　　　２５０ｓｌ　１：８　　　−　　　　　　２．０１１ ｔ１３４−３６　　　　　　　　２５０ｓ１１：８　　２５０ｓＡ！　１：１６ 　２．０ＩＩ４３７−３９　　　−　　　　２５０ｓｃＡｌ　１：８　　２５０ ％Ｊ１：８　　２．０１Ｊ４０　　４２　　　　　　　　−　　　　　　　　　 ２５０ｓｌ　　１：８　　　　　　２５０ｍ、−？　ｌ二４　　　　　２．０Ｉ Ｊ４３　４５　　　−　　　　２５０ｓＡ’　１：８　　２５０Ｊ　１：２　　 ２．０ＩＩｊ４６　４８　　２５０ｓｌ　　　２５０ｓＡ！　１：４　　　　　 　　　　　２．０ＩＩｊ４９−５１　　　−　　　　２５０ｓｊ！　１：４　　 ２５０ｓＪ　１：１６　２．０ｌｊ５２　５４　　　−　　　　２５０ｓｌ　１ ：４　　２５０ｓｊ！　１：８　　２．０ＩＩＪ５５−５７　　　−　　　　２ ５０ｓＪ　１：４　　２５０ｘｌ　１：４　　２．０ｔｄ５８　６０　　　−　 　　２５０ｓＪ１：４　　２５０ｓｊ！！１：２　　２．０ｍ６ｌ−６３２５０ ｓＪ　　　２５０ｓＪ　１：２　　　　　　　　　　２．０ｊＬ６６４−６６　 　　−　　　　２５０ｓ／　１：２　　２５０ｓＪ　１：１６　２．０鮮６７− ６９　　　　　　　　２５０ｓ１１：２　　２５０ｓ１１：８　　２．Ｏ１＋Ｌ ｔ７０−７２　　　　　　　　　　　　　　　　２５０ｕノ　１：２　　　　　 ２５０ｓノ１：４　　　　２．０１＋１ｔ７３−７５　　　　　　　　２５０ｓ Ｊ　１：２　　２５０Ｊ　１：２　　２．０ｍ７表　４　８つのダラム陽性生物 上の１１の抗生物質のＭＩＣのものへの４μｆ／ゴＥＢＶの効果 Ｃ’１　　　９９９９９　　　　　Ｆ ｏ　　　　８００００　　　　− セファロチン　　　　　＋　　十＋十士十＋　　　　　−エリスロマイシン　　 　　＋　　＋−−−−十−クロラムフェニコール　　　＋　　＋−−−−十十ク リンダマイシン　　　　＋　　＋−−一−十−テトラサイクリン　　　　　＋　 　　十−−−−十−バンコマイシン　　　　　＋−）−一−−−＋−１−グルー プ／１””ｓ、　ａｓｒｍｓａの２株２−　グループ＠Ｂ　”＝Ｓ、　ａｐｉｄ ａｒｍｉｄｉｓの５株５−ＡＣ−）は２未満の希釈段階のＭＩＣ減少を示す。

６−Ａ（＋）は２以上の希釈段階のＭＩＣ減少を示す。

ａ　　５　　　Ｅ、　ｃｏＬｉ（１）４株上の１１の抗生物質のＭＩＣのものへ の４１１ｇ、Δｎ１ＥＢＶ（Ｄ効果 セフオキシチン　　　　　　　　　　＋　　　　十十十１−　　ＱＣはこのアッ セイ系を試験するルーチン性質コントロールのために用イラしたｆ二Ｌリエ株で ある。

２−Ａ　　叶）は２以上の希釈段階のＭＩＣ涯少を示し工いる。

３−Ａ（−）は２禾満の希釈段階のＭＩＣ減少を示している。

表６ スタフイロコツクス・アウレウス　　リファンピシン＝、０１μｙ／ｒｎｌ　ｏ ｒ　、００１μ２Ａｌ（５ＬａｐｈｙＬｏｅｏｃｃｕｓ　ａｘデー”　）蜜蜂毒 ’ｆ１１．　＝　４　ａｙ　／ｍＡ、０４６　　．０８０　　　．８５０　　　 １，１７　　　１，２６　　　１．３４コントロール　　、０４６　　．０７３ 　　．８１５　　１．１６　　１．２６　　１．３２．０４６　　．０７３　　 ．８１５　　１．１６　　１，２６　　１．３５．０４６　　．０５６　　．１ ４０　　．３７２　　１．０７　　１．３２．０４６　　．０６２　　．１５８ 　　．７０５　　１．２０　　１．２９表７ シュードモナス・アエルギノサ　リファンピシン＝１０μｙ／ｍｌ　ｏｒ　２０ μ７Ａｔ、、、０３３　　．０６２　　．７３５　　　１．０．０　　　１．０ ２　　１．００コント”ロール　、０３３　　．０６９　　．７５５　　．９５ ５　　１．００　　．９９０．０３３　　．０６８　　．７７５　　　．９５０ 　　　．９９０　　．９００．０３３　　．０７８　　．６９０　　　．８９０ 　　　．９６０　　　・９８０毒液　　　　　、０３３　　．０８７　　．６８ ７　　．８７０　　．９６０　　．９８０４０ｔｔｙ／ｍｌ　　　、０３３　　 ．０５８　　．６８５　　　．８８０　　　．９５３　　．９５０．０３３　　 ．０７４　　．６３０　　　．８３０　　　．８８５　　．８４２リフアンピシ ン　、０３３　　．０８４　　．６７２　　　．８３０　　　．８９５　　．８ ５０１０μｙ／ｍｉ　　　、０３３　　．０８２　　．６４０　　　．８３０　 　　．８６５　　．８３２．０３３　　．０５３　　．３７５　　　．６６０　 　　．７３０　　．７３０リフアンピシン　、０３３　　．０５６　　．３２６ 　　　．６４５　　　　。７２０　　．７３０リフアンピシン　、０３３　　　 ．０８４　　　．４５２　　　．８０５　　　．８６０　　、．８６１リフアン ピシン　、０３３　　　．０６５　　　．１８０　　　．４１０　　　−５８０ 　　．６２０表８ 大腸菌（Ｅ、Ｃｏ１１）　　ポリミキシンＢ＝６．２５Ｕｎｉｔｒｔ／ｎ１ａｎ ｄ　３．１２５Ｕｎｉｔｓ／ｍｌマルハナバチ毒液＝　５　μｙ、Ａｎｔ　　ａ ｎｄ　２０１１ｆ／　／ｒｔｔ（Ｍａｇａｂｏｍｂｕｓ　ｐｇｎｎｓｙｌｖａｎ ｉｃｗａ）（接種後のン時間 表９ 大腸菌（Ｅ、ｃｏ、Ｉｔ）　　ポリミキシンＢ＝３．１２５Ｕｎｉｔａ／１ｎｔ （接種後の）時間 ．０３８　　．５２６　　１．０３　　１．０？　　　１．０８　　１．１２コ ントロール　、０３８　　．５２２　　１．０４　　　１．０７　　　１．０８ 　　１．１２ＰｏＬＢ　　　　、０３８　　．４７７　　１．０３　　１．０７ 　　１．０８　　１．１４ＹＪ　　　　　　、０３８　　．５４７　　１．０４ 　　１．０７　　１．０９　　１．１６８Ｆ　　　　　　、０３８　　．５５２ 　　１．０４　　１．０８　　１．０８　　１．１６平均　　　、０３８　　． ０２５　　．１０？　　　、８６５　　１．０７　　１．１２表　１０　　　　 膜翅類毒液のタンパク質様またはポリペプチドの構成要素のアナログの相対活性 アナログ　魔　　　　　　　　　相対活性１　　　　　　　　　　　　２０％ ２　　　　　　　　　　　２００％ ５　　　　　　　　　　　３００％ ６　　　　　　　　　　　１００％ ７　　　　　　　　　　　　２０％ 表　１１　　　時間及び、処理に対する細菌培養液の平均光学密度ＣＯＤｎｏ　 ）Ｏｈｒａ　　　　　２ｈｒａ　　　　　　４ｈｒａ　　　　　６ｋｒｓ　　　 　　８ｋｒａ　　　　　１２ｈｒａコントロール　　　、０１３　　．０７２　 　．８３１　　１．０８　　１．１０　　１．１７５μｔ アナログ　＄６−　　．０１３　　．０７２　　．８２４　　１．０９　　１． １１　　１．１７５μｔ ポリミキシンＢ−，０１３，０７２，４２３，８４０，９１１，９３０６ｓ％ｔ ｔａ 表　１２　　合成メリテンアナログの配列−天然メリチン メリチン（１−２０）−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｇｉｎ−Ｇｉｎ−Ｎ ＨＩ　　。

アナログ　＃２ メリチン（１−２０）−〇ｙｓ−Ｏｙｓ−Ｏｒｓ−Ｏｒｓ−Ｇｊｓ−Ｇｊｓ−Ｊ Ｖｆｆ２　　。

アナログ　＃４ メリチン（１−２０）　−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｌｙｅ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ− ＮＨ２。

メリチン（１−２０）−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｇｌｓ−ＧＸｎ−Ｎ ＨＩ　。

アナログ　＃６ メリチン（１−２０）　−Ｌｙｅ−Ｌｙａ−Ｌｙａ−Ｌｙｅ−Ｇｉｎ−Ｇｌｓ− ＭＨ２。

アナログ　＃７ メリチン（１−２０）　−Ｇｌｙ−Ｇｌ　ｙ−Ｇｌｙ−Ｇｊｙ−Ｇ（ｓ−Ｇ（ｓ −ＭＨ２。

傘　太字活字で示されたアミノ酸は、天然メリチンからの変更を表している。

表　１３　　　　　時間対処理した細菌培養液の光学密度（’０Ｄｏｓ。〕値は 括弧内のＳＥＭの上に平均値を表しているＣｎ＝６）（培養液接種後の）時間 コくトロール　　、００７　　．０８８　．６９２　１．ｏｉ’　　１．０５　 　　］、、０６　　１．０８（，００１）　　（，００３）　　（，０５８）　 　（，０１９；＋　　（，０１０）　　（，００８）　　（，００８）ポリミー １＋−シンＢ　　、００７　．０８８　．４７０　．９２６　　１．０２　　１ ．０４　　１．０６（，００１）　（，００３）　（，０７２）　（，０１４） 　（，０２７）　（，０３６）　（，０４４）メリｆ：ｙ　　＋　、００７　． ０８８　．０７１　．５１４　．９２５　１．０２　１．０５Ｐｏｔ　Ｂ　　　 　（，００１）　（，００３）　Ｃ−０１７）　（，１１６）　（，０７７）　 （，０２５）　（，０２２）合成　十　　　　、００７　　、Ｃ１８８，０１８ ，１４３，６６２，８８１１，０１Ｐａｌ　Ｂ　　　　（，００１）　（，００ ３）　（，００４）　（，０５７）　（，１６１）　（，１２８）　（−０４３ ，）ＮＦＳ−ｋｂＬ＋　　、００７　．０８８　．０４２　．２４７　．７６６ 　１．０４　１．Ｏ’８Ｐｏｌ　Ｂ　　　　（，００１）（，００３）　（，０ １０）　（，１０８）　（１９４）　（，０６９）　（，０５３）アナログ＃２ ＋　、００７　．０８８　．０２２　．２０８　．５０９　．９４２　１．．０ ３Ｐａｌ　Ｂ　　　　（，００１）　（，００３）（，００９）　（Ｊ１６）　 （，１，４６）　（，０２１）　（−０２２）アナログ＃４＋　、００７　．０ ８８　．０２０　．０２３　　、（１９４、，５３３，８６０）’ｏｌ　　Ｂ　 　　　　　　（，００１）　　（，００：３）　＜、００４　）　（，００１） 　　（，０３４）　　（−１５７）　　（C１２５） アナログ＃５＋　、００７　．０８８　　。０３６　．０３６　．０３８　．３ ３４　．６８７Ｐｏｌ　Ｂ　　　　（，００１）　（，００３）　（，００１） 　（−００１）　（，００４）　（，０９６）　（，１５０）アナログ＃６＋　 　、００７　．０８８　．０２０　．１６０　．７９３　１．００　　１．０４ Ｐｏｌ　Ｂ　　　　（−００１）　Ｃ，００３）　（，００７）　（，０６２） 　（，０７１）　（−０２５）　Ｃ−０２３）アナログ＃７＋　、００７　．０ ８８　．１４０　．８１８　１．０２　　１．０５　　１．０６Ｐｏｔ　Ｂ　　 　　（，００１）　（，００３）　（，０２８）　（，０４１）　（，０２１） 　（，０２８）　（，０２６）表、４−Ｉ　　　Ｓ、α１Ｌｒｅｕ８対アンピシ リンと蜜蜂毒液のチェッカ御飯アッセイの結果 表Ａ−１（続き） 表Ａ−１（続き） ７“０　　　０．０１３　　０．００２　　　　　　ＴＯＯ，０１３０，００２ １’２　　　　　　　０．０８５　　　　　　０．０１８　　　　　　　　　　 　　　　ノ’２　　　　　　　０．０８５　　　　　０．０P８ Ｔ４　　　０．１９１　　０．０４２　　　　　７°４　　　０．０９８　　０ ．０５４７’６　　　０．１１０　　０．０２７　　　　　　Ｔ６　　　０．０ ６１　　０．０４１Ｔ８　　０．０４’８　　０：０１９　　　　　　Ｔ８　　 　０．０３４　　０．０２７７’１２　　０．０２７　　０．００９　　　　　 　Ｔ１２　　０．０２０　　０．０１１Ｔ２４　　０．０２７　　０．００５　 　　　　７”２４　　０．０１８　　０．００８ＡＭＰ＝０．４　、ＥＢＶＲ４ ＡＭＰ−０，４、ＥＩ３Ｖ−８ＴＯ０，０１３’０．００２　　　　　　ＴＯ， ０，０１３，０，００２Ｔ２　　　０．０Ｂ５　　０．０１８　　　　　　ｒｚ 　　　　０．０８５　　　ｏ、ｏ１ｓＴ４　　　０．０４．０　　０．０２８　 　　　　　Ｔ４　　　０．０２３　　０．０１５Ｔ６　　　０．０２８　　０． ０２３　　　　　　Ｔ６　　　０．０１０　　０．００６ＴＦ３　　　０．Ｃ１ １９０，０１７Ｔ８　　　０．００６　　０．００４ＴＩ２　　０．０１２　　 ０．００４　　　　　　Ｔ１２　　０．００８　　０．００５Ｔ２４　　０．０ ０９　　０．６０７　　　　　　Ｔ２４０．０１０　　０．００６ＡＭＰイ０４ ．ＨＢＶ−１６ ＴＯＯ，０１３０，００２ Ｔ２　　　０．０８５　　０．０１８ Ｔ４　　　０．０２７　　０．０１３ Ｔ６　　　０．００８　　０．００４ Ｔ８　　　０．００６　　０．００４ Ｔ１．２　　０．００８　　０゜００５Ｔ２４　　０．０１０　　０．００４ 表Ａ−２（続き） 表Ａ−２（続き） Ｔ４　　０．０３１　　０．０１４ 表Ａ−３Ｅ、ｃｏＬ４対ポリミキシンＢと蜜蜂毒液のチェッカ御飯アッセイの結 果表Ａ−３（続き） 表Ａ−３〔続き〕 ＰＯＬＹ　Ｂ＝２５００．ＢＨＶ＝１６７’ＯＯ，００６０，００２ Ｔ２　　　０．０７４　　０．００４ １’４　　　０．１１０　　０．００９７’６　　　０．０９１　　０．００８ Ｉ’８０．０７８　　０．００９ ン’１２０．０６１０．００６ ７’２４　　０．２１０　　０．４２５表Ａ−４Ｅ、ｃｏＬｉ対アンピシリンと 蜜蜂毒液のチェッカ御飯アッセイの結果表Ａ−４（続き） 表Ａ−４（続き） Ｔｏ　　　　Ｏ，０１５０，０１５ＴＯ０，０１５０，０１５Ｔ２　　０．０８ ４　　０．０３２　　　　　Ｔ２　　０．０８４　　０．０３２７”４　　０． １５８　　０．１１８　　　　７’４　　　０．１５４　　０．１０８Ｔ６　　 ０．０６３　　０．（１１９７”６　　　０．０７６　　０．０３７Ｔｓ　　　 Ｏ，１２６０，２３０Ｔｓ　　　Ｏ，０８４０，０４４Ｔ１２　　０．０５５　 　０．０２３　　　　７’１２　　０．０５７　　０．０２２Ｔ２４　　０．０ ５６　　０．０１５．　　　　Ｔ２４　　０．０？６　　０．０７１ＡＭＰ□４ 　、ＥＢｌ’−１ＯＡＭＰ−４、ＥＢＶ−２０７”０　　０．０１５　　０．０ １５　　　　７”０　　　０．０１５　　０．０１５Ｔ２　　０．０８４　　０ ．０３２　　　　７’２　　　０．０８４　　０．０３２７４　　０．１２８　 　０．０９２　　　　７’４０．０９０　　０．０７０１”６　　０．０７５　 　０．０３９　　　　７’６　　　０．０６６　　０．０４３７’８　　０．０ ７４　　０．０４５　　　　　Ｔ８　　０．０６６　　０．０４５ＡＭＰ＝、４ 　、ＢＨＶ−４０ Ｔｏ　　　Ｏ，０１５０，０１５ １’２　　０．０８４　　０．０３２ Ｔ４　　０．０６２　　０．０４０ Ｔ６　　０．０５５　　０．０４０ ７”８　　０．０５４　　０．０３９ ：／’１２　　０．０５１　　０．０２８Ｔ２４　　０．０４２　　０．０２２ 表Ａ−５Ｅ、ｃｏｌｉ対カナマイシンと蜜蜂毒液のチェッカ御飯アッセイの結果 ７”６　　　０．９８０　　　０．０７５　　　　　７’６　　　　１．００２ 　　　０．０６５表Ａ−５　　（続き） 表Ａ−５０続き） Ｔｏ　　　　Ｏ，０２５０，００９ Ｔ２　　　０．１１９　　０．０２８ １’４　　　０．０８０　　０．０５４Ｔ６　　　０．０４１　　　０．０２０ Ｔ８　　　０．０３６　　０．０１３ ＴＩ２　　０．０４０　　０．０１９ ７’２４　　０．３４２　　０．３４４表Ａ−６Ｅ、ａｏｌｉ対ポリミキシンＢ と蜜蜂毒液のチェッカ御飯アッセイの結果表Ａ−６（続き） 表Ａ−６（続き） ＴＯＯ，０１２０，００５Ｔｏ　　　Ｏ，０１２０，００５Ｔ２　　０．０４０ 　　０．００４　　　　　Ｔ２　　０．０４０　　０．００４７’４　　０．０ １８　　０．００５　　　　　Ｔ４　　０．０２５　　０．００５Ｔ６　　０． ０１１　　０．００５　　　　　Ｔ６　　０．０１６　　０．００６７”８　　 ０．００９　　０．００３　　　　　Ｔ８　　０．０１１　　０．００５７“１ ２　　０．０７５　　０．１５０　　　　　Ｔ１２　　０．０１０　　０．００ ５Ｔ２４　　０．４７２　　０．４９８　　　　　Ｔ２４　　０．１９６　　０ ．３６１７”１２　　０．０２４　　０．０５１　　　　　Ｔ１２　　０．０１ ２　　０．００４Ｔ２４　　０．２０１　　０．３５２　　　　　Ｔ２４　　０ ．０７３　　０．１８４ＰＯＬＹ　Ｂ＝１２．ＨＢＶ＝４０ ＴＯＯ，０１２０，００５ ７’２　　０．０４０　　０．００４ ７’４　　　０．０４８　　０．００７Ｔ６　　　０．０２２　　０．００６ Ｔ８　　０．０１６　　０．００５ ７’１２　　０．０１５　　０．００６Ｔ２４　　０．０４７　　０．０８５ 表Ａ−７（続き） 表Ａ−７（続き） ＡＭＰ＝０．４　、ＨＢＶ＝１６ ＴＯＯ，０２００，０１６ Ｔ２　　　０．０６４　　０．０２０ Ｔ４　　　０．０３３　　０．０１４ ７’６　　　０．０１５　　０．００４Ｔ８　　　０．００８　　０．００５ ７”１２　　０．００９　　０．０Ｕ６Ｔ２４　　０．０１２　　０．００３ 表Ａ−８〔続き〕 表Ａ−８〔続き〕 ＬＡＮＡ＝４０．ＥＢＶ＝Ｑ　　　　　　　　　　　ＫＡＮＡ＝４０　、ＢＢＶ ＝２Ｔｏ　　　　　Ｏ，０１６０，００５ＴＯＯ，０１５０，００４Ｔ２　　　 　０．０４７　　　０．００９　　　　　　　Ｔ２　　　　０．０４７　　　０ ．００９７’４　　　　０．１１６　　　０．０５７　　　　　　　Ｔ４　　　 　０．０４８　　　０．０２１７”６　　　　０．１４６　　　０．０６９　　 　　　　　Ｔ６　　　　０．０４７　　　０．０２１Ｔ８　　　　０．１６１　 　　０．０７５　　　　　　　Ｔ８　　　　０．０４３　　　０．０２０Ｔ１２ 　　　０．１８４　　　０．０８４　　　　　　　ＴＩ２　　　０．０４９　　 　０．０２２Ｔ２４　　　０．６９７　　　０．３９６　　　　　　　Ｔ２４　 　　０．６９２　　　０．４６３ＫＡＮＡ＝４０　、ＨＨＶ＝４　　　　　　　 　　ＫＡＮＡ＝４０．ＢＢＶ＝８ＴＯＯ，０１５０，００４ＴＯＯ，０１５０， ００４Ｔ２　　　　０．０４７　　　０．００９　　　　　　　Ｔ２　　　　０ ．０４７　　　０．００９７４　　　　０．０３３　　　０．０２３　　　　　 　　Ｔ４　　　　０．０２３　　　０．０１１ＫＡＮＡ＝４０　、ＥＢＶ＝１６ ＴＯＯ，０１５０，００４ ７°２　　　　０．０４７　　　０．００９７”４　　　　０．０２３　　　０ ．０１１７°６　　　　０．０１７　　　０．００８ン’８　　　　　　　０． ０１６　　　　　０．００８ｒ１２　　　０．０１９　　　０．０１Ｊ７Ｔ２４ 　　　０．０２３　　　０．００９表Ａ−９カナマイシン耐性Ｓ、αｘｒｇｕａ 対ポリミキシンＢと養蜂毒液のチェッカ御飯アツ王イで酉果− 表Ａ−９（続き） 泰Ａ−９（続き〕 ＰＯＬＹ　　Ｂ＝１００．ＥＢＶ＝１６ＴＯＯ，００９０，００３ Ｔ２４　　　０．２８６　　　０．０６４表　Ａ−１１単処理モデルの生データ ｌｏｇ、。細菌／肩を血液 実験　　　　　　　処　理 □ １　　未処理　　　　　　　　　　２．６２　　３．４９　　２．９１　　３． １８１　　　メリチン−５０３，２７２，８８２，７６ｙ １　　　ポリミ＊シ：ｙＢ−２ｐｙ、　　　　　３，２０　　３．６１　　　２ ．３０　　３．４２１　　　ｆｉａｌ　５０ｎｙ＋ｐｏｌ　２μｙ　　　１．９ ０　　２．３８　　２．５８　　２．９４２　　未処理　　　　　　　　　　２ ．９６　　４，１６　　３．７７　　３．８９２　　　　メ’）ｆ７−５０ｎｙ 　　　　　　　３．３９　　２ニア９　　　’２．５８　　２Ｂ８２　　　ポリ ミキシンＢ−２ｔｔｙ　　　　　３．８８　　３．００　　　３．３４　　　３ ．２７２　　　ｍｇ１５０ｎｆ＋ｐｏ１２ｊｉｆ　　　２．３８　　０．００　 　２．６２　　２．１５３　　未処理　　　　　　　　　　２，３４　　２．６ ２　　２．５１　　１．９０３　　　メリチ：／−５０ｓｙ　　　　　　　３． ５２　　２．３４　　　１．６１　　３．０８３　　　ポリミキシンＢ−２ｔｔ ｙ　　　　　３．０８　　３．１１　　　２．９１　　　０．００３　　　ｒｎ ｇ１５０ｎｆ＋ｐｏ１２ｔｔｆ　　　２．４１　　１．３２　　１；３２　　　 ｏ、ｏ。

傘　血液サンプル不適により観察不能 表　反復処理モデルの生データ　　　　・１ｍｇｌ。細菌／ａｔ血叡 ４　　　ｍｍｌ　　５０ｓｔ＋ｐｏ１２μｆ　　　２．６０　　３．６８　　３ ．５１　　２．２３参考文献 Ｂｇｎｔｏ＊　、　ＡＪＩ’、　１９６５　、　Ｂａｃｖａｎｏｔｎ、イｔｓ　 ｃｏ’ｌ１ｍｃｔｉｏｎ’、ｔｏＭｉｃｉｔνａｓ　　ｏｆ　ｂａｇ　　ｖａｓ ｏｍｃＴｒａｓｐｌａｔａｄ　　ｔｉｔｌｅ、ｉｓ　　ＩｔａＬｉａｓ）、Ｉｓ ｍ−−ｒｇｍｏｌｕｔｉｏｓ　’Ｅ　−ＮＭＲｔｔｔｕｄｉａａ　ｏｆ　ｓａｌ ｔ−ａｇｇｒａｇａｔｔｏｓ　ｏｆｍｍＬｉｔｔｉｔｉ　ｉｍ　ａｑｓａｏｓａ 　５ｏｌｓｔｔｏｎ、　Ｂｉａｃｈｉｍ、　Ｂｔｏｐルｆ＃、Ａｄｄ６２２：２ ３１−２４４゜ Ｃａｒｒ４ｚｏａａ、　Ｊ、　ａ？Ｌｄ　Ｍ、Ｅ’、　Ｌａｖｉｓｏｎ、　１． ９　＆１　、　Ｍｉｎｉｆｎａｌ　ｃｏｓｃｉｓｔ−ｒａｔｉｏｓ　　ｏｆ　　 ａｔｎｉ％ｏｇｌｙｃｏｓｉｄａ　　ｔｈａｔ　　ｃａｎ　　ｓｙｎｍｒｇｉ＊ ａ　　ｗｉｔｈｐｍ％１ｃｉｌＨｘ　　ｉｎ　　ａｓｔｒｏｃｏｃｃａｌ　　ｅ ｎｄｏｃａｒｄｉｔｉｓ、Ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂ。

ＡｇａｎｔａＣ’ｈｍｍｏｔｈａｒ、２０”、４０５４０９゜Ｃｏｕｌｇｅｒｎ 、Ｃ，Ｃ，ａｎｄ　　Ｒ，Ｌ、五４ｓｃａｊｄ、１９８５　　、Ｇｒａｍ−ｐｒ ｍｐａｒａｔｉｖａｔｉｎｇ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ　　 ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａｎ　　５ｏｃｉｅｔｙ　　ｆｏｒ　Ｅｚ−ｐａｒｉ情ａｔ Ｊｔａｌ　　Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ　　ｌ’ｒｏｃｍｄｉ３ｇ ａ　　４４　：１７７７　。

Ｃｙｎａｍｏｎ、　Ｍ　、Ｅ　、　ａｎｄ　Ｇ、　Ｓ　、　Ｐａ１ｔｎｅｒ、　 １９８３　、　Ｉｎ　ｔｉｔｌｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ　ａｍｏｚｉｃｉＨｉ ｎ　ｉｎ　ａｏｔｎｂｉｎａｔｉｏｎ　ｗｉｔ五ｃｌａｖｓｌａｎｌｃ　ａｃｉ ｄａｇａｔ％ａｔ’Ｍｙｅｏｂαａｔａｖｉｓｍ　　ｔｓｂａｒｃｕｌｏａｉａ 、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ、　Ａｇａ−ｘｔａ　Ｃｈａｍｏｔｈｍｒ、２４　：　 ４２９−４３１　。

Ｆｅｎｎｅｌ、　／　、Ｆ、、　ｊｆ、Ｅ、　Ｓｈｉｐｍａｎ　ａｎｄ　Ｌ、Ｊ 　、　Ｃａ１ｍ、　１９６８　、　Ａｓｔｉ　−ｂａｃｇｇｒｉａｌ　ａｃｔｉ ｏｎ　ｏｆ　ｍａｌｉｔｔｉｓ、　ａ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ　ｆｒｏｍｂａ ｇ　　ｖｅｎｏｍ、Ｐｒｏｃ　　ＳｏＣ，Ｅｚｐ、ＢｉｏＬ、Ａｈｄ、１２７： ７０７　７１０゜ａｎｔｉｔｎｉｃｒｏｂｉａｌ　　ａｃｔｉｏｎ、Ｃｈａｐｍ ａｎ　　ａｎｄ　Ｈａｌｌ　、Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ。

Ｉｈｗ　Ｙｏｒｋ　、　ｐｐ、　６７−７２　。

Ｆｒａｎｋｌｉｎ、　Ｔ、Ｊ、　ａｎｄ　Ｇ、Ａ、さｎｏｗ、　１９８１　ｂ　 、Ｂｉｏｃにｇｒｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ（ＬｎＬｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　　ａｃｔ ｉｏｎ、　Ｃｈａｐｍａｖｓ　　ａｎｄ　ＨａＬＬ、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ。

Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　ｐｐ、　７３　７４　。

ＧｗｒａＬｎｉｃｋ、　Ｍ、Ｗ、、　Ｌ、Ｍ、　Ｍｕｌ　ｆｉｎｇｅｒ　ａｎｄ 　Ａ、Ｍ７．　Ｂｇｎｔｏｎ、　１９８６　。

Ｃｏ１１ｅｃｔｔｏｎ　ａｎｄ　５ｔａｎｄａｒｄｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｙ ｍｇｎｏｐｔｇｒａ　ｖａｎ　−ａｍ、ＦｏＬｉａ　Ａｌｌｇｒｇｏ１．Ｉｔｎ ｍｗｎｏｌ、Ｃ’Ｌｉｎ、３３　：　９　１８−Ｂａｂａｒｍａｎ、　Ｅ、　１ ９７２　、　Ｂａｇ　ａｎｄ　５ａａａｐ　ｖｅｎｏｍｓ　：　Ｔｈｅ　ｂｉｏ ｃｈｍｉｓｔｒｙａｎｄ　　ｐｈａｒｒｎａｃｏｌｏｇｙ　　ｏｆ　　ｔｈｅｉ ｒ　　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　　ａｎｄ　　ｅｎｚｙｍｅｓ　　ａｒｍｒｅｖｉｘｗ ａｄ、５ｔｉａｎｃａ　　１７７：３１４　３２２゜Ｂａｂｇｒｍａｎｒ　Ｅ、 　ａｎｄ　Ｊ、　Ｊｇｎｔｓｃｈ、　１９６７　、　Ｓｅｑｚａｎｔａｎａｌｙ ｓｍ　ｄａｍｍｇｌｉｔｔｉｎｓ　　ｔｈｕｓ　　ｔｉｍｎ　　ｔｒｙｐｔｉｓ ｃｈａｎ　　ｕｎｄ　　ｐａｐｔｉｘｃｈａｎ　　ｓｐｃｂｌｔ−ｇｔｕｃｋ４ ｎ、Ｅｏｐｐａ−５ａｙＬａｒ’ａ　Ｚ、　Ｐんｙｓｉｏｌ、ｃｈｅｔｎ、３４ ８：３７　５Ｅａｎｋｇ　、　Ｆ、　、　Ｃ，Ｍｓ　ｔｈｆａｓｇａ　ｌ　、　 Ｈ，Ｕ、　Ｗｉ　１ｍｓｇｎ、　Ｅ、　ｋａｔｚ　、　Ｂ、八ｎ１ａｎｄ　Ｇ、 　Ｂｏｈａｉｍ、　１９８３　、Ｍｇ１ｉｔｔｉｎ　ａｎｄ　ａ　ｃ五−ｍｉｃ ａｌｌｙ　ｍｏｄ　−４ｆｉａｄ　　ｔｒｔｃｈｏｔｏｚｉｎ　　ｆｏｒｍ　　 ａｌａｔｎａｔｈｉｃｉｎ−ｔｙｐｅ　　ｒｒｎｂＬｔｉ−ｓｔａ−１ｍ　　ｐ ｏｒｔｓ、Ｂｔｏｃｈｉｍ、Ｈｉｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　　７２７：１００　１ １４−Ｌａｕｔａｒｗａｉｎ、Ｊ、、Ｃ，Ｂｏｓｃｈ、Ｌ、Ｒ，Ｂｒｏｗｎ　ａ ｎｄ　Ｋ、Ｗ’５ｔｈｒｉｃｈ。

１９７９、Ｐｈｙｓｉｏｔｈｍａｔｎｉｃａｌ　　５ｔｕｄｉｅｓ　　ｏｆ　ｔ ｈｅ　　ｐｒｏｔｅｉｎ　１ｉｐｉｄｉｎｔａｒａｃｔｉｏｓａ　　ｉｎ　ｍｇ ＨＬｔｉｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｍ１ｃａＬＬａｘ、Ｂｉｏ−ａｈｉｍ、Ｂ ｔｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ　　５５６　：　２４４　２６４　。

Ｌａｘｔａｒｗｇｉｎ、　Ｊ、、　Ｌ　、　Ｒ、Ｂｒｏｗｎ　ａｎｄ　Ｋ、　Ｗ ｘｔｈｒｉｃ五、１９８０．Ｂｉｇ五−ｒｅｓｏｌｌＬｔｉｏｎ　’Ｈ−Ｍ７ｖ Ｒ５ｔｕｄｉｅｓ　　ｏｆ　ｍｏｎｏｍａｒｉｃ　ｔｎａＬｉｔｔｉｎ　　１ｎ ａｑｕｅｏｕｓ　ａｏＬｕｔｔｏｎ、Ｂｉｏｃんｉｍ、Ｂｉｏｐんｙｓ、Ａｅｔ ａ　６２２：２１９−２３帆Ｌｏｗｒｙ、０．Ｅ、、！ＬＪ　、Ｒｏａａｎｄｒ ｏｕｇｈ、Ａ、Ｌ、Ｆａｒｒ　　ａｎｄ　　Ｒ、Ｊ　、Ｒａｎｄ−ａｌｌ、１９ ５１　、Ｐｒｏｔａｉｎ　ｍｍａｓｓｒｇｍａｎｔ　　ｗｉｔん　ｔｈｅ　　ｆ ｏｌｉｎ　　ｐｈｅｎｏｌｒｇａｇａｎｔ、Ｊ、ＢｉｏＬ、Ｃｈｇｍ、１９３： ２６５　２７５゜ＭｏａｌＬａｗｉｎｇ、Ｒ，Ｃ，、Ｃ，＃”ａｎｎｇｙｓｔａ ｓ　　ａｎｄ　　Ａ、Ｎ、Ｗａｉｎｂａｒｇ、１９７１　。

５ｔｕａｉａｓ　　ｏｆ　ａ？Ｌｔｉｂｉｏｔｉｃ　　ｓνｘａｒｇｉａｍ　ａ σａｉｘｓｔ　　ｇｎｔａｒｏｃｏｃｃｉ。

Ｊ、Ｌａｂ、ｃＬｉｎ、Ｍｇｄ、７７：８２１８２７゜Ｍｏ１ｌａｙｌＣ，ａｎ ｄ　Ｇ、Ｋｒａｉｌ、１９７３　、Ｆｌｗｏｒｏｔｎａｔｒｉｃ　ｔｎｅａｓｕ ｒｇｍａｎ−ｔｓ　　ｏｎ　　ｔｈｅ　　ｉｎｔｍｒａｃｔｉ’ｏｎ　　ｏｆ　 ｍａＬｉｔｔｉｎ　ｗｉｔｈ　　Ｌａｃｉｔ五ｉ−Ｂｉｏｃｈｉｍ、Ｈｉｏｐｈ ｙｓ、Ａｃｔａ　３１６：１９６　２０３゜ｈｈＬｌ　ｆ　ｉｎｇａｒ、　Ｌ、 Ｍ、　、　Ａ、ｌ／　、　１ｊａｎｔｏｎ、　Ｍ　、ＩＪ’、　Ｇｓｘａｌｎｉ ａｋ　ａｎｄ　ｋ　、　`　。

Ｍ／１Ｌｓｏｎ、１９８６　、Ａ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｑｘａｎ ｔｉｔａｋｉｖｅ　　ａｎａ−１ｙｓｉａ　　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　　ｆｏ ｕｎｄ　　ｉｎ　　ｖａｓｐｉｄ　　ｖｅｎｏｍｓ、／、ＡｌｌｅｒｇｙＣｌｉ ｎ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、７７：６８１６８６−Ｏｒｔｇｌ、Ｓ、ａｎｄ　Ｐ’、Ｍ ａｒｋｗａｒｄｔ、１９５５　、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ　　ｏｎ　ｔｈ ｒｂａｅｔａｒｉｃｉｄａＬ　　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　　ｏｆ　ｂａｇ　　ｖ ｅｎｏｍ　ＣＴｒａｎｓｌａｔｇｄｔｉｔｌｅ、ｉｎ　Ｇｍｒｒｎａｎ）、Ｐｈ ａｒｍａｚｉｇ　　１０　：　７４３　７４６　、Ａｂｓｔｒａ−ｃｔａｄ　　 ｉｎ　　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　ＡｂｓｔｒａＣｔｓ、１９５６．５０：１２２９ ｃ。

Ｓｅｈｍｉｄｔ−Ｌａｔｓｇａ、ｕ’、１９４１　、Ｔ五−ｂａｃｔａｒｉｃｉ ｄａＬ　　ａｃｔｉｏｎ　　ｏｆ　ｂａｇｖｅｎｏｍ　ＣＴｒａｎｓＬａｔｔｒ ｄ　　ｔｉｔｌｅ、ｉｎ　Ｇｅｒｍａｎ）、Ｍｂｎｃん−ｍａｒ　Ｍｏｄｉ〆ｇ ｒＬｃＬｇ、Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ、ｐｐ、１４２−１４９　。

５ｙｄｎｅｙ、　ｃＬｓｄ　Ｔｏｒｏｎｔｏ、ｐｐ、１　１６　。

Ｔｕ、Ａ、Ｔ、１９７７６　、〆ａｎｏｍｓ：　ｃ五ｇｔｎｉｓｔｒｙ　　ａｎ ｄ　ｍｏｌａｃｓｌαｒ　ｂｉｏｌｏｇｙ。

ＪｏｈｎｌＶｉＬｍｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、Ｉｎｃ、、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｌｏ ｎｄｏｎ、５ｙｄｎａｙ。

ａｎｄ　Ｔｏｒｏｎｔｏ、ｐｐ、５０１−５　Ｌ　２　。

Ｔｓ、　Ａ、Ｔ　、　１９７７　ｃ　、　Ｖｅｎｏｍｓ　：　ｃｈｇｔｎｉｓ　 ｔｒｙ　　ａｎｄ　ｔｒｃｏｌａａｕｌａｒ　ｂｉｏｌｏｇ凵B Ｊｏｈｎ　Ｈ’１Ｌａｙ　ａｎｄ　５ｏｎｓ、Ｉｎｃ、、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、Ｌ ｏｎｄｏｎ、５ｙｄｎｅｙ。

ａｎｄ　Ｔｏｒｏｎｔｏ、ｐｐ、５０５−５０９　。

Ｐｈ１Ｌａ、、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｓａｎ　１ｏｓｓ　ａｎｄ　Ｔｏｒｏｎｔ ｏ、　ｐｐ、　１２１−１２２　。

Ｖｏｌｋ、ｌｌ’、Ａ、　１９７８ｂ、ＥａｓａｔｓｔｉａＬム旦ｍｅｄｉｃａ ｌ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、ｃ。

ＭＩＳｙ　ａ％ｄ　Ｊ、　ＦｒａｔｉａｒＣａｄｓ、）　、Ｊ、Ｐ、　Ｌｉｐｐ ｉｎｃｏｔｔ　Ｃｏｔｎｐａｎｖ＋Ｐｈ１Ｌａ、、Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ、５ａｎＪ ｏｓａ　　ａｎｄ　　Ｔｏｒｏｎｔｏ、ｐｐ、１２２　１２６　。

ＰｋｉＬａ、、Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ、　Ｓａ％　ｊ’ｏｓａ　　ａｎｄ　　Ｔｏ ｒｏｎｔｏ、　　ｐｐ、　　１３０　　１　３３　　。

Ｍａｙ　　ａ％ｄ　　Ｊ、ｌ”ｒａｚｉａｒ（ａｄｓ、）、Ｊ、Ｐ、Ｌｉｐｐｉ ｎｃｏｔｔ　　Ｃｏｍｐａｎｙ＋Ｐｈ１ｌａ、、Ｎｅｗ　　Ｙｏｒｋ、Ｓａ％　 Ｊｏｇｓ　　ａｎｄ　　Ｔｏｒｏｎｔｏ、ｐｌ、１３３−１３５　。

Ｙｘｓａ、Ｒ，Ａ、１９８２．Ａ　ｃｉｒｃｕｌａｒ　ｄｉｃｈｒｏｉｓｍ　５ ｔｕｄｙ　ｏｆ　を五ｅｓｔｒｕｃｔ％ｒｅ　　ｏｆ　　Ａｐｉｓ　　ｍａＬｉ ｆａｒａ　　ｔｐｃａＬｉｔｔｉｎ、Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｅｈａｍ。

Ｂｉｏｐｈｙａ　、　２１６（２１：　５５９−５６５　。

、４１）ＤＩＴＩＯＮＡＬ　ＢＩＢＬＩＯＧルリＨＹＧｏｏｄｍａｎ、Ｍ、Ｇ、 　ａ％ｄ　Ｗ、Ｏ，ρ’ｍｉｇＬｇ、Ｒａｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｂ−Ｌｙｍ ｐにｏｃｙｔａｐｒｏＬｉｆｇｒａｔｉｖｇ　　ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ　　ｂｙ　 　ａｒａｅｈｉｄｏｎａｔｇ　　ｒｈｍｔａｂｏｌｉｔｇｓ：Ｅｆｆｅｃｔｓ　 ｏｎ　ｔｎａｍｂｒｃＬｎｇ−ｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｖａｒｓｓａ　　１ｎｔｒａ ｃａｌｌｕＬａｒ　ａｃｔｉ−ｖａｔｏｒｓ、／、Ａｌｌｅｒｇｙ　　Ｃ１ｉｎ 、ｌｍｍ５％ｏＬ　、７４　：４１８−４２５．１９８４　。

Ｋｏｎｄｏ、Ｅ、ａｒｓｄ　Ｋ　Ｋａｎａ仁Ｂａｅｔｍｒｉｔｉｄａｌ　　ａｃ ｔｉｖｉｔｙ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　ｍａｍ−ｂｒａｘａ　ｆｒａｃｔｉｏ％　 １ｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｈαｇｏｃｙｔａａ　　ｏｆ　ｍ１ｃｅ　　ａ ｎｄｉｔｓ　ａｔｔｍｓｌａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｍａＬｉｔｔｉｎ、Ｊａｐａｎ、 Ｊ、ｋｇｄ、Ｓｃｉ、Ｂｉｏｌ、３ヱ：９−２０．１９８６゜ Ｋｏｎｄｏ、Ｅ、Ｍｇ１ｉｔｔｉｎ−ｓｔｉｍ％１ａｔｅｄ　ａｔ＊ｔｔｍｙｃ ｏｂａｃｔａｒｉａＬ　　ａａｔｉｖｉ−ｔｙ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　ｔｒｈｍｍ ｂｒａｎｍ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　　１ｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｗｎ　ｐｈａｇｏ ｃｙｔａｔｔｏｆ　ｇｓｉ＊ａａ　ｐｔｇａ、Ｊａｐａｎ、Ｊ、Ｍａｄ、Ｓａｉ 、Ｈ’ｉｏ１．３９：２１２４＋１９８６゜Ｓｏ＠ｉｒｆｉｇ　ｌｄ、Ｓ、Ｄ、 、Ｊ、５ｔａｃｋ、Ｃ，ｍｒａｔ　、Ｆ、ｇａｒｖａｉｇ　、ａｎｄ　　Ｅ、Ｓ ｋａ−ｔｈｕｓａ、ｔ３ｍａ　　ｖｇｎｏｔｎ　ｍａｌＮｔｔｎ　　ｂｌｏｃｋ ｓ　　ｎａｕｔｒｏｐｈｉｌ　　Ｕｓ　　ｐｒｏｄｓｃ−１ｉｏｓ、Ｉｔげｌａ ｍｔｎａｔｉｏｎ　１０：１７５　１８２，１９８６・Ｍｓｌｆｉｎｇａｒ、Ｌ 、Ｍ、Ｔｈｍ　ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｈｏｎ ｅｙ　ｂａｇｖｅｎｏｍ　５ｏｉｔｈ　ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｔｒ、Ｕｎｐｕｂ ｌｉａｈｇｄ　Ｍ、Ｓ、ｔｈｅｓｉｓ、Ｐａｎ５−ａｙｌｖａｓ４ａ　５ｔａｔ ｅ　Ｕｎｉｖａｒａｉｔｙ＋　１９８６Ｃｃｏｎｔａｉｎａｄ　ｉｓ　Ｕ、Ｓ、 Ｐａｔａ％ｔ　Ａｐｐｔ％、Ｓ、Ｎ、０９６．６２８）。

Ｌｏｗｒｙ、（Ｊ　、Ｅ、、Ａ’　、／　、Ｒｏａｍ＊ｂｒｏｓｇｈ、Ａ　、Ｌ 　、Ｆａｒｒ、ａｎｄ　　Ｒ，ハバａｓｄａ−１１、Ｐｒｏｔａｉｎ　　ｍｍａ ｓｓｒａｍｍ＊、ｔ　　ｗｉｔｈ　　ｔｈｅ　　ｆｏｌｉｎ　ｐルーｓｏｌ　　 　ｒｇａｇｍ外ｔ。

Ｊ、ｂｉｏｌ、Ｃｋａｍ、１９３：２６５　２７５．１９５１゜Ｒａｍａｅｋａ ｓｄｒａｎ、Ｊ、ａｎｄ　ｋ’ｉｒｇｉ＊ｉａ　Ｌａａ、Ｐｒａｐａｒａｔｉｏ ＊　ａｎｄ　ｐｒｏｐ−ａｒｔｔｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｏ−ｎｉｔｒｏｐｈｍｎ ｙｌ　ａｕｌｆａｎｙｒ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ｏｆＡＣＴＨ：　　ａｓ　　 １ｎｈｉｂｉｔｏｒ　　ｏｆ　　ｔｈｅ　　１ｉｐｏｌｙｔｉｃ　　ａｃｔｉｏ ｎ　　ｏｆ　　を五ｅｈｏｒｔｎｏｎａ、　Ｂｉｏｃｈａｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ 、　Ｒａｓ、　Ｃｏｍ、　３８（３）：　５０７−５１２゜１９７０゜ ５ｃｏｆｆｏｎａ、Ｅ、、Ａ、Ｆｏ％ｔａｎａ、ａｎｄ　Ｒ，Ｒｏｃｃｈｉ、　 Ｓｓげｅｎｙｌ五ａｌ　ｉｄｇｓａｓ　ｔｎｏｄｉｆｙｉｎｇ　　ｒａａｇｇｎ ｔａ　　ｆｏｒ　ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｓ　　ａｎｄ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ。

１、ＭｏｄｉｆｉＣａｔｉｏｎ　　ｏｆ　　ｔデｙｐｔｏｐｈａｎ　　デーｍｉ ｄｗａｙ、　　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ７（３）：　９７１−９７９．１９６ ８　。

Ｃｏｕｃｈ、Ｔ、ａｎｄ　Ａ、Ｅａｎｔｏｎ、Ｔｈｅ　　ｅｆｆｅｃｔ　　ｏｆ 　　ｔｈｅ　　ｗｇｎｏｍ　ｏｆｔｈｅ　　ｈｏｎｅｙ　　ｈａｍ、　　Ａｐｉ ａ　　ｍｇｌｌｉｆｇｒａ　　Ｌ、、　　ｏｎ　　ｔｈｅ　　ａｄｒａｎｏｃｏ ｒｔｉｔａｌｒｅｓｐｏｎｓｅ　　ｏｆ　ｔｈｅ　　ａｄｕｌｔ　ｍａｌｅ　ｒ ａｔ、　Ｔｏｚｉｅｏｎユ旦：５５−６２゜１９７２゜ 浄書（内容に変更なし） 図１ メリチンのアミノ酸配列 １−Ｘ”ｌ！　Ｈ４ｆ’ｋｌ！　；Ｆｍミル基２表す獣　！！−＠　　拐 米　訃　伽　妬 米　１１−　儲　拐 眠　！＋−伽　側 猷　訃　伽　側 眠　！ｌ−儲　側 眠　１１−＠　　側 米　訃　＠　軛 永　１１−　伽　鄭 刹　ｉｓ　　側 図１３ レーンｌ　−５０ｕｇ　　　メリチン　フラクショントン２−５０　ｕｇ　　密 蜂毒液全体 ｌ／−：／３−１００ｕ９メリチンフラクションレーン４−１００１Ｊ（ｌ　　 密蜂毒液全体トン５−２００　ｕ（ｌ　　メリチン　フラクション永　１＋−儲 　例 禾　訃　釦　餡 七　１１−　伽　側 七　＄ｇＢ　　勉 猷　１＋−伽　鄭 七　５Ｊｋｉ　　側 ＬｏａｉＯ細曹／ｍＬ血液 ＬｏｇＩＯ細菌／ｍ（血液 七　ＩＩ−伽　翅 ポ　訃　ｇａＩ！Ｉ の　　　　　■　　　　寸　　　　　へ　　　　ＯＷ１ 補正書の翻訳文提出書 （特許法第１８４条の７第１項） 平成　２年１２月１３日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．哺乳動物における感染治療のための組成物で当該組成物は、該感染に対抗す る活性を有する抗生物質剤、及び、少なくとも１つの膜翅類毒液、 膜翅類毒液の少なくとも１つの活性タンパク質成分、膜翅類毒液の少なくとも１ つのポリペプチド成分、膜翅類毒液の１つの活性タンパク質成分の少なくとも１ つのアナログまたは化学的に修飾された誘導物、 膜翅類毒液の１つの活性タンパク質成分の少なくとも１つのアナログまたは化学 的に修飾された誘導物、および それらの混合物 から成るグループから選択される第２の試薬から成り、 該抗生物質剤と該第２の試薬の比率は、該抗生物質剤の活性を該第２の試薬が高 めるようになされている、前記組成物。 ２．前記抗生物質が、 アンピシリン、 カナマイシン、 ポリミキシンβ、および リフアンピシン から成るグループのメンバーにより代表される抗生物質フアミリーから選択され るものである、請求の範囲第１項の組成物。 ３．前記第２の試薬が、 蜜蜂毒液、 マルハナバチ毒液、 ホホナガスズメバチ毒液、 ボルドフエイスホーネツト（ｂｏｌｄ　ｆａｃｅｄ　ｈｏｒｎｅｔ）毒液、前記 毒液の活性タンパク質成分、 前記毒液の活性ポリペプチド成分、 メリチン、ボンビリチン、マストポラン、およびクラポリンのアナログまたは化 学的に修飾された誘導物、およびそれらの混合物 から成るグループから選択されるものである、請求の範囲第２項の組成物。 ４、前記抗生物質剤がアミピシリンから成り、前記第２の試薬が蜜蜂毒液である ところの請求の範囲第２項の組成物。 ５．前記抗生物質剤がアミピシリンから成り、前記第２の試薬がメリチンである ところの請求の範囲第２項の組成物。 ６．前記抗生物質剤が、カナマイシンから成り、前記第２の試薬が蜜蜂毒液であ るところの請求の範囲第２項の組成物。 ７．前記抗生物質剤がカナマイシンから成り、前記第２の試薬がメリチンである ところの請求の範囲第２項の組成物。 ８．前記抗生物質剤がポリミキシンＢから成り、前記第２の試薬が蜜蜂毒液であ るところの請求の範囲第２項の組成物。 ９．前記抗生物質剤がポリミキシンＢから成り、前記第２の試薬がメリチンであ るところの請求の範囲第２項の組成物。 １０．前記抗生物質剤がリフアンピシンから成り、前記第２の試薬が蜜蜂毒液で あるところの請求の範囲第２項の組成物。 １１．前記抗生物質剤がリフアンピシンから成り、前記第２の試薬がメリチンで あるところの請求の範囲第２項の組成物。 １２．哺乳動物での感染治療のための投薬単位で、それは、該感染に対する活性 を有する抗生物質剤、及び、少なくとも１つの膜翅類毒液、 膜翅類毒液の少なくとも１つの活性タンパク質成分、膜翅類毒液の少なくとも１ つのポリペプチド成分、膜翅類毒液の１つの活性タンパク質成分の少なくとも１ つのアナログまたは化学的に修飾された誘導物、 膜翅類毒液の１つのポリペプチド成分の少なくとも１つのアナログまたは化学的 に修飾された誘導物、および それらの混合物 から成るグループから選択される第２の試薬から成る薬剤の有効投与量であつて 、 該抗生物質剤と該第２試薬の比率は該第２試薬が、該抗生物質剤の活性を高める ようになされている、前記投薬単位。 １３．抗生物質剤が、 アンピシリン、 カナマイシン、 ポリミキシンＢ、そして リフアンピシン より成るグループのメンバーに代表される抗生物質フアミリーより選択される抗 生物質から構成されるところの請求の範囲第１２項の投薬単位。 １４．第２試薬が、 蜜蜂毒液、 マルハナバチ毒液、 ホホナガスズメバチ毒液、 ボルドフエイスホーネツト毒液、 該毒液の活性タンパク質成分、 該毒液の活性ポリペプチド成分、 メリチン、ボンビリチン、マストポランそしてクラポリンのアナログまたは化学 的に修飾された誘導物、そして その混合物より成るグループから選択されるところの請求の範囲第１３項の投薬 単位。 １５．抗生物質剤がアンピシリンから成り、第２試薬が、蜜蜂毒液であるところ の請求の範囲第１３項の投薬単位。 １６．抗生物質剤がアンピシリンから成り、第２試薬がメリチンであるところの 請求の範囲第１３項の投薬単位。 １７．抗生物質剤がカナマイシンから成り、第２試薬が、蜜蜂毒液であるところ の請求の範囲第１３項の投薬単位。 １８．抗生物質剤がカナマイシンから成り、第２試薬が、メリチンであるところ の請求の範囲第１３項の投薬単位。 １９．抗生物質剤がポリミキシンＢから成り、第２試薬が、蜜蜂毒液であるとこ ろの請求の範囲第１３項の投薬単位。 ２０．抗生物質剤がポリミキシンＢから成り、第２試薬が、メリチンであるとこ ろの請求の範囲第１３項の投薬単位。 ２１．抗生物質剤がリフアンピシンから成り、第２試薬が、蜜蜂毒液であるとこ ろの請求の範囲第１３項の投薬単位。 ２２．抗生物質剤がリフアンピシンから成り、第２試薬が、メリチンであるとこ ろの請求の範囲第１３項の投薬単位。